免疫增强比浊法

免疫增强比浊法（精选6篇）

免疫增强比浊法 篇1

关键词：免疫增强比浊法,β2-微球蛋白,肾小球滤过率

β2-微球蛋白 (β2-MG) 存在于有核细胞的表面, 特别是淋巴细胞和肿瘤细胞, 并由此释放入血。正常人β2-MG的合成率及从细胞膜上的释放量相当恒定, 可以从肾小球自由滤过, 99.9%在近端肾小管吸收;故而正常情况下β2-微球蛋白的排出是很微量的, 由此β2-MG的升高可反映肾小球滤过功能受损或滤过负荷是否增加的情况;可做为肾小球和肾小管病变的敏感指标。有报道慢性肾炎患者β2-MG浓度可随病情加剧而升高。本研究建立了免疫增强比浊法测定血清β2-微球蛋白浓度的方法, 并对检测行为进行方法学评价。

1 资料与方法

1.1 一般资料

均为我院门诊和住院病人。

1.2 试剂和仪器试剂

试剂1 (R1) :磷酸盐缓冲液、氯化钠、聚乙二醇、稳定剂适量;试剂2 (R2) :结合乳胶微球的β2-MG抗体, 干扰物质:500μmol/L胆红素标准液、5g/LHb溶液均由浙江伊利康生物技术有限公司提供。仪器为:日立7080生化分析仪。

1.3 方法

1.3.1 原理

样品中β2-微球蛋白与试剂中相适应的β2-微球蛋白抗体在溶液中相遇, 立即形成抗原-抗体复合物, 并形成一定浊度。该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。通过与同样处理的校准液比较, 计算位置样品中得β2-MG含量。

1.3.2 分析

参数样本体积30μl。R1体积240μl, R2体积60μl, 主波长600nm, 副波长800nm, 终点法。反应温度:37℃, 第17点读取A1, 第34读取A2, 反应方向为上升反应。

1.3.3 操作方法

根据分析参数在仪器上编制检测程序, 在日立7080生化分析仪上完成检测。

2 结果

2.1 精密度

根据NCCLSEP5-A2文件对于精密度评价的要求, 分别测定低值、中值和高值三种水平的β2-MG浓度。2h内各种水平连续测定20次, 计算均值 ($\stackrel{—}{{\displaystyle x}}$) 、标准差 (S) 、 (CV批内) 。每天测定1次, 连续测定20d, 计算 ($\stackrel{—}{{\displaystyle x}}$) 、 (S) 、 (CV日间) 。批内精密度结果见表1。

2.2 回收试验

取两个新鲜血清样品各一份, 以不同比例混合, 成为分析样品, 然后分别测定β2-MG的浓度, 计算回收率%, 结果见表2。

注:*血清β2-MG的平均回收率为100.1%

2.3 对比实验

将血清样品 (N=40) 同时用该法与日本进口原装β2-MG试剂分别测定进行比较, 测定范围为 (0.05～15) mg/L, 计算出回归方程为y=1.021x+0.0043 (x为进口原装β2-MG试剂) 。相关系数r=0.9990, 经t检验, 表明两组结果差异无统计学意义 (P>0.05) , 高度相关。

2.4 稳定型试验

将本法试剂按以下几种方式测试, (1) 2℃～8℃开瓶上机稳定性, 即第一次校准后开瓶置于仪器冷藏, 随后不再校准每天监控相同批次标本, 直到失控为止; (2) 2℃～8℃开瓶第一次校准后, 随后不再校准每天监控相同批次标本, 直到失控为止, 但每天测定后及时密闭瓶盖; (3) 加速热破坏实验:37℃热破坏, 每次测定前进行重新校准每天监控相同批次标本, 直到失控为止。从试验结果可看出, 本法试剂显示出良好的开瓶稳定性 (至少1个月以上) , 结果见表3。

注:“开”指始终开瓶上机观察;“闭”指开瓶上机, 测定结束后密闭;“37℃”指热破坏性实验

2.5 干扰因素

用稀释好的不同浓度的血红蛋白、胆红素和类风湿因子分别与含β2-MG浓度较高的血清和0.9%氯化钠溶液做回收试验, 以回收率的好坏判断是否存在干扰。结果RF≤2000IU/L、胆红素≤400μmol/L、TG≤12mmol/L、Hb≤4g/L对β2-MG测定无干扰。

2.6 分析灵敏度试验

用浓度为2.25mg/L的定值样本, 重复测定3次, 分别计算测定吸光度的均值, 结果本试剂灵敏度为0.1820。

2.7 线性范围测定

按NCCLS (EP6P) 文件作线性评价标准, 取一高浓度β2-MG标准品和一低浓度β2-MG标准品, 然后把2份样本等量混匀产生中间值, 再分别将中间值和低值, 中间值和高值等量混匀, 共产生5个不同浓度的样品。在分析仪上用本试剂从低值到高值, 然后从高值到低值对5个不同浓度的标本等别平行测定5次, 求得均值为Y, 以理论值为X, 经线性回归分析, 得回归方程为:y=0.8384x+0.456, 说明β2-MG浓度在15mg/L范围内线性良好。

3 讨论

本文对重复性实验、回收实验、干扰实验、灵敏度和线性范围进行了分析。该法是利用包被在纳米微球上的抗人β2-MG抗体与β2-MG抗原反应产生浊度, 其浊度与β2-MG浓度成正比。该法在HITACHI7080全自动生化分析仪上有高度的精密度, 良好准确度, 较宽线性范围和较长的开瓶稳定性, 在抗干扰方面也有良好操作性能, 可见本法完全符合临床检验使用的要求。

免疫增强比浊法 篇2

妈妈们心中一直有个疑问？为何别人的小孩很久不曾生病，但是自家的小孩具有特异体质不说，还常常跟着流行挂病号，小小年纪病历就厚厚一叠，心中自责不已，因为他可能是遗传自我的不良体质。更懊恼的是常吃西药，不晓得会不会对他日后的发育有不良的影响？不然为什么小孩子的脸色苍白？是否有更好的方法可以改善体质，尽量远离疾病的威胁？

答案当然是肯定的，中医几千年来最强调的观点就是预防医学，先天之精有赖于后天之精的不断培育和充养才能充分发挥其生理效应;后天之精的发生又依赖于先天之精的活力资助，二者相辅相成，所以先天的不足在某些方面是可以靠后天的培养予以改善。这可以说是为什么中医在现代医学如此发达之下，仍然可以蓬勃发展的重要因素之一。中医称：“邪之所凑，其气必虚”“正气存内，邪不可干”说明了在正气虚弱，免疫力差的情况底下，容易造成外邪的入侵，即病原体的感染，会造成各种疾病;若自身之免疫力调节得当，则外邪不易入侵，治疗许多免疫力失调，容易罹患感冒、鼻炎、气喘、肠胃炎、肾炎等各种疾病的小朋友，中医即在此观念之下治疗小儿疾病，获得了不错的成效，不只感冒、鼻炎、气喘等疾病发作减少，而且气色变好，食欲增加，抵抗力亦随之勇固。

小儿各方面发育尚未完全，所以先天的禀赋关系着体质的优劣，通常与遗传具有一些关联性，尤其是免疫力，因此对病毒及细菌的抵抗力较差，故而容易罹患感冒、过敏性鼻炎、支气管炎、气喘、扁桃腺炎、中耳炎、肠胃炎、肠病毒、甚至肺炎、脑炎、肾炎等各种疾病，加上大脑内的体温调节中枢较不成熟，所以对体温的调控能力亦较薄弱，往往在一点征兆都没有的情况底下，病原体会直接影响体温中枢而引发高烧，严重者甚至引起各种并发症。

其实，对于西医的治疗小编还是非常的不喜欢的，因为西医的治疗是治标不治本。西医在治疗的时候多对疾病不同去用不同的支持疗法，如果是细菌的疾病，那么就用抗生素。这样的情况最后就是导致等病好后，孩子的身体非常的虚弱，这样长时间的恶性循环，对于孩子的生长发育非常的不好。

由于常罹患疾病吃药，以及小儿喜食冰饮、香辣烤炸的食物结果，常会使肠胃系统受损，因而更加恶化体质，使得有些小孩面色看起来晦暗无光，食欲不振的结果造成发育不良，身材瘦小，甚至会有注意力不集中的情形，严重影响学业成绩。

总结以上，小朋友的体力若输在起跑点，对以后人生竞争力的发展影响甚钜。由上观之，对于小儿体质免疫力的调节，与疾病的预防和治疗，分外重要。

中医改善体质的法则灵活而多变。总不离“急者治其标，缓者治其本”，遇到罹病初期的小朋友，除根据其病因给予不同药方治疗之外，常选用甜甜的口感不错的桂枝汤，小孩子喜欢吃之外，在抗邪外出之余，亦可调理体质，根本治疗，使以上所称的各种疾病发作次数减少，甚至获得痊愈。平常则给予稍具甜味的.小建中汤，此外玉屏风散、四神汤、四君子汤等亦为不错的日常调理方。以健脾为主，驱邪为辅。以期达到健全后天之本来培育先天禀赋的不足，根据多年来的临床经验显示，改善体质疗法，越早开始效果越宏大，希望可以藉由中医预防医学的观点，来帮助所有为人父母者，照顾呵护国家未来的主人翁。

治疗外邪侵入初期，及调节免疫力的药膳

治疗外邪侵入初期方

驱邪姜汤

治初期外邪入侵。

主要原料

生姜(老姜)二两、黑糖一两、水三碗。

制作方法

将以上三种材料煎至半碗，温服饮用。

桂姜粥

治初期外邪、可造成以上所称疾病者。

主要原料

桂枝三钱、生姜(老姜)四片、甘草一钱、红枣三钱、粳米一百克、适量水。

制作方法

先将桂枝、生姜、甘草、红枣洗净，煎取药汁去渣(大火后文火煎煮十五分钟)。将粳米淘洗干净，加水煮粥，粥将熟时加入药汁，煮成稀粥即成(咽喉肿痛严重者要小心) 。

黑芝麻馒头

所需食材/厨具

主料低筋面粉(250克)调料纯牛奶(140克)细砂糖(35克)玉米油(3克)酵母(3克)炒熟的黑芝麻(15克)糖粉(10克)厨具无

制作步骤

把牛奶加热至30度左右

加入酵母，拌匀，静止10分钟左右

把面粉倒入一个大盆里

加入砂糖、玉米油

搅拌，使它们充分混合

倒入加了酵母的牛奶

搓揉成光滑的面团

加入黑芝麻

将黑芝麻粒均匀地揉入面团中

盖上保鲜膜，进行第一次发酵

至于馒头发酵的方法有很多，许多的人都用的发酵粉，也有人家庭里面经常吃馒头的，所以每次吃的时候总会收下一点面头去作为酵母。一般大家都会将发酵的面放到保温的地方，但是夏天的话发酵的时间可以适当的短一点，尤其是南方城市，可以调整为45分钟左右。

趁着面团发酵的时候，可以制作内馅，把内馅所需的材料准备好

把黑芝麻粉和糖粉倒在一起

拌匀，使材料充分混合

取出发酵好的面团，并擀成长方形

在擀好的面团上均匀地刷上清水

将内馅均匀地倒在面皮上，并用手轻轻压一下，尽量使其与面皮结合

把面团由上至下卷成圆柱体，再从面团中心部位向两边轻轻搓几下，好让面团粗细均等

把搓好的面团切成6等份

放在油纸上，并摆进蒸笼中，盖上锅盖，静止20分钟

锅中注入冷水，大火蒸20分钟即可

卡通肉松饭团

许多的孩子最大的问题就是无论如何都不能够安稳的去吃饭，这也是许多家长都一直困扰的问题，而且这样长时间下去对于孩子的生长也是很受影响的。其实孩子不想吃饭有很多的原因。要想孩子能安心吃饭，首先少让孩子吃零食，只有饿了孩子才想去吃饭，但是每次吃不能要求孩子怎么吃多少。

多在集体环境就餐，小朋友多，热闹，吃饭也香。

家长不要在孩子面前议论自己的不喜欢吃什么，或什么东西不好吃，家长的喜好对孩子的影响是很大的，而且是根深蒂固。

考虑营养以外，孩子的食物还要注意色、香、味俱全，把饭菜做的软、烂、可口，多变花样，口味，根据儿童特点，发挥你的想象。

所需食材/厨具

主料

米饭(适量)

调料

海苔(适量)鸡蛋(适量)胡萝卜(适量)鸡肉泥(适量)盐(适量)白胡椒粉(适量)白糖(适量)

厨具

无

制作步骤

海苔。

鸡蛋液。

坐锅点火倒油，放入鸡肉泥、胡萝卜丁炒散，加入调料调味，再倒入鸡蛋炒散取出备用。

炒好的馅料和米饭。

案板上铺上保鲜膜，手上沾水把饭团放在保鲜膜里压成饼。

饼里放入炒好的馅料，包成团。

把包好的团放到保鲜膜里，轻压成熊猫头的形状。

用两个小饭团包做成熊猫耳朵，贴上海苔。

用海苔剪出眼睛、嘴，贴在饭团上，沙拉酱点上眼睛即可。

小窍门

抓米饭时，手上一定要点水，这样米饭才不会粘手

馅可根据自己孩子的口味来做

免疫增强比浊法 篇3

关键词：免疫透射,免疫散射比浊法,免疫球蛋白,补体

临床对血清中免疫球蛋白 (Ig G、Ig A、Ig M) 和补体 (C3、C4) 的测定方法主要采取免疫透射和免疫散射比浊法, 本次研究分别采用两种不同的仪器进行检测, 将两种方法的检测结果进行比较分析, 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2012年5月~2012年8月在我院进行健康体检的200例血清标本为研究对象, 其中男106例, 女94例, 年龄22~56岁, 排除感染性疾病及系统性疾病。所有样本浓度均符合 (CISI) Ep9￣A2中的要求, Ig G、Ig A、Ig M、C3、C4各浓度的水平尽量覆盖, 无黄疸、无脂浊、无溶血。

1.2 方法

健康体检者空腹采取静脉血3ml, 放置于不抗凝的无菌试管中, 分离血清并放置于一20℃冰箱中贮存备用;先用生理盐水对待测血清标本进行稀释, 测Ig A和Ig M时, 血清不稀释;测Ig G, 血清与生理盐水按照1:10的比例稀释;免疫透射比浊法采用贝克曼Dx C800生化分析仪, 免疫散射比浊法采用贝克曼IMMAGE800, 分别参照试剂盒及仪器说明书进行操作。

1.3 评估标准

1.3.1 批内重复性试验和批间重复性试验

批内重复性试验操作方法:分别取各检测项目中3份混合血清的高、中、低值, 将每份血清用两种方法重复检测5次。批间重复性试验操作方法:分别取免疫球蛋白 (Ig G、Ig A、Ig M) 和补体 (C3、C4) 的混合血清的高、中、低值, 然后分成8份标本贮存于-20℃冰箱中, 每天检测, 共检测8d, 并且每天检测时用2种方法检测1份标本。

1.3.2 比较方法试验

主要是评估两种测定方法的偏差。用5d时间做比较方法试验, 每天选取两份新鲜样本进行测试, 按照1￣2再2￣1的顺序做两次测定免疫球蛋白 (Ig G、Ig A、Ig M) 和补体 (C3、C4) 五项指标。

1.3.3 线性方案试验

选取6管混合血清 (第1管为原浓度, 第2￣6管分别按比例用生理盐水稀释) , 用两种方法测定免疫球蛋白和补体各指标的高值, 并分析测试结果[1]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0进行统计学分析。计量资料采用t检验, 以均数±标准差 (±s) 表示。P<0.05为差异有显著性意义。

2 结果

2.1 两种方法重复性试验结果对比

两种方法批内和批间重复性均较好, 批内重复性试验变异系数CV均值除C4 (透射法) 外均小于3%, 批间重复性试验CV均值除C4外均小于5%。见表1。

2.2 两种方法检测各指标的预期偏差和相对偏差对比

两种方法检测结果的偏差在可接受范围内, 检测免疫球蛋白指标时有较高的可靠性, 检测补体C3时, 低浓度点偏差达到15.34%, 补体C4高浓度点偏差达到14.56%, 需引起注意。见表2。

3 讨论

免疫透射和免疫散射比浊法是临床用于检测免疫球蛋白和补体的常用方法, 其检查原理相同, 只是采用的检测仪器和光信号有所区别。散射比浊法是一种免疫化学分析技术, 能快速、微量的对体液中特定蛋白质成分能自动化检测。传统认为散射比浊法比透射法准确度高, 更灵敏, 然而近10年来免疫透射比逐步成熟, 也逐渐替代了散射比浊法[2]。

免疫透射比浊法的原理主要是利用抗原和抗体的特异性结合形成的复合物, 通过对复合物形成量进行测定后对抗原或抗体进行定量的方法。技术要求:待测的抗原抗体复合物有足够大的分子量;保证抗体过量并具备高亲和力;检测过程中具有充分的反应时间;具备足够多的抗原抗体复合物数量[3]。免疫散射比浊法的原理是用一定波长的光沿着水平轴照射经过溶液时遇到其中的抗原抗体复合物, 光线被粒子颗粒折射下发生偏转后会产生散射光, 光线偏转的角度与抗原抗体复合物的大小、多少密切相关, 也与发射光的波长密切相关, 光的强度与抗原抗体复合物的含量成正比, 表示待测的抗原越多, 形成的复合物也就越多, 散射光会越强[4]。技术要求:检测时对光源强度、波长、测量角度及反应时间应进行适当选择, 抗原浓度要保证合适, 对离子的PH值、强度要选择适宜。

就本次研究而言, 两种方法分别检测免疫球蛋白 (Ig G、I-g A、Ig M) 和补体 (C3、C4) 各指标浓度水平具备良好的相关性, 而补体各指标检测时低浓度样本出现偏差较大, 可能因低浓度样本形成抗原抗体复合物较少, 可选择散射比浊法[5]。从检测精密度而言, 两种方法批内与批间重复性试验检测变异系数CV分析, 其中检测免疫球蛋白Ig G时, 散射比浊法CV值均高于透射比浊法, 透射比浊法的CV值较低, 重复试验更加准确, 可见透射比浊法的稳定性和重复性明显优于散射比浊法。其它指标的精密度基本符合要求[6]。透射法与散射法对比还具备抗干扰能力强、仪器投资成本较低、试剂消耗成本低、血样可直接与生化检查样本合用, 降低了采血成本, 检测时间短等优势。总之, 两种检测方法都有各自的优缺点, 相对而言, 免疫透射法更加实用和便利, 值得临床推广应用。

参考文献

[1]曾华, 罗玲, 何桂儿, 等.透射比浊法和散射比浊法测定免疫球蛋白和补体的评价[J].国际检验医学杂志, 2013, 34 (20) :2733-2734.

[2]石莉萍, 张利方, 秦滢, 等.免疫球蛋白、补体及胱抑素C对系统性红斑狼疮病程监测的临床价值[J].国际检验医学杂志, 2014, 35 (7) :901-902.

[3]刘少华, 邓文平, 李燕.免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较[J].重庆医学, 2012, 41 (15) :2034-2035.

[4]阮文清.免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白的结果分析[J].求医问药 (下半月) , 2012, 11 (3) :866-867.

[5]张倩, 周敬静, 徐华.免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测特定蛋白的比较[J].国际检验医学杂志, 2012, 33 (2) :2530-2531.

孩子应该怎么增强免疫力？ 篇4

首先不能让孩子有食积，少让他吃肉，多吃蔬菜水果，同时改掉睡前喝奶的习惯。

孩子睡前喝奶容易造成大便干，舌苔厚腻，消化不好，食积发烧，这可能与入睡后胃肠蠕动减慢、牛奶在胃内凝集成块、不好消化有关。改掉这一习惯后，儿子的食积发烧症状改善了不少。

牛奶可以让孩子在去幼儿园前，即早上喝。如果早上没喝晚上喝，最好放在睡前一两个小时。

经常吃点保和丸

孩子“没有内热，不得外感”。只要孩子大便通畅，消化功能好，能吃能拉，免疫力就会增强，得病的机会就少。给孩子吃了一段时间的保和丸。

保和丸里面有神曲、山楂、茯苓、连翘、陈皮、莱菔子(萝卜子)等，是一种很便宜的消食导滞药，还有清热作用，适合饮食过度或消化功能不好造成的厌食、便秘等。使用的方法是，便秘明显时连续吃一段时间，不明显时偶尔吃。这样调理半年下来，孩子大便通畅，胃口好了，体质明显增强。

发烧少用抗生素

感冒发烧80%~90%都是病毒感染，不需用抗生素，而且用了也没用。他见过很多孩子，越输抗生素，免疫力越低下，感冒一场接一场，还容易合并细菌感染。

平时孩子感冒发烧时，第一天给他口服“消积散”等中药散剂后，第二天就变成白天不烧夜里烧。继续服用，到第三或第四天退烧，一点抗生素没用，连咳嗽问题都解决了。

只要不是超过两天发高烧，到医院查血象正常，对孩子发烧不必恐惧，也不必急于退烧。当然，对于经常感冒、免疫力特别低下的孩子，可以在医生指导下用些调节免疫的药，如“转移因子口服液”“胸腺肽”等。

免疫比浊法脂蛋白a试剂的评价 篇5

1.1 免疫比浊法

免疫比浊法适用于自动化分析, 免疫散射要有专门仪器, 免疫透射比浊法可用自动生化分析仪。大多数生化自动分析仪要求反应在10分钟内完成, 所以必须有高活性抗体和合适的反应体系, 且检测血清用量大, 在常用PEG反应体系中存在明显的非特异性反应, 需依赖表面活性剂作用来加速反应速度和减少非特异性反应。Levine等设计免疫比浊自动反应体系中含22.5g/L PEG, 2g/L明胶等表面活性剂, 10分钟反应线形范围>2.6g/L, 不受蛋白纤溶酶原 (pg) 、ApoB、TG等干扰, 能识别11种LP (a) 的多态型, 与ELISA有良好相关性。

1.2 粒子增强免疫比浊测定法

原理与免疫比浊法一样, 主要区别在于从抗血清IgG后, 吸附或交联于胶乳表面, 因其有一定粒径, 可增强光散射强度等原因, 可使度法灵敏度达到ng/ml水平。同时因抗体的固相化, 增加了稳定性。

本次评价采用市场上常用的普通免疫比浊法的试剂盒, 与粒子增强免疫比浊测定法的试剂盒进行比较, 以了解现在市场上采用不同方法试剂的现状。

2 采取的主要实验方法

2.1 实验所用试剂

免疫比浊法:罗氏:646866;

粒子增强法:第一化学:815RA1 (试剂) 813 RA1 (校准品) 迈克:0611031。

2.2 实验仪器

日立全自动生化分析仪7100。

2.3 实验结果:

1) 准确性测定2适用于免疫比浊法试剂。

注:1) 罗氏Control范围1适用于粒子增强法试剂, 范围

2) Bio-Rad Control范围1为Beckman Coulter IMMAGE标示值, 范围2为Roche cobas

INTEGRA标示值。

由罗氏Cfas结果可知, 罗氏结果偏高34.44%, 而第一化学与迈克结果接近, 偏低很多;由罗氏Control 1结果可知, 罗氏试剂结果在标示范围内, 而第一化学与迈克结果接近, 低于下限值;由罗氏Control 2结果可知, 罗氏结果在范围内, 而第一化学与迈克结果仍然低于范围下限;由于Bio Control说明书上没有提供日立机型的参考范围, 故将其他全自动生化分析仪上的结果均进行比较, 除迈克Bio Control2的结果在Beckman Coulter IMMAGE的标示范围内, 其他结果均不在标示范围内。

2) 相关性测定

将罗氏, 第一化学, 迈克3款试剂同时测定55份人血清样本 (注:Lp (a) 含量超出线性范围, 用生理盐水稀释后测定, 结果乘以稀释倍数) , 结果统计如下:

有以上结果可知, 第一化学与迈克结果相近, 相关系数R=0.9908, 相关性很好;而罗氏与第一化学的相关系数R=0.9129;罗氏与迈克的相关系数R=0.9120;相关性不够好。

3 结论

从以上数据结果表明, 第一化学与迈克公司的LP (a) 的定量测定试剂盒所测得的结果较为相近, 普遍结果都要比罗氏公司的LP (a) 的定量测定试剂盒的结果低上不少, 究其原因可能第一化学与迈克公司的试剂盒均为粒子增强法试剂, 体系相近, 所以结果也相近;而此次试验中罗氏公司的试剂盒为常规的免疫比浊法试剂盒, 且所用抗体为多抗, 所测结果则较高。罗氏公司的试剂盒在测定罗氏control的结果都在给定的范围内, 而第一化学与迈克的试剂盒的结果则偏出范围外, 低于给定范围的下限, 而且测定的Bio-Rad Control的结果几乎都偏出所给参考范围;在相关性实验中也体现出第一化学与迈克由于都是粒子增强法试剂盒, 故相关系数达到0.9908, 而罗氏试剂盒所用方法不同, 与第一化学, 迈克公司的试剂盒的相关性并不好。说明市场上不同体系的LP (a) 的定量测定试剂盒所测得的结果差异很大。

早在2004年, IFCC的生物标准化专家委员会就接受了“IFCC SRM 2B”为国际上第一个LP (a) 免疫测定的WHO/IFCC国际参考物质, 该参考物质的每个安瓿内的LP (a) 为0.1071nmol。但目前市场上常用的计算单位为mg/dl, 又由于LP (a) 结构内含的apo (a) 具有多态性, 特别是环饼区域K4的第2段中的相似环饼从3~40个不等, 使得apo (a) 的大小从187kDa到662kDa不等, 也就导致LP (a) 的分子量的不确定, 故无法在2个单位间通过分子量进行换算, 因此从SRM 2B溯源的值无法在市场上得到普及, 造成现在市场上各体系间的差异, 希望在不久的将来, 以SRM 2B为基准溯源的结果能直接应用于临床, 解决类似差异的问题。

参考文献

[1]Albers.J.J, et al.The Unique Lipoprotein (a) :Properties and Immunochemical Measurement.Clin Chem.1990, 36 (12) :2019-2026.

[2]张丽霞, 只野寿太郎, 山本匡介.脂蛋白是最敏感的急性时相蛋白.中华医学检验杂志, 1997, 20 (3) :167.

[3]杨昌国, 许叶, 李清华.脂蛋白 (a) 的结构和免疫化学测定中的难题.临床检验杂志, 1993, 11:42-44.

[4]王红, 庄一义.血清脂蛋白 (a) 的免疫比浊测定法.临床检验杂志, 1991, 9 (4) :184.

[5]Molinari E.A, et al.Immunoturbidimetric determination of lipoprotein (a) :improvement in the measurement of turbid and triglyceride-rich samples.Clin Chim Acta235 (1995) :59-69.

[6]董军, 李健斋.血清脂蛋白 (a) 测定方法研究进展.中华医学检验杂志, 1997, 20 (1) :52-55.

免疫增强比浊法 篇6

免疫比浊法测定尿微量白蛋白 (Um ALB) 是近年来检测肾脏病变的早期指标, 并能在某种程度上反映病变的严重程度, 因此越来越受到临床的重视。笔者对免疫比浊法测定尿微量白蛋白进行了探索, 现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本

2013年5月10日在我院门诊进行健康体检的小学六年级一班学生和我院儿科住院患儿的新鲜随机尿液。

1.1.2 仪器

CS800全自动生化分析仪。

1.1.3 试剂

采用宁波瑞源生物科技有限公司生产的试剂。

1.2 方法

1.2.1 标本处理

新鲜随机尿液标本离心取上清液测定:稳定性试验取新鲜尿液离心后上清液分装于4℃和-20℃保存, 测定时取出平衡至室温后, 离心取上清液测定。

1.2.2 测定条件设置

采用免疫比浊法, 用试剂盒提供的标准品及试剂, 按照试剂盒的要求设置参数:双波长, 两点终点法, 定标方式为logit log 5p, 定标液浓度分别为0.0, 12.0, 22.2, 49.5, 103.5, 205.5 mg/L, 批号1335F。

1.3 统计方法

线性试验数据经SPSS1.0统计软件抛物线拟合处理。

2 结果

2.1 线性试验

定标后以标准物浓度为自变量X, 吸光度为因变量Y (吸光度值×104) , 通过抛物线拟合尿微量白蛋白标准曲线, 并与实际标准曲线比较。曲线方程为Y=1 052.10+124.639X-0.114 3X2, 确定系数R2=1.000, P=0.000。因此可认为拟合曲线与实际曲线符合性很好, 检出限为0~200 mg/L。

2.2 重复性试验

2.2.1 批内重复试验

取一新鲜尿液标本连续测定尿微量白蛋白20次, 计算变异系数, 结果见表1。

2.2.2 批间重复试验

取一新鲜尿液标本分装成10份, 同日分3批次测定 (第一批3份, 第二批3份, 第三批4份) , 每份标本均测定尿微量白蛋白两次, 取平均值计算变异系数, 结果见表1。

2.3 回收试验

取一新鲜尿液标本连续测定3次尿微量白蛋白, 计算平均值作为基础浓度, 分别加入3份不同浓度微量白蛋白标准物 (49.5, 103.9, 205.5 mg/L) 混匀后, 测定混合物尿微量白蛋白浓度, 计算回收率, 结果见表2。

2.4 干扰试验

2.4.1 血红蛋白干扰试验

取一肝素抗凝全血标本, 3 000 r/min离心3分钟弃去血浆, 剩余的红细胞以生理盐水洗涤4次, 通过机械搅拌和加入蒸馏水使其溶血, 制成血红蛋白液, 测定其血红蛋白浓度。将已知尿微量白蛋白量的尿液与血红蛋白液以不同比例混匀, 测定混合物尿微量白蛋白含量, 计算干扰率, 结果见表3。

2.4.2 胆红素干扰试验

取一胆红素定位阳性, 尿蛋白定性为阴性的新鲜尿液标本, 以此标本作为胆红素干扰液。另取一胆红素定性为阴性的新鲜尿液标本, 测定其尿微量白蛋白含量, 以此标本作为基础液。将基础液与胆红素干扰液以不同比例混匀, 测定混合物尿微量白蛋白含量, 计算干扰率, 结果见表4。

3 讨论

正常人的肾小球滤液中存在小分子的蛋白质, 在通过近曲小管时绝大部分被重吸收, 因此终尿中总蛋白含量很少, 仅为30~130 mg/24 h。当尿中白蛋白排出量在3.2~22.6 mg/mmol·Cr (30~200 mg/Cr) 或排除率在20~200μg/min这一范围内即为微量白蛋白尿[1]。尿微量白蛋白不仅对糖尿病、肾病的早期诊断、治疗和预后具有重要意义, 而且在高血压、心血管疾病、肾小球疾病等所致的肾损伤中具有举足轻重的作用[1]。

尿微量白蛋白用磺基水杨酸法、加热乙酸法及试带法基本不能查出[2]。故国内外多采用免疫化学技术进行测定。本试验采用免疫比浊法测定尿微量白蛋白, 检出限为0~200 mg/L, 批内CV为0.55%, 平均CV为1.18%, 平均回收率为101.9%, 与文献[3]报道的检出限10~160 mg/L, 批内CV6.3%, 批间CV 6.47%, 平均回收率96.2%比较, 结果较为理想, 该试验方法有良好的精密度和准确性。

干扰试验结果表明, 血红蛋白和胆红素均会对尿微量白蛋白的测定产生负干扰, 并且干扰物浓度越高, 负干扰率也越大。从血红蛋白干扰试验结果分析, 当血红蛋白浓度在0.61 g/L以下时, 对尿微量白蛋白的测定影响可以忽略 (干扰率<-2.60%) ;当血红蛋白浓度超过2.59 g/L时, 干扰率高达-15.61%, 这时测定的尿微量白蛋白结果是不可以接受的, 临床上测定无意义。胆红素干扰试验表明, 胆红素浓度<1.03μmol/L时, 对尿微量白蛋白的测定影响较小 (干扰率<-1.99%) , 可以忽略;胆红素浓度上升到5.18μmol/L时, 干扰率为-7.19%, 对尿微量白蛋白的测定影响较大;胆红素浓度达12.97μmol/L时, 干扰率高达-14.44%, 这时测定的尿微量白蛋白结果不可以接受, 临床上测定无意义。

由于本试验检出限制为0~200 mg/L, 测定前可先将标本离心, 取上清液做蛋白定性试验, 若阴性或弱阳性可直接测定尿微量白蛋白, 若阳性以上需以生理盐水适当稀释后测定, 以免造成尿微量白蛋白试剂不必要的浪费。

关于尿微量白蛋白测定结果的表示现在尚无统一单位。目前文献所采用的表示方法有两种:一是对定时尿样品的测定结果根据分泌的蛋白以μg/min表示;二是对不定时尿样品常用尿微量白蛋白/尿肌酐表示。

总之, 应用免疫比浊法测定尿微量白蛋白准确性高、精密度好, 适于常规实验室采用。

参考文献

[1]齐志宏, 刘振元.尿微量白蛋白测定的临床意义[J].现代诊断与治疗, 1999, 10 (6) :351-352.

[2]寇丽筠.临床基础检验学[M].北京:人民卫生出版社, 1997.