间质干细胞（精选8篇）
间质干细胞 篇1
摘要：由于骨髓间质干细胞具有多方面的优势, 越来越受到人们的关注, 人类对骨髓间质干细胞的研究也取得了重大进展。文章就骨髓间质干细胞的来源、研究历史、细胞形态、分离方法、分化潜能及其应用前景作一综述, 旨在为相关研究提供参考。
关键词：骨髓间质干细胞,生物学特性,应用前景
骨髓是胚胎时期最后一个造血器官, 由造血组织和基质构成, 含有两类干细胞, 即造血干细胞 (HSCs) 和间质干细胞 (MSCs) , 前者是存在于骨髓中的一小群具有无限或较长期自我更新能力的并具备多向分化潜能的原始造血细胞;后者是存在于骨髓非造血组织中的一种增殖能力较强、具有多向分化潜能的多能成体干细胞, 是由骨髓组织干细胞或前体细胞和躯体组织干细胞组成的细胞群体, 其成分及功能比较复杂。近几十年来, 对骨髓间质干细胞 (BMSCs) 的基础研究和临床应用取得了重大进展, 并且越来越受到人们的重视, 充分表明骨髓间质干细胞在细胞和基因治疗上具有广阔的应用前景。
1 骨髓间质干细胞的来源
在生物个体的发育过程中先后出现胚胎干细胞和成体干细胞, 具有多向分化潜能的间质干细胞作为一种成体干细胞来源于中胚层间充质, 主要存在于全身结缔组织和器官间质中, 以骨髓组织中含量最为丰富, 在人的骨髓中约占单个核细胞数的1/1×105[1]。间质干细胞首先是从骨髓中提取出来并被命名为骨髓间质干细胞, 目前研究较多的间质干细胞主要来源于脐带血、外周血及脂肪组织, 但骨髓间质干细胞一直是人们研究的热点。
2 骨髓间质干细胞的研究历史
19世纪70年代, 德国病理学家Cohnheim在研究伤口愈合过程中, 从静脉注入染料analine, 观察到伤口愈合处出现含有染料的炎症细胞和纤维细胞, 推测这些细胞来自高度运动的骨髓细胞, 并首先提出骨髓中有间质干细胞存在的观点。此后, 骨髓间质干细胞的研究越来越受到重视, 研究骨髓间质干细胞的人也越来越多。20世纪70年代, Friedenstein开始研究骨髓间质干细胞, 他在培养全骨髓标本时发现塑料培养皿中放入骨髓单个核细胞培养4 h左右, 培养皿上有少量呈梭形的贴壁细胞, 并以成纤维细胞样的集落形成单位[2], 而且发现这些贴壁细胞即使经过20～30次细胞传代后, 通过包埋在有孔的胶囊中植入大鼠腹腔仍可分化为软骨[3]。随后多数骨髓间质干细胞的研究都按照Friedenstein的方法依据其较强的黏附性而进行。
3 骨髓间质干细胞的细胞形态
骨髓间质干细胞从形态上主要分为以下几种类型:①球形细胞。这种细胞体积较小, 折光性强, 直径约 5 μm, 仅含1个核仁, 胞质内细胞器少, 核浆比大, 结构简单, 具有较大的分化潜能, 自我更新快, 因此被命名为球形细胞 (RS) [4]。②巨大扁平细胞。这种细胞是衰老的间质干细胞。③纺锤状细胞或梭形细胞。此细胞在培养过程中最常见。以上主要是原代骨髓间质干细胞的细胞形态, 骨髓间质干细胞传代后细胞形态较为一致, 多呈梭形。
4 骨髓间质干细胞的体外分离方法
骨髓间质干细胞的数量极少, 如何获取高纯度的骨髓间质干细胞相当重要。骨髓间质干细胞的体外分离方法主要有以下三种:①贴壁筛选法, 也称全骨髓法。这是根据骨髓间质干细胞在塑料组织培养瓶中具有黏附贴壁生长的特性对其进行分离的, 通过用培养液冲洗骨髓或直接抽取骨髓加入培养液, 经换液传代去除悬浮细胞得到纯化的骨髓间质干细胞。②密度梯度离心法。此方法是根据骨髓中各种细胞的密度不同, 采用 Percoll 或 Ficoll 与骨髓悬液混合离心获取单个核细胞, 此法在人医上应用较广, 分选纯度可达 98%以上。③流式细胞仪分离法。根据骨髓间质干细胞的体积小、相对缺少颗粒及具有相对稳定的细胞表面标志的特性对其进行分离[5]。最近几年, 有的实验室采用免疫磁珠分选技术分离骨髓间质干细胞并用流式细胞术加以检测, 得到纯度较高的中枢神经干细胞。现在国外较为关注的一种方法是依椐骨髓间质干细胞对生长因子的反应性不同, 通过选择适当的因子刺激增殖而获得含有较高比例的骨髓间质干细胞。在国外还建立了一种利用具有 3 μm 孔径的塑料培养皿从骨髓中筛选骨髓间质干细胞的方法, 这种方法筛选出来的骨髓间质干细胞均质性大于 98%, 具有增殖和自我更新能力, 并具有向骨、脂肪、软骨组织分化的潜能[6]。
5 骨髓间质干细胞的分化潜能
在适当的环境下, 骨髓间质干细胞经过诱导后可以分化为软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞、肌细胞及心肌细胞和肝细胞等。研究表明, 骨髓间质干细胞的分化能力正在不断地突破传统观点的局限, 在一定的体内外环境中, 骨髓间质干细胞具有跨系统分化的特性即可塑性。因此, 骨髓间质干细胞在一定的环境中可以分化为中胚层的组织细胞, 甚至跨越胚层向外胚层及内胚层来源的组织细胞分化。
6 骨髓间质干细胞的应用前景
干细胞研究始于20世纪60年代, 其发展举世瞩目。干细胞具有产生构成身体各种类型细胞的潜能, 在成体干细胞中, 骨髓里除含造血干细胞之外, 还含有间质干细胞, 后者虽曾受冷遇, 但由于具有多方面的优势, 成为医学界的一大研究热点。骨髓间质干细胞的取材极为方便, 简单穿骨即可获得, 经诱导分化得到的组织类型较为广泛, 若取自自体, 由它诱导分化而来的组织在进行移植时不存在免疫排斥问题。骨髓间质干细胞的移植方法具有简单、实用、费用低和不存在免疫排斥等优点, 即骨髓间质干细胞无论从来源、分离方法及可分化的组织上都有其独特的优势, 具有高度自我更新能力, 体外反复传代仍能具有保持多分化潜能的特点, 且遗传背景稳定, 自体移植还克服了伦理道德和免疫排斥等问题[6]。
鉴于骨髓间质干细胞具有的优势, 人们在基础研究和临床应用上也取得了可喜的成果:①骨髓间质干细胞作为种子细胞的应用。在组织工程方面由于从理论上说骨髓间质干细胞能分化成所有的间充质组织类型, 并已有研究表明骨髓间质干细胞可成功地分化为骨、软骨、肌肉、肌腱、脂肪、神经等组织, 因此它们在创伤性疾病、神经系统疾病的治疗和修复中具有巨大的应用价值。②骨髓间质干细胞不仅具有分化为多种组织的潜能, 近期研究还发现骨髓间质干细胞易于进行外源基因的转染和表达。有研究表明, 用骨髓间质干细胞移植治疗患有由Ⅰ型胶原基因突变所致的骨发育不良儿童, 3个月后可见供体骨髓来源的成骨细胞占受体骨细胞的1.5%～2.0%, 受体的骨无机盐成分也相应增加, 且有新骨出现。Studeny等利用骨髓间质干细胞作为载体将β-干扰素基因整合到骨髓间质干细胞中, 然后静脉注射到体内发现肿瘤所在的微环境有利于骨髓间质干细胞的迁移、聚集, 由此目的基因得以在局部持续、大量地表达, 克服了直接静脉注射β-干扰素难以在肿瘤部位达到高浓度的困难, 从而可以更好地治疗肿瘤。
虽然骨髓间质干细胞因具有多种优势而被广泛应用于研究与应用, 但目前还有许多与骨髓间质干细胞相关的问题有待解决, 尤其是骨髓间质干细胞的分化机制及影响因素等问题还需要做大量的基础研究, 真正要广泛应用于临床还需要进一步扩大试验。
参考文献
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[2] FRIEDENSTEIN A J, GORSKAJA J F, KULAGING N N.Fibroblast precursors in normal and irradiated mouse hematopoietic organs [J].Exp Hematol, 1976, 4:267-272.
[3]FRIEDENSTEIN A J, CHAILAKHYAN R K, GERASIMOV U V.Bone marrowosteogenic stem cells:invitrocultivation and transplan-tation indiffusion chambers[J].Cell Tissue Kinet, 1987, 20:263-272.
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[5] HUNG S C.Isolation and characterization of size-sieved stem cells from human bone marrow [J].Stem Cells, 2002, 20: 249-258.
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间质干细胞 篇2
豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的分离、培养及其鉴定
目的` 探索豚鼠膀胱Cajal样问质细胞的原代培养方法.方法 颈部脱臼法处死豚鼠,无菌条件下分离出膀胱肌组织制备成肌条.采用V型胶原酶酶解法分离细胞,将细胞悬液接种于含干细胞因子的细胞培养基中培养,隔日换液.用酪氨酸蛋白激酶受体特异性抗体标记细胞,证实细胞类型.结果 培养后的Cajal样间质细胞保持其固有特征,可见胞体为梭形且胞体两极有两个细长突起,该类细胞酪氨酸蛋白激酶受体抗体荧光染色阳性证实细胞培养成功.结论 用V型胶原酶消化法可获得成年豚鼠膀胱Cajal样问质细胞,并在体外条件下生长,可用于Cajal样间质细胞的电生理学研究.
作 者：Wang Qian 王勤章 Ding Guofu 李维仁 Wang Wenxiao 王江平Li Yinglong Wang Qian Wang Qinzhang Ding Guofu Li Weiren Wang Wenxiao Wang Jiangping Li Yinglong 作者单位：新疆石河子大学医学院一附院泌尿外科,新疆石河子,83刊 名：现代泌尿外科杂志 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF MODERN UROLOGY年，卷(期)：200813(4)分类号：Q813.11关键词：干细胞因子 V型胶原酶 酪氨酸蛋白激酶受体 Cajal样间质细胞
间质干细胞 篇3
1 资料与方法
1.1 一般资料
60例均为我院收治的脊髓损伤的住院患者, 全部病例均经CT或MRI诊断确诊, 其中男性50例, 女性10例, 年龄18～45岁, 平均 (32.5±4.2) 岁, 病程1～10个月。受伤原因均为外伤, 原因如下:车祸32例, 重物砸伤16例, 坠落伤12例, 大部分患者在骨科已进行椎板减压及内固定术。损伤部位:颈髓损伤12例, 胸髓20例, 腰髓28例, 按美国脊髓损伤学会 (ASIA) 残损分级:A级26例, B级20例, C级12例, D级2例。将该组患者随机分为观察组和对照组, 每组30例, 两组在年龄、性别、病程、损伤部位、残损分级方面均具有可比性, P>0.05。
1.2 治疗方法
(1) 对照组:采用综合康复治疗方法, 根据患者损伤程度, 脊柱稳定情况及功能状况进行康复治疗, 具体方法为进行正确的体位摆放, 被动关节活动、持续牵张运动和主动肌力训练, 轮椅技巧训练、按摩、坐位及站位移乘, 平衡训练, 针灸或功能电刺激, 佩带矫形器及支具等。 (2) 治疗组:在对照组的基础上采用间充质干细胞治疗, 治疗前常规检查排除干细胞移植禁忌证, 治疗前由患者签署干细胞治疗知情同意书及伦理同意书。
间充质干细胞的制备:采集经理化检验合格后新生儿脐带, 将脐带剪碎至约1mm×1mm×1mm, 首先经0.1%胶原酶37℃消化30min后, 在经0.125%的胰酶37℃消化30min, 用100目及200目分别进行滤网过滤, 去除未消化的组织, 离心收集细胞。细胞经培养、数次接代后可获得 (1.0～5.6) ×107的间充质干细胞, 再次检验合格后, 可用于移植治疗。使用时将细胞数为1×107的间充质干细胞悬液30mL静脉输注, 同时沿脊柱两侧竖脊肌及骶髂关节区域点状注射按照1:4稀释后的间充质干细胞。定期检查患者血常规、尿常规、肝肾功能、心电图、肌电图、X线胸片、血清免疫球蛋白、C3、C4、血压等指标, 记录患者的不良反应及其好转情况。
1.3 评价指标
比较两组患者治疗前及治疗后90d的感觉评分、运动评分、日常生活能力评分。采用评定表 (第6版) 进行治疗前后感觉与运动评分, 感觉评定为皮节的痛觉和触觉, 共分为0、1、2三级, 痛觉和触觉的总分都为112分。运动功能评定上下肢10块肌肉, 分别为深肘肌、屈肘肌、伸腕肌、屈指肌、小指展肌、伸膝肌、屈髋肌、踝背肌、拇长伸肌、踝蹠屈肌。日常生活活动能力评定采用改良的Barthel指数量表。
1.4 统计学处理
用SPSS13.0统计软件进行分析。计量资料以 (珚x±s) 表示, 组间比较采用t检验;计数资料以百分比描述, 采用χ2检验;以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组治疗效果比较
治疗前两组感觉评分、运动评分、日常生活能力评分无显著性差异, P>0.05。治疗组在治疗90d后的感觉评分、运动评分、日常生活能力评分的改善程度显著优于对照组, P<0.05。见表1。
(±s)
注:治疗前后相比, △P<0.05;治疗组与对照组相比, *P<0.05。
2.2 并发症
治疗组治疗期间出现发热1例, 头痛2例, 予降温及抗炎等对症处理后, 均在移植后2天内消失, 未出现严重并发症中断治疗。
3 讨论
脊髓损伤是较为严重的中枢神经系统的创伤, 患者主要表现为感觉、运动功能部分或完全丧失和大小便失禁。成熟神经元不具备增殖分化能力, 脊髓损伤后不能自我恢复, 因此, 常规治疗方法虽然在一定程度上缓解了脊髓损伤的病理性改变, 但仍不可改变患者的截瘫。间充质干细胞能分泌多种细胞因子, 发挥营养神经的作用, 可在体外细胞因子和体内微环境诱导下分化为神经细胞[3]。间质干细胞移植后向病变部位组织渗透融合, 其在新的环境下表达神经细胞表型, 替代损伤细胞, 作为连接损伤脊髓两断端的桥状结构, 支持并引导宿主轴突再生穿越损伤区, 重建神经环路, 其还能上调神经细胞的可塑性蛋白质, 刺激内源性神经系统的修复机制, 达到恢复神经功能的目的[4]。
本研究结果显示, 在综合康复治疗的基础上采用间质干细胞治疗脊髓损伤, 患者在感觉评分、运动评分、日常生活能力评分的改善方面显著优于综合康复治疗组, P<0.05。间充质干细胞不容易引起宿主的免疫排斥, 本研究中未发现严重排斥反应而终止治疗的病例。这说明采用间充质干细胞治疗脊髓损伤, 能够在近期内显著改善患者的运动和感觉能力, 但远期疗效还有待于进一步观察。
参考文献
[1]谢遵伟, 崔贵祥, 李义, 等.自体骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤疗效观察[J].中国组织工程研究与临床康复, 2007, 11 (7) :1277-1279.
[2]崔丙周, 李恩, 杨波, 等.人脐血间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究[J].广东医学, 2011, 32 (3) :304-305.
[3]寿纪新, 马林, 付旭东.脐带血干细胞移植治疗脊髓损伤30例临床观察[J].山东医药, 2010, 50 (40) :607-608.
间质干细胞 篇4
关键词：骨髓间质干细胞,移植,脑梗死,脑出血
脑血管病是我国中老年的常见病、多发病。 目前的外科手术和药物治疗使脑卒中患者病死率下降, 但多数幸存患者都遗留有程度不等的神经功能缺陷, 给患者、家庭及社会带来了沉重的负担。 近年来在神经系统可塑性和神经再生方面的深入研究, 成体干细胞具有多向分化潜能和自我更新的特性, 干细胞移植有望成为脑血管病治疗提供了新手段[2,3,4]。 本研究在急性脑卒中常规治疗病情稳定后采用自体骨髓间质干细胞 (MSCs) 经蛛网膜下腔移植治疗, 观察急性脑卒中患者的临床疗效和安全性。
1 资料与方法
1.1一般资料
选择2011 年1 月~2012 年12 月江西省人民医院神经内科收治的急性脑卒中患者49 例, 其中脑出血16 例 (基底节区9 例、脑干3 例、额叶2 例、顶叶2 例) , 脑梗死33 例 (基底节区22 例、脑干8 例、顶叶3 例) ;男29 例, 女20 例, 年龄58~69 岁, 平均65.3岁。所有患者均符合1995 年全国第四届脑血管病会议制订的诊断标准[1]。 患者均住院治疗行包括血、尿、便三大常规、肝肾功能以及胸片、心电图均正常, 多项肿瘤标志物均阴性。 患者签署治疗知情同意书。 治疗方案经医院医学伦理委员会批准。
1.2 方法
患者入院后按《中国脑血管病防治指南》常规治疗, 脑出血患者多在发病14~21 d后复查头颅CT平扫血肿吸收。 脑梗死患者多在发病3~7 d后复查头颅CT平扫中线结构无移位。 所有患者在生命体征平稳、意识清楚的情况下才行术前准备。
自体骨髓MSCs通过蛛网膜下腔输注进行移植治疗。 具体操作如下:1骨髓MSCs动员:采用粒细胞集落刺激因子进行动员, 剂量为5 mg/ (kg·d) , 连续2 d。2采集自体骨髓液:第3 天上午在手术层流室采集骨髓液, 取俯卧位, 盐酸利多卡因局麻, 依次在患者左右侧髂后上棘穿刺各抽取骨髓液约50 m L。 3骨髓MSCs分离、 鉴定和计数: 在干细胞实验室去除红细胞, 密度梯度离心法结合贴壁法获取骨髓单个核细胞。 流式细胞检测CD44+、CD90+, 制成约5 m L干细胞悬液备用, 细胞数为 (1.0~10.0) ×107, 每例患者均进行细菌、真菌、支原体和内毒素检测。 4自体骨髓MSCs移植:第3 天下午在手术层流室患者取侧卧位, 取L3、L4椎间隙为穿刺点, 9 号腰椎穿刺针进行穿刺, 穿刺成功后引流脑脊液约7 m L;注射器抽取干细胞悬液, 缓慢地推注至蛛网膜下腔; 最后抽取0.9%氯化钠注射液约2 m L, 使穿刺针道中的残留细胞完全进入蛛网膜下腔。 5患者去枕平卧位6 h, 观测生命体征。 1周后按上述步骤再次行自体骨髓MSCs移植。 共移植治疗2 次。
禁忌证: 1高度过敏体质或者有严重过敏史者。2并发重要脏器 (心、肺、肝、肾等) 功能衰竭。 3出凝血机制障碍, 如血友病等。4合并恶性肿瘤。5血清学检查阳性者, 如艾滋病、梅毒等传染性疾病。6局部或全身重症感染。
1.3 观察指标
患者在移植前和移植1、6、12 个月后进行疗效评定。 神经功能缺损程度评定采用美国国立卫生研究院脑卒中量表 (NIHSS) , 共11 小项, 总分42 分, 得分越高, 神经功能缺损越严重。 肢体运动功能采用简化Fugl-Meyer运动功能评分法 (FMA) , 上肢33 项, 下肢17 项, 每项0~2 分, 满分100 分, 得分越高, 提示肢体运动功能越好。 日常生活活动能力评定采用改良Barthel指数 (MBI) , 包括大便、排尿、修饰、用厕、吃饭移动、步行、穿衣、上楼梯和洗澡共10 小项, 总分10分, 分数越高, 提示生活自理能力越强。 同时观察患者术后不良反应和副作用, 移植12 个月后行头颅MR和肿瘤标志物检测。
1.4 统计学方法
采用SPSS 13.0 软件进行统计处理, 计量资料以均数±标准差 (±s) 表示, 组间比较采用t检验, 两两比较采用LSD-t检验。以P < 0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 随访结果
骨髓干细胞移植后, 49 例患者均完成12 个月随访, 中途无脱落。
2.2 骨髓干细胞移植前后患者神经功能评分的比较
与治疗前比较, 患者移植后1、6、12个月NIHS评分显著降低、FMA评分和MBI显著升高, 差异均有统计学意义 (P < 0.05 或P < 0.01) , 见表1。
注:与治疗前比较, aP < 0.05, bP < 0.01;NIHSS:美国国立卫生研究院脑卒中量表;FMA:Fugl-Meyer运动功能评分法;MBI:改良Barthel指数
2.3 不良反应及副作用
10 例患者低热 (体温37.5~38.5℃) 和6 例低颅压性头痛, 予以解热镇痛药和卧床输液处理后症状完全消失。 所有患者移植治疗12 个月后复查头颅MRI和肿瘤标志物均未见异常。
3 讨论
随着人口老龄化, 人们生活条件和生活方式的改变, 脑血管病成为影响中老年人健康的主要疾病。 脑卒中患者由于急性脑循环障碍, 脑组织缺血、缺氧、坏死造成神经功能缺损如肢体瘫痪、语言障碍、智能障碍等, 这些严重影响患者的日常生活, 给社会和家庭带来了极大的负担。 近年来研究发现, 骨髓MSCs具有强大的自我更新能力和多向分化潜能, 在适宜的条件可以分化为神经元和星形胶质细胞, 并能诱导神经干细胞分化为神经元。 干细胞治疗为脑卒中、脑损伤等疾病提供了新的治疗手段。李秀云等[5]将人脐血MSCs通过鞘内注射法治疗脑出血, 移植3 个月后欧洲卒中量表评分标准及独立功能评分标准评分均较移植前明显提高。 胡晴等[6]采用人脐带MSCs鞘内注射联合静脉滴注治疗脑梗死后发现运动功能障碍疗效明显, 同时具有良好的安全性。
脑出血和脑梗死后干细胞移植的最佳时间窗仍不确定, 患者急性期因兴奋性毒性神经递质、氧自由基、炎性介质释放等, 可能影响移植细胞的存活。 而强调延长移植的等待时间, 慢性期瘢痕形成对移植细胞生长、整合的阻碍也不利于患者的治疗。 脑梗死早期研究多在发病后7 d给予干细胞移植, 近期研究主要是在缺血后3~24 h进行移植。 移植的干细胞在脑出血模型的各阶段中均能存活[7,8], 是否存在最佳的移植时间还值得探讨。 本研究在患者入院后按《中国脑血管病防治指南》行常规治疗, 脑出血患者在病情稳定, 且多在发病14~21 d后复查头颅CT如血肿吸收则准备进行移植治疗, 而脑梗死患者病情平稳, 多在发病3~7 d后复查头颅CT平扫如脑中线结构无移位、 无梗死后出血则准备进行移植治疗。
目前认为MSCs移植治疗脑卒中的可能作用机制可能有:1细胞替代作用, 重建神经环路[9];2分泌细胞活性因子, 包括碱性成纤维生长因子、脑源性神经营养因子、 神经生长因子和血管内皮生长因子等, 神经保护、营养支持作用[10,11];3激活内源性神经干细胞的增殖分化[12];4抑制神经细胞凋亡[13];5促进轴突和髓鞘的再生[14];6MSCs在受损部位可分化成血管内皮细胞、细胞外基质而新生血管, 重建血循环[15,16]。
骨髓MSCs作为干细胞的一种存在于骨髓中, 易获取。 自体骨髓MSCs可以避免异体移植带来的免疫排斥反应, 同时可以避免胚胎干细胞所带来的伦理问题。 移植途径有动脉、静脉、立体定向和蛛网膜下腔等。 动脉/静脉移植途径需要大量的干细胞, 易于造成血栓栓塞, 且静脉注射时相当部分的移植细胞会被脾脏和肺摄取。 立体定向途径有侵袭性, 可能损伤局部正常脑组织, 有硬膜下血肿、癫痫等并发症风险。 本研究采用鞘内注射经蛛网膜下腔移植骨髓MSC避开了血-脑脊液屏障的阻碍, 且创伤小, 患者易于接受。 本研究中49 例患者均进入结果分析, 随访12 个月, 中途无脱落。 结果发现患者移植后1、6、12 个月后NIHSS评分与治疗前比较显著降低, FMA评分和MBI与治疗前比较显著提高, 差异均有统计学意义 (P< 0.05 或P < 0.01) 。 说明自体骨髓MSC移植治疗可以一定程度地降低患者神经功能缺损, 提高患者运动功能和日常生活能力, 改善急性脑卒中患者的临床症状, 提高生活质量, 减轻家庭和社会负担。 本研究中10 例患者在移植后出现发热, 体温最高38.5℃, 给予解热镇痛药对症处理后症状缓解, 发生率20.4%。 考虑由于干细胞来自体骨髓, 可能与单核细胞、粒细胞释放内生性致热源有关。 6 例患者起床后头痛, 卧床时症状缓解, 发生率12.2%。 考虑低颅压性头痛, 与腰穿有关。 所有患者在移植12 个月后复查头颅MRI和肿瘤标志物结果均未见异常。 患者住院手术后不良反应轻微, 之后的长期随访未见肿瘤发生。 因此, 认为自体骨髓MSCs移植治疗急性脑卒中是比较安全的。
间质干细胞 篇5
1 病例介绍
患者,21岁,孕1产0,2008年10月2日,主因孕34周,发现盆腔肿物4周,间断腹痛2周,加重3 h入院。患者于孕30周时,行产前B超检查发现子宫后方盆腔内有一实性肿物约7 cm×10 cm,未治疗。于入院前2周时常腹痛、下坠、大便不畅,经左侧卧位休息后好转,未治疗。3 h前腹痛加重,自感疼痛难忍,经卧床休息不缓解急诊入院。既往7年前患左卵巢支持-间质细胞瘤手术切除,自此声音低粗,未恢复正常女性音。查体:T 36.6℃,P 100次/min,BP 100/60 mm Hg,发育正常,痛苦表情,贫血貌。足月妊娠腹形,有压痛,宫高30 cm,腹围100 cm,胎位LOA,胎心140次/min,无宫缩。B超检查示:宫内孕单活胎,胎儿及附属物未见异常,子宫后方盆腹腔内有11 cm×14 cm实性肿物,腹腔内有液性暗区。Hb 72 g/L。初步诊断:(1)宫内孕34周第一胎;(2)妊娠合并卵巢肿瘤伴破裂出血;(3)失血性贫血。急行子宫下段剖宫产加卵巢肿物切除术。术中吸出游离血约500 ml,娩出一女性活婴,约重2000 g,左卵巢实性肿物约11 cm×15 cm,下端破裂出血并与盆腔壁粘连,向家属交待病情,建议切除肿瘤和子宫,家属要求保留子宫,行肿瘤切除术。术后病理报告为卵巢支持-间质细胞瘤。术中输血400 ml,术后5 d拆线,切口I期愈合,痊愈出院。半年后随访,盆腔内未见占位,乳水足,女婴发育正常。
2 讨论
支持-间质细胞瘤属卵巢男性化肿瘤,妊娠合并此肿瘤罕见[1]。本例单侧因此肿瘤切除后能够妊娠并又伴发此肿瘤更少见。妊娠合并此肿瘤所生婴儿多存在女性假两性畸形[1]。本例所生女婴外生殖器未见异常。
关键词：妊娠,卵巢,支持-间质细胞瘤
参考文献
间质干细胞 篇6
关键词：骨髓间质干细胞,细胞移植,肺纤维化
来源于中胚层的BMSCs, 具有强大的增殖能力和多项分化潜能, 能够向损伤组织迁移, 并参与相应组织的修复[1,2]。在2001年Kotton等研究提出成体组织来源的间质干细胞可以归巢至肺脏[3]。由此, 我们在其研究基础上从SD大鼠骨髓中分离、培养、纯化BMSCs, DAPI标记后移植到博来霉素所致肺纤维化模型大鼠体内, 以观察外源性BMSCs在损伤肺组织的定植情况及其治疗作用。
1 材料与方法
1.1 材料
BLMA5 (哈尔滨博莱制药有限公司) 、磷酸盐缓冲液 (PBS, Sigma公司) 、L-DMEM (Gibco公司) 、新生胎牛血清 (杭州四季青公司) 、0.25%胰蛋白酶 (Sigma公司) 、Percoll (Sigma公司) 、DAPI (Roche公司) 、HYP (南京建成生物工程研究所) 、雌性SD大鼠60只 (哈尔滨医科大学第二附属医院动物实验中心) 。
1.2 BMSCs分离、培养、标记
取6周SD雄性小鼠, 无菌条件下分离胫骨股骨获取骨髓, 用等体积Percolls (密度1.073g/ml) 分离液分离。沉淀的细胞加入L-DMEM培养液中, 用细胞计数板计数以5×105/ml接种于培养瓶中, 放在37℃的5%CO2培养箱中孵育。48后首次更换培养基, 以后每2~3d换液一次, 并用倒置显微镜逐日观察, 待细胞长满瓶底的80%或接近融合, 进行消化按1:3传代, 反复传代纯化扩增。待3代细胞90%融合时, 消化收集细胞加入无菌的DAPI (最终浓度50ug/ml) 中, 37℃、5%CO2避光孵育24h, 用PBS液反复冲洗去除未结合DAPI, 离心收集细胞, 用不含血清DMEM液配成1.0×106/ml的细胞悬液。
1.3 实验动物及分组
雌性SD大鼠60只 (体重180-200g) 随机分为4组每组15只, A组:气管内注入0.3ml生理盐水;B组:气管内一次性注入等体积BLMA55mg/kg;C组:在气管内注入BLMA5后24h尾静脉输入标记细胞悬液1ml;D组:气管内注入生理盐水后24h尾静脉输入标记细胞悬液1ml。
1.4 标本收集
分别于细胞植入7、14、28d后处死动物, 每组每个时间点处死5只。取左肺组织经福尔马林固定后取材, 制备石蜡切片, 行HE、Masson染色, 按文献[4]方法确定肺泡炎、肺纤维化程度;取右肺下叶肺组织约1g, 按HYP试剂盒的操作步骤进行HYP含量测定;取右下肺组织用锡纸包好置于液氮中速冻, 常规制备冰冻切片, 在高倍镜 (×400) 下每只大鼠随机选取5个非连续的肺片计数DAPI阳性细胞。
1.5 统计学处理
实验数据用x±s表示, 用SPSS10.0统计软件分析, 组间比较用方差分析, q检验, P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 BMSCs形态学观察
原代BMSCs, 3~4h开始贴壁, 24h有少量细胞贴壁, 48h贴壁细胞明显增多, 并分裂增殖。72h局部有细胞集落, 细胞呈纺锤状、多角形、长梭形, 胞浆有突触。14d左右80~90%融合, 细胞呈长梭或多边形, 平行状排列或旋涡状生长。细胞可重叠生长, 无突触抑制现象。随着传代次数增加, 细胞形态均匀一致, 为成纤维细胞样, 长梭形, 细胞变得宽大扁平, 胞体较原代增大。
2.2 组织病理学观察
B组第7d炎症明显, 肺泡腔、肺间隔内炎症细胞增多, 局部有淋巴滤泡形成, 成纤维细胞开始增多。第14d肺泡炎较前有所减轻, 纤维组织增多, 肺间隔开始增宽。第28d大部分肺泡壁僵直, 部分萎陷消失, 代之为胶原纤维合成纤维细胞, 肺泡间隔极宽, 提示肺纤维化模型制备成功。C组的大鼠肺组织病理变化较模型组减轻, 肺泡炎、肺纤维化评分降低, 但较A组明显升高。
2.3 BMSCs在大鼠肺组织内的分布
在荧光显微镜下, A组、B组大鼠肺组织内均未发现蓝色荧光标记细胞, D组大鼠肺组织内仅偶见DAPI阳性细胞。而C组大鼠肺组织内第7、14、28d可见肺泡壁、支气管壁少量蓝色荧光标记的细胞, 胞核明亮, 呈圆形或椭圆形, 细胞散在分布, 无明显规律。C组14d时DAPI阳性细胞数明显高于7d, 28d细胞数虽较14d有所增加但无显著差异。
2.4 HYP结果
各时间点与B组比较有显著性差异P<0.01;C组各时间点羟脯氨酸含量明显降低, 7、14、28d羟脯氨酸含量分别为1.7±0.1;1.8±0.2;2.1±0.1;与B组比较有显著性差异P<0.01。
3 讨论
BMSCs因其取材容易、对机体损伤小、有很强的自我复制能力, 且组织相容性好, 人们开始尝试用细胞移植来修复损伤组织。而观察细胞移植的作用首先需要有效的区分移植细胞与宿主细胞, 因此必须对移植细胞进行标记。目前常用的标记方法主要有基因标记法、染色体标记法、磁性标记法、核素标记法及荧光染料标记法等[5]。基因标记法程序繁琐, 实验周期长, 成功率低, 在国内较少展开。染色体标记法主要将雄性供体动物细胞移植到雌性动物体内, 通过Y染色体杂交区别确认移植细胞, 优点在于可终生标记, 但检测方法繁琐无法观察活性细胞。核素标记法只能标记增殖期细胞, 而且标记细胞不能被直接观察。磁性标记法适用于临床研究和大动物的实验研究。而DAPI是标记细胞核的荧光染料, 对活细胞无毒性, 标记率高。一旦被标记只由标记细胞保存, 不会有传递, 而且费用低廉可直接观察, 因此被广泛应用。本实验采用贴壁培养法分离、纯化BMSCs, 收集3~5代细胞对其行DAPI标记, 静脉移植BMSCs, 按设定时间点收及其治疗作用。在C组组织切片中各时间点均可观察到DAPI阳性细胞, 移植2周较1周时DAPI阳性细胞明显增加 (P<0.05) , 而4周较2周虽有增加但无明显差异 (P>0.05) , 由此我们推测4周时肺脏对BMSCs的趋化作用较前减低, 从而使BMSCs向肺组织迁移减少;另一方面, 随着DAPI标记细胞的细胞分裂, DAPI被子代细胞平分, 而至细胞内DAPI含量过低无法被测出;再者, 尽管BMSCs对缺血缺氧环境有很强的耐受能力, 但仍可能有少部分不能适应局部的环境而死亡致阳性细胞减少。而在D组的正常肺组织中却偶见标记细胞。这一结果表明BMSCs可定位于受损肺组织, 并且在炎症的急性期对BMSCs趋化作用强。
参考文献
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血细胞形态学室间质评分析 篇7
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取一位因跌倒后昏迷的65岁女性患者的血样本, 制成1010M1血片。血细胞形态学的室间调查样本按照WTO室间质评标准取样。DM96血细胞形态的分析系统和条形码生成器采用日本希森美康所生产的。
1.2 方法
连续扫描组:将血细胞形态的分析系统DM96进行开机预热, 时间为15min。条形码生成器产生条形码。把条形码黏贴于玻片血膜的头端, 并记录条形码号, 其应对照WHO调查的血片号。根据要求设置扫描程序和扫描区域, 或根据细胞总数选择扫描细胞数为100~150个, 也可根据距片尾区域多少毫米, 实施城垛式的连续扫描及摄像。设置完成后进行扫描摄像, 仪器扫描与软件配带的细胞库进行对比, 得出初步细胞分类的结果。导出摄像图片, 处理后制成文件并刻录光盘。对人工镜检后白细胞的分类结果和WHO预期的结果比较分析[2]。显微镜摄影:制作清晰的标本, 适度的组织切片, 注意染色片不要有多余染料, 制成载玻片。选择用高性能物镜及聚光器。用Kohler照明法, 选取合适拍摄胶片进行拍片。拍摄时应注意准确聚焦及合理曝光的时间。然后冲印出来[3]。
2 结果
通过试验结果对比, 连续扫描的摄像细胞照片与较显微镜摄像的细胞照片更利于细胞的辨认及识别。在相同大小尺寸的情况下, 其细胞核染色质的特征比较明确, 例如呈块状聚集的中性粒细胞核, 连续扫描的摄像照片显示核仁更加清晰, 胞质颗粒的特征更为明显, 差异性明显P<0.05, 有统计学意义。
用DM96血细胞形态的分析系统对WHO的1010M1血片的体尾交界实施连续扫描摄影, 将其原始结果及人工复核结果和显微镜分类的结果进行比较分析, 见附表。
3 讨论
细胞形态学的室间质评指能力验证计划的提供者对参与者细胞形态的识别能力进行验证。组织者能够利用室间质评对参与者细胞形态的识别总体水平或某一具体参与人员的水平进行详细了解, 以便不断改善室间质评计划及继续教育的计划。参与者则可通过室间质评了解自己在所有参与者中能力情况, 并且可以发现自己在哪方面存在不足, 有针对性的参与继续教育计划, 并且持续改进。
现阶段, 我国各省市组织起来的细胞形态学的室间质评, 大部分采取15~20幅单一细胞照片进行刻录光盘, 然后发放给参与者, 参与者实行单一细胞的识别方法。英国形态学处于领先地位, 仍采用传统玻片的阅片法, 而美国在此基础上增加了几幅单一细胞形态的照片进行识别。我国采用油镜下, 瑞吉染色血片, 20张显微镜摄影单一细胞的照片刻录光盘的方法发给参与者。此种方法能够克服人工制片染色及阅片区域的不同而产生的差异, 为参与者提供统一的细胞照片, 并且照片能够永久保存, 有利于传输。此法还具备改变阅片方式的优点, 使显微镜阅片变成为屏幕阅片, 很大程度上使检验者劳动的强度得到减轻。同时也便于大家一起阅片, 互相学习和讨论[4]。但是照片和照片之间的联系不够, 和细胞形态学的实际检验工作相距甚远, 无法使用量化指标对参与者进行考核。欧美做好的好处在于细胞形态的室间质评和细胞形态的实际检验工作相一致, 并且能够采取量化指标对参与者进行考核。其缺点在于人工制片和染色不能确保全部的血片都能够完全一致, 即使是全部的血片都来自同一位制片、染色训练有素的专家之手。近些年, 医学技术水平的不断进步发展, 使血细胞自动、分析、推片以及染色形成一条流水线, 逐步走向市场。血细胞的制片和染色的质量得到了保证。为了使血细胞的制片和染色过程中存在差异得到减少, 一些先进技术的国家均采取自动制片, 并染色的血片。但是, 尽管参与者都严格按照规范要求, 再用血片的体尾交界处进行城垛式阅片, 但是不同的阅片者对同一个血片的阅片区域及阅片细胞的数量多少都会产生不同的结果差异。
为了兼顾光盘法和玻片法的优点, 使提供给参与者的检查内容相一致, 且与实际工作一致, 同时便于保存及传输, 我们选取了连续扫描摄像法。通过附表结果显示, 连续扫描后经过软件分析白细胞的分类结果和WHO预期结果存在较大差别, 但经过人工复核后分类结果和人工镜检与WHO预期结果较为一致。其扫描的细胞数适用于白细胞的分类计数, 在没有软件分析的情况下, 连续扫描摄像的细胞照片能够代替血片的细胞识别及白细胞分类的计数。若被应用在细胞形态学的室间质评中, 与玻片法比较, 可提供较为一致的质评, 且更能体现公平和公正原则[5]。
总之, 血片采用连续扫描摄像的方法与显微镜摄像法比较, 更加适用在细胞识别和白细胞的分类计数上面。同时, 还能推动白细胞的分类计数标准化的进程。
参考文献
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间质干细胞 篇8
1 资料与方法
1.1 一般资料
8例中分化SLCT均为大连市妇幼保健院2005年1月~2013年5月住院手术患者, 并经病理证实。患者年龄18~60岁, 平均年龄35.5岁。多以“月经不规律、下腹不适”就诊, 超声检查提示盆腔包块住院手术治疗。8例患者中, 5例患者平日月经量少或闭经、体毛较重、声音变粗等去女性化及男性化症状, 术前血清睾酮检查睾酮为7.3~15.5 nmol/L (参考值范围0~3.0 nmol/L) , 其中1例表现为肥胖、多毛、不孕, 2年前诊断为“多囊卵巢综合征”。1例60岁患者为甲状腺癌术后10年, 因“绝经后出血”就诊, 超声提示子宫肌瘤多发伴左卵巢肿物, 血清睾酮正常, 雌二醇是286.0 pg/ml, 其余2例患者无激素分泌异常症状。术前AFP检查均正常。8例患者, 6例行单侧附件切除术、1例行全子宫双附件切除术、1例因病理提示“局灶分化偏低”行分期手术。术后随访1~8年, 均未出现复发转移。
1.2 方法
手术标本均经10%的福尔马林固定, 石蜡包埋, 5μm连续切片, 常规HE染色。AE1/AE3、inhibin、CD99、calretinin、EMA鼠抗人单克隆抗体均购自福州迈新生物技术有限公司, 采用免疫组化SP法, 细胞浆出现清晰的棕黄色颗粒定为阳性染色。
2 结果
2.1 肿物大体特点
8例患者均为单侧卵巢肿物, 5例发生于左侧, 3例发生在右侧。肿物直径3~17 cm, 表面光滑, 与周围组织无粘连。均为囊实性, 以实性为主, 囊内含透明黄色液体, 部分囊壁可见小乳头状突起。实性区切面呈杏黄色或灰黄色, 质地略硬, 可见出血坏死。
2.2 镜检
8例肿瘤表现基本一致, 主要由支持细胞和Leydig细胞构成。支持细胞排列呈小片状、细条索状, 部分区域形成典型小管或管状结构。细胞核小、深染, 部分细胞呈典型“葵花子”样, 部分肿瘤细胞核出现类似颗粒细胞的“核沟”, 核分裂象少见 (0~5个/10 HPF) 。Leydig细胞胞浆丰富嗜酸, 灶状分布为主, 其中1例患者呈片状分布在肿瘤周围。肿瘤细胞由纤维性间质分隔, 形成结节状或小叶样结构。1例患者局部区域表现为肉瘤样肿瘤细胞弥漫分布, 核分裂象多见, >10个/10 HPF。
2.3免疫组化
支持细胞AE1/AE3 (+) 、inhibin (+) 、CD99 (+) ;间质细胞calretinin (+) ;二者均不表达EMA (-) 。
2.4病理诊断
卵巢中分化-支持间质细胞瘤, 其中1例局灶分化偏低。
2.5随访结果
8例患者术后随访1~8年无复发转移。
3 讨论
3.1 SLCT临床特征
SLCT患者发病年龄主要在20~30岁, 青春期或绝经后偶发, 就诊时常伴有雄激素升高, 出现男性化症状, 如多毛、声音变粗、喉结增大、阴蒂肥大等, 或出现去女性化症状, 如月经稀少或闭经、乳房萎缩、皮下脂肪减少等, 也有患者表现为雌激素增多的症状, 如性早熟、月经增多或绝经后出血。文献报道SLCT患者伴有上述症状占总发病人数的比例并不一致, 30%~75%不等, 可能与肿瘤少见有关[1]。本院收治的8例中分化SLCT患者, 中位年龄35.5岁, 略高于好发年龄。5例血清睾酮升高, 并出现相应症状, 1例60岁绝经后患者表现为雌激素升高, 术后1周复查雌激素恢复正常, 提示该患者雌激素水平升高可能与SLCT有关。2例无激素分泌异常及相关症状。因此, 对于年轻患者, 如果出现男性化或去女性化症状并伴有睾酮升高, 应除外支持-间质细胞瘤可能。有作者提出, 少数SLCT患者术前可以出现血AFP升高, 本组8例患者血AFP均在正常范围内, AFP升高可能与肿瘤伴有异源性成分有关。
3.2 中分化SLCT的病理特点及鉴别诊断
SLCT患者肿瘤主要发生在单侧卵巢内, 双侧者不足2%。肿瘤平均直径5~6 cm, 最大直径可达20 cm, 界限清楚, 有包膜。以囊实性及实性为主, 也可以为囊性, 但较少见。囊内主要为透明黄色或血性液体。囊内壁有时可见息肉样突起, 实性区常呈分叶状, 质地硬或呈鱼肉状, 一般呈灰黄色, 出血坏死常常较明显。镜下特点:中分化SLCT瘤细胞呈结节状或小叶状分布, 由疏松的纤维性或纤维黏液样间质分隔。瘤细胞排列呈窄而短的条索状、空心小管状或轮廓不清的片块状。支持细胞典型的呈高柱状、葵花子样, 不成熟的呈柱状、圆形、多边形, 细胞胞质少或淡染, 核小, 圆形或有棱角, 部分细胞可出现类颗粒细胞瘤的“核沟”。细胞核异型性不大, 核分裂象少见 (<5个/10 HPF) 。Leydig细胞呈片状或簇分布或单个散在, 典型者细胞类圆形, 胞质有嗜伊红颗粒, 核小而圆。支持细胞和Leydig均可见胞质内脂质空泡, 偶尔也见奇异核[2]。上述特点不同于高分化SLCT一致的实性或空心小管结构, 也不同于低分化的弥漫片状分布的肉瘤样间质及大量核分裂象 (最高20个/10 HPF) 。文献显示, 中低分化SLCT中20%可含有异源性成分, 以胃肠黏液性上皮最为常见, 偶有肝细胞样分化、软骨和骨骼肌等成分。免疫表型方面, 中分化SLCT同其他分化一样, 可以表达inhibin、CD99、calretinin、AE1/AE3, 还可以表达低分子CK、CD10、Vim、SMA等, 极少表达EMA[3]。
中分化SLCT由于管状结构不典型、肿瘤细胞条索状排列及细胞出现类似颗粒细胞“核沟”, 需与成人型颗粒细胞瘤鉴别, 虽然后者偶见类似支持细胞瘤样的小实性管状结构, 但主要是卵泡膜细胞瘤样间质而不是肉瘤样间质, 仔细查找含有嗜酸性胞浆的Leydig细胞支持前者诊断。由于支持细胞与粒层细胞的免疫表达谱基本一致, 免疫组化对二者鉴别帮助不大。当Leydig细胞和卵泡膜细胞均表现为胞浆丰富脂质样细胞, 二者鉴别较为困难, 需结合发病年龄、临床特征及特殊染色。由于二者同属于卵巢性索-间质来源肿瘤, 治疗方式和预后非常类似, 有作者建议将鉴别困难者直接诊断为“卵巢性索-间质肿瘤”, 而无需细分。此外, 中分化支持-间质细胞瘤含有异源性成分, 应与卵巢类癌、畸胎瘤、内胚窦瘤等鉴别, 结合镜检特点及免疫组化并不困难。
3.3 中分化SLCT的治疗及预后
中分化SLCT的治疗及预后判断存在争议[4]。文献报道, 约10%的中分化SLCT临床经过恶性、网状结构的出现及伴间叶性异源性成分 (如骨骼肌、软骨或神经母细胞瘤成分) 的支持-间质细胞瘤预后差。中分化SLCT伴有黏液性上皮最为常见, 含胃肠黏液上皮或类癌成分的出现并不影响患者预后[5]。陈非[6]报道了1例异源成分为横纹肌肉瘤的患者, 术后6个月复发死亡。陈乐真[7]提出, SLCT最可靠的恶性指标是卵巢外扩散或剖腹探查时即已发生转移, 无明确的指标可作为判断预后的因素。SLCT治疗主要以手术为主, 患者如果要保留生育功能, 建议进行单侧附件切除术, 没有可靠证据支持此期患者需要辅助治疗, 但建议进行严密的随访, 血清睾酮的检测可作为随诊的手段之一。尽管作者提出分化不良者应辅以化疗或放疗, 但由于此类肿瘤罕见, 晚期或复发患者更为少见, 有关化疗及放疗的经验很少[8]。本院收治的8例患者, 病变均局限于卵巢, 其中1例因肿瘤局灶分化偏低家属要求行分期手术、1例合并子宫多发性平滑肌瘤行全子宫双附件切除术, 其余均因患者较为年轻或有生育要求行单侧附件切除术, 术后均未行辅助放化疗, 密切随访1~8年, 均无复发转移。
摘要：目的 探讨中分化卵巢支持-间质细胞瘤 (SLCT) 的临床病理特点。方法 分析8例中分化支持-间质细胞瘤患者的临床资料及病理特征, 并复习相关文献。结果 8例中分化SLCT患者, 年龄18~60岁, 平均年龄35.5岁。5例血清睾酮升高 (7.3~15.5 nmol/L) , 并出现相应症状, 1例60岁绝经后患者表现为雌激素升高 (286.0 pg/ml) , 2例无激素分泌异常, 血甲胎蛋白 (AFP) 均在正常范围内。肿物大体均为单侧, 囊实性, 质地略硬, 切面灰黄色, 见出血坏死。镜下显示肿瘤细胞由不同分化程度的支持细胞及Leydig细胞构成, 呈结节状或小片分布, 见少许小管样结构, 核分裂象少见。免疫组化AE1/AE3、inhibin、CD99、calretinin均不同程度阳性表达, EMA (-) 。8例患者行手术治疗, 术后随访1~8年无复发转移。结论 中分化SLCT较为罕见, 确诊需结合临床、组织学特征以及免疫表型, 主要注意与颗粒细胞瘤鉴别, 治疗以手术为主, 无成熟的化疗方案。
关键词：卵巢支持-间质细胞瘤,中分化,临床病理,免疫表型,预后
参考文献
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