抗生素效价（精选4篇）
抗生素效价 篇1
0 引言
抗生素效价测量系统是对抗生素药物药效进行测量的系统,测量时在菌液中加入一定剂量药品,37℃恒温条件下,在6h或更长时间内测量并记录菌液浊度变化,根据药典中一剂量标准曲线法、二剂量法或三剂量法[1,2]对药物效价进行测量[3,4]。
目前,北京潮声公司已经推出基于浊度法抗生素效价测量系统,该系统内置单色仪,采用旋转机构使样品室转动从而实现对每个样品浊度测量,系统一共有42 个测量单元,该系统为旋转机构,易产生重复性误差,且单色系统长时间工作易产生光强波动从而造成测量误差。
本文提出一种新的抗生素效价测量系统设计方法,特点是采用发光二极管做为光源,系统中没有活动部件,并且对光强波动进行校正。
1 系统总体结构
系统总体结构如图1 所示。系统包括4 个部分:恒温子系统、测量子系统(由35 个测量单元构成)、数据采集系统和计算机系统,其中恒温子系统是定制,温度恒温范围是37℃ ± 0.2℃。数据采集系统由数据采集卡实现数据采集,通过USB通讯将数据传输到计算机,由Labview编写计算机程序进行数据处理,同时显示结果。
1.1 测量单元基本结构
测量子系统是整个系统核心;该部分有35 个测量单元,每个单元结构完全一致,如图2 所示。
绿色发光二极管前面放置直径为2mm光阑,作为光束口径限制,发光二极管灯丝中心位置放在准直物镜(镜焦距为5mm)焦点上,产生平行光射入菌液,经过菌液吸收,出射平行光被汇聚透镜汇聚由硅光电池接收。
①光二极管;②光阑;③准直物镜;④样品池;⑤汇聚物镜;⑥硅光电池;⑦磁铁;⑧马达。
系统中所使用样品池为10mm×20mm×150mm样品池,高于且宽于标准10mm×10mm×50mm样品池,主要由于试样体积较大,传统样品池容量太小。
每个测量单元底部装有一个电机,电机上装有磁铁,在样品池内加入磁珠,当磁铁随电机转动时,磁珠在样品池内转动,从而带动液体转动,可以防止菌液中悬浊物固化在样品池内壁上影响测量。
1.2 发光二极管驱动电路设计
系统工作时,要在恒温37℃条件下连续工作6h或更长,因此光强稳定性异常重要,如果光强发生偏差,则必会造成很大测量误差。为保证发光强度稳定性,系统采用恒流源驱动发光二极管,因发光二极管发光强度与流经二极管电流近似成线性关系,只要保证电路中电流恒定,即可保证发光二极管光强稳定性。电路如图3 所示。
电源电压为+5V,电阻R1和R2阻值可以选择为5K欧姆,A电位为2.5V,根据虚短概念B点电位也为2.5V,C点电位也为2.5V,R3阻值为2.5K欧姆,三极管射级电流为1m A恒流,基极电流与射级电流相等,也为1m A,用来驱动发光二极管发光。R3可以改为电位器,可以根据实际情况改变R3阻值,从而改变发光二极管亮度。
1.3 系统光强稳定性实现
虽然采用恒流源驱动发光二极管,但是在长时间测量中还是会有光强漂移,导致测量结果误差,为克服这些误差,系统专门设置一个通道为参比通道(Reference tunnel,在本设计中采用是通道①,如图1 所示),在该通道样品池中只加入蒸馏水,不进行样品测量。在采集数据时,同时采集被测通道和参比通道信号,由于电路设计一致性,如果光强度有漂移,那么参比样品池与被测样品池应该是漂移幅度一致。
测量前,先记录下每个被测通道(共34 个)和参比通道最初光强(初值),在实际测量时采用公式(1)进行补偿:
式中R1是当前参比通道光强值,R0是参比通道光强初值,S0是被测样品通道光强实测值,S1是光强真实值。
因参比与实测漂移幅度一致,真实值S1可以按下式(2)求得。
此方法可保证系统在10h长时间测量时漂移为0.002 个吸光度,保证测量结果长时间稳定。
2 数据采集实现
数据采集由阿尔泰公司数据采集卡PCI-2318 实现,为采样速率100KSPS12 位数据采集卡,由于系统有35 个通道,因此,在采集卡前方放置一个多通道模拟开关,通过开关选择测量哪一个通道浊度。结构如图4 所示。参比信号为通道1,每次测量时,同时采集参比信号与被测信号,按公式(2)计算后得到结果。
3 系统标定实现
对于每一个被测单元,均需要对其进行定标。定标基本方法为,配置6 种不同吸光度菌液,分别为0.1 个、0.3 个、0.5 个、0.7 个、0.9 个、1.1 个吸光度[5,6],菌液吸光度值均由标准紫外可见分光光度计(TU1901)测定,将标准吸光度菌液放入每个被测通道中,得到实际测量结果,实测结果与标准结果用最小二乘法拟合,得到标准曲线,实际测量时,测得被测值带入公式中,可得到标准吸光度值[7,8,9]。
4 实验
我国药典规定,可以采用一剂量标准曲线法、二剂量法和三剂量法计算某种药品效价,本次实验中采用一剂量标准曲线法。配置5种不同浓度标准样品(分别为10%、20%,30%,40%,50%),这些标准样品每种浓度配置5份,5种不同浓度标准品共25份,分别以相同剂量加入菌液中,被测样品同样配置5份,整个实验需30个测量单元,在37℃恒温条件下连续6 h测量并记录浊度,每个5min记录浊度测量结果,具体测量过程如图5所示。
搅拌防止悬浊物质凝固在样品池池壁上影响光透射,停止搅拌后等待110s目的是搅拌后液体彻底稳定,防止液体中存在漩涡等影响浊度测量。浊度测量结束后等待140s,保证每个测量周期为5min(300s),共进行6 h测量(也可以根据需要进行其他时长测量,如10h),共72 次测量,保存每次测量结果以备未来查看。图6 为某几个通道测量数据显示。
测量完毕后以浊度值平均值和标准样品浓度负对数值进行拟合,得到标准曲线。将被测样品浊度值带入标准曲线即可得到其效价。以北京潮声公司效价测量仪为定标仪器,可以确定本系统效价测量准确度为3%。(实验中所有操作均由国内某省级药检所专业人员完成)
5 小结
本文采用方法基于发光二极管抗生素效价测量,该方法特点是没有活动部件,系统中所有元件均固定,免除移动部件可能带来测量误差,而且对光强波动进行校正,系统一共35 个测量单元,每个单元独立且功能完全一致,使用方便,可以推广。
参考文献
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抗生素效价 篇2
1 实验室的环境影响因素
1.1 实验室的环境因素
抗生素效价测定室分衣帽间、缓冲间、无菌室, 缓冲间、衣帽间、无菌操作室都要有紫外灯。每次试验前后必须开灯消毒杀菌30min以上，无菌室分百级区和万级区，在这两个区中的操作台都要水平、洁净、无菌，每做完一组试验都用75%的酒精消毒杀菌, 不得让抗生素和培养基残留在操作台上。下一次试验前必须用75%的酒精擦拭, 保持台面的清洁无菌，定期用清洁剂擦拭地面并熏蒸消毒, 定期进行菌落检查，总数要低于3个，方能进行试验。
1.2 操作人员的消毒也要彻底
出入操作间均需用0.1%新洁尔灭浸泡双手，进衣帽间把衣帽鞋更换，在做试验前双手必须用75%的酒精消毒，衣帽鞋每做完一批样品要消毒一次。
1.3 实验器具的选择和清洗
实验器具的选择也是关键的，要选择底平整，无气泡的，双碟清洗要干净，如清洗不干净，会影响到测定的效果，会使数据造成误差。钢管应选择两端平坦，光滑，管壁厚薄和质量均匀一致的同一批产品，内壁，外壁都要清洁，清洗，不干净重量就不相符，圈就不圆。两端不平坦，抗生素溶液就会漏出，破坏均匀扩散现象，导致整组试验失败。移液管、容量瓶必经过检定，尽量减少误差。
2 试验菌的准备及影响
要及时做好实验菌的传代和保存工作，以前的常用方法是将冻干菌种复苏后，采用斜面低温保藏法，一般1～3月转种一次，传到第7代后平板分离一次，挑选典型的单个菌落扩大培养，继续使用。但时间用长了就出现抑菌圈变小，不清晰。通过查找有关资料, 并进行了反复试验，改进了菌种的传代和保藏，就是将冻干菌种复苏后，挑取单个纯种菌落的第2代菌种用适宜的方法保藏数支，同时挑取纯菌落转接斜面菌种为工作用菌种，到第5代为止，再取保藏用的第2代菌种转种工作用菌种至第5代。如此循环用完保藏的第2代为止，同时保藏的第2代菌种要6个月转一次至第4代为止。这样能保证试验菌种的使用质量，使抑菌圈更清晰均匀度更好，有效的控制了可信限率和抑菌圈大小。菌液的复苏也是关键问题, 如果掌握不好会导致整个试验失败，要掌握好复苏的时间，过短它没醒，过长它又休眠了。
3 培养基对效价测定的影响探讨及改进
培养基中原料的质量对抑菌圈边缘清晰度及试验结果的精确度影响很大。培养基有干粉培养基和自配培养基两种。我们实验室为了保证试验的成功和试验数据的准确, 所用培养基都是从中国兽药监察所购干粉培养基，按比例加水配制后高压灭菌使用，使用前需测定和调节pH值，使pH值符合要求。
4 标准品和供试品的称量
称样量的计算公式 (W为需标准品或供试品的重量;C为标准品或供试品溶液的浓度;V为容量瓶的毫升数;P为估计效价, 要精密称量, 称多了要按比例补加液体使其达到准确配制的溶液浓度。提高准确度, 以防出现边缘数据。标准品的称量一般不低于20mg, 样品称量不低于50mg。
5 标准品和供试品的稀释
要采用容量瓶稀释, 稀释步骤不得超过3步，每步的取样量要根据药品的标示量来计算但不得低于2m L。吸取溶液的吸管要作3次冲洗(用稀释液冲)，吸取溶液后，要用滤纸把吸管外壁多余液体擦去，再从起始刻度开始垂直放液，一定要把液体放完。标准品与供试品所用溶剂要相同，使用同一瓶缓冲液用同一支吸管, 吸取相同的体积，同时进行稀释，使测定条件尽量一致。尽量减少各种误差，将操作误差降低到最低限度。
6 双碟制备对测定效价的影响探讨
6.1 底层培养基的制备
用干粉培养按比例调配好后放到电炉上加热煮沸, 一定要注意, 不要让液体流出, 待完全溶化后放到高压灭菌锅中高压灭菌30min后放到55～60℃的水溶锅中备用，温度不可太高，也不可太低，太低培养基会出现结块，甚至不能使用。做好后在每个碟中注入20mL培养基，使其铺满整个双碟，不能有气泡，若有要用吸管戳破。6.2菌层的制备菌层制备时要掌握好温度，温度过高会杀死细菌，过低培养基会出现结块，一般细菌控制在48～50℃，芽孢菌控制在60℃。当培养基中加入菌悬液后要尽快注入到底层培养基上，用吸管吸取菌层放在底层培养基的双碟的中间部位，在迅速转动双碟，使菌层培养基均匀推布并铺满整个底层，铺好后应平放，如果不平整，加入钢管中的抗生素溶液会从钢管下端流出，出现破圈，导致整组试验失败。
6.3 菌悬液的加量
菌悬液是取工作用菌种营养琼脂斜面物，用灭菌水洗下制备而成，新制备的菌悬液在做试验前要先试圈，使抑菌圈的直径在18～22mm内菌悬液的量要根据保存的时间长短来定，新配制的加量少，到中后期量要增加，因为菌株会随时间的延长而衰亡，生长周期不一样，对抗生素的敏感度减小，导致抑菌圈变大，模糊，甚至无圈都有可能，因此，菌悬液在使用一段时间后就要增大用量，一般3个月的菌悬液最好用。所以抑菌圈的大小就用菌悬液的量来调整，菌圈大就减少加量，菌圈小就增加量。
6.4 钢管放置
钢管放置要用钢管自动放置器, 这样放置出来的钢管距离均匀，如果距离不均匀, 会导致菌圈相离太远，或太近测量时会造成误差, 在抑菌圈自动测定仪上甚至测不出。
6.5 抗生素的滴加
滴加抗生素可以用胶头滴管滴加或定量加样器滴，在滴加之前必须用滴加液洗3次。笔者一般是用胶头滴管滴加(用胶头滴管滴加要操作熟练)，滴加前要检查滴管内是否有气泡或滴管开口端有液体残留，继续滴加容易造成气泡破裂，使溶液溅在菌层培养基上造成破圈，有残留液体会造成量不准确。滴加的量不能多，多了就要溢出，加少了量不够, 菌圈的直径达不到18～22mm，所以每个钢管内加到平满管口即。在滴加时不要离管口太高，太高会溅出，太低会碰到钢管。滴加的时间不能过长, 因为溶液的扩散时间不同会给测量结果造成误差。
7 培养的时间温度对效价的影响
把做好的双碟水平放置在35～37℃的恒温培养箱中, 培养12～18h, 根据需要可以延长1～2h，主要抑菌圈清晰就可以测量，双碟要放在恒温箱的中间比较好，温度均匀有利于细菌生长。
8 抑菌圈测定仪测量的影响
笔者用抑菌圈测定仪测量。如果不注意调整抑菌圈清晰度后就测量，会给测量造成很大误差，抑菌圈清晰测出的准确。圈不清晰测出的结果不准确。所以尽量使用仪器测量以减小人为因素引起的试验误差。
9 讨论
本文对管碟法测定抗生素进行试验探讨，对管碟法测定抗生素有直观, 准确, 灵敏度高, 便于操作的优点。笔者认为虽然影响因素较多, 但只要认真熟练的操作就能消除影响, 使测量结果更准确，提高测量结果的精密度和准确性。
摘要：管碟法测定抗生素效价需要从每个环节严格控制才能得到与真值更为接近的结果。笔者根据实验操作中积累的工作经验, 对管碟法测定抗生素效价过程中的多种影响因素进行归纳及改进, 有利于实验的顺利进行, 也有利于提高实验结果的准确性。
抗生素效价 篇3
1 实验方法与结果
1.1 标准曲线制备
1.1.1 中间浓度的选择:
根据量反应平行线原理设计, 通过检测抗生素对微生物的抑制作用, 在抗生素项下规定的剂量与反应线性范围内选择一个中间浓度C0=13.5 U/m L。
1.1.2 标准溶液浓度的确定:
依照标准品说明书的规定, 临用对照药典规定稀释, 各剂量按等比级数稀释。剂量间的距离为1∶0.85, 算出中间剂量邻近的高低2个浓度, C0+1及C0-1, 再分别计算各剂量的浓度, 各种浓度Cm (m1~m8) 分别为7.0、8.5、9.8、11.5、16.0、18.8、22.0、25.5 U/m L。
1.1.3 标准土霉素溶液的制备:
精密称取土霉素标准品, 用灭菌水制成1000 U/m L, 精密吸取20 m L至200 m L量瓶中, 加磷酸缓冲液 (p H7.8) 稀释成100 U/m L。再分别精密吸取3.5、7.0、8.5、9.8、11.5、16.0、18.8、22.0、25.5 m L至100 m L容量瓶中, 用p H6.0的磷酸盐缓冲液稀释至刻度, 制成中间浓度为13.5 U/m L及Cm (m1~m8) 各种浓度的标准溶液。
1.1.4 标准曲线的制定:
取试验用直径约90 mm、高16~17 mm的培养皿24只, 分为8组每组3只, 每组各培养皿内间隔的3枚不锈钢小管内分别滴满标准品, Cm1~8, 即8.4……21.0 U/m L溶液;另3枚不锈钢小管内均滴满标准品的中间浓度C0即13.5 U/m L溶液。在36℃培养14~16 h后, 用游标卡尺逐一测量每个培养皿3个浓度的抑菌圈直径。分别求得每组3个培养皿中间浓度C0所致的抑菌直径平均值y0即C1~C8所致抑菌圈直径的平均值, ym (即Cm=1~8) 。令fx=ym-y0, 分别计算测得值, 则8组培养皿可得出f1~8的8个反应参数 (表1) 。以fm值为横坐标, 以相应的抗生素浓度对数为纵坐标, 在方格纸上标点, 将各点联结即成标准曲线 (图1) ;或经计算, 得出回归曲线直线方程式:Y=0.15663X+1.32985, 相关系数:r=0.99878。
1.2 供试品效价测定
1.2.1 供试品效价测定:
取标准品制备中间浓度的标准液, 并取供试品, 预估效价后, 精取10 m L, 加灭菌水制成每1 m L中约含1000 U的溶液, 摇匀, 静置, 精密量取上清液适量, 用p H6.0的磷酸盐缓冲液稀释到与标准品的中间浓度相同的供试液。取试验用放置6枚不锈钢小管的培养皿, 一般不小于3个, 在每一培养皿中, 间隔的3枚不锈钢小管中分别滴满中间浓度的标准液, 另3枚不锈钢小管中滴满供试液。在36℃培养14~16 h后, 用游标卡尺测量各抑菌圈的直径。分别求得标准液抑菌圈的直径。分别求得标准液抑菌圈直径平均值y。和供试液抑菌圈直径的平均值ym, 算出的差数 (fm) 。据此在标准曲线上读取供试液的浓度, 即可换算成供试品所含效价 (U/m L) , 也可以代入回归曲线直线方程式, 算出供试品的效价 (即含量) 。
1.2.2 供试品效价的试验比较:
用标准曲线法测定土霉素片[2]批号分别为20101007、20111104、20120506、20121210, 并与抗生素微生物检定法 (二剂量法) 相比较, 结果如下 (表2) 。
1.3 重复性试验:
取土霉素片 (批号为20121210) , 按标准曲线法测定6份, 其平均值为98.6%, RSD为1.40%。
2 讨论
标准曲线法测定土霉素片抗生素效价, 选择标准品中间浓度为13.5 U/m L, 加菌液适量可现直径在15~18 cm的菌圈, 其抑菌圈较为清晰的边缘。用标准曲线法测定效价与二剂量法相比较, 结果没有显著差异, 实验过程虽然繁琐, 但结果准确, 重现性好。
摘要：目的 探讨用标准曲线法测定土霉素片的抗生素效价。方法 利用标准曲线法测定其效价, 与中国药典规定用抗生素微生物检定法二剂量法测定其效价进行比较。结果 标准曲线法测定其浓度在7.025.5 U/m L范围内菌圈清晰, 标准品菌圈直径与中心浓度菌圈的差与抗生素浓度对数线性关系良好 (r=0.99878) 。结论 本法与二剂量法比较, 结果无显著差异、准确, 重复性好。
关键词：标准曲线法,抗生素效价,土霉素片
参考文献
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抗生素效价 篇4
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2011年6月-2012年6月收治的骨科手术患者120例, 随机分为A、B、C、D、E、F 6组, 每组20例。A组男14例, 女6例;年龄20~65 (38.3±8.4) 岁。B组男13例, 女7例;年龄22~65 (38.5±8.5) 岁。C组男13例, 女7例;年龄21~65 (38.2±8.3) 岁。D组男12例, 女8例;年龄21~64 (38.4±8.4) 岁。E组男13例, 女7例;年龄20~63 (38.3±8.6) 岁。F组男12例, 女8例;年龄22~64 (38.2±8.5) 岁。6组患者性别、年龄等方面比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 纳入及排除标准
所有患者经检查均未发现肾功能不全、糖尿病、感染病灶等, 严格遵照手术预防性应用抗菌药物判定标准用药。
1.3 方法
A组采取头孢呋辛治疗, 头孢呋辛1.5g静脉注射, 每天2次。B组采取头孢他啶治疗, 头孢他啶1~2g静脉注射, 每天2次。C组采取磺苄西林钠治疗, 磺苄西林钠2~4静脉注射, 每天2次。D组采取阿奇霉素治疗, 第1天0.5g顿服, 第2~5天0.25g顿服。E组采取克林霉素治疗, 克林霉素0.6~1.2g静脉注射, 每天2次。F组采取左氧氟沙星治疗, 左氧氟沙星0.2~0.4g静脉注射, 每天2次。
1.4 观察指标
观察6组不同抗生素的治疗效果及成本效果。
1.5 疗效评定标准
显效:术后伤口达甲级愈合, 未出现感染;有效:术后伤口达乙级愈合, 未出现感染;无效:术后伤口达丙级愈合, 或出现感染。总有效率= (显效+有效) /总例数×100%。
1.6 统计学方法
计数资料以率 (%) 表示, 组间比较采用χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 治疗效果
A组、B组、C组、D组、E组、F组总有效率分别为95%、90%、95%、95%、75%、70%, A组、B组、C组、D组总有效率明显高于E组、F组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。
注:与E、F组比较, *P<0.05
2.2 成本效果
A组、B组、C组、D组、E组、F组成本/效果分别为0.97、1.84、2.76、1.51、1.20、1.30, A组成本/效果明显低于B组、C组、D组、E组、F组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表2。
注:与其他各组比较, *P<0.05
3 讨论
随着交通日益发达, 车祸发生也逐渐增多, 造成骨伤患者增多[2]。骨伤患者大部分非手术治疗难以收到满意的效果, 需手术治疗, 而手术治疗以复位后内固定为主。骨科医师常需采用大剂量的抗生素用于术前、术后, 以避免感染。而为提升杀菌效果, 两至三种广谱抗生素联合使用也较为常见, 常导致菌群失调, 耐药菌株出现等[3]。因此, 多数学者认为, 抗生素的给予应具有针对性及合理性, 大剂量及联合使用往往会带来更加严重的不良反应, 造成严重的医疗资源浪费[4]。因此将目前常在骨科应用的抗生素的药物效价比进行对照观察, 以期在最大化满足疗效的基础上降低治疗费用。
围术期抗生素使用一般为预防性质, 用于预防切口感染, 提高愈合质量, 一般骨科常用头孢呋辛、他唑巴坦、头孢哌酮、头孢噻肟、氧氟沙星、克林霉素、依替米星等作为预防感染用抗生素。本结果显示, 6种抗生素治疗分别的总有效率为95%、90%、95%、95%、75%、70%, 头孢呋辛、头孢哌酮、依替米星的总有效率显著高于头孢噻肟、氧氟沙星、克林霉素, 并且通过成本对比计算, 头孢呋辛成本较低, 成本效果比也明显高于其他抗生素, 因此, 头孢呋辛为骨科感染防治中效果较好且花费较低的药物, 并且临床使用较为安全, 因此推荐进行使用。
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