胎盘生长因子

胎盘生长因子（精选8篇）

胎盘生长因子 篇1

由于子痫前期 (preeclampsia, PE) 病因不明确, 病情发展迅速, 有部分患者仅存在实验室指标异常, 如低蛋白血症, 高尿酸血症。如何早期识别子痫前期, 已成为子痫早期预防和治疗的关键环节。本研究采用酶联免疫吸附法 (ELISA) 测定妊娠妇女的外周血清PIGF表达情况, 应用ROC曲线法, 探讨PIGF在PE发病中可能的作用以及其对PE诊断的价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2009年2月~2010年4月在深圳市妇幼保健院住院分娩的妊娠妇女53例, 其中PE组36例 (轻度15例, 重度患者21例) , 17例与之年龄、孕周相匹配的血压正常无妊娠合并症及并发症的孕晚期孕妇 (对照组) , 均为单胎妊娠。PE诊断标准参照全国高等学校教材《妇产科学》第7版[1]。排除标准:既往无高血压、肾病、糖尿病、甲状腺亢进、血小板减少等病史;无胎膜早破、早产及感染征象。对照组、PE轻度、PE重度组平均年龄分别为 (31.29±4.34) 岁、 (31.27±3.93) 岁、 (30.05±3.54) 岁, 平均分娩孕周 (39.24±0.97) 周、 (39.53±1.38) 周、 (38.62±1.93) 周。三组年龄及分娩孕周差异无显著性 (P>0.05) 。

1.2 研究方法

1.2.1 外周血PIGF水平的检测

PE孕妇入院时未采取任何治疗措施之前取肘静脉血3ml, 注入不抗凝的玻璃试管中, 静置0.5h, 3000r/min离心10min取上清液, 保存于-70℃冰箱。取对照组孕妇肘静脉血, 同法处理。应用酶联免疫吸附 (ELISA) 法测定已分离保存的血清中PIGF浓度, 操作严格按试剂盒 (购自美国R&D System公司) 的说明书进行, 所有标本均为同批测定。

1.2.2 血尿酸测定

按常规方法收集孕妇入院当天开始治疗前血液, 送检验科检查。

1.3 统计学方法

采用SPSS17.0软件进行统计学分析, 数据以 (±s) 表示, 采用单向分类方差分析。以P<0.05为差异有显著性。应用ROC曲线进行诊断效果的分析与评价。

2 结果

2.1 对照组、PE轻度组和重度组孕妇外周血中PIGF检测

ELISA法测定三组孕妇外周血清中PIGF的水平。对照组、PE轻度、重度孕妇PIGF的水平分别为 (147.55±86.66) ng/L、 (62.41±38.86) ng/L、 (35.91±24.28) ng/L, 逐渐降低。整体比较组间有显著性差异 (P<0.05) , 进一步做多重比较。PE轻度、重度分别与正常对照组相比较, 两者间差异有显著性 (均P<0.05) , PE轻度与重度组间P=0.083, 差异无显著性。

2.2血清尿酸对照组、PE轻度、重度浓度分别为 (271.31±55.81) μmol/L、 (323.14±73.55) μmol/L、 (370.0±77.66) μmol/L。

三组整体比较, 组间有显著性差异, 浓度逐渐升高;血清尿酸对照组与PE轻度组相比, P=0.05;对照组与PE重度组相比, P=0.000。

2.3 PIGF诊断子痫前期特性

PIGF诊断PE ROC曲线下的面积为0.913, 标准误为0.043。PIGF诊断PE有显著性意义, P=0.000。95%可信区间为 (0.829, 0.998) 。同时, PIGF在截断值等于107.25ng/L时, 敏感度是91.7%, 特异度82.4%。

2.4 血清尿酸诊断子痫前期特性

血清尿酸诊断PE ROC曲线下的面积为0.788, 标准误为0.064。血清尿酸诊断PE有显著性意义, P=0.001。95%可信区间为 (0.662, 0.913) 。同时, 血清尿酸在截断值等于326.0μmol/L时, 敏感度是60.0%, 特异度87.5%。

3 讨论

ROC曲线广泛用于医学诊断试验的性能评价, 是将诊断试验结果划分为若干临界点, 以每个临界点对应的灵敏度为纵坐标, 1-特异度为横坐标, 作图得到的曲线, 是一种全面、准确评价诊断试验的有效工具, 它的另一个作用是确定检测的最佳阈值。1995年美国国家临床实验室标准化委员会 (NCCLS) 正式批准了“应用ROC曲线是循证检验医学必不可少的应用方法”。PIGF是血管内皮生长因子家族中的一员, PIGF一方面通过自分泌方式促进滋养细胞增殖分化, 另一方面通过旁分泌方式调节胎盘血管形成和生理性重铸, 同时还可对血管内皮生长因子起到协同作用, 显著提高其生物活性, 促进胎盘血管发展, 维持妊娠过程中胎盘正常的血供和功能, 使其适应母体和胎儿发育的需要。目前有观点认为是由于胎盘血管重铸障碍致胎盘功能不良是PE发病的重要因素[2]。也许我们可以这样推测, 由于PIGF的减少, 导致胎盘重铸障碍, 胎盘血管发育受阻, 胎盘浅着床, 从而导致PE发生。有研究报道, 妊娠期高血压疾病时孕妇血清尿酸可预测先兆子痫的发生。用血清尿酸0.33mmol/L作为切割值, 尿酸作为诊断PE的敏感性为69%, 特异性为51%[3]。本研究发现, PIGF诊断子痫前期灵敏性及特异性均较高, PIGF诊断PE有显著性意义。PIGF在截断值等于107.25ng/L时, 敏感度是91.7%, 特异度82.4%, 优于血清尿酸, 在截断值等于326.0μmol/L时, 敏感度是60.0%, 特异度87.5%, 与文献报道一致。本试验通过ROC曲线得到PIGF最佳的临床判断临界值, 并通过调整ROC曲线的临床判断临界值, 以满足临床对检测灵敏度和特异度的特殊要求, PIGF对PE诊断具有一定的临床应用价值。

参考文献

[1]乐杰.妇产科学[M].第7版.北京:人民卫生出版社, 2009:92-101.

[2]Luttun A, Brusselmans K, Fukao H, et al.Loss of placental growth factor pro-tects mice against vascular permeability in pathological condi-tions[J].BiochemBiophys Res Commun, 2002, 295 (2) :428-434.

[3]Shuster E, Weppelman B.Plasma urate measurements and fetal outcome inpreeclampsia[J].Gynecol Obstet Invest, 1981, 12 (3) :162-167.

浅析环境因子对番茄生长的影响 篇2

关键词：环境因子；番茄生长；影晌

中图分类号：S641.2 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2011）-07-0157-2

0 前言

番茄原产南美洲，属喜光。喜温不耐热的茄科类作物，其生长发育有一定的适应性，由于番茄富含番茄红素、胡萝卜素、维生素C及多种其他维生素物质，对人体健康有一定的保健作用，因此为大众所接受，近年来番茄面积与产量不断在扩大，成为全球栽培最多的蔬菜品种之一，因此如何提高番茄产量与品质有着重要的意义。任何作物的生长都离不开环境，光照、温度、水分、土壤是主要的环境因子，但不同的作物对环境条件有不同的要求，下面就光照、温度、水分、及土壤条件等方面探讨适合番茄生长发育的环境条件，从而为番茄生产提供参考获取最大效益。

1 光照对番茄生长的影响

光照是植物进行光合作用的主要因子，不同的植物对光照的要求不尽相同。番茄是喜光性作物，不同光质，光照强度及光照时间对番茄生长发育均有影响。

1.1 光质

光质主要是指不同波长的光，有资料表明将苗期中的番茄植株分为两组。分别补充红光和白光照射实验，发现白光较红光更有利植株的伸长但红光对植株中蔗糖酶的活性影响以及番茄植株的糖代谢水平要比白光强，同时红光更有利于蛋白质的形成，说明红光更有利番茄的生长发育，因此在生产实际中，特别是在设施栽培条件下，适当补充红光可以获得更好的效果。

1.2 光照强度

光照强度是影响番茄生长的重要因素，光照不足使光合作用减弱，制造的氧分则较少使植株长势差，茎叶细小，节间拉长，开花数量少且易落花落果，果实着色差，影响番茄品质与产量，光照过强易引起生理性卷叶，灼伤果面，特别是在高温干旱季节，会加速水分蒸发，如果排水不便使番茄因缺水而受到影响，适宜番茄生长发育的光照强度为35000Lux左右，其光饱和点为70000Lux。

1.3 光照时间

番茄生长发育对光照时间不是很严格，一般每天8-16h的光照均能使番茄正常生长发育。

2 温度对番茄生长发育的影响

温度是影响番茄生长发育的重要因素，番茄在不同的生长时期对温度有不同的要求，下面就发芽期、苗期、及开花结果期探讨适宜的生长发育温度。

2.1 发芽期

番茄种子发芽最适宜的温度是25-30℃，低于15℃发芽率及发芽速度明显降低，低于12℃或高于40℃发芽相当困难，因此在生产实际中早春播种要加盖薄膜以提高地温，夏秋播种加盖遮阳网以降低土温。

2.2 苗期

苗期最适宜温度白天为22-28℃，晚上为15-20℃，低于12℃生长速度明显变慢，5℃以下基本停止生长，0℃以下便可造成冻害出现死苗现象。

2.3 开花结果期

开花结果期白天最适宜温度为24-28℃，夜间为15-20℃，低于15℃粉萌发及花粉管伸长受阻，易造成坐果差，甚至落花落果，同时会抑制茄红素及其他色素的形成，影响果实着色，从而影响到番茄的产量及品质，低于15℃花芽分化受到影响，也不利花器的正常发育，易出现畸形花、畸形果、且易落花落果，另外在开花结果期合理的昼夜温差较其他时期更为重要，白天温度高有利光合作用制造营养物质，夜间温度低减少呼吸消耗有利营养物质的运输和积累，从而促进植株和果实的平衡发展，番茄在开花结果期适宜的昼夜温差为10℃左右。

3 水分对番茄生长发育的影响

水分对番茄的影响表现为空气湿度及土壤含水量

3.1 空气湿度

适宜番茄生长发育的空气相对湿度为45-65%，过干会使叶片气孔关闭，卷叶，影响光合作用，湿度过大，病害增多，长势弱，且易落花落果，特别是在果实成熟期，若碰上连续雨天，会使果实含水量增加，果实变软，不耐贮运，同时还会引起裂果，严重影响果实商品性。

3.2 土壤含水量

番茄不同生长时期对土壤含水量有所不同，一般在发芽期要求土壤水分饱和，苗期土壤相对湿度最好在60-70%，果实膨大期为80-90%。

3.2.1 土壤含水量对番茄光合作用的影响 土壤具有70%以上含水量对番茄植株光合速率无明显的影响，70%以下就会快速降低。在土壤含水量较低的情况下，光饱和点及二氧化碳饱和点会下降，而光补偿点和二氧化碳补偿点则升高，导致番茄植株的光合效率降低，番茄植株的干物质积累量隋之减少。由此可见水分对光合作用的影响主要通过对气孔的影响，因此保持较高的土壤含水量有利提高光合作用。

3.2.2 土壤含水量对番茄植株营养元素吸收的影响 在不同的土壤环境下，番茄植株对矿质元素的吸收量有所不同，特别是土壤含水量对其的影响，实验表明番茄对磷、钾的吸收量受土壤含水量的影响最大，与土壤含水量呈现正相关的关系，而镁的吸收量随着土壤含水量减少而逐渐增加，此外，番茄对钙的吸收量也有所变化。对于铁、锌等微量元素与土壤含水量是负相关，铜、锰等微量元素就正好相反。

4 土壤环境对番茄生长发育的影响

番茄对土壤环境条件的要求不是很严格，但以土层深厚.富含有机质的砂壊土为最好，粘性土壤对番茄根系生长及营养吸收不利。

4.1 土壤肥力

土壤肥力是土壤环境的主要因素，番茄对氮、磷、钾的吸收比例大致1：0.5：1.5，以钾肥吸收最多， 适当增施钾肥不但可以增加产量同时可以改善果实品质，有实验表明增施钾肥可提高番茄维C含量，促进糖的合成和运输。同时还能增加果实硬度，提高番茄的商品性，氮肥主要促进植株生长，以适量为主，氮肥过量会导致营养生长和生殖生长失衡，影响花芽分化，特别是在早春低温条件下易造成畸形果增加，果实硬度下降，影响果实商品性，但对耐肥性强的品种可适当增施氮肥促进植株生长，磷肥能促进番茄根系及果实的生长发育以及前期的花芽分化，土壤有机质不仅能提供大量的營养物质，还能满足番茄生长所需的微量元素，改善土壤条件促进根系生长，改善果实品质提高果实商品性，因此在生产实际中最好以施用有机肥为主。

4.2 土壤PH值

碱性或过酸性的土壤对番茄生长不利，适宜番茄生长的土壤PH值为5.5-7之间。

5 结束语

番茄的生长发育是受环境条件影响的，特别是产量，坐果率，畸形果比例，裂果等性状受环境因素影响较大。同样的品种在不同的环境条件下栽培表现是有差异的，不同的品种对环境的敏感性是不一样的，因此品种间表现出不同的特征特性；比如耐寒性、耐热性、耐肥性、耐弱光性、耐旱性、抗病性等多种性状。这就要求在生产实际中首先要了解要栽培品种的特征特性，然后根据当地气候条件及栽培习惯合理安排，科学管理，使品种发挥最大效益。

参考文献

[1] 北京农业大学.蔬菜栽培学[M].北京:中国农业出版社,1987.

[2] 邹冬生.不同土壤水分条件下番茄叶片光合及蒸腾日变化研究[J].中国蔬菜,1989,(6):8-9.

[3] 冯玉龙.根系温度对器茄光合作用与水分代谢的影响[J].植物研究,l996,(2):21-218.

[4] 郭泳.环境因素对番茄单叶净光合速率的影响[J].沈阳农业大学学报,1998,(2):124-128.

胎盘生长因子 篇3

1.1 资料来源

胎盘标本取自2007年9月～2008年3月在本院分娩产妇的胎盘, 均为单胎、剖宫产分娩。对照组20例, 无内科或产科合并症, 均因骨盆狭窄或胎位不正等原因行选择性剖宫产的胎盘, 平均年龄 (27.8±3.4) 岁, 平均孕周 (38.85±1.35) 周。妊高征组24例, 按郑怀美主编的《妇产科学》诊断标准, 分为轻度6例, 中度10例, 重度8例, 平均年龄 (28.2±4.2) 岁, 平均孕周 (37.2±2.62) 周。

1.2 研究方法

1.2.1 胎盘组织中VEGF蛋白的测定

采用多克隆抗体免疫组化法, 测定胎盘组织中VEGF的表达, 试剂盒为中山生物公司研制的SP免疫组化试剂盒, Ⅰ抗为鼠抗人的VEGF多克隆抗体, 工作浓度为1∶60, Ⅱ抗为羊抗鼠的免疫球蛋白G (IgG) , Ⅲ抗为辣根过氧化物酶标记的链卵白素, Ⅱ、Ⅲ的工作浓度为1∶300。主要实验步骤为:①组织切片脱蜡;②过氧化氢清除内源性酶活性;③羊血清阻断非特异染色;④依次加Ⅰ抗、Ⅱ抗、Ⅲ抗进行孵育; (5) DAB显色, 用PBS代替Ⅰ抗作为阴性对照。

1.2.2 评分方法

参照许洪卫等[1] 的评定方法, 将制好的切片置显微镜下观察, 阳性染色为细胞核或浆内有棕黄色颗粒, 根据染色的强度分0级:细胞内无棕黄色阳性颗粒或呈均匀一致淡黄色, 与背景一致;+级:核或浆内可见淡黄色颗粒, 明显高于背景;++级:核或浆内可见较深棕色颗粒;+++级:核或浆内可见大量深棕色颗粒。本实验所有的切片均经双盲法分别观察评估, 对少数不易判定的切片多次阅片确定。

1.3 统计学方法

采用秩和检验。

2 结果

2.1 VEGF在正常妊娠组胎盘与妊高征组胎盘中分布基本一致, VEGF主要分布在滋养叶细胞, 血管及绒毛间质细胞。

2.2 在妊高征组胎盘中VEGF多数为轻度表达占79.2%, 中度表达占20.8%, 无重度表达。在正常妊娠组胎盘中VEGF的轻度表达占25%, 中度占45%, 重度占30%。

2.3 在妊高征组胎盘中VEGF表达明显低于正常妊娠组胎盘 (P<0.01) , 而且轻、中、重度妊高征组与正常组相比均有显著差异, 但在妊高征各组中, VEGF表达无明显差异 (P>0.05) , 见表1。

注:*P<0.01 (与正常妊娠组相比) , ** (轻度妊高征组与正常妊娠组相比) , ***P<0.001 (中度妊高征组与正常妊娠组相比)

3 讨论

VEGF是一种新近发现的对血管内皮细胞有特异高效的促有丝分裂因子, 体内实验表明VEGF刺激血管发生与生长[2], VEGF由血管平滑肌、内皮细胞产生, 通过旁分途径作用于血管内皮细胞, 人们认为它对维持血管的完整性和正常通透性有重要意义, 并在与血管内皮细胞增生相关的病理生理中占中心调控地位。

血管内皮细胞和滋养细胞均有VEGF受体的表达。研究表明胎盘植入过程中迁移入母体蜕膜的滋养细胞有较高的VEGF受体酪氨酸激酶 (flt) 的表达。本组结果表明:正常妊娠组和妊高征组胎盘中均有VEGF的表达且主要分布在滋养叶细胞, 说明VEGF对滋养细胞的分化及侵入有调节作用, 而妊高征组胎盘VEGF表达明显减少以致影响滋养细胞的分化与增殖, 造成滋养细胞侵入缺陷, 从而影响螺旋小动脉的生理变化。同时, 血管内皮细胞VEGF的减少也可影响胎盘血管的生成, 造成胎盘灌流减少, 进一步损伤血管内皮细胞的功能, 产生一系列妊高征的病理变化。由此可推断:VEGF在妊高征发病中占有一定的地位。

参考文献

[1]许洪卫, 何金, 王元和, 等.胃癌及其淋巴转移灶β1、β4、亚单位整合素表达的临床意义.中华病理学杂志, 1997, 26:168-169.

胎盘生长因子 篇4

1 资料与方法

1.1 对象及分组

所有研究对象均为初次单胎怀孕,排除内科慢性疾病和其他妊娠合并症,为子痫前期新发病例,诊断及分类标准依据乐杰主编《妇产科学》第7版,均为2009年9月至2011年12月在温州医学院附属第二医院及温州市第三人民医院门诊及住院的子痫前期孕妇。轻度子痫前期38例,平均年龄30.0±3.9岁,平均孕期26.4±2.3周;重度子痫前期32例,平均年龄31.0±3.3岁,平均孕期26.5±2.7周;正常对照组为同期门诊的正常妊娠产妇40例,无任何并发症和合并症,妊娠经过正常,胎儿发育正常,平均年龄29.0±1.3岁,平均孕期26.0±2.8周。3组孕妇年龄、孕周差异无统计学意义(P>0.05)。轻度子痫前期和重度子痫前期的孕妇于采血前未经任何相关的治疗和用药。

1.2 标本采集

3组孕妇于空腹采肘静脉血3 ml,待凝固后低温3000 r/min离心10分钟,分离血清,置-70℃冰箱集中待测;同时采集孕妇随意中段尿液3 ml,经低温3000 r/min离心10分钟,取上清液,置-70℃冰箱集中待测。

1.3 试剂与检测方法

PLGF和sFlt-1采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定,试剂均购自美国R&D System 公司,操作严格按照说明书;PLGF试剂盒批内及批间变异系数分别为4.3%和5.2%,sFlt-1试剂盒批内及批间变异系数分别为4.5%和5.5%;酶标比色仪为安图斯酶标仪anthos 2010。

1.4 统计方法

实验结果均以表示,多个样本均数比较用F检验,两样本组间比较行t检验,血清及尿液中sFlt-1/PLGF比值对子痫前期的诊断价值用ROC曲线分析,以P<0.05为差异有统计学意义;用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。

2 结 果

2.1 3组孕妇血清PLGF和sFlt-1浓度水平比较

见表1。3组血清分别行PLGF、sFlt-1的F检验,3组间差异有统计学意义(F=18.715,F=23.439,均P<0.01)。轻度子痫前期组的血清PLGF低于正常对照组(P<0.01),而血清sFlt-1高于正常对照组(P<0.05);重度子痫前期组的血清PLGF低于轻度子痫前期组,而血清sFlt-1高于轻度子痫前期组(均P<0.01)。

①轻度子痫前期组与正常对照组相比,P<0.01;②轻度子痫前期组与正常对照组相比,P<0.05;③重度子痫前期组与轻度子痫前期组相比,P<0.01

2.2 3组孕妇尿液中PLGF和sFlt-1浓度水平比较

见表2。

①轻度子痫前期组与正常对照组相比,P<0.05;②重度子痫前期组与轻度子痫前期组相比,P<0.01

3组间尿液PLGF、sFlt-1差异均有统计学意义(F=20.542,F=24.678,均P<0.01)。轻度子痫前期组的尿液PLGF低于正常对照组,而尿液sFlt-1高于正常对照组(均P<0.05);重度子痫前期组的尿液PLGF低于轻度子痫前期组,而尿液sFlt-1高于轻度子痫前期组(均P<0.01)。

2.3 尿液PLGF、sFlt-1与血清PLGF、sFlt-1的相关性分析

将所有尿液PLGF与血清PLGF及尿液sFlt-1与血清sFlt-1进行Person相关分析,尿液的PLGF与血清PLGF具有正相关性(r=0.692,P<0.05);尿液sFlt-1与血清sFlt-1亦具有正相关性(r=0.784,P<0.05)。

2.4 3组孕妇血清及尿液中sFlt-1/PLGF比值的变化

见表3。3组间血清、尿液中sFlt-1/PLGF差异均有统计学意义(F=30.542,F=22.417,均P<0.01)。轻度子痫前期组血清、尿液sFlt-1/PLGF比值高于正常对照组,重度子痫前期组sFlt-1/PLGF比值高于轻度子痫前期组,各组之间的差异均有统计学意义(均P<0.01)。

①轻度子痫前期组与正常对照组相比, P<0.01;②重度子痫前期组与轻度子痫前期组相比, P<0.01

2.5 血清及尿液中sFlt-1/PLGF比值对子痫前期的ROC曲线分析

ROC曲线分析见图1、图2。血清sFlt-1/PLGF比值对轻度子痫前期的曲线下面积(AUC)为0.921(SD 0.031;95%CI 0.861～0.982),最佳诊断界值为7.93(灵敏度0.865,特异度0.913);尿液sFlt-1/PLGF比值对轻度子痫前期的AUC为0.935(SD 0.027;95%CI 0.882～0.987),最佳诊断界值为20.67(灵敏度 0.881,特异度 0.921)。血清sFlt-1/PLGF比值对重度子痫前期的AUC为0.959(SD 0.022;95%CI 0.913～0.995),最佳诊断界值为19.34(灵敏度0.985,特异度0.975) ;尿液sFlt-1/PLGF比值对重度子痫前期的AUC为0.972(SD 0.016;95%CI 0.928～0.998),最佳诊断界值为87.95(灵敏度 0.989,特异度 0.983)。血清中sFlt-1/PLGF比值的AUC与尿液中sFlt-1/PLGF比值的AUC相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。

3 讨 论

妊娠是极其复杂的过程,胎盘的正常发育对正常妊娠的维持至关重要,胎盘组织所分泌的与血管新生、内皮细胞和滋养细胞功能相关的生长因子在胎盘形成和发育中起重要作用。病理研究显示[3]:子痫前期孕妇胎盘存在生理性血管重铸障碍、绒毛面积减少、密度减低、绒毛血管减少等病理表现。

PLGF是一种分泌性同二聚体糖蛋白,属于血管内皮生长因子(VEGF)家族中的一个新成员,基因位于人14号染色体[4],其丰富表达于胎盘,主要合成部位是滋养细胞。与PLGF高度特异结合的受体是VEGFR-1(Flt-1),Flt-1受体以膜型和可溶型(sFlt-1)[4]两种形式存在,循环中sFlt-1是由Flt-1基因的选择性剪接形成,具有拮抗性;它最初发现是在人类脐静脉内皮细胞上,而高浓度被检测到是在绒毛和绒毛外细胞上。研究表明,PLGF有如下生物特性[5]:①促进滋养细胞增殖与分化;②促进血管生成及扩血管作用。PLGF在胎儿发育中有很强的促血管生成特性,在胎盘血管生成起重要的作用。而sFlt-1有抗血管生成特性,能够对抗PLGF的生物学特性,而缺氧能使滋养细胞表达sFlt-1增加。

正常妊娠孕妇血清中PLGF随妊娠进展分泌水平呈峰形,孕早期较低,15周后明显上升,孕28～30周达高峰,随后又下降。为了排除由于孕周的不同导致的PLGF和sFlt-1值不同,本文中3组孕妇孕期无差别。研究发现[6],在子痫前期患者中,血清PLGF下降的幅度与病情严重程度有关,其较正常妊娠组差别越大,提示病情越严重。陈茜等[7]发现在正常孕妇、轻度子痫前期患者、重度子痫前期患者的胎盘中sFlt-1 mRNA的表达水平高于正常者,且随疾病的加重sFlt-1 mRNA的水平升高。子痫前期患者出现的高血压、蛋白尿在某种程度上可能与循环中的sFlt-1水平升高有关[8]。在子痫前期患者存在肾小球血管内皮损伤,内皮细胞间隙增大[9],一些蛋白成分能通过肾小球内皮细胞间隙从尿液排泄,故尿液中PLGF、Flt-1也有相应的变化。本研究结果显示,子痫前期患者血、尿PLGF低于正常妊娠孕妇,而sFlt-1高于正常妊娠孕妇,且随病情的加重PLGF有递减的趋势,而 sFlt-1有递增的趋势;血PLGF、Flt-1和尿PLGF、Flt-1变化相一致,且呈正相关性(r=0.692,P<0.05;r=0.784,P<0.05)。且血与尿中sFlt-1/PLGF比值的AUC比较差异无统计学意义(P>0.05),可以考虑尿液sFlt-1/PLGF检测替代血液sFlt-1/PLGF检测。

有学者[10]假设怀孕大鼠血压高、胎盘灌注量降低,与血浆中低PLGF、高Flt-1相关,并通过实验证明研究结果支持假设。Lapaire等[11]认为PLGF、Flt-1可以作为子痫前期的检测指标,可以作为判定疾病严重程度的辅助手段。De Vivo等[12]亦前瞻性研究得出PLGF、Flt-1可被用来作为标记,用于预测子痫前期,其指出sFlt-1/PLGF更能预测子痫前期的发生风险,可能比出现临床症状(血压、尿蛋白)早几周预示子痫前期的发生。从本文结果所示,轻度子痫前期患者的血清、尿sFlt-1/PLGF高于正常妊娠孕妇,而重度子痫前期患者又高于轻度子痫前期患者,差异均有统计学意义,说明sFlt-1/PLGF比值升高的程度与病情的严重程度相关,亦说明sFlt-1/PLGF比值在鉴别轻、重度子痫前期中有一定意义;血清、尿sFlt-1/PLGF诊断轻度子痫前期的ROC曲线的面积分别为0.921、0.935,诊断重度子痫前期的ROC曲线的面积分别为0.959、0.972,说明血清、尿sFlt-1/PLGF对子痫前期的诊断价值较高。

由于子痫前期病因不明确,病情发展迅速,一直以来没有一项特别理想的实验室指标预测子痫前期的发生风险,血清、尿液PLGF和sFlt-1及sFlt-1/PLGF比值的发现无疑预示着找到了一条经济可行的提高诊断及识别预防子痫前期的方法,而且尿液PLGF、 sFlt-1及sFlt-1/PLGF的标本留取方便、无创伤,更容易让患者接受,望能在将来的子痫前期的临床预测与诊断中代替血液发挥作用。当然,本文中只是选取了特定孕期的病例,更大的孕期范围我们可以进一步研究;血清、尿sFlt-1/PLGF在子痫前期病情的随访方面的作用我们也将进一步关注。

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[7]陈茜,陈汉平.sFlt-1mRNA在子痫前期患者胎盘中的表达[J].中国优生与遗传杂志,2008,16(5):54-55.

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胎盘生长因子 篇5

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年1月-2014年8月本院妇产科分娩的产妇31例, 依照患者分娩情况分为观察组16例和对照组15例, 观察组胎儿生长受限, 所有胎儿足月体重小于2500 g, Apgar评分大于8分, 孕妇年龄 (27.68±5.06) 岁, BMI (18.37±5.09) kg/m2, 产次 (1.34±0.35) 次;对照组患者分娩正常, 足月胎儿出生体重大于2500 g, 小于4000 g, Apgar评分大于8分, 孕妇年龄 (29.34±2.91) 岁, BMI (21.63±3.61) kg/m2, 产次 (1.43±0.53) 次。所有标本和资料均在获得患者同意后获取。两组患者孕妇均为初产妇, 自然受孕, 无生殖器官疾病, 排除高血压患者、糖尿病患者、甲状腺疾病患者、新生儿先天性疾病患者以及遗传性疾病患者。

1.2 方法

1.2.1 胎盘组织HE染色

在患者胎儿分娩10 min后, 剪去母体面胎盘组织, 注意避免出血、钙化区, 采用生理盐水冲洗干净后采用福尔马林液固定, 并对两组患者进行标记编号。

胎盘组织染色采用苏木精-伊红染色法, 将组织取材固定2 d后, 采用流水反复清洗, 进行透明处理、图蜡, 放在EG-1160病例组织包埋机制成包块, 采用切片机连续切片, 放在50℃温水中贴片, 并表上标签, 脱蜡至水, 放入苏木素染液中染色, 将切块放在盐酸酒精溶液中, 切块变为浅红色, 在采用流水清洗, 采用伊红染色, 再次经过脱水处理, 放在二甲苯溶液中浸泡3 min封存, 观察胎盘切块发育情况等[1]。

1.2.2 胎盘组织免疫组化染色

在患者胎儿分娩10 min后, 剪去母体面胎盘组织, 采用生理盐水冲洗干净后采用福尔马林液固定, 石蜡切块与上述一致[2]。将石蜡切片经过脱蜡止水, 加过氧化氢溶液, 消灭细胞内源性过氧化酶的活性, 放入PBS中浸泡5 min, 自然冷却, 滴加一抗组织液, 除去PBS液体, 滴加A液50~100μL, 除去PBS液体, 再滴加新鲜配制的DAB显色液50~100μL, 观察显色, 满意后采用自来水清晰, 采用苏木素染色, 脱水封装[3]。

1.2.3 胎盘组织Real-Tine PCR检测

在患者胎儿分娩10 min后, 剪去母体面胎盘组织, 注意避免出血、钙化区, 生理盐水冲洗干净后, 放在-80℃水箱中保存[4]。将保存的标本取出, 放在试管中, 加入Trizol试剂1 m L, 在冰浴中匀浆, 转移到EP试管中, 加入氯仿溶液2 m L, 置于冰中5 min, 离心15 min, 取上层液体, 加入0.5 m L异丙酮/Trizol液, 混合均匀后, 静置、离心, 舍弃上清液, 加入乙醇混合均匀后再离心, 舍弃上清液, 加入DEPC水50μL。在紫外分光光度计上检测, OD260/OD280在1.8~2.0范围内为合格。调整RNA的浓度为0.5μg/μL。实时定量荧光PCR测定中, 先在95℃下预变性10 min, 然后变性20 s, 退火, 结束后做溶解曲线。

1.3 评价标准

胎盘组织免疫组化染色结果在高倍显微镜下观察切块, 细胞浆存在褐色颗粒为阳性, 没有着色为0分, 着色为浅黄色为1分, 着色为棕色为2分, 颜色深至深棕色为3分。没有观察到阳性细胞为0分, 观察阳性细胞小于25%为1分, 观察阳性细胞在25~50%为2分, 观察阳性细胞大于50%为3分。实时定量荧光PCR测定中阙值定为0.8, 相对表达量采用2-ΔCt[5]。

1.4 统计学处理

应用SPSS 22.0统计学软件分析数据, 计量资料以 (±s) 表示, 比较采用t检验, 计数资料比较采用χ2检验, 以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胎盘组织HE染色

对照组胎盘组织绒毛发育良好, 主要是合体滋养细胞, 观察组胎盘组织发育欠佳, 存在较多绒毛内间质增生。

2.2 免疫组化染色

(1) 对照组胎盘组织激活素受体ⅠA染色强度以 (-) 为主, 无阳性染色, 观察组激活素受体ⅠA表达定位与对照组保持一致。 (2) 对照组胎盘组织激活素受体主要表现细胞滋养组织胞浆和合体滋养为主, 染色强度主要表现为 (-) , 无阳性表达, 观察组激活素受体ⅠB与对照组基本一致。 (3) 对照组激活素受体ⅡA表达以细胞滋养组织胞浆和合体滋养, 观察组激活素受体ⅡA表达定位与对照组表达一致, 染色强度主要是 (++~+++) 。 (4) 对照组胎盘组织激活素受体ⅡB主要表达细胞滋养组织胞浆和合体滋养, 染色强度以 (-) 为主, 观察组胎盘组织受体ⅡB表达定位与对照组基本一致, 染色强度以 (++~+++) 为主。

2.3 激活素受体在两组胎盘组织中的表达

两组激活素受体ⅠA、ⅠB表达差异不明显 (P>0.05) , 观察组ⅡA、ⅡB在 (++) , (+++) 的百分比均高于对照组 (P<0.05) ;观察组ⅡA、ⅡB在 (-) 的百分比显著低于对照组 (P<0.05) , 见表1。

2.4 胎盘组织中激活素受体基因的表达

观察组胎盘组织激活素受体ⅠA、ⅠB基因表达与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 观察组胎盘组织ⅡA、ⅡB表达明显高于对照组 (P<0.05) , 见表2。

%

%

3 讨论

胎儿生长受限是对围生期严重并发症之一, 围产儿死亡率非常高, 一般认为胎儿生长受限后导致血管、胰腺等重要组织器官的永久性改变。当前有关胎儿生长受限的研究有不少, 一般认为与多种因素有关, 研究胎盘生长受限胎盘激活素受体的表达有非常现实的意义[5,6]。

在本研究中分析胎儿受限胎盘与正常足月胎儿胎盘组织病理, 通过HE染色观察发现, 胎儿生长受限胎盘组织发育不佳, 绒毛减少, 钙化增多, 结果提示实验组患者胎盘成熟与灌注不良有关。胎盘是母婴至今物质交换的重要器官, 对胎儿的发育起到了重要作用, 胎儿的冰壁变化与并发症的发生有很大关系。有研究指出胎盘主要是由绒毛间质、绒毛滋养细胞等构成, 随着妊娠时间的不同, 胎盘逐渐出现不同的变化, 正常足月人本身, 绒毛组织主要由合体滋养细胞构成。胎儿生长受限会导致胎盘合体滋养细胞出现变化, 胎儿生长受限胎盘组织合体滋养细胞凋亡明显高于正常胎盘。在本研究中, 结果与以往研究比较类似, 推测胎儿生长受限的发生与胎盘发育不良有关[7]。

本实验通过免疫组化方法, 分析激活素4种受体的表达和检测, 结果表明胎盘组织激活素受体表达集中在细胞滋养细胞胞浆和合体滋养细胞中, 也会在绒毛血管的内皮细胞中少量表达, 这与近几年的研究比较类似。近几年很多研究表明妊娠晚期激活素受体主要来自于胎盘滋养细胞, 四种激活素受体主要定位于胎盘绒毛血管的内皮细胞, 本研究证实了这个观点。胎儿生长受限胎盘组织中激活素受体ⅡA、ⅡB表达说明明显高于对照组, 细胞滋养细胞阳性染色最强[8]。有研究表明胎儿生长受限与滋养细胞的凋亡有关, 在本试验中在胎盘组织中定位激活素水平, 结果表明胎盘中细胞凋亡的定位在绒毛滋养细胞层中, 与以往研究类似, 推测激活素受体可能具有调节绒毛滋养细胞凋亡作用, 导致胎儿生长受限的发生[9]。

在本研究中重点分析激活素与胎儿生长受限的关系。通过免疫组化实验方法和定量荧光PCR实验方法相结合, 分别从基因水平和蛋白对激活素水平在胎盘组织中的表达进行检测, 结果表明胎儿生长受限胎盘组织激活素受体ⅠA、ⅠB与对照组表达一致, 胎儿生长受限胎盘组织激活素受体ⅡA、ⅡB表达明显高于正常足月胎盘 (P<0.05) , 推测激活素受体ⅡA、ⅡB参与胎儿生长受限的发生[8]。采用不同的研究方法分析激活素受体的表达, 结果一致, 推测胎盘组织中Act RII表达水平升高会促使胎儿生长受限[10,11,12]。在以往的研究中指出激活素A参与到滋养细胞分化进而影响胎儿生长发育, 在研究中可以看出胎儿生长受限胎盘组织中激活素受体ⅡA、ⅡB明显提高, 推测与胎盘变化、血流密切相关[13,14,15]。

胎盘生长因子 篇6

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析了2005年3月～2010年5月在我院行肺癌根治术收的73例NSCLC患者为研究对象，均有完整的临床资料并成功完成随访。纳入标准：所有患者均经病理组织学和/或细胞学诊断为NSCLC，并按肺癌国际分期标准(UICC,2002)为Ⅲ～Ⅳ期，KPS评分≤60分，预计生存期≥3个月，既往未接受过抗肿瘤治疗或者距离末次抗肿瘤治疗时间2个月以上。73例患者中，男44例，女29例;年龄36～78岁，平均(62.6±11.2)岁;病理类型：鳞状细胞癌58例;腺癌15例;Ⅲ期57例，Ⅳ期16例。另选同期在我院体检的健康查体者70例为对照组，男40例，女30例;年龄35～75岁，平均(61.8±14.3岁)。NSCLC组与对照组在性别和年龄构成方面差异无显著性(P<0.05)，具可比性。

1.2 方法

分别取NSCLC患者手术前空腹12 h清晨肘静脉血，对照组取体检日空腹12 h清晨肘静脉血，样本量为3 m L,3 000 r/min离心15 min后分取血清，置-80℃冰箱保存待测。采用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检定血清HGF、TGF-β水平，所用HGF和TGF-β试剂盒为深圳晶美公司产品，严格按试剂盒说明操作。

1.3 统计学方法

采用SPSS13.0统计分析软件进行数据分析，计量资料(均数之间的比较)用t检验，以P<0.05为差异有显著性。所有计量资料采用均数±标准差(x±s)表示。检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 NS CLC组和对照组血清HGF和TGF-β水平比较

NSCLC组血清HGF、TGF-β均显著高于对照组，相比较差异有显著性(t=4.046,3.994,P<0.05)。结果见表1。

注：覮与对照组比较，P<0.05

2.2 HGF、TGF-β表达与NS CLC临床病理指标的关系

临床分期Ⅳ期的血清HGF、TGF-β水平显著高于Ⅲ期，相比较差异有显著性(t=3.941,3.898;P<0.05);肿瘤低分化组血清HGF、TGF-β水平显著高于高中分化组，相比较差异有显著性(t=3.471,3.656;P<0.05);发生肿瘤转移组血清HGF和TGF-β水平显著高于肿瘤未转移组，相比较差异有显著性(t=3.357,3.615;P<0.05)。血清HGF、TGF-β水平在性别、年龄和肿瘤病理类型之间比较差异无显著性(P>0.05)。结果见表2。

3 讨论

手术根治性切除仍然是NSCLC主要的治疗方法，但由于NSCLC易转移，大多数患者术后死于肿瘤转移和肺癌复发。传统的肺癌TNM分期作为评估患者术后转移和复发的指标很难做出准确的估计。近年来随着肿瘤分子生物学水平研究的不断发展，寻求NSCLC新的有效的预测指标，及早对NSCLC进行准确诊断，为患者争取手术时间、预测术后复发以及病情进展风险具有重要的现实意义。

由于肿瘤的发生与发展是一个多因素、多步骤的复杂病理过程，多种细胞因子与肿瘤的发生、肿瘤细胞增殖以及肿瘤分化密切相关[7]。研究发现HGF及TGF均是多效因子，在肿瘤的发生、发展中表现出多种生物学作用。HGF是一种在肝、肾组织受损后促进再生的生长因子，它具有刺激肝细胞再生的能力，并对上皮细胞集落有扩散作用[8]。TGF-β是一类多肽类生长因子超家族，具有多种生物学功能[9]。在多种肿瘤研究中均已证实HGF、TGF-β在肿瘤发生、发展中表现出多种生物学效应，有促进肿瘤细胞增殖、浸润转移的作用，有调节血管生长因子的表达和促进肿瘤血管生成的功能，有促进细胞增殖和抗凋亡作[10,11,12]。此外，HGF刺激可促进淋巴内皮细胞的增殖，促进淋巴管形成的作用[13]。TGF-β还具有免疫抑制作用，可以使高免疫原性肿瘤细胞逃脱免疫监视，从而形成肿瘤[14]。本研究结果显示：NSCLC患者血清HGF和TGF-β水平显著高于对照组(P<0.05)。提示NSCLC患者血清存在HGF和TGF-β高表达。

本研究进一步对血清HGF和TGF-β水平与NSCLC患者临床病理指标之间关系进行研究，结果表明临床分期Ⅳ期患者的血清HGF和TGF-β水平显著高于Ⅲ期(P<0.05)，肿瘤低分化组血清HGF和TGF-β水平显著高于高中分化组(P<0.05)。表明HGF和TGF-β在NSCLC血清中高表达，并随着肿瘤的恶性程度升高，其表达水平和强度增加。提示术前高水平的HGF和TGF-β意味着该患者可能处于肿瘤晚期，表明血清HGF和TGF-β水平作为监测肿瘤恶性程度是一个可行的指标。分析其原因可以在于：肿瘤进行晚期后，肺癌细胞丧失了对HGF和TGF-β负性调控作用的反应性，导致HGF和TGF-β无限增殖[15]。本研究结果显示：发生肿瘤转移组血清HGF和TGF-β水平显著高于肿瘤未转移组，相比较差异有显著性(P<0.05)。表明术前高水平的HGF和TGF-β意味着该患者已发生远处转移或淋巴结转移，进而提示研究者需要做进一步的检查，以避免进行不必要的手术。本研究结果表明HGF和TGF-β水平在性别、年龄和肿瘤病理类型之间差异无显著性(P>0.05)。提示HGF和TGF-β水平与NSCLC患者的性别、年龄和肿瘤病理类型无显著相关性。

胎盘生长因子 篇7

1 资料与方法

1.1 资料

收集中国医科大学附属盛京医院产科2008年1~12月入院病人中重度子痫前期合并FGR病人的胎盘组织14例(年龄19~39岁,平均28岁;孕周32~39周,平均36.5周)为研究组1,单纯重度子痫前期病人的胎盘组织15例(年龄22~35岁,平均29.4岁;孕周31~40周,平均36.2周)为研究组2;取同期的正常产妇胎盘组织19例(年龄21~37岁,平均29.3岁;孕周34~38周,平均37周)作对照组。3组产妇年龄和孕周比较差异无显著性。子痫前期重度的诊断标准参考第6版教材(乐杰)。胎儿生长受限诊断标准是指足月胎儿出生体重<2 500 g,或低于同孕龄正常体重的第10百分位数。3组孕妇均为单胎、初产,所有病例均排除内科合并症和其他产科并发症。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化法

3组孕妇于剖宫产术胎盘娩出后,立即取胎盘母体面正中组织大小约1 cm×1cm×1 cm,用生理盐水漂洗去掉血液,10%福尔马林液固定24 h,常规石蜡包埋,4μm连续切片,采用免疫组化SP染色法检测胎盘组织中VCAM-1的表达。免疫组化染色按说明书操作。

1.2.2 试剂

兔抗人多克隆抗体,即用型兔免疫组织化学SP试剂盒(北京博奥森生物技术有限公司)。

1.2.3 结果判定

VCAM-1免疫组织化学染色阳性均为胞膜或胞浆有棕黄色颗粒者。根据切片中胞质和胞膜染色深浅将染色强度分为4级:(1)0级,即阴性,细胞内无棕黄色颗粒出现;(2)(+)级,为弱阳性,少于10%的细胞内出现较浅的阳性染色,但明显高于阴性对照,个别细胞中可有中至强阳性染色;(3)(++)级,介于弱阳性和强阳性标准之间;(4)(+++)级,为强阳性,60%以上细胞中至强阳性染色,少数可为弱阳性染色。

1.3 统计学方法

所有数据均采用SPSS 13.0进行处理,多样本均数比较采用独立样本t检验,样本百分率比较采用Fisher精确检验,P<0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 3组胎盘绒毛合体滋养细胞中VCAM-1的阳性比较

VCAM-1在研究组1、研究组2和对照组合体细胞中的阳性表达率分别为57.14%、53.33%和89.47%。研究组1和研究组2胎盘合体细胞中VCAM-1阳性表达率均显著低于对照组,差异有显著性(均P<0.05)。而研究组1和研究组2胎盘合体细胞中VCAM-1阳性表达率未见明显差异(P>0.05)。见表1。

注:研究组1和对照组比较,P<0.05;研究组2和对照组比较,P<0.05;研究组1和研究组2比较,P>0.05

2.2 3组胎盘绒毛血管内皮中VCAM-1的阳性比较

VCAM-1在研究组1、研究组2和对照组胎盘绒毛血管内皮中的阳性表达率分别为92.86%、60.00%和21.05%。研究组1和研究组2胎盘绒毛血管内皮中VCAM-1阳性表达率均显著高于对照组,差异有显著性(均P<0.05);VCAM-1在研究组1阳性表达率显著高于研究组2,差异有显著性(P<0.05)。见表2。

注:研究组1和对照组比较,P<0.05;研究组2和对照组比较,P<0.05;研究组1和研究组2比较,P<0.05

3 讨论

细胞黏附分子是指由细胞合成,存在于细胞表面活细胞外基质中,介导细胞间或基质间相互接触或结合的一大类分子的总称[1],黏附分子多为糖蛋白,以配体-受体相对应的形式发挥作用。根据其结构特点,细胞黏附分子大致可分为5类,免疫球蛋白超家族为其中之一,VCAM-1是其中的主要亚家族,又称诱导性细胞黏着分子或CD106,是整合素亚家族VLA-4的配体,分子量100或110 k D,可表达与细胞因子活化的内皮细胞表面,还分布于上皮细胞、巨噬细胞表面。VLA-4可在白细胞、淋巴细胞、单核细胞上大量表达,作为VCAM-1的受体介导白细胞与活化的内皮细胞黏附[2]。ZHOU[3]等研究发现,足量的VCAM-1能够诱导和加强合体滋养细胞对子宫蜕膜层、肌层及血管的浸润,不仅使胎盘能够牢固附着在子宫壁上.还为母胎间氧和营养物质的交换提供有利条件,而子痫前期胎盘的滋养细胞层细胞缺乏VCAM-1的表达,从而不能完成黏附表型的转变,导致细胞滋养细胞分化受阻,不能浸润蜕膜、基层、螺旋小动脉[4],影响胎盘绒毛的重塑,造成胎盘的浅着床,胎盘缺血缺氧,导致子痫前期的发生。此外,VCAM-1与白细胞表面的VLA-4结合,可以使白细胞黏附在内皮细胞表面,引起白细胞活化,释放多种颗粒物质,如弹性蛋白酶、自由基和白三烯等,直接破坏内皮细胞基底膜及内皮下基层,使膜脂质过氧化、细胞溶解,导致血管内皮渗透性增加,血管收缩并进一步促进白细胞活化与黏附,导致恶性循环[5]。VCAM-1还可使白细胞通过内皮细胞间的连接处进入组织,引起炎性反应,并吸引更多的白细胞到内皮细胞表面,进一步促进白细胞活化与黏附,造成恶性循环[6]。VCAM-1可作为调节白细胞和内皮细胞激活的标志[7],而血管内皮VCAM-1的异常表达可反映内皮细胞的损伤。CATERINA等以硝普钠为供体研究一氧化氮(nitric oxide,NO)对内皮细胞VCAM-1表达的影响,结果显示,NO抑制IL-1诱导的VCAM-1表达。NO是一种信使分子,介导和调节体内多种生理功能,如松弛血管平滑肌、抑制血小板凝集等,在控制胎儿胎盘血流变化时发挥重要作用,以确保充足的胎盘血流量,胎儿营养及氧的供应。当血管内皮细胞受损失时血管内皮源性舒张因子一氧化氮等分泌减少,从而负反馈地促使VCAM-1表达增多。

本研究显示重度子痫前期及重度子痫前期合并FGR患者胎盘合体滋养细胞VCAM-1的阳性表达率均比对照组明显降低(P<0.05),可推测:VCAM-1与重度子痫前期及重度子痫前期合并FGR的胎盘着床表浅有关。与ZHOU等进行的研究相符。但由于二者胎盘合体滋养细胞VCAM-1的阳性表达率未见明显差异(P>0.05),表明VCAM-1是否与FGR有关难以确定。

此外,目前普遍认为,妊娠期高血压疾病的发生与血管内皮损伤有关,血管内皮受损,内皮细胞产生的血管舒缩物质失衡,可以引起妊娠期高血压疾病的病理改变。本研究显示重度子痫前期组及重度子痫前期合并FGR组胎盘绒毛血管内皮中VCAM-1的阳性表达率均较对照组明显升高(P<0.05)即证实了VCAM-1不仅与重度子痫前期及重度子痫前期合并FGR的胎盘着床表浅有关,而且参与重度子痫前期及重度子痫前期合并FGR患者的绒毛血管内皮损伤过程。同时,由于VCAM-1在重度子痫前期合并FGR组胎盘绒毛血管内皮中的阳性表达率明显高于单纯重度子痫前期组,说明FGR的发生可能与VCAM-1在血管内皮中表达增多有关,但其具体机制还有待进一步研究。

参考文献

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[4]ZHOU Y,DAMSKY CH,FISHER SJ.Preeclampsia is associatedwith failure of human cytotrophoblasts to mimic a vascular adhe-sion phenotype.One cause of defective endovascular invasion inthis syndrome[J].J Clin Invest,1997,99(9):2152-2164.

[5]蒋荣珍,穆卫红,黄亚绢,等.子痫前期血清对血管内皮细胞凋亡及细胞因子表达的影响[J].上海交通大学学报:医学版,2006,26(12):1358-1360.[5]JIANG RZ,MU WH,HUANG YJ,et al.Effect of serum ofpreeclampsia on apoptosis of vascular endothelial cells and ex-pression of cytokines[J].Journal of Shanghai Jiaotong University:Medicine Science,2006,26(12):1358-1360.Chinese

[6]杨宗利,王福玲,刘佩秋,等.血管内皮生长因子与血管细胞黏附分子在妊高征发病中的作用[J].中国优生与遗传杂志,2006,14(3):69-70.[6]YANG ZL,WANG FL,LIU PQ,et al.Effect of pathogenesis onthe VEGM and VCAM-1 in PIH[J].Chinese Journal of BirthHealth and Heredity,2006,14(3):69-70.Chinese

胎盘生长因子 篇8

1 材料与方法

1.1 组织来源

从屠宰场取泌乳山羊乳腺切取乳腺组织块置于含培养液的平皿中, 在超净台分离修剪, 洗净血凝块, 尽量剥离净脂肪组织和结缔组织, 将呈白色颗粒的腺胞组织剪成约1 mm3大小备用。

1.2 试剂与药品

RPMI1640培养基、EGF、胰岛素、氢化可的松、ITS、青霉素及链霉素、FBS、胰蛋白酶、Ⅳ型胶原, 以上试剂均购自Sigma公司。

1.3 培养皿的处理

用吸管吸取少许Ⅳ型胶原, 涂于培养皿底部, 以倾斜时不流动为宜, 经紫外线照射15 min, 备用。

1.4 原代细胞培养

1.4.1 培养液的准备

以灭菌超纯水配制的常规培养基RPMI1640做为基础液, 根据试验要求添加不同的培养因子。经0.22 μm 微孔滤膜过滤除菌, 4 ℃冰箱保存。

1.4.2 细胞培养

将修剪好的乳腺组织小块用牙科探针移入处理好的培养皿中, 置CO2 培养箱中4～5 h, 待组织块贴牢后加培养液至全部淹没组织块, 置37 ℃、5%CO2 培养箱中培养, 3 d 后每天观察1次。从第6天开始每2 d 换液1次。当细胞占培养皿底部达80%～90%时用胰酶消化, 用培养液制成细胞悬液传代。

1.5 细胞传代及上皮细胞的纯化

选80%～90%汇合的细胞, 吸出原有培养液。先加D-Hank’s液配制的0.25%胰蛋白酶, 以刚盖满细胞为宜, 37 ℃消化, 在倒置显微镜下观察, 待成纤维细胞脱壁时, 将酶液倾出。用D-Hank’s液清洗, 再加入专用培养液, 轻轻吹打, 制成细胞悬液, 用血细胞计数板计数, 将其稀释为1×105～1×106细胞悬液, 接种于其他培养皿继续培养。每3 d换液1次。

1.6 不同成分对乳腺上皮细胞生长的影响

取稀释后的细胞悬液1 mL, 以常规培养基为基础培养液进行培养, 分别添加胎牛血清、上皮生长因子 (EGF) 、胰岛素、氢化可的松和胰岛素-转铁蛋白硒钠 (ITS) 。不同因素的添加量见表1。

1.7 细胞计数

用移液枪吸取细胞悬液, 加1滴于细胞计数板, 10倍物镜下观察, 计数。计算公式:

细胞浓度 (个/ mL) = (4大格细胞之和/4) ×稀释倍数×104

2 结果与分析

2.1 FBS对乳腺上皮细胞生长的影响 (见图1)

从图1可知, 当FBS的添加量为5%时细胞数量最多, 为2.6×107个。此后随着添加量的增加, 细胞数量有减少的趋势, 当添加量达15%之后再增加添加量则细胞数量基本保持不变。

2.2 EGF对乳腺上皮细胞生长的影响 (见图2)

从图2可知, 随着EGF添加量的增加细胞数量也增加, 当EGF的添加量为10 μg/L时细胞数量最多, 达1.29×107个。此后随着添加量的增加细胞数量有减少的趋势, 当添加量达15 μg/L后再增加添加量则细胞数量基本保持不变。

2.3 胰岛素对乳腺上皮细胞生长的影响 (见图3)

从图3可知, 随着胰岛素添加量的增加细胞数量也增加, 当胰岛素的添加量为1.0 mg/L时细胞数量最多, 为2.63×106个。此后随着添加量的增加, 细胞数量开始减少。

2.4 氢化可的松对乳腺上皮细胞生长的影响 (见图4)

从图4可以看出, 随着氢化可的松添加量的增加细胞数量也增加, 当氢化可的松的添加量为0.1 mg/L时, 细胞数量最多为7.62×106个。此后随着添加量的增加, 细胞数量开始减少。

2.5 ITS对乳腺上皮细胞生长的影响 (见图5)

从图5可知, 随着ITS添加量的增加细胞数量也增加, 当ITS的添加量为10 mL/L时细胞数量最多, 为4.48×106个。此后随着添加量的增加, 细胞数量开始减少。

3 讨论与结论

在此试验中, FBS对上皮细胞生长的影响明显高于其他几个因素。这可能是由于血清中所含有的生长因子和生长激素共同作用的结果。

乳腺上皮细胞是制作乳腺生物反应器的靶细胞, 可产生医疗价值很高的药用蛋白。对于开发动物乳腺生物反应器来说, 建立永久乳腺上皮细胞系十分关键, 这个细胞系可用来研究细胞通讯与信号转导、细胞增殖、细胞分化、细胞衰老演变等规律;可作为泌乳模型研究乳蛋白基因表达及乳分泌的机制, 探索提高产奶量的方法和途径;可作为检测系统, 评价新药及化学产品的毒性及效能;在干奶期是研究细胞凋亡及乳腺退化的宝贵材料;还可用来研究乳腺上皮细胞恶变及乳腺癌发生的机制。

不同激素和生长因子对乳腺细胞生长均具有调控作用, 但作用程度不同。其中 5% FBS、10 μg/LEGF、1.0 mg/L胰岛素、0.10 mg/L氢化可的松、10 mL/L ITS对乳腺上皮细胞生长的影响最大。

参考文献