降糖类中成药及保健品

2024-10-04

降糖类中成药及保健品（精选3篇）

降糖类中成药及保健品篇1

高血压是常见病、多发病, 其发病率随着人民生活水平的提高、生活方式的改变及年龄结构的老龄化而迅速增加, 已经严重威胁到人类健康。降压类西药起效迅速, 疗效确切, 市场应用广泛, 但其具有依赖性严重、停药反弹及长期应用会不同程度损害肝肾等副作用[1,2]。因受利益驱使, 不法分子往中成药及保健品中非法添加降压类西药[3], 致使患者在不知情的情况下, 未按照正确用法、用量使用药物, 造成巨大的健康隐患和带来严重的不良反应。本实验在参考相关文献研究[4,5,6,7]的基础上, 运用液质联用技术, 采用多反应监测扫描方式, 首次建立了同时监测非法添加的7种降压化学药物的定性检测方法, 为更好地打击不法行为提供可靠的技术保障。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AB 3200QTRAP液质联用仪 (美国应用生物系统公司) , 配有电喷雾离子化源、三重四级杆质量分析器及Analyst 1.5.1工作站;Sartorius BP211D。

1.2 试药

对照品均由中国食品药品检定研究院提供。阿替洛尔 (批号:100117-199903) 、盐酸可乐定 (批号:0071-9504) 、氢氯噻嗪 (批号:100309-200702) 、卡托普利 (批号:100318-200602) 、盐酸哌唑嗪 (批号:100164-200402) 、利血平 (批号:041-9409) 及硝苯地平 (批号:100338-0001) 。样品:6个样品由本所在市场购得。乙腈、甲酸均为色谱纯, 水为超纯水。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱:Phenomenex Luna C18 (2.0mm×100mm, 3μm) ;流动相:以0.5%甲酸水溶液为流动相A, 乙腈为流动相B, 梯度洗脱, 见表1。流速:0.2mL/min;进样量:5μL;柱温:35℃。

2.2 质谱条件

ESI电离源;正负离子扫描模式, 区间扫描模式见表2;多反应监测 (MRM) 扫描方式;喷雾电压:5500V;气帘气压力:25psi;雾化气压力:40psi;辅助加热器温度:400℃;辅助气压力:40psi;碰撞气压力:Medium;碰撞室出口电压:3V, 解簇电压 (DP) 及碰撞能量 (CE) 。见表3。

2.3 对照品溶液的制备

对照品储备溶液:取上述7种对照品约10mg, 精密称定, 分别置于100mL量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀。

混合对照品溶液:分别精密吸取上述对照品储备液1mL, 置同一100mL量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。

2.4 供试品溶液的制备

取一次服用量的供试品, 研细, 精密称取0.5g置于50mL量瓶中, 加入甲醇40mL, 超声处理15min, 放冷至室温, 加入甲醇至刻度, 混匀, 滤过, 精密吸取续滤液1mL, 置100mL量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 过0.2μm滤膜, 取续滤液, 即得。

2.5 样品测定

取混合对照品溶液及供试品溶液各10μL注入液质联用仪, 按照LC-MS/MS测定条件分别进行分析。

3 结果

3.1 质谱条件的优化

分别将7种对照品储备液用甲醇稀释至1μg·mL-1的对照溶液, 采用ESI离子化方式, 通过直接进样, 进行质谱条件优化。首先, 采用母离子扫描 (Q1) 方式得到准分子离子峰, 在确定准分子离子峰的基础上, 进行DP值的优化, 得到各成分的最佳DP值, 再采用子离子扫描 (MS2) 方式确定其子离子及最佳CE值, 最后选择母离子及丰度较大的子离子组成检测离子对, 使MRM具较高的灵敏度。此外, 在样品测定中可适当增加离子对数量, 使MRM具有更强专属性。结果见表3。

3.2 检测限

取对照品溶液适量, 加甲醇逐步稀释, 按上述液质联用条件进行测定, 以S/N=3, 计算各成分的最低检测限 (LOD) 。结果见表4。

3.3 样品测定结果

在质量色谱图中, 如供试品出现与混合对照品保留时间一致的质量色谱峰, 则需比较其与相应的对照品MS/MS图, 若其离子对相同, 且其相对丰度一致, 见表5, 则判断该样品中含有该化学成分。在抽取检验的6批次供试品中, 检出1批样品添加了氢氯噻嗪, 相应图谱见图1、图2。

4 讨论

硝苯地平光稳定性较差, 操作中应尽量避光, 配置过程须采用棕色容量瓶。阿替洛尔因结构中含有一个手性碳原子, 存在着对映异构现象, 为外消旋体[8], 故在质量色谱中出现两个不同保留时间的吸收峰。

为使7种化学成分达到满意的分离度, 分别对0.5%甲酸-乙腈、0.5%乙酸-乙腈、0.5%甲酸-甲醇、0.5%乙酸-甲醇及20mmol/L乙酸铵-乙腈等洗脱条件进行了考察, 结果表明在0.5%甲酸-乙腈梯度洗脱时, 7种化合成分的离子化效率高, 并均能得到较好的分离。

本实验共建立了7种降压类保健品中非法添加成分的定性检测方法, 该方法采用多反应监测的方式检测, 专属性强, 灵敏度高, 检测结果更准确。

参考文献

[1]王艳, 赵龙凤, 王勤英.药物性肝损伤66例[J].中华肝脏病杂志, 2010, 18 (9) :715-716.

[2]沈素.引起药源性肾损害的药物与常见类型[J].中国医刊, 2007, 42 (11) :13-15.

[3]孙晓翠, 高尚, 刘艳丽, 等.检查清脑降压片中非法添加氢氯噻嗪的方法研究[J].中国药事, 2007, 21 (7) :504-506.

[4]陈海滨, 吴春敏, 胡敏, 等.LC-MS/MS检测降压类中药制剂中非法添加的9种化学药物[J].海峡药学, 2012, 24 (9) :47-50.

[5]刘吉金, 杨敏, 李军, 等.HPLC同时检测保健品及中成药中非法添加9种抗高血压化学药物的研究[J].中国现代应用药学杂志, 2008, 25 (8) :717-719.

[6]高青, 张吉吉, 车宝泉, 等.液质联用检查15种降压类药物及数据检索库的建立[J].中国药学杂志, 2007, 42 (21) :1665-1667.

[7]高青, 张吉吉, 车宝泉, 等.中药制剂及保健品中违禁添加降压药物的LC-MS/MS定性检测[J].中国医药工业杂志, 2007, 38 (7) , 364-367.

[8]邱峰, 郑姣妮, 邱宗荫.双向电泳结合MDLC-MS/MS法分析阿替洛尔对映异构体作用后的血管平滑肌细胞差异表达蛋白[J].第三军医大学学报, 2011, 33 (4) :345-348.

降糖类中成药及保健品篇2

1 研究方法与结果

1.1仪器、试剂试药:LC-20AD液相色谱仪-API4000+质谱仪, Thermo冷冻离心机, 型号:ST-16R, Synthesis A10超纯水系统, XS-205DU电子天平 (德国梅特勒公司) , KQ-200KDE型高功率数控超声波清洗器 (昆山超声波仪器有限公司) 。

甲醇 (色谱纯, 默克公司) 乙酸钠 (色谱纯) , 实验用水为超纯水。

对照品盐酸苯乙双胍、格列本脲、盐酸二甲双胍、格列喹酮、格列吡嗪、盐酸吡格列酮、格列齐特、格列美脲、瑞格列奈、马来酸罗格列酮 (中国食品药品检定院) 。

1.2 溶液制备

1.2.1 对照品储备液:准确称取含盐酸苯乙双胍、格列本脲、盐酸二甲双胍、格列喹酮、格列吡嗪、盐酸吡格列酮、格列齐特、格列美脲、瑞格列奈、马来酸罗格列酮各10.0 mg, 分别用甲醇溶解并定容至10 m L量瓶中, 配成1 mg/m L储备液, 于4 ℃下保存, 使用前用甲醇稀释至所需浓度。

1.2.2 标准混合使用液1:分别准确吸取1.0 m L各对照品储备液于100 m L容量瓶中用甲醇定容。

1.2.3 标准混合使用液2:准确吸取1.0 m L标准混合使用液1于100 m L容量瓶中用甲醇定容至刻度。

1.2.4 供试品溶液:取本品10粒, 倾出内容物, 研碎, 混匀, 精密称取一次口服剂量的内容物, 加甲醇25 m L超声处理20 min, 静置, 放冷, 以8000 r/min离心15 min取上清液经0.22 μm微孔滤膜过滤后, 取0.1 m L置100 m L容量瓶, 用甲醇稀释至刻度, 作为供试液。

1.3 色谱条件:参考相关文献[2]:采用Waters Atlantis T3色谱柱 (2.1 mm×100 mm, 5 μm) ;用含0.01 mol/L的乙酸铵水溶液 (A) -甲醇 (B) 为流动相, 梯度洗脱 (0~30 min, 30%~40% B, 30~40min, 40%→60% B, 40~60 min, 60%~70% B, 60~70 min, 70% B, 70~72 min, 70%~30%B, 72~77 min, 30%B;流速为0.3 m L/min进样量1 μL。

1 . 4 质谱条件:离子源为电喷雾电离源, 采用正离子模式检测, CAD (喷撞气) :4 psi;CUR (气帘气) 25 psi;GS1 (喷雾气) 65 psi;GS2 (辅助加热气) 65 psi;IS (离子化电压) 5500 V;TEM (温度) 600 ℃;采用多反应监测 (MRM) 。

1.5 方法与结果

1.5.1 线性关系及检出限:取各对照储备液, 准确配制一系列不同浓度的混合标准溶液, 重复进样测定3次, 以各物质特征碎片离子峰面积平均值 (Y) 对被测组分的的质量浓度 (X, μg/m L) 进行线性回归, 得回归方程、相关系数和线性范围及定量限。分别以信噪比 (S/N) 等于3和10为标准, 测得10个待测组分的检出限及定量限, 见表1。

1.5.2 精密度和稳定性试验:取同一批次样品6份, 按“1.2.4”项下方法制备供试品溶液, 在优化的实验条件下测定, 测定峰面积, 结果显示各组分特征碎片离子峰面积的RSD为0.7%~3.0%, 表明该方法有较好的精密度。

取同一批次样品按“1.2.4”项下方法制备供试品溶液, 在优化后的实验条件下分别于0、2、4、6、8、10 h进行测定, 测定峰面积, 结果显示各物质特征碎片离子峰面积的RSD为0.6%~3.0%, 表明供试品溶液在10 h稳定。

1.5.3 样品含量测定:分别精密称取不同批号的样品, 按“1.2.4”项下方法制备供试品溶液, 在优化的实验条件下进行含量测定, 把各组分峰面积带入回归方程计算计算样品的含量结果见表2。

1.5.4 加样回收率试验:各取未含降糖类药物的空白基质丸剂、胶囊剂、片剂一次剂量, 照表3添加对照品量。

2 讨论

2.1 本文参照国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件2009029的方法进行了HPLC的检验, 原标准将盐酸二甲双胍和盐酸苯乙双胍和其余8种物质分开, 用不同的液相色谱方法检验, 本文用一种液相色谱方法同时检测10种成分, 提高了效率。

2.2 本文梯度洗脱程序较原标准延长了30 min, 在75 min洗脱出了较多杂质, 10种成分也得到了较好分离。

2.3 HPLC-MS/MS法采用Waters色谱柱, 柱压较低, 在样品处理上较HPLC-DAD法多稀释了1000倍, 各物质特征碎片离子峰面积却达到了104, 检测出样品含有盐酸苯乙双胍、格列本脲、罗格列酮3种违禁成分, 与对照品的一级质谱和二级质谱高度匹配。

2.4 HPLC-MS/MS法采用正离子扫描, 得到的是M+1质谱离子, 盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍、马来酸罗格列酮溶解于甲醇后得到的是脱盐的离子。参照文献选用甲醇为溶剂。

参考文献

[1]肖树雄, 李杨杰.由降糖中成药和保健食品检验情况探索非法添加化学成分的系统快筛思路[J].药物分析杂志, 2011, 31 (2) :418.

降糖类中成药及保健品篇3

关键词：HPLC,数字对照品,相对保留时间

数字对照品法是几种物质与特定一物质的相对保留时间, 使用相对保留时间取代化学对照品定位某几种物质的方法即为数字对照品法。目前在定位对照品昂贵或难以获得的化学物质时常常使用[1,2,3,4,5]。镇静安神类化学药品常含苯巴比妥等上述五种精神药品, 购买此类药品对照品是需要省一级药监部门批准, 向国务院药监部门批准的单位购买。这一购买程序繁琐, 且价格不菲, 因此急需一种简单, 实用的检测方法来定性此五种药品。

1 仪器和试剂

色谱仪:Agilent 1100 Series (色谱仪1) , Shimadzu LC-10ATvp (色谱仪2) , Waters 2690-2487高效液相色谱仪 (色谱仪3) 。

对照药品:苯巴比妥片 (批号090402, 上海医药 (集团) 信谊制药总厂) 、艾司唑仑片 (批号20090209, 常州四药) 、阿普唑仑片 (批号090311420, 河南天方) 、三唑仑片 (批号20071201, 江苏恩华) 、地西泮片 (批号090302, 上海医药 (集团) 信谊制药总厂) 。

样品:养血安神片、仁和健脑安神片、养血安神糖浆、安神补脑液、睡安胶囊、镇脑宁胶囊均为市售常用镇静安神类中成药和保健食品。试剂:乙腈为色谱纯, 甲醇、甲酸均为分析纯, 水为超纯水。

2 制备溶液

2.1 制备混合对照液

取0.25mg三唑仑片、0.1mg阿普唑仑片、1mg艾司唑仑片、2.5mg地西泮片、30mg苯巴比妥片, 研细后置于量瓶中 (25 mL) , 加适量甲醇, 超声振荡10min, 冷却, 加甲醇至刻度, 轻轻摇匀, 得续滤液, 即为混合对照溶液。

2.2 供试品溶液制备

将已准备的6种镇静安神类中成药和保健食品, 溶剂用所制得的混合对照液, 样品溶液每份样品平行制备2份。供试品溶液具体制备过程见参考文献。

3 色谱柱条件与系统使用范围

色谱柱:Agela Venusil MP-C18 (4.6 mm×150 mm, 5μm) ;流动相:乙腈-体积分数0.5%甲酸 (33∶67) ;检测波长:254nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;进样量:20μL。苯巴比妥、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑及地西泮色谱峰与其相邻峰的分离度应>1.5。

4 基本原理

对多指标进行质量评价时, 可以以样品中对照品易得者作为典型成分某一典型成分替代对照品, 建立数字对照品法计算相对保留时间α, 如αis=ti/ts, αis为待测成分i相对于替代对照品s的相对保留时间, ti为待测成分的保留时间, ts为替代对照品的保留时间。测定样品时, 用替代对照品进行测定样品保留时间ti=α×ts。根据测定结果, 观察数字替代对照品进行非法添加检测的可行性。

5 数字对照品法耐用性考察

精密吸取混合对照液20μL, 连续进样测定三次去平均值。替代对照品为苯巴比妥其他四种样品为待测成分。

5.1 色谱柱对α值的影响:

通过实验结果比对同一台HPLC仪器使用不同色谱柱测定出结果具有差异, 但是P>0.05不具备统计学差异, 差异无意义。

5.2 柱温对α值的影响:

无论多么精密的仪器都无法控制到百分百精密因此HPLC的柱温箱也存在着偏差, 因此在同一色谱仪在不同温度条件下测得的α值也会产生偏差。但是通过对实验分析, 可以看出温度对α值无显著影响。

5.3 流速对α值的影响:

流速在HPLC色谱仪测定保留时间上有着直接影响。选择同一台色谱仪, 从0.6~1.4mL/min的流速, 梯度为0.2分别测量α值, 通过分析流速对α值的影响不大。

5.4 其他:

不同色谱仪在测定α值时对结果有一定影响, 但是产生的差异无统计学意义, 不影响测定结果。此外由于药物随着剂型的不同所用辅料也会不同, 因此这些辅料可能对检测结果造成影响, 实验通过对典型的片剂, 胶囊, 口服液进行检测发现对实验结果无影响。

6 结果与结论

数字对照品法对5种化学成分的定性检测结果较为成功, 确定了后四种成分对苯巴比妥的相对保留时间, 分别为1.9、2.2、2.6、3.4。可见数字对照品法能够更加实用、快速的筛查非法添加的5种化学成分。