荧光核型（通用5篇）
荧光核型 篇1
急性白血病是一类造血干细胞异常的克隆性恶性疾病, 在骨髓和其他造血组织中, 白血病细胞大量增生、积聚并浸润其他器官和组织, 抑制正常造血功能, 临床表现为贫血、出血、感染及各器官浸润。白血病在儿科恶性肿瘤的发病率中居第1位[1], 急性白血病常进展迅速。根据白血病细胞的类型, 临床上又分为急性淋巴细胞性白血病 (acute lymphoblastic leukemia, ALL) 和急性非淋巴细胞性白血病 (acute nonlymphocytic leukemia, , ANLL) 两大类。
ALL是一种起源于B系或T系淋巴祖细胞的肿瘤性疾病, 其细胞遗传学表现对于临床治疗方案的确定具有重要的指导意义[2]。检测白血病患者细胞遗传学异常的传统方法为染色体核型分析, 但急性白血病患者的染色体制备较难, 尤其是ALL患者的染色体易成团、不易辨别且显带不清, 导致常规细胞遗传学分析常出现困难[3]。间期荧光原位杂交技术 (fluorescence in situ hybridization, FISH) 能够在很大程度上避免上述问题, 尤其是八探针FISH联合系统可由一次操作完成对八种细胞遗传学异常的观察[4], 优势明显, 对ALL的分层诊断及指导个体化治疗具有实际意义。
1 对象与方法
1.1 对象
2008年1月至2011年5月在南方医院初诊为ALL且行ALL八探针检测与染色体核型分析的儿童病例39例, 其中男21例、女18例, 年龄1~13岁、中位年龄5.2岁。所有病例诊断符合《血液病诊断和疗效标准》。
1.2 方法
39例均行八探针FISH分析及染色体核型分析。
1.2.1 染色体核型分析
采用直接培养法和短期培养法制备骨髓细胞染色体, 采用G显带技术按国际细胞遗传学命名标准 (ISCN 2009) 进行核型分析, 每例患者每次核型分析数均>20个。
1.2.2 八探针FISH
ALL八探针包括针对MYC断裂基因、P16缺失、E2A/PBX1融合基因、TEL/AML1融合基因、BCR/ABL融合基因、MLL断裂基因、IGH断裂基因及多倍体检测共8组探针, 按设计组合标记固定于一张检测玻片, 按试剂盒操作说明进行标本处理、变性、杂交、杂交后洗脱等操作。
1.2.3 荧光显微镜检查
在Nikon E600荧光显微镜下通过三色滤光块 (DAPI/TRITC/FITC) 观察杂交信号, 用Macprobe4.0荧光图像处理系统 (美国PSI) 进行图像分析, 每份间期核标本计数500个细胞并记录杂交信号。
1.2.4 统计学分析
率间比较采用四格表卡方检验, 以P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 骨髓细胞染色体核型分析检测
行染色体核型分析的39例儿童ALL患者t (9;22) 0例、多倍体6例、其它数目异常3例、染色体其它结构异常4例。染色体核型异常阳性率为33.33%。
2.2 八探针FISH系统检测结果
39例ALL患者八探针FISH检测成功率为100%。八探针系统检测到ALL患者的MYC易位2例、P16缺失9例、E2A/PBX1重排3例、TEL/AML1重排9例、BCR/ABL易位0例、MLL重排1例、IGH易位2例、超二倍体8例。基因异常阳性率为87.18%。
a表示与染色体核型分析相比P<0.05
3 讨论
ALL以BCR-ABL最为常见, 此外, 儿童ALL还可见E2A-PBX、BCR-ABL[5]等融合基因, 为预后不良的标志。本研究中采用的八探针FISH系统基本上囊括了急淋患者常见的异常基因类型, 通过1次预处理、变性、杂交、杂交后洗脱等操作即能够检测出预设的8种基因是否异常, 方便、快捷、经济, 明显减轻了临床检验实验室的工作量。
本研究结果表明, 对于ALL儿童患者, 应用八探针FISH系统检测细胞遗传学异常的阳性率高于染色体核型分析的阳性检出率, 即八探针FISH系统在急淋儿童患者细胞遗传学检测方面的优势较为明显, 且八探针FISH检测系统可通过不同颜色、不同种类的探针, 一次性对ALL可能出现的多种细胞遗传学进行联合检测, 在操作方面有了明显提高, 也更为经济实用。但值得注意的是, 染色体核型分析与八探针FISH检测这两种方法各有侧重、互为补充, 在ALL白血病患者细胞遗传性异常的检测方面可以有效互补, 两种方法的联合使用可明显提高ALL患者细胞遗传学检测的效率, 是一种省时、高效、灵敏的细胞遗传学检测手段, 对于指导临床治疗及预后意义重大。
参考文献
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胎儿脐血染色体核型分析 篇2
1资料与方法
1.1一般资料选择2009年1月—2013年12月于我院就诊的具有产前诊断指征的孕妇行脐静脉穿刺术, 术前均经孕妇及家属同意签字。孕妇孕周23周~38周。
1.2方法
1.2.1孕妇排空膀胱, 取平卧位, 经二维超声确定脐静脉最佳穿刺部位, 腹壁严格消毒后, 选用B:PTC 23G×200 mm (保留胎儿用) 或B:PTC 22G×200 mm (不保留胎儿用) 介入穿刺针, 经穿刺架引导快速经腹壁、子宫、胎盘羊膜腔刺穿脐静脉, 待缓慢退针入脐静脉内抽取脐血2 m L。拔针后立即观察脐带穿刺点有无渗血, 并记录胎心情况。将抽取的脐血血滴和母体末梢血分别加入含氢氧化钠 (Na OH) 2 m L的溶液中对照, 母血立即变为棕色, 不变色为胎血。
1.2.2实验室工作人员无菌条件下将脐血分别培养、换液、培养、收获、制片、核型分析, 常规G显带 (320-400条带) 。
2结果
在626份胎儿脐血中, 共发现正常核型571份, 包括染色体多态性变异32例;异常染色体核型55例, 占8.78%, 其中数目异常39例占6.23%、结构异常14例占2.24%、嵌合2例占0.31%。染色体数目异常共计39例占异常核型的70.90%, 其中18-三体14例, 21-三体13例, 13-三体6例, 22-三体1例;性染色体异常5例;其他异常为16例。
3讨论
染色体病是导致胎儿先天异常的主要原因之一, 而产前诊断是预防染色体病患儿出生的主要措施。我院产前诊断中心对626例脐血染色体核型分析中发现异常核型55例, 占8.78%, 与郭小宝等[2]报道的异常率5.5%相比结果偏高, 与陈铮等[3]报道的8.83%相近。
随着产前诊断超声技术的提高, 胎儿在生长发育过程中出现的形态异常经B超提示的病例显著增多[4]。胎儿畸形与染色体异常相关性高, 产前诊断超声提示畸形部位越多, 患儿染色体异常的可能性越大[5]。55例染色体异常中, 有39例超声提示异常改变, 达70.90%。此数据表明, B超异常是染色体异常的一种提示。临床结合实验室检查中, 发现13-三体、18-三体都有明显的多发畸形, 21-三体缺乏明显的B超改变。目前, 认为鼻骨缺失是21-三体征的一个软指标, 18-三体更易引发多发畸形, 通过脐血培养染色体分析可以有效增加21-三体的检出率, 减少给社会和家庭带来的负担。
发展到目前, 我院的脐静脉穿刺术染色体核型分析技术非常成熟。2009年1月—2013年12月共穿刺626例, 一次穿刺成功559例, 二次穿刺成功67例, 穿刺成功率100%。培养失败5例, 培养成功率99.20%。
脐带血与羊水相比, 具有培养时间短、方法简单、染色体制备容易等优点。随着超声诊断技术的应用, 许多胎儿解剖结构异常可在妊娠中晚期被发现。对于孕早期错过唐氏筛查或羊水穿刺的高危人群, 以及孕晚期才发现胎儿畸形的孕妇, 脐血穿刺进行染色体核型分析尤为重要, 对降低出生缺陷率具有重要的意义。
参考文献
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绵阳地区普氏蹄蝠的核型分析 篇3
普氏蹄蝠属于翼手目蹄蝠科蹄蝠属, 主要分布在我国的西南地区各省。据统计, 至今共有两篇文章报道了普氏蹄蝠的核型。
尽管张维道等人报道的四川地区和安徽地区的普氏蹄蝠染色体数相同。但其论文有几点可改进: (1) 缺少显微镜下的染色体照片图和核型特征表; (2) 观察结果中没有对染色体进行分组; (3) 没有对该核型的结果进行讨论, 没有阐述该核型有什么意义。从目前国际上同类研究的趋势看, 缺少二倍体染色体的相对长度和臂比数表以及染色体模式图的文章, 信息量低, 给交流带来不便。所以四川地区普氏蹄蝠的核型研究还有待改进和完善。
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物。
成年的雄性普氏蹄蝠一只。
2.1.2 试剂
0.1%秋水仙素:称取10mg秋水仙素, 加入10ml0.85%生理盐水, 生理盐水:NaCl0.85g, 蒸馏水100ml;固定液:甲醇/冰醋酸=3/1 (体积比) , 1/15M, pH=6.8的磷酸缓冲液:取A液和B液各50ml混匀为pH=6.8。
A液:1/15M磷酸氢二钠, 取0.9465g磷酸氢二钠溶于100ml蒸馏水中;B液:1/15M磷酸二氢钾, 取0.9070g磷酸二氢钾溶于100ml蒸馏水中;Giemsa染液:Giemsa原液/pH=6.8磷酸缓冲液=1/10。
2.1.3 仪器。
低速离心机、恒温水浴锅、常用解剖器械。
2.2 实验方法
2.2.1 染色体的制备方法
采用改良的骨髓细胞空气干燥法制备染色体装片, 操作:
(1) 取样。准确称量蝙蝠的重量, 按3ug/g的量腹腔注射0.01%的秋水仙素。处理5个小时后掐颈至死。量蝙蝠的前臂长、后足长以及胫长。测量完毕后, 取下前骨、后骨, 剔尽骨头上的肌肉, 用剪刀剪开骨头的两端, 用已吸入37℃预热生理盐水的注射器将前骨和后骨的骨髓细胞冲洗至离心管中, 充分打散细胞, 离心 (1000r/min, 8min) 。
(2) 低渗处理。吸取上清夜, 充分打散细胞沉淀, 加入37℃预热的低渗液, 37℃条件下处理40min, 然后向离心管中加入1ml预冷固定液, 固定5min, 离心 (1000r/min, 8min) 。
(3) 固定。吸取上清夜, 轻轻打散细胞悬液, 然后加入固定液4ml, 固定35min, 离心 (1000r/min, 8min) 。重复上述固定过程, 固定时间改为20min。
(4) 制片。将预冷的载玻片倾斜30°～40°, 从约15cm高处滴1～2滴细胞悬液于载玻片上, 用嘴吹散细胞悬液, 在酒精灯上过3～4次, 然后空气干燥。Giemsa染色15min, 用蒸馏水冲掉染色液, 空气干燥。显微镜下观察。
2.2.2 核型分析的方法
选取一定数量分散较好的分裂相拍摄、裁减、测量, 计算染色体的相对长度 (单个染色体长度/单倍染色体总长度×100%) 、臂比 (长臂/短臂) , 求得平均值 (X) 和标准误 (SE) 。根据Levan等方法按臂比指数进行染色体分类, 按染色体类型和相对长度排列编号, 得核型图。
3 结果与分析
3.1 结果
观察统计了该种1雄体42个细胞, 其中38个有32条染色体, 即2n种数是32 (38/42×100%=90.5%) , 故染色体数是2n=32, 染色体臂数为61。如下表可见, 常染色体中, 中部着丝粒染色体 (m) 14对, 亚中部着丝粒染色体 (sm) 1对。根据染色体形态和大小, 可将普氏蹄蝠地染色体分为两组:
普氏蹄蝠的染色体数据
A组 (1～14) 包括14对中部着丝粒染色体 (m) 。哪几对为大型的, 哪几对为小型的, 哪几对相对长度和臂比相似, 不易区分。
B组 (15) 只有1对亚中部着丝粒染色体 (sm) 。
性染色体为XY型。X染色体为一条中部着丝粒染色体, 可归为A组。Y染色体为端部着丝粒染色体, 可独自归为一组, 在整个核型中最容易鉴别。
3.2 讨论
3.2.1 绵阳地区与安徽地区普氏蹄蝠的核型异同
从已报道的普氏蹄蝠的染色体核型可知, 张维道报道的安徽地区的核型结果为2n=32, FN=60[1], 与本文报道的二倍体染色体数完全相符。不同的是, 本文的染色体臂数FN=61, 这与张维道报道的染色体臂数存在着差异, 其原因可能是测量数据的过程中, 由于估读和视差引起的。另一个显著的不同是, 本文报道的染色体不存在随体, 而张维道报道的核型中第7对染色体上存在明显的次缢痕。这就说明, 绵阳地区的普氏蹄蝠染色体核型与安徽地区的染色体核型存在异同。
3.2.2 绵阳地区普氏蹄蝠核型的异同
本文报道的核型结果2n=32, FN=61, 与吴毅报道的四川地区的核型结果2n=32, FN=54同样存在部分差异, 这最可能是实验材料的具体采集地不同造成的。尽管吴毅和笔者都对绵阳地区普氏蹄蝠的核型进行了分析, 但是, 所采集的实验材料的数量都比较少, 采集地也较单一, 不具有代表性。所以, 并不能根据这些不显著的差异确定四川绵阳地区存在普氏蹄蝠的新亚种或是新种。
因此, 笔者认为, 绵阳地区普氏蹄蝠的核型由于地理差异的原因会发生部分重要或是显著的变化。但该地区是否由于地理差异存在新亚种或是新种, 笔者将继续探讨
摘要：采用骨髓细胞改良的骨髓细胞空气干燥制片法, 研究了绵阳安县地区普氏蹄蝠的核型。在处理和整理数据的过程中, 笔者发现获得的核型与其他两人的核型结果存在不同之处, 这说明绵阳地区普氏蹄蝠的核型可能存在部分地理变异。
关键词：普氏蹄蝠,核型,绵阳
参考文献
[1]王应祥.中国哺乳动物种和亚种分类名录与分布大全[M].北京:中国林业出版, 2003.
沈阳地区红色爱胜蚓核型的研究 篇4
1 材料与方法
1.1 材料
试验材料均采自沈阳农业大学校园, 成熟红色爱胜蚓个体10条, 体重0.5~0.6 g。
1.2 方法
活体注入1%秋水仙素溶液0.2 m L, 处理18~24 h。取其储精囊、精巢, 利用空气干燥法制备染色体中期分裂相, 10%姬姆萨染液常规染色。观察37个分裂相, 选取其中9个较好的中期分裂相进行拍照、测量。计算出相对长度、臂比指数。按照Levan[5]的标准对染色体进行命名和分类。
2 结果
红色爱胜蚓二倍体染色体数目为22条 (2n=22, NF=44) (见图1) , 可配成11对同源染色体 (见图2) 。有4对中部着丝粒染色体 (相对长度>7.1%) , 4对亚中部着丝粒染色体 (相对长度:6.3%~12.1%) , 3对亚端部着丝粒染色体 (相对长度>7.0%) (见表1) , 无性染色体分化。
3 讨论
国内外学者对赤子爱胜蚓、大平二号蚓的染色体进行研究, 得出它们染色体数目皆为2n=22, 笔者试验研究红色爱胜蚓二倍体染色体数目2n=22, 与它们相同。
许智芳等[3]研究赤子爱胜蚓、大平二号蚯蚓染色体, 除个别外皆为端部着丝粒染色体。韩建林等[4]研究大平二号蚯蚓有5对中部着丝粒染色体, 1对亚中部着丝粒染色体, 2对亚端部着丝粒染色体, 3对端部着丝粒染色体[4]。笔者研究红色爱胜蚓有4对中部着丝粒染色体, 4对亚中部着丝粒染色体, 3对亚端部着丝粒染色体, 核型模式为2n=22=4M+4SM+3ST, 无端部着丝点染色体, 可见爱胜蚓属的种间染色体类型差异明显。
红色爱胜蚓为沈阳地方蚓种, 利用沈阳当地蚯蚓进行杂交, 可培育出适应能力更强的蚯蚓良种。
参考文献
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宽翅曲背蝗染色体核型研究 篇5
1 材料与方法
1.1 材料
研究材料宽翅曲背蝗雄性个体于2011年7月采自子午岭中湾林场。
1.2 实验方法[9]
1.2.1 活体的预处理
活体腹腔注射0.05%秋水仙素5ul, 经8h后用解剖剪从蝗虫腹腔左侧剪开, 用镊子取出精巢, 放入0.08%的生理盐水中低渗15min, 再浸入固定液内固定12h, 然后移入70%酒精内常温保存备用。
1.2.2 取材
将保存在70%酒精中的精巢小管用镊子夹出置于培养皿中, 放在解剖镜下, 滴加3-4滴固定液, 用解剖针去除精小管表面的结缔组织, 切取其末端膨大部分。放在干净的载玻片上, 通常情况下, 每一载玻片上放3-5个材料。
1.2.3 压片
将取好材料的玻片平放于桌面, 给材料滴上1-2滴45%的冰醋酸溶液软化10-20分钟, 加盖片, 在盖片上覆以2-3层滤纸施压, 使染色体分散良好。
1.2.4 冰冻揭片
压好的片子放置液氮罐中冰冻处理3-5min, 取出后迅速揭片, 室温下干燥或放入恒温箱老化2-7d以备用。
1.2.5 染色
用5%吉姆萨染液倒扣染色1.5-2h, 然后用蒸馏水洗净玻片表面的染液。将染完色的玻片标本于室温下无尘处自然干燥后, 以中性树胶封片, 制成永久玻片标本, 以供镜检及照相。
1.2.6 镜检及拍照
在光学显微镜下进行观察挑选染色好、分散好、染色体形态典型的分裂相, 用显微照相设备进行显微摄影。
2 结果
2.1 染色体数目
选择30个染色体数目清晰的分裂相对染色体进行计数, 染色体数目为2n (♂) =23=22+X, 染色体臂数为NF=41, 性别决定机制为XO型。
2.2 染色体形态类型
染色体组式为3L+7M+1S+X, 包括大型染色体 (L) 3对, RL值为:10.51~15.38;中型染色体 (M) 7对, RL值:5.47~9.42;小型染色体 (S) 1对, RL值为:4.28;X染色体为小型染色体, RL值为2.85。染色体核型为2n (♂) =23=7m+2sm+3t, 染色体可分为三种类型:中着丝粒染色体 (m) 有7对 (L1~L6及L8) , 亚中着丝粒染色体 (sm) 2对 (L7和L9) , 端着丝粒染色体 (t) 有2对 (L10和L11) , 性染色体X为端着丝粒染色体 (如表1、图1, 2) 。
注:染色体相对长度大于10%为大型染色 (L) , 染色体相对长度在5%~10%之间的为中型染色体 (M) , 染色体相对长度小于5%为小型染色体 (S) .染色体的绝对长度 (AL) 为各条染色体的实际测量长度.染色体的相对长度 (RL) 为各条染色体的绝对长度与染色体组的总绝对长度的比值.
3 讨论
1) 良好的染色体制片受多种因素影响, 预处理和取材均是关键环节, 对于得到大量中期分裂相至关重要。其中秋水仙素的注射量和低渗时间是主要因素, 秋水仙素注射量过大, 染色体凝缩, 甚至可呈点状;注射量过小, 则无法起到阻断细胞分裂的作用。每只虫体注射5μL0.05%秋水仙素处理8h, 效果最好。低渗时间也会影响染色体形态, 低渗时间过短, 染色体伸展不好, 呈紧缩状;时间长染色体疏松, 崩解, 甚至出现灯刷染色状外观, 若继续低渗会导致细破裂, 染色体丢失。0.08%的生理盐水中低渗15min可达到较好的效果。取材时切取精小管末端膨大部分 (约是精小管1/4-1/3处) , 适宜作核型分析的细胞较多。染色时, 采用扣染的方法, 可减少杂物沉积在玻片上, 有利于染色体的观察和计数。
2) 本文研究的宽翅曲背蝗隶属于网翅蝗科曲背蝗属, 目前已研究的网翅蝗科种类染色体数目以2n (♂) =17种类为最多, 其次为2n (♂) =23, 而宽翅曲背蝗染色体数目属于后者。染色体数目可以反映属的特征, 相同属的种类具有相同的染色体数目, 不同属之间的染色体数目一般不相同。宽翅曲背蝗在染色体数目和核型上具有属的特征, 但在常染色体相对长度和性染色体形态上表现出物种独有的特性。近些年来, 随着分子生物学的发展, 昆虫系统学研究也已进入分子水平。只有在形态学、细胞分类学和分子系统学三个层次上都进行深入的研究, 建立物种之间的联系, 才能构建更加科学合理的物种亲缘关系。
摘要：用常规染色体制片法对宽翅曲背蝗Paracyptera microptera meridionalis (Ikonn.) 染色体核型进行分析, 结果表明:宽翅曲背蝗的性别决定机制XO型, 染色体数目为2n (♂) =23=22+X;染色体组式为3L+7M+1S+X;染色体核型2n (♂) =23=7m+2sm+3t;染色体臂数为NF=41。
关键词：宽翅曲背蝗,染色体,核型分析
参考文献
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