抗衰老中药对自由基清除作用的研究进展的论文

抗衰老中药对自由基清除作用的研究进展的论文（精选4篇）

抗衰老中药对自由基清除作用的研究进展的论文 篇1

关于抗衰老中药对自由基清除作用的研究进展的论文

【摘要】综述了抗衰老中药的抗氧化成分和抗氧化机制，提出了今后尚待研究的问题，对抗衰老中药进一步研究和开发具有重要意义。

【关键词】抗衰老 中药 自由基

Progress of studies for scavenging free radical on antiaging traditional Chinese medicine

【Abstract】This paper reviewed antiaging traditional Chinese medicine which have the antioxidative components and mechanism.The future developing direction in this fileld was proposed and further studies on antiaging traditional Chinese medicine is worth making.

【Key Words】Antiaging ;traditional Chinese medicine;free radical

1956年英国学者Harman在前人研究工作的基础上向科学界正式提出衰老自由基理论[1]。该理论认为引起人类衰老的主要原因是细胞在代谢过程中不断产生自由基。自由基是一类性质活泼、具有极强氧化能力的化学物质。机体代谢过程中产生的不稳定自由基在细胞内堆积，引起不饱和脂肪酸氧化成过氧化物，形成脂褐素(lipofuscin,LF)，并使细胞及其重要成分如DNA、蛋白质和酶类等改变或破坏，导致机体衰老。衰老是机体自然代谢过程中的一个必然阶段，是随年龄增长而产生的一系列生理学和解剖学方面的变化，主要表现为机体对内外环境适应能力逐渐减退以至丧失，是生物体在生命后期阶段所出现的进行性、全身性、多因素共同作用的循序渐进的退化过程。人体本身也能产生防御自由基损害的物质。然而，随着年龄增加产生这些物质的能力会逐渐降低，对自由基损害的防御能力下降，导致衰老加速。与人工合成的自由基清除剂相比，中药抗氧化剂具有经济和毒、副作用小的优点。大量研究证实，很多具有抗衰老的中药能提高机体抗氧化酶的活性，减少自由基对机体的损伤，发挥其抗衰老功能。本文对抗衰老中药的有效成分和自由基清除作用的研究情况作一综述。

1 黄酮类(Flavonoids)

黄酮类化合物是指二个苯环通过一个三碳链构成的环相连的一类化合物总称。根据其结构可分成黄酮、黄酮醇、二氢黄酮(醇)、异黄酮、双黄酮、查耳酮、黄烷醇等10个类别。因其化学结构中含有酮基，天然黄酮类化合物一般为金黄色或淡黄色，所以称之为黄酮。芸香甙、槲皮素及异槲皮甙清除氧自由基(O2- ·)和羟自由基(OH·)的作用强于标准的自由基清除剂VitE[2]。金丝桃甙可抑制心脑缺血及红细胞自氧化过程中的丙二醛(MDA)产生，显著提高大鼠血浆、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)等抗氧化酶的活性[3]。黄芪总黄酮有清除O2- ·和OH·防止生物膜过氧化的作用，也能显著抑制OH·对DNA的损伤作用，是黄芪抗氧化作用的主要成分[4]。从银杏叶、夏枯草提取的黄酮能有效改善阿茨海默等退行性病变[5]。其他一些黄酮类化合物如白花蛇舌草黄酮、甘草黄酮、沙棘总黄酮、艾纳香二氢黄酮等均有清除自由基或抗脂质过氧化作用。淫羊藿黄酮能够显著恢复D一半乳糖衰老模型小鼠T和B淋巴细胞增殖反应的功能，同时提高肝脏总SOD的活性，减少心、肝等组织的过氧化脂质(LPO)形成[6]。Husain等人证实了十二种黄酮类化台物对OH·的清除作用，并推论只有其B环上的羟基被取代时才具有此作用[7]。黄酮类化合物的抗氧化作用强弱与其结构有关，黄酮醇的抗氧化能力强于黄酮，B环上具有3ˊ，4ˊ邻二酚羟基的黄酮抗氧化性能最好。在B环无抗氧化作用时，A环上邻苯二酚结构可以补偿并起重要的抗氧化作用[8]。黄酮类化合物清除氧自由基的作用至少有三种途径：通过酚羟基与自由基进行抽氢反应生成稳定的半醌自由基，从而中断链式反应以完成抗氧化作用;通过抗氧化剂的还原作用直接给出电子而清除自由基，同时能显著提高SOD和GSH-Px活性并对过氧化氢(H2O2)的生成有明显的抑制作用;通过抗氧化剂对金属离子的络合，降低若干需金属离子催化的反应，从而间接实现抗氧化作用[9]。黄酮类化合物在抗氧化反应中既能消除链引发阶段的自由基，也能直接捕获自由基反应链中的自由基，通过酚羟基阻断自由基链反应[10]。

2 酚类物质(Phenolics)

多酚类化合物是极好的氢或电子供体，由于形成的酚类游离基中间体的共振非定域作用和没有适合分子氧进攻的位置，因此不会引发新的游离基或者由于链反应而被迅速氧化，所以是很好的抗氧化剂。阿魏酸(ferulic acid)分子苯环上的酚羟基是抗氧化活性基团，可清除自由基，抑制氧化反应和自由基反应，以及与生物膜磷脂结合保护膜脂质结构和功能[11]。阿魏酸还可直接减少H2O2含量，但对MDA含量无减少作用。绿原酸(chlorogenic acid,CHA)是由咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(quinic acid)组成的缩酚酸，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。CHA和3,5-二咖啡酰奎尼酸(DCQA)均属于小分子化合物，能与过氧自由基快速反应，对2,2′-二苯基-α-苦基肼基(DPPH)自由基显示清除活性。CHA主要存在于杜仲科、忍冬科忍冬属、菊科蒿属等中草药中。橄榄油富含多酚类化合物，如松脂醇(C20H22O6)和乙酰松脂醇(C22H24O8)。经常食用橄榄油能有效的防止因脂肪过氧化而发生的细胞凋亡所带来的`早衰、早老、色斑、皱纹等[12]。原花青素(procyanidins,PC)是由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成。最简单的原花青素是儿茶素、表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体、四聚体等直至十聚体。PC主要分布在下列中草药中：银杏、大黄、山楂、耳叶番泻、小连翘、葡萄、日本罗汉柏等，其最为突出的特点是能够扑获细胞外液中的活性氧，抑制低密度脂蛋白(LDL)氧化，表现出抗动脉粥样硬化的活性[13∽14]。

3 多糖(Polysaccharides)

许多中药富含活性多糖，因而具有促进机体免疫、抗肿瘤、抗细菌、抗病毒、抗寄生虫以及抗辐射等作用，临床主要用于治疗肝炎、癌症、艾滋病和抗衰老等。如人参多糖、黄芪多糖的免疫增强作用，香菇、猪苓多糖的抗肿瘤作用，银耳多糖的保护肝细胞作用，芦荟多糖的抗肿瘤和抗艾滋病毒作用等，都与其抗氧化作用密切相关。黄芪多糖可明显增强创伤小鼠体内的SOD活性，抑制创伤后体内自由基诱发的脂质过氧化反应[15]。灵芝多糖口服液可增强GSH-Px、SOD活性，抑制脂质过氧化，对阿霉素引起的细胞自由基损伤大鼠有一定的保护作用[16]。南沙参多糖对化学药品引起的小鼠学习记忆障碍有明显改善作用，对小鼠脑中MDA升高、SOD减少有抑制作用，表明南沙参多糖改善小鼠学习记忆作用与影响脑中自由基有关[17]。枸杞多糖能明显增强小鼠全血、肝、肌肉组织的SOD活性，升高肝组织GSH-Px、GSH的含量，促进小鼠体内氧自由基的清除。多糖抗氧化机制主要是加强DNA的复制与合成，提供必需的微量元素与营养来延长动物的生长期;提高动物对非特异性刺激的抵抗能力，通过调节和增强免疫功能达到抗衰老作用;通过调节蛋白质、核酸、糖和脂质代谢，抗脂质过氧化与抑制LF形成，提高机体SOD比活力，清除LPO和MDA、抑制单胺氧化酶B(MAO-B)的活性作用以发挥抗衰老功能[18]。

4 皂苷(Saponin)

皂苷是存在于植物界的一类较复杂的苷类化合物。因其水溶液形成持久泡沫，象肥皂一样而得名。皂苷类根据苷元的化学结构分为甾体皂苷和三萜皂苷两类，各类皂苷中以三萜皂苷分布最为广泛。近年来研究表明，皂苷大多具有明显的抗氧化作用，已知氧化损伤与许多病理生理现象如衰老、动脉粥样硬化、缺血再灌注损伤等有关，皂苷类的抗氧化作用则可能是其延缓衰老，抗动脉粥样硬化，抗缺血再灌注损伤等药理作用的共同作用机制[19]。甘草次酸能显著抑制CCl4诱导肝的微粒体不饱和脂肪酸过氧化作用，其抑制强度高于Vit E[20]。具有抗氧化活性的皂苷类还有三七皂苷、西洋参皂苷、柴胡皂苷a等。柴胡根含皂苷约2%，主要皂苷为柴胡皂苷a、c及d，果实亦含多种皂苷。党参根含三萜类化合物、皂苷、多种甾醇和甾苷等。人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1)和人参皂苷Rg3(ginsenoside Rg3)的混合物能阻止神经元产生过量硝酸，延缓衰老。人参皂甙可明显提高衰老模型小鼠血清中SOD及GSH-Px的活性，减少LPO及其代谢产物MDA含量，减少自由基对细胞的损伤,亦可减少脂褐质在脑、心肌中的沉积达到抗衰老的效果[21]。人参总皂苷能清除和抑制脂质过氧化，人参芦头总皂苷、茎叶总皂苷、人参果总皂苷可明显减少老年大鼠脑、心肌中LPO的生成并提高血中过氧化氢酶(CAT)的活性。此外还有绞股蓝皂苷、柴胡皂苷、甘草次酸等一些四环或五环三萜类皂苷也有类似作用[22]。

5 鞣质(Tannin)

鞣质为分子量500～3000的能沉淀生物碱、蛋白质的水溶性多酚类化合物。根据鞣质的分子结构及水解的难易可将其分为水解鞣质(hydrolysable tannins)、缩合鞣质(condensed tannins)及缩合鞣质与水解鞣质中的葡萄糖以碳健连接而成的复合鞣质(complex tannins)。约有70%以上的中药中含有鞣质类化合物。如地榆、大黄、诃子、肉桂、芒果、老鹤草及仙鹤草等含量较丰富[23]。鞣质分子中的众多酚羟基使其具有很强的还原性，对各种氧自由基、脂质自由基、含氮自由基都有较强的清除能力，比常用抗氧化剂Vit C和Vit E还强，也超过了小分子多酚如茶多酚和没食子酸。多数可水解鞣质在5μg/ml时就可显著抑制LPO升高的作用[24]。其抑制活性取决于酚羟基的位置和数目，六氢二酚羟基的清除活性大于没食子酸酚羟基。鞣质的抗氧化性还表现在抑制肝脏线粒体、微粒体的脂质过氧化作用;抑制由肾上腺素引起的脂肪细胞的脂质分解作用;降低由于肝损伤引起的肝和血清脂质过氧化物的浓度以及用过氧化油喂养的大鼠的胆固醇、谷丙转氨酶和谷草转氨酶的浓度;降低多种诱变剂的诱变性并有抗病毒活性;降低血液中尿素氮浓度和抗肿瘤、抗癌变作用[25]。

6 维生素类(Vitamins)

β┖萝卜素是维生素A的前

抗衰老中药对自由基清除作用的研究进展的论文 篇2

1 材料与方法

1.1 主要药品与试剂

桦褐孔菌子实体, 干燥、粉碎备用。SOD、MDA、CK、BUN和LDH试剂盒购自南京建成生物工程研究所, 其余试剂均为国产分析纯。

1.2 实验动物

清洁级雄性昆明种小鼠, 体重20~22g, 在室温25℃、湿度50%条件下适应性饲养, 饲养方式采用立体笼式饲养, 给予标准饲料, 自由饮水。

2 实验方法

2.1 精致多糖的制备

取桦褐孔菌干燥子实体的粗粉, 用95%乙醇回流提取, 提取液减压回收溶剂, 得乙醇提取物。加水煎煮提取, 所得水提取液浓缩加乙醇至含醇量达80%, 静置、抽滤, 得粗多糖, 反复醇沉后, 沉淀用丙酮洗涤3次, 抽滤, 得精制多糖 (PS) 。

2.2 自由基清除率的测定

2.2.1 样品制备

称取10mg PS, 溶解于1mL无水乙醇中, 浓度为10mg mL。依次稀释为1mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg mL、0.0625mg/mL、0.0313mg/mL。

2.2.2 自由基清除率的测定

采用DPPH分析法评价抗氧化活性。517nm处测定吸光度。分别取50μLPS乙醇溶液于96well中, 每样4孔, 再分别加入200μLDPPH的乙醇溶液 (DPPH浓度为1.2×10-5mol L) , 混合均匀, 放置30min, 用酶标仪在517nm处测定其吸光度Ai。同时测200μL DPPH溶液+50μL乙醇混合后的吸光度A0和50μL样品液+200μL乙醇混合后的吸光度Aj, 按下式计算自由基清除率:

2.3 动物实验

将小鼠随机分为对照组、模型对照组、PS-L、PS-M、PS-H5组。后3组每天分别给予PS (100mg/kg、200mg/kg、300mg/kg) , 剂量选择根据人体推荐剂量的10倍、20倍和30倍, 确定低中高3组剂量。对照组和模型对照组每天给予等剂量赋形剂。对照组不进行游泳训练, 模型对照组及PS给药组连续进行游泳训练10d, 每天30min, 第11天, 5组小鼠均进行1次尾部负荷体重5%的力竭性游泳, 最后下沉经10s后不能返回水面为力竭。力竭游泳结束后, 即刻进行颈动脉、肝脏采血, 分离血清, 测定血清CK、BUN、LDH含量, 测定肝脏SOD、MDA含量, 所有测定皆按试剂说明进行。

2.4 数据处理

采用Graphpad Prism软件, 测定值用x軃±s表示, 用“One-way ANOVA and Turkey’s multiple comparison tests”进行多组数据间对比。

3 结果

3.1 自由基清除率测定

测定不同浓度PS对DPPH自由基的清除率, PS随着浓度增加, 自由基清除率逐渐增高, 表明其清除能力与浓度有一定的量效关系, 但当PS增加到0.5mg/mL时, 清除率基本不变。结果如表1所示。

3.2 力竭游泳后各项指标

与对照组相比, 模型对照组小鼠游泳后, 抗氧化能力降低, 丙二醛、血清乳酸脱氢酶、尿素氮和肌酸激酶水平升高, 差异均有显著性意义 (P<0.05) 。与模型对照组相比, PS给药组小鼠抗氧化能力有所回升, 丙二醛、血清乳酸脱氢酶、尿素氮和肌酸激酶水平有所下降, 其中PS-M和PS-H给药组 (200mg/kg和300mg/kg) 5项指标改变与模型对照组比较具有显著性差异 (P<0.05) , 如表2所示。

注:与对照组进行比较, #P<0.05;与模型对照组进行比较, *P<0.05。

4 讨论

目前有关抗氧化疲劳中药提取物的研究, 尤其是关于桦褐孔菌的研究在国内外尚未有报道, 对其与血糖、血乳酸、血尿素氮、总抗氧化力变化关系的研究也非常少。运动耐力的提高是抗疲劳宏观表现, 力竭游泳实验可以用于反映动物运动疲劳程度, 通过对游泳后小鼠相关血清指标的测定可以反映桦褐孔菌多糖抗小鼠运动疲劳的能力。研究表明桦褐孔菌多糖具有良好的清除自由基能力, 且随着浓度增加自由基清除率逐渐增高, 一定浓度后清除率基本不变。机体不正常的代谢骤然产生大量的氧自由基, 当氧自由基的数量超过体内抗氧化防御能力时, 必然导致运动性疲劳[2]。SOD、MDA、CK、BUN和LDH是体内蛋白质代谢相关产物, 是评价运动性疲劳强度的重要指标。本实验表明桦褐孔菌多糖能显著降低小鼠运动后MDA、CK、BUN和LDH含量, 升高SOD, 提高运动耐力, 具有良好的抗疲劳作用。

参考文献

[1]戴芳澜.中国真菌总汇[M].北京:科学出版社, 1979.

抗衰老中药对自由基清除作用的研究进展的论文 篇3

[关键词] 青钱柳;提取物;脂质过氧化;自由基

文章编号:1003-1383(2009)04-0381-03

中图分类号:R 963

文献标识码:A

青钱柳[Cyclocarya paliurus(Batal) Iljinskaya](CPS)又名青钱李(江西),系双子叶植物纲(Dicotyledoneae)胡桃科(Juglandaceae)青钱柳属植物,它是我国独有珍稀树种资源[1],分布于广西、江西、浙江等地的山区、溪谷或石灰岩山地,为广西特色植物。据《中国中药志要》记载,其树皮、树叶具有清热解毒,止痛功能,可用于治疗顽癣。长期以来民间用其叶片做茶,因其味甜有清热解暑、降糖、降压的功效,又称为甜茶,神茶等[2]。青钱柳干叶的主要成分有糖、氨基酸、有机酸、黄酮、酸性物质、内酯、香豆精、三萜及皂甙、甾醇等[2]。我国从1970年开始对青钱柳进行药用开发研究,发现青钱柳具有明显的降血糖、降血压、减肥、抗肿瘤、抗衰老、抗过敏、清热解暑、提高人体免疫力、促进新陈代谢等多种功效,尤其对治疗糖尿病有显著疗效[3]。本实验对青钱柳不同提取物的体外抗氧化性进行了研究,为更进一步开发青钱柳保健产品提供理论依据。

材料与方法

1.动物 昆明种小鼠,雌雄各半,体重(20±2)g,由桂林医学院实验动物中心提供。

2.实验材料与仪器 青钱柳采自广西阳朔县白沙镇青钱柳基地,752GW型紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)、FA2004电子天平(上海精科天平)、小型三用水箱(北京医疗设备厂)、XHB型旋涡混合器(江苏康健医疗用品有限公司)、LD0.8离心机(北京医用离心机厂)、旋转蒸发器(RE52型,上海亚荣仪器厂生产)。

3.试剂 丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、无水乙醇、蒸馏水、邻二氮菲、硫酸亚铁、过氧化氢均为分析纯,PBS液为自制。



4.实验方法

(1)青钱柳不同溶剂提取物的制备 取烘干过筛的青钱柳粉末,分别按固液比1∶20加入去离子水,用旋转蒸发器提取2 h,过滤,去残渣。滤液分两部分,一部分加入80%乙醇提取后再用水提取,利用水提醇沉淀法[4]用三氯醋酸去蛋白质后得到青钱柳多糖合物,另一部分加入80%乙醇,提取1.5 h,分别用正丁醇、乙酸乙酯、石油醚萃取,得正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物,最后剩余的为水提物。各提取物均用真空浓缩至膏状,并于40℃真空干燥,冷藏备用。

(2)CPS对小鼠肝脏自发性脂质过氧化的影响 小鼠禁食12 h后摘除眼球放血处死,取肝,在0~4℃下用生理盐水制成5%肝匀浆。实验分为对照组(10%肝匀浆)、阳性组(VitC)和高、中、低3个剂量的青钱柳提取物组(10%肝匀浆和青钱柳不同溶剂提取物配液)。以硫代巴比妥酸法测定MDA含量,并计算抑制率:

抑制率(IR)=(对照组MDA-提取物组MDA)/对照组MDA。

(3)CPS对羟自由基的清除作用

采用亚铁离子催化过氧化氢产生(•OH)的方法。在样品管中加0.75 mmol/L的邻二氮菲溶液1 ml,PBS 2 ml和1 ml样品,旋涡混合器混匀后,加0.75 mmol/L的硫酸亚铁溶液1 ml,旋涡混合器混匀后,加0.01%过氧化氢溶液1 ml,置恒温水浴中37℃保温1 h。反应液置比色皿中,于分光光度计中在536 nm测定吸光度As。用1 ml蒸馏水代替1 ml样品,测定吸光度为Ap。吸光度为Ab的管不加过氧化氢和样品,都以蒸馏水代替。按以下公式计算羟自由基的清除率(d%):d%=(As-Ap)/(Ab-Ap)×100。

5.统计学处理 计量资料以均数±标准差(-±s)表示,采用EXCEL统计软件以t检验进行统计学处理,以P<0.05为有统计学意义。

结果

1.CPS对小鼠肝脏自发性脂质过氧化的影响 青钱柳各提取物对MDA的生成均有抑制作用,随着各提取物浓度增加,部分提取物的抑制率也会相应增高。五种提取物中对MDA抑制最强的为正丁醇提取物,在浓度为1.0 mg•ml-1时,对小鼠肝组织自发性MDA的抑制率大小为:正丁醇>石油醚>多糖>水>乙酸乙酯。见表1。

表1 CPS对小鼠肝脏自发性脂质过氧化的影响(-±s,n=6)

组别浓度(mg•ml-1)MDA(nmol•mgprot-1)抑制率(%)

对照组 11.388 ±0.306

VitC1.06.831±0.221※40.0

正丁醇提取物0.18.826 ±0.405※22.5

0.56.522 ±0.385※42.7

1.05.646 ±0.363※50.4

水提物0.19.742 ±0.164※14.5

0.58.715 ±0.325※23.5

1.07.844 ±0.386※31.1

多糖合物0.18.652 ±0.368※24.0

0.56.788 ±0.386※40.4

1.07.257±0.383※36.3

乙酸乙酯提取物0.18.531 ±0.459※25.1

0.58.848 ±0.317※22.3

1.08.528 ±0.388※25.1

石油醚提取物0.19.284 ±0.315※18.5

0.57.488 ±0.243※34.2

1.07.081 ±0.571※37.8

注:与正常对照组比: ※P<0.01

2.CPS对羟自由基的清除作用 CPS对•OH有清除作用,且作用较强。特别是正丁醇提取物、水提物和多糖合物,最高清除率可高达80%以上。随着各提取物浓度的增加,对•OH自由基的清除率不断增大。但到了一定浓度,再增加其浓度,反而清除率有所降低。

半清除率(IC50)指清除率为50%时所需样品的浓度,根据不同浓度样品的清除率作曲线求出。所需浓度越低,表明半清除率越高,清除效果越好。通过计算所得IC50值,可比较各青钱柳提取物对羟自由基的清除率:水>石油醚>正丁醇>多糖>乙酸乙酯。见表2。

表2 CPS对•OH自由基的清除作用(-±s,n=6)

观察项目水提物

石油醚提取物

正丁醇提取浓度(mg•ml-1)0.020.050.100.150.300.250.300.400.050.100.15

0.300.50

清除率(%)33.7±1.243.1±1.552.5±0.961.0±1.294.5±1.741.3±0.753.9±1.675.7±1.2

3.0±0.99.2±1.719.0±01.641.7±1.290.4±1.2

IC50(mg•ml-1)0.09

0.29

0.31

(续)表2

观察项目多糖合物

乙酸乙酯提取物

浓度(mg•ml-1)0.300.400.500.600.700.800.900.250.300.350.40

清除率(%)44.3±0.955.0±00.762.4±1.171.0±60.780.0±0.987.8±0.983.9±1.218.6±0.9

40.1±1.247.7±0.721.6±1.2

IC50(mg•ml-1)0.33

0.35

讨论

青钱柳为广西特有珍稀植物,对它的开发利用还十分有限,青钱柳既有明显的药理价值又具备一定的食品保健功能,进行工业化开发利用前景十分广阔。针对青钱柳叶中含有黄酮、多糖、内酯等多种有效成分,本实验提取了五种青钱柳提取物,考察青钱柳的体外抗氧化活性,为其药理作用提供科学依据。

脂质过氧化产物丙二醛等可导致人体细胞氧化损害、老化、致癌和动脉硬化等多种疾病。过氧化脂质大部分由肝细胞产生,其分解也主要在肝脏。MDA是过氧化脂质的主要降解产物,其含量可反映脂质过氧化的程度。故MDA的水平测定可用作检测抗过氧化作用。本实验结果表明,CPS可明显降低小鼠自发性MDA的生成,且活性与浓度有明显的量效关系。

羟自由基是反应药物抗氧化活性的重要指标。本实验利用Fenton反应产生羟自由基:H2O2+Fe2+=•OH+OH+Fe3+。Fe2+与邻二氮菲生成红色配合物,加入CPS后,减弱了•OH对Fe2+/邻二氮菲的氧化作用,引起自由基的变化,通过测定其吸光度值的变化,推断CPS对•OH的作用。结果表明CPS对羟自由基有较好清除作用,是天然高效的自由基清除剂。

CPS较高的体外抗氧化活性可能与其中含有黄酮类化合物有关。黄酮类化合物具有的多酚结构,能提供活泼质子,与自由基结合成稳定的产物,因而有较强的抗氧化作用[5]。黄酮类成分具有保肝、扩冠、抗炎、降低血管脆性,解除痉挛,增强心脏收缩,还有一定程度的抗菌及抑制肿瘤细胞等作用。同茶叶相比,青钱柳黄酮类化合物含量相对较高,可作为这些物质的补充源[6]。

参考文献

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].第21卷.北京:科学出版社,1979,18-19.

[2]谢明勇,李 磊.青钱柳化学成份和生物活性研究概况[J].中草药,2001,32(4):365-366.

[3]柳板誉,梁彦兰.混交林中青钱柳生长规律的研究[J].江西农业大学学报,2004,26(3):381-385.

[4]王著禄,陈海生,郑钦岳,等.商陆多糖的分离和纯化[J].第二军医大学学报,1990,11(1):56.

[5]张培刚,郑鸿雁,昌有权,等.松针黄酮的体外抗氧化作用研究[J].食品科学,2005,26(9):506-508.

[6]谢明勇,王远兴,温辉梁,等.青钱柳中黄酮甙和维生素含量的测定[J].食品科学,2001,22(1):66-68.

(收稿日期:2009-05-18 修回日期:2009-07-15)

核桃楸皮的抗衰老自由基机制研究 篇4

1 一般资料

核桃楸皮提取及有效成分的提取分离与有效成分含量测定[1]:核桃楸皮1kg, 干燥、粉碎。加水8L浸泡24h;30℃超声提取, 每次30min。过滤, 留取滤液。滤渣加水4L, 超声提取, 重复三次, 过滤, 合并过滤, 旋转蒸发浓缩, 按系统溶剂法分别提取, 作为供试药物。

2 对衰老模型鼠疫免疫功能的影响研究

2.1 衰老大鼠模型实验方案

60只雄性大鼠随机分为正常组、D-半乳糖模型组、维生素E对照组、给药低、中、高剂量组每组10只。各组大鼠在实验前需要禁食水10~12h后进行实验, 主要是针对其空腹提取药进入体内易于吸收, 效果更加明显, 易于观察。方法是正常组每日皮下注射等量生理盐水, 并灌胃等量蒸馏水。连续40d, 其余各组每日均皮下注射0.48D-半乳糖48mg/kg, 同时模型组灌胃蒸馏水10ml/kg, 维生素E对照组灌胃Vit E油剂141mg/kg。给药低、中、高剂量组, 给药体积与模型组相同。正常组于第41d处死大鼠, 立即取血和脑皮质, 血液按常规方法分离血清或溶血后测定各项指标。

采血后分别测定各项衰老指标。用四唑盐 (MTT) 微量自动比色法测定脾淋巴细胞转化指数 (SI) ;用免疫荧光法测定脾淋巴细胞亚群;用PI染色法测脾淋巴细胞的凋亡率, 观察其对免疫功能的影响。

脑皮质以0.1M、PH=7.4的磷酸盐缓冲液在冰浴下制成匀浆后待测。血清总超氧化物歧化酶 (T-SOD) 活性和脑匀浆SOD活性按黄嘌呤氧化酶法测定, 血清过氧化脂质产物丙二醛 (MDA) 和脑匀浆MDA含量按硫代巴比妥酸法, 全血谷胱苷肽过氧化物酶 (GSH-Px) 和脑匀浆 (GSH-Px) 活性按DTNB直接法。脑匀浆液蛋白定量采用考马斯亮兰 (Bradford) 法。

2.2 衰老小鼠模型实验方案

健康成年ICR小鼠60只, 雌雄各半, 体质量18~20g。随机分为6组: (1) D-gal+给药低剂量组; (2) D-gal+给药中剂量组; (3) D-gal+给药高剂量组; (4) D-gal+阳性药物组; (5) D-gal组; (6) 正常对照组。 (1) 、 (2) 、 (3) 、 (4) 、 (5) 组小鼠每日颈背部皮下注射5D-gal (0.25ml/10g) , 连续注射6周建立衰老动物模型;其中 (1) 、 (2) 、 (3) 、 (4) 组小鼠第3周分别每日灌胃给药低、中、高及脑复康6.2mg/10g; (5) 组小鼠给予等量双蒸水; (6) 组小鼠颈背部皮下注射等量生理盐水, 并于第3周给予等量双蒸水作为非模型正常对照组。

2.3 大脑SOD活性测定

小鼠要进行断头处死, 在20min内迅速取大脑组织, 然后加入适量组织匀浆液, 在冰浴中匀浆, 采用Bradford法测定总蛋白含量。取1%大脑组织匀浆液, 采用黄嘌呤氧化酶法 (SOD检测试剂盒) , 于波长550nm处分别测定各实验组和对照组小鼠大脑组织匀浆液的光密度 (D) 值。

2.4 大脑MDA含量测定

小鼠大脑组织脑蛋白匀浆和定量方法同上。采用TBA比色法 (MDA检测试剂盒) , 于波长532nm处分别测定各实验组和对照组小鼠大脑组织匀浆液D值。实验组的D值为17, 正常组D值为9, (P<0.05) 。

3 讨论

之所以会老化、体力衰退、皮肤失去光泽及弹性, 除了年龄是无法抗拒的因素外, 主要是体内自由基过多, 年轻时体内有较好的中和系统来排除自由基, 降低其所造成的伤害;然而随着年龄增长, 人体修复自由基的能力也随之下降;若未能及时补充抗氧化物, 细胞就开始损伤, 疾病就会产生, 越来越多的证据显示, 体内自由基含量越高, 寿命越短。用核桃楸灌胃的小鼠血清中丙二醛的质量浓度明显低于未给药的对照组, 说明核桃楸具有抗氧化的作用[2]。

4 体会

随着世界范围内, 老龄化趋势的不断发展, 抗衰老这一世界性医学课题在我国也日益受到关注。自由基对人体的损害主要有三个方面:使细胞膜被破坏;使血清抗蛋白酶失去活性;损伤基因导致细胞变异的出现和蓄积。抗衰老的意义和价值在于能够使人类主动预防, 延缓或终止过速衰老的过程, 有效地预防癌症、心脑血管疾病、糖尿病等与衰老相关疾病的过早发生。所以核桃楸皮在临床应用具有非常重要的意义。

参考文献

[1]杨凡.核桃楸根皮化学成分及其抗癌活性的研究[D].吉林大学, 2007.