牛黄降压丸（精选2篇）
牛黄降压丸 篇1
细胞色素P450酶是人体内的肝药酶,广泛分布于肝脏等器官,经研究已发现有20多种同工酶与药物代谢相关性高,共同参与人体内300余种药物的代谢[1],多种药物相互使用时,若其中药物是CYP3A4的诱导剂或抑制剂,则会显著影响其他药物的代谢,也会对其他药物的疗效产生影响。研究表明,多种中药提取物对P450活性有一定影响,如银杏、五味子、白芷、羌活等甲醇提取物对CYP3A4有抑制作用[2,3]。利用体外实验预测药物在体内是否发生药物代谢性相互作用,是目前药物代谢研究的热点内容之一。本文拟研究银黄颗粒、牛黄上清丸、双黄连合剂对重组人肝微粒体细胞色素酶rCYP3A4的影响,结果如下。
1实验材料
1.1仪器设备
微型离心机(常州朗越仪器制造有限公司产,型号:MINI-10K),电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产,型号:AL204),旋涡混合器(常州朗越仪器制造有限公司产,型号:XH-C),立式超低温保存箱(青岛海尔特种电器有限公司产,型号:DW-86L386),实验室pH计(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产,型号:FE20),高效液相色谱仪(北京创新通恒科技有限公司产,型号:LC3000)。
1.2试剂试药
人重组肝细胞微粒体CYP3A4(SPIBIO,批号:M41013),咪达唑仑注射液(江苏恩华药业股份有限公司,批号:20140607),1-羟基咪达唑仑(CeriLLiant,批号:FN08081402),卡马西平(中国食品药品检定研究院,批号:100142-201105),酮康唑(上海源叶生物科技有限公司,批号:SM0325YF13),NADPH(上海源叶生物科技有限公司,批号:WO1028EA14),乙腈(天津市大茂化学试剂厂,批号:20141021),甲醇(广东光华科技股份有限公司,批号:20140723),磷酸氢二钾(广州化学试剂厂,批号:20140701-2),三羟甲基氨基甲烷(上海源叶生物科技有限公司,批号:TA0429CA14),无水氯化镁(天津市福晨化学试剂厂,批号:20140412),碳酸氢钠(广州化学试剂厂,批号:20140701-1),银黄颗粒(河北国金药业有限责任公司,批号:4403073),牛黄上清丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂,批号:3015673),双黄连合剂(河南太龙药业股份有限公司,批号:1307001)。
2实验方法
2.1溶液配制
2.1.1咪达唑仑配制精密吸取咪达唑仑注射液360μL(相当于咪达唑仑1.8mg),置于5mL容量瓶中,用纯化水定容至刻度,摇匀,得到浓度均为1.0mmoL·L-1的储备液,置于4℃冰箱备用。精密吸取1mL于10mL容量瓶中,加入纯化水定容至刻度,摇匀,得到浓度为100μmoL·L-1的咪达唑仑溶液。
2.1.2 1-羟基咪达唑仑标准溶液配制精密吸取100μL1-羟基咪达唑仑于10mL容量瓶中,甲醇定容至刻度,得到1μg/mL的储备液,精密吸取1mL 100μL 1-羟基咪达唑仑储备液于10mL容量瓶中,甲醇定容至刻度,得到100ng/mL的储备液,置于4℃下保存待用。
2.1.3卡马西平内标溶配制精密称取10.0mg卡马西平于10mL容量瓶中,用乙腈定容得到1mg/mL卡马西平储备液,从储备液中精密吸取20.0μL到10mL容量瓶中,用乙腈定容得到浓度为2.00μg/mL的内标溶液,4℃下保存备用。
2.1.4磷酸盐缓冲液(pH=7.4)配制取磷酸二氢钾1.36g,加0.1moL·L-1氢氧化钠溶液79mL,用水稀释至200mL,即得PBS溶液。
2.1.5阳性抑制剂酮康唑配制精密称取酮康唑26.5mg于5mL容量瓶中,用PBS溶液(pH=7.4)溶解并定容至刻度,摇匀,得浓度为10.0mmoL·L-1的储备液,置于4℃冰箱备用。
2.1.6氯化镁溶液的配制精密称量47.5mg氯化镁于10mL容量瓶中,用PBS溶液(pH=7.4)充分溶解,定容摇匀,得到50.0mmoL·L-1的氯化镁溶液。
2.1.7 NADPH溶液配制精密称量8.3mg NADPH用PBS溶液(pH=7.4)稀释得到浓度为10.0mmoL·L-1的NADPH,现用现配,4℃冰箱避光保存。
2.1.8人重组肝细胞微粒体CYP3A4配制精密吸取100μL人重组肝细胞微粒体CYP3A4,置于1mL容量瓶,用PBS溶液(pH=7.4)配制成浓度为100pmoL·L-1的溶液,置于-20℃冰箱中保存。
2.2孵育体系与样品处理[4,5]
2.2.1孵育体系肝微粒体体外孵育体系的总体积为200μL:20μL CYP3A4(终浓度为10pmoL·L-1),20μL氯化镁(终浓度为5.00mmoL·L-1),10μL咪达唑仑(终浓度为5μmoL·L-1),剩余体积用PBS缓冲溶液(pH7.4)补充,37℃水浴中孵育5min后,加入20μL NADPH(终浓度为1.0mmoL·L-1)启动反应,反应5min。
2.2.2样品处理孵育结束后,立即向孵育体系中加入100μL冰乙腈(含内标物质卡马西平2μg/mL)终止反应,涡旋混合1min,-20℃下放置10min,10 000r/min高速离心10min,取上清液过滤,吸取20μL注入到HPLC仪中测定。
2.3色谱条件[6]
色谱柱KromasiL C18(250mm×4.6mm,5μm),流速为1.00mL/min,柱温为40℃,检测波长230nm,流动相:10.0mmoL·L-1醋酸铵缓冲液-甲醇(42∶58),进样量为20μL。
2.4分组与给药[7]
体外孵化反应分为阳性对照组、阴性对照组和试药组。阴性对照组中加入磷酸盐缓冲液(pH=7.4),阳性对照组中加入酮康唑溶液(0.0125、0.025、0.05、0.1、0.5、1.0、10、50μmoL·L-1);试药组给予以磷酸盐缓冲液(pH=7.4)稀释的不同浓度的中成药溶液。孵育体系总体积均为200μL,根据“2.2孵育体系与样品处理”项下进行反应并处理。将所有样品按“2.3色谱条件”项下进行测定,根据代谢产物1-羟基咪达唑仑的生成率可确定CYP3A4酶的相对活性(即试药组占阴性对照组生成率的百分比),计算半数抑制率(IC50)。
2.5标准曲线制备
取6只EP管,加入1-羟基咪达唑仑储备液,使1-羟基咪达唑仑的终浓度分别为10、20、50、100、200、500、1000ng/mL,按照体外孵育和样品处理方法“2.2孵育体系与样品处理”项操作,取上清液20μL进样,以1-羟基咪达唑仑和卡马西平的峰面积比值(Y)和含量(X)进行加权回归。
2.6酮康唑IC50的测定及抑制活性的评价
在肝微粒体孵育体系中阳性抑制剂酮康唑对CYP3A4介导的咪达唑仑1-羟基化反应有强抑制作用。阳性对照组中加入酮康唑溶液,使其终浓度为:0.025、0.1、0.5、1、10、50μmoL·L-1,根据“2.2孵育体系与样品处理”项下进行反应并处理,根据1-羟基咪达唑仑的生成率来确定CYP3A4酶的相对活性(即实验组占阴性对照组生成率的百分比),计算半数抑制率IC50。
2.7对rCYP3A4活性影响的初步筛选
2.7.1样品配制[7]根据说明书,分别取治疗量的银黄颗粒、牛黄上清丸、双黄连合剂,经处理后,分别置于100mL容量瓶中,加甲醇溶液定容至刻度,超声30min,滤过,滤液作为储备液。将中成药分为低、中、高剂量组,低、高剂量组则分别为中剂量组的1/2和2倍,并同时设置空白组。每个样品平行做3份。
2.7.2酶孵化条件反应体系中先分别加入PBS(pH=7.4)、咪达唑仑、氯化镁、rCYP3A4和待测药物的储备液,置于37℃水浴中预孵化振荡5min后,加入NADPH生成系统启动孵化反应。37℃水浴振荡反应5min后,加入冰乙腈(含内标物质—卡马西平2μg/mL)终止反应。涡旋混合1min,-20℃下放置10min,10 000rpm离心5min,取上清液过滤,吸取滤液20μL注入HPLC仪中,按“2.3色谱条件”项下色谱条件进样测定,测定咪达唑仑代谢产物1-羟基咪达唑仑的浓度。
2.7.3代谢产物测定使用HPLC仪按“2.3色谱条件”项下色谱条件进样分析,测定1-羟基咪达唑仑与卡马西平的含量,考察对CYP3A4活性影响较大的中成药。代谢产物1-羟基咪达唑仑的生成率越低,表示抑制作用越强。
2.8对rCYP3A4活性抑制作用强弱(IC50值)的计算
2.8.1酶孵化条件参见“2.7对rCYP3A4活性影响的初步筛选”项下“2.7.2酶孵化的条件”项操作。
2.8.2代谢产物测定参见“2.7对rCYP3A4活性影响的初步筛选”项下“2.7.3酶孵化的条件”项操作。
2.8.3 IC50测定通过体外初步筛选后,在固定CYP3A4浓度、探针底物咪达唑仑浓度和NADPH浓度的同时,改变待测中成药的浓度,测定不同浓度下中成药对1-羟基咪达唑仑生成率的影响,判断对CYP3A4的抑制程度,估计中成药对rCYP3A4活性的影响强弱。以中成药浓度对数值为横坐标(X),CYP3A4酶的相对活性(%)表示为纵坐标(Y),计算IC50值和95%的可信范围[8],计算公式为:Y=min×(max-min)/[1+10^(X-LogIC50)]。
3结果
3.1专属性考察
按“2.3色谱条件”项下色谱条件进样测定,1-羟基咪达唑仑、卡马西平的分离度好(>1.5),1-羟基咪达唑仑与卡马西平出峰时间分别在15.4min,8.6min。见图1、图2、图3。
3.2标准曲线
以1-羟基咪达唑仑和卡马西平的峰面积比(Y)和含量(X)进行加权回归,得到Y=0.001 2X+0.012 2(R2=0.997,n=6),表明1-羟基咪达唑仑在10~1 000ng/mL范围内与峰面积线性关系良好,结果见图4。
3.3阳性对照组酮康唑对rCYP3A4酶相对活性
计算IC50为0.065 38μmoL·L-1,95%区间:0.045 42~0.094 1符合文献[8]范围(0.06~0.16μmoL·L-1),表明所用的孵育体系可以满足CYP3A4酶抑制活性的评价及测定其他抑制剂IC50的要求。
3.4对rCYP3A4活性影响的初步筛选
由表3可看出:银黄颗粒、牛黄上清丸及双黄连合剂对CYP3A4酶表现出诱导作用。
4讨论
CYP3A4是肝脏和肠道重要代谢酶,含量可达到肝脏CYP450总量的60%,肠道CYP450总量的70%[9],是药物代谢的主角。中成药说明书中药物相互作用栏均未见报道,只是简单书写“如与其他药物同时使用可能会发生药物相互作用,详情请咨询医师或药师。”基于此,开展本研究对完善中成药的说明书有一定帮助作用,对临床合理用药提供了参考性依据。本实验结果显示,银黄颗粒、牛黄上清丸及双黄连合剂对CYP3A4有诱导作用,因此,在使用时可考虑其潜在的药物相互作用。
摘要：目的:探讨银黄颗粒、牛黄上清丸、双黄连合剂对CYP3A4活性的影响。方法:利用体外肝微粒体培育体系,以咪达唑仑作为探针底物,研究银黄颗粒、牛黄上清丸、双黄连合剂对人肝微粒体细胞色素P450_3A4(CYP3A4)活性的影响。结果:与空白组比较,银黄颗粒、牛黄上清丸、双黄连合剂对CYP3A4活性表现为诱导作用。结论:在与临床上经CYP3A4代谢的药物联合应用时,应警惕银黄颗粒、牛黄上清丸、双黄连合剂潜在的药物之间的相互作用。
关键词：银黄颗粒,牛黄上清丸,双黄连合剂,细胞色素P4503A4
参考文献
[1]刘艳,王海霞,黄丽军,等.大鼠肝微粒体法测定3种中药对CYP3A4亚型的作用[J].医药导报,2011,30(3):285-289.
[2]DBJ GURLEY,SF GARDNER,MA HUBBARD,et al.Clinical assessment of effects of botanical supplementation on cytochrome P450phenotypes in the elderly:St johns'wort,garLic oiL Panaxginseng and Ginkgo biLoba[J].Drugs Aging,2005,22(6):525-539.
[3]IWATA,郑晓燕,阴赪宏.26种中药提取物对CYP3A4和CYP2D6代谢的抑制作用[J].国际中医中药杂志,2004,27(4):232.
[4]任秀华,曹磊,斯陆勤,等.rCYP3A4孵育条件的优化及其中1-羟基咪达唑仑含量测定[J].医药导报,2010,29(4):418-421.
[5]沈玉捷.高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体CYP3A4和CYP2E1的活性及其应用[D].大连:大连医科大学,2013.
[6]VAP Jabor,EB Coelho,SNAG Dos,et al.A highly sensitive LC-MS-MS assay for analysis of midazolam and its major metabolite in human plasma:Applications to drug metabolism[J].Journal of Chromatography B,2005,822(1-2):27-32
[7]杨旭平,赖丹,黄毅岚,等.5种抗肿瘤中药注射液对CYP3A4酶代谢的影响[J].华西药学杂志,2014,29(5):550-552.
[8]YAO M,ZHU M,SINZ MW,et al.Development and full validation ofsix inhibition assays for five major cytochrome P450enzymes inhuman liver microsomes using an automated 96-well microplateincubation for matand lC/MS/MS analysis[J].J Pharm Binmed Anal,2007,44(1):211-223.
[9]刘建平,李高.生物药剂学与药物动力学[M].第4版.北京:人民卫生出版社,2008:130-156.
同仁牛黄清心丸说明书 篇2
同仁牛黄清心丸对气血不足，痰热上扰引起失眠是有效的。现代研究也证实，牛黄清心丸有镇静、降血压、解热、耐缺氧、抗血栓、抗动脉硬化等作用，还能降低胆固醇，抗疲劳，改善睡眠和情绪，增强机体对各种有害刺激的防御能力。
同仁牛黄清心丸源于宋代《太平惠民和方剂局方》卷一的“牛黄清心圆”，是历久不衰的效验医方，清代在对该方进行加减化裁后定为清宫秘方，经过二百多年临床实验，医家对该方不断进行改进，使其安全有效性更为可靠，而成为清心、化痰、开窍与滋补强壮共有的药物。清康熙年间，经同仁堂乐氏家族将原处方精心化裁，成为清代宫廷用药，是治疗风痰类疾病的经典名方。
同仁牛黄清心丸在临床上适用于治疗气血不足，痰热上扰引起：胸中郁热，惊悸虚烦，头目眩晕，中风不语，口眼歪斜，半身不遂，言语不清，神志昏迷，痰涎壅盛。同仁牛黄清心丸可用于高血压病、眩晕、中风先兆、脑血管意外，脑血栓后遗症、神经衰弱症，冠心病、心绞痛等的治疗，对改善心脑功能有明显作用。