奶牛精液冷冻技术

奶牛精液冷冻技术（通用6篇）

奶牛精液冷冻技术 篇1

奶牛的人工授精技术早在20世纪50年代左右就已经在畜牧业发达的国家普遍推广使用。我国在20世纪70年代也逐渐普及推广,尤其是精液冷冻技术的成功研制,使得精液能够长期保存,对促进我国奶牛业的发展起了很大的作用。

1 奶牛冷冻精液的意义

奶牛冷冻精液主要用于品种改良,可以充分发挥种公牛的种用价值,对其利用率大大提高。采用冷冻技术长期保存精液,每年1头良种公牛就可以和1万头以上的母牛配种;可以加快品种改良进度,短时间内获得杂交优势种群。冷冻精液不受时间、地域的限制,可以大范围地利用良种种公牛,还可以减少种公牛的饲养数量,节省饲养成本。

2 精液冷冻保存的原理

精液的冷冻就是利用液氮(-196℃)、干冰(-79℃)为冷源,将精液经过特殊处理,保存在超低温下,此时精子的生理代谢活动受到抑制,一旦升温又可以恢复精子的活力,这样就可以达到精液长期保存利用的目的。

3 精液冷冻保护剂

利用精液冷冻保护剂是为减轻精液在冻融过程中对精子的损伤,提高精子的存活力和活动力。目前,最常用的冷冻精液保护剂就是甘油,但甘油不仅有保护作用,还会对精子造成一定的损伤,开发新型的保护剂一直是重要的研究课题。冷冻稀释液是精子的载体,能为精子提供代谢物质,调节精子的受精能力,稀释液的组成成分对精子有很大的影响。姜方等[1]通过试验证明海藻糖和牛血清白蛋白不管是单独使用还是配伍使用都会对冻后的精子品质有显著影响。还有研究证明,牛冷冻精液稀释液中添加维生素可以有效减少精液从冷冻到解冻过程中产生的氧化应激,提高冷冻后精液的品质。如添加维生素B12可以显著提高精子活力、顶体完整率和质膜完整率。稀释液中添加某些氨基酸(如半胱氨酸和谷胱甘肽)可以降低在冷冻过程对精子DNA的损害。

4 冷冻保存技术

1)采精及精液品质检查。精液冷冻效果和精液的品质有着直接的关系,因此一定要做好采精的准备工作和规范采精操作程序,来获得高质量的精液。精液采集以后要认真做好精液的品质鉴定,对不合格的产品要废弃。奶牛精液的精子活率要不低于0.7,并保存在30℃的水浴中。

2)精液稀释。选择合适的稀释液,按照科学的稀释方法,规范操作程序来对精液进行稀释。稀释以后取样,在38~40℃的条件下进行镜检,稀释后的精液活率要不低于原精液的活率。

3)降温和平衡。降温就是在精液稀释以后,用12~16层的纱布包裹,放到0~5℃的冰箱内经过1~2 h的时间将精液缓慢降温的过程。平衡就是将降温后的精液放在冰壶内,放入0~5℃的冰箱内平衡2~4 h,以便精液的保护剂充分进入精子的内部,发挥保护精子质量的作用。在操作过程中要注意降温、平衡过程中要避光操作,已经降温、平衡后的精液温度不能再回升了。

4)精液的分装。目前常用的分装设备为细管精液分装一体机,这是一套灌装、封口、喷墨印字的一条龙式作业的一体化设备,这种设备的自动化程度高,可以确保精液不被外界污染。如果单独使用细管分装机操作,要在分装前做好细管上的标记,如种公牛的详细信息,信息要准确、全面。

5)冷冻。

(1)冷冻温度。冷冻温度是影响奶牛精液品质的关键因素,精液冷冻刚开始的温度一般为-120~-140℃,尽量在8 min内达到和维持这个温度区域后,再倒入液氮继续降温。有时冷冻精液的数量不同,初冻温度可以稍有回升,但是这种回升很危险,一定要注意补充冷源,确保冷源充足[2]。

在实际生产中,由于每头种公牛的个体、年龄、品种的不同,采精季节的不同以及稀释液的成分、甘油的浓度、冷冻剂型的不同,冷冻精液的时候,降温的速度和时间也会有差异。

(2)冷冻方法。目前我国对奶牛精液的冷冻方法根据设备的不同可以分为2种:精液自动冷冻仪法和简易细管精液冷冻箱法。

精液自动冷冻仪法是一种科技含量比较高的方法,冷冻仪是由计算机控制的全自动冷冻容器,人工做好各种准备工作,设定好参数,启动程序,由计算机控制来完成精液的冷冻过程。

简易细管精液冷冻箱法是生产中常用的方法,投资少,操作简单。首先要有一个隔热性能较好的、深度在50 cm以上的冷冻箱,使用前先加入液氮制冷,根据冷冻细管精液量的多少确定液氮的使用量。然后把冷冻细管精液放在冷冻架上,迅速放入冷冻箱中进行冷冻,整个冷冻过程一般在8 min以内。

6)奶牛冷冻精液保存。奶牛的冷冻精液保存在液氮罐中,液氮罐要放在干燥、通风的室内,底部要垫上木板或者毛毡,以防潮湿。储存精液后,要熟知罐的空重和液氮的多少,及时测量,及时补充,尽量减少开罐的次数,开罐后及时盖好。取放精液的时候,速度要快,不要把盛冻精的提桶提到罐口之外,只能到颈基部,开罐时间控制在5 s以内为好。

参考文献

[1]姜方,方世珍.冷冻精液的保存及应用[J].黄牛杂志,2002,28(5):66.

[2]刘海良,金穗华,张晓霞.牛精液冷冻技术与质量控制[J].畜牧与兽医,2012,44(4):88-91.

牛精液冷冻技术 篇2

为了在保存过程中保持精子活力, 在存取精液时应注意以下事项:

1. 编号存放。

冷冻精液的包装上须明确标明公牛品种、牛号、生产日期、精子活率及数量, 再按照公牛品种及牛号将冷冻精液装入液氮罐提筒内, 浸入固定的液氮罐内贮存。

2. 浸入液氮。

定期添加液氮, 使罐内贮存的颗粒冷冻精液或细管精液完全浸在液氮里, 且液氮体积不能少于罐体容积的2/3。用绳子拴系的精液包装物, 切勿因绳索缠结, 而使精液未能浸入液氮内造成温度升高。

3. 取用迅速。

在液氮中提取冷冻精液时, 不得提出液氮罐口外, 而应置于罐颈之下。要用电简照看清楚, 用镊子夹取精液, 做到目标准确, 动作利索。精液每次脱离液氮时间不得超过5秒钟。

二、液氮罐的使用

1. 保证安全。

不得用液氮罐盛装液氧、液态空气, 以免对罐体造成氧化腐蚀。新购或长期未用的液氮罐, 必须仔细检查, 确定外部无破损、无异常, 内部干燥、无异物, 颈管和盖塞完全, 贮精提筒完好。盛装液氮1天后观察液氮的损耗率, 各项指标合格后方可使用。

2. 注入液氮。

大液氮贮槽内的压力一般为2万～3万帕, 利用自身压力即可将液氮注入罐内。也可将液氮运输罐的液氮经漏斗注入贮存罐内, 为了防止液氮飞溅, 可在漏斗内衬一块纱布。

3. 贮存精液。

各种剂型的精液均须迅速放入经预冷的底布座袋贮丌, 或精手小提柄瓶筒置内内于浸, 丌罐入浸口液入的氮罐槽内, 沟纱液内布氮。袋面颗或以粒小下冷瓶, 将冻系提精一筒液标底可签部装固套入定入纱在罐口外。

4. 取用精液。

为了缩短开盖时间, 应事先做好准备工作。贮精提筒提至颈管基部, 在5秒钟内完成精液的取用操作, 并注意将精液容器再次浸入液氮内。

5. 补充液氮。

当液氮消耗1/2时, 即应补充液氮。罐内液氮的剩余量可用称重法来估算, 也可用细木条插至罐底, 经10秒钟取出, 测量结霜的长度来估算液氮的剩余量。

6. 液氮罐的保养。

液氮罐放置在凉爽、通风且干燥的室内, 严防受碰撞。注意保护盖塞和罐的颈管部, 此部分质地脆弱易于损坏。罐体不可横倒放置, 每年应清洗1次罐内杂质。空罐放置2天后, 用40～50℃中性洗涤剂擦洗, 再用清水冲洗多遍, 使之自然干燥。

三、冷冻精液的运输

由冷冻精液站提供的冷冻精液必须经过精子活率检查, 查验公畜品种、畜号及数量, 与标签一致、无误后方可运输。盛装精液的液氮罐必须确保其保温性能, 液氮罐应罩有保护袋或装入木箱内, 牢固稳妥, 严禁撞击和翻倒。另外, 运输途中要减少震动, 超过期限要注意补充冷源。当精液运达输精站时要办理好交接手续。

四、冷冻精液的解冻

由于剂型不同, 冷冻精液的解冻方法也有差别。颗粒冷冻精液解冻的稀释液要另配, 细管冷冻精液不需要解冻稀释液。

1. 颗粒精液的解冻。

先要配制解冻稀释液, 一般常用的是2.9%柠檬酸溶液、维生素B12 (0.5毫克/毫升) 溶液、葡柠液 (葡萄糖3%、二水柠檬酸钠1.4%) , 解冻液可装于玻璃安瓿中, 经灭菌后长期备用。

解冻时, 先取1～1.5毫升解冻液放入小试管内, 浸入40℃热水中经2～3分钟后投入1粒精液颗粒。待溶化1/3～1/2时, 即取出精液试管, 在常温下轻轻摇动至完全解冻后, 检查评定精子活率, 然后进行输精。

2. 细管精液的解冻。

由液氮罐内迅速取出一支细管冷冻精液, 立即投入40℃的热水中, 待精液基本溶化时, 用灭菌小剪剪去细管的封口端, 装入细管输精器中。检查细管精液品质, 可按批抽样评定, 不需每支精液液均均作作检检查查, 否则将会减少每头份精液的输精量及输入入精精子数。

3.注意事项。

猪精液冷冻技术研究进展 篇3

猪精液冷冻技术涉及多个步骤, 主要包括: (1) 公猪精液的采集; (2) 精液稀释液的配制; (3) 精液预处理; (4) 精液冷冻; (5) 精液保存; (6) 冻精解冻。其核心步骤是猪精液的冷冻、保存及冻精解冻。

1 精液的冷冻

1.1 冷却源

猪精液冷冻的冷却源主要有干冰 (-79℃) 、液氮 (-196℃) 、液氦 (-269℃) 。目前主要以干冰与液氮为主。研究表明, 使用干冰作为冷源制作的冻精在解冻后的精子活力略高于使用液氮作为冷源制作的冻精。但由于干冰造价高于液氮且不易保存, 因此实际生产中仍以液氮为主要冷却源。

使用液氮作为冷源制作冻精的方法, 目前主要有2种:细管冷冻法, 液氮颗粒冷冻法。由于颗粒冷冻精液较难进行不同头份 (来源) 的区别, 且容易造成交叉污染;而细管冷冻法的优点是不像颗粒冻精一样容易受污染, 且容积小、冷冻快, 受胎率也较高, 所以细管冷冻法在实际生产中的应用较多。目前, 研究者在细管冷冻法的基础上通过不断优化液氮面平衡高度与冻精管直径的大小来提高冻精的质量。液氮面平衡高度为5 cm时, 最适合使用0.25 m L细管;5 m L大管在3 cm平衡高度时使用效果最好。

1.2 精液稀释

猪精液稀释液为猪精液提供了必要的生存环境。研究者在常规的稀释液中添加Equex.STM (一种合成乳化清洁剂, 与卵黄共同作用能有效抑制顶体的异常变化) , 结果显示:添加Equex.STM的稀释液对冻精活率有提高, 与常规稀释液相比差异不显著 (P>0.05) , 但对冻精顶体完整率却有极显著的提高 (P<0.01) , 在一定程度上使冻精质量有所改善。

1.3 冷冻速率

冷冻速率对猪精液的冷冻至关重要, 在冷冻精液制作过程中必须提高冷冻速度, 温度须持续下降, 不能出现回升现象。精液在冷冻过程中应快速通过危险温区 (0~-60℃) , 这样才能提高冻精解冻后的活率。有研究表明, 采用50℃/min, 平衡温度-120℃、10 min, 精液的冷冻效果较好。理想的冷冻速率推荐为:0.5 m L细管采用30℃/min、3%甘油浓度, 或0.25 m L细管采用50℃/min、3%甘油浓度。

2 猪精液的保存

精浆是精液的重要组成部分, 具有调整精液p H值, 为精子提供营养物质, 防氧化等生理作用。精浆在冷冻精液中能乳化类脂、稳定精子膜中的类脂, 减小或抑制由于超低温冷冻保存而造成的类获能性变化, 从而起到保护精子的作用。有研究表明, 添加10%精浆冷冻保护剂对冻融后精子的品质有提高作用。一定浓度的精浆冷冻保护剂对猪精液的冷冻保存有利, 但若浓度过大, 却不利于冷冻精子存活。

3 猪冻精的解冻

解冻是猪精液冷冻保存的关键一步, 让精子在解冻后迅速恢复活力是十分重要的。目前常用的解冻液有Glucose-EDTA解冻液与DPBS-BSA解冻液。由于含糖的Glucose-EDTA解冻液给解冻精子及时补充了能量物质, 相对于不含糖含BSA的DPBS-BSA解冻液来说, 前者更能使精子快速恢复活力。在实际生产中, 推荐使用Glucose-EDTA解冻液用于冻精的解冻。

冷冻到-196℃的冻精在解冻过程中精子要两次经过临界温度区 (-60℃和-15℃) 。为使解冻后精子仍能存活, 只有通过适宜的解冻方法才能确保其复活。适当的解冻温度能使冷冻精子快速越过危险温区, 使玻璃化快速越过结晶态直接变为液态, 降低对精子的伤害。Olesenz等直接把0.25 m L微细管放于70℃水浴中解冻8 s;Woelders等的解冻方法是在39℃水浴中解冻30 s。目前研究证明, 37℃、30 s水浴解冻方法更适合0.25 m L细管猪冻精的解冻;颗粒冻精解冻适用干解法:40~45℃、8~10 s即可使精子的平均活率达到最高。

研究人员今后还需对猪精液冷冻技术的各关键步骤进行优化调节, 例如使用均匀降温的方式生产冻精, 使用高效的冷冻液等方式来提高冻精的使用效果。

参考文献

[1]刘国世, 等.国外猪人工授精技术研究进展[J].猪业科学, 2007, (7) :16-19.

[2]郑筱峰.猪精液超低温冷冻保存的研究[D].南京农业大学硕士学位论文集, 2007.

[3]赵祥杰.猪精液颗粒冷冻技术的研究[J].东北农业大学学报, 2008, (3) :70-75.

[4]张渭斌.咖啡因对猪精液冷冻的影响及冷冻-解冻方法的优化[J].中国畜牧兽医, 2010, (10) :148-152.

[5]Huang S.Y., et al.Hydrostatic pressure pre-treatment affects the protein profile of boar sperm before and after freezing-thawing[J].Anim Reprod Sci., 2009, 112 (1-2) :136-149.

[6]刘彪.精浆对猪精液冷冻效果影响的研究[D].东北农业大学硕士学位论文集, 2012.

[7]周鑫.不同冷冻方法和解冻液对猪精液冷冻效率的影响[J].内蒙古大学学报 (自然科学版) , 2013, (1) :80-86.

[8]Olesen I.Effects of cervical insemination with frozen semen on fertility and litter size of Norwegian sheep[J].Livestock Production Science, 1993, 37 (1-2) :169-184.

[9]Woelders H, et al.Cryopreservation of boar semen:equilibrium freezing in the cryomicroscope and in straws[J].Theriogenology, 2005, 63 (2) :383-395.

[10]潘红梅.不同精液解冻液和解冻速率对猪颗粒冻精品质的影响[J].畜牧与兽医, 2010, (9) :49-52.

山羊冷冻精液人工授精技术要点 篇4

1 选好输精员

选择具有一定文化水平, 最好是专业技能、综合素质较高的人员担任输精员。经县级以上业务主管部门培训合格, 核发证书后才能从业, 不断加强职业道德教育, 并作定期考核。服从业务部门的领导和指导, 爱岗敬业, 有良好的职业道德和服务精神。

2 保证母羊正常的繁殖机能

母羊正常的繁殖机能是母羊进行人工授精配种受胎的前提。加强母羊配种前补饲, 确保母羊繁殖机能正常。生产中, 在发情配种前10～20 d, 每头母羊夜间补充玉米、豆类等混合精料0.25 kg、食盐20g/d、青饲料3～6 kg, 保证繁殖母羊有一个良好的体况, 促使母羊正常发情、排卵。

3 细管精液的贮存

贮存冻精的低温容器应符合GB5458-85《液氮生物容器》标准规定;专人负责及时补充液氮, 保证冻精浸在液氮中;每只公羊的冻精单独贮存;贮存冻精的容器每年至少清洗1次并勤换新鲜液氮;取放冻精时, 冻精离开液氮的时间不得超过5 min;取放冻精之后, 应及时盖好液氮容器塞, 以免液氮大量蒸发和异物落入。

4 输精器材消毒

输精器先用2%的碳酸氢钠清洗再用清水冲洗, 然后用蒸馏水冲洗数次, 最后用毛巾包好, 进行蒸汽灭菌。开膣器通常用酒精火焰消毒, 消毒之后的开膣器要置于生理盐水中待用。纱布、手巾、台布等用肥皂水洗干净, 冲洗2遍后进行蒸汽灭菌。

5 适时输精

1) 输精在输精室举行, 输精室面积20～30 m2为宜。

2) 发情鉴定。母羊发情征候: (1) 精神状态的变化。发情母羊常表现精神不安, 不时鸣叫, 爬墙, 并且有摇尾表现, 频频排尿;当用手按压其臀部时, 摇尾更甚;同时食欲减退, 反刍停止, 放牧时常常有离群现象;主动接近公羊, 爬跨其他母羊, 并接受爬跨, 两后腿分开, 呈交配姿势。 (2) 生殖道的变化。外阴部充血、肿胀;分泌物增多, 并有黏液流出;子宫颈口开张, 子宫颈充血, 子宫与阴道收缩加强。

3) 配种适期。母羊从性成熟开始, 每隔21 d左右发情1次, 发情持续期一般平均为30 h。发情开始后24～36 h为配种适期, 此时阴户红肿刚减退 (打皱) , 粘液由稀变浓, 躁动稍减, 老母羊、外来品种应稍提前, 小母羊、本地品种可稍延长。

4) 细管冻精解冻。直接置于37～38℃水浴中解冻10 min, 至冻精完全融化, 擦去细管表面水分后装枪输精。

5) 活力检查。取解冻后精液1滴于载玻片上, 加盖玻片, 立即在200～400倍显微镜下观察活力, 环境温度或载物台温度保持37～38℃;也可通过电视显微装置在荧光屏上观察活力, 每个样品观察3个视野, 注意不同液层内的精子运动状态, 进行全面评定。呈直线运动的精子数占总体精子数的30% (即活力0.3) 以上方可用作输精, 对活力在0.3以下的精液不能使用。

6) 输精量。一般一次为0.25 mL (一支细管冻精) , 有效精子数不少于5 000万, 一个发情期可输2次, 间隔8～12 h。每输精1次应换一套输精器械。

7) 输精。输精前, 操作人员要洗手, 把消毒好的输精器械用少量稀释液冲洗2～3次, 将精液装入输精器。有条件的地方, 将待配母羊送到输精室内的输精架上固定好, 进行保定, 一般情况下采用倒提后腿法进行保定。母羊保定好后, 用0.1%的高锰酸钾溶液擦洗外阴部, 进行消毒。输精员右手持输精器, 左手持开膣器, 先将涂有润滑剂的开膣器顺着阴门插入阴道, 旋转90度, 再将开膣器轻轻打开, 找到子宫颈口, 然后将输精针插入子宫颈0.5～1 cm深处, 轻轻注入精液, 最后缓慢取出开膣器和输精针开膣器在阴道内始终处于开张状态, 不能闭合, 以免夹伤母羊。

如果打开开膣器后, 发现母羊阴道内黏液过多或有排尿表现, 应让母羊排尿或设法使母羊阴道内的黏液排净, 然后将开膣器再插入阴道, 仔细寻找到子宫颈口, 再进行输精。遇到初配母羊, 由于阴道狭窄, 开膣器打不开, 只有进行阴道深部输精, 但应加大输精剂量 (2～3倍) 。输精后的母羊应保持2～3 h的安静状态, 不能让其接近公羊或强行牵拉。

8) 做好人工授精配种登记记录, 以便推算预产期。

6 返情情况观察

牛细管冷冻精液保存与使用技术 篇5

1 稀释作用及意义

稀释精液在于增加精液量, 扩大配种头数, 提高种公牛的利用率, 供给精子养分, 增加抗冻性, 防止低温打击, 延长精子的寿命, 便于精液的保存和运输。目前, 使用的稀释液主要是卵黄稀释液和无卵黄稀释液。稀释液具有保护精子免受冷休克, 补充精子能量, 减少精液黏稠度等作用。原精液采集后, 经过相差显微镜镜检、感官评测合格的精液, 取样稀释置于密度仪中, 按密度仪检测数据, 配制稀释液进行稀释, 稀释后每剂量0.25 m L细管中有效精子数≥800个, 解冻后活力不低于35%。

2 保存与检查

细管冻精经程控冷冻仪从4℃降温至-140℃后, 移至液氮中, 待液面稳定后, 一份样取3支细管冻精在40℃水中解冻10 s后取出擦干, 剪去两端封口, 用移液器 (管) 取固定量精液在37℃恒温板上镜检精子活力大于35%以上, 每25支细管分装一根拇指管, 4根拇指管 (100支) 再装入一个纱布袋内, 标注牛号、品种、生产日期等信息后入库贮存于液氮罐中, 液氮罐上也同样标注清楚贮存信息, 整个过程细管和包装物不得离开液氮, 经批次检测菌落数等指标合格, 可长期保存或发售。库存期间根据不同型号液氮容器液氮消耗情况, 液氮面每周最少检查一次, 并及时补充, 确保冻精提筒在液面以下, 不能按时补充液氮时, 将冻精纱布袋用长绳系牢沉到罐底, 一端系于罐口处, 可延长7~10 d的保存期, 冻精储存室内保持通风良好, 防止阳光直射及鼠害。

3 解冻与使用

取用冻精时, 尽可能用长镊子, 切勿将提筒或纱布袋提到临界线以上 (罐口10 cm左右) 。从液氮中取出细管冻精时, 要轻轻甩一两下, 将塑料细管的棉塞端放入35~40℃的温水中, 待管内精液融化后或细管颜色变白后取出备用。解冻后的精液镜检时, 精子的活力不低于标准方可用于输精, 也可在输精后留一点镜检或同时解冻一支抽检精子活力, 确保正常受精。解冻后的精液应立即输配, 不宜停放时间过长, 做到现解现输精。输精后保留细管空管, 并做好详细记录。

4 适时输精

母牛正常排卵是在发情结束后6~12 h, 精子在母牛生殖道的存活时间为8~20 h, 且还需要2~6 h的获能过程, 才能与卵子结合受精。精子15 min就会到达输卵管受精部位, 因此, 让精子早于卵子到达输卵管受精部位是提高受胎率的先决条件。

4.1 输精时间

母牛在发情后期, 精神平稳, 外阴部肿胀消失, 阴道不再流出透明液体。直肠检查卵泡胀大, 表面紧张, 有一触即破之感, 此时为最佳输精时间, 输精后确保牛处于安静状态, 2 h内限制饲喂饮水。

4.2 输精部位

最佳输精部位在子宫颈内口1 cm处即子宫体基部, 过浅易导致精子在母牛体内耗损过大, 影响受胎, 过深易损伤子宫内黏膜, 如确定了卵泡的发育位置, 可将精液直接输入相应的子宫角口内1~2 cm处, 输精时输精枪不能与子宫壁接触。

4.3 输精方法

直肠把握子宫颈输精法。将母牛保定, 左手插入母牛直肠轻轻握住子宫颈后端, 右手将输精器自阴门向斜上方缓慢插入5~10 cm (以避开尿道口) 后再改为平插送到子宫颈口, 缓慢越过子宫颈管中的皱壁, 到达适宜的输精部位, 慢慢注入精液后, 缓缓抽出输精器。

4.4 输精次数

每个情期输精一两次为宜。可在发情母牛发情盛期后4~6 h时, 进行第一次输精, 间隔8~12 h再进行第二次输精。

摘要：作者从稀释与解冻等多方面分享牛细管冻精的保存和使用的技术操作, 以供同行参考学习。

奶牛性控精液繁殖技术 篇6

1 性控精液各项技术指标

国内外生产的性控精液均为0.25/im细管精液,母犊率指标均在90%以上。具体指标如下:

(1)精子数量:每支含有有效精子220万～240万以上。

(2)精子活力:0.4～0.5以上。

(3)产母犊率:90%以上。

(4)情期受胎率:50%以上。

(5)顶体完整率:合格。

(6)精子畸形率:合格(0.1%)。

2 性控精液品种及遗传品质

2.1 种公牛选择技术

性控精液供精公牛必须为线性测定的验证公牛,后裔测定成绩为:

(1)乳脂率、乳蛋白等乳成份改良效果明显者。

(2)体型无明显缺陷。

(3)公牛女儿产奶量1万千克以上。

(4)后裔测定可靠性≥95%,乳房改良效果好。

2.2 母牛要求

基础母牛的选择采取如下技术手段:①采用奶牛选种选配手段;②要求有完整的系谱档案;③择选生殖系统良好的15～18月龄体重达到380kg以上的青年育成牛,或者是产后60～80天生殖道恢复良好的无产科疾病的经产母牛。

2.3 选种选配技术

在高产奶牛群采用同质选配,加强优势性状的遗传进展中产奶牛群采用异质选配,改良缺陷性状,提高群体遗传水平。

3 性控精液授配技术指标要求

性控精液授配技术指标具体包括:

(1)情期受胎率必须达到50%以上。

(2)母犊率必须到达90%以上。

(3)犊牛繁殖成活率必须达到95%以上。

4 性控精液授配母牛技术要求

采用性控精液授配母牛要求以14～16月龄育成牛为主,也可选择部分一胎和二胎牛产后无产科疾病、发情正常、卵巢发育较好的繁殖母牛。

(1)育成牛要求年龄15～18月龄,体重380kg以上,体高1.25米以上。

(2)育成牛体成熟后,必须达到性成熟,自然发情第二个情期进行配种。如果采用人工催情本情期不可采用性控精液。

(3)产后牛要求产完犊后首先饮麸皮红糖水,每隔日灌服一剂益木生化散300～500g连用3次,10天后子宫灌注0.5g土霉素5支,加入500m10.9%的生理盐水中,一次投入子宫,隔日一次,连用2～3次。促使子宫复旧。50天后发情时,根据子宫恢复情况及卵泡发育情况进行性控精液配种。

(4)经产母牛发情时发情鉴定子宫复旧不完全,或者产科有疾病均不能采用性控精液配种。

(5)正常的经产母牛可在发情后12～18小时内子宫灌注400万青霉素1支,100万链霉素2支,0.9%生理盐水20ml,待接近排卵时进行人工授精。

(6)性控精液授配母牛最好是育成牛或一胎和二胎产后无产科疾病卵泡发育正常的繁殖母牛。但用性控精液只能配1～2个情期,然后返情牛一律采用普通精液配种,以免影响总受胎率和胎间距。

5 性控精液授配母牛发情鉴定要求

性控精液在生产过程中因通过XY精子分离和精选,由此延长了生产时间,增加了能量消耗,之所以解冻后及输精后在母牛子宫内有效时间较普通精液短一些,加上每头份精液中的直线运动有效精子含量少于普通精液,所以要求发情鉴定要准确无误,特别要求以卵泡发育情况决定输精时间,具体要求包括:

(1)母牛发情后12小时直肠检查一次,主要检查卵巢、子宫、输卵管有无产科疾病,生殖器官是否发育正常。同时确定双侧卵巢是否有黄体消失,或者是否有卵泡出现。

(2)母牛发情外部结束以后再进行第二次直肠检查,确定卵泡发育阶段,安排第三次直检时间。

(3)在母牛发情外部表现结束后6～5小时,或者发情开始后20～24小时,再进行第三次直肠检查,卵泡是否发育成熟,最后确定输精时间。

6 性控精液解冻方法

采用38～40℃温水快速解冻,具体操作方法是:从液氮罐中快速取出精液,轻轻甩一下细管上的液氮残留,快速投入准备好的38～40℃温水中,待全部解冻后取出擦干上面水珠,双手轻轻搓一搓起到一个调节温度作用,然后装在消毒后的输精枪上准备输精。

7 性控精液的输精方法

(1)性控精液同普通精液输精方法一致,要求必须规范操作,首先要严格输精器械及手臂的消毒,输精枪每牛一支,不能连续使用,并对授配母牛外阴部进行采用0.2%高锰酸钾水清洗消毒,然后用一次性纸巾擦干后进行输精,输精部位要求输在子宫颈内口。

(2)输精时间要求在卵泡发育成熟,排卵前4～6小时或者在排卵后2～4小时输精,同时在输精时没有卵泡的母牛输精后肌肉注射0.2mg促排卵3号3支,注射用水10ml,一次肌注,促使排卵。

(3)为了提高性控精液情期受胎率,可在每次输精后给授配母牛肌肉注射黄体酮2m1*5支,或者人用VE1ml*10支。

(4)输精部位要求配种员技术熟练者可在发育卵泡侧子宫角输精,能提高受胎率,如果配种员技术不太过硬,要求子宫颈内口输精,防止万一播错部位(左侧排卵输入右侧)会降低情期受胎率。

8 妊娠鉴定