运动干涉（共7篇）
运动干涉 篇1
1 前言
汽车排气系统作为整车一个重要的子系统, 其运动轨迹关系着整车的振动与噪声 (NVH) 性能。排气系统的运动包络面直接反映了该系统的运动轨迹, 通过仿真计算可得出其在极限工况下与车身及其附件的运动干涉情况, 从而避免排气系统因运动干涉造成的振动噪声问题, 以及排气系统因干涉而造成的磨损。国内文献对于排气系统的运动包络面研究还很少[1], 本文正是基于这个基础上提出排气系统运动包络面的计算方法, 以及运动干涉分析方法。
2 排气系统运动分析
汽车排气系统的运动是复杂的非线性运动。排气系统所受的激励为催化转化器法兰与发动机的连接部位, 而所约束为排气系统各悬挂点。由于排气系统管路为细长薄壁管, 在排气系统运动中会有所变形, 因此在计算其运动轨迹时, 不能单纯的将其考虑为刚体采用多刚体的方法计算其运动轨迹, 而需要将其考虑为柔性体, 发动机与车身等其他部件考虑为刚体, 来计算排气系统运动轨迹是否与车身及附件发生干涉。因此这里需要引出刚弹性耦合的建模计算方法。
2.1 建模理论
刚弹性耦合模型, 需要将有限元柔体超单元分为边界自由度和内部自由度。建立柔体超单元模型时保留下的外部节点就是合并到多体模型中时的连接点, 它的自由度就是边界自由度, 通过连接点可以在多体模型中建立各种边界条件。当把超单元转换到MSC.ADAMS软件的多体模型中时, 柔体被写成模态中性文件 (MNF) , 这时要进行正交模态转换去除掉车身的刚体模态, 并保留柔体模态的全部信息, 包括连接点的约束模态等[2,3,4]。
2.2 排气系统柔性体模型的建立
在MSC.PATRAN中建立柔性体超单元模型时, 必须确定超单元的外节点和动力缩减后的模态自由度。本文中外部节点为排气系统各吊点以及催化转化器与发动机的连接法兰螺栓点。有限元模型动力缩减后保留的模态是根据模态频率和模态振型确定的。模态频率要符合所研究的问题的频率范围, 但同时也应注意若保留过多的模态数量将会导致分析困难。这时可以通过在MSC.ADAMS中检查柔性体的模态振型并对模态进行取舍, 禁用不重要的局部模态。考虑到本文主要为分析排气系统的运动轨迹, 涉及的刚体模态较低, 故保留了0~200Hz以内的模态频率, 见表1。排气系统柔性体模型如图1所示。
2.3 排气系统刚弹性耦合模型的建立
在MSC.ADAMS中将上面建立的柔性体模型转化成柔性体中性文件 (MNF) 并导入, 同时建立发动机的刚体模型, 在仿真中假定车身为刚体, 固定不动。排气系统吊钩与车身之间使用橡胶衬套连接, 发动机与车身之间使用橡胶衬套连接。同时, 为便于观察排气系统运动与前消和后消的隔热罩是否发生干涉, 将与排气系统间隔比较近的零件如:副车架、中通道、后悬架扭转梁、备胎等同时作为固定刚体导入模型。装配后的排气系统仿真模型如图2所示。
3 运动包络计算与干涉分析
3.1 仿真条件
对排气系统的运动轨迹进行计算时, 必须考虑到发动机工作的各中极限工况。通常在对动力总成位移进行校核时, 使用到28种典型工况进行校核, 从而得出发动机在不同工况下质心的位移情况。这里使用发动机质心位移作为初始条件对排气系统的运动轨迹进行计算, 即最终的计算结果包含了汽车28种典型工况下的运动轨迹, 如表2, 很具有代表性。
3.2 运动包络分析
在发动机质心处依次加载发动机各典型工况下的位移, 由ADAMS仿真可得出排气系统的运动包络面。由于排气系统运动相对整个排气系统来说变形量较小, 为清晰显示排气系统运动包络情况, 对三元催化位置、前消声器位置及尾管位置局部进行截图。如图3所示。
3.3 运动干涉分析
将排气系统边界模型导入ADAMS分析模型中后, 通过前面进行的排气系统运动包络分析可检查排气系统与边界是否发生干涉。由于边界较多, 本文限于篇幅不一一列举, 选取其中未发生干涉、发生干涉两处进行说明。如下图4 P1为前消顶部与横梁之间间隙, P2为管路与横梁之间间隙。
P1前消壳体与横梁间隙随各工况变化情况如图5, 最初间隙为30.3mm, 最小间隙为23.7mm, 所在工况为垂直向上加载, 最大间隙为36.9mm, 所在工况为垂直向下&横向向左加载。
P2管路与横梁间隙随各工况变化情况如图6, 最初间隙为11.1mm, 最小间隙为-8.4mm, 即发生干涉, 所在工况为8KPH前碰, 最大间隙为35.4mm, 所在工况为8KPH后碰。
后续可通过对管路局部走向修改对干涉位置进行调整, 以避免干涉。
4 结论
(1) 利用部件模态综合法建立了排气系统的刚弹性耦合模型, 提出了排气系统运动包络面的计算思路, 并由实际算例说明该方法的可行性。
(2) 利用建立的排气系统刚弹性耦合模型, 计算了某型车的排气系统包络面, 并检查其是否与排气系统边界的干涉, 在早期对排气系统整体设计提供帮助。
摘要：汽车排气系统往往由于其设计不当而在某些工况下与车身或车身附件发生干涉, 排气系统的运动包络面包含了汽车在极限工况下排气系统的运动轨迹, 可得出排气系统与车身及其附件的干涉部位, 从而作出改进。文章结合MSC/PATRAN和MSC/ADAMS, 以某轿车排气系统为例, 由PATRAN建立排气系统柔性体模型, 再由ADAMS建立刚弹性耦合模型计算其运动轨迹, 解决了该轿车排气系统与隔热板之间的运动干涉问题。
关键词：刚弹性耦合,排气系统,包络面
参考文献
[1]顾彦, 宋艳冗.汽车排气系统运动包络面的计算[C].MSC.Software中国用户论文集, 2007.
[2]Craig R R, Bampton M.Coupling of Substructures for Dynamics Analyses[J].AIAA, 1968 (6) :1313-1319.
[3]马天飞, 王登峰.利用MSC Adams/Car建立轿车的刚弹耦合模型[J].计算机辅助工程, 2006, (15) .
[4]朴英花, 马天飞.利用刚弹耦合模型进行整车振动的仿真计算[J].汽车技术, 2006, 20 (3) .
儿童学步车设计中的运动干涉检查 篇2
关键词：学步车,PRO/E,干涉检查
0 引言
对于学步车,欧美标与国标在结构上要求不同,根据不同的目标市场,应当按照不同的标准进行设计。按照欧标BS EN 1273-2005规定,学步车是小孩处于坐或站立状态,在车架支持帮助下,进行移动的一种结构。主要包括车架、底盘、上盘、停车装置和胯布等几个部分,如图1所示。学步车以塑料零件为主,需要方便地拆卸、折叠和变换使用状态,特别是上盘,安装了很多自身有动作并且需要可以拆卸的小玩具,很多零件之间有相互运动关系。为了避免手板完成后出现太多的改动,就需要对现有设计模型进行准确的分析,不但要判断零件之间在静止状态下是否有干涉现象,还要判断在学步车折叠、转轮、放下停车装置、拆卸玩具盘等动作过程中零件之间是否存在干涉。运用有效的运动干涉检查工具,可以大大缩短设计周期,降低后期手板修改和改模造成的花费。
1 常用的干涉检查方法
1.1 静态的干涉检查
在静止的固定状态下,判断零件之间的干涉是相对比较容易的,Pro/E、SOLIDWORKS、甚至AUTOCAD都能比较容易地实现。
在Pro/E的装配模式下,选择分析菜单中的模型,然后选择全局干涉菜单,就可以进入功能界面进行静态干涉检查。Pro/E将以零件对的形式,将所有发生了干涉的情况列出,供设计人员进行核对。有的干涉是设计中故意保留的结构造成,比如待攻丝的螺孔、两组不同的轮子为了方便装在同一位置等。有的则是设计疏忽造成的错误,如图2所示,上盘中弹簧直径过小,造成了弹簧与塑料定位件之间的干涉。这样的局部小零件的细小干涉,人工检查一般是很难发现的。
1.2 运动干涉检查
上文采用的分析方法,只能在静态情况下进行分析。当零件之间有相互运动时,要判断在运动过程中零件与零件之间是否有干涉的情况,就不适用。这时就需要通过Pro/E的运动仿真模块来实现运动干涉检查。下面以学步车脚轮为例来说明运用Pro/E现有功能实现运动干涉检查的方法。
首先,在装配模块中,应该用机构连接的方式中的销钉定义脚轮的动作,如图3所示。然后进入机构设置模块,定义脚轮的运动轴为伺服电机,并设定电动机的初始速度为50。设定完成后,新建分析运行,即可看到脚轮的转动模拟。在回放中选择碰撞检测设置,设置全局干涉。计算完成后,就可以实现运动过程中的干涉检查,如图4所示。如果发现有干涉现象,干涉区域将以红线标出。
2 基于二次开发的干涉检查
以上两种方法,在使用时,都有其局限性。静态检查无法处理运动干涉的情况,而Pro/E所提供的运动干涉检查的功能在实际使用时,计算非常的缓慢,在中等复杂程度的情况下,进行一个简单的分析往往就需要十几分钟的时间,如果是大的运动检查,需要的时间更长,实用性很差。为了方便使用,减少计算时间,将静态检查、简化表示和二次开发方法结合起来,提出了一种新的干涉检查方法,实现思路如下:
1)因为整个学步车模型比较复杂,在运动过程中,每帧都要进行全局干涉分析,计算量过大,速度缓慢是正常现象。
应当首先构建零件/组件间装配关系对,根据具体的运动情况,把运动过程中可能发生干涉的组件或零件名称成对列出。例如对脚轮而言,在脚轮转动过程中,只可能和下盘、防滑块发生干涉。这样就构成脚轮——下盘、脚轮——防滑块两对可能干涉组合。
建立这样的干涉组合的目的,是在分析计算过程中,只让有可能发生干涉的零件参与运算,其它零件通过简化表示减少资源占用。
2)在简化模式打开装配件的情况下,设定步长,在每个节点进行全局干涉检查,在任意节点碰到干涉即停止在干涉位置,供设计人员确认。
3)通过二次开发的方法,自动实现根据数据库中的干涉组合信息生成简化模型、修改位置信息并进行全局干涉检查。
3 关键步骤与效果
选用Pro/E野火5.0作为开发平台,Visual Basic.net 2008作为开发语言,选用Excel 2007构建数据库文件,关键步骤和实现效果如下:
1)为了操作方便,选用Excel作为数据输入接口,然后将xls文件通过ADO方式打开,操作方法类似一般的Access数据库操作。数据直接由设计人员根据实际情况,手工输入,如图5所示。
2)在VB中读取数据库内容,通过API连接PROE与VB,生成仅仅包含干涉组合对零件的简化表示形式。通过CCpfcCreateNewSimpRepInstru ctions.Create()设置IpfcSimpRepInstructions对象,给定简化表示的名称,然后根据数据库内容添加零件或组件到简化表示中。仅添加下盘56和轮子104的简化表示效果如图6所示。
3)根据数据库内容修改主动零件的参数,在零件设计过程中,应当有根据装配关系确定的驱动尺寸,否则无法实现本步骤。一般是通过IpfcBaseSession.RetrieveModel获得基础模型,IpfcParameterOwner.GetParam获得参数,然后设定参数的值,最后通过IpfcSolid.Regenerate再生模型,获取尺寸变动后的模型。
4)通过调用全局干涉检查功能IpfcGlobalEvaluator.ComputeGlobalInterference()计算当前状态下干涉情况。
5)变更步长直到终值计算完成,从而完成一个干涉组合对的计算。碰到globalInterferences is Nothing不符合的情况,说明出现干涉,则记录当前位置信息,输出到数据库作为后续分析参考。
6)循环读取其它组合对,完成整个学步车的运动干涉分析。
4 结束语
本文以儿童学步车为例,介绍Pro/E中进行运动干涉检查的常用方法,并且借助Pro/E的VB API二次开发技术,将简化表示、全局干涉检查结合起来,提出了一种实现运动干涉的新方法,虽然步骤增加,但整体处理速度明显加快,并且可以将分析结果以EXCEL表格的方式输出,便于进一步进行后续分析。
参考文献
[1]PTC.Pro/Engineer WildFire5.0VB API User’s Guide[M].USA:PTC,2010
[2]刘龙,朱林波.基于VB.NET的PRO/E二次开发关键技术[J].现代制造工程,2008,(10).
[3]张继春,杨建国,徐斌.使用VB进行Pro/ENGINEER二次开发[J].机械与电子,2006,(4).
论人道主义干涉与不干涉内政原则 篇3
2011年2月, 叙利亚反对派与政府军之间的矛盾激化, 逐步发展成为国内战争。为了保护平民不受战争的侵害, 2011年3月17日, 联合国安全理事通过了以“保护平民”、“设立禁飞区”等为主要内容的第1973 (2011) 号决议。[1]2011年3月19日, 北约部分成员国开始空袭利比亚, 这是继伊拉克战争之后, 以美国为首的北约又一次军事打击, 而这次的美国又是打着人道主义干涉的旗帜, 该事件再度引起了世人对人道主义干涉问题的关注。
一、从理论层面分析不干涉内政原则的定义及适用
《联合国宪章》第2条第7款规定:“本宪章不得认为授权联合国干涉在本质上属于任何国家国内管辖之事件, 且并不要求会员国将该项事件依本宪章提请解决;但此项原则不妨碍第七章内执行办法之适用。”由此可见, 不干涉内政原则已经被国际社会普遍接受。要分析在不干涉内政原则基础上, 人道主义干涉的合法性及合理性问题, 首先必须对“干涉”这个词的内涵进行分析。
按照国内学者主流观点, 所谓“干涉”, 是指一国以直接或间接的非法手段迫使他国在某些内政事项上接受自己的立场或意志。[2]而英国著名国际法学者劳斯特派则认为:“干涉是指专横地干预, 是否定国家独立的行为。它隐含了一种强制性的对与实际的作为和不作为的要求, 这种要求如果不被服从, 就会引起某种形式的强制威胁或诉诸强制。”按照他的观点, 再结合《宪章》的第2条第7款, 就会得出这样的结论, 那就是联合国大会和经社理事会对人权进行一般性讨论, 或直接针对某一国家的人权问题讨论, 都不能被视为干涉, 因为它们都不构成强制性的专横的干涉。
那么, 假定大会和安理会, 经社会有权力对特定国家的人权现状进行讨论, 如果某一国家出现了大规模的人道主义灾难的时候, 安理会是否有权对这一国家进行干涉, 包括最高程度的武力干涉对于这个问题, 以美国为首的西方国家基本有了定论。自冷战后, “人道主义干涉”理论在西方国家盛行。该理论主张当一国国内发生大规模践踏人权之不法行为时, 基于对基本人权的保护, 国际社会可采取各种措施以制止该行为, “人权高于主权”论调由此产生。
二、实践中人道主义干涉的应用
实践中, 联合国安理会第一次以决议的形式派遣多国部队对特定国家进行人道主义干涉是在1991年的索马里冲突。
1991年1月26日, 索马里政府被推翻, 索马里瞬间陷入了混乱及无政府状态。为了避免大规模的人道主义灾难, 12月3号, 联合国安理会通过了第794号决议, 目的是保护平民, 防止大规模人道主义灾难发生。从世界各国都对联合国的794号决议表示赞同, 以及纷纷派遣多国部队的事实表明:如果联合国主导的人道主义干涉是为了维护某一国家的国民被大规模的剥夺国际社会普遍认可的人权或为制止发生在某一国家的非人道的事情。而且人道主义干涉的目的在于防止侵犯基本人权的事情的发生, 如发生大规模的种族灭绝事件。那么从国际社会现实和国际法的角度来看, 联合国安理会对于特定国家的人道主义干涉, 包括武力干涉就应该被认为是合法的。因为种族灭绝事件的发生不只是一种国内事务, 当迫害造成大量难民流离失所并严重影响到周边国家的稳定发展和社会安定时, 应视为对国际社会和平安全构成了威胁。[3]但是, 这里需要强调的是, 人道主义干涉的合法主体应该是联合国并且只能是联合国, 联合国安理会应作为授权人道主义干涉的唯一合法主体。这就与西方国家盛行的半边人道主义干涉形成了鲜明的对比。
三、西方的单边人道主义干涉浪潮
自从人道主义干涉在国际上有了一定的立足之地以后, 西方国家为了其自身利益, 就一直试图通过这个借口对他国内政进行粗暴干涉, 如果其意图无法得到联合国安理会的认可, 他们就自主发明了“单边人道主义干涉”这个新兴词汇。
最能代表西方单边人道主义干涉的例子莫过于1998年的北约轰炸南联盟。1999年3月, 北约公然绕开安理会开始对南联盟实行军事打击, 开启了冷战之后单边实行人道主义干涉的先例。大多数发展中国家对此次人道主义干涉行动是持否定态度的, 认为其行为除了与联合国宪章的基本原则相冲突之外, 还很可能会被滥用, 成为大国推行霸权主义和强权政治的借口。另外, 这样做有损安理会的权威, 挑战了联合国的集体安全体制。
综上所述, 单边人道主义干涉违反联合国宪章的基本原则, 在现代国际法上也找不到法律依据, 同时存在严重的弊端, 因此是非法的。[4]
四、利比亚战争的相关争议
正如前文中已经明确指出的, 在某一国家确实出现了大规模的人道主义灾难之时, 人道主义干涉的确是有必要适时介入, 这点也被绝大多数国家所认可。然而这里需要重申的是, 授权人道主义干涉的法律主体是且只能是联合国安理会, 任何国家以任何借口的单边人道主义干涉都是非法的, 是违背《联合国宪章》的, 是对他国主权的粗暴干涉。
那么, 在这里就需要讨论另一个更深入的问题, 是不是所有安理会授权的人道主义干涉都足以发动一场战争以至于推翻这一国家的政权换句话说, 就是如果经联合国安理会授权进行人道主义干涉, 那么这种干涉应该持续到什么时候为止, 是不是只要没有人道主义灾难了就应该停止武力干涉而安理会是否需要承担这样一个义务, 那就是判断何时停止人道主义干涉
其实从这次的利比亚战争中可以看出, 也许利比亚的确可能存在一些人道主义问题, 但其究竟是否已经达到需要外部武力干涉的程度, 是值得怀疑的。从北约空袭后的局势看, 大量平民死于战争以及沦为难民系利比亚内战及北约空袭本身所致, 而并无确切的证据证明利比亚政府一方仍在故意实施非人道行为, 而此时北约并未停止武力干涉。众所周知, 北约发动空袭乃是为了自己在北非的战略利益以及经济利益, 北约支持利比亚反对派武装推翻卡扎菲政府, 并非真心是为了消除人道主义危机等这类的堂而皇之的理由, 所谓的保护平民只不过是给西方国家赤裸裸地以权力界定的利益穿上了皇帝的新装而已。
所以, 虽然安理会第1973 (2011) 号决议程序上是合法有效的, 北约的空袭行为也不能算是单边人道主义干涉行为, 但是在北约应何时停止空袭这个问题上, 笔者认为安理会应该有一个新的决议出现。因为1973号决议的目的是为了保护平民, 是为了防止人道主义灾难的出现。而当卡扎菲政府停止屠杀平民的时候, 北约应该停止空袭, 卡扎菲政府与反对派的战争是利比亚的内政, 他国包括联合国都不应该干涉。所以, 安理会不但应该以1973号决议的形式授权北约进行空袭, 更应该适时的停止人道主义干涉, 因为干涉的目的并不是为了推翻卡扎菲政府, 而是为了保护平民, 防止人道主义灾难。
五、结语
人道主义干涉之所以在国际上争论纷纷, 是因为其本身所特有的性质。一方面:如果某一国家确实出现了大规模的人道主义灾难, 那么国际社会当然不能袖手旁观, 致该国国民的生死于不顾;另一方面, 西方国家一直盛行单边人道主义干涉理论并积极为之辩护, 其狼子野心昭然若揭, 他们就是想为自己粗暴干涉他国内政找到一个合法的借口。这自然会得到大多数弱者国家, 或者说被干涉国家的强烈反对。从国际法的层面上讲, 授权人道主义干涉的法律主体是且只能是联合国安理会, 任何国家以任何名义进行的单边人道主义干涉都是非法的, 是对他国内政的粗暴干涉, 这一点作为前提应该首先明确。
然而, 单单做到这一点还是远远不够的, 正如本文中所提到的, 安理会不单有权授权他国进行武力干涉, 并且在这一国家的人道主义灾难消除之时, 应该适时发表决议停止人道主义干涉, 而并非如这次利比亚战争一样直到推翻卡扎菲政府为止。只有做到这点, 才能真正的让人道主义干涉起到其本身应有的作用, 并且不让一些别有用心的国家借此之口武力干涉他国内政。
摘要：不干涉内政原则作为国家主权原则的具体表现形式之一, 已经被全世界国家所认可, 并详细规定在《联合国宪章》之中。然而, 促进人权的尊重与遵守亦是联合国的宗旨内容之一, 从最初的索马里冲突到科索沃战争再到最近的利比亚战争, 西方国家都是举着人道主义这面旗帜进行武力干涉。本文结合具体实例, 探讨在国家主权及不干涉内政原则下, 人道主义干涉的合法性及合理性。
关键词：人道主义干涉,不干涉内政原则,人权,主权
参考文献
[1]参见联合国安全理事会:第1973 (2011) 号决议S/RES/1973 (2011) , 2011-03-17[EB/OL].http://WWW.un.org/chinese/aboutun/pri-norgs/sc/sres/2011/s1973.htm.
[2]王虎华主编.国际公法学[M].北京:北京大学出版社, 2005:55.
[3]成衔.国家主权原则下的人道主义干涉[J].经济与法, 2010 (7) .
运动干涉 篇4
1 材料与方法
1.1 主要试剂、载体及细胞
Trizol,Invitrogen公司生产;RNase抑制物(Inhibitor),原平皓生物公司生产;rTaq酶、反转录试剂盒、SYBR Premix Ex Taq试剂盒、pMD18-T载体,TaKaRa公司生产;BamH Ⅰ、Hind Ⅲ、EcoR Ⅰ、T4 DNA连接酶,Promega公司生产;脂质体Lipofect、小提小量试剂盒,天根生化科技(北京)有限公司生产;pRNAT-U6.1/Neo,南京金斯瑞生物科技公司生产;pcDNA3.1(+)载体、293GP细胞,东北林业大学生命科学学院研究室自存。
1.2 小鼠MSTN基因真核表达载体的构建
1.2.1 骨骼肌总RNA的提取
采用颈椎脱臼法将性成熟的昆明小鼠(ICR小鼠)处死后,采集骨骼肌组织50 mg,用Trizol法提取总RNA,并置于-80 ℃冰箱中保存,备用。
1.2.2 引物的设计及合成
根据GenBank中小鼠MSTN基因序列(登录号为BC105674.1),设计1对在上、下游5′端分别加入BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的特异性引物MSTN-1和MSTN-2(引物序列分别为5′-GGATCCCCTGTTCATGCTGATTGC-3′和5′-GAATTCGAAGACCTTCCATGACTTG-3′)。将引物送宝生物工程(大连)有限公司合成,将合成的引物与pMD-18T载体连接。
1.2.3 RT-PCR 取上述骨骼肌RNA
2 μL,50 μmol/L Oligo15 1 μL,DEPC灭菌水3 μL,于70 ℃保温10 min后冰浴2 min,再加入5×M-MLV Buffer 2 μL,dNTP 0.5 μL,RNase Inhibitor 0.25 μL,Reverse Transcriptase M-MLV 0.5 μL,DEPC灭菌水0.75 μL于42 ℃保存1 h,70 ℃保存15 min,经冰浴冷却后获得cDNA。
1.2.4 小鼠MSTN基因的扩增与测序
MSTN基因的扩增:以MSTN-1、MSTN-2为引物对MSTN 基因进行PCR 扩增。PCR反应体系(25 μL):cDNA 产物1 μL, 215 mmol/L dNTP 4 μL, 10 ×rTaq Buffer 2.5 μL, MSTN-1和MSTN-2引物各1 μL,rTaq 酶0.3 μL,加DEPC灭菌水至25 μL。PCR 反应条件:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性45 s,60 ℃退火45 s,72 ℃延伸90 s,共35个循环;72 ℃再延伸10 min。
pMD18-T-MSTN重组质粒的构建:将上述的PCR产物经电泳后回收MSTN基因片段,然后与两端含有连接酶的线性pMD18-T载体在16 ℃条件下连接30 min(PCR 产物1.0 μL,pMD18-T载体 1.0 μL,ddH2O 3.0 μL)。取连接产物5 μL转化50 μL大肠杆菌感受态细胞DH5α,蓝白斑筛选。挑取白色克隆于含有氨苄西林(Amp)的LB培养液中摇菌,采用小提小量试剂盒提取质粒。
重组质粒进行PCR鉴定(以STN-UP和MSTN-DOWN为引物进行扩增及电泳)和酶切鉴定(用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ进行双酶切及电泳)。将PCR鉴定和酶切鉴定正确的pMD18-T-MSTN质粒送Invitrogen公司测序。
1.2.5 小鼠MSTN基因真核表达载体的构建
利用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切pcDNA3.1(+)载体获得载体片段,经BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ双酶切pMD18-T-MSTN载体获得MSTN基因片段,再利用T4 DNA 连接酶将载体片段和MSTN基因片段连接并转化后获得重组质粒。经PCR鉴定和酶切鉴定后,获得小鼠MSTN基因真核表达载体pcDNA 3.1(+)-MSTN。
1.3 小鼠MSTN基因shRNA载体的构建
1.3.1 小鼠MSTN基因shRNA设计与合成
根据GenBank上小鼠MSTN基因mRNA 序列,在线设计shRNA序列。共设计109条符合Tuschl法则的shRNA序列,再经过人工筛选3条shRNA序列(S1 MSTN基因的第310～328位碱基为5′-GGTATACTGGAATCCGATC-3′;S2 MSTN基因的第427～445位碱基为5′-GATGACGATTATCACGCTA-3′;S3 MSTN基因第659～677位碱基为5′-GCTCCTAACATCAGCAAAG-3′),并将其利用shRNA表达载体设计3条shRNA序列。将设计的shRNA序列送南京金斯瑞生物公司合成后连接到pUC57载体上,分别命名为pUC57-M1、pUC57-M2、pUC57-M3。
1.3.2 小鼠MSTN基因shRNA的构建
利用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ对带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的pRNAT-U6.1/Neo质粒进行双酶切后获得酶切产物pRNAT-BH;利用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ分别对pUC57-M1、pUC57-M2、pUC57-M3进行双酶切获得M1、M2、M3。将pRNAT-BH分别与M1、M2、M3片段进行连接获得重组质粒pRNAT-M1、pRNAT-M2、pRNAT-M3,将其转染大肠杆菌感受态细胞DH5α后提取重组质粒并进行测序。
1.4 小鼠MSTN基因shRNA的干涉效率
1.4.1 小鼠MSTN基因干涉载体的转染
采用常规方法,利用培养液(10%胎牛血清、1%青霉素、1%链霉素、1%谷氨酰胺和1%非必需氨基酸的DMEM液)进行传代培养,并制备细胞悬浮液。将上述细胞悬浮液,用6孔培养板(每孔含2 mL培养液)对冷冻保存的293GP细胞进行传代培养。细胞转染前12 h用不含抗生素的培养液(2 mL)进行续培养,当细胞密度达到40%～50%时,用2 μg pcDNA 3.1(+)-MSTN、2 μg pcDNA 3.1(+)-MSTN和2 μg pRNAT-M1、2 μg pcDNA 3.1(+)-MSTN和2 μg pRNAT-M2、2 μg pcDNA 3.1(+)-MSTN和2 μg pRNAT-M3的4种载体液与用250 μL无血清培养液稀释10 μL Lipofect试剂溶液混合后,分别加入含有细胞的培养孔中并于室温下保持20 min,再置于37 ℃、100%湿度、5%CO2培养箱中培养12 h。然后用含有抗生素的合成培养液进行续培养,每隔24 h在倒置荧光显微镜下观察细胞形态及细胞发出荧光情况。
1.4.2 小鼠MSTN基因干涉载体的干涉效率检测
细胞总RNA的提取及反转录:采用脂质体法将上述293GP细胞转染36 h后,采用Trizol法提取293GP细胞总RNA;利用反转录试剂盒对总RNA进行反转录,获得cDNA。
RT-PCR引物设计:根据GenBank中的GAPDH(登录号为NM-008084.2)和MSTN(登录号为NM-010834.2)基因序列,应用Oligo 6.0软件和Primer premier 6.0软件分别设计作为参照的GAPDH基因引物(G1 5′-ATCACTGCCACCCAGAAGACT-3′,G2 5′-CATGCCAGTGAGCTTCCCGTT-3′)和MSTN基因引物(M3 5′-GAGAATGGCCATGATCTTGCTGTA-3′,M4 5′-CGCAGTCAAGCCCAAAGTCTC-3′),将设计的引物送宝生物工程(大连)有限公司测序。
干涉效率的检测:根据SYBR Premix Ex Taq试剂盒说明,将上述获得模板cDNA和引物配置成4个PCR反应混合物,并进行RT-PCR。采用RT-PCR仪对RT-PCR结果进行融解曲线分析,并以GAPDH为内参照,计算转染pcDNA 3.1(+)-MSTN、pcDNA 3.1(+)-MSTNpRNAT-M1、pcDNA 3.1(+)-MSTN和pRNAT-M2、pcDNA 3.1(+)-MSTN和pRNAT-M3载体后的MSTN基因的相对表达量。
2 结果与分析
2.1 小鼠MSTN基因的克隆及序列分析
利用MSTN-1和MSTN-2引物对小鼠MSTN基因进行RT-PCR扩增并对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳后,在约1 150 bp处可观察到特异性扩增带(见图1)。阳性重组质粒pMD18-T-MSTN通过EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切后,经琼脂糖凝胶电泳,可观察到约2 700 bp和1 150 bp的2条带(见图2)。对阳性重组质粒pMD18-T-MSTN的PCR鉴定结果,在约1 200 bp处出现特异性条带(见图3)。
1.DL-4 500 Marker;2.PCR产物。
1.DL-4 500 Marker;2.重组质粒双酶切产物。
1.DL-4 500 Marker;2.重组质粒PCR产物。
对pMD18-T-MSTN进行测序,所克隆的MSTN基因序列大小为1 145 bp,与GenBank上BC105674(小鼠MSTN基因的参照序列)有99.83%的同源性;仅在第497位点存在1个T与C的转换。
2.2 小鼠MSTN基因真核表达载体的构建
对pcDNA 3.1(+)-MSTN的PCR鉴定结果,可见长度约为1 200 bp的条带(见图4)。对pcDNA 3.1(+)-MSTN双酶切鉴定结果,可见长度约为1 200 bp和5 400 bp的2条带(见图5)。
1.重组质粒PCR鉴定;2. DL-4 500 Marker。
1. DL-4 500 Marker;2.重组质粒双酶切鉴定。
2.3 shRNA的转染
用pcDNA 3.1(+)-MSTN、 pcDNA 3.1(+)-MSTN和 pRNAT-M1、 pcDNA 3.1(+)-MSTN和 pRNAT-M2、 pcDNA 3.1(+)-MSTN和 pRNAT-M3对传代培养的293GP细胞(见图6)进行转染。在转染后的第36小时,转染4种载体约80%的细胞,可见表达绿色荧光蛋白的绿色(见174页彩图7)。
2.4 小鼠MSTN基因在293GP细胞中的扩增
采用RT-PCR方法,以GAPDH基因作为内参对照,用MSTN基因引物扩增转染pcDNA 3.1(+)-MSTN、 pcDNA 3.1(+)-MSTN和 pRNAT-M1、 pcDNA 3.1(+)-MSTN和 pRNAT-M2、 pcDNA 3.1(+)-MSTN和 pRNAT-M3的293GP细胞的cDNA,通过对PCR产物的融解曲线检测GAPDH、MSTN基因扩增情况及融解曲线和标准扩增曲线。试验结果表明:GAPDH和MSTN基因均被特异性扩增,且2个基因的融解曲线均呈“S”型,而荧光定量动力学曲线平滑,可用于目的基因的相对定量分析。
2.5 shRNA对MSTN基因的干涉效率(结果见图8)
由图8可知:当转染pcDNA 3.1(+)-MSTN的293GP细胞的MSTN基因表达量为1.000时,转染pRNAT-M1、pRNAT-M2、pRNAT-M3的表达量分别降低至(0.232±0.010),(0.763±0.010),(0.298±0.010)。
3 讨论
根据P.Alexander等[6]的报道,用复制缺陷型病毒携带干扰朊病毒蛋白的mRNA序列的shRNA构建的载体转染小鼠胚胎细胞后,出生的小鼠对朊病毒的抵抗能力显著提高。另有报道,构建小鼠BMP4条件性RNAi载体BMP4CRNAi,经FVB小鼠受精后原核注射获得了抑制BMP4表达的后代[7]。研究表明,采用RNAi转基因的方法能够在表达量上调节目标基因表达,或者修饰出不同表型的基因敲除小鼠。
J.G.Doench等[8]研究了在Hela细胞中对CXCR4基因表达具有抑制作用的shRNA。结果表明,shRNA与CXCR4基因互补程度对翻译抑制具有显著的加乘作用。因此,根据C.E.Meacham 等[9]将3种沉默效能针对不同的抑癌基因p53的RNAi导入Eμ-Myc转基因小鼠的胚胎细胞中,这些小鼠出生后根据p53被敲除的水平呈现不同的疾病谱。表明不同的RNA干涉序列对相应基因具有不同的调控效率。为了筛选小鼠MSTN基因的干涉序列,研究采用RT-PCR等分子生物学方法克隆获得了与GenBank中的序列同源性为99.91%的小鼠MSTN基因序列(见图1～3),并构建了真核表达载体连接pcDNA 3.1(+)-MSTN(见图4,5)。与此同时,根据GenBank上的小鼠MSTN基因mRNA 序列,设计shRNA pRNAT-M1、pRNAT-M2、pRNAT-M3。利用pcDNA 3.1(+)-MSTN和所设计的3种干涉载体转染293GP细胞(见图6,7)并检测细胞中MSTN基因表达量,其结果表明转染pRNAT-M1、pRNAT-M2、pRNAT-M3后MSTN基因相对表达量明显降低(见图8),pRNAT-M1干涉效率最高。
自J.W.Gordon等[10]首次采用原核显微注射法获得转基因小鼠以来,该方法得到不断完善,已成为获取转基因动物的主要手段。R.D.Palmiter等[11]获得带有白蛋白启动子的人生长激素基因的转基因鼠。此外,K.M.Gaensler等[12]获得转150 kb的人β珠蛋白基因簇的转基因鼠。如果筛选适合的启动子,就能构建组织特异性表达的融合基因,且通过显微注射法获得转基因后代。如果利用小鼠MSTN基因的RNA干涉序列与小鼠肌肉特异型启动子构建真核表达载体,采用原核注射或通过体细胞转染后再经体细胞核移植的方法就有可能获得MSTN基因被干涉的转基因小鼠,且可利用该方法进一步开展家畜的相关研究。
摘要：为了筛选小鼠肌肉生长抑制素(MSTN)基因的干涉序列,根据GenBank中小鼠的MSTN基因序列,采用RT-PCR方法克隆获得MSTN基因序列,构建其真核表达载体pcDNA 3.1(+)-MSTN;根据MSTN基因序列设计合成3种MSTN基因干涉序列(M1、M2、M3),并构建相应的RNA干涉载体pRNAT-M1、pRNAT-M2、pRNAT-M3。将构建的真核表达载体pcDNA 3.1(+)-MSTN单独或分别与3种干涉载体共转染293GP细胞,检测干涉载体对MSTN基因的干涉效率。结果表明:试验成功克隆得到与GenBank中的序列同源性为99.91%的小鼠MSTN基因序列,并构建了真核表达载体pcDNA 3.1(+)-MSTN;与转染pcDNA 3.1(+)-MSTN后的293GP细胞中MSTN基因的相对表达量(1.000)相比,转染pRNAT-M1、pRNAT-M2、pRNAT-M3后MSTN基因相对表达量明显下降,pRNAT-M1的干涉效率最高。说明研究成功获得对MSTN基因表达具有明显干涉作用的干涉序列。
关键词：小鼠,肌肉生长抑制素(MSTN)基因,RNA干涉
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防止“文化干涉者” 篇5
企业文化的“民间性”之所以重要和需要强调, 原因是很多企业的文化建设往往是领导者的“个人意志”。从实践看, 这些“个人意志”如果符合员工的利益和需求, 就经常被执行得很好, 但如果违背了大家的意愿, 文化建设就往往变成一种负担和“走过场”, 甚至搞得公司怨声载道。从这个意义上说, 一些企业领导的所谓文化建设, 实际上变成了文化的“干涉”———因为自己的“无知无畏”, 将原本有利于公司成长的“民间”文化, 变成了一种不伦不类的“假大空”。所以, 往往有企业的领导或管理者说, 原来我们建设文化时感觉挺顺的, 但一旦把文化装进一个框框里, 就不知道怎样去“建设”文化了。在这样的情况下, 文化建设就失去了其源于民间的、生动活泼的本性, 甚至扭曲成了另外一种东西。
我们很多企业的所谓文化建设, 恰恰就是这样“徒有其表”, 甚至完全背离了文化建设初衷的状况。在这样的情况下, 企业文化的“民间性”肯定荡然无存。
要防止企业领导人或管理者成为企业文化的“干涉者”, 有两个基本途径:
第一, 认真研究和界定企业与员工的关系, 即企业主如何看待为企业工作的员工。
如空想社会主义者罗伯特·欧文所说, “把工人当人看待其实是有利可图的”, 或者如德鲁克倡导的, 劳资关系应该建立在工人工作的意愿以及对所制造的产品的成就感上。当然, 要做到这一点不是一件容易的事情, 一是企业主愿不愿意把员工看成企业发展的“目的”而不是“工具”;二是如何像马丁·路德将《圣经·旧约》由希伯来文翻译成德文那样, 让员工真正掌握“知情权”和“话语权”。
第二, 企业文化的理念也好, 企业文化的建设过程也好, 一定要体现“民间的”和“群众的”意愿, 不能仅仅是企业的领导者想怎样就怎样。
同时, 文化建设的过程中, 要防止“干涉者”的干涉, 还需要“群言”, 而不是一家之言。就像自然界和社会系统都是一个生态系统一样, 企业文化的理念和建设过程, 也要倡导基于“民间性”的“生态论”, 即企业文化建设过程能够真正体现复杂多变的人性以及企业管理中纷繁复杂的诸多情境。看了一部美国电影, 叫做《分歧者:异类觉醒》, 就很能说明我上面的观点:
一百年前, 席卷全球的战争让几乎所有的国家都从地球上消失, 幸存的人类聚集在破败的芝加哥。新世界的创始者为了消除人性的多元和复杂、谋求永久的和平, 就将幸存者们分成了无私派、诚实派、无畏派、友好派和博学派, 同时社会根据各个派别的特性, 分工协作。但问题是, 总有一些人常常具有博学派的知识, 无畏派的勇敢和无私派的无私等等品行, 所以他们既属于任何派系, 又不属于任何派系。在电影中, 这样的“分歧者”是十分危险的, 一旦被检测出来就要被干掉, 因为他们是这个社会的“危险分子”。自然, 电影最后以“分歧者”的胜利否定了将人单一地划分为某一派别的“僵化”状态, 也试图告诉人们, 人性就是这样的复杂、多元与多变, 你不可能以一种单一的模式要求别人去做什么。
浅析“不干涉内政原则” 篇6
不干涉内政原则是是国际关系和国际法上的一项基本法律原则, 也是指导当今国际关系的一项重要准则, 主要就是对促进国际和平与安全以及维护国际社会正常秩序起着重要作用。本文对其不干涉内政的起源及发展进行简述、“内政”及“干涉”的进本内涵进行简述, 主要对该原则在适用上的一些例外因素进行分析, 从中了解各国学者对该原则的认识分歧, 从而导致该原则在适用上的一些问题和障碍。
一、不干涉内政原则的产生和发展
所谓的“不干涉内政原则”, 是指每个国家都有平等的主权, 每个民族都有决定自己命运的权利, 任何国家或任何国际组织都无权以任何方式去干涉其他国家在本质上属于国内管辖的事物。
不干涉内政原则最早由法国提出。法国资产阶级革命胜利以后, 法国政府为反对欧洲封建势力对其内部事务的干涉, 在1783年法国宪法中规定了不干涉内政原则。
资产阶级当时提出这个原则的目的, 是保证自己得以建立其新的剥削制度而不受周围一些君主专制国家的侵犯。随着资本主义的发展, 特别是到了帝国主义时代, 这一原则遭到了粗暴的破坏。1823年, 美国总统门罗则发表国情咨文, 宣布美国奉行“不干涉政策”, 实际上美国是把美洲圈入气独家控制的势力范围, 阻止了欧洲国家干涉美洲各国的事务。
第一次世界大战以后, 《国际联盟盟约》首次以条约形式肯定了不干涉内政原则, 该《盟约》第15条第8款对其进行了规定, 大意为一旦某项争议经争端一方声明, 并为国际联盟行政院承认, 属于该争端方的国内管辖事项, 国际联盟就不得介入。1954年签订的《联合国宪章》将“不干涉内政原则”列为了七项基本法律原则之一, 与《国际联盟盟约》的规定相比, 特点是明确强调了联合国不得干涉“本质上属于任何国家国内管辖的事件”, 取消了“国内管辖事件”须经国际组织某机构承认的规定, 但同时也明确了任何国家均不得以“内政”为由来对抗联合国安理会为维护集体安全而作出采取执行行动的决定。
1954年, 中国、印度、缅甸三国共同倡导的和平共处五项原则将之称为“不干涉内政原则”。这种提法突出了各国实施不干涉内政原则中的对等义务和责任, 使得该项原则的表达更合理。这是对于该原则的理解和现实指导意义的大突破, 也是中、印、缅三国对现代国际法发展作出的举世称颂的贡献。
1965年联合国通过的《关于各国内政不容干涉及其独立于主权之保护宣言》对不干涉内政原则的涵义进行了初步的概括, 对“内政”的范围及“干涉行为”的表现也初步的进行了描述。
1970年联合国大会通过了《国际法原则宣言》, 该宣言对不干涉内政原则进行了详细的解释, 把该原则的具体内容归纳成五个方面, 相对于1965年的宣言, 进一步丰富了不干涉内政原则的内涵, 并对其运用提供了比较明确的标准。
二、“内政”和“干涉”的界定
“内政”和“干涉”的界定问题的存在会影响不干涉内政原则在适用上的界限不清, 所以笔者认为有必要对这两个问题进行下分析。
(一) “内政”的涵义
什么是“内政”, 就如“不干涉内政原则”一样, 学者们有很多不同的见解。
有学者认为, 国家主权范围内的事务就是国家在宪法中所规定的事项以及与国家行使主权相联系的一切对内对外活动;有学者认为, 从国际法角度看, 内政或国内管辖事项是指应由国家自主处理的一切事项;也有学者认为, 按照有关国际法文件的规定, 凡在本质上属于国内管辖的事件, 均属内政。众说纷纭, 这些界定或太绝对得将宪法规定的事项解释为一国的内政, 或不知道什么是“应由国家自主处理事项”, 或者是根本没有一项国际文件从内涵上给“内政”下过明确、恰当的定义。
笔者认为, 从合理的角度出发, 所谓的“内政”应该是指未经国际法确定为某国的国际义务, 而可由该国自由行使的任何事项。这个涵义具体而言:
其一, 关于“内政”, 我们不能简单将其理解为发生在一国境内的任何事件, 因为在一国境内发生但侵害到了他国的权益的事件就可能属于“非内政”。同样的“属于国内管辖事件”的说法也是不能划清两者之间的界限。
其二, “内政”与“非内政”的划分要看有关国家在相关事务上是否已经承担了“国际义务”。比如, 某国已参加了《禁止酷刑公约》, 其司法部门仍然在国内对嫌疑犯或被告采用刑讯逼供, 这无疑是违背了所承担的国际义务, 这就属于“非内政”。
其三, 国际义务是否存在的依据则是国际法, 而非各国的国内法。
其四, “内政”不是由一国的政府确定, 或是有某一国际机构确定, 而应该是由这个国家是否受到国际义务的约束。简言之, “内政”与“非内政”的界限:一国是否受某项国际义务约束。
(二) “干涉”的涵义
什么是“干涉”, 在我国的学者中几乎学者对其作出明确的解释, 这也说明了实际判断中存在某些难以确定的因素。曾经英国学者对“干涉”作过界定和解释, 他认为国际法给予了干涉严格的定义, “干涉是指一个国家对另一个国家事务的强制或专断的干预, 旨在一个国家对另一个国家强加某种行为和后果”。
从这位英国学者的界定中进一步引申, 笔者认为, 所谓“干涉”是指一国或几国为实现自己的意图, 使用政治、经济、甚至军事的手段, 以直接或间接的、公开或隐蔽的方式干预另一国的内外事务, 使被干预国按照干预国的意图行使, 以改变被干预国所执行的某种方针、政策或存在的情势。国际法上的“干涉”特点归纳起来主要有以下几点:
第一, 干涉者使用非法手段介入了别国的内政事项。“非法手段”即国际法所不允许使用的方式和方法。比如, 有个很明确的例子, 干涉者威胁和使用武力, 这在国际法上肯定是被禁止的。因为如果干涉包含武力的使用, 它就违反了《联合国宪章》第2条, 该条款规定:禁止使用威胁或武力或与联合国原则不符的任何方式侵害任何国家的领土完整或政治独立。从该条款的措辞可以很明显地看出, 除了使用威胁或武力外, 国际法上显然还包括其它干涉方式可以达到侵害国家的领土完整或者政治独立的目的。
第二, 干涉者必定是使用了强迫手段来干预别国的内政。奥本海认为:“要构成干涉, 干预必须是强力的或专断的, 或者是胁迫的, 在实际上剥夺了被干涉国家对有关事项的控制权。”这里特别指出因为干涉是强制的, 所以提出建议、斡旋或调停等不是干涉。
在国际实践中, 典型的干涉方式主要有三种:武装干涉、经济干涉、外交干涉。除此之外, 诸如向他国派遣特工或通过在他国收买代理人以策动他国内乱, 支持或资助他国反政府组织或恐怖组织以颠覆他国政权等, 均属于干涉内政的行为范畴。
三、不干涉内政原则的适用之例外因素
什么是不干涉内政原则, “内政”和“干涉”的界定给这个定义奠定了基础。但在国际上, 通常存在喜欢干涉别国内政的情况, 特别是西方国家。而且为使干涉内政行为合法化, 西方学者提出了各式各样所谓的“干涉的法律依据”。例如:依据权利的干涉, 保侨干涉, 应邀干涉, 人道主义干涉等等。我国学者一般都反对这种所谓的干涉理论和干涉依据, 并认为这不过是给帝国主义的侵略行径套上合法的外衣, 是为其干涉别国内政的非法行为所找的一种借口。
笔者认为, 干涉并不分“合法”和“非法”, 而应均属于非法, 但从某些方面看, 我们又不能把所有的“介入行为”或“干预行为”都纳入“干涉内政”的范畴。例如:在请求下的援助行为、人道主义干预、外交保护措施等等。
“在请求下的援助行为”是指一国经另一国合法政府请求, 并在其同意的范围内所给予的援助行为。不过这个行为的合法适用需要有两个前提:其一, 请求并同意的内容必须是合法的。其二, 这种请求必须来自请求国的合法政府。例如反政府的邀请必然是非法的, 则属于干涉内政的行为。在请求下的援助行为的最大特点就是没有强迫因素, 而是应他国请求、经他国同意作出的援助行为, 所以, 在本质上就不属于“干涉”的范畴, 应排除在干涉之外。
“人道主义干预”是指在一国严重侵犯基本人权的情形下, 他国或国际社会对该侵害国所施加的一定的强制措施。它的实施关键在于被采取措施的国家违背了其所承担的国际义务, 侵害了受国际法保护的基本人权。当然其中由谁来判断, 怎么来判断是否违背了国际义务也是值得推敲的问题。
“外交保护措施”是指一国通过外交途径对本国公民在海外合法权益所进行的保护。当然这不能简单地称作“保侨干涉”, 两者之间存在着很大的区别。外交保护的本质是针对东道国违背国际义务的行为, 是国际法上的责任问题, 而不属于保护侨民而干涉他国内政。
四、结论
综上所述, “不干涉内政原则”的基本涵义是要求国家在国际关系上不得以任何方式介入别国的内部事务, 不得将自己的立场、意志或者社会制度强加于别国。弄清该原则的适用范围, 首先要将“内政”、“干涉”两个基本概念界定清楚。西方学者为其不法行为所寻找的借口根本不能在法律上站稳脚跟。但从另一角度看, 也不是所有的“介入行为”和“干预行为”都是非法干涉内政的行为, 存在着某些例外因素。正确及合理地运用不干涉内政原则, 才能维护国际社会秩序的长治久安。
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日本干涉活动催生北京政变 篇7
另一方面冯玉祥、王怀庆观望战局变化, 同驻热河的米镇标、驻通州的陕西军第一师长胡景翼、北京警备副司令孙岳等暗中策划, 乘直军陷于不利战局之机, 采取行动反对吴的武力统一政策。所以, 冯玉祥于10月22日傍晚自热河向北京返行, 夜间于北京郊外的北苑召开军事会议, 确定政变方针。第二天即23日凌晨冯玉祥的部队陆续开入北京, 控制交通、通信机关, 囚禁曹锟, 发布停战令, 免去吴佩孚的职务。局面由此一新。
由于冯玉祥政变, 吴佩孚自天津撤退, 从海路逃至烟台, 使日本朝野上下因第二次直奉战争爆发感到担心的“在满权益的保持”得以贯彻。
却说当时推测冯政变的原因是“由于吴仰仗实力冷遇王、冯的私怨”[1]403, 但在幕后, 和军部中央保持联系的日本驻外军事机构暗中参与了政变活动, 外务省机构对这种幕后活动也表示了默许。
据与幕后活动有关系者的回忆资料, 勾勒出活动概貌如下。
首先, 最初的活动者, 是当时的预备役陆军大佐、住友合资会社的顾问寺西秀武。时在日本的寺西1924年秋来到东京, 察觉到第二次直奉战争的形势变动后, 遂闯入位于银座的大仓组, 利用该社的密码电报, 通过大仓组天津支店向段祺瑞发电敦其立即参加战争。然后直奔奉天。在来华途中的车上, 寺西遇见了奉军第六军副军长吴光新, 遂随同其一起访问了张作霖, 劝说张同段合作。寺西马上又跑到天津, 拟指使冯倒戈的计划。当时段在天津租界, “政变费用由段写信向张申请, 在天津领取”[2]807。
“奉直两军在山海关僵持之际, 段一再向张提议, 用一百万日元能收买冯、胡和孙, 出钱就能扳倒吴。”[2]900这是不是寺西劝说的作用不详, 听到这种提议的张作霖顾问松井七夫大佐, “因为张出钱不痛快, 和杨宇霆商量后, 某一天跟随阪东末三顾问, 在密室访问了张, 同其畅谈说‘花百万日元取得战争胜利, 没有这样的便宜事, 如果不能成功, 就当百万日元打水漂儿了, 不好吗’, 这样张也勉强同意了”。因为张希望这笔钱由日本人送到, 杨劝说也不改变主意, 当天遂决定由日本人出钱, 由松井送到天津华北驻屯军司令官吉冈显作处。由三井银行奉天支店长天野悌二通过吉冈司令官再由段交给冯[2]901。将百万日元直接送到冯玉祥处的是冯的军事顾问松室孝良少佐和王乃模、段祺树三人[3]。
但在冯玉祥侧直接推动其发动政变的却是土肥原贤二中佐[4]832。而土肥原是由坂西利八郎中将推荐, 同坂西中将一同于1924年9月担任中国大总统府军事顾问的。由于参谋本部对土肥原的意见是暂以正式应聘处理, 供职参谋本部在中国工作[5], 故土肥原同坂西的关系极亲密。时有情报传到阪西处:“当时大总统曹锟为保其地位由秘书长王兰亭、顾维钧等策划请求美国援助。”“而且抄写了作为证据的文件, 但因为文件出处写错, 所以认为这个计划如果实现对日本来说是重大问题, 土肥原将此文件给黄郛看, 敦促其打乱计划。”“此时锐意革新的黄郛决定劝说冯玉祥使其谋反, 下决心采取打垮曹锟的手段。”作为颜惠庆内阁教育总长的黄郛“将此文件提到内阁会议上, 会议一结束马上奔高丽宫冯的住处敦促其崛起。据说冯也犹豫不决, 黄有一天晚上在冯处住下劝说冯并拟定了攻入北京城时张贴的告示草案, 在印好了之后, 第二天早晨才坐车返回北京”。据说由于黄郛以迅雷不及掩耳的速度行事, 当曹锟感到异常时已经是政变那天早晨即10月23日上午九点左右[4]832。
再有, 日本驻中国现地军事机关参与这个政变计划, 军部上层应该是知晓的。宇垣陆相也好, 上原元帅也好, 不仅知晓, 而且据说还鼓励完成这种活动。在宇垣日记中有如下记载:“……日本以自重的态度和坚定的决心观望当前形势的推移伺机进行调停。那是为了在双方均势未完全打破前, 使日本在满洲的立场更加巩固, 所以对现在的权力者张作霖在物质上和精神上给予相当的支持 (两军在山海关对峙初期的感情) 。在以上的考虑下, 政治家、实业家、政党等也在活动, 在决战之际背地里给予相当支持的结果是其后局面的展开。……”[6]42
而且上原传记中有如下记载:“……元帅从国防国策的立场出发认识到不应该断然放弃满洲, 提拔陆军少将林弥三吉就任我北京公使馆武官, 对其密授使命, 使其临机措置。第二次直奉战争胜败变化, 以常胜军自夸的吴佩孚一败涂地, 张作霖得保全其地位, 全在于元帅的暗筹默算。”[7]278
林武官具体的如何完成任务, 尚不明了, 同样的在上原传记中有, “冯玉祥断然决定从内部呼应奉军, 是由于林少将的奇策妙筹极好地策动了冯玉祥, 因此冯的态度发生转折性的变化”[7]279。而且从林弥三吉少将本人如下的叙述中能看到是怎样的活动:“第二次直奉战争时如我方所想, 第一, 为了防止外国势力进入我国防重要根据地满洲, 第二, 为了维护我满蒙既得利益, 而采取措施, 由于我国文武两方面驻外机构的合作, 巧妙高明地达到了目的。”[8]61另外, 作为外务省驻外机构在某种程度上了解这项工作的证据是:“直军败退, 最后胜利归于奉军, 当时驻北京全权公使芳泽谦吉立即赶来, 对林弥三吉少将说‘妙!妙!’祝贺其成功。”[7]278却说冯玉祥发动政变的消息传入日本外务省是前述10月23日的傍晚。当天阁僚们正出席在永田町首相官邸从下午五点半召开的关西实业家招待会。外务省给临席的币原外相打来电话说, 冯玉祥的军队进入北京, 接着吴佩孚的军队从天津方面撤退[9]102。
于是币原外相请求加藤首相, 在招待会终了后召开临时内阁会议。宇垣陆相因病未出席招待会, 也赶来参加内阁会议。推测宇垣陆相或许在府中暗中等待政变消息的传来。在内阁会议中, 币原外相报告了从北京发来的电报, 内容如下:在阁僚各位的关照下, 因此政变可不必担心满洲遭受战祸。此前还主张援助张作霖的高桥是清农商务相, 大喜道:“因为你的努力, 日本得救了。如果像我们主张的那样, 秘密援助张作霖, 会陷入困境, 不能面对各国, 我们将陷入进退两难……”希望同币原外相和解[9]103。不过, 通过此番言论不能了解政变是军部机构策划的。
参考文献
[1]吴佩孚先生集编辑委员会.吴佩孚先生集 (下篇) [M].
[2]对华功劳者传记编纂会.续对华回顾录 (下卷“寺西秀武”项) [M].
[3]松室孝良氏同笔者的谈话.
[4]对华功劳者传记编纂会.续对华回顾录 (下卷“坂西利八郎”项) [M].
[5]防卫厅战史室.密大日记 (大正十三年第三册) [M].
[6]宇垣一成.宇垣日记[M].
[7]元帅上原勇作传记编纂委员会.元帅上原勇作传 (下) [M].
[8]林弥三吉.文武权力的界限及其运用[M].
[9]大正十三年十月二十四日出版的《时事新报》;币原喜重郎.外交五十年[M].