蛋清实验

蛋清实验（精选4篇）

蛋清实验 篇1

荨篷膏是新疆伊犁萨克民族居住区发掘的外用药，常被当地少数名族用来治疗各种原因引起的关节肌肉疼痛、风湿关节肿痛，多种周围血管病引起的肢体肿胀及坏死性、溃疡性疼痛，也常用于治疗各种原因引起的创面破溃，久不收口等外科疮疡性疾病。为给临床应用提供理论依据和进一步开发利用民族药物资源，本课题组进行了荨篷膏对小鼠足跖肿胀影响的初步抗炎作用研究，报道如下。

1 材料与方法

1.1 药材试剂

1.1.1 药材：

方中所用民族药均购买于当地民族药材市场，其他中药则选自伊犁州中医医院购买于药材市场的药材；基质及相当于人体及小鼠用药的原剂量、5倍、10倍剂量的荨篷膏由新疆伊犁州中医医院药剂科提供。

1.1.2 阳性对照药：

999皮炎平，由三九制药厂生产，批号为1204004H。

1.1.3

蛋清自制，其他试剂均为市售分析纯。

1.2 试验动物及分组：

60只体质量（20±2)g的SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，由新疆医科大学医学实验动物中心提供，合格证号scx（新）2011-0004，随机分为：模型组、基质组、阳性药对照组，荨蓬膏低、中、高剂量组，每组各10只。

1.3 方法：

造模前用游标卡尺测定各组小鼠右后肢足跖厚度。基质组系配制油膏的胡麻油；模型组则只给蛋清，不做药物干预；荨蓬膏低、中、高剂量组，分别相当于人体及小鼠用药的原剂量、5倍、10倍剂量（按人体60 kg体质量原剂量生药含量93 g，则小鼠20 g体质量，低、中、高剂量药物含生药分别为0.031克/只、0.157克/只、0.314克/只）；阳性对照药为999皮炎平。除模型组外，各组于右足跖涂抹0.03 g/cm2的相应药物4次，每次间隔30 min。于未次给药20 mi后，每鼠右足跖腱膜下注射0.1 mL蛋清（自制）致炎，造成急性足跖肿胀模型，分别测定致炎后1、2、4、6、8 h左右足跖厚度，计算各组小鼠足跖肿胀度均值及肿胀抑制率。肿胀度（mm）=致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度；肿胀抑制率（%）=（对比组肿胀度-给药组肿胀度）/对比组肿胀度×100%。

1.4 统计学处理：

采用SPSS 13.0统计软件，计量资料以均数±标准差表示，组间差异比较用t检验和卡方检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 荨蓬膏低剂量组小鼠足跖肿胀度在2、4、6 h时明显低于模型组、基质组，差异有统计学意义（P<0.05）；阳性药对照组与模型组、基质组差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.2 小鼠足跖肿胀抑制率的影响1、2、8 h时，低剂量组与基质组、模型组相比的肿胀抑制率显示出优于对照组、高剂量组、中剂量组与基质组、模型相比的各组，但差异无统计学意义（P>0.05);4 h、6 h时，低剂量组与基质组、模型组相比的肿胀抑制率优于对照组、高剂量组、中剂量组与基质组、模型组相比的各组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

3 讨论

资料显示，高血压、糖尿病、脂代谢紊乱、肥胖等代谢性疾病等近年来有显著上升趋势[1]，本课题组先前的研究也显示出伊犁山区牧民上述疾病的患病率不容乐观[2]。因上述疾病引起的动脉硬化闭塞症、静脉血栓性疾病、糖尿病足等可导致间歇跛行、剧烈疼痛、肢体溃烂、坏疽甚至截肢，造成终身残疾、甚至危及生命，有效的干预将使患者直接受益。

荨蓬膏主要成分荨麻、篷子菜、骆驼蓬、苦豆子，系新疆伊犁哈萨克、维吾尔族常用口服、外用药；当地居民及民间医常以上述药外覆治疗风湿关节肿痛、外伤化脓、疮疖肿毒、皮肤瘙痒溃烂等。资料显示，上述诸药具有调节人体免疫力，抗菌抗炎、抗过敏之作用[3,4,5,6]。课题组以此为依据，结合中医药理论运用此方药物熏洗及软膏外涂治疗动脉硬化闭塞症、静脉血栓性疾病、糖尿病足获得良好疗效。

方中荨麻、蓬子菜利水消肿、活血、生肌止痛为君药；骆驼蓬、苦豆子助君药消肿、生肌止痛；佐以姜黄、白芷化瘀、去腐生肌；冰片清热解毒、祛湿化浊，同时促进其他药物透皮吸收而为使药，诸药共用达到行水活血止痛、去腐生肌的作用。

本课题先前的研究证实了该方具有消炎、镇痛等作用[7,8]，本研究对蛋清引起的小鼠足跖肿胀模型的进一步观察，显示出低剂量荨篷膏对小鼠足跖肿胀具有良好的抗炎、消肿作用，且以造模后4、6 h时效果最佳，明显优于阳性对照药999皮炎平，其机制可能是方中主药具有利尿[3]、通过降低毛细血管通透性[9]使渗出减少，促进水肿消退而达抗炎作用的。本实验为荨篷膏的临床运用及剂量确定，从而进一步研究开发提供了理论参考依据。

注：与基质组、模型组相比，*P<0.05,**P>0.05

注：与对/基、高/基、中/基相比，*P>0.05，△P<0.05；与对/模、高/模、中/模相比，**P>0.05；△△P<0.05

摘要：目的 观察荨篷膏蛋清致小鼠足趾肿胀的抗炎作用。方法 将60只SPF级昆明种小鼠随机分为模型组(只给蛋清,不做药物干预)、基质组、阳性药对照组(对照组),荨蓬膏低、中、高剂量组6组;造模前用游标卡尺测定各组小鼠右后肢足跖厚度,除模型组外,各组于右足跖涂抹0.03 g/cm2的相应药物4次,每次间隔30 min。末次给药20 min后,每鼠右足跖腱膜下注射0.1 m L自制蛋清致炎,造成急性足跖肿胀模型,分别测定致炎后1、2、4、6、8 h左右足跖厚度,计算各组小鼠足跖肿胀度均值及肿胀抑制率。结果 1对蛋清致小鼠足跖肿胀度的影响:2、4、6 h时,与模型组、基质组相比,低剂量组差异有统计学意义(P<0.05);2对蛋清致小鼠足跖肿胀抑制率的影响:4、6 h时,低剂量组与基质组、模型组相比的肿胀抑制率优于其他与基质组、模型组相比的各组(P<0.05)。结论 低剂量组荨篷膏具有很好抗蛋清致小鼠足趾肿胀的抗炎作用。

关键词：荨篷膏,足趾肿胀,抗炎

参考文献

[1]刘爱兵,曾伟民,李红梅,等.飞行人员代谢综合征与动脉粥样硬化危险因素研究[J].中华航空航天医学杂志,2009,20(3):46-51.

[2]苏建春,于云华,霍伊军,等.伊犁山区哈萨克族牧民代谢综合征患病率及相关性分析[J].新疆医科大学学报,2010,33(9):1073-1075.

[3]李莉,张庆林.荨麻的药理作用研究进展[J].解放军药学学报,2007,23(4):297-298.

[4]田旭升,高杰,赵刚.蓬子菜在动脉硬化闭塞症中的研究与应用[C].中华中医药学会周围血管病分会第一届学术大会论文集,2012:161-162.

[5]胡承波,梅林,龙春,等.中药骆驼蓬的研究进展[J].中国药业,2007,16(8):59-61.

[6]李莉,张文学,张顺利.苦豆子生物碱的免疫调节作用及其作用机制研究进展[J].中草药,2007,38(4):7-8.

[7]张莉,于云华,李洁,等.荨篷膏抗炎作用的实验研究[J].中华中医药杂志,2014,29(3):882-883.

[8]刘虎,李洁,王喜梅,等.荨篷膏醋酸扭体法镇痛实验研究[J].新疆中医药杂志,2014,32(2):54-55.

[9]马英丽,卢卫红,于晓敏,等.蓬子菜的化学成分研究[J].中草药,2005,36(10):1464-1466.

基于蛋清分离器的浇口分析 篇2

对于常规的塑件, 一般分析流程包括前处理与后处理。前处理过程中有两大步骤“建立网格模型”与“设定分析参数”, 后处理中为“模拟分析结果”。

(1) 建立网格模型。本课题将利用UG建好的模型导出Moldflow能够识别的STL模型。然后对该模型进行网格划分。

(2) 设定分析参数。首先确定分析的类型, 对相应的模块进行分析。接着, 在材料库中选择成型材料及各种物理参数。按照注塑成型的不同阶段, 设置相应的温度、压力和等工艺参数。然后设定浇口位置, 创建浇注系统和冷却系统的形式, 初步确定主流道、分流道、浇口的大小和位置, 与冷却管道的大小和位置等。

(3) 模拟分析结果。通过参数设置, 进行相关工艺的分析。在分析结束后, 可以看到产品成型过程中充填过程、温度、压力的变化和分布, 以及产品成型后的形状等信息, 为模具设计提供必要的设计依据或参考。

2 蛋清分离器的分析准备

(1) 模型导入。Moldflow与其它CAD系统具有良好的数据接口。本论文使用的CAD模型数据是由UG转换为STL文件。STL文件是Moldflow能识别的文件, Moldflow对文件的导入后, 后期需要划分网格, 同一个3D模型数据由于保存的文件格式不相同, 网格划分的质量也不一样。如果保存的文件格式为IGS格式, 在后续的划分网格质量, 其匹配率要比STL和STP等格式的数据模型高一些。但有时数据模型的结构较复杂, IGS格式的数据反而会使网格的缺陷增多。因此, 在IGS格式的数据质量较好的情况下, 优先选择IGS格式;反之, 优先选择STL格式。

(2) 模型网格的划分。运用Moldflow进行模型分析之前, 需要创建网格模型, 通过有限元的计算方法, 将模型用网格包络逼近, 网格是模流分析的基础。全局网格边长一般情况下为制件最小壁厚的1.5-2倍。本论文的塑件壁厚通过厚度诊断平均值1.07mm, 如图1所示。因此重新设置全局网格边长为1.6mm, 满足原则要求, 划分完之后的结果如图2所示, 匹配率达到88.3%。表面网格模型的网格匹配率必须达到85%或者更高才可以进行流动+保压分析。

3 浇口位置分析

选择合理的浇口在模具设计中是十分重要的。通过Moldflow中的“浇口位置”分析模块, 可以用来设计分析过程找到一个初步的浇口位置, 如果已知塑件的材料是食品级别的PP塑料, 通过材料的选择后, PP料的相关特性也就确定了, 其中PP料的推荐的模具表面温度为50度和熔体温度为230度。

通过浇口位置分析后, 如图3所示的浇口匹配性结果, 显示了模型各位置处的浇口匹配性位置。其中用蓝色表示浇口匹配性最好, 表示是最优的浇口位置。红色位置表示浇口匹配性最差, 不适合设置浇口位置, 其他位置匹配性处于过渡区域。

4 总结

蛋清实验 篇3

目前用于蛋白质检测的主要仪器包括分光光度计[1]、SDS-凝胶电泳仪[2,3]、氨基酸分析仪[4]和飞行时间质谱仪[5]等。其中, 分光光度计特异性差和灵敏度低[6];SDS-凝胶电泳仪的操作较为复杂, 尚不能完全自动化处理[7];氨基酸分析仪结构复杂, 且不能同时测定脯氨酸和其他氨基酸[8]。而飞行时间质谱仪可以测定蛋白质的精确质量数, 且分辨率和灵敏度高, 具有较宽的质荷比检测范围[9]。此外, 飞行时间质谱仪可以在没有标准品的情况下对未知物质进行有效鉴定。将其与超高效液相联用, 大大提升了其对蛋白质的检测能力, 已被广泛应用于生命科学的蛋白质组学研究[9], 此外, 液相-飞行时间质谱仪在新药开发、环境和食品安全检验检疫等领域具有广阔的应用前景。

鸡蛋清中的主要蛋白成分是溶菌酶、卵转铁蛋白[10]和卵清蛋白, 所以本文将建立一种使用超高效液相-飞行时间质谱仪快速准确检测鸡蛋清中这3种蛋白质的方法。

1 试验材料与方法

1.1 仪器和试剂

Agilent 1260超高压液相色谱仪、Agilent 6540 Q-TOF飞行时间质谱仪, 安捷伦科技有限公司;Eppendorf Centrifuge 5804离心机, 德国艾本德公司。

乙腈 (色谱纯) Fisher Scientific;超纯水由Millipore Milli-Q超纯水仪生产;海藻酸钠 (分析纯) Adams Reagent公司;NaCl、巯基乙醇和Tris等试剂均为分析纯。

1.2 试验方法

1.2.1 UPLC条件

色谱柱:Agilent Poroshell 300SB-C18色谱柱 (2.1×75mm, 5μm) ;柱温30℃;流动相:A相为0.1%三氟乙酸水溶液, B相为乙腈溶液, 采用梯度洗脱, 0～20min内B相从20%增加到90%;流速0.5mL/min;进样量5μL。

1.2.2 质谱条件

电喷雾离子源 (ESI) ;正离子模式;毛细管电压3500V;干燥气温度350℃;干燥气流速10mL/min;雾化气压力45psi;Fragmental电压170V;锥孔电压40V;质荷比采集范围m/z 100～3200。

1.3 样品处理

使用Awadé[11]的方法对鸡蛋清进行预处理:取5mL鸡蛋清和10mL含0.4mol/L NaCl和10mmol/Lβ-巯基乙醇的0.05mol/L Tris-HCl (pH值9.0) 缓冲液轻微搅拌置于4℃冰箱过夜后, 7 000r/min下离心3min, 取上清进样。

2 结果与分析

图1为鸡蛋清的总离子流色谱图 (TIC) , 在本文的色谱条件下4.4、5.8和8.5min处均有较大的离子流。使用Masshunter Qualitative Analysis软件中的分子特征提取功能 (MFE) 对TIC图进行分析, 得到总化合物色谱图 (TCC) (图2) 及4.4、5.8和8.5min处物质的特征分子质谱图 (图3、图4和图5) 。

查阅文献可知溶菌酶、卵转铁蛋白和卵清蛋白的相对分子量分别为14 307.9Da[12]、76 000～80 000Da[10,13,14]和44 000～45 000Da[15]。使用Masshunter Qualitative Analysis软件对以上3个分子特征质谱图进行计算, 得到4.4min处物质的相对分子量为14 304.51Da, 带有5～11个电荷, 可以确定为溶菌酶;5.8min处物质的相对分子量为77 295.88～77 693.17 Da, 带27～61个电荷, 为卵转铁蛋白;8.5min处物质的相对分子量为44 329.19～44 519.61Da, 带16～52个电荷, 为卵清蛋白。

3 结论

蛋清实验 篇4

禽类胚胎体外培养技术是禽类胚胎生物工程必不可少的重要环节, 也是发育生物学、药物毒理学等学科常用的研究手段, 在胚胎学、遗传学、转基因生物反应器以及空间生命科学等的研究中日益发挥着重要作用。

禽类体外培养技术是将禽类受精卵或早期胚胎在代用蛋壳或人造容器所组成的相对开放的体外培养系统中培养孵化获得个体的技术。利用体外培养技术可以满足人们对各个发育阶段的胚胎进行操作的需要, 且具有便于观察的优点。禽类胚胎的体外培养研究, 主要是以鹌鹑和鸡为实验材料的。早在1896年, Assheton等就曾试图将鸡胚放在玻璃器皿中培养。至今禽类胚胎体外培养方法有三种, 即早期的非蛋壳器皿培养、代用蛋壳体系和三期培养体系。随着对器皿培养导致的胚胎发育迟缓、严重缺钙症状的剖析及禽类胚胎发育与蛋壳之间紧密联系认识的加深, 人们确信蛋壳在胚胎发育中的不可替代作用。Ono (1984) 将孵化2.5d的鹌鹑胚胎转移到鸡蛋壳内培养, 有3%的鹌鹑孵出。Rowlett (1987) 将孵化3d的鸡胚转移到火鸡蛋壳或鸡双黄蛋壳中培养, 结果孵化出了雏鸡, 孵化率分别为20.0%和21.7%。为了将显微注射技术应用于制备转基因家禽, 英国的Perry (1988) 在综合前人研究的基础上从鸡输卵管膨大部后段获得单细胞受精卵, 将胚胎发育的子宫期、1～3d和3～22d的体外期分别在3个不同的培养系统中连续培养, 成功地孵化出雏鸡, 孵化率为7%, 从而建立了3期培养体系。1994年, 在Perry的培养体系基础上加以改进, Ono (1994) 建立了鹌鹑的3期体外培养体系, 获得25.0%的孵化率。

家禽的胚胎发育与哺乳动物不同, 它是依赖于种蛋内贮存的营养物质, 而不从母体血液中获取营养物质, 在鸡胚的整个发育过程中, 蛋壳内的蛋白质、碳水化合物、脂肪、矿物质、维生素和水含量对其正常的发育起着至关重要的作用。本试验拟通过抽取蛋清和蛋壳钙质开口, 以研究蛋清抽取量和蛋壳钙质开口对鸡胚发育的影响。

1材料与方法

1.1实验仪器

超净工作台:AIRTECH, 苏宁集团安泰公司制造。

全自动电脑孵化器:INCBJAJOR11J-18, 中国北京海江电脑孵化设备制造有限公司生产。

1.2试验材料

种蛋:由天津市西青区大梁庄兴华养鸡场提供, 总共100枚, 99枚用于实际试验。种蛋要求清洁, 大小相近, 表面光滑, 蛋壳厚度适中, 质地均匀, 蛋形指数为2.5～3。

1.3试验设计

本研究共设计二组试验, 试验一为在X期 (0日龄) 种蛋的小头抽取1mL或3mL蛋清以研究蛋清抽取量对X期鸡胚体外发育的影响。试验二为在X期 (0日龄) 种蛋蛋壳钙质层的大头顶端的开直径为0.5cm的圆口, 进行封口或不封口处理, 以研究蛋壳钙质层的完整性对X期鸡胚体外发育的影响。

1.4试验方法

1.4.1超净工作台消毒操作全过程在超净工作台上进行。试验前, 将所用器械和试剂等置于超净工作台上, 紫外线照射30min以上进行消毒。

1.4.2蛋壳表面消毒试验用X期种蛋, 用医用酒精棉签擦拭消毒, 确保整个蛋壳表面均被擦拭并晾干。

1.4.3抽蛋清 (试验1) 用酒精灯火焰已消毒的针头在种蛋的小头打一小孔, 然后使种蛋大头向上, 小头向下, 放置1min左右, 使蛋黄向上漂浮, 避免抽蛋清时破坏蛋黄, 再将注射器针头在小头抽取蛋清 (针头尽量靠近蛋壳) 1mL或3mL。

1.4.4开口 (试验2) 先用铅笔在种蛋大头顶端画一直径为0.5cm的圆圈, 然后用手术刀片沿着所画线刻出画痕, 去除圆内蛋壳钙质, 切口尽量保持平滑。

1.4.5封口

试验1:针孔直接用特制的封口胶涂抹即可。

试验2:则需先用手刻好直径约0.7cm的蛋壳皿, 将其浸泡在加有青霉素和庆大霉素的生理盐水中, 封口前用滤纸吸干蛋壳皿的液体, 然后盖在蛋壳钙质开口处, 用特制封口胶封闭边缘缝隙, 确保封封严实, 封口胶应面积小, 且不应太厚。

2.4.6孵化条件种蛋钝端朝上放入全自动电脑孵化器内孵化。孵化条件为:孵化温度为37.8℃, 出雏温度为37℃;相对湿度60%左右;自动翻蛋 (1次/h) ;转蛋角±45°。

1.4.7观察在孵化的第3、第6、第9、第12、第15和第18天分别进行照蛋, 观察胚胎的心脏、胎盘、血管、胚体等, 以此来判断鸡胚的存活以及胚胎的发育情况。死亡鸡胚及时打开, 观察死胚的发育情况。

1.5试验数据

处理试验数据用百分数表示, 并用T检验进行组间差异的显著性检验。

2结果与分析

2.1蛋清抽取量对X期鸡胚体外发育的影响

从试验结果来看, 抽取1mL蛋清组与抽取3mL蛋清组的孵化率分别为37.9%和50.0%, 抽取3mL蛋清组的孵化率明显优于抽取1mL蛋清组 (p<0.05) 。从鸡胚的发育过程来看, 两组鸡胚存活率的下降主要集中在抽蛋清后的6～9日龄, 另外抽取1mL蛋清组在孵化的后半期存活率下降较快。

2.2蛋壳钙质开口对X期鸡胚发育的影响

在X期鸡胚大头顶端钙质层开直径为0.5cm的孔的情况下, 试验就蛋壳钙质开口与否对X期鸡胚发育的影响作了研究。由表2可见, 封口组和开口组X期鸡胚的孵化率存在极显著差异 (p<0.01) , 两组的孵化率分别为70.0%和15.5%, 封口组的孵化率明显优于开口组。另外, 开口组鸡胚的死亡主要集中在孵化的15d之后, 特别在孵化的第15～18天, 鸡胚的存活率由第15天时的85.0%降到18d时的35.0%。

3讨论

3.1蛋清抽取量对X期鸡胚体外发育的影响

李碧春、赵东伟和陈国宏等 (2001) 对不同发育时期的早期鸡胚的体外培养的情况进行过研究, 试验结果表明, 随着受精卵和早期胚胎的发育, 胚胎在体外的发育能力越来越强, 体外受精卵体外培养发育率为1.2%;孵化1d鸡胚体外培养的出雏率为7.9%。为了寻找影响X期鸡胚体外发育的原因, 郝志明等 (2005) 进行了抽取蛋清试验, 他们分别在X期鸡胚和孵化3d种蛋的小头抽取1mL蛋清, 结果X期鸡胚和孵化3d种蛋的体外培养的孵化率分别是31.3%和81.3%。基于上述研究成果, 本试验就蛋清抽取量对X期鸡胚体外发育的影响进行了研究。从表1看, 抽取1mL和3mL蛋清的孵化率分别为37.9%和50.0%, 抽取3mL蛋清组的孵化率明显优于抽取1mL蛋清组, 这似乎与常理并不相符。按照常理, 抽去蛋清的量愈多, 孵化率应愈低。本实验为何出现与常理相反的结果, 还有待于进一步研究。

3.2蛋壳钙质开口对X期鸡胚体外发育的影响

郝志明, 等 (2005) 曾对X期鸡胚进行过开口试验, 但他们将整个蛋壳开孔, 包括蛋壳的钙质部分和蛋壳内外膜。他们研究发现开口后立即进行封口和开口后停留2h后封口, 鸡胚的发育出现明显的差异, 孵化7日龄时, 鸡胚的存活率立即封口组为51.6%, 而停留2h后封口组只有25%。本试验则仅对蛋壳的钙质进行了开孔, 并没有破坏蛋壳膜, 以研究蛋壳钙质开口对X期鸡胚体外发育的影响。

从表2试验结果看, 开口组与封口组之间的孵化率存在极显著差异, 封口组的孵化率为70.0%, 而开口组的孵化率仅为15.0%, 封口组的孵化率明显优于开口组。另外, 研究还发现开口组鸡胚的死亡主要发生在孵化的15d之后, 存活率从15日龄时的85%下降到出雏时的15%, 短短的几天, 存活率下降60%。解剖死胚发现, 鸡胚气室极大, 胚体明显减小, 胚体明显变硬。因此我们推测, 开口组鸡胚的死亡主要是由于孵化期间鸡胚水分的蒸发, 使胚胎缺水, 最终造成鸡胚代谢紊乱, 严重尿中毒所致。

4结论

4.1 X期鸡胚蛋壳钙质开孔可明显降低鸡胚的孵化率, 约0.5cm的开孔, 孵化率仅为15.0%。