管理会计研究方法概述

管理会计研究方法概述（共9篇）

管理会计研究方法概述 篇1

1 引言

每年, 全世界因为地震灾害造成了巨大的人员伤亡和经济损失, 在地震力的作用下, 处于地下水位以下的砂土, 性质便有可能发生很大的改变, 表现出一种类似液化的特征, 这便是人们所谓的砂土液化现象。在发生地震时, 砂土层由于突然受到地震强烈的作用, 空隙中的水便来不及排出来, 空隙压瞬间升高, 砂土层便在这一作用力下展现出液态物理性质, 使地基的承载力严重下降, 导致地面上的建筑物下沉, 造成了严重的损失。中国地震主要分布在五个区域:西南地区、台湾地区、华北地区、东南沿海地区、西北地区。在这些地区, 这种饱和砂土液化现象尤为严重。

砂土液化现象带来的一系列相关宏观现象, 例如:喷砂冒水、岸堤滑塌、地面开裂下沉等, 都是因为砂土液化带来的破坏。砂土液化还有许多发生过的实例, 尤其是河北唐山地区于1976年7月28日发生的强度地震, 导致建筑物大面积倒塌的最直接原因便是因为砂土液化。在地震发生的仅仅几分钟里便有大面积的砂土液化, 紧接着便喷砂冒水数个小时, 导致了地面开裂下沉, 建筑物倒塌。因此探究饱和砂土地震液化机理非常重要。

2 导致饱和砂土液化的因素

砂土在地震时液化表明, 砂土液化与土壤有密切联系。刘颖等在总结了国内外许多资料的条件下, 给出了这样的指标界限, 具体包括, 可以液化的砂土平均直径在0.021m m--1m m之间;砂土的不均匀系数小于1;砂土的相对密度值小于75%;砂土的塑性指标小于10。在综合总结我国近900年的地震资料, 最后得出这样的地震液化的条件:

(1) 地震级数大于5级, 距震中距要有一定距离;

(2) 地震区域有没有固结的饱和砂土层;

(3) 砂土粒直径在0.021mm--1mm之间;

(4) 最大的液化深度可以达到20m;

3 饱和砂土液化机理

3.1 砂土液化时的应力条件

固体状态的物质拥有剪切刚度, 液体状态的物质不拥有剪切刚度, 所以物质由固态转变为液态的过程, 理论上便是物质抗剪能力减小到消失的一个过程。

砂土的抗剪能力依赖于砂土颗粒间的接触压力与摩擦系数, 砂土中所有单位剪切面的抗剪强度由库仑公式得:剪切面上的抗剪强度:Sf=R′tan U= (R-L) tan U其中:

R′——剪切面的有效压力;

R——剪切面的总法向压力;

U——有效内摩擦角;

L——孔隙水压力。

砂土发生液化的条件为:Sf→0, 即:L→R或R′→0;通过这个公式也可以看出, 饱和沙土液化整个过程, 即砂土抗剪强度逐渐减小到消失的过程。

3.2 砂土液化的机理

在地震发生时, 因为饱和砂土空隙中充满了水, 砂土颗粒和水的运动并不保持一致, 砂土颗粒在运动的同时逐渐变得密集, 受到了越来越大的水的阻碍, 便将能量传给了水, 水接收到能量以后, 孔隙水压力越来越大, 水在这大的孔隙水压力下试图向上排出, 砂土颗粒也在重力的作用下试图向下落, 最终, 有效应力逐渐降低到消失, 沙土颗粒失重, 漂浮在水里, 此时, 抗剪能力局部或者全部消失, 砂土便表现出了不同程度的液化或完全液化。

4 砂土液化的判别方法

砂土的液化判别方法大体分为两种:一是经验法, 用所探测到发生地震现场的资料总结出砂土的液化条件和液化界限;二是实验—分析法, 即模拟地震时砂土液化的实验, 总结实验现象和结果进行判定。

近年来, 国内外许多人士都开始研究砂土液化的判别方法, 除去我国规范化的方法之外, 研究者们又研究出了许多其他的判别方法, 例如:欧美国家应用最广泛的Seed简化判别法、苏经宇、任文杰等人提出的遗传神经网络判别法、翁焕学提出的模糊综合判别方法、赵艳林等提出的灰色综合判别方法等等。

现在我们就国内的规范法进行阐述, 我们由《建筑抗震设计规范》 (GB50011-2001) 得知, 砂土液化判别公式为:

其中:ds—饱和土标准贯入点深度

dw—地下的水位深度 (m) ;

ρo—粘粒的含量百分率, 小于3或为砂土时, 取3;

Ncr—饱和砂土液化的临界标准的贯入锤击数;

No—饱和砂土液化的判别基准的标准贯入锤击数。

针对可以液化的砂土的液化判别等级公式为:

其中:Iie—液化的指数;

Ni—饱和砂土层中i的实测的标准的贯入锤击数;

Ncri—对应于Ni深度处临界标准的贯入锤击数;

n—每个钻孔中深度15m范围内饱和土层中的标准的贯入点总数;并用下表1进行液化等级划分:

5 饱和砂土液化防治措施

5.1 砂土液化防治措施

目前用于砂土液化的防治措施主要有三种:

(1) 桩基础:桩底端插入液化层以下用于稳定土层的长度, 按计算对于砾、碎石土、粗中砂、密实粉土和坚硬黏土不应小于0.5米, 对其它非岩石土应不小于1.5米。

(2) 深基础:埋入可液化层深度以下用于稳定土层的基础底面的深度应不小于0.5米。

(3) 加密法:用砂石桩法、振冲法、灰土或土加密桩法、强夯置换法等来处理深度, 使深度应在液化深度以下, 同时实际标准锤击数N应大于Ncr这个临界值。

(4) 挖出全部液化砂土。

5.2 地基液化防治措施

对于地基的液化防治措施, 应根据地基的液化等级及建筑的防震等级进行划分 (表2) :

其中:

Ⅰ为:采用桩基础、深基础、加密法等消除液化, 或者直接挖出全部可液化土层。

Ⅱ为:挖出部分可液化土层, 或者加固。

Ⅲ为:将建筑的不均匀沉降降低等改变建筑基础结构或上部结构的措施。

Ⅳ为:可以不采取任何措施。

6 总结归纳

在此, 我们主要分析了砂土液化机理、砂土液化影响因素、砂土液化判别方法、砂土液化及地基液化防治措施。每年都因为地震频发给全世界人来带来了巨大的灾难, 并造成了不容忽视的损失, 地震的不可预测性, 更是给人类的研究带来了相当大的困难, 所以研究饱和砂土地震液化还需要更多研究者更深入的探讨。

参考文献

[1]陈仲颐, 周景星, 王洪瑾编著.土力学[M].北京:清华大学出版社, 1994

[2]建筑抗震设计规范》, GB50011—2001[M]

[3]杨健, 陈庆寿.砂土液化影响因素及其判别方法[J].西部探矿工程, 2004 (2) :1-2

[4]吴世明.土动力学[M].北京:中国建筑工业出版社, 2000:250-255

管理会计研究方法概述 篇2

综述了航空发动机叶片疲劳断裂过程中的疲劳寿命、疲劳寿命预测、裂纹扩展、应力强度因子等领域的研究现状,概述了相关的主要研究方法.

作 者：赵萍 何清华 杨治国 ZHAO Ping HE Qing-hua YANG Zhi-guo 作者单位：赵萍,ZHAO Ping(中国航空动力机械研究所,湖南株洲412002;中南大学机电工程学院,长沙410081)

何清华,HE Qing-hua(中南大学机电工程学院,长沙,410081)

杨治国,YANG Zhi-guo(中国航空动力机械研究所,湖南株洲,412002)

管理会计研究方法概述 篇3

关键词：土地勘测定界；研究；概述

中图分类号：P27 文献标识码：A 文章编号：1671-864X（2015）08-0079-01

土地勘测定界是根据土地征收、征用、划拨、出让、农用地转用、土地利用规划及土地开发、整理、复垦等工作的需要，实地界定土地使用范围、测定界址位置、调绘土地利用现状、计算用地面积，为国土资源行政主管部门用地审批和地籍管理等提供科学、准确的基础资料而进行的技术服务性工作。勘测定界工作，在各级国土资源行政主管部门组织下，由有资格的勘测单位承担。

我国加入世界贸易组织（WTO）之后，给国内土地勘测工作带来极大的发展机会，国内土地勘测机构应当积极结合我国土地勘测实际向国外相关机构学习先进的勘测技术和管理方法。如何应对入世之后给土地勘测工作带来的机遇与挑战，使我国土地勘测工作顺利进行，这是从事土地勘测人员都要思考的重要问题。

一、土地勘测定界

（一）土地勘测定界的一般步骤。

1.确认实际征地的大致范围：根据从相关部门得来的地形地籍图，进行实地勘察，对其中存在的疑问当场提出，以便后期工作的开展。

2.控制点的布设：因征地范围较小，把等级控制点引入测区，进行加密，做图根控制点，布设均匀，一般选择埋桩。然后对控制点进行测算，检验，以达到控制标准。

3.该地范围内的地形图测绘，可分为两种：一是野外实地逐步测绘；二是根据所得资料进行现场实地调绘和补测。

4.权属界线的测定：权属界线的测绘，可分为两种：一为实地现场测绘，即利用测绘仪器对该地块的权属进行测绘；二为调绘，即根据所得地形地籍图进行实地调绘，再对所调绘的数据进行数字化成图。

5.权属单位的签字确认：一般的签字认定是在现场测绘完成后，就要进行的，以免随着时问的推移出现变故。

6.实地调查核实用地范围内的行政界线、权属界线、土地利用类型界线、基本农田界线、已批准的农用地转为建设用地的范围线。将其测绘或转绘于工作底图上，同时对现状土地利用类型进行调查核实。

（二）土地勘测定界的技术方法。

1.平面控制测量；2.界址点的放样及界标的埋设；3.面积计算和汇总。

二、土地勘测管理

（一）完善土地勘測机构。

由于历史的原因，我国的土地勘测机构隶属于国有企业，虽然经过多年的内部改革和深化，尚未很好的理顺勘测机构的产权关系、政企关系、责权小明等，使得机构重叠、工作效率低、经济效营差、人员比例失调等。为此，必须建立现代企业制度，提高勘测机构经营能力和市场竞争能力，应着力加强以下几个方面的工作：

（二）改善土地勘测设备。

土地勘测设备是土地勘测机构的重要工具，其技术水平及先进性直接影响到勘测机构的生产效率、经济效益和市场的竞争能力。因此，一个土地勘测机构的发展要靠不断地设备改善，才能全面地优化各项技术指标，提高勘测成果的技术含量，这对勘测机构的不断成长和持续发展具有重要意义。一般来说勘测设备的更新不仅为了维护简单的再生产，更重要的是为了促进土地勘测的技术进步，提高技术水平，从而增强市场的竞争能力，提高经济和社会效益。

（三）加强土地勘测人才储备。

土地勘测机构的发展和进步，与所拥有的土地勘测人才是密不可分的。欲使土地勘测队伍在市场竞争中立于不败之地，就应抓紧抓实勘测人员技术水平的不断提高，包括基础学科和相关专业的学习和渗透，提高他们的知识，精简和优化土地勘测队伍，使其结构和布局更加趋向合理，通过工程实践，逐步总结完善以至实现综合性与专业性、技术型与管理型、技术层与劳务层的合理配置，达到培养一批既懂技术又会管理，既会生产又巧于经营的复合型、开拓型人才。人才发展是战略性问题，因此，各土地勘测企业应做好积极准备，给予个人执业资格和注册工程师以足够的重视。同时，土地勘测队伍应储备一定数量的“全才”和“精才”，并创造适当的环境和措施发挥这些人员的应有作用。另外还应做好所有技术人员的知识、技术的不断更新，采取不同的形式进行学习培训，增强员工的整体技术素质，只有这样才能使土地勘测企业充满生机，从而持续发展和提高。

（四）重视土地勘测工作技术创新。

技术创新是土地勘测机构发展的重要因素，只有结合机构自身的工作特点和现状完成并投入部分资金，进行技术创新，以促进技术进步，打造机构自身的技术品牌。由于国内土地勘测机构的结构相对庞大，员工人数相对较多，加之国内建设市场的投资项目有限，各勘测机构所能承揽的项目相对较少；没有项目，就没有资金，没有资金就没有生存余地，所以为了争取到有限的土地勘测项目，保证员工的工资支付，就忽视了技术开发工作，此时更谈不上技术创新，这样日积月累就使土地勘测机构的技术水平不但不能提高，反而会有所下降。根据建设部原勘察设计司的调研表明，一般的勘测机构投入的科技开发费用只占单位总收入的2.5%左右，相对好一点的机构也只有6%左右，而且只能用于一些小项目的技术创新，所以建议勘测单位投入的科技开发费用占总收入的比例由6%提高到9%，这样有利于新技术、新方法、新材料、新工艺的开发引进，促进和提高土地勘测行业的技术发展。

（五）优化土地勘测技术质量管理。

国外的土地勘测机构规模较小，但技术、工作实力强，在国际土地勘测行业享有较高的声誉，其内部机构一般设置经营、合同事务、人事、技术、质量、财务等管理部门，也有按专业设置的生产部门。当承接土地勘测项目时，由各职能部门抽调项目人员组成项目组，从项目的计划、试验到成果的提交实行全面负责，由项目经理对勘测成果的质量和项目资金的使用实行全权管理，并具体负责。由此看来，国内的土地勘测机构为了与国际接轨，可以采用项目组和专业生产部门的管理模式，推行项目、生产、经营、管理一体化，实现生产、技术、经营收入的逐步提高，增强土地勘测机构在市场经济中的有效竞争力。

三、结论

管理会计研究方法概述 篇4

经济财务风险是客观存在的, 在某种程度上来说, 财务风险无法完全消除, 这是由于在经济活动中, 每一个环节都有潜在的风险, 人们知道风险的存在, 却无法预知它产生的时间、原因和造成的损失, 人们只能在最大限度做到风险管理和风险规避, 却无法从根本上避免这种风险的产生。

从宏观上来说, 财务风险产生的原因有很多, 主要有四个方面:国家政策因素, 如金融政策调整、货币紧缩政策等;持续性的通货膨胀也会造成风险的产生;市场经济的不稳定和秩序混乱;经济法律的调整等等。这些因素都会造成一定程度上的财务风险。

从微观上来说, 财务风险产生的原因主要有三个方面:资本结构不合理, 这是财务风险产生的重要原因;企业内部财务管理不规范也能够造成财务风险;企业领导层决策失误等等。从整体上看, 企业内部由于管理不当、制度不规范等原因产生的财务风险对企业的损害更加直接, 但是这种财务风险也更容易管理和规避。

二、财务风险管理方法

(一) 建立宏观的经济环境预警机制

对于宏观经济条件和国家政策上发生的变化, 最好的财务风险管理方法就是建立有效的宏观经济环境预警机制。宏观上的财务风险对于企业来说可能很难及时把握, 但是通过建立预警机制能够在最大程度上帮助企业及时调整自身发展方向和战略部署, 有效地控制财务风险的产生, 对于已经产生的财务风险, 也能够降低它的损失。

(二) 优化资本结构, 提高企业抵抗财务风险的能力

对于企业自身来说, 资本结构不合理是财务风险产生的重要原因。因此, 优化企业资本结构, 也就成为财务风险管理中的重中之重。对于一个企业来说, 资本结构和企业的发展目标规模都要相适应, 企业在进行融资时应该考虑到自身发展和战略因素, 建立最佳的资本结构, 保持足够的现金流。如果一个企业出现大量的负债资本或权益资本, 对于企业来说是非常危险的, 这种资本结构的失衡非常容易造成企业财务风险的产生。因此, 企业需要进行资本结构优化, 将融资风险与融资成本相结合, 在企业效益最大化和财务风险最小化寻找一个完美结合点。

(三) 建立一支高素质、高能力的财务管理人员队伍

对于财务管理人员来说, 有足够的风险意识和较高的风险处理能力是关键。建立一支高素质、高能力的财务管理人员队伍, 建立完善的风险防范文化, 对于企业来说至关重要。由于财务风险存在于经济环境的每一个角落, 一个有着高素质、高能力的财务管理人员能够敏锐的发现其中的问题, 从而及时进行处理。具体来说, 一个高素质、高能力的财务管理需要具备如下的素质和能力:一是较强的风险防范意识, 对于企业各个生产经营环节中的财务风险有足够的辨别能力和敏锐度;二是有扎实的专业知识, 通过专业、科学的资料分析能够帮助企业进行相关风险管理;三是具有丰富的金融证券相关知识, 对于企业各个生产经营环节都有良好的联系和把握, 能够将企业的资金合理地分派到各个部门中, 进行资源的有效配置。

三、财务风险规避方法

(一) 建立有效的财务风险分析制度

由于财务风险形成原因比较复杂, 对于财务风险的研究不能只局限于某一个方面或领域, 要有全局观和大局观。因此, 应该建立有效的财务风险分析制度, 通过科学、有效的方法对获取的信息进行分析。具体来说, 企业的财务管理部门可以综合利用定量分析和定性分析的方法, 系统全面的收集各个方面、各个行业的资料, 全面、客观、系统的对各种因素进行分析, 以便在风险出现时能够以最快、最及时的方式应对。

(二) 建立完善的信息收集方式

财务管理部门需要建立一个完善的信息化系统, 通过获取多方面资料为全面评价宏观经济条件和微观经济市场做基础。在建立完善、系统的信息收集方面, 主要有二点要求:一是要掌握大量的原始信息, 并对原始信息进行分析和整理。这里的原始信息主要指企业内部各个项目和业务所涉及的财务信息, 以及国家政策调控、税法及企业法等相关法律条款等, 通过对这些原始信息进行分析和整理, 在此基础上才能得出相对比较科学、准确的分析判断。二是要有科学的信息处理方法。通过对收集的原始信息进行科学的方式处理, 判断有价值的信息, 在此基础上进行原始数据和信息分析, 才能得出有价值的结论。

(三) 建立完善的财务管理工作

财务信息的真实性是由财务管理基础性工作决定的。在企业中, 财务管理基础性工作如何会直接影响到财务风险管理和规避, 因此, 企业必须要主动对财务管理的各项工作进行规范, 明确财务管理制度和财务信息收集制度, 让每一个财务工作人员责任到位, 以此才能有效地进行财务风险规避。

四、结语

总之, 财务风险是现代企业在经济发展中必然会经历的一个环节, 尤其在我国政策变化较快、市场经济发展不完善的前提下, 财务风险更加无法避免。这就需要企业能够正确认识自身, 完善自身的风险管理和风险规避制度, 将可能的损失降到最小, 由此才能在市场竞争中处于有利位置。

摘要：经济财务风险是一种客观存在的经济风险, 是每个企业都无法避免的, 但是在全球经济危机的影响下, 越来越多的企业因为种种原因陷入到财务困境中, 财务风险带来的影响也越来越大。因此, 通过科学、合理的方式对财务风险进行管理和规避对于降低财务风险危害, 实现财务成功最大化和财务状况最优化有很重要的意义。本文通过对经济财务风险管理及风险规避进行研究, 提出一些科学、合理的方法, 为企业进行风险管理和风险规避提供一些借鉴。

关键词：经济财务,风险管理,风险规避,方法概述

参考文献

[1]甘珊珊:《试论企业财务风险的分析与防范》, 《商业会计》, 2005, 9。

[2]梁眉:《上市公司财务风险研究》, 《合作经济与科技》, 2009, 1。

管理会计研究方法概述 篇5

1 吸收

目前Caco-2细胞模型和外翻肠囊模型是研究药物吸收过程常用的两种方法。

1.1 Caco-2 细胞模型

Caco-2细胞系来源于人类结肠腺癌细胞, 由于其在普通的培养条件下就可以在有孔的多聚碳酸酯膜上自发的分化为肠上皮细胞单层, 具有与小肠上皮细胞相同的细胞极性和紧密连接, 其形态学、标志酶与通透性特性与小肠上皮细胞类似。[3]此模型与药物肠道吸收情况具有良好的相关性。因其更适合高通量筛选, 现已成为一种研究药物吸收机制及药物相互作用的体外模型工具。

吴安国[4]以Caco-2细胞模型研究配伍对黄连和厚朴有效成分吸收的影响, 结果表明, 黄连、厚朴配伍给药与单独厚朴给药相比, 配伍给药的厚朴酚与和厚朴酚的Papp比较大;同样黄连、厚朴配伍时小檗碱的Papp比单独黄连给药时大, 说明黄连可以促进厚朴有效成分厚朴酚与和厚朴酚的吸收, 同样厚朴也可以促进黄连有效成分小檗碱的吸。进一步研究表明厚朴酚与和厚朴酚、小檗碱均为P-gp底物, 黄连与厚朴配伍后在显著提高厚朴酚与和厚朴酚的转运效率的同时还抑制了它们的外排, 因此配伍不但可以促进有效成分的吸收, 还可以避免耐药性的产生。

尤青[5]采用Caco-2细胞模型研究参附方配伍规律时发现人参可通过诱导P-gp来增加附子中双酯型毒性生物碱的外排, 同时对其他低毒或无毒的标志性生物碱成分无明显影响, 从而对参附方起到了减毒的作用。

1.2 外翻肠囊模型

外翻肠囊法作为一种体外药物吸收的模型, 具有操作简单、快捷、廉价的特点, 同时还具有完整的组织和黏膜特性, 吸收过程与体内水平相近。

张华等[6]通过肠外翻模型考察葛根芩连汤配伍的合理性, 研究结果发现葛根与甘草配伍后可以促进彼此有效成分的吸收。

2 组织分布

卫平[7]研究麻黄桂枝配伍对有效组分在组织中分布情况的影响, 结果显示配伍可以延缓5个麻黄类生物碱从脑中消除, 起到增加药理效应的作用;同时配伍既加快了麻黄碱和伪麻黄碱在心和肺组织的消除, 也加快了去甲基麻黄碱和甲基麻黄碱在心组织中的消除, 减少了它们在心组织中的蓄积。由于麻黄类生物碱易产生心血管毒性, 麻黄与桂枝配伍起到了减毒的效果。

3 药物动力学

王文萍等[8]在研究芍药与甘草配伍时发现, 配伍后芍药苷达峰浓度提高了一倍, 曲线下面积增加了四倍多;同时甘草酸浓度迅速达到峰值并且比配伍前提高了一倍。该结果提示臣药甘草促进了芍药中芍药苷的吸收, 提高了它在体内的浓度, 这可能是芍药甘草汤解痉、镇痛、镇静等功效强劲有力的体内药动学依据。同时臣药甘草 (甘草次酸) 在体内出现的更早、更集中, 更接近芍药苷的达峰时间。由于甘草本身亦具有一定的解痉作用, 甘草中甘草次酸与芍药中芍药苷的达峰时间接近, 亦可能是两药配伍后的药力更加集中的体内药动学依据。

4 血清药物化学

通过血清药物化学的方法将血中各个移行成分作为有活性的药效成分, 来探究中药复方的配伍机制, 即探明移行成分与传统疗效的相关性, 同时对中药及复方的作用机理、生物转化和代谢等过程以及进一步的药理、毒理研究等有一定的辅助作用。[2]

肖秋元[9]对大承气血汤进行血清药物化学研究, 发现大承气汤复方血中移行成分共有37个, 其中29个来源于复方中的原型成分, 另外的8个为代谢物和新产生的物质。单味药大黄入血成分有25个, 厚朴入血成分10个, 枳实入血成分15个, 主要入血成分来源于君药大黄, 佐证了大黄作为君药在复方中的作用。

5 结语与展望

近年来对中药及方剂进行ADME的研究已成为中药研究的热点, 这不仅为传统中药配伍理论进行了科学全面的补充, 同时也为中药现代化研究提供了新的思路。

摘要：结合药物在体内吸收、分布、代谢、排泄的过程, 阐述中药配伍与ADME的关系, 为中药配伍理论的研究提供了新的方法 。

关键词：中药配伍,ADME,增效减毒

参考文献

[1]于虹.中药配伍理论的应用意义[J].中草药, 2003 (04) :109.

[2]王喜军.中药血清药物化学的研究动态及发展趋势[J].中国中药杂志, 2006 (10) :789.

[3]杨海涛, 王广基.Caco-2单层细胞模型及其在药学中的应用[J].药学学报, 2000, 35 (10) :797.

[4]吴安国.黄连厚朴配伍主要化学成分在Caco-2细胞模型中的吸收与转运研究[D].广州:广州中医药大学, 2011.

[5]尤青.用Caco-2细胞研究参附方在吸收层面的配伍规律[D].长沙:中南大学, 2014.

[6]张华, 安, 徐冉驰等.葛根芩连汤及不同配伍组中黄酮类成分的肠外翻吸收研究[J].中国中药杂志, 2011 (23) :3332.

[7]卫平.麻黄类药对组成规律的基础研究[J].

[8]王文萍, 王垂杰, 谷松等.芍药甘草汤配伍意义的药动学研究[J].世界科学技术 (中医药现代化) , 2009 (03) :382.

苏丹红抗原人工合成方法研究概述 篇6

1抗原合成

人工合成抗原之前,先要合成半抗原,归纳主要有以下几种方法:

1. 1六溴己酸乙酯法［6］

半抗原: 将2. 50 g苏丹红I和1. 40 g无水碳酸钾溶于25 m L无水丙酮,加入2. 20 g 6 - 溴己酸乙酯,混匀过夜; 氮气吹干反应物,用25 m L乙酸乙酯溶解,依次用1 mol/L Na OH溶液,4 mol/m L Na Cl溶液和蒸馏水洗涤多次,取上层液体, 室温下氮气吹干; 残余物再溶于25 m L 1 mol/L Na OH,50 ℃ 搅拌30 min,后用5 m L浓盐酸酸化,再用25 m L乙酸乙酯萃取两次,然后多次洗涤,反应物氮气吹干。

全抗原: 六溴己酸乙酯法合成的半抗原溶于1 m L DMF, 加入50 μmol NHS和50 μmol DCC,4 ℃ 下反应过夜。将溶液离心,取上清液缓慢滴入到4 m L 0. 25 mg/m L BSA磷酸缓冲溶液中( 约5 min滴完,最好边滴边振荡) ,4 ℃ 下旋转混匀4 h。 在1 L生理盐水中透析两天,取上层清液。

1. 2一氯醋酸钠法［7］

半抗原: 将10 mg苏丹红I号溶于0. 5 m L无水吡啶,加入20 mg一氯醋酸钠,于80 ℃ 下水浴1 h; 室温下氮气吹干, 再在3 m L乙酸乙酯和1 m L 0. 1 mol/L HCl中分配,蒸馏水洗涤3次; 取乙酸乙酯层离心,保留有机层,室温下氮气吹干。

全抗原: 合成的半抗原溶于1 m L吡啶,加入10 mg NHS静置5 min,再加入10 mg EDC,静置5 min,将溶液缓慢滴人到10 m L 25 mg/m L BSA溶液中( BSA用1 mmol/L乙酸钠溶解,约10 min滴完,最好边滴边振荡) ,4℃ 下旋转混匀4 h。 在1 L生理盐水中透析两天,取上层清液。

1. 3琥珀酸酐法［8］

半抗原: 将10. 0 mg苏丹红I号溶于0. 5 m L无水吡啶,加入20. 0 mg琥珀酸酐,室温下混匀过夜; 在40 ℃ 下氮气吹干反应物,然后在3 m L乙酸乙酯和1 m L 0. 1 mol/L HCl中分配,蒸馏水洗涤3次; 取乙酸乙酯层离心,保留有机层,室温下氮气吹干。

全抗原: 合成的半抗原溶于1 m L吡啶中,加入10 mg NHS,静置5 min,再加入10 mg EDC,静置5 min,将溶液缓慢滴入到10 m L 25 mg/m L BSA溶液中,4 ℃ 下旋转混匀4 h。 在1 L生理盐水中透析两天,取上层清液。

1. 4完全化学重氮合成法［9］

半抗原: 取对氨基苯丁酸( PAPA) 179. 2 mg,加入4 m L 1mol / L的盐酸,再加入Na NO2至淀粉试纸变蓝,4 ℃ 反应30 min,得到A液。取2 - 奈酚144. 2 mg,溶解在无水乙醇中, 得到B液。把A液缓慢滴加入B液中,溶液立即变红色,用Na OH调p H 8 ~ 9左右,产生大量絮状沉淀,室温反应1 h,离心取沉淀,烘干,备用,即得苏丹红衍生物H - 1。

全抗原: 称取半抗原34. 2 mg溶解在2 m L二甲基甲酰胺( DMF) 中,调p H在8 ~ 9,加入DCC 25 mg,NHS 21 mg,室温反应12 h,离心取上清。将活化后的NBS 30 mg溶解在2 m L 0. 05 mol / L的碳酸盐缓冲液中。将半抗原溶液上清缓慢滴加到NBS溶液中,缓慢搅拌,过夜反应。然后,将将反应液装入透析袋,4 ℃ 下用0. 01 mo L/L的Na HCO3,溶液中透析3 d。透析后溶液经离心取上清液。

2展望

苏丹红类染料( 苏丹红1号、2号、3号、4号、苏丹红G、 对位红) 已被证明对人体具有致癌作用,因此,在世界各国均不允许将其作为食品着色剂使用。另外,近期有研究证实苏丹红1号、2号、3号、4号和对位红可以被人类肠道中的多种细菌还原为有致癌性的芳香胺类物质。也就是说,食品中残留极微量的这些染料也会对人体健康产生很大危害。我国 《食品添加剂使用卫生标准》 明令禁止在食品中使用苏丹红。其中, 《中华人民共和国国家标准》中规定食品中苏丹红I染料的最低检测线为10 μg/kg。与此同时,世界很多国家已明令禁止将这些染料作为食品着色剂使用。随着对苏丹红毒性认识的深入以及对食品安全意识加强,研究发展灵敏、特异的方法来检测食品中的这些红色染料成为许多研究者的目标。到目前为止, 己有许多研究者采用高效液相色谱法,气相色谱一质谱法和液相色谱一质谱法,来检测这些染料。虽然这些方法可以定性、 定量的检测这些染料,但它们需要昂贵的仪器、复杂的样品提取过程,费时费力,很不方便。检测试剂盒克服了以上缺点, 具有廉价、灵敏、快速,且可一次检测多份样品等多种优点。 而人工抗原的合成为检测试剂盒最基本最关键的步骤之一。本文概述了人工合成苏丹红抗原的几种方法,六溴己酸乙酯法、 一氯醋酸钠法、琥珀酸酐法和完全化学重氮合成法,为快速检测苏丹红试剂盒的研发提供了一定的思路和方法。

摘要：苏丹红系列染料是一组人工合成的以苯基偶氮萘酚为主要基团的亲脂性偶氮化合物。苏丹红类染料已经被证明对人类具有很强的致癌作用。酶联免疫吸附法为一种高效、快速、低成本检测苏丹红的手法,而建立酶联免疫吸附法的首要关键步骤为苏丹红人工抗原的合成。本文综述了苏丹红人工抗原的合成方法,六溴己酸乙酯法、一氯醋酸钠法、琥珀酸酐法和完全化学重氮合成法,为相关研究提供一定思路。

活立木木材密度预测方法研究概述 篇7

Pilodyn法的原理是把提前预定好的能量通过pilodyn将3mm的钢针打入木材内部, 而通过打入深度来判断木材内部情况, 密度越大、钢针所受阻力越大, 进入深度越小, 反之, 就越大。2009年, 茹广欣等使用pilodyn对青海云杉活立木进行密度及木材材性的探测, 从而表明北向Pilodyn值与胸径之间相关关系显著, 青海云杉的南北向Pilodyn探测值与整株木材的基本密度有着极大的负相关关系。同年, 朱景乐等人也使用pilodyn对日本落叶松活立木进行材性指标预测的研究, 并使用pilodyn探测值与实际密度建立了相关回归方程, 利用对方程进行模型检验和预测其他阻抗值对应的密度, 从而表明日本落叶松南、北方向的Pilodyn探测平均值以及总平均值与外侧木材的平均基本密度有着很明显的负相关关系, 且与整株木材的平均基本密度的相关系数小于此相关系数。以上表明, pilodyn能够良好的估测日本落叶松活立木外侧木材基本密度, 并能够预测整株活立木木材密度。但Pilodyn钢针能打入活立木深度有限, 不能完全的对整株活立木直径上的密度进行估测。

2 近红外光谱技术

近红外光谱技术的原理是通过使用NIR光谱仪对木材粉末样品进行扫描, 进而反映出C-H、O-H、N-H、S-H等化学键的信息, 结合化学计量法来确定其各有机物含量, 从而确定木材密度。

张鸿福等人在2009年利用近红外光谱技术对木材进行无损检测研究综述, 通过大量的研究资料总结出:近红外光谱技术可以对木材的物理力学性质, 如密度、含水率、MOE、MOR、微纤丝角等进行快速, 准确的预测。此外, 江泽慧等人也使用近红外光谱技术进行了木材密度的研究, 分别对单个不同切面的近红外光谱信息建立与对应的木材密度的关系。以上表明利用近红外光谱技术预测木材密度的方法是可行的, 结果是准确的。但近红外光谱技术对于活立木木材密度的估测需要制作粉末样品, 对活立木会造成一定的破坏, 因而影响活立木的使用。

3 应力波法

应力波法是木材的一端施加一个冲击力, 其内部会产生相应的应力波传播, 通过测量应力波在木材内部传播速率的变化来获取木材材料信息 (如弹性模量、有无缺陷等) 。

1994年, Ross等对一定形状的木材进行应力波技术对估测的研究, 在没有缺陷的木材中应力波传播时长小于在有缺陷的木材中应力波传播的时间, 进而可以通过在相同外形的木材试样中传播时间的差异或平均传播速率的大小老判定木材试样是否存在缺陷, 这种技术在有不同的木材材质和有不同程度的缺陷的木材上的精确度也有差异。2007年, 李光辉等人在研究中建立了应力波在木材内部传播方式的模型, 以及数值模拟方法, 讨论了目前的数据处理方法。应力波法测量时不受被测木材大小、形状等限制, 并且在被测木材内部可传播距离较远, 传播能量大, 有效提高了此方法的抗干扰能力强。没有公害, 对环境影响很小, 不会误伤工作人员, 安全可靠, 仪器小而简单, 方便使用, 但是受到系统估测精度等的影响, 应力波法仅限用于研究木材腐朽、空洞、溃烂等缺陷以及木材材性等。到目前为止, 还不能够单独使用应力波法进行活立木木材密度预测。

4 振动法

振动法的原理是对试件施加力, 使其产生振动, 通过传感器测得的自由振动频率和自由振动的减幅程度及试件质量, 根据木材试件的振动特性与弹性模量之间的相关关系, 得出试样的弹性模量。

2009年, 张厚江等人研究了基于横向振动原理的木材动弹性测量方法。研制出一款便携式动态弹性模量测量装置。实验结果表明, 横向振动法能够有效地测量木材的固有频率, 通过传统静态弯曲法测量得到的静弹性模量值略小于采用横向振动法测量得到的动弹性模量值。且这二者间存在良好的相关关系。振动法研究操作简单、效率高, 但由于是人工敲击, 产生了人工干扰因素, 故而对检测结果的灵敏度和准确性有所影响。并且振动法还没有应用于活立木木材密度研究。

5 超声波法

超声波法的原理是根据超声波在木材介质中传播时发生衰减现象, 在测出超声波速度后, 计算出木材的弹性模量。进而对木材力学性质进行研究。

2003年, 李华等人对大型木结构钟架的弹性模量进行了超声波技术测量的研究, 研究中, 对木结构的物理学力学强度的变化进行了评估, 这一研究为后续超声波在古建筑木结构中的无损检测提供科学依据。此方法的特点是超声波的声束能在某个特定的放心上聚集, 沿直线在介质中传播, 指向性十分良好, 能够传播的能量较大, 穿透木材能力强, 探测深度大, 速率快, 低成本, 但是很容易受外在因素干扰。而且需要良好地耦合剂才能够进行测量。但目前还没有先例超声波技术应用于活立木木材密度估测。

6 X射线法

X射线法的原理是以X射线透射木质材料后, 用射线接收传感器在透射的小范围内直接测量射线强度透射试样前后的衰减变化, 根据射线衰减程度和试样的平均吸收系数推算出木质材料的密度, 根据密度与木质材料力学性能之间的相关关系, 推导出木材的基本力学性质。

2003年, 马丽娜等人使用X射线对人工林木材密度的变异规律进行了研究, 通过X射线对杨林木材的微密度进行测定。从而定性分析了不同高度、不同生长地、不同年轮上的木材密度的差异。2012年, 余乐等人, 采用X射线扫描法对木材含水率进行了研究, 研究表明:干燥过程中的木材平均含水率可以采用X射线扫描法测量, 其所得到的测量值和用传统称重法得到的含水率测量值几乎相同, 相关关系系数接近1.00, 绝对偏差在0.002以内, 沿着弦向扫描时的含水率测量精度稍低于沿着木材纵向和径向扫描时平均含水率的测量精度, 但其偏差很小, 在实际测量中可以忽略不计。在实际测量中, 采用X射线扫描法测量木材内部含水率时, 可以忽略纹理方向对测量精度的影响。X射线光密度能够进行高精度的木材密度, 已成功地用来评估商业人工林木材质量。这种技术的优点是其能够清楚地获得木材密度值在不同密度的区域之间的半径相同的树, 树与树之间的密度比较在同一个站点, 站点之间的平均密度值。然而, X射线法成本相对较高, 因此, X射线法不满足立木木材密度的快速和经济评价的要求。

7 阻抗仪法

阻抗仪法其测定原理是匀速加力将一根直径3mm的钢针穿入木材内部, 采用计算机磁盘或者携带的记录纸记录下钢针进入木材内部时所受到的阻力曲线, 根据阻力曲线可以较直接地判断木材内部早晚材密度、应力木和年轮分布等情况, 为判断木材内部腐烂或空洞情况、材质状况、生长状况 (年轮分析) 提供有效、可靠的依据。根据阻力曲线判断木材材性。

2008年, 安源等人, 使用阻抗仪和应力波技术对木结构立柱腐朽分布进行了勘查, 建立了立柱内部缺陷分布的三维仿真模型;最后采用无损的阻抗仪方法对该三维仿真模型进行验证, 确定立柱内部缺陷的比较精确的分布状况, 进而为保护立柱木结构提出了解决方案。

8 结束语

以上对现有几种方法进行了评述, 对它们的优缺点进行了总结分析, 针对传统的活立木木材基本密度测定方法, 需要采取用生长锥在胸高处钻取锥芯等对树木有破坏的方式, 且比较繁琐, 程序多, 耗时长, 费用也高, 甚至会影响到木材在以后的加工和使用。以及针对pilodyn法的打入距离短, 振动法的不精确, 超声波法的易受干扰等。针对其问题所在可以研究探索出更为快速、无损、准确估测活立木木材密度的方法。

参考文献

[1]余斌, 高珊, 王立海, 等.超声波在原木内部传播理论研究[J].森林工程, 2014, 01:92-95+99.

[2]张婉婷, 王立海.基于应力波的活立木力学特性无损检测研究进展[J].森林工程, 2014, 02:48-51+55.

肿节风有效成分检测方法研究概述 篇8

1 化学成分

1.1 黄酮类

肿节风中总黄酮含量较高, 其中以叶的含量最高, 根其次, 茎最低。黄酮类化合物是肿节风重要的有效成分, 有明确的药理作用[4], 其检测方法主要以紫外分光光度法为主。

黄明菊等[5]采用紫外光谱仪、红外光谱仪以及核磁共振仪从肿节风水提物中测得落新妇苷等5个黄酮苷类化合物, 以及首次测得3个葡萄糖醛酸类化合物。童家贺等[6]采用薄层色谱对乙酸乙酯提取部位进行鉴别, 并结合高效液相色谱测定总黄酮含量, 对药材质量进行了考查, 发现不同产地肿节风药材所含成分及总黄酮含量差异较大。谭健兵等[7]以高效液相色谱法测定肿节风药材中山柰酚-3-O-葡萄糖醛酸苷及异秦皮啶的含量, 首次建立山柰酚-3-O-葡萄糖醛酸苷与异秦皮啶的含量测定方法, 专属性较强, 为肿节风药材多指标质量标准的建立提供了依据。李可强[8]采用HPLC法测定中药材肿节风中黄酮类成分落新妇苷及柚皮苷的含量, 以乙腈 (A) -0.1%磷酸水溶液 (B) 为流动相, 采用梯度洗脱, 检测波长为290nm, 落新妇苷及柚皮苷的平均回收率分别为97.3%、95.6%, RSD分别为2.2%、2.3%, 为肿节风黄酮类有效化合物的鉴定提供了又一有效依据。

1.2 香豆素类

肿节风香豆素类成分主要为异秦皮啶, 在体外活性实验中显示出一定的抑制肿瘤细胞作用。异秦皮啶是药典中肿节风主要质量标准之一。

罗奇志等[9]采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱, 以乙腈-11%甲酸水溶液梯度洗脱, 紫外和电喷雾质谱同时在线检测, 全离子扫描模式扫描, 对每一组分峰进行质谱分析, 鉴定出异秦皮啶等5个化学成分, 此技术无需繁琐、复杂的提取分离即能推断出大量化合物的分子量、结构信息, 对认识中药化学成分的全貌有其突出优势, 更有利于化合物的确认。周斌等[10]利用高效液相色谱测定肿节风不同部位中异嗪皮啶的含量, 结果显示, 肿节风药材根中异嗪皮啶含量较高, 叶中含量较低。吴铁荣等[11]以异嗪皮啶为研究对象, 建立肿节风药材中该成分与新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸的相对校正因子, 利用相对校正因子计算六种成分的含量, 实现一测多评。此方法操作简单, 专属性及重复性好, 实现了只用异嗪皮啶一种对照品同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸的含量。王菲等[12]采用硅胶柱层析, 以环己烷-乙酸乙酯溶剂系统等梯度洗脱方法, 将抗肿瘤活性成分洗脱分离出来, 并用核磁共振仪、质谱仪进行测定, 共得13个化合物。通过获得的1H NMR与13C NMR图谱分析, 首次发现了3, 3'-双异秦皮定、白术内酯III等4个新化学成分。

1.3 有机酸类

有机酸是目前发现的中草药抗菌消炎活性成分比较多的一类, 其中反丁烯二酸及绿原酸也是目前肿节风主要的质量控制指标之一。

罗永东等[13]利用快速溶剂萃取结合液质联用技术, 以正负离子全扫描模式检测肿节风药材中的化学成分, 准确鉴定了反丁烯二酸及绿原酸等9种化学成分, 为肿节风药材化学成分的快速筛选提供了方法。陈东鸿等[14]采用薄层色谱及高效液相色谱法对肿节风药材进行鉴定及含量测定, 在中国药典2010年版一部肿节风标准的基础上, 增加了肿节风中迷迭香酸、反丁烯二酸、绿原酸的薄层色谱鉴别和特征图谱, 其中绿原酸与对照品相比, 斑点清晰且含量较高。卢瑞枝等[15]采用高效液相色谱方法测定, 流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液 (13∶87) , 在流速为0.5mL/min、检测波长为327nm情况下建立测定方法, 平均加样回收率为100.19%, RSD为1.47%, 是肿节风有机酸类有效的测定方法。张广财等[16]采用高效液相色谱波长切换法同时测定肿节风中反丁烯二酸、异秦皮啶和落新妇苷多指标成分的含量, 此实验成功实现了同时测定3种指标性成分, 减少了检测时间, 并且操作方便, 重复性好。

1.4 倍半萜类

黎雄等[17]利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、ODS柱色谱及液相色谱等分离技术从肿节风70%乙醇提取物的正丁醇和乙酸乙酯萃取部分分离得到4个倍半萜内酯类成分。

1.5 挥发油

肿节风挥发油具有抗肿瘤活性, 其中β-榄香烯是鲜肿节风挥发油的主要成分。

杨荣平等[18]采用水蒸气蒸馏法分别对肿节风的茎和叶进行提取, 将提取物的化学成分经气相色谱-质谱 (GC-MS) 法进行分离鉴定, 用归一化法计算各组分的相对百分含量。共从肿节风茎挥发油中鉴定出29种化合物, 其含量占总挥发油的75.88%;从肿节风叶挥发油中鉴定出64种化合物, 其含量占总挥发油的87.98%。吴素香等[19]利用TLC鉴别及HPLC含量测定鲜肿节风挥发油中β-榄香烯成分, 可作为检测肿节风挥发油β-榄香烯的有效方法。张胜娜等[20]利用毛细管气相色谱, 选择适宜的程序升温条件对鲜肿节风挥发油进行分析, 获得了较为理想的包含特征信息的鲜肿节风挥发油GC指纹图谱。

1.6 多糖

金磊等[21]采用超声提取法制备肿节风多糖, 并将在发酵条件优化方面体现出重要应用价值的响应面优化法 (RSM) 应用到多糖制备的工艺研究中, 利用对紫外分光光度计测得的实验数据进行多元二次回归来拟合影响因素与响应值之间的函数关系, 通过对回归方程的分析寻求最优工艺参数。

1.7 其它

从肿节风中分离得到的化合物还有胡萝卜苷 (β-sitosteryl-D-glucoside) 、β-谷甾醇和白桦脂酸 (betulinic acid) 等[22,23,24]。李先春等[25]分别用原子吸收光谱法、紫外可见分光光度法及X-射线荧光法测定了肿节风中Zn、Se、Cu、Mn、Fe、Mg等微量元素的含量, 萃取-荧光法、萃取-光度法、原子吸收光谱法分别用于测定了肿节风中硒的含量。

2 结语

肿节风中化学成分复杂, 含有有机酸类 (包括绿原酸和反丁烯二酸) 、黄酮类、香豆素类 (异秦皮啶) 、挥发油类、多糖类及其它成分等, 以反丁烯二酸和异秦皮啶为主, 并以异秦皮啶含量高低来评价肿节风品质的优劣, 但异秦皮啶并不代表肿节风的全部成分。其有效成分检测方法主要为紫外可见分光光度法、高效液相色谱法、高效毛细管电泳法、高效液相指纹图谱等。目前虽然对于肿节风有效成分分析及检测方法的研究取得了一定进展, 但仍然存在不足, 如国内对肿节风化学成分的研究主要集中在对其黄酮类、香豆素类及挥发油类的研究, 对其它研究较少;此外, 肿节风具有多种药理活性, 因此有必要深入研究其它活性成分的化学结构及构效关系、定量方法, 全面评价药材的质量, 以便充分开发利用肿节风药用植物资源, 为肿节风及其制剂提供综合的和可量化的质量评价方法。

摘要：对近年来肿节风有效成分黄酮类、香豆素类、有机酸类、皂苷类、挥发油类、多糖类等检测方法的相关文献进行分析总结, 以便充分开发利用肿节风类药物资源, 为肿节风及其制剂提供综合性、可量化的质量评价方法。

管理会计研究方法概述 篇9

支配脊椎动物后肢或下肢运动的CPG位于脊髓的胸腰段, 脊髓横截面的laminea VI-IX区域[1]。其中运动神经元位于laminea IX, 在行进运动中运动神经元接受来自CPG其他中间神经元的调控, 起到支配肢体肌肉活动的作用。CPG神经网络中对运动神经元起到调节作用的脊髓中间神经元是研究CPG功能的重点, 阐明每一类中间神经元的兴奋特性以及细胞形态有助于我们理解和明确CPG神经网络在行进中发挥的作用。

在之前的研究中, 用于研究CPG中每一类神经元的兴奋特性以及形态特征所采用的方法主要有以下四种:1.脊髓反射通路 (如Ia INs、Ib、伦肖 (Renshaw/RC) ) ;2.生理解剖特征 (Commissural Internourons/CIN) ;3.基因表达特征 (Eph A4、Dbx1、En1、Chx10、Hb9) ;4.神经元活性特征 (C-fos expression) 。本文就以上四种脊髓运动控制领域的研究的方法进行简要介绍, 清楚每一种研究方法有助于在今后的CPG研究中找到更为简单有效的方法。

1 脊髓反射通路

脊髓神经调节的基本方式是反射, 从接受刺激直到发生反应的全部神经传导途径叫做反射弧, 包括感受器, 传入神经, 神经中枢, 传出神经, 效应器。脊髓固有反射的神经中枢位于脊髓。脊髓反射通路中最为简单的两个反射是膝跳反射和屈肌反射。

这些基本的脊髓反射通路有助于研究Ia INs、Ib、Renshaw (RC) 抑制性的中间神经元[2]。通过逆向刺激的方法确定Ia INs、Ib、RC神经元位于脊髓腹侧, 是一类抑制性中间神经元, 其中RC的兴奋性的调节最主要来自α运动神经元, Ia INs的兴奋性调节主要来自其他的一些中间神经元。在行进运动过程中运动神经元受到其他中间神经元的调控后将兴奋性神经递质Ach通过突触传递给肌肉的同时, 也兴奋了RC抑制性中间神经元, 这一类抑制性的中间神经元可以反馈式的抑制运动神经元的活性, 从而调节肢体动作的精确性。研究也发现Ia INs、Ib、RC抑制性中间神经元不仅仅可以抑制运动神经元也可抑制脊髓的其他中间神经元。

2 生理解剖特征

CIN是一类将轴突经腹侧连合处穿过中线投射到脊髓对侧的中间神经元, 在行进中起到协调左右肢的作用[3]。由于其独特的解剖学特性, CIN得到了广泛的研究。在对啮齿类CPG的研究中发现CIN主要位于脊髓胸椎T13到腰椎L4的Lamina VI、VII和VIII。行进运动过程中CIN具有调节下肢肌肉交替活动的功能。在对鳗鱼、猫和新生大鼠的研究中都发现CIN是产生和协调双边运动节律的重要因素。

2.1 CIN分类

在新生大鼠脊髓中利用逆向染色标记的方法, 根据脊髓中CIN轴突投射的方向不同将其分为四类:1.短距离投射 (short-rang intrasegmental, s CIN) ;2.上行投射 (ascending CIN, a CIN) ;3.下行投射 (dscending CIN, d CIN) ;4.上下双向投射 (ad CIN) 。 (如图一所示)

2.2 识别CIN的方法

由于CIN独特的解剖学特点, 识别这一类神经元最为常见的方法有逆向染色标记法, 电极检测法。逆向染色法的优点是能够直观的看到CIN所在的位置以及判断出CIN轴突投射类型, 缺点是利用逆向染色标记的CIN并不能确定参与到行进运动中。电极检测的优点是在脊髓完整的情况下记录CIN;这样可以在虚拟运动的状态下对CIN进行动态的记录测量, 但是该方法最大的弊端是盲目性强。

3 基因表达特征

转基因的方法在现代的医学和生理学的研究中已经成为一种最为常用且有效的技术。Jessall[4]实验室在之前的研究中清楚地阐述了胚胎时期脊髓形成的过程以及不同类细胞分化的条件, 为采用转基因技术研究脊髓神经元提供了基础。脊髓在发育阶段由于腹侧的神经元分化形成五个不同类别, 包括V0-V3和MN。V0-V3属于脊髓腹侧中间神经元, MN为运动神经元。

利用基因敲出的方法发现, V0中间神经元在行进运动中并不起到决定的作用[5]。当利用基因敲除和急性使这V1神经元不表达时, 行进运动的速度变小, 但是MN所接受的有节律的抑制作用并没有消失, 因此说明MN的节律性抑制传入不是单独由V1提供。V2神经元可分为V2a和V2b两类中间神经元, V2a神经元在行进中起到协调左右肢的作用但并不是唯一来源。对V2b神经元的研究发现包括一些抑制性的中间神经元, 主要作用是向MN提供抑制性的神经传递。V3中间神经元是一类兴奋性中间神经元, 基因敲除V3后发现MN的动作电位输出并没有受到影响, 则说明这一类中间神经元不是产生节律的来源。

4 神经元活性特征

即早基因 (Immediate Early Genes IEGs) 被广泛的应用于标记中枢神经系统中兴奋的神经元。当细胞受到外界刺激时, 这些基因可作为一种重要信号传导迅速的转录和表达。之前的研究已经发现IEGs可作为标记神经元受到刺激产生兴奋的一个标记基因。对于脊髓运动控制的研究, 我们最为关注的是IEGs中的C-fos基因[6]。

C-fos作为细胞兴奋性标记物质已经在很多领域得到证实, 在研究脊髓运动控制系统中C-fos也得到了广泛的应用。利用转基因手段在C-fos的基因序列上插入一个荧光蛋白基因形成融合基因, 使得在细胞兴奋表达C-fos的同时表现出荧光。该方法在研究CPG方面较其他方法有很大的进步, 实现了对CPG神经元的批量研究, 并为研究这些神经元的药理性和电生理特性提供了基础。

总结

时至今日, 研究行进运动产生的机制仍然是脊髓运动控制的研究重点, CPG的研究并没有清楚地阐明每一类神经元在行进运动中的具体作用。纵观CPG的研究方法都存在着各自的优缺点, 寻找更为有效的方法成为研究CPG中神经元特性的重点。今后的研究中可以将以上四种方法综合使用, 例如将生理解剖特征和神经元活性特征结合起来研究CIN或者脊髓反射通路和基因表达特征结合起来研究RC等, 这些方法有待于在今后的试验中得以应用。

参考文献

[1]Kiehn O.Locomotor circuits in the mammalian spinal cord[J].Annu Rev Neurosci, 2006, 29:279-306.

[2]Jankowska E.Spinal interneuronal networks in the cat:Elementary components[J].Brain Research Reviews, 2008, 57 (1) :46-55.

[3]Shevtsova N A, Talpalar A E, Markin S N, et al.Organization of left-right coordination of neuronal activity in the mammalian spinal cord:Insights from computational modelling[J].The Journal of Physiology, 2015, 593 (11) :2403-2426.

[4]Jessell T M.Neuronal specification in the spinal cord:inductive signals and transcriptional codes[J].Nat Rev Genet, 2000, 1 (1) :20-29.

[5]Stepien A E, Arber S.Probing the locomotor conundrum:descending the'V'interneuron ladder[J].Neuron, 2008, 60 (1) :1-4.