胎盘组织液（精选7篇）
胎盘组织液 篇1
腹膜粘连是指腹部手术后壁层腹膜与脏层腹膜以及脏层腹膜之间的异常粘连,腹膜粘连为腹部外科手术后的常见并发症,发生率很高[1]。腹膜是人体内最大的浆膜,分为壁、脏两层,壁层腹膜衬于腹壁、盆腔壁和膈的内面,脏层腹膜覆盖在腹腔脏器的表面,腹膜薄而光滑,呈半透明状,由单层间皮细胞、基底膜层和结缔组织层构成,腹膜受到诸如感染、异物刺激、手术等损伤后,由于其自然的修复作用,几乎都可发生局部粘连[2]。腹膜粘连可导致多种严重的并发症,如肠梗阻、慢性盆腔炎、不孕症等[3],实施微创手术、药物治疗、使用防粘连隔离材料等均可减少或预防粘连的发生。目前腹膜粘连的发生机制还没有完全阐明,临床预防也存在不足,所以对术后腹膜粘连的研究一直是腹部外科的热点。
我国传统中医将人胎盘称为人胞,或胞衣,认为它有药用价值,《本草纲目》记载:其性温无毒,具有温肾、益经、补气、养血等功效。因此,由胎盘提炼出的胎盘组织液、胎盘素等具有很高的药用价值。人胎盘组织液是由健康母体的胎盘经检验检疫后,通过特殊的分离提取手段,将胎盘中的活性有效成分提取后制成的具有医用、保健、美容等功效的注射用制剂,在临床上已用于气管炎等慢性病和妇科、皮肤科一些慢性炎症,在手术后粘连及瘢痕挛缩的治疗上也有应用。本实验采用大鼠腹膜缺损/盲肠刮伤模型,观察人胎盘组织液的抗腹膜粘连作用。
1 材料与方法
1.1 实验材料及仪器
人胎盘组织液,邯郸康业制药有限公司产品,规格:2 ml/支,批号:20090502,保存条件:2～8℃避光保存。TGF-β1一抗(Santa Cruz公司产品,北京中杉金桥生物技术有限公司分装)。CX21型光学显微镜,日本Olympus光学公司。RM2135型组织切片机,德国LEICA公司。DM2500病理工作站,德国LEICA公司。
1.2 实验动物及饲养条件
SD大鼠60只,7～8周龄,雌雄各半,体重240～280 g,来源:河北省实验动物中心。饲养条件:中央空调调控温度和湿度,大鼠饲养笼内饲养,每笼5只,温度19～26℃,相对湿度40%～70%,控制光照明12 h,暗12 h,动物自由摄食及饮水。
1.3 实验方法
1.3.1 制备大鼠腹膜缺损/盲肠刮伤模型[4]
大鼠禁食12 h,手术当天禁水,腹腔注射10%水合氯醛,300 mg/kg麻醉。仰卧位固定麻醉大鼠,碘伏消毒下腹部皮肤,下腹部正中纵向切口4 cm,逐层进腹,找到蚓突后提出切口外,用手术刀片轻刮距盲端3.0 cm以内的蚓突前侧浆膜60次,使整个浆膜面充血并出现均匀的点状出血,刮伤盲肠面积约2 cm×1 cm,回纳盲肠,锐性切除与损伤的盲肠相对的壁层腹膜和大部分肌层,造成2 cm×1 cm的腹壁缺损,将刮伤的盲肠与腹壁缺损处相对放置,使其相互接触,用1号丝线间断缝合两层关腹。
1.3.2 分组及给药
实验分为三组:假手术组、模型组、人胎盘组织液组。模型组:只制备腹膜缺损/盲肠刮伤模型,不用药;假手术组:除不损伤盲肠和腹壁外,其他手术操作同模型组;人胎盘组织液组:将人胎盘组织液稀释100倍,术后每日肌内注射,用量1 ml/100 g体重。
1.3.3 Belluco C及Nari五级分类评分
术后7 d和14 d,腹腔注射10%水合氯醛300 mg/kg麻醉,倒U形切口掀起腹壁,观察腹膜粘连情况,由一人采用盲法按Belluco C及Nari五级分类评分。评分标准见表1。
1.3.4 制备病理组织切片
受损肠壁和粘连组织经10%中性福尔马林固定后,各级浓度的酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋。切片厚度为6μm,进行常规HE染色、Masson染色。
1.3.5 HE染色
石蜡切片经二甲苯脱蜡,无水乙醇洗去二甲苯,梯度酒精和蒸馏水水化组织切片,苏木精染色1～2 min,自来水洗1 min,1%盐酸酒精分化,自来水洗1 min;1%氨水返蓝数秒、蒸溜水洗1 min,入伊红染液2 min;常规脱水、透明,中性树胶封片。
1.3.6 Masson染色
石蜡切片脱蜡至水,依次用自来水和蒸馏水洗,用苏木精染液染核2 min,充分水洗,如过染可盐酸酒精分化,蒸馏水洗,用Masson丽春红酸性复红液5 min,以2%冰醋酸水溶液浸洗30 s,1%磷钼酸水溶液分化5 min,不经水洗,直接用苯胺蓝染5 min,以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻,95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。
1.3.7 TGF-β1免疫组化检测
用多聚赖氨酸处理玻片,连续石蜡切片(4μm),60℃烘干1 h,常规脱蜡、水化组织切片,将切片置于0.01 mol/L pH 6.0的柠檬酸缓冲液中微波98℃抗原修复15 min,自然冷却至室温;用蒸馏水洗涤,PBS洗涤;3%H2O2处理10 min以抑制内源性过氧化物酶,PBS洗涤;滴加1∶150稀释的兔TGF-β1多抗,置湿盒内4℃过夜;PBS洗涤,滴加二抗(山羊抗兔IgG抗体-HRT多聚体),37℃孵育30 min,PBS洗涤;DAB显色5 min左右;水洗后,常规脱水、透明,中性树胶封片。在光镜下观察,组织细胞显示棕黄色者为阳性。
2 结果
2.1 Belluco C及Nari五级分类评分结果
术后7 d,假手术组发现1例轻度粘连;模型组出现盲肠与周围组织多处粘连,甚至与腹壁粘连;人胎盘组织液组可减轻粘连,评分较模型组明显降低。术后14 d,假手术组中有1例出现轻度粘连,模型组的粘连情况比术后7 d有所减轻,人胎盘组织液组的粘连情况比术后7 d稍有降低。各组粘连评分结果见表2,各组腹腔外观见图1。
与模型组比较,*P<0.05
Compared with model group,*P<0.05
2.2 HE染色
术后7 d假手术组未见组织损伤及炎症反应;模型组可见局部肠壁近浆膜侧肌纤维部分消失,被肉芽组织取代,肉芽组织内胶原纤维少,炎症细胞、嗜酸粒细胞浸润明显,肠管间或肠壁与腹壁组织粘连,少数可见浆膜面出血;人胎盘组织液组肉芽组织量少,肉芽组织疏松,肠管间有少量粘连。术后14 d假手术组未见组织损伤及炎症反应;模型组肠壁大量肉芽组织,肉芽组织内各种炎症细胞减少,小血管减少,肠管间及肠管与腹壁粘连明显;人胎盘组织液组与同期模型组相比,肉芽组织少且疏松,血管丰富,肌纤维破坏少,肉芽组织形成的粘连带减少。见图2。
2.3 Masson染色
Masson染色后胶原纤维、黏液、软骨呈蓝色,胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核呈黑蓝色。假手术组无胶原纤维;模型组肉芽内胶原纤维丰富,人胎盘组织液组与同期模型组相比,胶原纤维少。见图3。
2.4 TGF-β1免疫组化检测
术后7 d各组标本可见盲肠壁平滑肌细胞TGF-β1呈非特异性阳性表达。在平滑肌细胞之外假手术组仅见个别阳性细胞;模型组损伤处盲肠浆膜外增生的纤维组织TGF-β1呈强阳性表达,主要表达在成纤维细胞、血管内皮细胞、炎症细胞的胞浆;人胎盘组织液组TGF-β1在部分成纤维细胞、血管内皮细胞、炎症细胞中阳性表达,与模型组相比阳性表达明显降低。见图4。
3 讨论
由于腹膜粘连在手术后的高发生率,并且由此产生的一系列并发症,使得对腹膜粘连的研究一直成为热点。本实验结果表明,与模型组相比,人胎盘组织液可明显抑制成纤维细胞的增生和胶原蛋白的形成,减轻大鼠腹膜肠粘连的程度和范围。术后7 d观察结果表明,在对大鼠腹膜缺损/盲肠刮伤模型使用人胎盘组织液后,腹膜粘连的程度明显降低,HE染色结果可见,使用人胎盘组织液后与同期模型组相比,肉芽组织少且疏松,血管丰富,肌纤维破坏少,肉芽组织形成的粘连带减少。
目前一般认为在正常生理情况下,腹膜间皮细胞纤维蛋白溶酶原和纤维蛋白溶酶原抑制物的释放存在着平衡关系,在腹膜发生机械性损伤、局部缺血或炎症时,纤维蛋白溶酶原的激活物减少,纤维蛋白溶酶原抑制物增加[5],纤维蛋白溶解作用受到抑制,纤维蛋白沉积,粘连形成[6]。在分子水平,研究者发现腹膜损伤早期,有大量纤维蛋白、纤维连接蛋白渗出,并且有大量炎症细胞出现[7],由于组织低氧、局部异物刺激等激活炎症细胞,释放大量组织因子和细胞因子,其中转化生长因子TGF-β1起关键作用,是产生腹膜粘连的中心。TGF-β1能够促进成纤维细胞增殖,抑制金属蛋白酶的活性,刺激胶原等胞外基质的合成和沉淀,趋化成纤维细胞和巨噬细胞到损伤部位,导致创伤部位纤维化,促进粘连的形成[8,9]。TGF-β1分为3个亚型,TGF-β1在组织损伤中作用最强,本研究通过实验检测人胎盘组织提取液对TGF-β1表达的影响,免疫组化结果表明,与模型组相比在注射人胎盘组织液后,TGF-β1阳性表达明显降低。已有研究表明,人胎盘组织提取液具有营养和生长因子作用,能促进细胞增殖和新陈代谢[10,11],人胎盘组织液降低TGF-β1的表达,抑制成纤维细胞的增生和胶原蛋白的形成,可能与其富含多种生物活性因子的协同作用有关,其具体作用方式还有待于进一步探讨。
胎盘组织液 篇2
1 临床资料
1.1 诊断标准
诊断标准参照《中药新药临床研究指导原则》[2]中慢性盆腔炎诊断标准, 中医辨证属气滞血瘀型者。
1.2 一般资料
共观察60例, 随机分为2组, 治疗组30例, 年龄22~45岁, 平均32.12岁, 病程6~60个月, 平均20.25个月;对照组30例, 年龄23~46岁, 平均33.80岁, 病程6~60个月, 平均19.80个月。2组患者一般资料经统计学处理, 差异无显著性意义 (P<0.05) , 具有可比性。
2 治疗方法
2.1 治疗组
复方当归注射液合胎盘组织液肌肉注射治疗。用法:复方当归注射液 (江西桔都药业有限公司生产, 2m L/支, 批号:20061112) 、胎盘组织液 (江西捷众生物有限公司生产, 2m L/支, 批号:20070112) 各2m L, 肌肉注射, 每日1次。
2.2 对照组
复方丹参片 (重庆天圣制药有限公司生产, 批号:070102) , 每次3片, 每日3次, 口服。
2组均连用14d1个疗程, 经期停用。治疗期间停用一切与本病有关的治疗药物及疗法, 随访2个月。
3 疗效标准与治疗结果
3.1 疗效标准
参照《中药新药临床研究指导原则》[2]中慢性盆腔炎的疗效判定标准。痊愈:治疗后下腹疼痛及腰骶胀痛等症状消失, 妇科检查及理化检查结果正常, 停药后1个月内未复发。显效:治疗后下腹疼痛及腰骶胀痛等症状消失或明显减轻, 妇科检查及理化检查明显改善;有效:治疗后下腹疼痛及腰骶胀痛等症状减轻, 妇科检查及理化检查有所改善;无效:治疗后下腹疼痛及腰骶胀痛等症状无减轻或有加重, 妇科检查及理化检查较治疗前无改善或有加重。
注:与对照组比较, (1) P<0.05
3.2 2组临床疗效比较 (表1)
总有效率治疗组为93.33%, 对照组为66.67%, 2组比较, 差异有显著性意义 (P<0.05) , 说明复方当归注射液合胎盘组织液治疗慢性盆腔炎总疗效优于复方丹参片。
4 讨论
盆腔炎是西医病名, 是育龄妇女常见疾病。中医对本病临床特征的描写散见于“热入血室”、“腹痛”、“带下病”、“产后发热”、“癥瘕”、“不孕”等病中[3]。中医学认为, 慢性盆腔炎的主要发病机理为湿瘀之邪蕴于子宫、胞络, 致冲任带脉功能失调而致。或素有宿疾, 淤血内阻, 或因情志所伤, 气机不利, 气滞血瘀, 胞脉血行不畅而致病[3]。
针对病因病机, 治疗上采用复方当归注射液合胎盘组织液肌肉注射治疗, 活血化瘀, 通络止痛, 增强机体抵抗力。复方当归注射液为当归、川芎、红花提取的中药制剂, 方中当归为补血活血、调经止痛之要药, 有耐缺氧、降压、抗炎镇痛、镇静、抗菌等作用, 可增强红细胞输氧能力, 降低血小板集聚, 抑制血栓形成, 改变血液粘滞凝聚状态, 促进机体免疫功能的作用;能明显加强动物腹腔巨噬细胞的吞噬能力, 提高网状内皮系统对染料的廓清速度;对在体子宫, 注射当归挥发油及非挥发油均出现兴奋作用。川芎活血通经, 散风止痛, 可抑制血栓形成, 对动物中枢神经有镇静作用。红花活血通经, 祛瘀止痛, 醇提取物可缩小狗实验性心肌梗塞范围。三药合用, 活血祛瘀之力更强。胎盘又名紫河车, 补气养血, 温肾益精。含蛋白质和肽类, 类甾醇激素、磷脂、多糖等, 能增强机体抵抗力, 注射胎盘球蛋白有抗感染作用。两针合用, 活血化瘀, 通络止痛, 增强机体抵抗力。其功效恰针对本病病机, 达到治病求本的目的, 因从根本治疗, 故取得满意疗效。复方当归注射液及胎盘组织液价廉易得, 应用简便, 疗效好, 值得推广应用, 特别适宜基层应用。
摘要：目的观察复方当归注射液合胎盘组织液治疗慢性盆腔炎 (气滞血瘀型) 的临床疗效。方法将60例慢性盆腔炎患者随机分成2组, 治疗组30例以复方当归注射液合胎盘组织液肌肉注射治疗, 对照组30例以复方丹参片口服治疗, 观察2组的临床疗效。结果总有效率治疗组为93.33%, 对照组为66.67%, 2组比较, 差异有显著性意义 (P>0.05) 。结论复方当归注射液合胎盘组织液治疗慢性盆腔炎总疗效优于复方丹参片。
关键词：盆腔炎,气滞血瘀,复方当归注射液合胎盘组织液,慢性病
参考文献
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[2]中药新药临床研究指导原则[M].北京:中国医药科技出版社, 2002:314.
胎盘组织液 篇3
子痫前期是妊娠期特有的疾病,多发生于妊娠20周之后,多数病例在妊娠期出现一过性高血压、蛋白尿等症状;严重时出现抽搐、昏迷、甚至心功能衰竭,是孕产妇妊娠期死亡的主要原因[1]。子痫前期作为一种产科常见的并发症,但关于其发生机制并未明确。目前多数研究表明,滋养细胞分子水平改变导致其细胞功能障碍,继而滋养细胞浸润性下降与螺旋动脉重铸不良,最后导致子痫前期病理变化的发生。然而滋养细胞功能障碍的分子机制尚不明确。近年来人们发现微小RNA在细胞生物学过程中起重要的调控作用,这些mi RNA参与了细胞的增殖、凋亡、细胞分化等重要的生物过程,并且它们能抑制蛋白质的合成,导致靶标m RNA的降解,或者其他形式的调节机制来抑制靶基因的表达。因此,mi RNA在分子水平可能有着极其重要的作用。mi RNA-18b是一段20-24 nt的非编码单链RNA分子,即自身不翻译转录为蛋白。通过参与调控基因表达水平,影响m RNAs稳定性和翻译发挥作用。目前已在许多组织中发现对细胞功能有着重要的调控作用。为深入研究mi RNA与子痫前期的相关性,本研究采用实时荧光定量技术比较了正常妊娠与重度子痫前期患者胎盘组织中mi R-18b的表达,探讨mi RNA在子痫前期病理生理过程中的作用及其临床意义。
1材料与方法
1.1资料与方法
1.1.1临床资料
选择2011年1月—2011年7月在我科分娩的孕妇。采取随机原则,随机选择20例子痫前期患者与20例正常孕妇。病人纳入标准:(1)年龄20—35岁,妊娠大于28周的孕妇;(2)子痫前期患者的诊断标准依照第七版妇产科;(3)无其他系统性疾病。排除标准:(1)过期妊娠(妊娠≥42周);(2)妊娠次数≥3次,多胎妊娠(≥2);(3)有自身免疫性系统疾病的患者;(4)妊娠期糖尿病及糖尿病患者;(5)RH阴性血妊娠孕妇。以上所有孕妇均经剖宫产终止妊娠。两组患者年龄、孕周均无显著性差异(P>0.05),具体资料见表1。
孕周、年龄P>0.05
1.1.2实验器械
剪刀、有齿镊和爱丽丝钳(用前烤箱中180℃烘烤6 h);分光光度计一ND1000(Nano—drop,美国);定量PCR仪(Roche,瑞士);PCR仪(Bio—Rad,美国);凝胶成像系统(Alpha,美国)。
1.1.3实验步骤与实验方法
(1)收集胎盘:胎盘娩出后5 min内于胎盘母面(避开钙化及出血点,避开羊膜等胎儿成份)采集胎盘组织块,置液氮中速冻后-80℃保存。
(2)提取RNA:称取100 g胎盘组织,使用RNAiso Plus提取总的RNA,采用紫外分光光度法测定总RNA含量及纯度。
(3)引物设计:根据GeneBank数据库中的相关序列设计mi-18b的引物,以U6为内参照基因:人类mi-18b引物序列:
通用引物:TAAGGTGCATCTAGTGCAGTTAG
RT:GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTAT-TCGCACTGGATACGACctaact;
AS:CCATAAGGTGCATCTAGTGCAGT。
U6的引物Forward:CTCGCTTCGGCAGCACA;
Reverse:AACGCTTCACGAATTTGCGT。
(4)c DNA合成:取500 ng Total RNA,加入特异的茎环micro RNA反转录引物1μL,总体系10μL,反应条件:37℃15 min;85℃5 s。4℃保存。
(5)应用实时荧光定量PCR仪进行PCR反应:取2μL稀释10倍的反转录产物为模板,另取mi R-NA通用引物和特异反义引物各2μL进行PCR扩增,反应体系为20μL。PCR参数:(1)95℃20 s;(2)95℃10 s;(3)60℃20 s;(4)70℃10 s,进行荧光检测。
1.1.4统计学分析
数据经SPSS软件13.0处理,用t检验对两组数据进行比较,P<0.05为差异具有统计学意义。
2实时荧光定量PCR结果
以U6为内参照基因,对两组中的mi RNA-18b进行标化,利用公式2-△△Ct(△Ct=mi R-18b Ct-U6 Ct,△△Ct=实验组△Ct-对照组△Ct),计算子痫前期组与正常孕妇组的表达量,结果和正常组比较,子痫前期胎盘组织中的mi R—18b的表达量下降(P<0.05),具体如表2和图1所示。)
3讨论
子痫前期作为一种产科常见的并发症,其病因至今仍不能圆满解释[2]。研究表明,滋养细胞分化异常导致螺旋动脉重铸失败和胎盘浅着床、血管内皮细胞损伤、过度的炎性反应是子痫前期重要的特征性病理生理变化。其中滋养细胞功能障碍导致的螺旋动脉重铸失败和胎盘浅着床与子痫前期发病关系最为密切[3,4,5]。滋养细胞分化异常导致其功能发生障碍,进而引起其浸润表浅与螺旋动脉重铸不良,使得子宫胎盘血流灌注不足和缺血、缺氧,进一步使子痫前期患者的病理变化从子宫-胎盘局部发展到全身各系统[6,7,8]。而细胞内部分子水平改变,是滋养细胞分化、增殖、凋亡及浸润改变的起始原因。但关于滋养细胞功能障碍的分子机制尚未阐明。
微小RNA是一类广泛存在于真核生物非编码RNA,在细胞生物学过程中起重要的调控作用。mi R—152的功能验证发现[9],在子痫前期胎盘中病理性高表达的mi RNA—152分子可以降调节人类白细胞抗原—G(HLA—G)蛋白的表达,而参与子痫前期的病理过程。由此可见,mi RNA可能通过对其靶基因的调节从而影响了滋养细胞的细胞功能而参与了子痫前期的发生发展过程。
mi—RNA18b即本实验中的微小RNA,是一段20—24 nt的非编码单链RNA分子。目前已研究发现其在胃癌组织中处于高表达,并且抑制其内源性mi—RNA18b可以抑制其细胞增生,相反植入功能性mi—RNA18b于被抑制的心肌细胞可使其从新增生肥大[10,11]。在乳腺癌组织中,低表达的mi—RNA18b可以提高HER2-negative乳腺癌的存活,并且和雌激素受体(ESR—1)具有相关性[12]。对于雌激素受体近年研究表明[24],雌激素可能与孕激素协同作用,促进滋养细胞水解酶释放,使胚泡的透明带溶解而有助于着床;也可能影响子宫上皮细胞或使上皮细胞自体溶解,有利于滋养细胞侵入子宫内膜。ESR—1作为雌激素功能实现的介导中枢,可能通过与雌激素的相互介导作用而参与了子痫前期的发生。实验中mi—RNA18b在子痫前期患者胎盘组织中表达量下降,可能导致了滋养细胞增生下降;又因和ESR—1具有一定的相关性,因此也可能通过ESR—1介导雌激素发生作用引起滋养细胞功能发生障碍,使得浸润性与螺旋动脉重铸发生改变,进而引起子痫前期的病理变化。后续实验将深入验证mi—RNA18b与ESR—1的相关性。
总之,mi RNA—18b在子痫前期患者胎盘组织的表达量下降,可能参与子痫前期的发生有着密切的关系。
摘要：为探讨子痫前期患者胎盘组织中miRNA-18b的表达特点及其意义。采用实时定量PCR检测子痫前期患者与正常孕妇胎盘组织中mi-18b的表达量。结果子痫前期患者中miRNA-18b的表达量与正常孕妇相比,表达量下降。说明子痫前期患者的mi-18b表达量下降,可能参与了妊娠期高血压疾病的发生。
关键词：子痫前期,微小RNA,胎盘
参考文献
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胎盘组织液 篇4
1 资料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 材料来源 胎盘组织取自珠江医院妇产科2007年9月至2008年6月住院分娩的产妇,共20例,均获得患者知情同意。
1.1.2 分组 EOSP组:10例,重度子痫前期的诊断标准参考《妇产科学》第7版[4]:BP≥160/110 mmHg;尿蛋白≥2.0 g/24 h或(++);血清肌酐>106 μmol/L,血小板<100×109/L;血LDH升高,血清ALT或AST升高,持续性头痛或其他脑神经或视觉障碍,持续性上腹不适。孕周< 32周的重度子痫前期患者为EOSP组。 对照组:选择同期住院分娩的早产患者10例为对照组。要求研究对象月经规则,无慢性高血压、慢性肾炎、糖尿病等内科合并症,无不良烟酒嗜好等。EOSP组与对照组孕妇年龄、孕周及产次等比较差异均无统计学意义(P>0.05)。
1.2 研究方法
1.2.1 标本的处理 胎盘娩出后,立即在胎盘母体面中间带不同部位随机取2块组织,大小约2 mm×2 mm×2 mm,浸入2.5%的戊二醛溶液中固定,按常规制成电镜标本,每个组织块随机取5张超薄切片, Hitachi H-7500透射电镜观察。
1.2.2 生物体视学参数测定 每张切片在15000倍下随机拍摄互不重叠的照片5张(附标尺),将电镜照片输入计算机,用Image-Pro图像分析软件设计方网测试系统,方网的点间距为20个像素,用标尺对该网格进行标定,标定后方网的点间距为0.1709 μm。用该方网测试系统测试击中线粒体、内质网、微绒毛及包容空间的测试点数,计数测试线与上述结构的交点数以及测试区域内微绒毛的个数。参照文献公式 [4]计算体视学参数。
1.3 数据处理及统计学分析 采用SPSS 13.0软件进行统计处理,结果用undefined表示,采用t检验及χ2检验,以α= 0.05 为检验水准。
2 结 果
2.1 胎盘组织超微结构的改变
2.1.1 电镜下观察结果
对照组胎盘合体滋养细胞表面有大量的微绒毛,细而长,整齐排列,细胞内含有丰富的内质网和线粒体,胞质中有少量的脂质颗粒,见图1(见插页3-1)。EOSP组胎盘合体滋养细胞表面微绒毛稀少,末端膨大,部分微绒毛缺失,线粒体肿胀,内质网明显扩张,部分融合呈囊状,胞质空泡状变性,脂质颗粒沉积增多,见图2(见插页3-1)。
2.1.2 胎盘合体滋养细胞微绒毛体视学参数
EOSP组胎盘合体滋养细胞微绒毛的体积密度(Vv)、表面积密度(Sv)、数密度(Nv)均小于对照组,两组比较差异有统计学意义(P< 0.01),见表1。
2.1.3 胎盘合体滋养细胞线粒体的体视学参数比较
EOSP组与对照组胎盘合体滋养细胞线粒体的Vv、Sv均大于对照组,差异有统计学意义( P<0.01);两组线粒体的Nv比较,差异无统计学意义( P>0.05),见表2。
2.1.4 胎盘合体滋养细胞内质网体视学参数比较
EOSP组与对照组胎盘合体滋养细胞内质网的Vv、Sv均大于对照组,差异有统计学意义( P< 0.01) ,内质网的Nv比较,差异无统计学意义(P> 0.05),见表3。
2.2 围生儿结局
EOSP组胎儿生长受限(FGR)3例,新生儿窒息4例,新生儿死亡2例;对照组FGR 0例,新生儿窒息1例,新生儿死亡2例。由于本实验取材例数相对较少, EOSP组与对照组之间比较FGR、新生儿窒息,新生儿死亡等方面比较,差异并无统计学意义(P>0. 05)。
3 讨 论
3.1 EOSP胎盘结构的变化特点及临床意义
胎盘绒毛合体滋养细胞是胎盘内进行物质交换的主要场所,滋养细胞功能受损将会影响胎儿的健康[5]。合体滋养细胞微绒毛是细胞的特化结构,构成了绒毛的刷状缘,增加了合体滋养细胞与母血接触的表面积,更利于胎儿营养物质的摄入。本实验镜下观察发现:EOSP组胎盘合体滋养细胞表面微绒毛稀少,绒毛的Vv、Sv、Nv均小于相应对照组。这些病变说明EOSP时存在对细胞具有损伤性的因素,表现为微绒毛的缺失,同时胎盘合体滋养细胞为适应胎儿生长发育所必须的物质交换,代偿性加大剩余微绒毛的表面积和体积,故出现微绒毛末端膨大现象 [6],这些损伤的存在减低了胎盘与母血之间营养物质交换。线粒体是组织细胞呼吸代谢和产生能源的重要结构,如果线粒体受到损伤,细胞赖以维持正常功能所需ATP的合成将会减少,由此引起的质膜离子泵功能障碍,致使细胞外液流入胞质内并引起细胞水肿甚至坏死。在实验中我们发现,EOSP组线粒体均出现肿胀、扩张的现象,其形态由正常的梭形变为椭圆形及球形,线粒体嵴显示不清。其体视学参数Nv相对于对照组无明显变化,但Sv、Vv却显著大于对照组,这是EOSP胎盘功能受损时,合体滋养细胞超微结构改变的病理现象 [7,8]。内质网是细胞质中重要的膜性结构,它为多种酶提供了大面积的结合位点。研究中发现EOSP组内质网均出现囊状扩张,Vv、Sv显著大于对照组,这样的囊状变化使核糖体自内质网上脱落,蛋白质的合成与转运,脂类代谢、糖类代谢障碍,从而造成整个胎盘的损伤。同时实验中观察到脂质颗粒沉积增多,这也是细胞损伤的重要迹象。
3.2 胎盘组织结构的改变与重度子痫前期围生儿结局的关系
母体是胎儿直接的外在环境,胎儿所需的养分是由母体通过胎盘获得的。合体滋养细胞生理功能受损,必然影响到胎盘的气体交换,营养物质输送及内分泌功能,从而影响胎儿的正常生长发育[9]。本实验观察到EOSP组有较多FGR的发生,这可能是在EOSP环境下,胎盘缺血、缺氧导致胎儿氧供不足造成。新生儿窒息的发生在EOSP组较多,这可能是由于在病程早期,合体滋养细胞等尚有部分代偿功能,随着病情继续发展,更多数量的合体滋养细胞被损伤或在母体处于应激状态及母胎循环经受宫缩的考验时,胎盘功能出现失代偿,成为围生儿窒息率较高的原因之一。
以上结果显示,胎盘病理改变程度与围生儿结局状况基本一致。实验中EOSP组与其对照组之间新生儿死亡均为2例,并无差别,因此,本研究尚需扩大样本规模,并对EOSP进行系统、追踪研究,更深入阐明胎盘功能受损与新生儿不良结局之间的内在联系与变化规律,最终为重度子痫前期发病机制的研究提供前期的实验数据。
摘要：目的:从三维水平定量揭示早发型重度子痫前期(EOSP)患者胎盘组织超微结构的变化特点,探讨EOSP胎盘组织结构的定量变化与围生儿不良预后的关系。方法:选择10例EOSP患者为EOSP组,另选10例血压正常的早产患者作为阴性对照组,采用计量方法测定两组胎盘组织超微结构的体视学参数体积密度(Vv)、表面积密度(Sv)、数密度(Nv),分析各参数的变化与围生儿不良结局的关系。结果:①EOSP组胎盘合体滋养细胞表面微绒毛稀少,末端膨大,线粒体肿胀,内质网扩张,部分融合呈囊状,胞质大量空泡状变性,脂质颗粒增多。②EOSP组胎盘合体滋养细胞线粒体和内质网的Vv、Sv均大于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),Nv差异无统计学意义(P>0.05)。③EOSP组胎盘合体滋养细胞微绒毛的Sv、Vv、Nv均小于其相应对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:EOSP环境下,胎盘组织超微结构损伤,可能影响胎盘的运输和合成功能,可能参与胎儿的损伤。
关键词：早发型,子痫前期,胎盘超微结构,体视学
参考文献
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胎盘组织液 篇5
牦牛(Bos grunniens)是在高原特定生态环境下,经过长期的自然选择而形成的特殊牛种,大部分生活在海拔3 000～5 000 m的高寒地区,具有生存能力强、体格强壮、高原的适应性强、抗寒、抗疾病能力强等生物学特征。本实验通过对小白鼠的肝、肺、心肌和骨骼肌中T-SOD活性的测定,研究牦牛胎盘对小鼠组织中T-SOD活性的影响。
1 材料和方法
1.1 牦牛胎盘粉的制备
以牦牛新鲜胎盘为原料,加工调制胎盘粉。生产工艺流程:取材→清洗→消毒→干燥箱(60℃24 h)→粉碎、研磨→过80目筛→米黄色粉末,冰箱冷藏备用。
1.2 试验动物分组
将100只小白鼠(由青海省实验动物中心提供)按收集到胎盘的海拔分为高海拔组、中海拔组、低海拔组和对照组,分别每天给予浓度为400 mg/kg的牦牛胎盘,对照组每日灌生理盐水0.2 m L,各组连续灌胃28 d。
1.3 样品采集
饲养28 d后脱颈椎处死小白鼠,分别采取肝、肺、心肌和骨骼肌等组织,低温保存备用。
1.4 仪器和试剂
UV-1601紫外可见分光光度计,电子天平,BECKMAN J2-21高速离心机,恒温水浴箱等,SOD试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号:20080818);蛋白定量测试盒(南京建成生物工程研究所,批号:20080818)。
1.5 测定方法
组织解冻后滤纸吸去表面残血,精确称取各组织,剪碎,加入少量石英砂和冷生理盐水制成1%的组织匀浆,匀浆在4℃下以10 000 r/min离心20 min,取上清液测定组织T-SOD活性。
1.6 数据处理
U/mg
注:**与对照组相比差异极显著(P<0.01),*与对照组相比差异显著(P<0.05)。
采用Excel进行数据分析,结果用(X±S)表示,组间比较采用t检验。
2 结果
对小鼠分别灌服不同海拔的牦牛胎盘和生理盐水,于28 d后处死,分别取肝、肺、心肌、骨骼肌、脾脏和肾脏,测定各组织中T-SOD活性,牦牛胎盘对小鼠组织中T-SOD活性的影响见表。
3 讨论
胎盘除含有免疫球蛋白(Ig)、活性多肽、细胞因子、生长因子外,还含有多种氨基酸、磷脂、多糖和多种矿物质等物质[4],其中的胎盘免疫调节因子能够使小鼠体内的SOD活性明显升高具有抗衰老的作用[5]。
SOD对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用,此酶能清除超氧阴离子自由基保护细胞免受损伤[6]。从本次测定结果看出,牦牛胎盘能够提高肝、肺、心肌、骨骼肌和肾脏中T-SOD活性,从而提高机体抗氧化的能力,这与陈水亲和刘少娟[5,7]的实验结论相同,既牦牛胎盘和人、羊的胎盘一样,具有抗氧化的作用。
摘要：目的:探讨牦牛胎盘对小鼠组织中T-SOD活性的影响。方法:根据采集到胎盘的海拔高度将100只小白鼠随机分为高海拔组、中海拔组、低海拔组和对照组,连续28d分别灌服不同海拔的牦牛胎盘和生理盐水,然后处死小白鼠快速采取肝、肺、心肌、骨骼肌、脾脏和肾脏,测定各组织内T-SOD的活性。结果:高海拔肺脏,高、中海拔组骨骼肌中T-SOD活性显著高于对照组,差异极显著(P<0.01);各海拔组心肌和肾脏,高、中海拔组肝脏中T-SOD活性高于对照组,差异显著(P<0.05)。结论:牦牛胎盘能够提高小鼠肺、骨骼肌、心肌、肾脏和肝脏中T-SOD的活性。
关键词：牦牛胎盘,T-SOD,小鼠
参考文献
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胎盘组织液 篇6
1 材料与方法
1.1 材料
选择2012年01月至2013年01月在我院足月住院分娩的轻度子痫前期和重度子痫前期患者各15例, 另选取足月正常分娩患者15例作为对照组。所有研究对象均为单胎妊娠, 既往均无心、肝、肾疾病及高血压病史, 无其他产科合并症及并发症。
产次均为单胎初产, 因此:各组孕妇在产次、年龄、分娩孕周均无统计学差异 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 方法
①血清标本采集:分别抽取各组孕妇入院时、治疗前的外周静脉血2m L, 待自凝后取血清经4℃低温离心后将其上清液置-80℃冰箱冻存待测。采用ELISA法检测各组血清中的TSP-1表达。②胎盘组织采集:终止妊娠时留取患者胎盘组织, 采用免疫组化SP法检测各组胎盘组织中TSP-1的表达:每例组织切片随机观察高倍视野下1000个细胞阳性染色强度并计数阳性细胞数。阴性 (-) :细胞不着色和/或阳性细胞率<25%;弱阳性 (+) :阳性细胞率25%~50%;阳性 (++) :阳性细胞率50%~75%;强阳性 (+++) :阳性细胞率>75%。
1.3 统计学处理
应用SPSS13.0软件进行分析, 计数资料采用均数±标准差 (±s) 表示, t检验和χ2检验, P<0.05为差异有显著性, 有统计学意义。
2 结果
见表2、表3。
采用t检验:①轻度PE组与重度PE组比较P>0.05, 无统计学意义;②轻度PE组与重度PE组分别与足月正常对照组比较P<0.05, 有统计学差异
采用χ2检验①轻度PE组与重度PE组比较P>0.05, 无统计学意义;②轻度PE组与重度PE组分别与足月正常对照组比较P<0.05, 有统计学差异
3 讨论
血小板反应蛋白 (TSP) 是一种高分子多功能糖蛋白, 1971年由Baenaiger首先发现, 目前已知有5种不同类型的TSP蛋白, 其中TSP-1和TSP-2具有影响血管生成的功能区, 可抑制新生血管生成。血小板反应蛋白通过多种途径发挥抑制血管生成作用:研究证实血小板反应蛋白能抑制纤维生长因子 (fibroblast grwoth factor, FGF) 或者VEGF诱导的血管生长反应。作为血管抑制蛋白结合FGF, 并具有抑制它和黏附分子及FGF受体结合的作用, 干扰FGF诱导信号的传导[2]。它与血管内皮细胞受体CD36结合, 通过非受体蛋白酪氨酸fyn和有丝分裂原活化蛋白酶P38介导, 增加caspase-3 (与调亡相关的蛋白酶) 的活性, 诱导内皮细胞的凋亡[3]。末端的COOH与整合素相关蛋白相互作用, 通过内皮细胞抑制管腔形成, 并阻碍病灶黏合激酶整合素依赖的酪氨酸磷酸化, 从而抑制内皮细胞黏附, 阻碍其迁移, 最终抑制血管的生成[4]。Jeff等人发现[5,6], TSP的两种受体CD36和CD47能抑制NO-c GMP的信号传导, 使NO分泌降低, 导致前血栓形成, 内皮细胞的修复受到抑制, 而使血管形成受阻, 导致血压升高。另有研究发现[7], TSP在血管内平滑肌细胞通过调节氨基乙酸的代谢和细胞内蛋白质的糖基化诱导血糖水平升高。故增高TSP的水平表达在糖尿病和不正常的血管生成的机制中有重要联系。而近年的研究发现妊娠期高血压疾病患者存在胰岛素抵抗, 与妊娠期糖尿病关系密切。Bala Z等人[8,9]通过病例对照研究发现:子痫前期孕妇血清中TSP-2的浓度比正常孕妇高出1.7倍。新生血管在胎盘微循环障碍的情况下发生, 如胎盘大面积缺氧、缺血等, 而TSP在胎盘的表达水平升高, 引起内皮细胞的激活和损伤, 导致血管生成受到抑制, 进一步加剧胎盘的缺血、缺氧, 最终导致子痫前期临床症状的加重。
此次研究显示, 子痫前期患者胎盘组织及血清中TSP-1的表达明显高于正常妊娠对照组, 与国外Bala Z等人报道的一致。但轻度子痫前期与重度子痫前期患者之间无明显差异。故TSP-1升高与子痫前期的发病有密切关系, 但与子痫前期的严重程度关系不大, 无法用于鉴别疾病的严重程度。
参考文献
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胎盘组织液 篇7
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取该院收治的20名原发性羊水过多产妇设为观察组, 所有产妇均为剖宫产, 另选同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇设为对照组。所有产妇经产前检查显示各项体征正常, 无胎儿畸形、胎膜早破、糖尿病及其他妊娠并发症。观察组中最大年龄为37岁, 最小年龄为18岁, 平均年龄 (25.36±5.63) 岁, 最长孕周为42周, 最短为37周, 初产妇12例, 经产妇8例;对照组中最大年龄为36岁, 最小年龄为19岁, 平均年龄 (24.57±5.47) 岁, 最长孕周为42周, 最短为37周, 初产妇11例, 经产妇9例。
1.2 方法
在产妇分娩之后立即取胎膜和胎盘组织标本各2份, 采用无菌生理盐水将所取标本漂洗干净, 同时将血液尽可能的去除干净。将其中一份标本分离出羊膜、绒毛膜和胎盘组织后置于液氮, 另外一份则放置于浓度为4%的多聚甲醛中固定24 h后行石蜡包埋。水通道蛋白8 mRNA表达水平检测采用RT—PCR技术。具体检测步骤为:将预先准备的胎盘及胎膜组织取适量放置于液氮中研磨成粉末, 采用由美国Invitrogen公司生产的TRlzol试剂提取总RNA。采用由日本TaKaRa公司生产的RNA PCR试剂盒按照操作规范提取总RNA并逆转录为cDNA, 同时进行PCR扩增。PCR反应体系50ul, 反应条件为:94℃预变性3 min一个循环;再94℃变性35 s, 57℃退火40 s, 72℃延伸45 s, 共30个循环;最后72℃延伸6 min。PCR产物行1.5%琼脂糖凝胶电泳, 在凝胶成像系统上成像并保存结果。采用Quantity One图像分析系统值分析电泳结果, 同时对AQP8产物与B—actin产物的A值的比值进行计算, 将计算值作为水通道蛋白8 mRNA的相对表达水平。
水通道蛋白8蛋白表达水平检测采用免疫组化技术。具体步骤为:预先将准备的标本通过浓度为4%的多聚甲醛固定一整天后实施石蜡包埋, 切成5μm的薄片备用。将石蜡切片进行脱蜡和水化处理, 然后放进0.01 mol/L枸橼酸钠缓冲液 (pH值6.0) 中微波修复10~15 min;采用浓度为3%的H2O2去离子水处理10 min, 将内源性过氧化物酶活性消除感觉, 再按照标准操作规范进行封闭、稀释及显色, 最后采用北航CM-2000B型生物医学图像分析系统对免疫组化图片进行分析。在×400的高倍视野下, 每张切片随机选取5个视野, 测量阳性表达部位的平均A值, 以其均值表示AQP8蛋白的相对表达水平。
1.3 统计方法
将该次统计调查的实验数据均录入SPSS17.0软件包进行统计学分析, 计量资料以均数±标准差 (±s) 表示, 进行t检验。
2 结果
观察组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mR-NA表达水平分别为 (0.77±0.14) 、 (0.85±0.16) 、 (0.57±0.09) , 对照组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为 (0.40±0.06) 、 (0.35±0.10) 、 (0.46±0.08) , 两组数据结果比较差异有统计学意义 (P<0.05) ;观察组产妇羊膜、胎盘、绒毛膜和组织中的水通道蛋白8蛋白表达水平分别为 (0.194±0.025) 、 (0.192±0.025) 、 (0.169±0.027) , 对照组产妇羊膜、胎盘、绒毛膜和组织中的水通道蛋白8蛋白表达水平分别为 (0.149±0.017) 、 (0.151±0.022) 、 (0.155±0.024) , 两组产妇羊膜、胎盘组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较差异有统计学意义 (P<0.05) , 而绒毛膜组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较有统计学意义差异 (P>0.05) 。见表1。
3 讨论
据有关临床统计资料表明, 羊水的膜内吸收是羊水量调节的重要渠道[5]。目前, 大量研究证实, 羊水的膜内吸收是羊水量调节的关键途径口。向胎羊血管缓慢注射生理盐水后, 胎羊尿液每天可增加4 L, 与此同时, 羊水的膜内吸收显著增加, 从而避免了水过多的发生。我国著名医学研究者黄锦[6]等研究表明, 在人和其他动物胎膜及胎盘组织中, AQPl、AQP3、AQP8、AQP9均有表达。其中, AQPl mRNA表现为显著增多, AQP3和AQP9对于水分子具有良好的通透性, 除此之外, 对尿素和甘油也具有一定的通透性, 有研究者提出可能参与了尿素的转运;同时, Koyama[7,8,9,10]等通过对非洲爪蟾蜍卵母细胞转染人AQP8基因试验发现, AQP8对水分子具有良好的通透性。我国在上世纪初的时候便有临床试验证实AQP8 mRNA在人羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞、绒毛膜上皮细胞和中均有表达。由此给于我们提示AQP8可能参与了羊水量的调节。
该研究主要采用分组对照的形式, 对该院2012年10月—2013年10月间收治的20名原发性羊水过多产妇和同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇进行了研究分析, 通过研究结果可以看出, 通过RT·PCR技术可检测到羊水过多患者以及正常孕妇及的羊膜、胎盘、绒毛膜中均有水通道蛋白8 mR-NA表达, 与国内相关文献报道相符合。通过免疫组化法检测结果可以发现, 水通道蛋白8蛋白主要表达于羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞、绒毛膜滋养细胞和。观察组产妇水通道蛋白8 mRNA在羊膜、胎盘、绒毛膜组织中的相对表达水平均明显高于对照组;另外, 观察组产妇水通道蛋白8胎盘蛋白在羊膜和胎盘组织中的相对表达水平也较对照组明显增加;而绒毛膜组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较差异无统计学意义 (P>0.05) 。分析其原因可能是由于水通道蛋白8 mRNA增加的幅度较小等因素引起。同时, 通过该次研究发现, 当产妇的羊水量过多的时候, 羊膜组织水通道蛋白8 mRNA和蛋白的表达上调, 它可能会引起羊膜增加, 从而增加了对水的通透性, 最终促进了羊水的膜内吸收, 当水分吸收量增大时, 就会使胎盘组织中水通道蛋白8 mRNA和蛋白表达上调, 从而促进了母胎间经胎盘的水转运过程, 有利于排出胎儿体内过多的水分。由此给于我们提示, 水通道蛋白8在羊水量的调节中可能发挥代偿作用, 根据这一思路可进行深一步的羊水量异常治疗研究。
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