大蒜提取物抑菌活性

2024-08-19

大蒜提取物抑菌活性（精选9篇）

大蒜提取物抑菌活性篇1

近年来随着抗生素在临床上的广泛应用大大降低了细菌感染性疾病的发生率, 但抗生素的过敏反应、菌群失调以及耐药性问题的日趋严重, 促使研究者寻找新的抑菌资源[1]。由于中草药具有天然廉价、副作用小、抑菌、低毒、不易产生耐药性等特点而备受青睐, 研究抑菌中草药对于细菌性疾病的防治具有重要意义[2]。经研究发现:大蒜 (AlliumSativum L.) 对化脓性球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、幽门螺旋杆菌等多种细菌和真菌均有明显的抑制或杀灭作用[3], 但由于其生吃时口感不好, 人们通常都将其加热后再食用。本文研究了大蒜水溶液对四种常见细菌抑菌活性的热稳定性, 为人们在日常生活中食用大蒜预防常见的细菌感染提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

细菌菌种:金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌。上述菌种由本院病原中心提供。

大蒜:在农贸市场买回的白皮大蒜。

培养基:琼脂培养基

1.2 实验方法

1.2.1 琼脂平板的制备

将细菌培养皿洗净, 放入高压灭菌锅中以15 MPa, 200℃灭菌30min, 再放入烘箱以210℃烘烤2小时, 冷却备用;在电子秤上称取营养琼脂15g, 倒入已装了400ml蒸馏水的500ml锥形烧瓶中, 再加入一小勺琼脂粉, 瓶口用牛皮纸细线密封好, 放入高压灭菌锅中以15MPa, 200℃灭菌30min, 在电炉上煮沸, 备用。在超净工作台上趁热将琼脂液倒入已灭菌的细菌培养皿, 冷却备用。

1.2.2 大蒜水溶液的制备

大蒜去皮和芽, 用手术刀将其切碎, 在电子秤上称取2g, 放入研钵, 用移液管取5 ml无菌蒸馏水加入研钵, 研磨至浆状;再以3500r/min离心10 min, 取其淡黄色上清液为28% (质量百分比浓度, 下同) 大蒜水溶液, 稀释成以下浓度:14.3%, 7.2%, 3.6%, 1.8%。

1.2.3 药敏纸片的制备

用打孔器将常规滤纸打成直径5 mm的小圆纸片, 放入高压灭菌锅中以15MPa, 200℃灭菌30min, 烘干备用。

1.2.4 大蒜水溶液的加热处理

将制备好的不同质量百分比浓度的大蒜水溶液分别在40℃, 60℃, 80℃, 100℃下恒温水浴10min, 冷却至室温 (约20℃) 后, 将已灭菌的药敏纸片放入其中浸泡30min, 紫外线灭菌30min。

1.2.5 抑菌实验

在无菌琼脂平板上采用密集画线法接种上金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌等菌种;将每个涂菌平板等分成4个区域后贴上已灭菌的药敏纸片, 并做好标记;滤纸片之间距离应基本相等, 各纸片中心相距应大于24mm, 纸片距平板内缘应大于15mm[4];平板置于36℃的孵箱中培养24小时后取出, 测量滤纸片周围抑菌圈直径。阳性标准:3次重复试验抑菌环直径均达到7mm以上者为有抑菌作用, 阴性对照组 (无菌蒸馏水) 应无抑菌环产生, 否则试验无效。抑菌直径为每个培养皿上所形成的3个抑菌环直径的平均数。参照北京药品检验所提供的常规抗生素药敏抑菌圈标准, 抑菌圈在15 mm以上为抑菌能力强, 在10~15mm为抑菌能力较强, 10mm以下为抑菌能力弱[5]。

2 结果

80℃以下加热处理28.6%大蒜水溶液对金葡球菌均有强的抑菌作用。100℃以下加热处理的14.3%大蒜水溶液对金葡球菌均有较强的抑菌作用。7.2%大蒜水溶液只在40℃加热处理时, 对金葡球菌有弱的抑菌作用。大蒜水溶液浓度低到3.6%和1.8%时未见抑制金葡球菌的作用。在抑制金葡球菌的大蒜水溶液有效浓度时, 加热处理大蒜水溶液的温度增高, 大蒜水溶液的抑菌作用随之减弱。见表1。

100℃以下 (含100℃) 加热处理28.6%的大蒜水溶液对枯草杆菌均有强的抑菌作用;80℃以下 (含80℃) 加热处理的14.3%大蒜水溶液对枯草杆菌均有较强的抑菌作用;7.2%、3.6%和1.8%大蒜水溶液在80℃ (含80℃) 以下加热处理时, 对枯草杆菌有弱的抑菌作用;在抑制枯草杆菌的大蒜水溶液有效浓度时, 加热处理大蒜水溶液的温度增高, 大蒜水溶液的抑菌作用随之减弱。见表2。

100℃以下 (含100℃) 加热处理28.6%大蒜水溶液对大肠杆菌均有较强的抑菌作用;80℃以下 (含80℃) 加热处理的14.3%大蒜水溶液对大肠杆菌均有较弱的抑菌作用;7.2%和3.6%大蒜水溶液只在40℃加热处理时, 对大肠杆菌有弱的抑菌作用;大蒜水溶液浓度低到1.8%时未见抑制大肠杆菌的作用。在抑制大肠杆菌的大蒜水溶液有效浓度时, 加热处理大蒜水溶液的温度增高, 大蒜水溶液的抑菌作用随之减弱。见表3。

40℃加热处理28.6%大蒜水溶液对痢疾杆菌均有强的抑菌作用;加热处理的温度增高, 28.6%大蒜水溶液的抑菌作用随之减弱。80℃以下 (含80℃) 加热处理的14.3%大蒜水溶液对痢疾杆菌均有较弱的抑菌作用;7.2%大蒜水溶液只在60℃以下 (含60℃) 加热处理时, 对痢疾杆菌有弱的抑菌作用;大蒜水溶液浓度低到3.6%和1.8%时未见抑制痢疾杆菌的作用。在抑制痢疾杆菌的大蒜水溶液有效浓度时, 加热处理大蒜水溶液的温度增高, 大蒜水溶液的抑菌作用随之减弱。见表4。

3 讨论

不同加热温度的大蒜水溶液在质量百分比浓度为7.2%及以上浓度时, 对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌和痢疾杆菌4种实验菌都有一定的抑制作用, 且抑制作用随大蒜水溶液浓度升高而增强。

大蒜水溶液浓度低至1.8%时仍能抑制枯草杆菌, 说明对其抑菌作用更强。

大蒜水溶液在28.6%浓度时其抑菌活性在100℃以内具有较好的热稳定性。

40℃加热处理的大蒜水溶液抑菌作用强, 100℃加热处理只有在浓度较高时才具有较强的抑菌活性, 说明加热处理大蒜水溶液温度高低对其抑菌作用有明显影响, 随着加热处理温度的升高大蒜水溶液抑菌作用逐渐减弱。提示要充分发挥大蒜的抑菌作用, 不宜对其加热过高。

参考文献

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[5]黄小燕.4种百合科植物抑菌作用[J].贵州师范大学学报 (自然科学版) , 2000, 18 (2) , 19-20.

大蒜提取物抑菌活性篇2

苦楝果实提取物对几种芽孢杆菌的抑菌活性

将采摘的苦楝果实烘干、粉碎后,以甲醇为溶剂,用超声波法提取后,配成不同浓度的苦楝果实提取液,测定其对巨大芽孢杆菌、短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌4种芽孢杆菌的.抑菌圈直径和抑菌百分率.结果表明:苦楝果实提取液浓度越高,其抑菌作用越强.苦楝果实提取液对枯草芽孢杆菌的抑菌活性最大,对短芽孢杆菌的次之,对巨大芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的抑菌活性最小.

作者：翟兴礼王启明王立娟作者单位：商丘师范学院生物系,河南,商丘,476000 刊名：安徽农业科学 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES 年，卷(期)： 34(9) 分类号：Q936 关键词：苦楝芽孢杆菌抑菌活性

大蒜提取物抑菌活性篇3

关键词：红菊苣；总黄酮；提取工艺；超声波辅助提取；抗菌活性

中图分类号：S636.901；R284.1 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）03-0251-02

红菊苣来源于菊科菊苣属中的多年生草本植物菊苣，是维吾尔族和蒙古族习用药材，用于治疗湿热黄疸、胃痛食少、水肿尿少，国外常用菊苣作为食品添加剂、营养饲料、果糖原料和咖啡替代品，20世纪80年代引入我国后，菊苣由于品质优良、饲用价值高，现已成为最有前途的饲料和经济作物之一[1]。现代研究表明，菊苣中含有三萜、倍半萜、香豆素、糖类等多种成分，具有保肝、降脂、促进消化等多种作用。总黄酮是在植物体内广泛存在的一类天然产物，其生物活性多种多样，如对心血管系统的作用、抗肝脏病毒、抗炎、提高机体免疫力、雌激素样作用、抗菌、抗病毒以及抗氧化作用等，在食品和医药领域应用广泛[2-3]。超声辅助提取是一种操作简单、效率比较高的技术[4]，超声空化可对细胞壁产生机械的修剪力，使细胞壁破裂，同时超声可促进溶剂和活性成分的双向转移[5]。超声波用于辅助从植物中提取活性物质，可减少溶剂用量和提取时间，降低提取温度，有利于热敏感物质和不稳定物质的提取。本研究采用超声波强化提取红菊苣中的总黄酮，并通过正交试验确定超声波辅助提取红菊苣中总黄酮的最佳工艺条件，对红菊苣提取产物进行体外抑菌试验，以期为该资源的利用和开发提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

红菊苣采自江苏省海洋生物产业园。供试微生物菌株包括大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、青霉菌（Penicillium notatum）、白假丝酵母菌（Candida spp.），均购于中国微生物保藏中心。

主要试剂包括芸香苷对照品，购于国药集团；试验用水为蒸馏水；试验所用试剂均为分析纯。

主要仪器有LC-5500型高效液相色谱仪，购于北京东西分析仪器有限公司；FW100型高速万能粉碎机，购于天津市泰斯特仪器有限公司；HZT-A+X型精密天平，购于上海鼎拓实业有限公司；超声仪，购于江苏省昆山市超声仪器有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为水与甲醇（其体积比为30 ∶70），流速为 1.0 mL/min，进样量20 μL，检测波长360 nm，柱温25 ℃，理论塔板数按芸香苷峰计算应不低于3 000 个。

1.2.2 芸香苷标准曲线的绘制

准确称取芸香苷10.5 mg，在120 ℃下烘至恒质量，用70%色谱级甲醇溶液溶解稀释至50 mL，分别量取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，用70%色谱级甲醇溶液稀释至10 mL，摇匀，得到不同浓度梯度的标准溶液，将各标准溶液在“1.2.1”节中所述的检测条件下测定色谱峰面积。根据标准溶液浓度和对应测得的峰面积，制作出总黄酮含量对比基准。

1.2.3 红菊苣总黄酮的提取及其含量的测定

采集海洋生物园的红菊苣茎、叶，晾干，粉碎，80 ℃下干燥2 h，按一定固液比加入不同浓度乙醇提取溶剂，选取不同超声提取温度和提取时间，放入超声波仪中进行提取（提取时加回流装置，以防溶剂损失），趁热抽滤，收集提取液，加入与乙醇提取液体积比为1 ∶1的石油醚，萃取3～4次，脱去脂溶性杂质，将乙醇溶液层转入大孔吸附性树脂柱，原液与树脂量的比为 1 ∶2，依次用水、80%乙醇洗脱至溶液由浅黄色变为无色，收集乙醇溶液洗脱液，将洗脱液于50 ℃条件下碱液浓缩，得到红菊苣总黄酮浸膏。取所得浸膏，用70%色谱级甲醇溶液稀释成100 mL，摇匀，配制成待测溶液。

将所得待测溶液在“1.2.1”节中所述的检测条件下测得待测溶液的峰面积值，由标准曲线差查得该待测溶液浓度，即为待测液总黄酮含量，根据稀释倍数换算出红菊苣中的总黄酮含量。

1.2.4 紅菊苣总黄酮提取工艺的L9（34）正交法试验设计

在单因素试验的基础上，根据正交试验设计原理，选出对红菊苣总黄酮含量影响较大的4个主要试验因素，考察红菊苣总黄酮含量。根据L9（34）正交设计方案进行试验，确定红菊苣总黄酮的最佳提取工艺条件。

1.2.5 抑菌试验

1.2.5.1 红菊苣总黄酮抑菌活性的测定[6-7]

将灭菌后的专用药敏纸片浸于50 mL浸提液中浸泡24 h，使其充分吸收提取液，以灭菌水为空白对照，采用纸片琼脂扩散法测定抑菌圈直径，以反映供试品的抑菌能力。取0.1 mL液体培养基以活化培养好的供试菌，用无菌玻璃刮棒均匀涂布于相应的琼脂培养平板上，用无菌镊子将含有提取液的纸片贴于含菌琼脂平板表面，纸片应贴得均匀，各纸片中心距离不小于 24 mm，纸片至平板内边缘距离大于15 mm。在放好滤纸片的含菌培养皿中恒温培养，其中细菌于37 ℃培养24 h，真菌于28 ℃培养 48 h，用游标卡尺测定抑菌圈直径。

1.2.5.2 最低抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）的测定[8]

nlc202309032225

用无菌水将红菊苣总黄酮提取液稀释，终浓度分别为0256、0.128、0.064、0.032、0.016 mg/mL。取2 mL提取稀释液至15 mL培养基中，混匀，倒入平板，凝固后加入100 μL的100万～1 000万CFU/mL菌液，涂布均匀，放于相对湿度37%、温度28 ℃的条件下培养24 h后观察结果，菌落被完全抑制的最高稀释度提取物浓度即MIC；培养48 h后，菌落被完全抑制的最高稀释度提取物浓度为MBC。

2 结果与分析

2.1 芸香苷标准曲线

按照“1.2.1”节的方法绘制得到芸香苷标准曲线，由标准曲线可以得到总黄酮浓度与吸光度的回归方程：y=18 893x+38 546，r=0.997 2，可见在0～150 mg/L范围内总黄酮浓度与吸光度呈良好的线性关系。

2.2 红菊苣总黄酮提取工艺优化结果

在单因素试验基础上，根据正交试验设计原理，以料液比、超声功率、提取温度、乙醇浓度4个因素进行L9（34）正交试验（表1），对总黄酮提取工艺进行优化。

2.3 红菊苣总黄酮的抑菌试验结果

2.3.1 红菊苣总黄酮的抑菌活性测定结果

使用优化得到的方法提取红菊苣中的总黄酮，得到的浸提液经减压蒸发去除乙醇。采用纸片琼脂扩散法考察红菊苣总黄酮对几种模式微生物（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白假丝酵母、青霉菌）的抑制特性，抑菌试验结果见表3。试验结果表明，红菊苣总黄酮对青霉菌的抑菌效果最差，对白假丝酵母有一定的抑制作用，对潜在致病菌金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有很强的抑制作用，为红菊苣药物的抗菌临床应用提供了有力的证据并且有助于红菊苣的进一步药用开发。

3 结论

本研究采用超声波辅助提取法，以红菊苣总黄酮含量为考察指标，在单因素试验的基础上，采用正交试验法确定超声波辅助提取红菊苣总黄酮的最佳工艺提取条件为：料液比1 g ∶20 mL，超声功率200 W，提取温度70 ℃，乙醇浓度50%。在此条件下，总黄酮含量为21.042 mg/g。对红菊苣总黄酮提取液的抑菌效果试验结果表明，红菊苣总黄酮具有较强的抗菌作用，对革兰氏阴性和阳性细菌具有抑制作用，为红菊苣总黄酮的开发和利用提供参考。

参考文献：

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薄荷水提取物抑菌活性的研究篇4

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

干燥薄荷, 药房买;牛肉浸膏, 广东环凯微生物科技有限公司;无水乙醇 (分析纯) , 天津市广成化学试剂有限公司;细菌学蛋白胨, 广东环凯微生物科技有限公司;氯化钠、氢氧化钠, 天津市福晨化学试剂厂;琼脂粉, 北京鼎国生物技术有限责任公司;冰乙酸, 天津市富宇精细化工有限公司;盐酸, 广州市东红化工厂;大肠杆菌 (Escherichia coli) 、金黄色葡萄球菌 (staphylococcus aureus) 、枯草杆菌 (bacillus subtilis) 、沙门氏菌 (Salmonella sp.) 以上菌种均由仲恺生物工程试验室提供。

1.2 仪器与设备

LX-B35L立式自动电热压力蒸汽灭菌器, 合肥华泰医疗设备有限公司;SW-CJ-1F超净工作台, 苏州安泰空气技术有限公司;PH S-25pH计, 上海虹益仪器仪表有限公司;HWS12电热恒温水浴锅, 上海一恒科技有限公司;BL600A电子天平, 常熟双杰测试仪器厂;GZX-9070MBE数显鼓风干燥箱, 上海博迅实业有限公司医疗设备厂;TCYQ生化培养箱, 太仓市试验设备厂;RE-52AA旋转蒸发器, 上海亚荣生化仪器厂。

1.3 试验方法

1.3.1 薄荷提取液的制备

取干燥薄荷, 粉碎, 取样10g, 盛于烧杯中, 加入提取溶剂120mL, 用氢氧化钠溶液或者盐酸溶液将浸提液的pH值调至指定值, 浸泡16~24h。溶液颜色变成黄棕色或棕色后用4层纱布过滤, 取55mL滤液在50℃下用旋转蒸发器进行蒸馏至5mL。冷藏, 备用。

1.3.2 热稳定性测定试验

为了验证薄荷活性物质是否具有耐热性, 待测薄荷提取物样品在100℃恒温水浴锅中进行加热处理, 10min后取出备用。

1.3.3 抑菌试验

将灭菌的琼脂培养基冷却到50℃左右, 接入10%的含菌量为106~108CFU/mL的活化后的菌悬液, 混匀。将混有指示菌的培养基大约15mL倒入培养皿内, 每个培养皿中均匀放置3个牛津杯, 加入待测样品。把平板放置于37℃恒温培养箱中培养24h后, 用尺子测量抑菌圈直径。每个样品做3个平板, 即8~9个重复。以上操作均在超净工作台中完成。

2 试验结果与讨论

2.1 含有乙酸的溶剂制备的薄荷浸提液的抑菌效果

溶剂A:30mL无水乙醇、加9mL冰醋酸, 补充蒸馏水至120mL;溶剂B:9mL冰醋酸, 补充蒸馏水至120mL。用溶剂A、B按照1.3.1的方法制备薄荷提取液, 以枯草芽孢杆菌为指示菌, 按照1.3.3做抑菌试验, 试验结果如表1、图1所示。

注:-表示抑菌圈过大无法测量。

试验结果显示, 用乙酸和乙醇的混合液为溶剂和用乙酸为溶剂制备的薄荷提取液都具有明显的抑菌效果, 乙酸和乙醇混合液为溶剂的薄荷提取液抑菌效果明显强于乙酸薄荷提取液的抑菌效果, 此试验结果与刘学明等人报道的试验结论相吻合。

由试验现象还可以看出, 乙酸和乙醇混合液的薄荷提取液可形成的抑菌圈清澈透明, 而乙酸溶液的制备的薄荷提取液形成的抑菌圈却有很重的颜色, 其中原因不详, 有待于进一步的深入研究。

2.2 含乙酸溶剂本身的抑菌效果

乙酸与乙醇的不同比例的混合液与不同浓度的乙酸溶液分别按照1.3.3的方法做抑菌试验, 试验结果如表2、图2所示。

通过试验结果可以得出, 所有含乙酸的溶剂, 都具有明显的抑菌效果;即使乙酸含量低至5%, 无论是在水中还是在乙醇中, 抑菌效果非常明显, 且随着乙酸的浓度升高, 含乙酸的溶剂本身抑菌圈的直径也不断增大, 抑菌效果不断增强。

虽然在试验2.1中, 含有乙酸的溶剂制备的薄荷提取液具有非常好的抑菌效果, 但本试验为了避免提取溶剂对薄荷提取物本身抑菌效果的干扰, 因此以下薄荷提取物的抑菌试验均采用水来做提取溶剂, 而不再采用任何含有乙酸的溶液作为溶剂。

2.3 薄荷水提取液对指示菌的抑菌效果

用水为溶剂按照1.3.1的方法制备薄荷水提取液, 按照1.3.3抑菌试验方法, 对枯草杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌分别做抑菌试验, 试验结果见表3, 对试验结果进行S-N-K法两两比较分析, 分析结果见表4。

薄荷的水浸提物对大肠杆菌、沙门氏菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌均能形成明显的抑菌圈, 4种指示菌形成的抑菌圈平均直径分别为:12.0、12.0、12.3和13.3 mm, 说明薄荷水浸提物对4种指示菌都具有明显的抑制效果。利用S-N-K法对4种指示菌进行一对一比较分析, 结果将薄荷提取物对4种菌的抑菌情况分成了两个亚组, 大肠杆菌、沙门氏菌和枯草芽孢杆菌分在同一亚组, 组内的p值为0.294, 表明薄荷水浸提物对大肠杆菌、沙门氏菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用区别并不显著;金黄色葡萄球菌在一亚组, 两个亚组之间的p值大于0.05, 表明薄荷的水浸提物对金黄色葡萄球菌和对大肠杆菌、沙门氏菌和枯草芽孢杆菌这3种菌的抑制能力具有显著区别, 说明薄荷的水浸提物对金黄色葡萄球菌的抑制能力最强。

2.4 不同pH值下制备的薄荷水提取物的抑菌效果

用水为溶剂, 用氢氧化钠溶液和盐酸溶液分别调p H值为2、4、6、8、10后, 按照1.3.1的方法分别制备薄荷提取液, 按照1.3.3抑菌试验方法, 对枯草芽孢杆菌做抑菌试验, 试验结果见表5, 对试验结果进行S-N-K法两两比较分析, 分析结果见表6。

在p H值2~10范围之间, 薄荷的水浸提物均具有明显的抑菌效果, 在p H值2~6之间, 随着p H值的下降, 抑菌圈直径逐步增加, 在p H值6~10之间, 随着p H值的上升, 抑菌圈直径也有轻微上升, 在p H值为6的时候, 抑菌圈直径最小。利用S-N-K法对不同p H值下的薄荷水浸提物形成抑菌圈直径进行一对一比较分析, p H值6、8、10分在了一个亚组, 组内的p值为0.278, 表明在p H值2~6范围内, 薄荷水浸提物对枯草芽孢杆菌的抑制作用区别并不显著;p H值2和p H值4分在了另外的两个亚组, 亚组之间的p值大于0.05, 表明在p H值2~6之间, 薄荷的水浸提物对枯草芽孢杆菌抑制能力随着p H值的变化而显著变化。说明在酸性环境下提取的薄荷水浸提物的抑菌活性较强。

2.5 加热对抑菌效果的影响

将2.4中在不同p H值下制备的各种薄荷水浸提物按照1.3.2的方法进行加热处理后, 再做抑菌试验, 试验结果见表7, 这次试验结果与未加热前的试验结果进行对比分析, 分析结果如图3所示。

由试验结果可以看出, 在p H值2~10的范围内制备的薄荷水提取物, 进行100℃加热10min的热处理后, 都能形成清晰可见的抑菌圈, 其抑菌圈直径与加热前进行比较分析, 可以看出, 加热处理后, 大部分抑菌圈直径都有小幅度的下降, 说明加热处理可以降低薄荷水提取物的抑菌活性, 但是抑菌圈直径下降的幅度不大, 这也说明了薄荷水提取物具有很好的抗热性能。

3 结果与讨论

(1) 薄荷的乙酸溶剂的浸提物具有非常明显的抑菌效果, 但是乙酸本身也具有非常明显的抑菌效果。

(2) 薄荷的水浸提物在浓缩10倍后, 对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌均具有抑制效果。

(3) 在p H值2~10之间提取的薄荷水提取物, 对4种指示菌都具有抑菌效果, 且在酸性条件下抑菌效果较好。

(4) 在p H值2~10之间提取的薄荷水提取物在100℃加热10min中后, 仍然保留有大部分的抑菌效果, 说明薄荷提取物在较宽的p H值范围内, 具有良好的耐热性。

摘要：采用琼脂扩散法研究了薄荷水提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌的抑菌活性。研究结果表明:薄荷水提取物对4种指示菌均具有明显的抑菌活性, 其中对金黄色葡萄球菌的抑制效果最好;在pH值2～10范围内, 薄荷水提取物具有抑菌活性且具有较好的热稳定性, 薄荷水提取在酸性条件下的抑菌效果要强于中性和碱性。

关键词：薄荷,提取,抑菌活性,热稳定性

参考文献

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竹叶黄酮提取物的抑菌活性研究篇5

1 实验材料

1.1 原料

竹叶提取物(总黄酮≧40%),购于金华贝康生物科技开发有限公司。

1.2 仪器

立式自动电热压力蒸汽灭菌锅(LDZX-40BI型),上海申安医疗器械;电热恒温鼓风干燥箱(DGG-9140B型),上海森信实验仪器有限公司;数显电热恒温培养箱(303A-4),上海汇三贸易有限公司;电热恒温水浴锅(DK-S24型),上海精宏实验设备有限公司;医用超净工作台(YJ-875),苏州三兴净化设备有限公司;华日冰箱(BCD-227C),杭州华日电冰箱股份有限公司;循环水真空泵(SHB-3),郑州合众仪器有限公司;电子天平(TD.10001),上海长城华美仪器化剂有限公司。

1.3 培养基

营养琼脂,青岛海博生物;营养肉汤培养基,杭州微生物试剂有限公司。

1.4 微生物

藤黄微球菌(Gambogic micro aureus);金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus);乙型副伤寒沙门氏菌(S.paratgphi B);马红球菌(Rhodococcus equi);痢疾志贺氏菌(Shiga diarrhea);大肠杆菌(Escherichia coli);柠檬酸杆菌(Citric acid bacteria);黑曲霉(aspergillus );以上菌种由浙江省水产技术推广总站,浙江省水产质量检测中心提供。

2 实验方法

2.1 芦丁标准曲线制作及黄酮含量测定

以芦丁标准品为对照品,精确称量芦丁标准品0.0313 g,用30%乙醇溶液溶解并定容成100 mL,摇匀即得浓度为0.313 mg/mL标准溶液。分别移取1、2、4、6、8、10 mL标准溶液于50 mL容量瓶中,补加30%乙醇至25 mL,加1.4 mL 5%NaNO2 溶液,5 min后加1.4 mL 10%Al(NO3)3溶液,6 min后加10 mL 1 mol/L NaOH溶液,最后用30%乙醇溶液定容,混匀,显色10 min后于510 nm处测得吸光度(此波长通过众多文献得出的最佳吸收波长),同时以空白为参比[4]。样品测定时用同样的方法。

2.2 试验药品的制备

准确称取竹叶总黄酮粉末5.00 g溶于40 mL 40%的乙醇溶液,作为1号储备液。准确称取黄酮10.00 g于圆底烧瓶中加入100 mL 30%盐酸溶液溶解,在50 ℃水浴锅中冷凝回流水解1 h,抽滤,再用水洗去盐酸,固体用20 mL 40%乙醇溶液溶解,用分光光度法测出其浓度,根据浓度配置出和1号储备液同浓度的溶液作为2号储备液。

2.3 菌种活化

分别将藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、乙型副伤寒沙门氏菌(S.paratgphi B)、马红球菌(Rhodococcus equi)、痢疾志贺氏菌(Shiga diarrhea)、大肠杆菌(Escherichia coli)、柠檬酸杆菌(Citric acid bacteria)从4 ℃冰箱取出升温至室温,然后接种于营养琼脂斜面培养基上,于(36±1)℃下培养24 h进行活化培养,传二代。

分别取活化并传代培养好的菌株,用无菌生理盐水将菌苔洗下,采用比浊法用0.5麦氏比浊管对比配制菌体悬浮液,使菌悬液菌数为 1.50×108个/mL。

2.4 抑菌活性测定

抑菌活性测定利用滤纸片法,将滤纸片在储备液中浸泡1 h后置于无菌环境晾干备用。分别在营养琼脂培养基中加入0.1 mL的已配好的菌悬液,用涂布棒涂布均匀,将晾干的滤纸片放在相应位置。用无菌水浸泡的滤纸片做空白对照。在(36±1)℃下培养24 h[5]。

2.5 最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定

提取物进行二倍稀释。取10支无菌试管,各加营养肉汤1 mL,第1管加储备液1 mL,混匀后取1 mL于第2管,混匀后吸取1 mL于第3管,依次类推到第9管,弃去1 mL,第10管改加1 mL无菌生理盐水作为对照,然后每管内加入菌悬液0.1 mL混合均匀,(36±1)℃培养24 h。结果判定:肉汤清亮透明表示细菌不生长(-),肉汤浑浊表示有细菌生长(+)。能抑制细菌生长的提取物最高稀释度作为其最低抑菌浓度。将其继续于(36±1)℃培养24 h观察肉汤透明度。澄清不长菌的最高稀释度就是最小杀菌浓度[6,7]。

3 结果与分析

3.1 芦丁标准曲线及其提取物、水解产物含量测定

通过芦丁标准标准曲线法作标准曲线如图1。由图1得芦丁标准曲线线型方程为y=11.89x+0.0074相关性R2=0.9994。通过同样方法测得竹叶提取物吸光度值代入线型方程中得出总黄酮含量为40%,竹叶提取物水解产物总黄酮含量也为40%。

3.2 抑菌活性初步测定

用竹叶提取物、竹叶黄酮储备液及其水解产物对一些常见菌和致病菌做平板扩散实验。实验结果如表1。从表1可以看出竹叶提取物对金黄色葡萄球菌、痢疾志贺氏菌抑菌效果最佳,对乙型副伤寒沙门氏菌、马红球菌、柠檬酸杆菌、藤黄微球菌抑菌效果次之,对大肠杆菌抑菌效果不理想。竹叶提取物水解产物对藤黄微球菌抑菌效果最佳,其次依次是金黄色葡萄球菌、柠檬酸杆菌、马红球菌、乙型副伤寒沙门氏菌,对大肠杆菌抑菌效果也不理想。两种药品均对黑曲霉没有抑菌效果。竹叶提取物水解成分对藤黄微球菌抑菌效果优于提取物。同时在对金黄色葡萄球菌、柠檬酸杆菌、马红球菌、乙型副伤寒沙门氏菌这些抑菌效果也略优于提取物本身。

注:以上结果均为三次平行试验平均值。

3.3最低抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC)测定

采用营养肉汤培养基两倍稀释法,培养24 h和48 h后观察培养基的混浊情况[8]。试验结果见表2。由表2可以看出:竹叶提取物对被测细菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为藤黄微球菌15.625 mg/mL,金黄色葡萄球菌7.8125 mg/mL,乙型副伤寒沙门氏菌7.8125 mg/mL,马红球菌7.8125 mg/mL,痢疾志贺氏菌7.8125 mg/mL,大肠杆菌62.5 mg/mL,柠檬酸杆菌7.8125 mg/mL。其中竹叶提取物对大肠杆菌抑菌效果不理想。

注:“+”为有细菌成长。以上活菌数都为比浊法测得的,0.5麦氏即为1.50×108个/mL。

注:“+”为有细菌成长,以上活菌数都为比浊法测得的,0.5麦氏即为1.50×108 个/mL。

由表3可以看出:竹叶提取物对被测菌的杀菌浓度中,金黄色葡萄球菌效果最为明显,对乙型副伤寒沙门氏菌、马红球菌、痢疾志贺氏菌、柠檬酸杆菌的杀菌浓度差不多。

由表4可以看出:竹叶提取物中总黄酮水解产物对藤黄微球菌抑菌效果明显,在低浓度下仍然有很好的抑菌效果。其次是对乙型副伤寒沙门氏菌、马红球菌、痢疾志贺氏菌、柠檬酸杆菌。同样,总黄酮水解产物对大肠杆菌抑菌效果不明显,在总黄酮水解产物较高浓度下,细菌仍生长良好。

由表5可以看出:竹叶提取物总黄酮水解产物对被测菌的杀菌浓度中,对大肠杆菌效果不够明显,而对藤黄微球菌、乙型副伤寒沙门氏菌、马红球菌、痢疾志贺菌和柠檬酸杆菌的效果都比较明显。

4 结论

综合各表看出竹叶提取物水解处理产物的抑菌及其杀菌能力略大于竹叶提取物,两种药品对大肠杆菌的抑菌效果均不明显,对黑曲霉均没有抑菌效果。该实验结果表明竹叶黄酮苷的抑菌杀菌效果和其水解产物黄酮甙元相比,黄酮甙元的抑菌活性要略强于黄酮苷。将竹叶黄酮水解产物应用于各种抑菌杀菌特别是抑制藤黄微球菌产品开发方面,具有良好的发展前景。

摘要：采用稀释法研究了竹叶黄酮提取物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并采用滤纸片法对竹叶黄酮提取物及其水解产物的抑菌活性进行了对比研究。试验结果表明竹叶黄酮提取物对藤黄微球菌、沙门氏菌、马红球菌、痢疾志贺氏菌、柠檬酸杆菌的抑菌效果及杀菌效果较好,其中竹叶黄酮提取物水解产物对藤黄微球菌的抑菌杀菌效果尤为明显,最小抑菌浓度为1.953 mg/mL,提取物对大肠杆菌抑菌作用很弱。竹叶黄酮甙元的抑菌效果要优于黄酮苷,因此在抑菌方面应该注重竹叶黄酮水解产物的开发。

关键词：竹叶黄酮提取物,水解,抑菌,藤黄微球菌

参考文献

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板栗花水提取物的抑菌活性研究篇6

关键词：板栗花,水提取物,最小抑菌浓度

长期和广泛的使用抗生素不仅造成病原微生物产生耐药性，并且还带来毒副作用、污染环境以及影响畜产品品质等诸多弊端。中草药具有较好的防治疫病的效果，并具有成本低，残留少，毒副作用小等优点，运用中草药进行防治疾病有相当大的潜力。板栗花为壳斗科(Fagceae)栗属植物栗(Castanea mollissima Blμme)的雄性花序，可以增强血管张力，降低血管脆性，改善血管通透性，降低血脂及胆固醇;减少红血球和血小板聚集，减少血栓的形成;护肝解毒，提高机体免疫力;抗菌、抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗真菌、抑制肿瘤等。近年来，随着板栗种植面积的扩大，板栗雄花日益增多，成为板栗生产中的废弃物，造成极大的资源浪费。本试验通过板栗花提取物的体外抑菌试验，进一步明确板栗花的抑菌活性，以期能够变废为宝，为云南省板栗花的进一步研究与开发应用提供一定的科学依据。

1 材料与方法

1.1 板栗花

采自云南省昆明市嵩明县板栗园。

1.2 供试菌株

大肠杆菌O4、大肠杆菌O8、大肠杆菌O101、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等均由云南农业大学动物科学技术学院微生物实验室保存。

1.3 供试菌株培养基、含药平板和药敏片

由本研究参照常规方法制备。

1.4 中药板栗花提取物的制备

采用水提取法提取，称取150g板栗花细粉，加入5～6倍量蒸馏水，浸泡18h后，煎煮1.5～2h，过滤收集药液，药渣加3～4倍量蒸馏水煎煮1.5～2h，再过滤收集药液，最后，药渣再加3～4倍量蒸馏水煎煮1h，过滤收集药液。将3次滤液合并进行浓缩，至其生药量为1g/m L时，于121℃灭菌15～20min后备用。

1.5 含药平板的制备

在普通琼脂培养基中加入终浓度分别为：C1=0001g/mL、C2=0.01g/mL、C3=0.1g/mL、C4=1g/mL的板栗花提取物。

1.6 药敏片的制备

1.6.1 药敏试纸的准备

用打孔机将常用的定性滤纸打成直径为0.5cm的圆形滤纸片，121℃灭菌20min，烘干后备用。

1.6.2 药液的准备

将浓缩后的板栗花提取物分别用灭菌蒸馏水稀释成C1=0.002g/mL、C2=0.02g/m L、C3=0.2g/mL、C4=0.5g/mL 4个浓度。

1.6.3 药敏片的制备

将10片药敏试纸放入0.5m L的药液中，待药液充分吸收后置于37～40℃恒温箱中干燥，密封后4℃保存。所得4种浓度的药敏片分别为C1=0.0001g/mL、C2=0.001g/mL、C3=0.01g/m L和C4=0.025g/mL。

1.7 细菌悬液的制备及细菌平板计数

将供试菌株接种于营养肉汤培养基中，37℃培养18～24h后，按10倍稀释制备的10-4, 10-5, 10-6悬液，分别吸取0.1mL分别滴入固体培养基中，均匀涂布后于37℃培养18～24h，观察并记录结果。

1.8 药敏试验

1.8.1 含药平板药敏试验

根据平板计数结果，取最适浓度菌液0.1mL滴入不同梯度含药平板中，均匀涂布后于37℃培养18～24h，观察细菌生长情况。有细菌生长判为阴性，记为“-”;无细菌生长判为阳性，记为“+”。

1.8.2 药敏片药敏试验

根据平板计数结果，取最适浓度的菌液0.1mL滴入制备好的琼脂培养基中，均匀涂布，然后贴上不同梯度的药敏片，每个梯度5片，3个重复，于37℃培养18～24h后，测量药敏片抑菌圈大小。抑菌圈直径<10mm为低度敏感，10mm<抑菌圈直径为<15mm为中度敏感，抑菌圈直径>15mm为高度敏感。

2 结果与讨论

2.1 最适制作含菌平板的菌液浓度

根据细菌平板计数的结果，确定本试验中各种供试菌的最佳浓度，大肠杆菌O4为10～3个/m L，大肠杆菌O8、大肠杆菌O101、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌均为10～4个/m L。

2.2 含药平板药敏试验结果

不同浓度的板栗花平板抑菌显示，空白和C1=0.001g/mL浓度的平板对所有试验菌株没有抑制作用，C2=0.01g/mL、C3=0.1 g/m L和C4=1g/mL均有明显的抑菌作用。结果如表1。

2.3 药敏片药敏试验结果

不同梯度的药敏片对不同受试菌的抑菌圈大小显示，C3=0.01g/mL和C4=0.025g/mL两种浓度对大肠杆菌O4、大肠杆菌O8、大肠杆菌O101、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌都高度敏感(结果见表2)。从本试验研究结果看出，板栗花提取物的浓缩液达到0.01g/mL时，对细菌的抑制效果明显，被抑制的细菌中既有革兰氏阳性菌，也有革兰氏阴性菌;既有球菌也有杆菌，说明板栗花提取物对细菌具有广泛抑制作用。近年来，因为化学药物和抗生素的过量使用，抗生素的滥用不仅促使了一些耐药和变异的超级细菌的产生，增加了不良反应的发生几率，并且造成了资源浪费，而中草药作为一种天然药物，有巨大的开发潜力。但是我国兽用中草药的开发相对落后，难以找到让人满意的新药，因此，应加强对民间常用药物的关注，以求开发出更新更有效的抗菌药物。在民间兽医临床上应用40～80g/头板栗花对大肠杆菌引起的仔猪腹泻进行临床治疗，效果比较理想，这也为本课题的下一步的进行指明了方向。

参考文献

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大蒜提取物抑菌活性篇7

赶黄草含有没食子(GaLie acid)、槲皮素(Guercatin)、2,6-二羟基苯乙酮-4-0-β-D-吡喃葡萄糖苷(2,6-dihydroxyacetophenone-4-0-β-D-gLucside)、两个结构有待进一步确证的化合物及丰富的黄酮类物质[3,4]。中医学认为,赶黄草性温味甘,具有祛黄疸、利尿、活血、保肝、清热等功效,以其为原料提取而成的肝素颗粒广泛应用于临床。近几年来,国内外对赶黄草的化学成分及其对肝病的治疗作用研究较多,但对该植物抑菌方面的作用,少有报道。本文分别采用赶黄草的水提取物及乙醇提取物对多种菌进行体外抑菌实验,拟观察赶黄草的体外抑菌活性,为临床提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

赶黄草,采于四川古蔺桂花乡。供试菌种:金黄色葡萄球菌(StaphyLococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coLi)、枯草芽孢杆菌(BaciLLus stubtiLis)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、表皮葡萄球菌(StaphyLococcus epidermidis)、新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)、白色念珠菌(MoniLia aLbican),皆由我校微生物实验室提供。

1.2 方法

1.2.1 赶黄草水提取法[5]

取赶黄草10g,加适量蒸馏水浸泡30min后加热煮沸,再用文火加热30min,过滤得第1次水提取物,将滤渣用同样方法得到第2次、第3次水提取物,合并3次滤液,再浓缩至10mL,得到赶黄草水提取物(即每毫升药液含1g干药)。

1.2.2 赶黄草乙醇提取法[6]

取赶黄草10g,共4份,分别置于500mL圆底烧瓶中,然后加适量30%、50%、70%和90%乙醇浸泡30min后,100℃加热30min后过滤。药渣再加适量同浓度乙醇溶液,100℃加热30min后过滤。将两次滤液合并,用文火浓缩至10mL,得到赶黄草相应浓度乙醇提取物(即每毫升药液含1g干药)。

1.2.3 比浊管的配制[7]

取0.5mL浓度为0.048moL/L的BacL2加到99.5mL浓度为0.18moL/L的H2SO4中配制成0.5个麦氏浊度的比浊管(相当于细菌数为1.5×108个/mL),密封备用。

1.2.4 菌悬液的制备[7]

将供试菌接种至固体培养基上,细菌37℃培养24h,真菌28℃培养48h后,用适量生理盐水将菌落洗下。用比浊调管对比稀释至0.5麦氏浊度(1.5×108个/mL),4℃保存备用。

1.2.5 药敏纸片制备

取优质滤纸,用打孔器制备成直径6mm的滤纸片,置于洁净干燥的培养皿中,121℃高压蒸汽灭菌20min。无菌操作下将其分别浸在赶黄草的各种提取液及相应提取剂中,备用。

1.2.6 药敏试验[9]

无菌操作下吸取0.2mL菌悬液于琼脂平板上(细菌用MH琼脂平板,真菌用沙氏琼脂平板),均匀涂布,取含药滤纸片紧贴于平板上,每个平板贴4片,每个菌种做三组平行,另外每个菌种用含提取剂滤纸片做一份阴性对照,10min后倒置于恒温培养箱中37℃培养,细菌培养24h,真菌培养48h。使用十字交叉法测量抑菌圈直径,并记录数据。

2 结果

赶黄草水提取物及不同浓度乙醇提取物的体外抑菌效果见表1。

(抑菌圈直径mm)

注:表中各抑菌圈直径为三组平行试验测得表皮葡萄球菌的抑菌圈直径的平均值;“—”表示无抑菌圈产生;所用阴性对照组均无抑菌圈产生。

3 讨论

现代药理研究表明赶黄草有治疗黄疸、水肿、经闭、血甭、带下、跌打损伤以及各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等作用[10],对细菌与真菌的抑菌作用研究甚少。本实验用赶黄草的30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇提取物与水提取物,分别对白色念珠菌、新生隐球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌在体外进行抑菌效果观察。结果如表1所示,赶黄草水提物及醇提物对绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌均有不同程度的抑制作用,对供试真菌无抑菌效果。

表1提示水与乙醇不同溶剂赶黄草提取物的抑菌活性无明显差别;乙醇浓度与抑菌效果之间呈不均一的线性关系,随着乙醇浓度的增高,赶黄草乙醇提取物对绿脓杆菌的抑菌活性降低,对枯草芽孢杆菌和表皮葡萄球菌的抑菌活性增强:30%乙醇提取物对绿脓杆菌抑菌效果最好,90%乙醇提取物对枯草芽孢杆菌和表皮葡萄球菌体外抑菌效果较好。

随着抗生素的广泛应用,致使多重耐药菌株的出现,细菌耐药性的问题已日益突出。中草药以其价格低廉,毒副作用小,且很少产生耐药性等独特优势越来越受到外界重视,中草药的抑菌作用已受到重视。目前,对赶黄草的抑菌作用研究较少,进一步对其抑菌机制、抑菌成分及其对更多其他菌种的抑菌活性进行研究将具有更大的价值。

摘要：目的:研究赶黄草水提物及不同浓度醇提物的体外抑菌作用。方法:以抑菌圈直径为参考指标,采用滤纸片法,测定赶黄草水提物及30%、50%、70%、90%醇提物对几种常见病菌的体外抑菌活性。结果:各提取物对绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌均有不同程度的抑制作用,而对白色念珠菌、新生隐球菌、大肠杆菌的抑制作用不明显。结论:赶黄草不同溶剂提取物对4种供试菌均具有不同程度的抑制作用,是一种具有开发价值的天然抑菌资源。

关键词：赶黄草,水提物,醇提物,体外抑菌

参考文献

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大蒜提取物抑菌活性篇8

试验以川东獐牙菜为研究对象,用纯化水、70% 乙醇和乙酸乙酯作为提取溶剂,分别得到獐牙菜水提取物、乙醇提取物和乙酸乙酯提取物,采用纸片扩散法和二倍稀释法分别测试3种提取物对5种常见食源性微生物的抑菌活性,同时进行了稳定性研究,为獐牙菜的深度开发、利用提供理论依据。

1材料

1. 1药品

獐牙菜,购自三峡中药城; 无水乙醇、乙酸乙酯、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、Na OH均为分析纯,购自广州化学试剂厂。

1. 2菌种

大肠杆菌、肠球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、苏云芽孢杆菌,由三峡学院生命科学与工程学院微生物实验室提供。

1. 3主要仪器

旋转蒸发仪( 型号为RE - 52) ,购自上海亚荣生化仪器厂; 高压灭菌锅( 型号为YXL - LS - 30 SII) , 购自上海博讯实业有限公司医疗设备厂; 数显恒温水浴锅( 型号为HH - 4) ,购自江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司; 电子分析天平( 型号为AL104) ,购自梅特勒- 托利多仪器( 上海) 有限公司; 微型高速试样粉碎机( 型号为FW80) ,购自河北省黄骅市新兴电器厂; 真空冷冻干燥仪,购自德国CHRIST公司。

2方法

2. 1样品提取物制备的工艺流程

獐牙菜→去杂、清洗→干燥→粉碎→称量→提取、抽滤→减压浓缩→真空冷冻干燥→即得獐牙菜提取物。

具体操作步骤: 将獐牙菜去杂、清洗后,置于鼓风干燥箱中,50 ℃ 干燥( 水分含量为5. 22% ) ,粉碎后备用; 分别称取5. 0 g獐牙菜粉末于250 m L容量瓶中,准确量取100 m L纯化水、70% 乙醇和乙酸乙酯加入容量瓶中,同时置于70 ℃ 水浴锅中提取2 h; 减压过滤,滤渣再分别提取1次; 过滤,合并滤液; 减压浓缩,真空冷冻干燥,分别得到獐牙菜水提取物、乙醇提取物和乙酸乙酯提取物,备用。

2. 2抑菌活性试验

2. 2. 1菌悬液的制备用已灭菌的生理盐水稀释活化的供试菌种,将菌液的吸光度值调至0. 08 ~ 0. 10 ( 波长= 600 nm) ,制成菌种准备液; 然后再稀释1 000倍制成菌悬液使用,此时菌种浓度大约为1 × 105cfu / m L[5]。

2. 2. 2抑菌圈的测定抑菌圈的测定采用纸片扩散法[6],选用吸水力强且质地均匀的滤纸,用打孔器制成直径为10 mm的圆纸片,于110 ℃ 干燥灭菌30 min。在无菌条件下,分别将圆纸片浸入浓度为32. 0 mg / m L的獐牙菜水提取物溶液、乙醇提取物溶液和乙酸乙酯提取物溶液中约15 min; 取出,自然沥干后贴在含供试菌( 大肠杆菌、肠球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、苏云芽孢杆菌) 的平板培养基上,每皿3片,同时分别以相应的溶剂进行空白试验, 置于恒温培养箱中培养24 h; 取出后采用十字交叉法测量抑菌圈直径,减去空白试验组抑菌圈直径后取其平均值作为试验结果。

2. 2. 3最低抑菌浓度( MIC) 的测定参照参考文献[7]采用二倍稀释法。准确吸取2. 0,4. 0,8. 0,16. 0, 32. 0 mg / m L的獐牙菜提取物溶液( 獐芽菜水提取物溶液、乙醇提取物溶液和乙酸乙酯提取物溶液) 1. 0 m L均匀涂布于平板培养基表面,再加入0. 5 m L 2. 2. 1中所制备的菌悬液,均匀涂布,同时分别以相应的溶剂进行空白试验,置于恒温培养箱中培养24 h, 取出并观察各试验菌种生长状况,以完全不生长细菌平板的最低样品浓度为MIC。

2. 3獐牙菜水提取物抑菌稳定性研究

参照参考文献[8 - 9]。根据2. 2中抑菌活性试验结果,以抑菌圈直径为评价指标,獐牙菜水提取物为研究对象,考查其在不同条件下对肠球菌、金黄色葡萄球菌及苏云芽孢杆菌抑菌活性的稳定性。将獐牙菜水提取物配制成浓度为32. 0 mg /m L的提取物, 分别进行如下处理: 置于20,40,60,80,100 ℃ 处理30 min; 将獐牙菜水提取物调制成不同的p H值,即2,4,6,8,10; 取一定量的獐牙菜水提取物置于无菌操作台,打开紫外灯,照射时间设为0. 5,1. 0,2. 0,4. 0, 8. 0 h; 分别称取一定量氯化钠,溶于獐牙菜水提取物中,配制的浓度分别为0. 4% 、0. 6% 、0. 8% 、1. 0% 、 1. 2% ,按照2. 2. 2中的方法操作,测定抑菌圈直径。

3结果与分析

3. 1獐牙菜不同溶剂提取物的抑菌效果( 结果见表1)

由表1可知: 3种溶剂提取物在32. 0 mg /m L浓度条件下,对各供试菌皆有一定的抑菌活性,其中乙酸乙酯提取物对大肠杆菌和肠球菌抑菌效果较好; 而纯化水提取物对肠球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和苏云芽孢杆菌抑制作用较强; 相对而言,70% 乙醇提取物抑菌效果较差。最大抑菌圈直径为26. 45 mm( 纯化水提取物对金黄色葡萄球菌) ,最小抑菌圈直径为4. 35 mm( 乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌) 。

3. 2獐牙菜不同溶剂提取物的MIC( 结果见表2)

mg·m L-1

由表2可知,在较低浓度条件下,獐牙菜不同溶剂提取物均显示了较强的抑菌活性,其中纯化水提取物对金黄色葡萄球菌的MIC为4. 0 mg /m L,对肠球菌和苏云芽孢杆菌的MIC则为8. 0 mg /m L。

3. 3獐牙菜水提取物抑菌稳定性研究

3. 3. 1热处理对獐牙菜水提取物抑菌活性的影响

以肠球菌、金黄色葡萄球菌和苏云芽孢杆菌为指示菌,研究獐牙菜水提取物在不同温度条件下的抑菌活性,结果见图1。

由图1可知,随着温度的升高,獐牙菜水提取物对3种测试菌的抑菌活性变化并不大,各测试菌的抑菌圈直径变化范围仅在2. 5 ~ 3. 0 mm之间,100 ℃处理30 min后仍具有较好的抑菌作用,表明獐牙菜水提取物的抑菌成分具有较强的热稳定性。

3.3.2 p H值对獐牙菜水提取物抑菌活性的影响

结果见图2。

由图2可知,p H值对獐牙菜水提取物的抑菌活性影响较大,特别是对肠球菌和金黄色葡萄球菌。在酸性( p H值< 7) 条件下,獐牙菜水提取物对3种测试菌的生长具有明显的抑制作用,但随着p H值的升高,特别是在碱性( p H值> 7) 条件下,抑菌效果显著下降,其中苏云芽孢杆菌对獐牙菜水提取物p H值的变化敏感性弱于另外2种测试菌。说明獐牙菜水提取物在酸性条件下能显示较好的抑菌活性。

3.3.3紫外线处理对獐牙菜水提取物抑菌活性的影响

结果见图3。

由图3可知,随着紫外线照射时间的延长,獐牙菜水提取物对3种测试菌的抑菌效果都不同程度减弱,其中对金黄色葡萄球菌和苏云芽孢杆菌的抑制作用下降较为明显,而对肠球菌的抑制作用则较为稳定。

3.3.4盐浓度对獐牙菜水提取物抑菌活性的影响

结果见图4。

由图4可知,在一定盐浓度范围内,獐牙菜水提取物对3种测试菌的抑制作用随着盐浓度的增大而减弱,但当盐浓度超过1. 2% 时,抑菌作用开始增强, 可能是由于盐浓度的增加影响了微生物细胞内渗透压的平衡,与獐牙菜水提取物产生了协同抑菌效果。

4结论

獐牙菜的3种不同溶剂提取物对5种常见的食源性污染菌都具有一定的抑制作用,其中獐牙菜水提取物抑菌效果最好,对金黄色葡萄球菌的MIC为4. 0 mg / m L,对肠球菌和苏云芽孢杆菌的MIC则为8. 0 mg / m L,而70% 乙醇提取物抑菌效果相对较差。

稳定性试验结果表明,热处理、p H值及紫外线照射对獐牙菜水提取物的抑菌效果具有一定影响,但对不同菌种抑制效果的减弱程度并不一致,而盐浓度的增加对提取物的抑菌活性产生一定增效作用。总体而言,獐牙菜水提取物抑菌活性较稳定,受环境因素影响较小,将獐牙菜水提取物用于食品的防腐保鲜可起到延长食品保质期的目的。

试验主要考察了三峡库区獐牙菜不同溶剂提取物的抑菌活性及稳定性,但对其中主要的抑菌活性成分还未明确,下一步将进行獐牙菜水提取物抑菌活性物质的分离、纯化与结构分析,以明确抑菌活性成分的物质组成。

摘要：为了研究三峡库区獐牙菜的抑菌活性和稳定性,以纯化水、70%乙醇和乙酸乙酯作为提取溶剂对獐牙菜进行提取,通过测定抑菌圈直径大小和最低抑菌浓度(MIC)来比较不同溶剂提取物对5种常见食源性污染菌的抑制作用,同时考察热处理、pH值、紫外线照射、盐浓度对獐牙菜水提取物抑菌活性稳定性的影响。结果表明:3种溶剂提取物对测试菌均具有一定的抑菌活性,其中以纯化水提取物效果最好;热处理、pH值及紫外线照射对獐牙菜水提取物抑菌活性的稳定性影响较小,而增加盐浓度对獐牙菜水提取物的抑菌活性产生一定增效作用。

大蒜提取物抑菌活性篇9

生物类黄酮结构是两个苯环通过中央碳链相互连接的一系列C6-C3-C6化合物。生物素类黄酮有多种生物活性。如防止高血压作用、抗炎作用抗菌、抗病毒等作用[2]。近年来随着研究方法和技术的不断提高,发现了许多新的种类和生理作用,特别是抗自由基及抗癌防癌等作用,使黄酮的研究进入了新的阶段,掀起了生物类黄酮研究开发利用热潮。其在医药、食品领域的应用具有广阔的前景。作者等对节节草黄酮类化合物3种不同提取方法进行了比较,对提取物进行了鉴定,并证实该提取物对多种细菌有作用[3]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料:

节节草(Equisetum ramosissimum Desf)采集于新疆乌鲁木齐南山,干燥,用粉碎机粉碎,过40目筛,并鉴定所采集的标本为木贼科木贼属植物节节草。大肠杆菌、八叠球菌等由新疆大学微生物教研室提供。

1.1.2 试剂:

乙醇、石油醚、蒸馏水、Zn粉、1%醋酸铅、 NaOH、 AlCl3、NaNO2、浓盐酸均为分析纯,购自乌鲁木齐市伟业实验器材供应站。

1.1.3 仪器:

752紫外可见分光光度计,上海精密科技有限公司;JY92-Ⅱ超声波细胞粉碎机,上海新艺生物技术研究所;旋转蒸发器RE-52A,上海亚荣生化仪器厂;DHG-9030型电热恒温鼓风干燥箱,上海精宏实验设备有限公司;SHZ-95型循环式多用真空泵,河南巩义市英峪予华仪器厂;电子天平Al104;超净工作台;培养箱。

1.1.4 培养基:

牛肉膏蛋白胨培养基,取液器,分液漏斗。

1.2 材料的处理

将干燥的节节草地上部分研磨打碎。

1.3 标准曲线的绘制及测定方法

1.3.1 工作曲线回归方程的建立

精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品0.025g,置于100mL的容量瓶中,加60%乙醇至刻度,摇匀。精确吸取已制备的对照品溶液0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL、7.0mL,分别置于25mL具塞容量瓶中,各加5%亚硝酸钠1.0mL,混匀,放置6min,加10%的硝酸铝1.0mL,混匀,放置6min,加4%的氢氧化钠10mL,再加乙醇至刻度,摇匀,放置15min,用分光光度法在X=510nm处测定吸光度,用最小二乘法作线性回归[4]得芦丁浓度(Y)与吸光度(X)的关系曲线的回归方程式:Y=80.347X+0.4526 R2=0.9998。根据回归方程计算样品中总黄酮含量。吸光度测定结果见表1。

1.3.2 样品含量测定:

取出各不同提取方法提取液10mL置于50mL容量瓶中,加5%亚硝酸钠1.0mL,静置6min,加10%硝酸铝1.0mL,静置6min,加4% NaOH 10mL,再加乙醇至刻度,摇匀,放置15min,于510nm处测吸收光度。根据回归方程计算节节草中黄酮类化合物的含量。

1.4 黄酮类化合物的提取

1.4.1 乙醇浸提法:

程序为:材料→75%乙醇提取→过滤→回流→萃取→回流→浓缩粗提物→放干→加乙醇溶解→过滤定容[5]。

(1)准确称取材料2g,75%乙醇浸泡3次,每次24h,合并滤液。

(2)将滤液进行蒸发直到无乙醇味为止,用蒸馏水定容至50mL。

(3)用石油醚进行萃取脱色2次,每次24h。

(4)将萃取物浓缩蒸干,加60%乙醇溶解置于50mL容量瓶中,定容。

1.4.2 超声波辅助提取法:

程序为,称取材料→超声波提取3次→合并滤液→石油醚脱色→回收乙醇→定容[6]。

(1)把干材料用研磨打碎称取2g,装入烧杯加75%乙醇40mL浸泡2h后置于超声波破碎机。

(2)超声3次,每次45min,合并滤液,石油醚萃取脱色,回收乙醇,用蒸馏水定容至50mL。

1.4.3 索氏提取法:

精密称取材料→石油醚索氏回流脱色6h→回流提取3h→过滤定容。

(1)准确称取打碎粉末的2g干材料包裹于滤纸中,装入索氏回流装置加入40mL石油醚60℃中脱色6h,晾干使石油醚挥发完。

(2)晾干的材料装入提取仪中,加入75%乙醇回流提取2次,每次3h,合并滤液,石油醚萃取脱色,回收乙醇,用蒸馏水定容至50mL。

1.5 鉴定

1.5.1 显色反应:

为了避免提取液本身颜色的干扰,用1.4.1、1.4.2和1.4.3得到的粗黄酮加无菌水直到无色。

(1)盐酸-锌粉:

试管取样品溶于1mL甲醇或乙醇振摇,加入少许镁粉或锌粉滴加几滴浓盐酸1～2mL观察颜色。

(2)氢氧化钠水溶液:

将试管取1mL提取液滴上数滴1% NaOH溶液观察颜色变化。

(3)三氯化铝:

取1mL提取液滴上数滴1% AlCl3溶液观察颜色变化。

(4)三氯化铁反应:

取1mL提取液滴上数滴1% FeCl3后观察颜色变化。

1.5.2 沉淀反应:

铅盐:取1 mL提取液滴上数滴1%醋酸铅静置,观察是否有沉淀及颜色变化。

1.5.3 抑菌实验

(1)培养基的制备:

牛肉膏1.5～0.75g,蛋白胨5～2.5g,NaCl 2.5～1g,琼脂8.5～4.5g,500～250蒸馏水,pH 7.0～7.2,121℃灭菌20min[7]。

(2)抑菌液的制备:

将1.4得到的粗黄酮加无菌水于紫外灯光下灭菌15min,将灭过菌的滤纸放入上述溶液浸泡2h。

(3)菌悬液的制备:

把各种供试菌菌种用其适宜的斜面培养基进行活化后,用无菌生理盐水制成含菌量约为CFU/mL 106～107的菌悬液[8]。

(4)实验操作:

用滤纸片法,首先将已灭菌过的固体培养基倒入无菌培养皿中,水平放置待凝固。用无菌吸管吸取0.2mL菌悬液加入到凝固的培养基上,用无菌三角涂棒涂布均匀。将已涂布好的培养皿划分成4等份,作上标记。用无菌镊子将已灭菌的小圆滤纸片置于相对的部位。最后放于37℃培养箱中,24h后取出观察是否产生抑菌圈(注:该实验在无菌操作下进行;同步制备对照组)。

2 结果与分析

2.1 不同提取方法的比较

表2显示,三种总黄酮提取方法中索氏提取法提取黄酮得率最高。超声波辅助提取法测定的总黄酮得率居中,乙醇浸提法的较低。采用SPSS12.0统计软件对这3种处理的差异显著性进行t检验分析,发现前两者无显著差异(P>0.05),这两种方法与乙醇提取方法差异显著(P>0.05)。说明索氏提取方法与超声波辅助提取法的提取量相当。索氏提取为连续回流提取,充分地利用了溶剂。超声提取由于其空化作用,可以破坏植物药材的细胞,有利于有效成分溶出,所以提取率也较高。由表2还可看出,超声波提取法所需提取时间明显短于索氏提取法与乙醇提取方法,因此具有明显优势。

注:用超声波提取法和索氏提取法分别提取相同淫羊霍样品,每种方法设5个重复。

2.2 显色和沉淀反应的结果

盐酸—锌粉显紫红色、醋酸铅为黄色沉淀、氢氧化钠水溶液显黄色、三氯化铁显棕黑色、三氯化铝为黄色。图略。

2.3 抑菌实验结果

24h后取出培养基观察,结果大肠杆菌、八叠球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌接种的培养基产生明显的抑菌圈,对照组中没有抑菌圈(图略)。说明提取得到的节节草浓缩液对这些微生物有较强的抑制作用。据报道,有些植物中提取得到的黄酮类化合物具有抑菌作用,如金银花中提取的粗黄酮对肠道致病菌有较高的抑菌作用[9],而作为一种植物类黄酮制剂的竹叶提取物对食品致病菌有一定抑菌作用[10],但林檎叶中得到的黄酮类化合物则无抑菌作用。

另外,实验中抑菌圈大小不一,说明节节草中总黄酮对实验菌的抑制作用不一,这可能是所提取得到的总黄酮中的具体成分跟其它一些植物中的黄酮的种类有一定差别,也可能是提取的黄酮浓度太低,还起不到抑菌作用。

3 讨论

作者对节节草黄酮类化合物3种不同提取方法进行了比较,其中乙醇提取的结果表明,乙醇提取法虽然有设备和操作简单、提取简便等优点,但是具有耗费时间长、耗费试剂多、得率明显低等缺点。这种方法的效率远低于超声波辅助提取法和索氏提取法。可能是移入溶液过程中有效成分流失以及提取不彻底所致。

索氏提取法提取率最高,并且能有效地反复利用提取溶剂,但索氏提取是一种连续回流提取方法,虽然溶剂用量不大,但提取时间较长,往往需要数小时才能将有效成分提取完全,而且药液长时间处于被加热状态,致使其中的有效成分容易被破坏[11]。

超声波辅助提取[12]利用高功率的超声波产生强烈的振动、高的加速度、强烈的空化作用、搅拌作用和瞬时高温等,造成植物细胞壁破坏和溶剂快速渗透,被提取有效成分迅速溶解到溶剂中,从而提高提取率,缩短提取时间,节省溶剂。超声波提取所选取的频率范围为20～100kHz,其中频率20左右的超声波使用最多,一般认为频率低,功率大有利于植物细胞壁的破碎。尽管超声波提取与索氏提取得率相近,但超声波辅助提取却避免了索氏提取的种种缺点。由此表明超声波辅助提取法是提取节节草总黄酮的比较理想的方法。通过显色反应和沉淀反应初步鉴定节节草地上部分含有较为丰富的黄酮类化合物,抑菌实验结果表明,该化合物对大肠杆菌和八叠球菌等有明显的抑制作用。

致谢:感谢苏力坦·阿巴白克力老师的指导及其他同学、生物化学教研室、微生物教研室的老师、细胞生物学教研室老师的帮助。

参考文献

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