人工牛黄（精选4篇）
人工牛黄 篇1
牛黄, 是黄牛、水牛、野牛的胆结石、胆管结石、肝管结石、属于贵重药材, 由于市场紧缺, 价格昂贵, 特别是在天然牛黄供不应求的情况下, 开展人工植黄, 不仅可缓和牛黄供应紧张, 而且是广大农民脱贫致富之道。每克牛黄销售价达350元左右, 如人工植黄, 一般每头牛可产牛黄3~15克, 高的达26克以上, 植黄三年可产牛黄30~40克, 最高达126克以上, 可收入44000多元, 相当于出栏5头300千克以上肉牛的收入。怎样才能培植人工牛黄?总结一些专业户的经验是:
一、选牛
凡植黄的牛, 不分品种, 公母牛均可。但一定要把好牛的年龄关, 经验表明, 最佳植黄的牛的年龄是4~10岁。牛龄太小的产黄少, 年龄太大的易伤亡, 或因生存时间段短, 难于形成较大的胆石, 经济效益低。
二、植黄时间
人工培植黄牛, 与牛的体况和外界气候有关。因此, 要选最适宜的时间, 一般南方4~5月, 北方5~6月植黄为宜。因为上述时间, 牛的膘情差, 手术容易。此时又处于牧草返青季节, 牛吃上青草上膘快。又因降雨少, 伤口不易感染, 愈合快。
三、巧植
主要把“七关”:一是准备关。做好手术前的一切准备, 如器械、药品和“核”等, 并在手术前让牛禁食一天。二是保定关。手术时, 要把牛左侧卧保定在平地上, 最好是在手术台上, 捆住四肢, 固定头、尾。使其不能骚动。三是麻醉关。要根据牛体大小, 肌肉注射麻醉剂, 麻醉时间达3小时左右, 使牛安静下来, 进行手术。四是部位关。手术部位, 即胆囊部位, 在牛体右下侧肝下缘腹壁直下, 即肩胛骨1/3处, 往后作平行线, 与右侧倒数第二、第三肋骨中间的交会处。五是手术关。部位确定后, 要剃毛和消毒, 先用5%碘酊消毒, 再用70%的酒精脱碘, 并盖好创布。在两肋间切开皮肤5~8公分, 然后按肌肉纤维方向钝性剥离肋间外肌、腹横肌, 并做好止血。当腹膜暴露后, 用鼠齿镊子提取腹膜, 用直尖剪刀剪开一小口, 并钝性撕开2~3公分。找到胆囊后, 将其牵引到切口处。胆囊初拉出时呈浅绿色, 表面分布有网状血管, 呈梨形。将胆囊拉出, 剪开2厘米小口, 让胆汁流出一半, 从切口放入“核”。六是选“核”关。选用富有弹性的、无毒塑料制成的、乒乓球大小的, 并套有用酒精浸泡过毒的良布的网型空核, 但核的直径不能小于1.5厘米。七是注液关。将“核”放入胆囊内, 要用胃线缝合, 后再向胆囊内注入牛黄菌种8~10毫升。然后用生理盐水冲洗干净后, 把胆囊送入腹腔中。再分别作腹膜、肌肉分别连续缝合, 最后将皮肤作结节缝合, 并用敷料覆盖切口, 经5~7天可拆线。在缝合胆囊时, 千万注意做到完整无漏, 特别是腹膜与胆囊粘连, 手术即失败。
四、护理
手术后的牛, 必须加强护理, 要注意以下几点:一是要单独放牧, 饲养一星期方可入群;二是要防止污染伤口, 特别是不能进雨水;三是要防止蚁、蝇叮咬, 要在伤口处涂少量的碘酊;四是注意牛瘤胃臌气, 一旦发现要及时注入“气灵”;五是在手术当中及伤口愈合阶段, 手术牛严禁使用抗菌素、磺胺类药品, 否则不产牛黄;六是牛黄菌种在有效期内应保持在0~4℃之间, 防止温度忽高忽低, 从而影响牛黄生产的数量。
五、取黄与再植黄
植黄10~14个月就可取黄, 取黄的方法与植黄手术相同, 打开胆囊, 把“核”取出。再把新“核”植于胆囊中。健壮牛可植黄2~3次, 一般不可超过3次。
六、加工
取出“核”后, 可发现其内外有金黄、橙黄、褐黄色的沉积物附着于“核”的内外, 此即牛黄。要做好加工, 必须把好“三关”:一是及时用卫生纸吸水, 不可用其他纸代替, 以去其粘液和胆汁及污物;二是不可曝晒和高温烘烤, 要放在通风、干燥地方, 使其自然干燥;三是干燥后, 用清洁瓶密封保存或销售。据《本草通玄》记载:“牛黄”, 体轻气香, 置舌上, 先苦后甜, 清凉透心者为真。
人工牛黄 篇2
1 材料
1.1 仪器设备
MG0.6型压力蒸汽灭菌柜 (河北省邢台医疗器械厂) ;LRH-150B型生化培养箱 (广东省医疗器械厂) ;101-2A电热鼓风干燥箱 (上海沪南科学仪器联营厂) ;SHJ-SZP超净工作台 (苏州安泰空气技术有限公司) 。
1.2 培养基及试剂
改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基。培养基均为本公司自制。人工牛黄甲硝唑胶囊 (石药集团有限公司) , 批号1205051、1207061、1209071, 规格:甲硝唑0.2g, 人工牛黄5mg。
1.3 验证菌种
金黄色葡萄球菌[CMCC (B) 26003]、大肠埃希菌[CM-CC (B) 44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC (B) 63501]、黑曲霉菌[CMCC (F) 98003]、白色念珠菌[CMCC (F) 98001]均购自中国食品药品检定研究院。
2 菌液制备
将金黄色葡萄球、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉菌按《中国药典》2010年版二部附录XI J细菌、霉菌及酵母菌计数项下的菌液制备方法制成浓度约为50~100cfu/mL的菌悬液, 备用。[2]
3 供试液制备
用非水溶性药品处理方法试验, 取5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80于烧杯中溶化混匀, 加入供试品5g, 用无菌玻棒搅拌成团后, 缓慢加入45℃左右的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100mL, 边加边搅拌使之溶化, 即为供试液。
4 回收率实验
4.1 结果判定:回收率应不低于70%
稀释剂对照组的菌回收率 (%) =稀释剂对照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落数×100%
试验组的菌回收率 (%) = (试验组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数) /菌液组的平均菌落数×100%
4.2 供试品对照组
分别取上述供试液1mL, 用平皿法制板, 制成2个营养琼脂培养基平板、2个玫瑰红钠琼脂培养基平板。细菌在33℃下培养72h, 霉菌或酵母菌置25℃下培养120h, 计数。
4.3 试验组
取上述供试液1mL和5种菌液各1mL, 同法制成营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基平板各2份, 并依法培养, 计数。
4.4 菌液组
取5种相同的菌液各1mL, 同法制成营养琼脂培养基平板和玫瑰红钠琼脂培养基平板各2份, 并依法培养, 计数。结果见表1-3。
4.5 稀释剂对照组
取供试品制备所用稀释剂1mL和上述5种菌液各1mL, 制成营养琼脂培养基平板和玫瑰红钠琼脂培养基平板各2份。细菌置33℃培养箱中培养72h, 霉菌 (酵母菌) 置25℃培养120h计数[3]。结果见表4。
5 讨论
本研究结果表明:各组试验回收率均大于70.0%, 符合法定要求, 本法所用稀释剂对结果无影响;采用平皿法检验供试品, 采用加入对照法试验, 各组试验的回收率均高于70.0%, 无明显抑菌作用。所以人工牛黄甲硝唑胶囊在进行微生物限度检查检验金黄色葡萄球、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉菌时可以采用非水溶性药品处理方法和平皿法进行检验。
参考文献
[1]国家药典委员会.国家药品标准·化学药品地方标准上升国家标准 (第三册) [S].北京:化学工业出版社, 2008.
[2]潘有文.现代医药工业微生物实验室质量管理与验证技术[M].北京:中国协和医科大学出版社, 2004:179-185.
人工牛黄 篇3
1 仪器与试药
日本岛津公司高效液相色谱仪LC-2010A;岛津UV-2450型紫外-可见分光光度计;202-V1型电热恒温干燥箱;BP211D电子天平;CQ250型超声波清洗器 (功率:500W) 。
甲硝唑对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号:100191-200305, 供含量测定用, 含量为100.0%) ;人工牛黄甲硝唑胶囊 (吉林道君药业股份有限公司, 批号为20040504、20040801、20040802、20040803) ;甲醇为色谱纯, 水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:diamonsile (钻石) C18 (4.6mm×250mm, 5μm) 流动相:甲醇-水 (25∶75) ;检测波长:277nm;流速:1.0m L/min;进样量:10μL;柱温:30℃。色谱柱的理论塔板数按甲硝唑峰计算>6000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取105℃干燥至恒重的甲硝唑对照品21.91mg, 置100m L量瓶中, 加流动相使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得 (每1m L含甲硝唑219.1μg) 。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取装量差异项下内容物适量 (约相当于甲硝唑20mg) , 置100m L量瓶中, 加流动相约60m L, 超声处理2min, 放冷, 加流动相稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取滤液作为供试品溶液。
2.4 线性关系及标准曲线
精密吸取甲硝唑对照品溶液4、8、10、12、16、20μL, 注入高效液相色谱仪, 按上述色谱条件测定, 以甲硝唑对照品峰面积积分值为纵坐标, 其进样量为横坐标进行线性回归, 得回归方程为y=11363+193481x, r=0.999999 (n=6) , 在0.8764~4.3820μg范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
取对照品溶液, 按2.1项下条件进样10μL, 重复进样6次, 峰面积的平均值为1945842, 其RSD为0.78% (n=6) 。表明精密度良好。
2.6 稳定性试验
取对照品溶液, 按2.1项下条件进样10μL, 在0、2、4、8、12、24h分别测定。结果峰面积平均值为1941238, 其RSD为1.02% (n=6) 。表明溶液在24h内稳定性良好。
2.7 重现性试验
取同一批号 (批号:20040801) 样品, 按2.3项下方法制成供试品溶液, 按2.1项下条件, 平行进样6次, 测得其含量为100.25%, 其RSD为0.21% (n=6) 。表明重现性良好。
2.8 回收率试验
精密称取甲硝唑对照品10.12mg, 置10m L量瓶中, 加流动相使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为对照品溶液。
另精密称取已知含量的人工牛黄甲硝唑胶囊 (批号:20040801, 含量为100.25%) 内容物适量 (约相当于甲硝唑10mg) , 置100m L量瓶中, 加流动相约60m L, 超声处理2min, 放冷, 精密加上述对照品溶液5m L, 再加流动相稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 即得, 分别精密吸取10μL, 注入高效液相色谱仪, 按2.1项下色谱条件测定, 以外标法计算, 结果见下表1。
2.9 阴性干扰试验
按照处方比例取除去甲硝唑的其他成分, 按制备工艺制得阴性样品。按上述条件与方法试验, 结果阴性样品在与对照品色谱峰相应的位置上无吸收峰, 说明处方中其他成分对测定无影响, 见图1。
2.1 0 样品含量测定
分别取上述4批人工牛黄甲硝唑胶囊供试品溶液注入高效液相色谱仪, 以外标法计算甲硝唑相当于标示量的百分含量, 同时用国家药品标准规定的紫外分光光度法测定上述样品, 两法测得结果比较见表2。
3 讨论
3.1 测定波长的选择
紫外法测定甲硝唑在277nm波长处有最大吸收。
3.2 本方法的优点
本方法测定样品含量, 操作简便, 重现性好, 准确度高, 减小了人为带来的误差与仪器误差。因此, 可用本方法测定样品含量。
摘要：目的 建立测定人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑含量的高效液相色谱法。方法 采用ODS柱 (250mm×4.6mm, 5μm) , 流动相:甲醇-水 (25:75) , 检测波长为277nm。结果 甲硝唑在0.8764～4.3820μg范围内呈良好线性关系, 相关系数为0.999999, 平均回收率为99.72% (n=6) , RSD为0.29%。结论 本方法简便、准确、重现性好。
人工牛黄 篇4
1 仪器与试药
Z R S-8 G智能溶出试验仪 (天津大学精密仪器厂) ;U V-2501PC分光光度计 (岛津公司) ;XS105DU电子天平 (梅特勒-托利多公司) :甲硝唑对照品 (中国药品生物制品检定所;批号:100191-200305) ;人工牛黄甲硝唑胶囊 (A厂:广东华卫药业有限公司, 批号:20100601;B厂:秦皇岛百慧制药厂, 批号:100701;C厂:吉林双药药业集团有限公司, 批号:20110306;D厂:陕西爱民药业股份有限公司, 批号:20100305) ;盐酸 (分析纯) , 纯化水。
2 方法与结果
2.1 溶出介质的选择
甲硝唑在水中微溶, 故本法拟采用转速每分钟为75转, 分别以水, 0.01mol/L HCl和0.1mol/L HCl900mL为溶出介质, 于20min时取样5mL, 滤过, 取续滤液3mL置50mL量瓶中, 用溶出介质稀释至刻度, 摇匀, 在277nm处测定其吸光度。溶出结果分别见表1。
上述测定数据表明在溶出介质为水时甲硝唑的溶出量小, 仅有30%多;当介质为0.01mol/L盐酸溶液时其溶出量上升为80%以上;当介质为0.1mol/L的盐酸溶液时甲硝唑的溶出量达到了90%以上。故选择0.1mol/L的盐酸溶液为溶出介质。
2.2 转速的选择
采用0.1mol/L的盐酸溶液900m L为溶出介质, 采用了50转, 75转和100转的转速, 于20min时分别取样5m L, 滤过, 取续滤液3m L, 置50m L量瓶中, 用溶出介质稀释至刻度, 摇匀, 在277nm处测定其吸光度。结果见表2。
由表2可知, 在75r/min时甲硝唑的溶出量在20min时趋于平衡, 所以选择75r/min为其溶出转速。
2.3 取样时间及限度
由本品溶出曲线显示20min时, 甲硝唑的溶出量达到了95%以上, 按照药典要求, 综合考虑后确定取样时间为20min, 限度为标示量的75%。
2.4 溶出曲线
取本品, 照溶出度测定法 (《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第一法) , 以0.1mol/L的盐酸溶液900mL为溶出介质, 转速为75r min, 依法操作, 经5、10、15、20、30、45min时溶液5mL, 滤过, 并补充溶出介质5mL。取续滤液3mL置50mL量瓶中, 用溶出介质稀释至刻度, 摇匀, 在277nm处测定其吸光度。计算各时间点的校正累积溶出量, 绘制每粒的溶出曲线, 结果见图1。
2.5 方法验证
2.5.1 线性关系考察
精密称取甲硝唑对照品适量, 加0.1mol/L的盐酸溶液溶解并稀释为对照品贮备溶液 (100μg/mL) ;精密量取该储备液1mL, 2mL, 3mL, 4mL, 5mL分别置于25mL量瓶中, 并用0.1mol/L的盐酸溶液稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液, 在277nm处测定其吸光度。以甲硝唑浓度 (C) 为横坐标, 吸光度 (A) 为纵坐标进行线性回归, 其回归方程为:c=26.33A-0.0947, 相关系数r=0.9999, 表明甲硝唑在4.228～21.14μg/m L浓度范围内线性关系良好。
2.5.2 精密度试验
分别精密量取上述对照品储备液溶液3mL, 置25mL量瓶中, 用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度, 摇匀, 在277nm处测定吸光度, 平行试验6次, 由测定结果计算其RSD值为0.1%, 表明具有良好的精密度。
2.5.3 回收率试验
精密称取甲硝唑对照品适量, 置25mL量瓶中, 用溶出介质溶解并稀释至刻度, 作为对照品储备液 (2mg/mL) 。根据处方, 用空白辅料配制得到阴性空白, 称取适量的阴性空白, 置25mL量瓶中, 分别加入对照品贮备溶液1, 2, 3mL, 加溶出介质适量使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液3mL, 置50mL容量瓶中, 用溶出介质稀释至刻度, 摇匀, 在277nm处分别测定其吸光度, 每个浓度平行试验三份。结果平均回收率为99.8%, RSD为0.5% (n=9) , 结果见表3。
2.5.4 稳定性试验
取回收率试验项下的1份供试品溶液, 分别于0、2、4、6和24h, 在277nm的波长处测定其吸光度。结果相对标准偏差为0.8%, 表明供试品溶液在24h内稳定。
2.6.4 批次样品的溶出度检查
分别取4批次的样品, 照溶出度测定法 (第一法) , 以0.1mol/L盐酸溶液900mL为溶出介质, 转速为75r/min, 依法操作, 经20min时, 取溶液适量, 滤过, 取续滤液3mL置50mL量瓶中, 用溶出介质稀释至刻度, 摇匀, 在277nm处测定其吸光度, 按甲硝唑 (C6H9N3O3) 的吸收系数 (E) 为377计算每粒的溶出量。结果见表4。
3 讨论
3.1 上述试验表明, 不同厂家生产的人工牛黄甲硝唑胶囊校正累积溶出率存在一定的差异, 可见, 不同厂间制剂工艺存在较大差异。
3.2 溶出度是评价药物质量的一个内在指标。作为制剂质量控制的一种手段, 其目的是使不同厂家生产的同一品种能达到一定程度上的生物等效。本文建立的溶出度测定方法, 经方法学验证, 此方法可行, 回收率良好, 对评价该药物制剂的安全和有效性提供了有效的手段。
摘要：目的 建立人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑的最佳溶出度测定方法。方法 采用《中国药典》2010年版二部溶出度测定法第一法 (转篮法) , 以0.1 mol/L盐酸溶液900mL为溶出介质, 转速为75r/min, 取样时间为20min, 采用紫外分光光度法测定溶出量。结果 甲硝唑在4.22821.14μg/mL范围内线性关系良好 (r=0.9999) ;平均回收率为99.8%, RSD为0.5% (n=9) 。结论 本方法符合溶出度方法的建立原则, 可控制人工牛黄甲硝唑胶囊的内在质量。
关键词：人工牛黄甲硝唑胶囊,溶出度
参考文献
[1]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:中国医药科技出版社, 2010.
[2]国家食品药品监督管理局国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准 (第三册) [S].2003.
[3]欧阳露, 肖雨清, 姜美蓉.紫外分光光度法测定复方甲硝唑胶囊中甲硝唑的含量[J].安徽医药, 2005, 9 (5) :353-354.