沙门菌检测技术（通用10篇）
沙门菌检测技术 篇1
沙门菌为常见的肠道病原菌之一，在自然界分布广泛，种类繁多，所致疾病统称沙门菌感染，其中由伤寒、副伤寒沙门菌引起的急性全身系统性传染病是我国《传染病防治法》中规定报告的乙类传染病，而由非伤寒沙门菌引起的食物中毒则占我国内陆地区细菌性食物中毒的首位。
及时准确地检验沙门菌，为诊断和控制由该菌引起的疾病提供依据。沙门菌检验程序主要包括：标本采集、标本的处理与接种、菌株分离与鉴定和PCR检测几个步骤。
标本采集
标本采集前，应准备好所需的培养基和器材，主要有：血液需氧培养瓶、血琼脂平板、XLD（木糖赖氨酸脱氧胆盐）琼脂平板、BS（亚硫酸铋）琼脂平板、SC（亚硒酸盐胱氨酸）增菌液、酒精灯、采样瓶、剪刀、镊子等。
沙门菌检验标本主要分为：食品样品、可疑食物中毒标本，沙门菌患者标本。可疑食物中毒标本主要有：可疑食品、相关环境标本、疑似病人标本。可疑食品的采集：在采集可疑食物中毒标本时，应重点采集剩余食物以及食品加工有关的炊事用具，操作人员的手、肛试等相关环境标本。采样时，用棉试子涂抹物品表面后，置于少量增菌培养基内，也可根据情况在接种现场接种分离平板。
沙门菌感染患者标本的采集：沙门菌感染患者应采集新鲜粪便标本或肛试子直接接种分离平板和增菌液。对伤寒、副伤寒患者，在病程的第1~2周，可采集静脉血液4~8ml，接种血液需氧培养瓶中。
每个标本需做好标识和记录，采集的食品样品4℃保存，已接种标本的增菌液和培养基，室温下保存，2小时内送达实验室。
标本的处理与接种
沙门菌标本的处理与接种常用培养基有：TTB（四硫磺酸钠）增菌液、SC(亚硒酸盐胱氨酸)增菌液、XLD琼脂平板、BS琼脂平板和麦康凯（MaC）琼脂平板。
可疑中毒食品标本的处理：对采集的标本通常按1:10的比例分别接种于100mlTTB和100ml增菌液中，每瓶增菌液加入标本约10g，同时还可将可疑中毒食品标本直接接种于分离平板。将接种后的TTB增菌液置42℃培养箱中培养18~24小时，将SC增菌液和分离平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。取培养后增菌液转种XLD琼脂平板和BS琼脂平板，将接种后的平板置37℃培养箱中培养24~48小时，待观察。
血液（骨髓）标本的处理：将已接种标本的血液培养瓶直接放置37℃培养箱中培养7天，在培养期间分别于培养的第1天、第2天和第7天取培养液一环接种血琼脂平板，将平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。培养至第7天时，如培养物仍无菌生长，则可判为阴性。
肛试子及其他环境标本的处理：将现场采集已接种标本的分离平板和增菌液直接放置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。取出18~24小时培养的增菌液转种XLD琼脂平板和麦康凯琼脂平板。将接种完毕的平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。
菌株分离与鉴定
主要实验试剂有：氧化酶（试剂）、三糖铁（TSI）、动力—靛基质—尿素半固体（MIU）和赖氨酸铁琼脂斜面、API20E、沙门菌诊断血清。
沙门菌菌株的鉴定主要试验有：菌体形态观察，菌落形态观察，氧化酶实验，初步生化鉴定（系统生化鉴定），血清学分型。
菌落形态观察：在XLD平板上沙门菌菌落呈粉红色、光滑、湿润、边缘整齐、产H2S的菌株，可形成中心黑色或全部黑色的菌落。在BS琼脂平板上，沙门菌菌落呈黑色有金属光泽、棕色或灰色，培养基周围可呈现黑色或棕色，有些菌株可形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。在麦康凯琼脂平板上，沙门菌菌落为无色、透明或半透明、光滑湿润、边缘整齐、圆形。从分离平板上挑取3-5个可以菌落，分别接种XLD平板和营养琼脂平板，将接种完毕的平板置37℃培养箱中，18~24小时纯化培养。
菌体形态观察：挑取纯培养物进行革兰染色，在显微镜下观察菌体形态。沙门菌为革兰阴性杆菌，长1-3um，宽0.5~1um，无芽胞，两端钝圆。
氧化酶试验：用一次性接种环（或牙签）挑取菌落于滤纸上，滴加氧化酶试剂一滴，在10s内菌落不变色为阴性，呈现紫色者为阳性。本试验菌落不变色，氧化酶试验为阴性：
初步生化鉴定：将菌落形态和氧化酶试验符合沙门菌特征的纯培养物分别接种于三糖铁琼脂斜面（TSI）、MIU培养基、赖氨酸铁琼脂斜面，将已接种的生化培养基置37℃培养箱中，培养18~24小时，待观察。
典型的沙门菌在三糖铁（TSI）上，斜面呈红色，下层产酸呈黄色，多数沙门菌产生硫化氢，试管内出现黑色，有气泡。
赖氨酸脱羧酶试验阳性，培养基由紫色变成紫黑色。
在MIU培养基上尿素为阴性培养基不变色，有动力，沿穿刺线浑浊生长，加入靛基质试剂0.5ml于试管内，轻摇试管，沙门菌靛基质试验结果不定。本试验靛基质试验为阴性，试剂不变色。
系统生化鉴定：肠杆菌科细菌在生化反应上有类似之处，对初步生化试验符合沙门菌的可疑菌株需要进一步做系统的生化鉴定。生化试剂可采用自配或市售成品，也可选用生化鉴定试剂盒（API 20E）或全自动微生物鉴定系统（VITEK）。本试验以API 20E生化鉴定试剂盒进行示范，具体操作步骤如下：
菌悬液制备：挑取24小时培养的营养琼脂平板上1~2个菌落至5ml灭菌生理盐水中制成均匀的菌悬液。
接种与培养：将配制好的菌悬液按产品说明书要求填充API 20E条上的小杯，按要求加盖矿物油，置于36℃培养箱中培养18~24小时，待观察。
结果观察与判定：按照说明书要求，在读取结果前，部分试验先添加附加试剂。根据API 20E中的读数表判定和记录各项反应结果，并得到一个7位数的编码，通过在数据库或API编码表中查询该编码即可获得菌株鉴定结果。
血清学分型：对生化鉴定为沙门菌的菌株，需用玻片凝集法进行血清学分型，血清学分型试验的主要步骤为：先用A-F多价血清作玻片凝集，若血清发生凝集再分别选用O4 O9 O2 O10 O7等因子血清做玻片凝集，以判定其群别。根据判定的O抗原，进行H抗原的第一相和第二相抗原凝集和判定，下面以某品牌血清为例进行试验。
第一步，O抗原凝集，分别取一环A~F血清和生理盐水于洁净的载玻片上，挑取待检菌株新鲜培养物适量，研成乳状，倾斜摇动玻片1分钟，观察血清凝集情况。若血清产生凝集颗粒盐水无颗粒者判为阳性；两者均无凝集颗粒产生，判为阴性；盐水有颗粒者为粗糙型菌株，不能分型。本菌株结果为阳性。
第二步，取一环O4血清于洁净的载玻片上，用与上述相同的方法试验，结果若为阳性，进行H因子血清凝集试验；若结果为阴性，再分别选用O9 O2 O10 O7等因子血清进行玻片凝集试验。本菌株O4为阳性。
第三步，H抗原凝集，在沙门菌抗原表中，选择与O4相对应的H因子的第一相和第二相单因子血清作逐一凝集试验。本次实验结果被检沙门菌的抗原式为1,4,5，12：i：1,2 为鼠伤寒沙门菌。
血清凝集试验中几种特殊情况：
1.Vi抗原的判定：伤寒或丙型副伤寒沙门菌的Vi抗原能阻碍O抗原凝集，含丰富Vi抗原的伤寒菌株，经煮沸破坏Vi抗原，再与O血清凝集。实验方法为，取适量菌苔于1ml生理盐水中，在酒精灯火焰上煮沸后再与O血清凝集，若仍不凝集，可送上级单位鉴定。2.位相诱导法试验：如双相菌只检出一相H抗原时，可用位相诱导的方法获得另一相抗原。位相诱导方法较多，主要有，小玻璃管法、小倒管法、简易平板法。本篇着重介绍简易平板法。将0.7%~0.8%半固体琼脂平板烘干表面水分，挑取已知相因子血清一环滴在半固体琼脂平板表面，放置片刻，待血清吸收到琼脂内，在血清部位的中央 点接种待检菌株，36℃培养18~24小时后，在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌做凝集试验。
3.H抗原不凝集：如果两相H抗原均不出现，则应通过半固体琼脂平板、血平板等琼脂平板传代法获得某相或两相抗原
PCR检验
在沙门菌的检测工作中，常利用PCR技术来做沙门菌检测的初筛实验，以提高工作效率，降低成本。PCR初筛试验采用检测样品增菌液中是否有沙门菌属侵袭性抗原保守基因（invA 基因）的存在，以此来判定是否有沙门菌的存在。PCR反应条件，94℃变性1min，52℃退火1min，72℃延伸1min，35个循环72℃延伸7min。
用凝胶成像系统观察结果时，如在284bp处出现扩增条带，则为阳性，凡是PCR检测呈阳性结果的标本，均应进行沙门菌病原菌的检测。
注意事项
在沙门菌检验过程中，应注意以下问题。
1.试验应在BSL-2生物安全实验室的二级生物安全柜中进行操作，并做好个人的安全防护工作。
2.在生化初筛试验中应特别注意，只有在三糖铁琼脂斜面和底层均产酸，同时赖氨酸脱羧酶试验阴性的菌株或尿素酶阳性的菌株可以排除，其他的反应进行进一步的试验确证。
3.沙门菌的鉴定和血清学分型试验必须使用纯化菌株。
4.BS琼脂平板要求的培养观察时间为48小时，此时才能形成描述的典型菌落。
沙门菌检测技术 篇2
1材料与方法
1. 1菌株福氏志贺菌 ( CMCC51573) 、鼠伤寒沙门菌 ( CMCC50098) 、宋内志贺菌、肠炎沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、阪崎肠杆菌等8株菌用于特异性实验, 由本实验室保存的质控考核和监测所分离菌株。
1. 2仪器与试剂TGW16台式高速微量离心机、微量移液器、恒温培养箱、超净工作台、生物安全柜、 DK-S420电热恒温水槽、ATB微生物生化鉴定系统;
沙门菌志贺菌通用的一次性采便增菌管 ( DB12 - T465 - 2012, 天津乾坤) ; 营养琼脂、SS琼脂、 HE琼脂、三糖铁琼脂 ( TSI) 、MIU等培养基 ( 天津诺凡) , 均在有效期内使用; 沙门菌、志贺菌核酸联检试剂盒 ( 13051601, 广州华峰) 。
1. 3标本来源选择一次疑似食物中毒事件中, 需调查的76名食堂从业人员的粪便分别接种于一次性采便增菌管。 阳性控制菌株为福氏志贺菌 ( CMCC51573) 、鼠伤寒沙门菌 ( CMCC50098) 。
1. 4检测方法沙门菌、志贺菌同时用LAMP方法和GB 4789. 4 - 2010、GB 4789. 5 - 2003的方法进行平行对照实验, 用GB 4789. 4 - 2010、GB 4789. 5 - 2003的方法进行最后分型鉴定。
1. 4. 1LAMP检测方法和结果判断按试剂盒说明书, 取待测的增菌液1 ml加到1. 5 ml无菌离心管中, 10 000 r / min离心2 min ( 离心半径= 5. 7 cm) , 吸弃上清; 加入80 μl DNA提取液, 振荡混匀后沸水浴10 min, 置冰上10 min; 10 000 r/min离心2 min, 上清即为核酸模板; LAMP反应体系包括Shi反应液22. 5 μl、 Bst DNA聚合酶0. 5 μl、稳定液50 μl和2 μl显色液和上述样品核酸模板2. 5 μl; 置65 ℃恒温反应1 h, 反应结束, 将HF反应管倒置甩动2次, 再正置甩动2次, 使工作液与显色液充分混合, 冷却至室温。在黑色背景下观察管中颜色判读结果。HF反应管呈现绿色则为阳性, 呈现橙色则为阴性, 呈现橙绿色则取1次LAMP产物5 μl再次LAMP, 观察颜色变化。
1. 4. 2传统检测方法取余下的增菌液和LAMP检测阳性的增菌液按GB 4789. 4 - 2010、GB 4789. 5 - 2003方法分别转种于SS琼脂平板和HE琼脂平板上, 挑取SS琼脂平板和HE琼脂平板上的可疑菌落分别转种TSI和MIU。如果生化反应初步符合志贺菌或沙门菌特征, 转种营养琼脂平板做纯培养, 纯培养菌落用生理盐水制备成麦氏浊度为0. 5的菌悬液, 使用ATB微生物鉴定系统进行分析; 同时时做血清学分型。挑取可疑TSI上菌落分别做志贺菌属4种多价血清和沙门菌属AFO多价血清凝集, 同时做盐水对照试验, 如志贺菌属4种多价血清或沙门菌属AFO多价血清凝集, 继续做志贺菌或沙门菌的分型鉴定。
1. 5特异性试验取福氏志贺菌 ( CMCC51573) 、鼠伤寒沙门菌 ( CMCC50098) 、宋内志贺菌、肠炎沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、阪崎肠杆菌等8株菌分别接种于一次性采便增菌管, 取增菌液制备DNA模板进行沙门菌和志贺菌LAMP方法检测, 验证方法的特异性。
1. 6灵敏度试验取新鲜生长在营养琼脂平板上的福氏志贺菌 ( CMCC51573) 、沙门菌 ( CMCC50098) 菌落分别接种于无菌生理盐水中, 比浊法制备108CFU / ml菌悬液 ( 麦氏浊度0. 5) , 菌悬液用无菌生理盐水10倍倍比稀释至10- 8, 选择10- 6、10- 7和10- 83个连续稀释度的菌悬液分别取100 μl平行涂在营养琼脂平板上做菌落计数[2]。同时, 取10- 6、10- 7、10- 83个连续稀释度的菌悬液1 ml, 用试剂盒法提取DNA, 取2 μl上清液作为模板进行LAMP扩增。以LAMP阳性检出的最低稀释度管相对应的平均菌落数为本次的LAMP检测的灵敏度。
2结果
2. 1沙门菌志贺菌的LAMP检测和分离培养结果LAMP方法检出1份标本为沙门菌阳性, 阳性率为1. 32% , 可通过肉眼判断结果; 分离培养法检出1份都柏林沙门菌, 阳性率为1. 32% 。
2. 2特异性试验福氏志贺菌 ( CMCC51573) 、宋内志贺菌、沙门菌 ( CMCC50098) 和肠炎沙门菌等4株菌出现LAMP扩增, 检测结果为阳性, 其他4株菌均无扩增殖, 检测结果为阴性, 表明该引物特异性强。见图1。
注:1.试剂盒阳性对照;2.福氏志贺菌 (CMCC51573) ;3.宋内志贺菌;4.沙门菌 (CMCC50098) ;5.肠炎沙门菌;6.试剂盒阴性对照;7.金黄色葡萄球菌;8.大肠杆菌;9.变形杆菌;10.阪崎肠杆菌
2. 3灵敏度试验经平板计数, 原始菌液浓度为108CFU / ml, 10倍倍比稀释至10- 8, 选择10- 6、10- 7、 10- 83个连续稀释度的菌悬液进行LAMP检测, 结果鼠伤寒沙门菌LAMP方法的灵敏度为170 CFU/ml, 福氏志贺菌LAMP方法的灵敏度为190 CFU/ml。见表1。
3讨论
目前, 国标中提供沙门菌、志贺菌属的检测方法为传统的分离培养, 包括增菌、分离、筛选可疑菌落、生化和血清学鉴定等多个步骤, 得到阴性结果至少需要3d, 检出沙门菌或志贺氏菌至少需要5 d。另外, 分离培养法的生化鉴定存在易受人为和试剂的影响因素或需要昂贵的微生物鉴定系统的不足之处, 血清学分型也存在效价低和易失效等缺点。国内外针对沙门菌和志贺菌的快速检测方法很多, 主要有酶联免疫吸附试验 ( ELISA) 、胶体金免疫测试条、聚合酶链反应 ( PCR) -凝胶电泳法、实时荧光PCR法、基因芯片等方法。各种方法都存在各自的优势和缺点。免疫学方法敏感度有待提高, 易出现假阳性; PCR技术具有灵敏度高、特异性好的优点, 但其对操作人员和操作环境的要求高, 需要专门的检测设备, 需要防止PCR扩增产物污染环境而引起以后的PCR假阳性; 而基因芯片的制作工艺复杂, 信号检测也需专门的仪器设备, 需解决诸如建立标准化程序、降低检测费用、简化样品制备和标记操作等一系列问题[3]。
LAMP技术是一种核酸恒温扩增新方法, 该方法依赖于能够分别识别靶序列上6个特异区域的4条或4条以上特异性引物和一种具有链置换特性的DNA聚合酶, 在等温 ( 65 ℃) 的条件下反应1 h即可高效、 快速、高特异地扩增靶序列, 可以通过浊度计、琼脂糖凝胶电泳, 甚至肉眼观察判断结果。具有操做简单、扩增反应极快、灵敏度高、特异性强、不需要昂贵的仪器 ( 只需普通电热恒温水浴锅) 、不需要繁琐的电泳紫外观察等过程而易普及等优点。广州华峰设计的LAMP反应管, 解决了“气溶胶”干扰, 实现了核酸扩增后不开盖肉眼直接判读检测结果, 摆脱了对仪器的依赖。 然而, 因为LAMP的检测限很低, 反应非常灵敏, 所以在使用LAMP检测时, 检测者一定要熟悉分离和鉴定细菌的无菌操作, 实验时应严格分区操作, 样品前处理要避免交叉污染, 加样、分装的时候应尽量避免产生气泡, 反应前应注意检查反应管是否盖紧, 避免发生假阳性[4]。该技术已被列为出口食品中致病菌检测的推荐方法 ( SNT 2754 - 2011) 。
本试验结合沙门菌和志贺菌通用增菌的优势, 经过1次增菌、1次测试便可同时完成对沙门菌和志贺菌的快速检测, 而且直接用肉眼判断结果, 从样品增菌到取得阴性结果报告可在24 h内全部完成。但LAMP法是对沙门菌和志贺菌的通用核酸检测, 对活菌或死菌的检测结果都会是阳性, 不能进一步鉴定分型和分离菌株, 所以需要将沙门菌和志贺菌的LAMP方法配合分离培养法进行检测, 增菌液LAMP检测发现阳性或弱阳性结果后, 都应进行后续分离培养法试验来鉴定分型和菌株分离, LAMP方法仅适合作为分离培养方法的有益补充而不能代替它。
总之, LAMP方法是一种简便、快速、灵敏的检测方法, 为基层疾病控制实验室提供了简易有效的沙门菌和志贺菌检测方法, 尤其适用于从业人员沙门菌和志贺菌的快速筛查, 具有较好的推广应用前景。
参考文献
[1]俞彩娥.沙门菌和志贺氏菌通用增菌液增菌效果实验观察[J].预防医学情报杂志, 2006 (3) :369-370.
[2]Hara-Kudo Y, Nemoto J, Ohtsuka K, et al.Sensitive and rapid det-ection of Verotoxin-producing Escherichia coli using loop-mediated isothermalamplification[J].J Med Microbiol, 2007, 56:398-406.
[3]曹际娟.食品微生物学与现代检测技术[M].辽宁师范大学出版社, 2006:150-187.
一例鼠伤寒沙门菌的检测结果分析 篇3
【关键词】伤寒沙门氏菌；鼠伤寒沙门氏菌；误报
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）09-0390-02
伤寒是古老的肠道传染病[1]，常由伤寒沙门菌、甲、乙、丙型副伤寒及鼠伤寒沙门菌等肠道致病菌引起，如不及时确诊和控制，造成环境、食品等污染会引起暴发流行。对此类病例实验室病原的确认数据将为临床的诊治和疫情控制提供可靠保障。
2011年5月11日，孝昌县第一人民医院上报了一例感染伤寒沙门氏菌的临床诊断病例。接到报告后，县疾控中心立即对5月5日出现持续三天的不规则发热，最高体温达到39.5度，出现腹痛、腹泻、便血，患者新鲜粪便和血液标本立即送实验室检验。5月15日检验人员经过反复实验和鉴别，病人粪便微生物检测结果为鼠伤寒沙门氏菌，并立即更正了疫情网报。病原学诊断过程如下：
1 材料和方法
1.1病人新鲜粪便、血液标本各一份
1.2 检测试剂
1.2.1 亚硒酸氢钠增菌培养基（SF）南京一基生化科技有限公司 有效期：20120412
1.2.2 葡萄糖胆盐肉汤培养基 杭州微生物试剂有限公司 有效期：20111216
1.2.3 哥伦比亚血平板 郑州博赛生物技术股份有限公司 有效期：20110922
1.2.4 SS琼脂 杭州微生物试剂有限公司 有效期：20120427
1.2.5 MC琼脂 杭州微生物试剂有限公司 有效期：20111209
1.2.6 三糖铁琼脂 杭州微生物试剂有限公司 有效期：20121023
1.2.7 肠杆菌科细菌生化鉴定管 杭州微生物试剂有效期：20111029
1.2.8 沙门氏菌因子血清 宁波天润生物药业 有效期：20120124
1.3 病人调查：病人的发病史、接触史、生活史、治疗过程。
1.4 检测方法
1.4.1 增菌分离培养[2]
1.4.1.1 血液标本
按1:10加入葡萄糖胆盐肉汤培养基，置于36℃±1℃ 孵育，分别于1d、2d、7d转种血琼脂平板，置36℃±1℃培养24h～48h。
1.4.1.2 粪便标本
取新鲜粪便标本1g接种于9ml亚硒酸氢钠增菌培养基（SF），置36℃±1℃培养18h～24h后，接种到SS和MC琼脂平板上，置36℃±1℃、18h～24h分离培养。
1.4.2 初步生化试验
自上述平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂斜面上于36±1℃分别培养18h～24h，观察生化反应。
1.4.3 形态染色
取三糖铁斜面上的菌苔做革兰氏染色。
1.4.4 生化试验
取三糖铁琼脂斜面上的菌苔接种到肠杆菌科细菌生化鉴定管中，于36±1℃分别培养，观察生化反应。
1.4.5 血清试验[3]
取符合沙门氏菌的三糖铁斜面上的菌苔做玻片凝集试验，并设盐水对照。挑取三糖铁斜面上菌苔，先用盐水做对照玻片凝集，盐水不凝集，再用O多价血清玻片凝集，O多价血清凝集；再依次用单因子血清做凝集试验，O抗原确定后，再用H因子血清凝集。
2 结果与讨论
2.1 结果
2.1.1 菌落形态
在血平板、MC平板上可见中等大小、无色半透明、表面光滑的菌落，菌落边缘整齐。在SS琼脂培养基平板上可见中等大小、无色半透明、中心黑褐色、表面光滑的菌落，菌落边缘整齐。为革兰氏阴性短杆菌。
2.1.2 生化结果
TSI反应结果：斜面不产酸，底层产酸，并产生气体，三糖铁琼脂中间变黑色即产生硫化氢。
生化鉴定：硫化氢+，靛基质-，pH7.2尿素-，氰化钾-，赖氨酸脱羧酶+，赖氨酸+，乌氨酸+，ONPG-，水杨苷-，棉子糖-，动力+。
2.1.3 血清凝集反应
O1、O4单价血清凝集；H抗原第1相i因子凝集，H抗原第2相1,2因子凝集。
2.1.4结果报告
通过菌落形态、革兰氏染色、生化试验、血清玻片凝集试验可以判断此患者感染为鼠伤寒沙门氏菌。
2.2 讨论
2.2.1 医院临床报告患者为伤寒，实验室诊断血清分型时，当多价血清凝集后，伤寒沙门氏菌血清因子未发生凝集现象，又重新对血清因子进行筛查，经过反复多次血清凝集试验，确定此患者为鼠伤寒沙门氏菌感染。
2.2.2 通过核查该病人粪便微生物培养记录，发现他们报告的结果为鼠伤寒沙门氏菌，两家实验室检测结果一致，进一步调查发现，由于医院临床医生的疏忽，将鼠伤寒沙门氏菌误报为伤寒沙门氏菌。
2.2.3临床医生的误报，可能影响患者的治愈过程。孝昌县为省级伤寒监测点，09年底曾经暴发过伤寒流行，这种误报可能会引发一系列的应急响应机制。
参考文献：
[1] 李碧华.伤寒菌苗研究现状[J].中国公共卫生杂志，1981；7（1）：35.
[2] WS 280-2008《伤寒和副伤寒诊断标准》.
[3] GB 4789.4-2010《食品安全国家标准-沙门氏菌检验》.
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沙门菌检测技术 篇4
当前，随着农产品与农副产品需求不断扩大，蔬菜种植及鸡（鸭）等经济型动物养殖规模正在不断扩大，市场竞争日趋激烈。从近年来农业及农副产品市场价格走势可以看出，蔬菜种植及经济型动物养殖的相对效益正在降低。如何提高这些农产品的生产效益，最大限度地挖掘增收潜力，已经是越来越多农民朋友极需解决的问题。从生态农业角度考虑，新型沼气生态大棚与鸡（鸭）益生菌养殖技术结合可成为农户致富的利器，这样，既可以为蔬菜生产提供优质有机肥，节约能源，达到降低成本的目的，又可以生产出无公害绿色农业和农副产品，以高质量带动提高产品单价，达到增加产出的目的。
新型沼气生态大棚与鸡（鸭）益生菌养殖技术结合是新型生态农业一项低风险、高效益，并且可行的生态农产品生产项目。新型沼气生态大棚是以沼气为能源，集蔬菜种植和畜牧生产为一体的新型生态大棚, 这种生态大棚的生产模式是，在大棚内饲养鸡（鸭）等经济类动物，用其粪便作原料制造沼气，利用沼气作燃料和照明的能源，通过燃烧沼气来取暖和照明，给大棚提温、保温和补充光照，对预防冻害，尤其花果期突遇寒流降温有明显的作用，可减少畸形果的发生。同时燃烧沼气还可以增加大棚里二氧化碳的浓度，有利于作物生长。此外，沼气池里的沼液和沼渣作绿色环保肥料，给蔬菜喂肥，沼液和沼渣的利用减少了化肥的使用量，大大提高了蔬菜生产的绿色环保水平。另外，大棚内鸡（鸭）采用发酵床养殖法，在大棚鸡舍内将稻草或者秸秆切到10到15公分长，一般铺30到45公分厚，再按稻草总量的5%，撒上没有污染过的土，和0.3%的粗盐或者1%沸石，因为粗盐（沸石）中含有丰富的矿物质，有利于微生物的繁殖和分解稻草。然后按每平方米一定比例的少量益生菌液洒上去，先进行前期发酵，一周以后可以放入雏鸡（鸭），鸡（鸭）的粪便在发酵床上一般只需三天就会被微生物分解，粪便给微生物提供了丰富营养，促使有益菌不断繁殖，形成菌体蛋白，鸡(鸭)吃了这些菌体蛋白不但补充了营养，还能提高免疫力。在鸡(鸭)养殖过程中由，在鸡(鸭)的饲料和饮水中也配套添加微生态制剂（制剂主要是由安全可靠的芽孢杆菌、放线菌和乳酸菌等等优化组合而成。芽孢杆菌能促进食料中养分的转化，便于吸收；放线菌在肠胃的环境下能产生适量的抗生物质，可预防肠道疾病、增强禽体免疫力；乳酸菌可产生适量的乳酸调节肠胃的碱性环境，促进消化物的吸收），这样可使鸡(鸭)胃肠道内存在大量有益菌，这些有益菌中的一些纤维素酶、半纤维素酶类能够分解秸秆中纤维素、半纤维素等，采用这种方法养殖，可以增加粗饲料的比例，减少精料用量，其相应就降低了饲养成本。鸡生活在发酵床上，更健康，不易生病，从而减少了医药成本。由于养殖过程中运用了微生物（益生菌）技术，经微生物作用后，养殖场地和鸡（鸭）排泄臭味大幅度减少，禽群的免疫力和抗病能力也能得到增强，畜禽的疾病明显减少，禽群产蛋率提高，饲料转化率提高，从而显著地提高了养殖的经济效益。更重要的是，鸡、鸭等的粪便做为蔬菜类肥料，达到了资源循环利用，既生态，又环保，更降低成本。将新型沼气生态大棚与鸡（鸭）益生菌养殖技术结合，是将科学种植、科学养殖技术有机结合成一个整体，两种技术均采用有机农业科学种植、养殖技术，不用化肥、化学饲料和农药，降低了生产成本，由于在生产过程中不用或严格控制农业化学类原料的使用，使水体中的农业化学物质含量降低，环境质量也得到相应改善。通过养殖过程中动物有机废物循环利用而使这些废物变成农作物的营养源，土壤有机质的增加使土壤保水保肥能力增强，有机肥料养分比较齐全，能充分满足作物对养分的需求，从而在改善了土壤的同时，也解决了有机废物的处理问题，能最大限度的保护自然资源，更可减少化学物质对鸡（鸭）等经济型动物、植物和果实的影响，提高了农产品质量，又因其不用或极少使用化学原料，使生产投资大大减少，但产品食用安全可靠性却得到大幅度提高，产品深受消费者的喜爱，其销售价可大大高出常规农业产品，进而单位面积内的经济效益得到提高，即使农民朋友利用科技获得了较高的经济效益。
“双锋出鞘，致富法宝”------强强联手，新型沼气生态大棚与鸡（鸭）益生菌养殖技术相结合将会惠泽更多农户，使农民朋友走上致富新路。
沙门子收费站消防演练总结 篇5
为了使站全体员工了解消防基础知识，提高安全防范意识，增强自我保护能力，掌握对突发火灾的应变、扑救技能，学会灭火以及有序地进行人员、车辆的疏散处理，确保人员的生命及财产安全，2013年6月7日xxxxx以各班组为单位组织了一次实战的全员消防演练。
本次全员消防演练由站领导亲自对消防演练的指挥。7日上午组织班组长及相关人员召开了演练沟通协调会议，并对消防演练工作进行了周密的部署安排。下午10点30分，在各班组人员到位的情况下，首先安全员以班组为单位列队，站长郝游俊对参加演练人员讲解了本次演练的目的，并宣布演练开始。各班组按照预定方案，紧张、有序的进行。
演练结束后，站长对此次消防演练做了点评，对于演练结果给予了充分的肯定，要求大家要进一步提高安全生产责任意识，并宣布消防演练取得了圆满成功。
沙门菌检测技术 篇6
资料与方法
监测对象:选择天山区1家三甲医院、3家社区服务中心作为志贺菌、沙门菌监测点,以就诊的急性重症腹泻患者为监测对象,每年检测400例以上腹泻患者的粪便样品。
监测方法:肠道门诊建立专册登记,按照监测病例的定义进行严格诊断;对符合对象进行登记和对重症腹泻病患者进行采样监测,用棉签采集新鲜粪便的浓血、黏液、水样便或稀便部分,采样量5~10 g,置于肛试管内,当天送区疾控中心进行监测。
结果
急性腹泻患者志贺菌监测情况分析:2013-2015年共检测1 363份标本,检出志贺菌、沙门菌共40株,阳性检出率2.93%,其中检出沙门菌15株,检出志贺菌25株,各年度情况见表1。
时间分布:不同月份急性腹泻患者志贺菌检出情况分析:除5月份和10月份检出阳性率较低,阳性率最高为6、7月份,见表2。
天山区志贺菌阳性腹泻患者志贺菌实验室分型情况,见表3。
天山区沙门菌阳性腹泻患者沙门菌实验室分型情况,见表4。
讨论
本次调查2013-2015年共检测1 363分标本,检出志贺菌、沙门菌共40株,阳性检出率2.93%,其中15例沙门菌阳性患者均否认有相同患者接触史、饮生水史,有2人家中饲养宠物,有3例患者述邻居家中饲养宠物。15例患者中有8例(53.33%)有可疑饮食史,其中2例食用禽类,2例食用蛋类,2例食用动物肉类制品,2例食用海产品类,食用方式多为生、半生品和隔夜未回锅菜。25例志贺菌阳性患者5岁以下9例,其大多数与夏季食物储存不当和食用凉品有关。另外夏秋季节蚊蝇滋生繁多,导致食品受污染的机会增多,增加人群感染机会;年龄集中分布在5岁以下儿童,这与何战英等人研究结果一致[2],这可能与人群的防病意识薄弱,饮食卫生以及居住卫生环境差有关。
通过流行病学调查可以间接提示沙门菌感染和食品,特别是肉制品的污染可能有密切关系,进而提示我们对食品加工、贮藏、运输等各个方面做好监督工作,加大督查力度,同时更要提高市民对食品卫生以及对食物加工过程的安全意识,彻底煮熟以动物为源的食物,特别是禽类、肉类和蛋类,以防止食源性疾病的发生。
参考文献
[1]廖斌,李怡,侯敏,等.一起阿柏丁沙门菌引起食物中毒的实验室检测[J].内蒙古中医药,2011,30(4):115-116.
蛋鸡沙门氏菌病诊治技术 篇7
关键词：蛋鸡；沙门氏菌病；诊治
中图分类号： S858.31 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2015.06.033
1 病原特性
鸡沙门氏菌是肠杆菌科的一属，该属细菌抗原结构复杂，目前共发现四千多个血清型，我国已报道的血清型有240种以上。在自然条件下，沙门氏菌的抵抗力较强，在土壤中可以存活14个月，在鸡舍内可以生存到第二年。但是，沙门氏菌不耐热，煮沸5分钟可杀死，在70℃下20分钟可致死，高锰酸钾溶液、甲酚皂溶液（来苏儿）、甲醛溶液和苯酚（石炭酸）等消毒液都能迅速将其杀死。鸡沙门氏菌是胞内寄生菌，易产生耐药性，当遇到抗生素、磺胺类等药物的攻击时，可躲进动物体细胞内避开药物的作用，使该病难以治愈。
2 流行特点
鸡副伤寒通常引起成年鸡发生急性或慢性败血病，但以雏鸡死亡率为高。鸡副伤寒沙门氏菌主要感染雏鸡和火鸡，在孵化器内感染较多，1月龄以上的鸡有较强的抵抗力，青年鸡和成年鸡很少发生急性副伤寒。鸡副伤寒沙门氏菌感染的特征是细菌在肠道无症状性定殖，有时持续到屠宰导致加工的胴体污染，因此鸡副伤寒容易导致人类食源性疾病的发生。
近年来，由于密集饲养、鸡品种易感性差异、病原菌的毒力与嗜性不同、并发感染和各种应激因素的影响，使以往主要感染雏鸡的鸡白痢沙门氏菌出现了易感日龄增大和临床病型多样化的趋势，导致整个养鸡周期都受危害，严重影响产蛋率，且可垂直传播，几乎无法彻底消除。
沙门氏菌病严重降低了鸡群的均匀度，病程延续到成年鸡时，可造成蛋鸡推迟开产，同时产蛋率降低20%左右，没有产蛋高峰，蛋壳质量不好，破损蛋增多，给养鸡户带来较大的损失，对种鸡而言，种蛋的受精率、孵化率降低，雏鸡死亡率也高。
3 诊断方法
鸡沙门氏菌病的检测方法很多，包括血清学鉴定、平板凝集法（PAT）、卵黄琼脂扩散试验、酶免疫测定法、ELISA法、等位基因特异性PCR技术、单克隆抗体和LPS敏化RBC等，但基层最为常用的检测方法是平板凝集法。生产实践中，人们在平板凝集试验基础上做了一定的改进，获得了更简便、实用、快速的凝集试验法。例如，利用稀释血清凝集反应的方法有试管法、血清平板凝集法、卵黄平板凝集法、微孔板凝集法。利用全血反应的有纸片法和全血平板凝集法等，产蛋鸡群还可用卵黄琼脂扩散试验检测抗体。进行蛋鸡净化检验时，可根据饲养条件、日龄、血清抗体的消长规律，选用不同血清学方法。
4综合防治
4.1 做好鸡群净化
有条件的养殖场要坚持自繁自养，谨慎从外地引进种蛋。小规模养殖户，要选择正规种鸡场购买雏鸡，尽量不要从外地购买青年鸡。临床上，因引进的青年鸡未做免疫和隐性感染而导致发病的情况时有发生。对健康种鸡群，每年春、秋两季要定期用血清凝集试验进行全面检疫和不定期进行抽查检疫。对40日龄以上的中雏，也可进行检疫，以淘汰阳性鸡和可疑鸡。
4.2 做好环境消毒
鸡舍内要进行严格的消毒，正常情况下每周消毒1次，发病情况下每周消毒2次，在免疫前后3天不消毒。鸡舍腾空后要彻底清扫，洗刷和消毒用具，而后熏蒸消毒。消毒后至少闲置2周以上才可进鸡。进鸡前5天再熏蒸消毒1次。蛋鸡消毒常用的药物有0.3%过氧乙酸、0.1%新洁尔灭和0.1%次氯酸钠等。
4.3 加强饲养管理
蛋鸡场应重视饲养管理，合理配制饲料，提高雏鸡营养水平，并提供合适的光照、温度和通风，减少应激因素，提高蛋鸡的抵抗力。若发现患鸡，要立即隔离消毒。调查结果表明，不同鸡舍感染率也有差异，饲养管理条件相对落后、预防措施不完善的养鸡场发病率明显高于标准鸡场。
4.4 配合药物治疗
多数种鸡养殖企业采用定期投喂大剂量抗菌药物来暂时性预防鸡沙门氏菌病的发生。例如，在鸡白痢易感期，用0.02%呋喃唑酮饮水，或在雏鸡粉料中按0.02%的比例拌入呋喃唑酮或按0.5%的比例加入磺胺类药物，有利于控制鸡白痢的发生。成年鸡可首选庆大霉素、氯霉素、新霉素、卡那霉素和诺氟沙星等，按使用说明饮水或混料喂服，可获得较好的疗效，但迄今尚未发现任何一种或几种药物能够使沙门氏菌病从鸡群中清除。近年来，鸡沙门氏菌耐药性菌株明显增多，因此建议养殖户不要盲目用药，要根据药敏试验结果选择敏感药物及时投喂，或者选择中药治疗，其配方：雄黄10%、藿香10%、滑石10%、白头翁10%、马齿苋15%、黄柏15%、马尾莲15%、诃子15%，共为细末，按日粮的5%添加，治愈率较高；或用大蒜捣泥，加5倍量清水调和，0.5～1毫升/天，分3～4次滴服，疗效显著。
目前，鸡沙门氏菌病还没有有效的疫苗，因此要在全国范围内加以防范，以血清凝集试验进行定期检疫，淘汰阳性鸡和认真执行兽医卫生综合防治措施，同时在育雏、育成和产蛋阶段，选择敏感药物及时投喂。具体到各养鸡场（户），则应制订和实施严格的卫生管理制度，做好沙门氏菌病的防治和净化工作。
1例鸽沙门菌病的诊治和体会 篇8
关键词：鸽,沙门菌,剖检,PCR检测,治疗
鸽沙门菌病, 又名鸽副伤寒, 是由沙门菌引起的一种呈地区性流行的急性或慢性传染病, 是引起鸽死亡的主要传染病之一。近年来, 常见有鸽感染此病的报道, 主要表现为精神沉郁、羽毛松乱、下痢、翅膀麻痹、头向后仰等临床症状, 具有较高的死亡率, 乳鸽尤为严重, 给养鸽业带来极大的经济损失。在实践中主要是根据临床症状对鸽沙门菌病进行诊断, 极易与鸽副黏病毒病 (鸽瘟) 相混淆而误判。近期, 笔者对山东省临沂市的1例疑似沙门菌病的肉鸽进行诊断, 通过临床症状、病理剖检变化及实验室诊断确诊为神经型鸽沙门菌病, 现报道如下。
1 发病情况
2013年下半年, 山东省临沂市某鸽场的260只肉鸽群发生以神经症状为主要特征的疾病, 发病初期死亡率较低, 随着病程的延长, 病鸽死亡率升高。之前鸽群未免疫新城疫疫苗, 发病时曾使用抗病毒的中药和西药, 未见明显效果, 期间未使用抗菌药。截至就诊时间, 病程约20 d, 发病鸽共125只, 发病率为48.1%, 死亡42只, 病死率为33.6%。
2 临床症状
病鸽初期表现为行动迟缓, 食欲减退, 喝水增多, 排水样稀粪或绿色粪便等现象;不久病鸽表现为羽毛杂乱, 翅膀收缩无力, 一侧或两侧翅膀麻痹;严重者出现头向后仰、颈部扭成S型、头颈部震颤等神经症状, 受到惊吓, 呈阵发性发作, 甚至倒地抽搐;患病严重的病鸽机体迅速消瘦, 脱水衰竭后死亡。
3 剖检变化
剖检5只病鸽, 病理变化基本一致, 除了脑膜可见明显充血及轻度水肿, 十二指肠充血、出血, 盲肠扩张外, 其他没有明显的病理变化。脾脏和肾脏多见肿大, 肝脏发生肿大、充血, 心脏偶尔可见细条状的白色病灶。剖检的病鸽中, 肝脏没有出现特征性的灰白色或黄白色病灶, 而心脏的细条状白色病灶可能具有重要诊断意义。病鸽剖检变化不明显, 给鸽沙门菌病的诊断带来困难, 尤其容易误判为鸽副黏病毒病。
4 PCR诊断
以无菌操作采集病鸽的肝脏、心脏和脑组织作为病料, 选用报道的沙门菌通用引物进行PCR扩增[1,2], 引物序列:上游引物5'-CTTTGGTCGTA-AAATAAGGCG-3', 下游引物5'-TGCCCAAAG-CAGAGAGATTC-3', 由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。反应体系 (25μL) :10×Buffer2.5μL, 2.5 mmol/L d NTP 2μL, 10μmol/L上、下游引物各1μL, 5 U/μL Taq DNA聚合酶0.2μL, 模板 (用上海生工生物工程技术服务有限公司生产的动物基因组DNA抽提试剂盒提取) 3μL, 最后加灭菌水至25μL。反应条件:95℃5 min;94℃30 s, 55℃30 s, 72℃15 s, 共30个循环;72℃10 min。对PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳。从病鸽的心脏和脑组织中扩增出预期大小为260 bp的目的片段, 而肝脏的PCR结果可疑 (见图1) ;优化PCR条件和体系后, 在肝脏中也扩增出大小为260 bp的目的片段 (见图2) 。
5 治疗
1.阴性对照;M.DL-2 000 Marker;2.肝脏;3.心脏;4.脑组织。
1.肝脏模板1μL, 退火56℃;2.肝脏模板0.5μL, 退火56℃;M.DL-2 000 Marker。
全群鸽子用0.02%强力霉素饮水, 连用5 d;发病鸽同时采用氟苯尼考注射液按照每千克体重20 mg肌肉注射, 每天1次, 连用3 d;同时添加电解多种维生素饮水以增强鸽子的抵抗力。用药后第2天死亡率降低, 3 d后病情明显减轻, 疫情得到控制。
6 诊治体会
PCR诊断具有耗时短、成本低、诊断准确的优点, 在快速诊断和早期治疗方面具有特别重要的意义[2]。但此类方法需要特殊的仪器和较高的技术水平, 在实践中的应用受到影响, 养殖场可以到具备条件的县级或市级动物疾病控制中心进行诊断。
PCR结果表明, 病鸽的肝脏、心脏和脑组织中均存在沙门菌, 其中心脏和脑组织中的检测结果较理想, 肝脏的检测结果较差。建议用PCR检测鸽沙门菌病时, 选用多个脏器病料用于检测, 如肝脏、心脏、卵巢和脑组织, 从而提高检测的准确性。
鸽沙门菌病从临床症状上分析, 尤其是神经症状, 极易与鸽副黏病毒病相混淆而误判, 本病例的场主就犯了这个错误, 带来严重的经济损失。笔者认为, 可以从剖检变化上来区分鸽沙门菌病和鸽副黏病毒病, 主要看脏器的出血性变化, 一般鸽沙门菌病病情较轻, 鸽副黏病毒病病情严重。本病例中, 心脏的条状白色病灶对于鸽沙门菌病具有重要的诊断意义, 对于混合感染的诊断, 必须通过病原学诊断技术, 如病原的分离培养、PCR检测技术等。
对于鸽沙门菌病的治疗, 常用的广谱和抗革兰阴性菌抗菌药均有作用, 该病例选用的广谱抗菌药强力霉素和氟苯尼考具有很好的治疗效果。由于沙门菌耐药性的问题, 有条件的可以通过药敏试验筛选高敏药物, 避免盲目用药而延误病情。在不能确定是鸽沙门菌病还是鸽副黏病毒病的情况下, 使用抗病毒药的同时, 一定要配合抗菌治疗。
建议发病的鸽场实行全进全出的饲养方式, 加强环境消毒, 消灭可能存在的病原, 对于种鸽场尤为重要, 因为沙门菌病可以垂直传播, 病鸽治愈后可以长期存在于卵巢中, 由于种蛋带菌而传给后代, 造成早期感染。成年鸽一般呈隐性感染或带菌者, 粪便中持续排出病原菌, 危害鸽群[3]。
鸽沙门菌病的发生多与昼夜温差变化大、养殖密度过大、舍内通风不良等应激因素刺激有关, 还与养殖环境潮湿、饲料饮水不洁有关。因此, 要预防鸽沙门菌病, 必须加强鸽场的饲养管理和环境卫生, 给予营养均衡的饲料, 保持饲料和饮水的清洁卫生, 减少导致发病的各种诱因, 同时要注意定期进行药物预防[4]。
参考文献
[1]MAKINO S, KURAZONO H, CHONGSANGUAM M, et al.Establishment of the PCR system specific to Salmonella spp.and its application f or the inspection of food and fecal samples[J].J Vet Med Sci, 1999, 61 (11) :1245-1247.
[2]周延庆, 刘蓓蓓, 潘志明, 等.动物粪便沙门菌PCR检测技术的研究[J].动物医学进展, 2010, 31 (S) :82-86.
[3]吴宏新, 吴家富, 龚筱丽.一起鸽子感染沙门氏菌病的诊治体会[J].畜牧兽医杂志, 2011, 30 (6) :120-121.
沙门菌检测技术 篇9
1 临床症状
该场共饲养貉300多只, 其中种貉50多只, 仔貉250只。种貉无明显症状, 主要是仔貉发病, 大群发病20 d, 一共100多只陆续发病, 发病笼舍集中, 就诊时已死亡70多只。就诊前2周前接种过犬瘟热疫苗, 接种后发病加剧, 仅接种后仔貉死亡多达50多只, 占死亡总数的71%。
各日龄仔貉均有发病, 体温稍有升高, 病后食欲下降, 少数有明显眼屎。发病仔貉主要表现为腹泻, 开始排黄色稀粪, 后来喷射灰绿色稀粪, 最后排红色或黑色粪便, 最终死亡。死前呼吸困难, 个别貉全身发抖。多数貉发病3～4 d死亡, 其他病程7 d后以死亡转归。畜主曾用阿莫西林与黄芪多糖拌料饲喂3 d, 基本无效。后又用氨苄西林配合病毒康皮下注射, 有几例好转后又复发。
2 剖解变化
肺脏严重瘀血, 有泡沫;心肌松软;肝脏肿大, 有针尖状出血点;脾脏色淡, 肿大不明显;肾脏肿大, 被膜不易剥离, 肾乳头有出血点;膀胱黏膜出血;胃内容物稀薄, 黏膜出血, 肠道黏膜严重出血, 肠系膜淋巴结肿大。
3 实验室诊断
3.1 病料涂片
取肺脏、肝脏、脾脏和血液等病料涂片, 采用革兰染色后镜检。结果发现肺脏内有革兰阳性双球菌和革兰阴性短杆菌, 肺脏细胞明显空泡化;肝脏细胞肿大, 部分细胞破碎, 有革兰阴性短杆菌;脾脏内细胞肥大, 少数细胞崩解;血液内红细胞低, 血红蛋白、淋巴细胞相对较多, 有革兰阴性杆菌。
3.2 细菌培养
将病料分别接种于普通琼脂和SS培养基上。在37℃培养24 h。普通琼脂上可见圆形、光滑、湿润的菌落;SS培养基上为黑色、圆形、光滑的菌落。挑取培养的细菌, 革兰染色后镜检, 证实为革兰阴性杆菌, 同病料涂片基本一致。
3.3 包涵体检查
在载玻片上滴一滴生理盐水, 刮取膀胱黏膜上皮细胞制成涂片, 采用苏木精-伊红染色, 油镜下观察发现胞浆内有包涵体。
3.4 药敏试验
选用头孢噻肟、头孢他啶、氨苄西林、新霉素、强力霉素、氟苯尼考、阿莫西林、庆大霉素、阿米卡星、恩诺沙星、替米考星、土霉素等12种药物进行药敏试验。其中头孢曲松、阿米卡星及新霉素高度敏感, 其他各药抑菌圈不明显。
4 诊断
经过临床症状、解剖变化和实验室诊断综合考虑, 最终确诊为肠炎型犬瘟热继发沙门菌感染, 并立即采取措施防治。
5 防治措施
病貉皮下注射犬瘟热高免血清, 按每千克体重2 m L计, 连用3 d。全群用新霉素, 按每千克体重10 mg拌料, 连用3～5 d;配合皮下注射头孢曲松25 mg, 连用3～5 d。左旋咪唑片按每千克体重3 mg拌料, 连用1周。
对笼舍和用具进行消毒。笼舍采用3%漂白粉消毒, 用具用2%苛性钠溶液浸泡3～5 min, 每天1次。对于病死的貉予以焚烧或深埋。
6 讨论
采取以上措施后, 大群再无新增病例。治疗初期仍有零星死亡, 可能是由于沙门菌感染引发全身的毒血症导致。
经过临床症状与包涵体检查确诊为肠炎型犬瘟热, 全群接种犬瘟热疫苗后出现大批死亡, 可能是在犬瘟热病毒潜伏期接种所致。经畜主介绍, 就诊前曾用黄芪多糖拌料, 无明显效果, 笔者经过临床实践发现, 黄芪多糖通过调节免疫力抗病毒, 需长期使用才有效, 发病后使用往往效果不理想;左旋咪唑是可靠的免疫增强剂, 其价格低廉、效果确实, 在临床上应用较多。在病料涂片中, 除确诊为沙门菌的革兰阴性菌外, 还发现了革兰阳性双球菌, 笔者认为该菌是导致病貉呼吸困难的致病菌, 该菌为条件致病菌且致病力不强, 由于全群呼吸症状并不典型, 故未将其作为主要致病原;沙门菌是肠道的常在菌, 肠炎型犬瘟热暴发后机体抵抗力下降, 继发沙门菌感染是导致病貉严重腹泻最终致死的主因。沙门菌主要致病力在于产生大量的内毒素, 肝脏细胞的肿大、部分变性破碎, 且在肝脏中发现了该菌, 证明了内毒素的存在。血液中观察到革兰阴性杆菌进一步说明沙门菌的感染导致了全身的菌血症和毒血症, 最终导致了病貉的死亡。
沙门菌检测技术 篇10
1 临床资料
1.1 一般资料
来源于我地区2008年12月至2010年2月血液及骨髓培养的阳性标本中、粪便、尿液分离出96株沙门菌。
1.2 药敏纸片
药敏纸片:选用9种抗生素纸片:环丙沙星、头孢噻肟、氯霉素、诺氟沙星、丁胺卡那霉素、头孢他啶、哌拉西林、氨苄西林、复方新诺明、链霉素。诊断血清购自卫生部兰州生物制品研究所。经标准菌株鉴定合格后使用。药敏纸片由杭州微生物厂生产。均在有效期内使用。
1.3 细菌分离鉴定及药敏结果判定
参考高等医学院校教材《全国临床检验操作规程》、《微生物学和微生物学检验》及进行。药敏试验采用KB琼脂扩散法。沙门菌血清学鉴定主要借助于沙门菌O抗原多价血清与O、H、Vi抗原的单价因子血清。甲型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌和伤寒沙门菌分别属于A、B、D血清群。培养基及试剂ss增菌液、ss琼脂、克氏双糖培养基、MH琼脂。
1.4 血清学诊断
肥达试验:用已知的伤寒沙门菌0、H抗原,甲乙丙副伤寒沙门菌H抗原稀释后与被检血清作定量凝集试验,以检测患者血清中抗体的含量,来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热症并判别沙门菌的种类。
2 结果
2.1 96株沙门菌血清学鉴定菌型分布
通过位相变异法12株菌株第2相H抗原凝集均呈阳性,分别鉴定出山夫登堡沙门菌33株、鼠伤寒沙门菌12株、德尔卑沙门菌25株、猪霍乱沙门菌8株、阿贡纳沙门菌2株、汤卜逊沙门菌2株和伦敦沙门菌1株、科鲍尔沙门氏菌、吉韦沙门氏菌和戈尔查沙门氏菌各1株。见表1。
2.2 96株沙门菌药敏结果及耐药率分析
沙门菌对头孢噻肟的耐药率为0,而对环丙沙星、氨曲南耐药率仅仅为6.25%、9.37%,但对链霉素的耐药率最高,达63.54%,应引起重视。见表2。
3 讨论
近年来,随着抗菌药物的不断更新换代,监测细菌的耐药性对抗菌药物的合理使用显得至关重要,因此必须提高对医院感染的监测,及时掌握细菌耐药的最新动态,以避免抗菌药物的滥用,为合理使用抗生素提供依据[1]。
关于沙门菌的药物敏感的研究目前国内外的结果及观点不尽相同[2]。沙门菌耐药菌株的出现,特别是多重耐药菌株的出现,使得临床治疗更为棘手。因此为防止耐药菌的进一步扩大,必须重视病原体检查,积极做血液、痰液或咽拭子细菌培养和药敏试验。检验室要及时反馈病原体及药敏结果,临床医生应及时了解本科室细菌分布及耐药情况,正确掌握抗生素经验性用药原则。如果盲目运用抗生素,不仅延误治疗,而且增加再次感染的危险[3]。
本研究的细菌菌型鉴定及药敏试验结果发现,通过位相变异法12株菌株第2相H抗原凝集均呈阳性,分别鉴定出山夫登堡沙门菌33株、鼠伤寒沙门菌12株、德尔卑沙门菌25株、猪霍乱沙门菌8株、阿贡纳沙门菌2株、汤卜逊沙门菌2株和伦敦沙门菌1株、科鲍尔沙门氏菌、吉韦沙门氏菌和戈尔查沙门氏菌各1株。沙门菌对头孢噻肟的耐药率为0,而对环丙沙星、氨曲南耐药率仅仅为6.25%、9.37%,但对链霉素的耐药率最高,达63.54%,应引起重视。
药敏试验虽对临床上有一定的指导意义,但临床用药仍需结合药理和实际病情进行更多的治疗对照研究。实验室作为这一研究的组成部分,只有对其药敏情况持续系统地监测,才能更好地为临床提供资料。
参考文献
[1]李梦东,王宇明.实用传染病学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2004:762～769.
[2]叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M].第2版.南京:东南大学出版社出版,2005:22～27.