茎叶处理

茎叶处理（共7篇）

茎叶处理 篇1

香蕉是产于我国南方的主要水果之一,一株生长充分的香蕉植株重约60 kg,其中可供销售的果品仅约20 kg,植株的大部分作为废弃物抛弃,既浪费了大量可利用资源,也污染着香蕉产地环境。为了综合利用香蕉茎叶,2003年以来,中国热带农业科学院环植所科研人员开展了一系列用蚯蚓处理香蕉茎叶的试验[1,2]。试验表明用蚯蚓处理香蕉茎叶的方法确是一种一举两得的方法,由于香蕉茎叶含水量高达90%以上,已有处理试验所得有机肥数量有限,而且已有处理试验均是以“香蕉茎叶+牛粪”的二因素方式进行,对猪粪等大量存在的农家肥以及来源更为方便的塘泥等的处理效果不明。根据蚯蚓可将有机废弃物连同土壤一道吞入体内为食的特性,为探索获得较大数量的有机肥,同时也为了探索蚯蚓处理香蕉茎叶的其它配方效果,在以往试验的基础上,开展了本试验。

1 材料和方法

1.1 材料

香蕉茎叶(巴西种),赤子爱胜蚓(Eisenia foetida),干牛粪,干猪粪,塘泥,EM发酵液;切草机,SC96-02水分快速测定仪,笔式PH计,千分之一电子天平,10×8×6(cm)养殖盒,镊子,培养皿,吸水纸,台秤,水桶。

1.2 方法

用切草机将香蕉茎叶切碎成约10×10 cm块状后放入桶中,加入EM发酵液压实发酵,15 d后取出,用SC96-02水分快速测定仪测定供试香蕉茎叶、干牛粪和干猪粪的水分含量,分别按香蕉茎叶、干牛粪、干猪粪的干物质重量比例配制不同配方,各配方组成见表1(其中A-E配方以干燥塘泥填充香蕉茎叶及干牛粪所含水分的重量),每配方3个重复,共30个重复。配料装入养殖盒,用笔式pH计测定配料的酸碱度并调整水分含量至70%左右。各放入总体重为0.87(±0.02)g的蚯蚓10条,盖上盒盖(盖上有相同数量的通气孔)。静置饲养100 d后,分检各重复蚯蚓的数量并用清水清洗,用吸水纸吸去蚯蚓体表水分,用电子天平称量蚯蚓重量,用台秤称量各重复基质存余总量,并用笔式pH计测定其pH值。将存余基质(蚯蚓粪)送中国热带农业科学院分析测试中心检测N、P、K等11种元素和有机质的含量,所得数据用SAS软件进行差异显著性测验(邓肯法)。

2 结果与分析

2.1.1蚯蚓数量

各配方蚯蚓数量增减及显著性测验情况见表2。

由表2可见,D与I配方所得蚯蚓数量均增长了3倍,显著大于其它配方所得蚯蚓数量,在“香蕉茎叶+牛粪+塘泥”的三因素处理的4个配方中有3个配方的蚯蚓数量显增长之势,且各配方的梯级递增规律明显,而“香蕉茎叶+猪粪”的二因素处理的4个配方中只有1个配方(I)的蚯蚓数量显增长之势,各配方的梯级递增规律不明显,这说明“香蕉茎叶+猪粪”的二因素处理除I配方外,其它配方很不稳定。值得注意的是完全用香蕉茎叶养殖蚯蚓的(J)配方的3个重复里竞无一蚯蚓存活,而香蕉茎叶加入塘泥填充水分以后的(E)配方里,蚯蚓不仅可以存活,而且数量还增加了1倍多。

2.1.2蚯蚓重量

各配方蚯蚓重量增减及显著性测验情况见表3。

由表3可见,在蚯蚓重量方面,D和I配方仍是最重。值得注意的是含猪粪的I配方中蚯蚓个体较大,三个重复平均体重达到了5.2 967 g,比初始期的0.87 g增重6倍多,对照表4的主要成分表,可见猪粪原来的磷、钾元素及有机质总量均大大高于牛粪和塘泥,因而认为这三种物质是使蚯蚓个体大的主要因素。

2.2 各处理存余基质(蚯蚓粪)主要成份含量

各存余基质主要成分见表4。

由表4可见,存余基质(蚯蚓粪)中氮、磷、两种大量元素含量比较初始期所使用的牛粪、猪粪、塘泥氮、磷含量降低了很多,而钾元素则大幅提高。存余基质中的有机质含量,在“香蕉茎叶+牛粪+塘泥”的三因素处理部分,变化不大,没有梯级递增规律,而在“香蕉茎叶+猪粪”的二因素处理部分则有随着加入香蕉茎叶比例的增大而提高的趋势,梯级递增规律明显。

2.3 各配方重量前后对比见表5

注:表中重量数字均为3个重复的平均值

由表5可见,“香蕉茎叶+牛粪+塘泥”三因素处理的各配方基质(蚯蚓粪)剩余率均在74%以上,而“香蕉茎叶+猪粪”二因素处理各配方基质剩余率则较低,“香蕉茎叶+塘泥”处理的E配方剩余率为75%,而100%香蕉茎叶的J配方里没有蚯蚓存活,基质剩余率高达90%。这充分说明加入塘泥的三因素处理不仅有助于获得较多的蚯蚓还有助于获得较大数量的有机肥(蚯蚓粪)。其中以D和E配方因具有产出蚯蚓和蚯蚓肥以及处理香蕉茎叶数量大的优势,配方中所含泥土比例又最接近于设施农业专用基质要求的泥土比例[3,4,5,6],故此两配方最有使用价值。

2.4 各处理基质pH值前后对比

据pH计测定发现,基质的pH值在处理前后变化不大,均在中性左右,这表明用蚯蚓处理香蕉茎叶而制成的有机肥料(蚯蚓粪)可以直接施用于作物。

3 结果与讨论

3.1 用蚯蚓处理香蕉茎叶,依据目的不同有多个配方选择:如以产出蚯蚓和蚯蚓肥以及处理香蕉茎叶数量多,并且所产出的蚯蚓粪肥能直接作为设施农业专用基质为目的,宜选上述D和E配方;如以产出蚯蚓个体大以及制出的有机肥磷和钾及有机质含量高为目的,宜选上述I配方;100%香蕉茎叶(不填加塘泥)的配方蚯蚓较难存活,达不到处理香蕉茎叶“一举两得”目的,但其基质剩余率、钾含量、有机质含量都是参试配方中最高的,这说明目前生产上正在使用的香蕉茎叶就地还田的作法还是可行的,但在香蕉病害高发区此法还必须慎用,以免病害循环发生。

3.2 本试验中含猪粪的配方表现出蚯蚓个体大、制出的有机肥磷和钾及有机质含量高的趋势,但猪粪往往伴有大量的猪尿,使用起来较为麻烦,不利于降低成本。

3.3 此次试验产出的蚯蚓数量和重量较以往试验均少得多,分析原因,除了使用的原料因素有别之外,更主要的原因与本次试验在温度较低季节进行有着密切关系,故生产上如使用蚯蚓处理香蕉茎叶,处理的季节应选择夏秋季节、温度最适蚯蚓生存繁殖时为好。

摘要：试验用香蕉茎叶和牛粪、猪粪、塘泥等组成10个不同因素配方养殖蚯蚓,探索既可大量处理香蕉茎叶又可大量产出蚯蚓和有机肥(蚯蚓粪肥)且处理成本低的处理方法。结果表明,“80%香蕉茎叶+20%牛粪+塘泥”的配方和“80%香蕉茎叶+20%猪粪”的配方产出蚯蚓数量最多、重量最重;“100%香蕉茎叶+塘泥”配方,产出蚯蚓数量略少,但处理香蕉茎叶更多,成本更为低廉;“香蕉茎叶+牛粪+塘泥”处理的各个配方最终的有机质含量变化不大;“香蕉茎叶+猪粪”处理的各配方有机质含量有随着加入香蕉茎叶比例的增大而提高的趋势,但所产有机肥数量较少;“100%香蕉茎叶”处理,蚯蚓难于存活。

关键词：爱胜蚓,处理,香蕉茎叶

参考文献

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[2]卓少明,康国兴.香蕉茎杆不同处理对蚯蚓生长繁殖的影响[J].热带农业科学,2005,25(3):23-25.

[3]卓少明.蚯蚓粪基质栽培娃娃缨萝菜定量研究[J].热带农业科学,2007,27(1):31-33.

[4]尚庆茂,张志刚.黄瓜蚯蚓粪基质穴盘育苗肥料添加量的研究[J].长江蔬菜,2005(11):41-43.

[5]卓少明,李文标,沈诗庆.蚯蚓粪基质栽培娃娃缨萝菜效果初报[J].长江蔬菜,2005(11):45.

[6]卓少明.不同比例蚯蚓粪与常规基质培育豌豆苗菜效果比较[J].热带农业科学,2006,26(6):10-12.

茎叶处理 篇2

1作业时最佳参数

根据省站室内测定结合田间测定结果, 作业时最佳参数如下: (1) 喷雾高度:是指喷头距杂草的平均高度。据调查, 喷雾时杂草高度约在5cm左右, 取约50cm (后桥支架从上向下数第2个固定位置) , 经省站测定, 这一高度下喷雾效果最为均匀。 (2) 作业压力:取392~490kPa, 作业压力取决于油门, 与挡位无关, 经测定, 苗后喷雾在392~490kPa时, 喷雾均匀度较好。 (3) 拖拉机油门及挡位:6挡位拖位机取4挡中油门;8挡位拖位机取5挡中油门。 (4) 行走速度:控制为6km/h。 (5) 公顷用水量:压力为392kPa时, 公顷喷液量约为140±5L;压力为490kPa时, 公顷喷液量约为155±5L。采取上述参数, 每作业1hm2, 作业时间约在15min左右。

2技术支持

2.1选择安全、高效的除草剂

由于2013年播期晚, 苗小现象突出, 为防止药害更要注意选择对作物安全的除草剂。豆田防治阔叶杂草可选用广灭灵、排草丹、氟磺胺草醚 (每公顷1050mL以内) 、虎拿草、耕田易等;防治稗草、野燕麦、狗尾草、芦苇等禾本科杂草, 可选用拿捕净、精稳杀得、精禾草克、威霸、收乐通、喷特、高效盖草能等。玉米除草可选用玉农乐、磺草酮或玉农乐+阿特拉津。水田除草可选用禾大壮、拜田净、杀草丹、千金、草克星、威农等。

2.2注意施药时期

适时施药是保证化学除草效果的关键。由于干旱农民等雨现象普遍, 致使大豆、玉米苗后除草施药过晚的问题突出, 导致草龄大、抗性强, 影响防效。因此, 在干旱条件下, 施药时间应适当提前。大豆田特别是防治鸭跖草、苣荬菜、刺儿菜、大刺儿菜 (大蓟) 、问荆等难治杂草, 要抓住杂草3叶期前, 多数杂草已出苗的适宜时期, 提前施药。玉米田除草, 在玉米3~5叶期选择适宜时间施药即可。水田除草, 在插秧后5~7d可以施药, 但对恶性杂草应选择适宜的时期和适当的药剂进行防治。

2.3注意选择适宜的施药环境

苗后除草剂的药效主要受湿度、温度影响, 高温可使作物受害, 还能加快除草剂雾滴的蒸发, 严重影响药效, 一般温度高于28℃时不宜施药。长期干旱, 土壤水分不足, 空气相对湿度低可降低杂草茎叶表面对除草剂的吸收和传导能力, 加快除草剂雾滴的蒸发, 也影响药效。空气相对湿度低于65%的干旱条件下, 应停止施药。应选早晚气温低, 风力小时施药, 有条件的可进行夜间施药, 防治效果好。

2.4注意助剂选择应用

目前市场上助剂品种杂而多, 农户为提高除草效果要注意选择合适的助剂。近几年研究成果表明, 在喷洒苗后除草剂时, 加入植物油型喷雾助剂, 按要求规范使用, 可克服高温干旱等不良环境因素影响, 获得稳定的药效。在干旱条件下, 药液中加入液体肥、矿物油类、人工合成的非离子表面活性剂类的助剂, 增效作用小甚至无增效作用, 并且对作物安全性差, 与金豆、杂草焚、克阔乐、氟磺胺草醚等混用药害加重, 不推荐使用。

2.5选择先进施药机械, 注意喷液量

水飞蓟茎叶化学成分研究 篇3

1 仪器、试剂和药品

KQ-5200型超声清洗器 (昆山市超声波仪器有限公司) , 硅胶G (青岛海洋化工有限公司) , UV-1型三用紫外分析仪 (上海精科实业有限公司) , 水飞蓟茎叶 (2009年3月采由佳木斯三江水飞蓟素制品有限公司提供) , 水飞蓟宾 (天津金测分析技术有限公司) 。

2 方法与结果

2.1 有效成分提取

称取干燥的水飞蓟茎叶10g, 加入10倍量水, 室温浸泡过夜, 超声波提取, 滤取部分溶液10mL, 记为检液I。剩余溶液和残渣于60℃水浴超声波提取30min, 过滤, 滤液记为检液Ⅱ。另取水飞蓟茎叶10g, 加入10倍量95%乙醇, 于40℃水浴中, 超声波提取30min, 趁热过滤, 记为检液Ⅲ[4]。

2.2 有效成分检测

2.2.1 试管预试法

分别取检液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ进行试管试验[5], 检测结果见表1。

2.2.2 纸层析法 (PC法)

分别取检液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ, 以正丁醇-甲酸-水 (4:1:5上层液) 展开, 各瓣喷雾不同的显色剂[6], 检测结果见表2。

2.2.3 薄层色谱法 (TLC法)

分别取检液Ⅰ、Ⅲ进行薄层色谱法, 色谱条件见表3, 色谱结果见图1～3。

3讨论

本实验通过试管试验法、PC法、薄层色谱法对水飞蓟茎叶的提取液进行检测, 从中检出糖、氨基酸、黄酮、皂苷、甾醇、有机酸等多种天然活性成分, 表明水飞蓟茎叶具有开发利用价值, 为水飞蓟的综合利用奠定基础, 为寻找新的药用植物资源提供科学依据。

参考文献

[1]刘洪玲.水飞蓟素的化学成分及药理作用研究进展[J].中国民族民间医药, 2008, 7 (23) :23-25

[2]闫玉峰, 于建东.水飞蓟化学成分及药理研究进展[J].中国药事, 2000, 14 (5) :335-337

[3]张俊平, 胡振杯, 冯增辉, 等.水飞蓟宾对小鼠肝脏炎症损伤和肿瘤坏死因子的产生及活性的影响[J].药学学报, 1996, 31 (8) :577-580

[4]顾剑, 张宇.樟子松树皮有效成分的初步研究[J].黑龙江医药科学, 2009, (3) :4

[5]杜青波, 张宇, 刁婷婷, 等.红瑞木叶化学成分探讨[J].黑龙江医药科学, 2008, (1) :25-26

苘麻茎叶抗炎镇痛活性部位研究 篇4

动物:昆明种小鼠 (18～22g) , 由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。仪器:R-202旋转蒸发仪 (上海申胜生物技术有限公司) ;B-L系列分析天平 (梅特勒-托利多仪器上海有限公司) ;HH-S恒温水浴锅 (江苏金坛县医疗仪器厂) 。药材和试剂:苘麻茎叶, 采于黑龙江省宾县, 经鉴定, 原植物为Abutilon theophrasti Medic。阿司匹林肠溶片 (湖南新汇制药有限公司, 批号081101) 。所用试剂均为分析纯。供试品溶液的制备:取药材500g, 粉碎成粗粉, 加入6倍量70%乙醇回流提取3次, 每次2小时, 合并提取液, 减压浓缩, 干燥。将干燥后的乙醇提取物用水溶解后, 依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取至无色, 减压浓缩并干燥, 得石油醚部位 (18.5g) , 乙酸乙酯部位 (9.5g) , 正丁醇部位 (16.6g) 和水溶性部位 (56.2g) 。分别取各部位用1%羧甲基纤维素钠配制成相当于生药1g/ml溶液, 备用。

2实验方法

参照文献[1]方法。

3实验结果

见表1。

与空白组比较*P<0.05, **P<0.01

4讨论

苘麻茎叶为锦葵科植物苘麻属苘麻Abutilon theophrasti Medic的干燥茎叶, 分布在长白山区及全国各地。苘麻具有消炎解毒、祛风的功效, 主要用于风湿疼痛、关节酸痛, 跌打扭伤、痢疾, 中耳炎、耳鸣、耳聋的治疗[2]。长期以来人们对其种子治疗痈肿目翳报道较多[2], 但对其茎叶的研究仅限于总黄酮提取工艺方面[3]。基于苘麻茎叶民间良好的治疗价值及其潜在的开发应用前景, 本实验按照传统部分分离的方法采用经典抗炎镇痛模型研究其活性部位, 为苘麻的进一步开发应用研究提供实验依据。

本实验结果表明, 在抗炎方面, 阿司匹林、乙酸乙酯层、正丁醇层显著抑制二甲苯所导致小鼠耳廓肿胀 (P<0.01) , 抑制率分别为55.29%、42.21%、46.10%, 石油醚层与水层效果不显显著 (P>0.05) ;与空白组比较, 乙酸乙酯层、正丁醇层、水层均能减少小鼠肉芽肿重量 (P<0.01) , 其抗炎效果接近阿司匹林组。在镇痛方面, 苘麻乙酸乙酯和正丁醇层能够显著抑制醋酸刺激腹腔黏膜引起的疼痛反应, 减少扭体次数 (P<0.01) , 且效果相当, 镇痛率分别为29.71%、28.87%;石油醚层和水层效果不明显 (P>0.05) ;正丁醇层显著延长热板致小鼠疼痛的痛阈值, 且作用时间持久, 效果与阳性组相当 (给药后30min, 60min, 90min, 120min的痛阈值P<0.05或P<0.01) 。提示苘麻茎叶抗炎镇痛活性部位为乙酸乙酯层和正丁醇层, 且正丁醇层效果优于乙酸乙酯层。

参考文献

[1]陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社, 1993:356, 360.

[2]江苏新医学院.中药大辞典.上海:上海科学技术出版社, 1977:1306.

茎叶处理 篇5

1 材料

菠萝茎叶,海南文昌菠萝种植基地提供。

MRS培养基(乳酸菌培养基),自制。取蛋白胨10 g、牛肉膏10 g、酵母粉5 g、K2HPO42 g、柠檬酸二铵2 g、乙酸钠5 g、葡萄糖20 g、吐温-80 1 m L、MgSO4·7H2O 0.58 g,Mn SO4·4H2O 0.25 g、琼脂20 g,加入纯化水1 000 m L[4],加热溶解,调p H值至6.2~6.4,分装于三角瓶中,121℃灭菌15 min。

青贮瓶(塑料瓶,体积为1.25 L)、保鲜膜、超净工作台、移液枪、锥形瓶、烧杯、试管架、精密雷磁酸度计、分析天平。

2 方法

2.1 青贮料的制作

采用常规青贮法进行青贮,青贮期为28 d。首先将刚收割的菠萝茎叶经过风干萎蔫后,切成1.5~3.0 cm的小段,混匀后装入青贮瓶内,压实,在瓶口处包住保鲜膜,拧紧瓶盖以防漏气[5],分别在0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,14,21,28天取样一次,每次取3个平行样品。取样时首先除去上层发霉的青贮料,再将青贮料混合均匀,然后取样。

2.2 青贮饲料感官评定

青贮饲料感官评定采用德国农业协会(DLG)青贮感官评分标准及等级进行评定。根据气味、质地、色泽3项进行评分,气味评定分为4个等级,为0~14分;色泽评分分为3个等级,为0~2分;质地评分分为4个等级,为0~4分,然后综合3项得分,评定为优(20~16)、中(15~10)、可(9~5)、下(4~0)4个等级。具体评定标准和等级见表1。

2.3 乳酸菌培养与计数

无菌条件下在3个平行样中各称取10 g青贮饲料样品,分别置于装有90 m L灭菌生理盐水的锥形瓶中振荡5 min,浸泡2 h做成10-1的均匀稀释液。然后用1 m L灭菌移液枪吸取10-1稀释液1 m L;注入含有9 m L灭菌生理盐水的试管内,振摇混匀,做成10-2稀释液;再从该试管中吸取1 m L稀释液,注入另一支装有9 m L灭菌生理盐水的试管内,重复以上步聚,最后将原液稀释至10-7倍。然后用移液枪从稀释倍数为10-5、10-6和10-7(新鲜样品稀释倍数为10-3、10-4和10-5)的试管中分别吸取100μL稀释液,滴在MRS培养基平板上,涂匀,每个稀释倍数做3个重复,37℃厌氧培养72 h,进行菌落计数[6],选取菌落数在30~300的平板进行计数[7]。同时用稀释液作空白对照,以区别操作过程中是否有污染。

2.4 p H值的测定

青贮瓶开封后取部分青贮饲料混合均匀,称取35 g青贮饲料放入锥形瓶中,加入70 m L去离子水;用保鲜膜密封,放入冰箱中4℃浸提24 h;然后取出锥形瓶,用双层纱布和滤纸进行过滤和榨取。滤液用酸度计测定p H值并记录。

常规青贮饲料p H值的国家标准:优等,p H值4.0以下;良好,p H值4.1~4.3;一般,p H值4.4~5.0;劣等,p H值5.0以上[8]。

3 结果与分析

3.1 感官评定

结果见表2。

由表2可以看出:菠萝茎叶通过青贮后,分别在第7,14,21,28天对青贮料进行感官评定。青贮第7天,青贮料呈黄绿色,有光泽,有芳香酸味,茎叶保持原状,综合评分为优;青贮第14天,青贮料呈亮黄色,无酸臭味,有较浓酸香味,茎叶结构明显,综合评分为优;随着青贮时间的延长,当青贮到第21,28天时青贮料呈黄绿色,有光泽,有芳香酸味,茎叶结构明显,不黏手,综合评分为优。因此,菠萝茎叶在青贮各阶段中感官评定等级皆为优,适合作为青贮原料。

3.2 p H值与乳酸菌

结果见表3、图1、图2。

由表3和图1可以看出:菠萝茎叶在青贮过程中,乳酸菌数在前期逐渐下降,第5天时突然上升,达到一个相对最大值(7.51 cfu/g),之后整体呈逐渐下降的趋势,并趋于稳定,到28天时达到最小值(5.59 cfu/g)。

从表3和图2可以看出:菠萝茎叶青贮过程中,各阶段p H值均小于原样。前9 d,p H值下降较为明显;青贮5~28 d,p H值维持在一定水平,不再有剧烈的波动。说明菠萝茎叶青贮过程中乳酸产生较快,青贮第5天就达到了较高的水平且已基本稳定。

4 讨论

本试验结果表明,菠萝茎叶青贮初期乳酸菌含量逐渐下降,在青贮第5天升高,之后逐渐减少,缓慢趋于平稳;青贮菠萝茎叶p H值在青贮前期逐渐下降,第5天达到4.0以下,以后几天无明显变化,趋于平稳。这是由于随着氧气耗尽,厌氧条件形成,青贮饲料乳酸菌增殖,使乳酸、乙酸等有机酸积累,p H值下降,当有机酸积累到一定程度会抑制乳酸菌繁殖,从而达到长期稳定保存的目的。杨云贵等[4]对2种玉米青贮饲料青贮过程中主要微生物的变化规律进行研究,结果表明,乳酸菌数量均呈先升高、然后逐渐下降并趋于平缓的变化规律,与本试验结果一致。本试验结果表明,乳酸菌在第5天即可大量繁殖,成为优势菌群,并产生大量乳酸,致使p H值下降;后期由于原料中所含可溶性碳水化合物已被利用,而逐渐减少;而且在青贮过程中有机酸逐渐积累、酸度增加,导致厌氧不耐酸的乳酸杆菌受到抑制[9],使得p H值不再大幅度变动;同时,青贮过程中乳酸菌数量共出现两次升降变化,最后趋于稳定,这和张慧杰等[7]对饲草青贮过程中乳酸菌数量变化的研究结果一致。

青贮饲料p H值是衡量青贮饲料品质优劣的重要指标,优质青贮饲料p H值大体在3.5~4.0之间;低劣青贮饲料p H值在5.5~6.0之间;中等的青贮饲料则在二者之间[10]。本试验中,菠萝茎叶青贮饲料p H值约为3.99~3.74,属优质青贮饲料。另外感官评定结果表明,在各青贮阶段,菠萝茎叶青贮料均呈黄绿色,有光泽,有芳香酸味,茎叶保持原状,综合评分在18分以上,皆为优等,适合作为青贮饲料原料[11]。目前研究者多研究菠萝茎叶作为纺织纤维利用,而应用于青贮饲料的研究较少。本试验对菠萝茎叶青贮过程中品质变化规律进行研究,为菠萝茎叶更好地应用于青贮饲料原料提供参考。菠萝茎叶边缘有锐齿,且锐齿较小,不容易处理,从而导致适口性差,如何提高其适口性和动物采食量是菠萝茎叶利用的关键问题。

5 结论

在菠萝茎叶青贮过程中,乳酸菌数量在青贮第5天达到相对最大值,第28天达到最小值;p H值总体趋势为下降,而后趋于平稳,青贮各时段的p H值均低于原样,青贮前5 d p H值出现明显降低,之后趋于平稳;同时在各阶段青贮料感官评定都为优。说明菠萝茎叶是一种适宜青贮的秸秆原料,具有乳酸菌增殖快、p H值下降快且稳定的特点。

参考文献

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白芨组培苗春季剪除茎叶炼苗技术 篇6

1 白芨组培苗剪除茎叶炼苗方法的优点与缺点

1.1 白芨组培苗剪除茎叶炼苗方法的优点

白芨组培苗剪除茎叶炼苗方法优点主要体现在五方面:一是洗苗时对根和茎叶的要求不高,白芨组培苗洗苗时最容易伤及根和茎叶,采用这种炼苗方法对成活率几无生影响;二是对空气湿度要求不严,炼苗中可减少喷雾次数,便于管理;三是能明显提高炼苗成活率,其成活率可达90%以上;四是提高了双芽率,剪除主茎后,可刺激新芽萌发,个体较大的假鳞茎能萌发双芽,增加苗量;五是明显增加新根数量,苗较健壮,移栽大田时显著提高移栽成活率。

1.2 白芨组培苗剪除茎叶炼苗方法的缺点

白芨组培苗剪除茎叶炼苗方法缺点存在于两方面:一是洗苗后需剪除茎叶,增加了一定的工作量;二是出苗不整齐,由于假鳞茎大小不一,芽的强弱有差别,从4月至7月陆续有新苗萌发。

2 白芨组培苗剪除茎叶炼苗方法的基理

白芨组培苗传统的带茎叶炼苗方法,炼苗过程中假鳞茎上的老根吸水能力较弱,只有新根逐渐长出后才能正常供给地上部分水分,新根产生需要45~60天,在此之间都要保持较高的空气湿度才能保证成活,但基质湿度又不能太高,由于假鳞茎在组培瓶中一直位于培养基外,处于一种相对干旱的环境,浇水过多会导致假鳞茎无法适应高湿的基质环境,容易引起腐烂,常规方法炼苗中基质湿度与空气湿度形成一对矛盾体。生产中只有采取人工背喷雾器在一天中多次喷水增加空气湿度,或选用成本较高的弥雾设备才能解决空气湿度与土壤湿度的矛盾。剪除茎叶炼苗方法充分利用了假鳞茎中自身保持的水分能满足芽在基质中萌发的特性,炼苗前期基质中只需保持适度水分即可,由于剪除了茎叶较低的空气湿度对其无影响。待新芽萌发出土后对空气湿度要求较高,此时增加浇水量,保持较高基质湿度的同时增加了空气湿度,有利于苗的生长,由于假鳞茎通过前期的适应性锻炼已逐渐适应了较高的基质湿度,在高湿的基质中已经不会腐烂,剪除茎叶炼苗方法很好地解决了空气湿度与基质湿度之间难于协调的矛盾。

3 白芨组培苗剪除茎叶炼苗方法

3.1 保护设施的选择

炼苗设施可选择带有遮阳网的塑料大棚、塑料小拱棚,或者简易的阴棚,但以塑料大棚或塑料小拱棚较好,两种塑料棚可根据气温变化调节棚内温度,达到提前出苗的效果。

3.2 基质配比及处理

白芨属兰科药用植物,其根是典型的气生根,对土壤的透气性要求较高。疏松的炼苗基质是提高炼苗成活率的关键。目前多采用腐殖土、草碳、锯木屑或粉碎的玉米杆与土壤按一定的比例配置成炼苗基质。在保证成活率的前提下从经济角度考虑,以选用废弃的菌料(种过双胞菇、平菇等食用菌的栽培料)或药渣与土壤配成基质较好。配比前将菌料或药渣堆捂发酵约1个月,用发酵腐熟后的菌料或药渣与红壤按1:1配成基质,在苗床上铺一层厚5~10cm的基质,用500倍液的多菌灵药液喷湿基质表面进行基质消毒。

3.3 组培苗质量要求

剪除茎叶炼苗方法对组培苗的质量有一定要求,只有假鳞茎横茎3mm以上,分茎明显,经过冬季低温休眠的假鳞茎炼苗才易成功。假鳞茎较小的组培苗由于母鳞茎的养分不足,头年不能分化芽原基,剪除茎叶后没有新芽萌发,容易在基质中腐烂,一般不能成苗。

3.4 炼苗时间的确定

白芨组培苗剪除茎叶炼苗时间一般在2~3月均可进行,以新芽刚萌动时最好,萌发的芽太大洗苗时易伤芽。

3.5 洗苗、剪苗及消毒

剪除茎叶炼苗方法对组培瓶中的苗不用开瓶锻炼,可直接从组培瓶中取出洗苗,洗净培养基,距假鳞茎0.5~1cm处剪除上部茎叶,放入用40%多菌灵乳油配制的1000倍液的药液中消毒30分钟,在遮光条件下晾干表面水分即可种植。

3.6 种植

按株行距5cm×5cm的种植规格,在苗床上开浅沟,沟深1~2cm,依次放置假鳞茎后覆盖基质,覆盖厚度以刚盖严假鳞茎为宜。浇少量水,以渗透基质层2cm左右较好。

3.7 炼苗管理

3.7.1 水分管理

刚种植的假鳞茎不宜浇水过多,浇水过多会导致假鳞茎无法适应高湿的基质环境,容易引起腐烂。每隔2~3天浇一次水,每次浇水以水分能渗透到基质层2cm左右即可。在这种环境下,老根会逐渐死亡,但不会影响新芽萌发。种植30~45天会有部分新芽萌发出土,少量新根也随之长出,此时茎叶的蒸发量较大,需加大浇水量,每天喷水一次,经常保持基质表面湿润。

3.7.2 温度控制

白芨组培苗假鳞茎新芽萌发要求的温度较高,在气温28~32℃,地温22~25℃时萌发最快,地温低于20℃萌芽极缓慢。因此,早晚关棚提高棚内温度,中午当棚内温度高于35℃明应及时开棚降温。当50%以上的芽萌发出土,为防止苗徒长应降低棚内温度,将棚内气温控制在20~25℃,确保幼苗健壮生长。

3.7.3 施肥

白芨组培苗炼苗期间施肥以叶面追肥为主,当出苗率达80%以上时可浇清粪水1~2次,每间隔20天左右用2~3%的磷酸二氢钾水溶液喷雾一次,每间隔30天左右用2%的尿素水溶液喷雾一次。

3.7.4 除草

白芨组培苗生长缓慢,植株矮小,除草要做到除早、除小,防止杂草过大时拔除易将白芨苗带出土面。对于易拔除的单子叶杂草和双子叶杂草可采用人工拨除法,人工较难拔除的常见恶性杂草水花生采用20%使它隆乳油除草剂防治,能收到较好效果。

3.7.5 病虫害防治

白芨苗床上常见的害虫主要有卷球鼠妇(草鞋虫)、蛞蝓,用3%辛硫磷颗粒剂撒施苗床表面进行防治,每667m2用药2kg。苗期易发生根腐病,病害发生后要适当控制浇水量,同时用1000倍液的多菌灵喷雾1~2次。

4 起苗移栽

炼苗3~6个月可起苗移栽,起苗时先浇水,用竹刀挖苗,尽量不伤根,及时移栽至大田。

摘要：为简化白芨组培苗炼苗方法,采用剪除白芨组培苗茎叶的炼苗方法,提高了白芨组培苗炼苗成活率,促进苗健壮生长提高移栽成活率。

水稻茎叶特异性启动子研究进展 篇7

鉴于茎叶是水稻进行光合作用的场所, 光合作用相关的蛋白主要可分为3类:一是捕光叶绿素a/b结合蛋白 (CAB, chlorophyll a/b binding protein) , 其可以通过与光合体系Ⅰ (PSⅠ) 和光合体系Ⅱ (PSⅡ) 结合接收太阳能从而同化二氧化碳[1];二是核酮糖-1, 5-二磷酸羧化酶 (Ru BPCase, ribulose 1, 5-bisphosphate carboxylase) , 其主要是在光合作用中对二氧化碳的固定起到催化作用, 并且在光呼吸途径中产生2-磷酸乙醇酸[2];三是丙酮酸磷酸双激酶 (PPDK, pyruvate, orthophosphatedikinase) , 其作为光合反应中的一个叶绿体酶, 同时催化二氧化碳初级受体生成磷酸烯醇式丙酮酸。研究表明, 编码光反应酶的基因是多基因家族, 它们在茎叶中表达具有高度的组织特异性。近年来, 关于水稻茎叶特异性启动子的研究主要是与光合作用相关酶基因的方面, 并且取得了一定的进展, 现将其总结如下。

1 水稻茎叶特异性启动子的种类

1.1 捕光叶绿素a/b结合蛋白基因启动子

植物捕光叶绿素a/b结合蛋白是一类比较典型的光诱导型基因。目前, 研究者已经从小麦、水稻和梨等植物中分离并得到了cab基因[3,4,5,6,7,8]。Leutwiler L S et al[9]的研究结果表明, 植物中的cab启动子同时具有2种特性, 即光诱导性及茎叶组织特异性。cab基因的表达调控是在转录水平上, 调控元件位于基因的5′非翻译区, 而且cab基因的表达水平与不同的光受体有关[10]。Xiang T H et al[4]从水稻中可以克隆和分离全长的编码捕光叶绿素a/b结合蛋白的全长cab基因。研究发现, cab基因家族是高度同源且保守的, 并且从Northern杂交分析表明cab-n8的表达在茎叶中无差异, 但是cab-n8在茎叶中的表达需要有光的诱导。

1.2 核酮糖1, 5-二磷酸羧化酶基因启动子

光合作用是植物最重要的生理功能之一, 而核酮糖1, 5-二磷酸羧化酶是光合作用中碳同化的关键酶。核酮糖二磷酸羧化酶是由2种大小亚基组成, 大亚基和小亚基 (rbc S) 分别由叶绿体基因组、核基因组编码。由于大亚基的表达受小亚基 (rbc S) 表达的调控, 因此关于小亚基的研究更受关注。rbc S基因通常以基因家族的形式定位于1条或多条基因组染色体上。高等植物中rbc S的基因家族成员在植物的各个组织和发育的不同时期的表达情况不完全一样, 因此所受的调控机制也不相同。Nomura M et al[11]的研究中发现rbc S在C3和C4植物中的表达模式不同, rbc S基因主要在C3植物叶肉细胞中特异表达, 在C4植物的维管束鞘细胞中表达。

rbc S启动子同时具有光诱导性和组织特异性。目前, rbc S启动子在水稻上的应用非常广泛。最早Kyozuka J et al[12]从番茄中发现rbc S启动子可以在转基因水稻中驱动gus基因的表达, 通过检测GUS活性发现其只在绿色组织中表达, 具有组织特异性。刘巧泉等[13]克隆番茄Rubisco小亚基rbc S3A基因的5′上游序列, 发现rbc S启动子可以驱动gus基因在转基因水稻绿色组织中特异表达, 而在种子和根等组织中几乎不表达。黄海群等[14]克隆水稻日本晴rbc S基因的启动子, 命名为Posrbcs。Posrbcs启动子可以驱动gus报告基因在转基因水稻的胚及胚乳中不表达, 在叶片叶鞘、茎及颖壳中特异表达。然后构建Posrbcs的5′端缺失载体, 通过对GUS进行定性与定量结果分析, Posrbcs片段缺失的越多, GUS活性越低。进行光诱导实验发现, 光能显著提高gus基因的表达活性。Posrbcs缺失片段中I box、T box、GATA box等于光应答相关的元件缺失会造成在不同时期光诱导活性的降低及光诱导的表达时间后移。卢碧霞等[15]进行了相类似的实验, 对转基因水稻的GUS定量测定结果发现rbc S启动子的表达水平高于Ca MV35S组成型启动子。

1.3 丙酮酸正磷酸双激酶启动子

丙酮酸正磷酸双激酶 (PPDK) 不仅是C4植物光合反应中的一种叶绿体酶, 而且也是C4途径中的专一酶。该酶可催化二氧化碳初级受体———磷酸烯醇式丙酮酸 (PEP) 的生成。此催化反应不仅受到光的调控, 而且也是C4光合作用途径中的限速步骤之一[16]。

C4植物是从C3植物进化而来的, PPDK基因在C3、C4植物中可能有一个共同的祖先。Imaizumi N et al[17]研究发现, 在C3植物水稻中, PPDK基因同样具有2个不同的启动子转录起始位点。其中较长的转录本存在于叶片中, 而较短的转录本存在于小穗中。Wang Q et al[18]也在水稻叶片中发现有C4光合酶系统。Taniguchi M et al[19]从玉米中克隆C4pdk启动子, 发现其是受光诱导的强启动子, 驱动gus基因在玉米叶肉细胞中特异性表达。目前关于PPDK基因在转基因水稻方面的研究进展主要集中在对光合作用的影响上, 而在PPDK启动子对转基因水稻方面的研究有待进一步深入。

1.4 其他茎叶特异性启动子

PD540启动子:CAI MENG et al[20]从农垦58中分离克隆了1个携带编码光合系统Ⅱ的10 KD蛋白的基因PD540启动子区的DNA片段, 发现它能驱动gus基因在水稻茎、叶、颖壳以及叶鞘中表达, 而在水稻根、胚、胚乳以及成熟的颖壳中不表达。PD540是一个绿色组织特异性的启动子。从PD540中发现5种新型组织特异顺式元件 (LPSE1, LPSE2, LPSRE1, LPSRE2, PSE1) 。LPSE1激活基因在叶片以及圆锥花序中表达。LPSRE2抑制基因在叶片、根、圆锥花序及茎中表达。PSE1抑制基因在圆锥花序及茎中表达。LPSRE1和LPSE2在调控组织特异性方面具有双重作用, 都可作为叶片激活子, 但是LPSRE1作为茎的抑制剂, LPSE2作为圆锥花序和根的抑制剂。转基因水稻携带Cry1Ac表达, 在胚乳和胚中没有发现Cry1Ac蛋白, 各种缺失的PD540启动子调控报告基因表明各种组织/特异表达模式。PD540, 缺失PD540和组织特异顺式元件为调控水稻再生组织/特异基因表达提供有用的工具。

LP2启动子:在转基因水稻中rbc S (核酮糖二磷酸羧化酶) , PPDK (丙酮酸磷酸双激酶) , LHCPⅡ (光合体系Ⅱ中叶绿体a/b结合蛋白) , PD540 (光合体系Ⅱ10 KD蛋白) , 这些都是光合作用相关的启动子, 都可以在水稻的茎叶组织中表达。Roger T et al[21]分离并鉴定了水稻叶, 圆锥花序2基因的启动子 (LP2) 。LP2基因编码富含亮氨酸重复序列类受体蛋白激酶, 构建含有LP2启动子和GUS-GFP双元报告基因的载体, 转化出苗后通过组织化学GUS染色发现在叶肉细胞中GUS活性最强, 但是在其他绿色组织, 包括叶片的表皮细胞都有表达。LP2启动子对光有高度的应答, 在黄化的幼苗中检测到其表达很弱。LP2启动子是绿色组织特异性启动子, 虽然插入到不同的基因组位置而且拷贝数也不一样, 但是它们组织表达模式是一样的, 分析LP2启动子的顺式元件发现2.2 kb的启动子序列含有20多种不同的光应答元件。

PDX1启动子:YE RONG-JIAN et al[22]根据微阵列以及RT-PCR数据库, 发现了1个水稻绿色组织特异性表达的基因DX1, 克隆DX1基因的启动子并构建与GUS基因的表达载体, 出苗后经过GUS活性的组织染色和定量分析发现, PDX1-Gus在绿色组织中高度表达, 而在花药以及种子中不表达。随后构建PDX1启动子5′和3′缺失的载体, 凝胶阻滞实验和定向突变实验发现在PDX1启动子中含有2种新型的组织特异顺式元件 (GSE1和GSE2) 。GSE1作为在叶、叶鞘、茎和圆锥花序中表达的正调控元件。与GSE1相比, GSE2只在叶鞘以及茎中作为正调控元件。PDX1启动子以及其顺式作用元件, GSE1和GSE2对转基因水稻育种方面具有重要的作用。

2 水稻茎叶特异性启动子的应用前景

早期关于水稻启动子的研究主要集中在组成型启动子的功能及应用方面。但是组成型启动子驱动外源基因的表达可能会对水稻有害, 引起不育, 发育迟缓, 形态发育不正常, 产量减少, 改变颗粒组成或者转基因沉默。伴随多基因转化技术的进步和应用, 尽快找到合适的组织特异性启动子则是当前科学界研究的重点。使用1个强的组织特异性性启动子可以限制基因在只需要的组织或者在特定的时期表达可以解决上述的问题。茎叶特异性启动子可以使表达的蛋白质产物富集在茎叶中, 减少水稻无需的物质能量消耗, 改善光合作用;也可以用于水稻种子为主要收获产物的作用, 使抗除草剂、抗虫等外源基因只在茎叶中特异表达而在水稻籽粒 (胚和胚乳) 中不表达, 以此来提高转基因作物的生物安全性。而该研究结果对解决人类食用转基因水稻安全性问题具有开创性意义[23]。

摘要：实现目的基因在转基因水稻中的定点、定时、定量表达以及提高转基因水稻的生物安全性一直是转基因水稻研究者追求的目标。水稻茎叶特异性启动子可以驱动目的基因在茎叶中优势表达, 使其获得抗虫、抗病能力及对逆境的耐受性。综述了水稻茎叶特异性启动子的特点及其种类, 并对其提高转基因水稻安全性的现实意义进行了展望。