发育能力（共12篇）
发育能力 篇1
视觉运动统合是指视知觉与手部动作之间协调的程度, 学者们认为儿童即使有良好的视知觉和运动能力, 但如果不能完好地协调两者, 仍会出现认知、学习和行为问题, 因此这种统合能力非常重要[1]。
拜瑞-布坦尼卡视觉-运动统合发展测验 (The Beery Buktenica Developmental Test of Visual-Motor Integration) 是美国心理学家拜瑞-布坦尼卡于1967年研制的心理测查工具, 是最基本的学习能力发育检测方法。它通过描绘几何图形观察小儿行为, 了解其视觉运动统合能力发育水平。笔者采用视觉-运动统合发展测验评估儿童视觉运动统合能力, 将学习困难和精神发育迟滞儿童的VMI标准分与韦氏智力测试结果作比较, 并对在校小学生学业成绩、家庭经济文化背景、围产期因素等进行调查, 探讨儿童视觉运动统合能力与智能、学业成就的关系及其发育的影响因素。
1 对象与方法
1.1 对象
以深圳市儿童医院儿童保健门诊54名学习困难和精神发育迟滞儿童为研究对象, 其中男41名, 女13名。另外抽取深圳市某小学一年级、二年级、四年级和六年级共4个班级的185名学生, 剔除调查表填写不全者4名, 共181名, 其中男89名, 女92名。
1.2 方法
1.2.1 测验方法
门诊所见的学习困难和精神发育迟滞儿童视觉-运动统合发展测验作个别测验, 在诊室内进行;依据年龄不同, 小于6岁儿童作中国韦氏学前儿童智力量表 (C-WPPSI) 测试, 大于6岁儿童作中国韦氏儿童智力量表 (C-WISC) 测试。
在校小学生采取集体测验方法, 给每名学生测验册1份, 不带橡皮的铅笔或圆珠笔1支, 由有经验的主试者解释指导语, 令其在测验纸上按顺序依次临摹, 每图只能画1次, 不能涂改, 时间不限。
在校小学生学业成绩、家庭经济文化背景、围产期因素调查表由家长和教师共同完成, 家长中由父亲填写者62人、母亲填写者115人、其他4人。学习成绩按等级分类:A (≥90分) , B (89～70分) , C (≤69分) , 由班主任教师核实。
1.2.2 评分方法
评分标准按第4次修订版的视觉-运动统合发展测验发育测验手册中的规定执行, 采用美国常模评定标准分[1]。评分由资深专家进行。
1.2.3 统计分析
采用SPSS 11.0软件进行统计学分析。
2 结果
2.1 VMI得分与韦氏儿童智力测验结果的相关性
门诊54例学习困难和精神发育迟滞儿童, VMI测试结果采用美国常模评定标准分;依据年龄不同, 10人采用中国韦氏学前儿童智力量表 (C-WPPSI) , 44人采用中国韦氏儿童智力量表 (C-WISC) 测验;其VMI得分与韦氏儿童智力测验的语言智商、操作智商、总智商的相关系数分别为0.680, 0.790和0.764 (P值均<0.01) 。
2.2 在校小学生VMI标准分与学业成绩的相关性
181名学生年龄为5岁8个月～13岁, VMI标准分均分为 (109.45±12.85) , 其中最低80分, 最高148分。各年级组VMI标准分无明显差异 (P>0.05) 。
儿童VMI标准分与数学、语文和外语成绩等级相关系数分别为0.194, 0.205, 0.065, 与数学、语文成绩均呈高度相关 (P值均<0.01) 。
2.3 VMI标准分与相关因素的多元逐步回归分析
181名在校小学生, 调查表中包括儿童性别、主要抚养人、家庭类型、父母职业及文化程度、围产期因素 (出生体重, 是否早产, 是否有缺氧窒息史、先天缺陷及抽搐史等) 、是否曾参加书法美术兴趣班等15个自变量。多元逐步回归分析显示, 是否曾参加书法美术兴趣班和是否早产进入回归方程 (表1) 。其中儿童是否参加书法美术学习、是否早产与VMI标准分相关。
3 讨论
Kulp等[2]认为儿童视觉运动统合发展不良归因于以下一种或多种缺陷:视觉分析/视觉空间能力、动作协调、视觉构思力或视动统合能力。许多研究表明, 视觉运动统合能力缺陷基本上与智力低下的程度平行[3]。本研究中学习困难和精神发育迟滞儿童VMI标准分与韦氏智测的语言智商、操作智商、总智商的相关系数分别为0.680, 0.790, 0.764 (P值均<0.01) , 与既往研究结果近似, 说明VMI标准分在一定程度上反映儿童智能发展水平。
有学者报道, VMI标准分与阅读和数学标准化学业成就测验的效度r为0.51～0.75[4], 与小学生的斯坦福阅读和数学学业成就测验成绩高度相关[5]。本研究结果显示, 儿童VMI标准分与数学、语文和外语成绩等级相关系数分别为0.194, 0.205, 0.065, 与数学、语文成绩均高度相关 (P值均<0.01) 。说明VMI可以作为一种早期识别和预测儿童学习能力的筛查工具。
视觉运动统合是感觉-反应统合中发育最早的, 它的完善以视觉、运动和大脑良好的生理发育为基础, 同时也与后天教育训练及其它环境因素相关[6]。笔者在对深圳市部分小学生视觉运动统合能力发育测查的基础上[7], 随机抽查每年级各1个班, 作相关影响因素的进一步分析。本研究结果提示早产与VMI标准分相关。其他学者也报道早产与7岁时运动和认知发展有关, 视觉运动统合测试平均分明显降低[8,9]。说明围产期高危因素仍为最值得重视的因素。
手写能力通常是儿童心智和社会基础的指标, 一些学者证实视觉运动统合能力与抄写字母能力及书写空间组织能力有关[10,11]。本研究结果提示, 对于学龄儿童是否参加书法美术培训对VMI标准分影响较大, 与有关报道结论一致[12]。由此笔者推测对书法美术感兴趣的儿童可能具备较好的视动统合能力, 而绘画和书法训练可能促进了其视觉分析、动作协调、视觉构思等能力的进一步发展。本研究还有待扩大样本量来做更深入的探究。
VMI简便实用, 结果能较好反映儿童的智能发展水平和学习能力, 值得在学校心理卫生工作中推广应用;对于在筛查中存在问题儿童, 应进行干预;只有重视视觉运动统合能力发育的影响因素, 加强孕期保健, 探索有效的系统干预措施, 才能促进儿童视觉运动统合能力发展, 从而提高儿童智力水平和学习成绩。
参考文献
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发育能力 篇2
长期喂饮钇对子代大鼠生长发育及学习记忆能力的影响
目的考查长期摄入稀土对子代大鼠学习记忆能力及生长发育的影响.方法32只Wistar大鼠,随机分为4组,分别喂饮钇浓度为0、0.534、53.4和5340mg/L的饮用水,计算其孕育率、平均产仔率和平均仔鼠成活率.亲、子代大鼠从出生后第20天开始,每10天对其称重1次,持续2个月,观察其生长发育情况.对6月龄子代大鼠进行跳台实验.结果与对照组相比,低浓度组(0.534mg/L)子代大鼠学习阶段的触电时间显著降低,记忆阶段的.潜伏期显著增长(P＜0.01),但其亲代、子代体重的增长和生育情况无明显改变;中浓度(53.4mg/L)组子代小鼠各项指标均无明显改变;高浓度(5340mg/L)组子代小鼠在学习、记忆阶段的触电时间都显著增长(P＜0.01),而错误次数都明显增加(P＜0.05),亲代、子代体重增长量和子代平均成活率显著降低(P＜0.05).结论低浓度(0.534mg/L)的钇对子代Wistar大鼠的学习记忆能力有促进作用(P＜0.01),但对其生长发育无明显影响;中浓度(53.4mg/L)时对其学习记忆能力和生长发育均无明显影响;高浓度(5340mg/L)时则对其学习记忆能力和生长发育均有抑制作用(P＜0.05).
作 者：吴敏仪 张萍 杨维东 刘洁生 莫伍兴 作者单位：暨南大学生物工程学系,广州,510632 刊 名：卫生研究 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF HYGIENE RESEARCH 年，卷(期)：2006 35(3) 分类号：Q614.322 Q584 R339.35 关键词：稀土 学习记忆 大鼠 生长发育发育能力 篇3
【关键词】 诊断；发育性髋关节发育不良；复位
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.11.280 文章编号：1004-7484（2013）-11-6365-01
发育性髋关节发育不良（即DDH）是小儿在生长发育过程中表现为髋关节时空上不稳定的病变，临床中有三类，分别是髋臼发育不良、髋关节脱位及髋关节半脱位[1]。文章主要对我院收治的DDH患儿的诊断和治疗情况进行了介绍，详细情况如下：
1 资料和方法
1.1 一般资料 资料选取2010年——2012年我院小儿门诊、儿童保健科收治的大腿皮纹不对称为主要体征的患儿143例，其中男性患儿78例，女性患儿67例，患者年龄在3d-6岁。
1.2 诊断 按照患儿年龄不同采用不同的诊断方法。初诊年龄小于4个月的患儿采用Graf静态超声检查；初诊年龄在4-6个月的患儿采用Graf静态超声与X线相结合的检查方法；初诊年龄大于6个月的患儿采用双髋前后位X线检查。Graf超声诊断采用My-Lab20Plus诊断系统，探头频率为7MHz，X线检查仪器为760型DR机。
1.3 治疗 ①6个月以下的DDH患儿采用pavlik吊带治疗，此种方法操作简单，易于接受，患儿要保持110°屈髋，外展60-70°，屈膝90°，保证患儿髋关节有一定的活动度。每1周进行B超检查，如3周后B超提示稳定复位，需要持续维持3个月，如未获得良好复位，则需要采用其他方法治疗。②7-18个月的患儿可以采用闭合复位及石膏固定术。在闭合复位之前进行半个月的悬吊皮牵引，使脱位髋关节松弛，闭合复位前还应该皮下切断内收肌，然后牵引大腿，用拇指推移股骨大转子，直到复位。然后采用石膏固定髋关节，固定3月周后改用支具治疗。③1.5岁-6岁的患儿采用Salter骨盆截骨术，通过截骨远端向下或者是向外的旋转，恢复髋臼的方向，使髋臼能包容股骨头。
2 结 果
2.1 诊断情况 对145例患儿采用Graf静态超声与X线诊断，有DDH的患儿为25例，DDH发病率为17.2%。其中6个月以下患儿9例，6-18个月患儿11例，大于18个月患儿8例。
2.2 治疗情况 9例6个月以下患儿采用pavlik吊带治疗，治疗有效7例，2例失败，后采用闭合复位及石膏固定治疗复位效果满意；11例6-18个月患儿采用闭合复位及石膏固定治疗复位效果满意。8例大于18个月的患儿先采用保守治疗，2例患儿复位效果满意，其余均行Salter骨盆截骨术治疗，得到满意的复位效果。
3 讨 论
临床中DDH是小儿常见的下肢畸形，指得是患儿出生后出现股骨头从髋臼中脱出，存在骨性和软组织发育不良，此种疾病的诊断比较困难，治疗方法多样。当前临床诊断中主要采用的方法有Graf静态超声与X线诊断[2]。因为小于4个月的患儿髋关节正处在发育阶段，股骨头骨化未完全完成，采用X线检查基本不显影，检查结果不准确，因此在这部分患儿中主要采用Graf静态超声检查，检查中可以对软骨部分清除显示，也能对α角和β角准确测量。而对于6个月以上的患儿采用双髋X线检查更好，能得到较好的显影。另外，在部分患儿的检查中要将上述两种检查方法结合起来。
DDH治疗主要有保守治疗和手术治疗，保守治疗有pavlik吊带治疗、闭合复位及石膏固定，手术治疗应用较多的是Salter骨盆截骨术、Ferguson单纯切开复位术、Dega髋臼成形术等[3]。在治疗中首先可以考虑保守治疗，当保守治疗复位不成功时，要根据患儿的情况选择合适的手术治疗方法。另外，在研究中发现小于6个月的患儿治疗效果要明显高于6个月以上患儿，可能是因为6个月以下的患儿的髋关节可塑性较强，而6个月以上的患儿股骨头部分开始骨化，患儿的活动度增加，给治疗带来障碍。因此，早期普查对于发现DDH和提高治疗效果有很重要的意义。
参考文献
[1] 李军，马保安，胡运生，龙华，周本根.发育性髋关节发育不良的外科治疗分析[J].西北国防医学杂志，2008，30，（2）：97-98.
[2] 郭永成，申毅，王永堂，陆亚东，夏冰.婴幼儿发育性髋关节发育不良早期筛查和治疗[J].实用儿科临床杂志，2012，27（9）：721-722.
发育能力 篇4
1 材料
小鼠胚胎CZB系列培养液药品、地衣红,购自Sigma公司; 孕马血清促性腺激素( PMSG) 、人绒毛膜促性腺激素( h CG) ,购自宁波三生药业; 体视显微镜、普通光学显微镜,由Olympus公司生产。
2 方法
2. 1 胚胎体外培养与热应激处理
收集超数排卵小鼠受精卵,用CZB培养液,在37 ℃ 、5% CO2和100% RH的条件下培养至4 - 细胞期,将胚胎转移至含有1 mg /m L葡萄糖的CZB培养液中,培养至早期囊胚。将早期囊胚分别在39 ℃、5. 5% CO2和41 ℃、6% CO2的条件下热应激处理2 h,热应激结束后恢复至37 ℃ 继续培养。对照组胚胎在37 ℃、5% CO2的条件下连续培养。
2. 2 早期囊胚发育率观察
分别在热应激结束后24小时和48小时,在体式镜下观察热应激早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚( 包括正在孵出的囊胚和已经孵出的囊胚) 。试验重复4次,每个重复的胚胎数为45 ~ 50枚。
2. 3 不同时期囊胚细胞总数计算
将热应激后的早期囊胚培养到扩张囊胚和孵化囊胚,然后置于1% 、0. 5% 低渗柠檬酸钠溶液中分别处理30 min、20 min,再移到3∶1的甲醇 - 乙酸液中固定30 min。然后将胚胎移至PLP硅化的载玻片上,干燥后滴加1% 醋酸地衣红染色液染色15 ~20 min,水洗干燥后封片镜检。记录每枚胚胎的细胞总数。试验重复3次,每个重复30 ~ 40枚胚胎。
2. 4 数据的统计分析
所有数据均采用SPSS 10. 0统计分析软件进行方差分析和LSD法多重比较。
3 结果与分析
3. 1 热应激对早期囊胚后发育率的影响
37 ℃ 正常培养组小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚率和孵化囊胚率分别为( 81. 7 ± 6. 5) % 、( 77. 2 ±5. 0) % 。39 ℃ 热应激2 h早期囊胚的扩张囊胚率[( 80. 8 ± 6. 4) %]和孵化囊胚率[( 79. 7 ± 5. 6) %]与37 ℃ 正常培养组相比差异不显著( P > 0. 05) 。41 ℃ 热应激2 h显著降低了早期囊胚的扩张囊胚率[( 63. 3 ± 3. 6) %]和孵化囊胚率[( 49. 4 ± 9. 3) % ) ,与37 ℃ 正常培养组和39 ℃ 热应激处理组相比差异显著( P < 0. 05) ,见表1。
3. 2 热应激对囊胚细胞总数的影响
37 ℃ 正常培养组小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚的细胞总数分别为( 57. 11 ± 1. 70) 个、( 73. 09 ± 0. 60) 个。39 ℃热应激处理组和41 ℃热应激处理组小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚的细胞总数分别为( 49. 89 ± 1. 30) 个、( 42. 22 ± 2. 00) 个,孵化囊胚细胞总数分别为 ( 71. 27 ± 0. 50) 个、( 71. 89 ±1. 80) 个。39 ℃ 、41 ℃ 热应激处理组扩张囊胚细胞总数与37 ℃正常培养组相比差异显著( P < 0. 05) ,但39 ℃ 、41 ℃ 热应激处理组的孵化囊胚细胞总数与37 ℃ 正常培养组相比差异不显著 ( P > 0. 05 ) ,见表2。
注: 同列数据肩标小写字母不同表示差异显著( P < 0. 05) ,小写字母相同表示差异不显著( P > 0. 05) 。
注: 同列数据肩标小写字母不同表示差异显著( P < 0. 05) ,小写字母相同表示差异不显著( P > 0. 05) 。
4 讨论
小鼠附植前胚胎对热应激非常敏感,在35. 0 ℃条件下热应激处理12 h,可使小鼠受精卵发育到桑葚胚和囊胚的比率明显降低[6,7,8],而41 ℃ 热应激1 ~2 h就能降低体外2 - 细胞期胚胎形成囊胚的百分率[9]。但是当体外培养的2 - 细胞期小鼠胚胎发育到8 - 细胞期时就能产生热耐受性,而体内发育的小鼠胚胎在囊胚时才能产生热耐受性[10]。研究发现,在39 ℃条件下温和热应激处理2 h对小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚的比率几乎没有影响,但是41 ℃强烈热应激处理2 h则显著降低了其发育到扩张囊胚和孵化囊胚的比率。说明小鼠早期囊胚不能耐受短时间的强烈热应激,但能够较快从温和热应激损伤中恢复过来。这可能是因为39 ℃ 2 h的温和热应激能够有效诱导胚胎产生足量的热休克蛋白70,从而保护胚胎免受损伤或快速修复热损伤。
胚胎细胞总数的多少是评价胚胎质量的一个重要指标,胚胎细胞总数减少预示着胚胎的活力下降或发育阻滞。39 ℃、41 ℃ 热应激2 h均能显著降低早期囊胚发育到扩张囊胚的细胞总数,并且2个热应激组间差异显著( P < 0. 05) ; 但孵化囊胚细胞总数与正常培养组相比差异不显著( P > 0. 05) 。这说明热应激暂时抑制了小鼠囊胚细胞分裂,可能是热应激破坏了细胞有丝分裂装置,如中心体、纺锤体、细胞骨架成分[11,12,13]等,或是相关细胞有丝分裂的细胞因子失调,如cdc2活性降低( 细胞成熟促进因子MPF的催化亚基,诱导细胞进入有丝分裂)[14],cyclins A/B( 细胞周期调节蛋白) 水平升高[15]。
虽然41 ℃热应激2 h能降低早期囊胚的扩张囊胚率和孵化囊胚率,但孵化囊胚的细胞总数并没有减少,说明存活下来的胚胎仍具有较强的活力或者是说经过优胜劣汰,一部分存活下来的胚胎具有较强的热耐受性。因此,相对于41 ℃热应激2 h而言,39 ℃热应激2 h可能是诱导早期囊胚产生热耐受性的一种有效的热休克处理方式,但是还需要从其他热损伤和热保护方面进行进一步研究,以寻找最佳的热休克处理方式,生产出具有热耐受性的胚胎。
摘要：为了研究体外热应激对小鼠早期囊胚发育能力的影响,试验在39℃和41℃条件下对小鼠早期囊胚培养2 h,然后恢复37℃培养,以观察其发育到扩张囊胚和孵化囊胚的比例和细胞总数。结果表明:37℃正常培养组和39℃、41℃热休克处理组早期囊胚发育到扩张囊胚率分别为(81.7±6.5)%、(80.8±6.4)%、(63.3±3.6)%,各组扩张囊胚细胞总数分别为(57.11±1.70)个、(49.89±1.30)个、(42.22±2.00)个;孵化囊胚率分别为(77.2±5.0)%、(79.7±5.6)%、(49.4±9.3)%,孵化囊胚细胞总数分别为(73.09±0.60)个、(71.27±0.50)个、(71.89±1.80)个。41℃热条件下热休克2 h显著降低了小鼠早期囊胚的扩张囊胚率和孵化囊胚率(P<0.05),39℃热休克处理组与正常培养组相比差异不显著(P>0.05)。39℃、41℃热休克处理组扩张囊胚细胞总数与正常培养组相比显著减少(P<0.05),孵化囊胚细胞总数与正常培养组相比差异不显著(P>0.05)。41℃热休克2 h抑制了小鼠早期囊胚发育,而39℃热休克2 h对其发育力没有影响。
发育能力 篇5
一、被子植物的个体发育
教学目的
1．被子植物种子的形成过程（A：知道）。
2．种子的萌发过程（A：知道）。
3．植株生长和发育的过程（A：知道）。
教学重点
被子植物胚的发育部位。起点和过程，胚乳发育的部位。起点和过程。
教学难点
胚的发育过程及胚。胚乳。果皮。种皮细胞的遗传物质的特点。
教学用具
花生种子；玉米种子；放大镜； CAI课件；桃花的纵切图；芥菜胚；种子发育过程模式图；莽菜胚；种子发育过程照片图；本节重点内容小节图表；课堂
作业。
教学方法
教师讲述、师生谈话与学生观察相结合。
课时安排 1课时
复习提问：用CAI课件投影一朵桃花的纵切图及以下问题：
1．雄性、雌性生殖细胞分别位于哪里？
2．双受精作用是指什么？
（回答：1．雄性生殖细胞——精子位于花粉中，雌性生殖细胞位于胚珠中。2.双受精作用是指来自花粉管的两个精子，一个与胚珠内的卵细胞结合形成受精卵，一个与两个极核结合形成受精极核。如果亲本体细胞遗传物质的数目为2个单位2n——则受精卵中遗传物质的数目为n＋n＝2n，受精极核中遗传物质的数目为n＋n＋n＝3n。）
（教师补充或纠正回答中的错误）
引言：对于进行有性生殖的生物来说，受精卵的形成，就标志着新生命的开始。一个新的生命诞生以后，是如何完成它的生长发育过程的呢？今天，我们就开始学习第二节生物的个体发育中有关被子植物的个体发育的内容。
讲述：被子植物的个体发育大致可分为种子的形成和萌发，植株的生长和发育这几个步骤，我们先来看一看种子的形成和萌发。
提问：种子有哪些结构？
（回答：胚、胚乳、种皮。教师纠正回答中的错误。）
讲述：同学们知道这些结构是怎么形成的吗？下面我们首先来看看胚是如何形成的。种子中的胚是由受精卵发育来的，在胚珠内，一个受精卵进行短暂休眠后，便开始第一次分裂。这时受精卵分裂成两个细胞，靠近珠孔的细胞叫做基细胞，远离珠孔的细胞叫做顶细胞。
展示CAI课件：图１示荠菜胚珠内一个受精卵第一次分裂产生的两个细胞。图2示荠菜胚珠内顶细胞和基细胞经几次分裂形成的球状胚体和胚柄。）
教师说明泡状细胞的功能是吸收养料供球状胚体发育的。图3示荠菜胚珠内球状胚体继续发育形成突起。
图4示荠胚珠内球状胚体最后发育成子叶、胚芽、胚轴、胚根。教师引导学生理解子叶是由突起进一步分化形成，胚芽是由子叶向的细胞分化而成，根是由胚柄顶端的一个细胞与球状胚体基部的细胞发育而成，胚轴是由胚根与胚芽之间的细胞发育而成，它构成了胚，同时胚柄逐渐消消失。
（教师引导学生归纳上述过程，提问：受精卵如何发育成胚的？学生归纳时，教师边纠正错误边板书。）
观察1：请同学们拿出事先准备好的花生种子，打开后，剥去“红帐子”（种皮），里面的“白胖子”就是花生的胚。请同学们观察花生的两片子叶，子叶间的胚芽，底部的胚根及两者之间的胚轴。（若看不清楚，可用放大镜观察。）
观察2：请同学们拿出玉米种于观察，能否看到同样的结构呢？（回答：不能。）为什么？因为玉米是单子叶植物，它的种子与花生（双子叶植物）的种子不同。玉米种子中有丰富的胚乳，下面我们来认识一下胚乳的发育过程。
［展示CAI课件：荠菜种子发育过程图（同课本中图5—13）。］
讲述：在卵细胞受精的同时，两个极核与另一个精子结合。受精极核不经休眠就开始发育，故它应该早于胚的发育，受精极核经多次分裂就形成游离胚乳核，然后形成细胞壁，形成胚乳细胞，构成胚乳。如图5—13中1、2、3。
但是对于双子叶植物来说，它们的胚乳往往会被胚柄和子叶吸收，最后转移到子叶中，所以荠菜的种子中没有胚乳，如图5—13中4。同样，花生种子中也没有胚乳。
提问：种子包括胚、胚乳和种皮，那么，种皮是由胚珠的哪个部分形成的？
（回答：珠被。）
提问：种子外的果皮如何形成的？
（回答：子房壁。）
讲述：种子遇到合适的环境，便开始萌芽，形成幼苗。下面请同学们阅读“植株的生长和发育”部分内容。（要求学生了解营养生长和生殖生长的关系。）”
讲述：一年生植物和二年生植物，当营养生长发育到一定时曲便进行生殖生长，生殖生长结束后便死亡。多年生植物，当营养生长发育到开花年龄后，每年都进行生殖生长和营养生长，并且营养生长使植株长高长粗。
总结：被子植物的个体发育从受精卵开始发育成种子，种子萌发后，逐渐生长发育成一个性成熟的植株。对于被子植物来说，性成熟是它的个体发育结束的标志。
课堂作业：用CAl课件展示课堂作业：
一、填空题：
1．用稻谷碾成的精白米，它是由
发育来的。
2．黄豆种子贮存养料的结构是由
发育成的。
3．荠菜种子的胚是由
发育成 再发育成的，种皮由
发育来，胚乳被
吸收小
二、选择题：若水稻的体细胞内含24条染色体，在一般情况下它的卵细胞、子房壁细胞和胚芽细胞所含的染色体数目依次是（）。
A.12，24，24； B.24，24，36；
C.12，24，36； D.24，24，24。
答案：填空题：1．受精极核。2．受精卵。3．受精卵；球状胚体；珠被；子叶。选择题：A。
第二节
生物的个体发育
一、被子植物的个体发育
（一）种子的形成
1．胚的形成过程
２.胚乳的发育
受精极核经多次分裂形成胚乳
珠被形成种皮
3．种皮的形成
（二）种子的萌发
警惕孩子发育异常 篇6
孩子正常发育与否的衡量指标
儿童处于快速生长发育阶段，身体形态和各部分比例变化很大。充分了解儿童各阶段发育的规律、特点，正确评价儿童生长发育状况，及时发现问题，予以适当的干预，对促进儿童的健康生长十分重要。最常用的评价儿童体格生长状况的指标为体重、身长。
体重是体格生长的重要指标之一，是反映营养状况最常用的指标。儿童的体重增长非等速增加，年龄越小，增长速度越快，其增长具有一定的规律性。1岁以内的婴儿期是人的一生中生长速度最快的时期。正常足月婴儿在生后前三个月体重增加速度最迅速，平均每月增加约1～1.2公斤，生后3个月的婴儿体重约为出生体重的2倍；婴儿3～6个月时每月体重增加约0.5～0.6公斤；6～9个月时每月平均体重增加0.25～0.3公斤；9～12月时，每月平均增加体重0.2～0.25公斤，至1岁时体重增加至出生时体重的3倍，2岁时体重约为出生时体重的4倍；2岁至青春期前体重增加减慢，稳速生长，每年增加约2公斤；青春期开始后体重又猛增，年增长4～5公斤，持续2～3年，是人的一生中第二个生长高峰。
身长的增长规律与体重相似，年龄越小增长越快。出生身长平均为50厘米，生后第一年身长增长最快，生后前3个月身长平均每月增长约4厘米，3～6月时每月平均增长2厘米，后半年每月增长约1厘米，1周岁达75厘米；第二年生长速率减慢，平均约11～12厘米，2周岁时身长约87厘米；2岁以后至青春期前每年长约5～7厘米。青春期再现生长高峰，男性1年身高约增加9厘米，女性约8厘米。
在生长发育过程中，各项发育指标的监测非常重要，即孩子的身高、体重与同龄人相比，是不是在正常范围？每年增长了多少？这些数据都很重要。建议家长们在孩子生长发育期间，务必要至少每半年为孩子准确测量一次身高、体重，并对照儿童生长规律，初步判断孩子是否出现了生长发育风险。如果发现孩子发育异常，应到正规医院接受检查。
孩子比同龄人矮小的检查及治疗、调养方案
如果发现孩子生长缓慢或者个子比同性别同年龄的孩子矮小，务必要提高警惕，及早去专科就诊，进行血生化、甲状腺功能、染色体核型分析、生长激素和骨龄测定、脑垂体的影像学检查等，寻找生长缓慢的原因，及早发现问题。在临床上发现，很多家长发现孩子身高低于正常人时，误认为孩子身高增长要到十七八岁，没有必要过早干预，因此到了孩子十五六岁时才到医院检查。此时往往为时已晚，一旦骨骺线闭合，再权威的专家也无能为力。
预防孩子身材矮小，首先要注重营养，合理充足的营养是儿童生长发育的物质基础。要注重科学喂养和各种营养素的合理搭配，培养良好的饮食习惯。二是加强运动，体育活动是促进身体发育和增强体质最有效的方法。运动可刺激生长激素分泌，促进骨骼生长，肌纤维变粗，还可消耗多余的脂肪，预防肥胖。可根据孩子的年龄和兴趣来选择运动项目，以弹跳、伸展运动为最佳，如跳高、跳绳、游泳等。三是保证充足的睡眠。生长激素在睡眠状态下的分泌量是清醒状态下分泌量的3倍，所以充足的睡眠有助于长高。同时，还要注意观察异常的生长情况。如骨龄落后或提前，性激素水平较高，发育前已偏矮，发育中又无身高突增者，要及时到专科就诊。
孩子增高过快应观察孩子第二性征是否过早出现
8个月的女婴乳房开始发育、2岁的女孩出现外阴出血，这些让人难以置信的症状，近年来在儿科内分泌门诊屡见不鲜。原因何在？
其实，儿童性早熟发病的原因，除了神经、生物、内分泌激素分泌紊乱以外，环境因素更为重要。孩子们爱吃的的小零食、饮料、快餐等含有一些添加剂，甚至有些家长总担心孩子营养不良，买一些保健品、补品给孩子补充，由此病从口入，不仅影响了孩子们的食欲，更为严重的是孩子摄入了大量的外源性性激素，加速了骨龄成熟，影响了正常的生长发育过程。
孩子的身高增长具有一定的规律性。如果在青春前期出现了身高突增，家长们要注意观察孩子是否有第二性征的出现。目前认为，女孩在8岁前出现乳房发育，10岁前出现月经初潮；男孩9岁前有睾丸增大，阴茎增粗，12岁前出现遗精，即属于性早熟。家长应在日常生活中多注意观察孩子的发育情况，如有异常应及早到正规医院就诊，早诊断、早治疗。
孩子过于肥胖对生长发育的影响和调节办法
近年来我国儿童肥胖发生率猛增，与孩子们不良饮食行为和生活方式的变化有密切关系。如食用高脂快餐、饮料、甜点等“垃圾食品”；家长营养知识的缺乏，逼迫式劝食，重肉轻蔬、过度喂养；体育活动少，运动量小，以看电视、玩游戏等静坐为主的生活方式增多等。很多家长认为，孩子胖一点，营养好，有利于孩子的生长发育。其实是不正确的。
儿童肥胖可以给生长发育带来一系列的问题。肥胖儿童体内蓄积的过量脂肪使脑垂体后叶脂肪化，阻碍促性腺激素和生长激素生成，从而危害青少年儿童的生长发育、生殖发育和性发育成熟。女孩肥胖可出现青春期提前，过早乳腺发育及过早初潮，比普通孩子略提前1～2年，提前生长加速，骨龄加速成熟，影响最终身高。男孩肥胖易出现小睾丸、小阴茎，生殖器发育停留在儿童期。
正确处理饮食调整和体育活动的关系是控制体重的关键。运动是增加消耗、防止热量在体内积累的有效途径，但一定要持之以恒，保证足够的运动时间和运动强度。合理地控制饮食，从平时的一日三餐做起，少吃甜食、快餐等高热量、高脂肪食品，多吃蔬菜、水果、粗粮，要平衡膳食。家长应为孩子创造一个有规律的生活环境，注意饮食、睡眠、运动等各方面的调节，从而避免肥胖的出现。
孩子过于瘦弱可能是营养不良
孩子食欲不佳、身体瘦弱等亚健康状况，也会影响体格的生长发育。建议要充分保证孩子身体营养物质供给，多样化食物合理搭配，保证每日摄入足够的热量、蛋白质和水分，少吃零食和辛辣等刺激性的食物。不挑食、偏食，不强迫进食，养成良好的饮食习惯，促进孩子身体各器官正常发育。养成早睡早起的习惯，保证充足的睡眠，让孩子多参加户外活动和体育锻炼，提高身体素质，增强身体吸收代谢各类营养素的能力。
重视儿童生长发育监测，早认识，早预防，全面了解孩子的生长状况，调整日常的饮食、运动以及生活习惯的培养，孩子才会健康茁壮成长。千万别因为我们的疏忽大意，给孩子造成莫大的终身遗憾。
发育能力 篇7
关键词：促卵泡素(FSH),卵母细胞,体外成熟,体外受精,绵羊
促卵泡素(FSH)是一种由脑垂体合成并分泌的糖蛋白激素,在雌性哺乳动物体内作用于卵泡,促进卵泡生长发育,使卵泡分泌卵泡液,最终促使卵泡生长。因此,哺乳动物卵母细胞的体外成熟液中常添加一定剂量的FSH,以提高卵母细胞体外成熟效果。C.Accardo等[1]在添加胎牛血清(BSA)和雌二醇(E2)的TCM199中添加重组人FSH,使绵羊卵母细胞体外成熟率达到91.9%,国内也有大量文献报道FSH能明显促进绵羊卵母细胞的体外成熟研究[2,3]。目前,绵羊卵母细胞体外成熟液中所使用的FSH多为家畜超数排卵用FSH,这种FSH突出的问题是效价不稳定,应用于绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精及其他胚胎工程试验中效率较低。因此,试验采用Sigma公司生产的FSH,研究其不同浓度对绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精的效果。
1 材料与方法
1.1 试剂
试验所用化学试剂均购自Sigma公司。
1.2 卵母细胞的采集及成熟
从屠宰场摘取卵巢,放入35 ℃含双抗的生理盐水中,2～3 h带回实验室。用刀片划破卵巢表面2～6 mm 小卵泡,在体视显微镜下选择胞质均匀、带有3层及以上完整致密的卵丘颗粒细胞的卵母细胞复合体(COCs),移入100 μL成熟培养液[TCM199+ FSH + 10 μg/mL促黄体生成素(LH)+1 μg/mL E2+20 ng/mL表皮生长因子(EGF)]微滴中培养,FSH的浓度分别为0.01,0.02,0.03 IU/mL。每滴入孵15枚卵母细胞,置于38.5 ℃、5%CO2饱和湿度的培养箱内成熟培养24 h。将成熟卵母细胞用透明质酸酶消化,以卵母细胞周围留有 2～3 层颗粒细胞为宜。用成熟液充分洗净后供冷冻试验使用。根据不同需要,于体外成熟培养0小时、8小时、12小时、24小时时分别取生发泡期(GV)、生发泡破裂期(GVBD)、第1次减数分裂中期(MⅠ)、第2次减数分裂中期(MⅡ)卵母细胞进行OPS法玻璃化冷冻,将未经处理的新鲜卵母细胞作为对照组。
1.3 体外受精
受精液由输卵管合成液(SOF)+20%胎牛血清(FBS)+ 10 μg/mL肝素组成,体外成熟的卵母细胞在受精液中洗 3 次,每 15 个卵母细胞移入30 μL受精液滴中。通过上游法制备体外受精(IVF)精子,方法是将解冻的精液放入盛有2 mL预平衡上浮液[SOF+2% FBS]的底层,40 min后取上清液,1 000 r/min离心8 min,弃上清液。用受精液调整精子密度,每个受精液滴中加入精子的密度为 1×106/mL,将精子和卵母细胞置于38.5 ℃、5% CO2饱和湿度的培养箱中培养 18～20 h。
1.4 体外发育培养
精卵共孵育18～20 h后,将受精卵从受精液中取出,在HSOF中轻轻吹打除去全部卵丘细胞并用发育液洗涤3次,移入50 μL发育液微滴中,每滴10～15枚卵母细胞。采用混合气体即5%CO2、5%O2、90%N2,38.5 ℃饱和湿度条件下进行培养。发育液为 SOF+1%非必需氨基酸(NEAA)+1%必需氨基酸(EAA) +10 ng/mL EGF +1 mmol/L L-谷氨酰胺+8 mg/mL BSA,每 48 h换半液培养,受精后48小时统计卵裂率,受精后5～7 d统计囊胚率。
1.5 统计分析
采用 SPSS 16.0软件对试验数据进行统计分析, P<0.05表示差异显著,P<0.01表示差异极显著。
2 结果与分析
2.1 不同浓度FSH对绵羊卵母细胞体外成熟效果的影响(结果见表1)
注:同列数据肩标字母相同表示差异不显著(P>0.05)。
由表1可知:成熟液中添加0.01,0.02,0.03 IU/mL的FSH,第一极体排出率分别为 80.77%、77.27%、73.81%,差异不显著(P>0.05)。
2.2 不同浓度FSH对体外受精胚胎发育效果的影响(结果见表2)
注:同列数据肩标字母不同表示差异显著(P<0.05),字母相同表示差异不显著(P>0.05)。
由表2可知:0.02 IU/mL组卵裂率最高,为67.29%,与0.03 IU/mL组(55.92%)相比显著升高(P<0.05),但与0.01 IU/mL组(63.40%)相比差异不显著(P>0.05)。0.02 IU/mL组囊胚率最高(39.38%),与0.01 IU/mL组(21.36%)和0.03 IU/mL组(30.93%)相比差异显著(P<0.05)。
3 讨论
目前,卵母细胞体外成熟以排出第一极体作为判断标准,但这只是卵母细胞细胞核成熟的标志,而细胞质成熟鉴定比较困难,尚无统一的判断标准。研究发现,在绵羊卵母细胞成熟培养过程中添加FSH,对其排出第一极体具有显著的促进作用[3]。另有研究表明,FSH 对卵母细胞体外成熟的功能主要是诱导卵丘扩散,暂时性抑制生发泡破裂,改变第1次成熟分裂时间,促进胞质成熟[4]。可见,FSH对卵母细胞的核成熟和胞质成熟都是非常必要的。本试验结果表明:在成熟液中添加0.02 IU/mL FSH,绵羊卵母细胞第一极体排出率最高,但与0.01 IU/mL组和0.03 IU/mL组相比差异不显著(P>0.05)。对猪和奶牛的研究表明,卵泡的发育需要FSH的持续供应[5],在成熟培养液中添加FSH可以提高卵母细胞的体外成熟率[6,7]。
研究表明,在成熟培养液中添加FSH可以提高小鼠、猪、牛卵母细胞的体外受精率[6,8,9],其原因可能是FSH 可以促进卵丘细胞和胞质内蛋白质合成[10]。本试验结果表明:在绵羊卵母细胞体外成熟液中添加0.02 IU/mL FSH,其体外受精后的卵裂率(67.29%)显著高于0.03 IU/mL组(55.92%)(P<0.05),但与0.01 IU/mL组相比差异不显著(P>0.05);0.02 IU/mL组囊胚率也处于最高水平,为39.38%,显著高于0.01 IU/mL组和0.03 IU/mL组(P<0.05)。这很可能是由于0.02 IU/mL FSH与0.01 IU/mL组和0.03 IU/mL组相比,更有利于绵羊卵母细胞的胞质成熟。
参考文献
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发育能力 篇8
1 材料与方法
1.1 实验动物
6周龄健康清洁级雄性SD大鼠(东南大学医学院实验动物中心提供)80只,实验起始体重(110±20)g,12h光亮/黑暗条件、22～25℃环境温度下混合喂养。
1.2 试剂
戊四氮(美国Sigma公司),TPM(西安杨森制药有限公司,生产批号:060215,25mg·片-1);设计合成的扩增GAP- 43的cDNA 引物(由上海生物工程公司合成),上游引物:5′-ACAAGGAAAAAGCTCAAAG- 3′,下游引物:5′-GACGGGGAGTTATCAGTGG- 3′;RNA 提取试剂Trizol(美国Invitrogen公司),逆转录试剂盒(美国Promega公司),Taq 酶(日本Takara公司),大鼠Morris水迷宫(中国药科大学),Y迷宫(张家港市三兴教学仪器厂) 。
1.3 动物分组及模型建立
1.3.1 分组
在80只大鼠中随机抽取16只作为正常对照组;余64只制作成SE模型,依据TPM使用剂量进一步分为低、中、高剂量组及模型对照组(均n=16)。
1.3.2 动物模型建立 PTZ
20mg·kg- 1大鼠腹腔注射,然后每10min注射10mg·kg-1,直至达到SE发作。癫痫发作标准[1]:Ⅰ级——点头、眨眼、颈动或湿狗样颤抖;Ⅱ级——节律性点头;Ⅲ级——头部抽搐加前肢颤抖;Ⅳ级——第Ⅲ级加后肢站立;Ⅴ级——惊厥致跌倒,全身强直性抽搐。Ⅳ、Ⅴ级发作持续30min及以上者为SE。 造模成功后12h,TPM低、中、高剂量组分别给予TPM 20、40、80mg·kg-1灌胃,模型对照组和正常对照组予以等体积生理盐水灌胃。每隔24h重复给等量药1次,持续2周。各组动物混合饲养,每日测其体重以调整灌胃剂量。2周给药结束后开始进行行为学测试。
1.4 行为学测试
1.4.1 Morris水迷宫实验[2]
(1)定位航行实验:历时4d,每天8次,将大鼠从4个入水点面向池壁放入水中,记录120 s内寻找平台的时间(逃避潜伏期) 。找到平台后休息20s,如果120s内找不到平台,则逃避潜伏期计为2min,并帮助其上平台休息,再按顺序由下一象限入水进行下一次实验。取8次的平均值进行统计。(2)空间探索实验:定位航行试验结束后撤除平台,然后将大鼠任选一入水点放入水中,测其120s 内在原放有平台的象限内停留的时间(探索正确时间)。
1.4.2 Y迷宫
参照文献[3]进行检测。大鼠10s内从非安全区一次性跑到安全区为正确反应,否则为错误反应。连续10次有9次正确为达到学会标准,记录达标所需训练次数。24h 后以同样方法测试,每只大鼠进行10次,正确率即为24h记忆保持率。
1.5 海马组织GAP- 43mRNA的RT-PCR检测
大鼠Morris水迷宫实验完毕后,每组随机选取大鼠8只,直接断头取双侧海马,生理盐水冲洗后,置-80 ℃冰箱中保存。
采用Trizol一步法提取总RNA。按试剂盒说明书进行操作,PCR反应条件:94℃预变性5min;94℃变性45s,55℃(以引物序列后退火温度为主)复性 45s,72℃延伸1min;循环35次,72℃延伸10min。取10μl 扩增产物与2μl 6×loading缓冲液混合后,在1.5%的琼脂糖凝胶上电泳,溴化乙锭染色,用ImageMaster VDS图像分析处理系统扫描,以ODGAP- 43/ODβ-actin cDNA吸光度比值作为GAP- 43mRNA 的相对表达水平。
1.6 统计学处理
数据以undefined表示,采用SPSS13.0软件进行t检验和方差分析。
2 结 果
2.1 Morris水迷宫实验
大鼠定位航行实验结果显示,与正常对照组相比,模型对照组大鼠到达平台的平均逃避潜伏期均明显延长(P<0.05);TPM低剂量、中剂量组与模型对照组无明显差异(P>0.05);高剂量组与模型对照组相比,到达平台的平均逃避潜伏期明显延长(P<0.05)。
空间探索实验结果则显示:大鼠120 s内在原放有平台的象限内停留的时间模型对照组与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组明显减少(P<0.05),低剂量、中剂量组与模型对照组差异无统计学意义(P>0.05,表1)。
与正常对照组比较,*P<0.05;与模型对照组比较,▲P<0.05,△P>0.05
2.2 Y迷宫实验
与正常对照组比较,其余各组大鼠学会达标所需训练次数增多,24 h 记忆保持率均有不同程度下降,差异均有统计学意义;TPM低剂量、中剂量组与模型对照组无明显差异,高剂量组与模型对照组相比,学会达标所需训练次数增多,24 h 记忆保持率下降,差异有统计学意义(P<0.05,表2)。
与正常对照组比较,*P<0.05;与模型对照组比较,▲P<0.05,△P>0.05
2.3 大鼠海马组织GAP- 43mRNA表达
经治疗后,TMP各组大鼠海马组织GAP- 43mRNA 相对吸光度值较正常对照组均降低(P<0.05);低剂量、中剂量组与模型对照组比较差异无统计学意义, 高剂量组较模型对照组明显降低(表3,图1)。
3 讨 论
PTZ是一种氨基酸(GABAA)受体的拮抗剂,其本身不破坏脑组织结构,无特殊的神经毒性作用,对大鼠的记忆、视力和运动能力无明显影响,采用PTZ制作的SE模型是一种与人类癫痫具有高度相似性的慢性癫痫模型。Morris水迷宫和Y迷宫实验是研究与海马功能直接相关的空间学习记忆的方法,可客观反映动物的空间学习记忆能力。本实验结果显示,在Morris水迷宫中,与正常对照组比较,模型对照组大鼠平均逃避潜伏期显著延长,原平台所在象限停留时间明显缩短;在Y迷宫实验中,模型对照组大鼠达到学会所需的训练次数较正常对照组大鼠增多,24 h记忆保持率较正常对照组大鼠低,证明本实验中SE模型大鼠的学习记忆能力受到了损害。
与正常对照组比较,*P<0.05;与模型对照组比较,▲P<0.05
1.正常组;2.模型组;3.低剂量组; 4.中剂量组;5.高剂量组
TPM具有多种抗癫痫机制,对多种类型癫痫尤其是难治性癫痫临床疗效肯定。随着TPM在临床上的应用,其中枢神经系统的不良反应,尤其是对患者认知功能的损害引起了广泛的关注,有关TPM影响认知功能的报道也较多。Smith等[4]研究发现,TPM可对正常人工作记忆产生损害,服用TPM后受试者脑电图和诱发电位的改变与工作记忆损害程度相一致。有学者[5]认为,TPM引起的认知障碍随着药物剂量的加大、添加速度过快及多药治疗而增加;但也有研究[6]认为,认知障碍与TPM的剂量和血药浓度无关,部分患者即使是缓慢加量、给予适当的剂量仍有明显的认知障碍,可能与个体的敏感性有关,TPM剂量不能衡量TPM引起的认知障碍的程度。本实验中我们发现,TPM治疗与认知功能障碍之间存在一定的剂量关系,低剂量(20mg·kg-1)、中剂量(40mg·kg-1)对学习记忆的影响不明显,高剂量(80mg·kg-1)明显抑制了癫痫大鼠的学习记忆能力。此结果对TPM的临床应用具有一定的参考价值。
学习记忆是一个复杂的过程,现已知道,海马是学习记忆的关键部位,突触可塑性(synaptic plasticity)是学习记忆的神经基础,长时程增强(long-term potentiation,LTP) 是突触可塑性的典型表现[7]。突触可塑性是指突触形成、结构及其功能(主要是信号强度) 具有可调节性。GAP- 43是一种神经元特异性胞膜磷酸蛋白,主要分布于轴突生长锥质膜和突触前末端,与神经系统生长发育、再生、轴突生长和突触重组密切相关,被作为突触生长的标志物,对突触可塑性具有重要意义。GAP- 43在边缘系统和联络区有丰富表达,表明它与长期记忆相关的可塑性有关[8]。GAP- 43和PKC基因的过表达将明显增强转基因鼠的长时程电位(LTP) 和学习能力,因LTP与记忆有关,表明GAP- 43 基因与学习、记忆的调节有关[9]。由LTP所引发的突触效能的变化可影响GAP- 43mRNA 的表达[10]。本研究显示,癫痫反复发作大鼠学习记忆功能降低的同时,海马组织中GAP- 43转录水平下调,低、中剂量治疗后癫痫模型大鼠学习记忆能力无明显改善,GAP- 43转录水平与模型对照组无明显差异,高剂量治疗后癫痫模型大鼠学习记忆能力降低,同时GAP- 43转录水平下调,表明高剂量TPM对癫痫模型大鼠学习记忆能力有损害作用,可能与调节GAP- 43转录水平有关。
综上所述,癫痫发作对认知能力存在损害,机制之一可能与大鼠海马内GAP- 43转录水平下调有关。TPM可能通过调节海马内GAP- 43转录水平引起癫痫大鼠认知能力损害,其损害程度可能与TPM的使用剂量有关。
摘要：目的研究托吡酯(TPM)对戊四氮(PTZ)致癫痫的发育期大鼠学习记忆能力及海马组织神经生长相关蛋白(GAP-43)表达的影响。方法从80只6周龄健康雄性SD大鼠中随机抽取16只作为正常对照组;余64只以PTZ腹腔注射,制作癫痫持续状态(SE)模型,再随机分为模型对照组、TPM低剂量组、TPM中剂量组和TPM高剂量组,每组16只。TPM低、中、高剂量组分别给予TPM 20、40和80 mg.kg-1灌胃。2周后应用Morris水迷宫、Y迷宫评价大鼠的学习记忆能力,应用RT-PCR方法检测大鼠海马组织GAP-43 mRNA表达变化。结果发育期癫痫大鼠的学习记忆能力较正常大鼠明显下降(P<0.05),海马组织GAP-43 mRNA相对吸光度值降低(P<0.05)。癫痫大鼠学习记忆能力经低、中剂量TPM干预后未发生明显变化,海马组织GAP4-3 mRNA相对吸光度值也无明显变化;经高剂量TPM干预后学习记忆能力则明显下降(P<0.05),海马组织GAP-43 mRNA相对吸光度值降低(P<0.05)。结论SE后发育期大鼠的学习记忆能力受损,大剂量应用TPM可加重这一损害,该损害可能与调节海马GAP-43表达有关。
关键词：癫痫,戊四氮,海马,托吡酯,学习记忆,神经生长相关蛋白
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发育能力 篇9
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试雌金鱼购自湖南柳吉现代农业科技有限公司;雄性鲤鱼来自湖南农业大学水产教学基地。
1.2 试验方法
1.2.1 人工催产。
在繁殖季节, 选取已经达到性成熟的雌金鱼和雄性鲤鱼注射HCG与LHRH-A1合剂进行催熟, 约10 h采集精液。催产药物注射时间与量根据当时水温、亲本成熟度、方便操作等诸多因素来确定, 鲤鱼注射1次, 用量为金鱼亲本的1/2。
1.2.2 精子灭活。
人工挤出鲤鱼精子, 立刻加Hanks液, 精子∶Hanks液=1∶4, 然后充分摇匀, 在培养皿上铺成1 mm左右的液层, 放距紫外线20 cm处垫有冰板的摇床处理15 min左右, 显微镜下定期检查精子活性。当90%精子失去活性时停止紫外线照射, 收集失活精子, 储存在冰块中备用。
1.2.3 雌核发育。
受精:捞取发情金鱼亲本, 挤出成熟卵粒, 快速加入失活精子, 用消毒的干鸡毛搅拌, 进行人工干法假授精。热休克:用21℃水尽量冲散卵粒, 均匀粘附在直径20 cm的玻璃培养皿内, 恒温5 min, 然后逐步进入40℃水体, 放置3min, 再逐步回到21℃, 放置3 min, 其后放置室内孵化。胚胎发育观察:孵化水温和室内维持在 (21±2) ℃, 孵化用水充分曝气, 每隔2 h换水1次, 定期剔除死卵, 定期用显微镜观察与摄像记录胚胎发育过程, 并统计受精、孵化等情况。
2 结果与分析
当水温为21℃时, 受精卵经过60 min开始细胞分裂, 18 h 48 min进入原肠期, 29 h 40 min后进入神经胚期, 40 h40 min后进入眼基期, 45 h 30 min进入眼囊期, 49 h 10 min进入肌肉效应期, 55 h 23 min进入心脏原期。
2.1 胚胎发育过程
2.1.1 卵裂。
卵受精后, 卵膜吸水膨胀开始出现第1次分裂, 卵裂速度较快, 2 h内完成16细胞期分裂, 胚盘开始形成多层, 卵裂球越来越小, 规则地排列在配盘表面, 逐渐向胚盘外表推移, 并集中在胚盘处形成较为明显的隆起, 4 h后形成多细胞期 (图1a~d) 。
2.1.2 囊胚期。
受精6 h后, 胚胎细胞界限开始模糊不清, 胚盘在卵黄上呈高峰状, 出现早期囊胚, 进入高囊胚期 (图1e) ;9.8 h后, 细胞界限消失, 囊胚细胞开始向下方扩展, 面积不断扩大, 囊胚降低, 囊胚细胞逐步平展于卵黄膜上, 胚盘为弓形, 形成低囊期 (图1f) 。
2.1.3 原肠胚期。
受精18.67h后, 胚层进一步向植物极扩张, 约占整个胚胎的1/3 (图1g) ;受精20.17 h后, 胚盘下包卵黄1/2 (图1h) , 由于细胞的集中和内卷后造成一环带形的胚胎和一新月形的缺口, 这就是背唇, 也即原肠期形成的开始。21.33 h后, 胚盘下包3/5, 背唇处又内卷及增生的细胞向中央伸展集中形成球胚盾, 前段头部隆起明显, 形成原肠晚期胚胎 (图1i) 。原肠期统计受精率为56.54%。
2.1.4 神经胚期。
受精39 h后, 胚层细胞继续下包4/5, 受精35 h后, 囊胚层完全包围卵黄, 胚孔闭合, 胚体形成, 呈弧形, 胚盾中线形成神经索, 脑部逐渐膨大, 出现2个收缩部分, 脑分为前、中、后3个部分, 胚体上神经沟两侧可见5~6对短柱状体节, 达到胚孔封闭期 (图1k) 。
2.1.5 器官形成期。
受精45 h后, 胚体前方两侧出现椭圆形突起的眼泡原基, 出现体节, 并随着时间的推迟, 体节越来越明显, 受精52 h后出现眼点, 配体后部肌肉可以轻微扭动, 可见神经索。受精60 h后, 个别胚体心脏开始微弱跳动。
2.1.6孵化期。
受精75~90 h后, 胚体活动明显减弱, 然后胚体尾部出现剧烈扭动, 甚至翻滚整个胚体, 借助尾部摆动的力量冲破卵膜, 从卵膜破裂到胚体完全脱落需要8~10 h。刚脱膜而出的鱼苗, 腹部带有一椭圆形卵黄膜, 2~3 d后消失, 鱼苗能平游。
2.2 胚胎发育成活情况
对雌核发育的金鱼胚胎发育到囊胚期的成活率、孵化率以及正常鱼苗的比率进行统计, 结果见表1。平均受精率为65.16%;平均孵化率为50.28%;诱导率15.80%, 正品率为
注:a为受精卵;b为2细胞期;c为4细胞期;d为8细胞期;e为64细胞期;f为囊胚期;g为原肠早期;h为原肠期;i为原肠晚期;j为神经胚期;k为胚孔封闭期。
67.90%。
3 讨论
3.1 鲤鱼精子作为诱导源的可行性
热休克是一种常用的染色体加倍处理方法, 用于雌核发育研究的不多, 并且不同鱼类和不同染色体加倍处理阶段, 热休克起始时间、所需强度、温度等均有所不同, 孵化率和成活率较低[4,5]。本研究表明, 遗传失活的鲤鱼精子能有效启动金鱼雌核发育, 采用热休克处理染色体加倍, 较其他学者研究结果来看, 可能达到较高的受精率和孵化率, 表明此方法进行金鱼雌核发育是有效可行的。
3.2 雌核发育技术在金鱼选种中的优势
雌核发育主要是通过人工染色体加倍处理, 使雌核单体发育成为有正常生活力的个体[6]。染色体加倍可在不同发育阶段处理进行, 受精受阻后阻止卵子的第2次成熟分裂, 或卵子的第1次有丝分裂而使染色体加倍, 不同染色体加倍处理, 雌核发育后代基因纯度不同, 实践中多采用第1次有丝分裂过程中染色体加倍处理[7]。
试验过程中, 胚胎发育时间同其他学者研究上有所差异, 笔者认为可能是以下原因:一是孵化水温和室温差异, 导致胚胎发育速度有所改变。胚胎在培养皿发育过程, 水温易受到环境影响, 故孵化水温较难控制。二是雌核胚胎发育多放在室内进行, 环境光照对其影响较大。三是不同品种鱼类, 其胚胎发育时间会有所差异。
鲤鱼属鲤科, 鲤亚科, 鲤属, 染色体数目2N=100, 金鱼染色数目为2N=100, 两者关系较近, 外部形态较大, 理论上早杂交个体不存活。在该研究中, 用未曾遗传失活的鲤鱼精子与金鱼人工授精, 有杂交个体产生, 体色黑, 外部形态与鲤鱼相似, 其杂交出现成活个体的机理仍有待进一步研究。
摘要：开展了金鱼人工雌核发育的胚胎发育过程研究, 用紫外线灭活的鲤鱼精子激活金鱼卵子, 采用热休克处理卵子使其染色体加倍, 获得雌核发育的二倍体金鱼苗。将假受精的金鱼卵放入室温 (21±2) ℃室内塑料盒里孵化, 10 min后卵膜吸水膨胀, 60 min后开始卵裂, 8 h后出现囊胚期, 29 h后出现原肠胚期, 39 h后出现神经胚期, 56.8 h后器官开始形成, 3 d后孵化出小苗, 受精率为65.16%;平均孵化率为50.28%;诱导率15.80%, 正品率为67.90%。
关键词：金鱼,人工雌核发育,鲤鱼,胚胎发育
参考文献
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[4]林莲英, 宗琴仙, 李永强.人工诱导雌核发育金鱼的研究[J].水产科技情报, 1993, 20 (1) :15-19.
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[6]桂建芳, 孙建明, 梁绍昌, 等.鱼类染色体组操作的研究Ⅱ.静水压处理和静水压与冷休克结合处理诱导水晶彩鲫四倍体[J].水生生物学报, 1991, 5 (4) :333-342.
发育能力 篇10
1 临床资料
募集管辖区域2011年1月—2012年1月确诊为DDH的儿童16例, 年龄2个月至10岁, 其中男7例, 女9例, 所有病例均由三级甲等医院确诊, 并行下肢石膏固定, 生命体征平稳。
2 DDH儿童的社区护理指导
DDH儿童的康复护理多在家庭和社区中进行, 对于这些病人在社区护理中应着重注意以下几个方面。
2.1 社区早期筛查
新生儿出生时1%~10%存在髋臼发育不良、半脱位及脱位倾向。该病如果能早期发现和早期治疗, 能发育成一个正常的髋关节[3]。目前国内外学者一致认为DDH疗效的关键在于早期诊断和恰当的治疗。因此, 新生儿定期体检和筛查DDH, 在很多国家已成为新生儿保健的重要内容[4,5]。
2.2心理护理
患儿年龄小, 由于疾病原因不能同外界同龄儿童一样, 而产生哭闹、恐惧心理, 应根据患儿的心理、特点, 多上门接触患儿, 陪伴患儿做游戏, 拉近患儿心理距离, 让患儿感到亲切, 同时向家属做好解释工作, 认识到出院后早期进行正确康复的重要性。
2.3 生活护理
因DDH患儿出院后双下肢多数仍维持石膏固定, 所以应指导家属保持居室空气新鲜, 湿度、温度适中, 床铺清洁、干燥、平整、无皱褶、无渣屑, 做好大小便护理及会阴清洁。
2.4功能锻炼
患儿未弃石膏前应指导其继续加强踝泵活动及股四头肌舒缩活动, 保持患肢外展30°, 进行髋关节伸展练习, 每天活动2次或3次, 每次20min~30min。去除石膏后, 在床上练习屈髋、外展、内收、内旋、外旋髋关节。根据患儿情况, 一般术后8周, 根据X线复查结果, 可指导不负重下地活动。术后10周, 负重行走, 并练习下蹲动作。向患儿及家长讲述下地行走时, 不要急于两腿并拢;包石膏时的内旋状态不要急于外旋或摆正, 以防止髋关节再次脱位及避免患肢肌肉萎缩及关节僵硬、用性骨松变。
2.5 并发症预防性护理
①为防止骶尾部及石膏绷带边缘部位的压疮发生, 每次翻身后应检查并按摩骨突部位及石膏边缘的皮肤, 予温水擦洗, 石膏绷带边缘粘上花瓣或胶布。②教会家长随时观察石膏绷带的松紧度及下肢循环情况, 包括皮肤温度、颜色、有无肿胀、足趾活动度、感觉等, 有异常及时与社区人员或就诊医院联系。③患儿卧床时间较长, 活动量减少, 同时由于生活条件的改善, 大多数有偏食挑食的习惯, 饮食结构不合理, 极易引起便秘[6]。因此, 社区护理人员应了解患儿饮食习惯和爱好, 指导其增加蛋白质、粗纤维及新鲜蔬菜和水果。
3 小结
目前DDH儿童的社区护理在我国还处于起步阶段, 我国多数DDH儿童都是由家庭照顾者负责照料。然而, 由于大多数家庭照顾者护理知识缺乏, 致使儿童在家庭中难以得到正规的、系统的康复护理, 因此, 要随着医疗卫生改革的深入, 加大发展社区护理, 为更多的DDH儿童实施科学的社区护理指导, 提高DDH儿童生活质量和治疗效果, 减少对社会和家庭的经济负担, 提高社会满意度。
参考文献
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少女乳房发育案例解析 篇11
芳芳，12岁：前几天洗澡时，触摸到那如小丘般隆起的乳房，感觉有点硬硬的，随着月经的到来，乳房时有轻度的疼痛袭来，扰得我心烦意乱，不知是何毛病？
解析：女孩子在十岁左右，随着性发育的启动，第二性征逐渐显露出来，乳头如花蕾一样绽出，乳房逐渐如小丘样膨隆。少女乳房的发育是在垂体前叶、肾上腺皮质和卵巢内分泌激素调控下进行的，此外还受甲状腺等调节作用的影响。中枢神经系统是掌管青春期少女乳房发育的“司令部”，由它指令垂体分泌促性腺激素，后者作用于卵巢，促使卵巢分泌雌激素和孕激素。雌激素能促使乳腺导管的增长和分支发育，使乳房增大；而孕激素则能促使乳腺腺泡发育，使富有弹性的脂肪沉积于乳房内。另外，垂体前叶“生产”出的催乳素也会直接影响乳房的发育。处于青春期发育阶段的少女，由于月经来潮前体内雌激素水平增高，致使乳管扩张，上皮细胞增多、肥大，会引起乳管周围基质水肿，乳房胀大变硬，于是有时会摸到乳房内结节样块状物，并感到胀痛、压痛，这是乳房发育中正常的生理现象。有些喜吃炸鸡及冰激凌、奶油蛋糕等高热量、高脂肪甜点的女孩，因摄入过多的热量，转化成过多的脂肪，超出乳房问质吸收填充的限度，乳房甚至可扪及包块或引起疼痛。但这一切都是短暂的，随着机体的自我调整会自行消失。女孩子乳房胀痛一般在月经前两三天出现，随着月经消失，体内雌激素水平下降，乳管末端及腺小叶退化复原，乳管变小，上皮细胞萎缩脱落，胀痛、压痛会自然消失。
对策：青春期少女出现乳房结节样块状物及胀痛、压痛时，不必忧心忡忡，要明白这是性发育中的正常生理现象。注意不要束胸，避免碰撞乳房或乳头，少吃高糖高脂，不吃使用催熟剂的食物，少吃海鲜、咸肉等。
案例二突如其来的乳房发痒
甜甜，16岁：别人都夸我亭亭玉立，开始戴胸罩后，衬托出窈窕的曲线，更显得俏丽可人。可这些日子不知何故，乳房与乳头时有发痒的感觉，上课时又不好意思用手去挠瘁，弄得我坐立不安，听课老是走神。
解析：不少青春期少女在乳房发育时期会有乳房发痒的感觉，其实这也是正常的生理现象，并非有什么毛病。造成乳房发痒的原因，主要是乳房的淡褐色乳晕汇集许多腺体，会分泌出油脂样物质，时间一长，脂质酸化及污垢堆聚，会刺激乳房的局部皮肤，引起痒感。还有些女孩戴化纤材料制作的胸罩，或睡觉时没有卸下胸罩，致使乳头透气不良或汗水排出不畅、潮湿，也会引起发痒。还有些女孩爱用香皂清洁乳房，经揉搓与化学作用，会不断洗去皮肤表面的角化细胞，破坏皮肤组织，引起乳房表皮层肿胀、皮肤干燥与瘙痒。
对策：青春期女孩要养成勤洗澡的习惯，注意乳房卫生与保健。清洗乳房勿频繁使用香皂。有条件者，可用温开水清洁乳房，再用冷毛巾敷一下，能刺激血液循环，有助增强乳房皮肤和间质的弹性。胸罩不宜选用化纤制品，宜挑选柔软、透气性能好的棉制品，入睡前务必卸下胸罩，以免过度压迫乳头及乳房，引起瘙痒。须注意的是，乳房的皮肤十分娇嫩，感觉痒的时候勿直接用手抓挠。若痒感严重，且皮肤出现红肿、疼痛及皮疹，应及时到正规皮肤科或外科诊治，不可乱用药膏涂抹。
案例三 个子高，乳房却比同龄人小
媛媛，15岁：我是班里个子最高的女生，而且体形纤瘦，令很多女生羡慕。可我发现自己的乳房比班里其他女生都要小。尤其到了夏天，这种差别就更明显了。别人曲线动人，我自惭形秽：为啥我长得高，乳房却比别人小？
解析：据资料显示，我国青春期少女在14岁至18岁时，乳房基本发育成熟。乳房的发育与性发育的不同类型、遗传因素、营养状况及运动锻炼相关。如早熟型青春期启动早，此型多为矮胖型女孩，身体各处都分布较多脂肪，乳房间质也充填着脂肪，故较肥胖的女孩，其乳房比苗条、偏瘦的女孩要丰满些；而青春期启动晚的晚熟型，多为偏瘦、身材高挑的女孩，其乳房间质脂肪要相对少一些；至于均衡型，则介于早熟型与晚熟型之间，乳房发育大小适中。不少专家认为，乳房大小主要与遗传因素有关。若女孩的母亲、姐姐甚至外婆的乳房偏小，那女孩的乳房也大都偏小，反之亦然。当然这也并非绝对。
对策：要保证饮食充足、多样、均衡，适当多吃些富含维生素E、蛋白质、脂肪，以及能促进性激素分泌的食物，如奶制品、禽肉、蛋、鱼虾、牛肉、麦芽、蜂蜜、坚果、干果、豆制品及莴苣、山药、香菜、西蓝花、苹果、奇异果等鲜蔬水果。适当摄入动物蛋白、脂肪丰富的食物是必要的，绝不可盲目减肥，一味素食。因为体内各种类固醇如雌激素、孕酮等，都是以胆固醇为原料转化而来的，女性只有在体内脂肪占身体总重量的25%以上时，才会有月经来潮，而乳房的正常发育与月经正常周期的建立密切相关。
经常锻炼上臂与胸部，如适当做些扩胸运动、俯卧撑、游泳、健美操等，使胸肌和悬韧带强健，可使乳房挺耸，“充填物”脂肪充沛，则会使乳房变得丰盈。另外，青春期少女要避免含胸弓背姿势，端坐时要挺胸；行走时要抬头挺胸、收腹提臀、背部平直，有利于增强胸大肌力量，给乳房以托力；睡姿提倡仰卧位，避免长期侧卧使一侧乳房受压、两侧不匀称。大约80%的女孩要到16岁至18岁时，乳房发育才接近成人。美学家认为乳房以精致、饱满、挺秀、自然为美，并非硕大为优。
适时使用胸罩。胸罩能支持、衬托乳房，促进其血液循环通畅，有助于促进乳房内脂肪积聚，使乳房丰满。用软尺从乳房上底部经乳头到下底部测得的距离超过16厘米时，就应戴上合适的胸罩。过早戴胸罩，对正处于隆起发育期的乳房不利，还会影响今后乳汁的分泌；如乳房发育成熟后不戴胸罩，又易使乳房松弛下垂。乳房较小的女孩，可在月经来潮的第11天至第13天及第18天至第24天，卵巢激素全天候等量分泌期的10天里，进行乳房按摩，有助于激发乳房内脂肪的积聚。方法：双手大拇指和其余四指形成半圆形，从两侧乳房外沿轻柔往中间推移按摩，到中间时两手朝乳头轻推，每回做30次，早晚各1回。
发育能力 篇12
本研究以二倍体虹鳟为对照,利用光镜、电镜切片和TUNEL染色观察三倍体虹鳟卵巢中卵原细胞的发育情况,利用荧光定量PCR分析180 dpf(6月龄)至300 dpf(10月龄)时期二、三倍体虹鳟卵巢中的GDF9、BMP4和BMP7基因表达情况,探讨三倍体虹鳟卵巢中卵母细胞发育停滞后的最终去向,并分析其原因。
1 材料
试验中所有程序都严格遵守东北农业大学的动物保护和使用委员会的规定,并严格遵守动物福利。本次试验所用二、三倍体全雌虹鳟发眼卵(全雌三倍体虹鳟由全雌四倍体虹鳟与全雌二倍体虹鳟杂交而成)购于美国,置于水族箱中,孵化过程水温恒定为8℃,待鱼苗体重达50 g后饲养于养殖基地,养殖水温恒定为12℃。180 dpf(6月龄)起每30 d采集一次二、三倍体虹鳟的卵巢组织,共采集5次,采集的卵巢样本分三组:两组用p H值为7.2的磷酸缓冲液(PBS)清洗后,分别放入4%多聚甲醛和2.5%戊二醛中固定用于组织学观察;另外一组迅速放入液氮中暂存,然后转入超低温冰箱进行保存。
2 方法
2.1 组织学观察
2.1.1 光镜切片
将固定的卵巢组织从4%多聚甲醛中取出,从70%的乙醇开始进行梯度乙醇脱水,二甲苯透明,常规石蜡包埋与切片,切片厚度为5μm,H.E.染色,中性树胶封片,用Carl Zeiss显微镜观察,Motic Images plus 2.0系统拍照。
2.1.2 透射电镜切片
将固定的卵巢组织从2.5%戊二醛中取出,用锇酸再固定,Epon812包埋,在恒温培养箱中聚合,用Ultracut E型超薄切片机切片,经恒温培养后用醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色,用JEM-1200EX型电子显微镜观察拍照。
2.1.3 细胞凋亡的TUNEL法检测
将固定的卵巢组织从4%多聚甲醛中取出,进行脱水、透明、浸蜡、包埋,制作石蜡切片。脱蜡后采用末端脱氧核苷酸转移酶(Td T)介导的原位末端标记法(TUNEL)测定凋亡率,按照细胞凋亡检测试剂盒(罗氏公司)说明书进行,将10月龄三倍体虹鳟设为阴性对照组,采用PBS代替一抗,最后经脱水、透明、封片,在光镜下观察、拍照,细胞核呈棕黄色为凋亡细胞。
2.2 总RNA的提取及c DNA的合成
使用TRIzol试剂(购自Invitrogen公司)按照说明书进行总RNA的提取。琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,紫外分光光度计检测RNA浓度与质量。使用Prime ScriptTM第一链c DNA合成试剂盒(购自Ta KaRa公司)进行c DNA的合成,并保存于-20℃。
2.3 Real-Time实时荧光定量PCR
根据已经公布的虹鳟GDF9、BMP4和BMP7基因序列,应用Primer Premier 5.0软件设计实时荧光定量PCR引物(由华大基因公司合成),序列见表1。以β-actin为内参基因,分析各受体基因的相对表达水平。Real-Time实时荧光定量PCR反应体系(20μL):SYBR premix Ex Taq(购自Ta KaRa公司)10μL,5倍稀释的c DNA模板2μL,上、下游引物各0.4μL,dd H2O 7.2μL。PCR反应条件:95℃30 s;94℃5 s,60℃30 s,共40个循环。PCR反应结束后,对扩增产物进行熔解曲线分析,检测反应的特异性。采用2-△△Ct法分析各基因的相对表达量。
2.4 数据的处理与分析
试验数据采用SPSS 17.0进行统计处理,利用One-way方差分析进行差异显著性检验,分析后的结果均表示为“平均数±标准差”,P<0.05为差异显著。
3 结果
3.1 组织学观察结果
3.1.1 光镜切片观察结果
观察180~300 dpf时期二、三倍体虹鳟的性腺组织切片观察结果见287页彩图1。二倍体全雌虹鳟的卵巢发育正常,卵巢中以初级卵母细胞为主,卵母细胞体积增大,大多数为圆形,结构完整,核仁多个并移至核膜内侧(见287页彩图1A中箭头所示),而后外排,随着发育出现皮质泡(见287页彩图1B、1C箭头所示),卵母细胞由Ⅱ时相发育至Ⅲ时相。三倍体卵巢发育明显迟于二倍体,180 dpf时期卵巢中主要以卵原细胞为主,并且发生卵原细胞囊泡化现象,表现为数个卵原细胞外被一层膜结构包裹,形成卵原细胞簇(见287页彩图1D中箭头所示)。随着日龄增加卵原细胞簇数目减少,卵原细胞未发育成初级卵母细胞,并发生染色质固缩现象,疑似发生细胞凋亡(见287页彩图1E、1F中箭头所示)。
3.1.2 透射电镜切片观察结果
透射电镜下观察可见:与发育正常的二倍体相比,三倍体虹鳟性腺中的卵原细胞出现细胞膜空泡化、细胞质浓缩、染色质固缩(见图2A中箭头所示),以及卵原细胞膜内陷、染色质边聚(见图2B中箭头所示)等典型的细胞凋亡现象,并能观察到凋亡小体(见图2C中箭头所示)。
3.1.3 TUNEL染色观察结果
采用TUNEL法检测二、三倍体全雌虹鳟性腺细胞凋亡,结果见287页彩图3。二倍体卵巢阴性对照未出现阳性结果(见287页彩图3A)。180~300 dpf时期二倍体卵巢中的初级卵母细胞未见凋亡,卵母细胞呈蓝色(阴性),随着卵母细胞发育,个体逐渐增大,部分滤泡细胞和间质细胞发生凋亡,其细胞核呈黄褐色(阳性),为卵巢发育过程中自然凋亡(见287页彩图3B、3C、3D);180~300 dpf时期三倍体卵巢中的卵原细胞发生凋亡则为普遍现象,180 dpf卵原细胞簇内的卵原细胞簇内还存在部分未凋亡的卵原细胞,随着发育凋亡的加剧,卵原细胞簇数目减少,大部分卵原细胞均呈阳性,部分滤泡细胞和间质细胞也发生凋亡(见287页彩图3E、3F、3G)。
3.2 二、三倍体虹鳟GDF9、BMP4、BMP7基因在卵巢中的表达结果
提取的二、三倍体虹鳟5月龄的性腺组织RNA经琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测,RNA完整性良好,反转录得到的c DNA经内参基因β-actin检测发现可以用于实时荧光定量PCR试验。
试验结果表明,随着卵巢发育,三倍体虹鳟卵巢中的GDF9、BMP4和BMP7基因表达水平均显著低于同时期二倍体(P<0.05),并大体呈不规则的下降趋势。但240 dpf时BMP4在三倍体虹鳟卵巢中的表达显著高于二倍体(P<0.05)。见图4。
4 讨论
注:*表示二、三倍体虹鳟比较差异显著(P<0.05)。
4.1 二、三倍体虹鳟性腺组织学观察结果
细胞凋亡是1972年由Kerr教授根据形态学特征首先提出的,是一种由基因控制的细胞自主性死亡方式,也是一种主动的、程序性的、细胞固有的生物学过程,是为更好地适应生存环境而主动争取的死亡过程,普遍存在于动植物中,又称细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)。细胞凋亡是最基本的生物现象,是机体生存和发育的基础,具有清除多余细胞、无用细胞、发育不正常的细胞和完成正常使命的衰老细胞等生物学意义[11]。光镜切片、透射电镜切片和TUNEL染色结果表明,在180 dpf至300 dpf时期,二倍体虹鳟卵巢中的卵母细胞并未发生凋亡,只有部分间质细胞因性腺发育而发生正常的凋亡现象[12]。而发育异常的三倍体虹鳟卵原细胞最终去向是发生了凋亡。在180 dpf时,三倍体虹鳟卵巢中的卵原细胞簇数目较多,其中仍有部分未发生凋亡,随着性腺发育,卵原细胞簇数目减少,绝大部分卵原细胞发生凋亡,几乎观察不到发育正常的卵母细胞。之前对于三倍体在生长过程中较二倍体显示出明显的生长优势,一直被认为是奇数染色体组会导致减数分裂的失败和性腺发育的失败,在二倍体鱼类中用来促进性腺发育的能量在三倍体鱼类中被用来生长[13]。结合以上观点,笔者认为三倍体虹鳟卵巢中卵原细胞凋亡为其后性腺的重组或重新分化奠定了物质基础,发育不正常的卵原细胞通过细胞凋亡的途径,使机体获得更强的生存能力和更优良的生长特性。
4.2 二、三倍体虹鳟GDF9、BMP4、BMP7基因在卵巢中的表达
对鱼类的研究表明,GDF9在异育银鲫卵细胞的发育过程中具有重要作用,尤其是参与调控卵母细胞的早期发育[9]。在60 dpf和100 dpf时均检测出GDF9和BMP7在虹鳟卵巢中的表达,GDF9、BMP4、BMP7在不同发育阶段的虹鳟卵母细胞中均有表达,在Ⅰ时期卵母细胞中表达量最高,随着发育在卵母细胞中的表达量逐渐降低[14]。本研究也发现,180 dpf至300 dpf期间,二倍体虹鳟卵巢中GDF9和BMP7基因随着月龄的增加呈上升趋势,在10月龄达到最高,可见GDF9、BMP4和BMP7在鱼类卵巢发育过程中的作用。
三倍体虹鳟卵巢中GDF9、BMP4和BMP7基因的表达量显著低于卵巢发育正常的二倍体虹鳟,整体呈不规则下降趋势。羊GDF9和BMP15基因表达异常会导致母羊产仔数目减少。人类多种卵巢疾病,如卵巢早衰(POF)、卵巢功能缺陷(POI)、多囊卵巢综合征(PCOS)都与GDF9和BMP15(GDF-9B)的突变和表达异常有关[15]。GDF9基因敲除的小鼠缺乏生育能力,卵泡发育停留在初级卵泡阶段,即使有GDF9的同系物BMP15的表达也不能弥补GDF9的缺失[16]。因此,笔者认为随着卵巢发育,三倍体虹鳟GDF9、BMP4和BMP7的表达量过低,可能不足以维持卵原细胞的正常发育,最终导致卵原细胞发生凋亡。
240 dpf时三倍体虹鳟卵巢中的BMP4表达量突然升高,并高于同时期二倍体虹鳟的表达量,随后表达水平恢复至显著低于二倍体,结合TUNEL染色结果可知,240 dpf三倍体虹鳟卵巢中卵母细胞凋亡程度加剧。有研究表明,BMP4已经被证实不仅能够促进大鼠原始卵泡的发育,还能作为存活因子抑制细胞凋亡[17]。因此可以推测BMP4在虹鳟中的功能可能与在鼠中的相似,不仅可以调节卵母细胞的发育,还能抑制卵原细胞的凋亡。
5 结论
1)三倍体虹鳟中发育不正常的卵原细胞最终去向为发生细胞凋亡。2)三倍体虹鳟中性腺发育相关因子GDF9、BMP4和BMP7的低表达可能诱导卵原细胞发生凋亡,且BMP4可能同时具备抑制卵原细胞凋亡的功能。
摘要：为了研究三倍体雌性虹鳟在生长过程中出现的性腺发育停滞、卵原细胞发育异常的原因,试验采集180300 dpf时期二倍体和三倍体虹鳟的性腺组织,利用光镜、电镜切片和TUNEL染色进行组织与细胞学对比研究,利用实时荧光定量PCR分析对卵巢发育和配子发生过程发育具有调节作用的生长分化因子9(GDF9)、骨形态发生蛋白4(BMP4)和骨形态发生蛋白7(BMP7)在二、三倍体相同时期的表达差异。结果表明:180300 dpf虹鳟三倍体卵巢中的卵原细胞发生凋亡,除240 dpf三倍体虹鳟BMP4表达量显著高于二倍体外,三倍体虹鳟中GDF9、BMP4和BMP7表达量显著低于同时期二倍体。说明三倍体虹鳟卵原细胞发育异常,最终发生凋亡,可能与GDF9、BMP4和BMP7的低表达有关,BMP4在调节卵母细胞发育的同时可能有抑制细胞凋亡的作用。