芦荟多糖

芦荟多糖（精选5篇）

芦荟多糖 篇1

1 实验材料

库拉所芦荟 (优质库拉索芦荟, 市售)

2 实验药品 (分析纯)

葡萄糖标品 (中国医药上海化学试剂公司) , 三氯甲烷、正丁醇、95%的乙醇 (北京化工厂) , 浓硫酸 (天津福晨化学试剂厂) , 苯酚 (郑州明欣化工产品有限公司) , 活性炭 (天津市美化泰克科技有限公司) 。

3 实验设备

分析天平, 感量0.01g (北京赛多利斯天平有限公司) , DK-8D型电热恒温水槽、101-A点热鼓风干燥箱 (上海医用恒温设备厂) , 721分光光度计 (上海精密科学仪器有限公司) , 组织捣碎机 (常州国安赛尔包装机械有限公司) , DHZ-DⅢ型循环水真空泵 (市英峪华予仪器制造厂) 。

4 实验方法

4.1 芦荟多糖的提取工艺。

芦荟清洗→称取→捣碎→加水→热水浸提→减压抽滤→浓缩→醇沉→过滤→去蛋白→脱色→醇沉→过滤→用水溶解→定容→测量。

用组织捣碎机把称好的芦荟捣碎, 确保细胞破碎, 才能够最大限度的提取芦荟当中的多糖。将捣碎的芦荟匀浆以一定的料液, 料液比为m/v是芦荟的质量与水的体积之比, 一定的浸提温度和一定的浸提时间进行多糖的提取, 冷去后进行过滤分离。对所得到的上清液进行浓缩, 浓缩到一定的体积。向浓缩的的上清液中加入一定体积的95%的乙醇, 使醇能够达到一定的浓度, 然后静置隔夜, 再进行过滤, 收集沉淀。将正丁醇与三氯甲烷以1:1的比例混合, 取得的混合溶液加入所得的沉淀进行充分的震荡, 直到蛋白沉淀析出为止, 取得上清液。Sevage法脱蛋白条件温和, 处理后的糖类性质不变, 本文用此法去除粗总糖中的蛋白。芦荟多糖的溶液经浓缩后颜色较深, 含有多种色素, 影响生产工艺指标的选定和最终成品的质量, 必须加以去除。脱色用活性炭除吸附有色物质外还能除浊、除臭, 降低糖浆的灰分含量, 提高产品稳定性等。将所得的上清液加入一定的活性炭进行脱色, 放到热水浴中煮30~40min。将活性炭脱色后的溶液进行醇沉, 加入一定量的95%的乙醇, 进行最后一次的去除杂质, 使得到得粗多糖的杂志质尽可能的减少, 使多糖尽可能的纯化。过滤溶解并且定容:过滤到滤纸上的粗多糖, 用蒸馏水冲洗, 并且把所得的多糖溶液定容100ml的容量瓶中, 进行含量的测定。

4.2 总糖含量的测定。

采用苯酚-硫酸法测定总糖含量。苯酚-硫酸试剂可与游离的单糖或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸以及糖的甲基衍生物发生显色反应, 己糖在490nm (戊糖及糖醛酸在480nm) 处有最大吸收, 并且吸收值与糖含量呈线性关系。准确称取85℃干燥至恒重的无水葡萄糖25mg于250m L容量瓶中, 加水至刻度, 分别吸取0.1ml, 0.2ml, 0.4ml, 0.6ml, 0.8ml, 1.0ml, 用水补至1.0ml, 后加入6%苯酚0.5ml及浓硫酸2.5ml, 摇匀, 室温放置30分钟后在490nm测吸光度, 以1.0ml水按同样的显色操作为空白, 横坐标为糖微克数, 纵坐标为吸光度值, 得到标准曲线。取样品液l.0ml, 按以上操作步骤测定吸光度值, 从标准曲线上查知对应糖微克数, 测得样品含量。

4.3 单因素实验。

据现有的糖类研究资料结果表明, 影响总糖提取率的因素有浸提温度、浸提时间、料水比、浸提次数等。因而为确定芦荟多糖的提取工艺, 本试验主要从提取次数、料水比、浸提温度、浸提时间等因素来考察, 从而为正交试验设计的水平提供有意义的参考范围。每组试验分别进行3次平行试验, 总糖提取率以其3次试验的平均值计。

4.4 正交实验。

选取主要影响因素料液比、浸提温度、浸提时间、提取次数四项为考察因素, 依据L9 (34) 正交试验表进行设计, 以确定芦荟多糖提取的最适工艺。

从正交试验结果中可以看出, 由正交实验的k值分析, 则最优的工艺条件为A2B3C2D3, 即为工艺条件, 提取次数为2次, 提取时间为2小时, 提取温度为90℃, 料液比为1:10。由极差分析则对提取率的影响最大的因素为浸提温度, 相对来说料比的影响相对较小, 影响总糖提取率的因素主次关系为:浸提温度>提取次数>提取时间>料液比, 理论上的最佳提取工艺为:浸提温度90℃、料液比1:10、提取时间为2h, 提取次数为2次。

4.5 验证试验。

称取芦荟, 并按照所选得最佳的提取工艺进行实验, 设置浸提温度为90℃, 浸提次数为2次, 浸提时间为2h, 料液比为1:10, 若所得的提取率高于正交实验的最高提取率, 那么说明, 我们所选的实验条件为最优的。由验证试验的数据可以看出, 在实验条件为, 浸提温度90℃, 浸提次数2次, 浸提时间2h, 料液比1:10时所得到的多糖平均提取率为0.28175%, 高于正交时最高提取率0.2814%, 说明所选取的提取工艺为最优的。

5 芦荟皮渣, 芦荟全株, 芦荟凝胶的多糖含量比较

5.1 预处理。

把芦荟的皮渣和芦荟的果肉分离, 分离之后进行称取, 再放入组织捣碎机中捣碎, 之后按照全株的提取方法进行芦荟的多糖的提取。

5.2 实验条件的确定。

选取浸提温度为90℃, 提取次数为2次, 提取时间为2h, 料液比为1:10, 醇沉浓度为80%, 醇沉时间为6h, 醇沉温度为室温, 进行芦荟的皮渣, 芦荟的凝胶, 芦荟的全株的多糖提取。

6 结论与展望

芦荟含有多种活性成分, 通过不同的机制对人体产生多种生理功能.其中对芦荟的重要成分芦荟多糖的研究也到了一个新的领域, 芦荟多糖有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、抗病毒、抗辐射等方面的活性功能。本文进行的是库拉所芦荟多糖的提取和含量的测定, 首先通过单因素实验和正交实验对库拉索芦荟中的多糖提取工艺进行优化, 然后再进行芦荟的叶渣和芦荟的凝胶中的多糖含量进行测定, 并进行比较。本实验主要采取的是水提法进行芦荟多糖的提取, 采用苯酚硫酸紫外分光光度法对芦荟多糖进行测定。经过单因素实验, 并通过四因素三水平的正交实验, 我们最终确定了库拉索芦荟全株的多糖的提取工艺条件为提取次数为2次, 提取时间为2h, 料也比为1:10, 浸提温度为90℃, 醇沉浓度为80%, 醇沉时间为6h, 醇沉温度为室温。对芦荟的皮渣, 芦荟的果肉, 还有芦荟全株进行比较, 实验结果显示, 芦荟叶的多糖的提取率为0.4162%, 汁液的提取率为0.1371%, 芦荟的提取率为0.2781%。

摘要：芦荟多糖有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、抗病毒、抗辐射等方面的活性功能。本文进行的是库拉所芦荟多糖的提取和含量的测定。对芦荟多糖的提取工艺的优化, 可以为我们以后的多糖的工业化生产提供更多的工艺参数。也可以为今后的研究提供一些参考。

关键词：芦荟多糖,紫外分光广度法,正交实验法

参考文献

[1]董银卯, 陈存杜, 赵华等.芦荟多糖、芦荟油、芦荟素的提取及应用[J].天然产物研究与开发, 2001, 14 (2) .

[2]董志超, 何际婵, 王建荣等.库拉索芦荟粗多糖提取工艺优化[J].制剂技术, 2007, 19 (16) .

[3]刘树楷.新型化工、食品、医药材料-芦荟[J].化工时刊, 1994 (5)

[4]闫吉昌, 崔春月, 张奕等.芦荟多糖的分析纯化及结构分析[J].高等学校化学学报, 2003, 24 (7) .

[5]苗艳艳.库拉所芦荟多糖的提取纯化及含量测定[J].中华中医药学刊, 2009, 27 (10) .

[6]张翠利.开封市场芦荟药材中芦荟苷和芦荟多糖含量考察[J].河南大学学报 (医学版) , 2006, 25 (4) .

[7]李燕, 王晓丽, 俞飞峰.响应曲面法优化超声辅助提取芦荟凝胶多糖的工艺[J].食品研究与开发, 2010, 31 (6) .

[8]马稳, 袁红霞.微波辅助提取芦荟中芦荟多糖的研究[J].食品科学, 2008 (9) .

芦荟多糖的提取与含量测定 篇2

1 材料

1.1 仪器

7530紫外分光光度计 (上海第三分析仪器厂) , 1000r/min高速自控组织捣碎机 (江苏盐城市龙冈医疗器械厂制造) , JB-1型搅拌器 (上海雷磁新泾仪器有限公司) , LG10-2.4A型高速离心机 (北京医用离心机厂制造) 。

1.2 试药

无水乙醇 (齐齐哈尔轻工学院试剂厂, AR) ;硫酸 (上海化学试剂有限公司, AR) ;苯酚 (上海试剂一厂, AR;重蒸后使用) ;丙酮 (齐齐哈尔轻工学院试剂厂, AR) , 乙醚 (沈阳市试剂五厂, AR) ;D-甘露糖 (上海试剂二厂, AR) 。

2 方法与结果

2.1 标准曲线绘制

精密称取105℃干燥至恒重的甘露糖0.100 g置于100 ml容量瓶中, 加蒸馏水定容。从中精密量取5 ml置于50 ml容量瓶中, 加蒸馏水定容。分别精密吸取0 ml、1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml置于50 ml容量瓶中, 加蒸馏水定容。分别精密吸取2 ml于试管中, 加苯酚1 ml摇匀, 加浓硫酸5 ml, 迅速摇匀后, 静置5 min, 沸水水浴加热15 min, 冷却至室温, 分光光度法于490 nm波长处测吸收度, 结果见表1。

2.2 芦荟多糖的提取

采用水提醇沉法提取芦荟多糖。取芦荟叶片洗净、去刺, 在去离子水中浸泡, 以除去表皮渗出的黄色液汁。然后切去表皮, 将内层凝胶至于去离子水中浸洗, 捣碎, 纱布过滤, 冷藏过夜, 次日离心, 抽滤, 所得芦荟汁经浓缩后, 再次离心, 以除尽纤维质, 冷藏备用。然后向芦荟凝胶浓缩汁加入无水乙醇, 使其乙醇终浓度为80%, 沉淀12 h后, 高速离心得多糖沉淀。取沉淀物溶于蒸馏水中配成溶液, 过滤, 摇匀, 定容至200 ml, 即得芦荟多糖溶液。

回归方程为C=0.0145D-0.0169 (r=0.9940)

2.3 总糖含量测定

精密量取芦荟粗多糖溶液5 ml置于50 ml量瓶中, 加蒸馏水溶解并稀释至刻度, 从中精密吸取2 ml于置于试管中, 照2.1项下自加苯酚起依次操作, 测得吸收度为1.524, 依回归方程计算, 再乘上稀释倍数, 得芦荟多糖相对含量为8.796 mg/ml。

2.4 精密度试验

平行取六份甘露糖和芦荟多糖溶液, 苯酚-硫酸法显色后测定D值。结果重现性良好。结果见表2。

2.5 加样回收率试验

取芦荟多糖提取液5份, 分别加入一定量的甘露糖标准液, 进行回收试验。结果见表3。

3 讨论

3.1 芦荟多糖的测定多是以葡萄糖为标准品[4,5], 而芦荟多糖的主要组成单糖是甘露糖, [6]而且在实验过程中, 也采用了葡萄糖标准品、甘露糖标准品与芦荟多糖溶液做对照, 发现芦荟多糖的吸收光谱与甘露糖基本一致, 除了490 nm处的最大吸收峰外, 在430nm处还有一个次吸收峰, 而葡萄糖则无此特征, 因此, 本文采用甘露糖为标准测定芦荟多糖的含量, 能更准确地反映真实值。

3.2 芦荟多糖的研究已有一些报导, 但芦荟产地不同、种植条件不同会影响芦荟多糖的含量, 为详细考察本地产芦荟多糖含量, 为地方经济发展做一定的实验基础研究, 故本文采用的芦荟均为黑龙江省牡丹江芦荟培育基地所产的斑纹芦荟。结果发现本地产芦荟多糖含量丰富, 作为医药保健品来开发利用是很有发展前途的。

3.3 采用苯酚一浓硫酸法测定芦荟多糖含量, 此方法稍繁琐但比较经典, 此外, 还可采用旋光法与高效液相色谱法进行测定, 由于仪器条件限制, 没有采用。

参考文献

[1]齐永家, 李俊强.芦荟栽培与加工利用, 长春:吉林科学技术出版社, 2000.

[2]李文亭, 苗艳波, 师海波, 等.芦荟研究新进展深圳中西医结合杂志, 1998, 8 (1) :41-48

[3]杨继远, 袁仲.芦荟化学成效的保健功效与产品开发, 2001, (4) 6-8.

[4]陈丹, 等.斑纹芦荟与库拉索芦荟原胶中多糖含量研究, 中国中药杂志, 1996, 21 (6) :359-360.

[5]郑荣珍, 等.蕃拉芦荟水溶性多糖的分离与鉴定, 热带作物学报, 2000, 21 (3) :49-57.

芦荟多糖 篇3

1 实验部分

1.1 实验材料

葡萄糖、苯酚、浓硫酸、无水乙醇、石油醚、丙酮、碳酸钠、硫酸铵、碳酸钠、甘油、透明质酸均为分析纯,芦荟(自养)。

1.2 实验设备

紫外可见近分光光度计(UV-3010,日本日立公司),可调功率微波化学反应器(WBFY-201,巩义予华仪器有限公司),电子精密天平(BS223S,上海精密仪器表有限公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 葡萄糖标准曲线的绘制[14]

精确称取葡萄糖103 mg(105℃烘干至恒重),加蒸馏水溶解并定容于100 m L容量瓶中,得1.03 mg/m L的葡萄糖对照品溶液。分别取葡萄糖对照品溶液0.00、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00、2.40 m L置于100 m L容量瓶中,定容。用移液管分别吸取2 m L于试管中,然后分别加入5%新蒸苯酚1 m L;充分振荡混匀后,快速加入5 m L浓H2SO4,摇匀后静置5 min;再沸水浴中加热15 min,取出后迅速冷却至室温。在浓H2SO4作用下,多糖水解成单糖,并迅速脱水形成糖醛衍生物,然后与苯酚缩合反应显色,于490 nm处测定各溶液的吸光度。以吸光度A对质量浓度ρ(mg/m L)进行线性回归,得回归方程ρ=0.0827 A-0.0008,r=0.9981。

1.3.2 微波提取法

摘取新鲜的芦荟叶片,洗干净后除皮,刮下叶内凝胶部分,切成3~4 cm小块。于榨汁机中榨制15 min,除掉泡沫,得芦荟凝胶原汁。称取芦荟凝胶原汁5份,每份质量约10 g。再加入一定量的蒸馏水后,置于微波反应器中。预设一定的温度、微波时间、微波功率进行微波提取芦荟多糖。微波提取完后趁热过滤,浓缩滤液后定溶于100m L容量瓶中。移取5 m L溶液置于锥形瓶中,加入20 m L无水乙醇沉淀,密封,静置5 h。然后,将上述多糖和乙醇的混合物离心,将沉淀依次用无水乙醇、石油醚(60-90)、丙酮洗涤,即得芦荟粗多糖。

1.3.3 芦荟多糖提取率的测定

将上述制备的沉淀物加蒸馏水溶解,定容于100 m L容量瓶中。移取2 m L多糖溶液于试管中,加入5%新蒸苯酚试液1 m L,充分混匀后,迅速加入5 m L浓H2SO4,摇匀静置5 min,沸水浴加热15 min;取出后使溶液迅速冷却至室温,于490nm处测定吸光度,并按下式计算芦荟多糖的提取率。

式中:ρ为多糖的质量浓度,mg/m L;V为多糖溶液的体积,m L;n为多糖溶液的稀释倍数;m为样品的质量,g;k为多糖的提取率,%。

2 结果与讨论

2.1 单因素实验

2.1.1 微波功率对多糖提取率的影响

将处理后的芦荟汁按料液比1∶1(g/m L)加入蒸馏水,然后设置微波温度80℃,再分别在微波功率为100、200、300、400、500、600、700、800 W时,辐射5 min。处理并计算多糖提取率,结果见图1。

从图1可知,微波辐射功率对提取率有显著的影响,当微波辐射功率在100~500 W时,多糖提取率随微波辐射功率的增加而增加,并在500W时提取率最高。随着微波功率的增加,迅速生成大量的热能,分子运动速度加快,使细胞破裂导致活性物质扩散到溶剂中,提取率逐渐增大。当微波功率大于500 W后,多糖提取率略有下降,可能是由于微波辐射功率过高产生热效应,相同时间内使提取液的温度快速提升,部分活性物质因受热产生损失;受热效应影响溶剂挥发速度加快,也使得提取受到影响。因此,提取功率选择500W为宜。

2.1.2 料液比对多糖提取率的影响

将处理后的芦荟汁分别按1∶1、1∶2、1∶4、1∶6、1∶8、1∶10 g/m L的料液比加入蒸馏水,然后在微波功率500 W、温度80℃条件下作用5 min。处理后计算多糖的提取率,结果见图2。

从图2看出,料液比在1∶1~1∶8 g/m L时,提取率随着料液比的增加而升高;当料液比高于1∶8g/m L以后,再增加料液比,多糖的提取率增加减缓。考虑生产成本及后续处理的难度,所以液料质比也不宜太高。因此,实验选取料液比1∶8g/m L。

2.1.3 微波时间对多糖提取率的影响

将处理过的芦荟汁按料液比1∶8 g/m L加入蒸馏水,然后在微波功率500 W、温度80℃条件下分别作用1、3、5、7、9、11 min。处理后计算多糖的提取率,结果见图3。

从图3看出,微波辐射时间对芦荟多糖提取率有较大影响,提取时间在7 min以下时,随着微波时间的延长,多糖提取率增加,并在微波时间为7 min时达到最大值。微波辐射时间不宜过长,多糖溶出物饱和后,多糖不再溶出;时间延长后,溶出的杂质也会增多。

2.1.4 温度对多糖提取率的影响

将处理后的芦荟汁按料液比1∶8 g/m L加入蒸馏水,然后在微波功率500 W、时间7 min条件下分别作用20℃、30℃、50℃、70℃、90℃的条件下进行多糖提取,结果见图4。

从图4看出,提取温度在20~50℃时,随着提取温度的增加,芦荟多糖的提取率也随之增加;当提取温度超过50℃时,芦荟多糖提取率呈下降趋势。提取温度高会导致多糖裂解甚至失活,使得多糖得率降低。因此,适宜温度为50℃。

2.2 正交实验设计

根据上述单因素的实验结果,选取微波辐射功率、时间、料液比、温度4项为考察因素,依据L9(34)正交实验表进行设计,见表1。数据平行2次测定,以确定多糖提取的最佳工艺。

以芦荟多糖提取率为考察指标,采用4因素3水平正交实验方案安排实验,对微波提取工艺进行优化,结果见表2。

从表2可知,各因素对芦荟多糖提取率的影响主次顺序为:C>A>B>D,即时间>功率>料液比>温度。均值分析表明,最佳工艺条件组合C2A3B1D2,即微波时间为5 min、微波功率600W、料液比为1∶6、温度为50℃。说明芦荟多糖在微波提取中,辐射时间是影响芦荟多糖提取率最显著的因素,其次是微波功率对芦荟多糖的提取率影响也较明显,温度对多糖提取率影响最小,与单因素实验结果基本对应。因为最佳组合不在实验设计中,需要补做验证实验。按照最佳组合条件提取3次,芦荟多糖的提取率为0.2 317%。

3 保湿性能研究

3.1 吸湿性实验

将由饱和硫酸铵水溶液作为相对湿度(RH)81%的干燥器和由饱和碳酸钠水溶液作为相对湿度(RH)43%的干燥器置于20℃恒温环境中;分别精确称取两份0.5 g试样(用最佳工艺条件提取的芦荟多糖)、甘油、透明质酸,置于直径为3cm的称量皿中;再放到两个干燥器里。48 h后取出,准确称量各试样的质量量。由实验前后试样的质量差,用下式计算出试样的吸湿率,平均实验两次取平均值,结果见表3。

式中:m0为试样放置前的质量,mn为放置24 h后的质量。

3.2 保湿性实验

分别精确称取两份0.5 g芦荟多糖(用最佳工艺条件提取)、甘油、透明质酸,置于称量皿中(直径3 cm)。加入质量为样品10%的去离子水,分别放置于两个干燥器中:一个干燥器内放有饱和碳酸钠水溶液(RH=43%),另一个放有饱和硫酸铵水溶液作为相对湿度(RH)81%的干燥器。48 h后取出,准确称量各试样的质量,平均实验两次取平均值。保湿率根据测定前后试样的质量差计算,结果见表3。

式中:m(H2O,0)为试样含水质量,m(H2O,n)为放置n天后试样含水质量。

从表3中看出,在低湿度(RH=43%)条件下甘油是较好的吸湿剂,但保湿性能较差;透明质酸是“第四代化妆品”中广泛使用的理想的天然保湿因子,芦荟多糖的吸湿和保湿性能略低于透明质酸,差别较小,表明芦荟多糖在皮肤角质层中与水结合的能力和透明质酸相当,但其保湿性能显著优于甘油;在RH=81%时,芦荟多糖有强的吸湿性能且优于甘油,但在相对湿度较小的干燥器中,吸湿性能略低于甘油。可见,芦荟多糖具有良好的保湿作用,而且满足了人们在安全性、绿色环保方面的诉求。

4 结论

芦荟多糖 篇4

本文在参考传统提取方法的基础上, 创新性地提出酶-超声双辅助提取中华芦荟多糖, 并通过单因素和正交设计实验优化提取条件。

1 材料与方法

1.1 材料

无水乙醇、丙酮、乙酸乙酯、苯酚、浓硫酸、果胶酶、纤维素酶、中药粉碎机、超声清洗仪、烘箱、电子天平和紫外分光光度计。

1.2 方法

1.2.1 酶-超声双辅助提取中华芦荟多糖

新鲜、肥厚的中华芦荟若干, 清洗, 小心去皮, 取肉质部分, 搅碎, 加水浸泡过夜, 加果胶酶/纤维素酶作用2 h, 超声恒温水浴加热, 4层纱布过滤得滤液, 浓缩, 搅拌, 滴加入乙醇溶液中, 5 000 r/min离心5 min, 取上清, 用丙酮、无水乙醇、乙酸乙酯洗涤离心得沉淀, 烘干。

称取样品若干溶于水, 移入2 m L比色管中, 加入1.0m L 6%苯酚溶液及5.0 m L浓硫酸, 静置20 min, 摇匀, 40℃放置15 min。以空白组作试剂空白, 于490 nm处测吸光度值。

1.2.2 工艺优化实验

酶种类:果胶酶/纤维素 (m L∶g) 为0∶0、0∶0.1、0.1∶0、0.2∶0.1、0.1∶0.2、0.2∶0.2、0.2∶0.3。料液比为1∶5、1∶10、1∶20。超声时间:20、30、40、50、60 min。超声温度为40、50、60、70、80℃。超声功率为40、60、80、100 W。超声次数响:1、2、3、4、5次。乙醇浓度:滴加入1、2、2.5、3、3.5倍体积95%乙醇沉淀。

在单因素实验基础上设计正交设计实验见表1。

2 结果与分析

优化实验结果表明, 酶的加入有利于多糖的提取, 综合考虑成本及效率, 确定纤维素酶:果胶酶 (v∶m) 比例为1∶2;溶剂的增加对产率为负增长, 说明溶剂的量不是提取的关键, 确定料液比1∶5;乙醇浓度为80%时, 芦荟多糖提取产率最高。

超声时间对多糖产率的帮助呈现先增后趋于稳定, 确定超声时间应为50 min;超声时间对多糖产率的帮助呈现先增后减, 确定超声温度为70 ℃。超声功率和超声次数对芦荟多糖的提取产率影响均不是很大, 考虑能耗和效率, 最终超声功率为60 W、超声次数为3次;

正交试验结果表明, 在4种因素的作用下, 对中华芦荟多糖产率影响的排序为超声温度>超声时间>料液比>乙醇浓度, 最终确定最佳提取条件为A3C3B3D2, 即超声温度80 ℃、超声时间60 min、料液比1∶20、乙醇浓度80%。

3 结论与讨论

本试验优化了由酶-超声联用双辅助提取中华芦荟多糖的提取工艺, 最佳提取工艺条件为, 纤维素酶:果胶酶 (v∶m) 为1∶2、超声温度80 ℃、超声时间60 min、料液比1∶20、乙醇浓度80%、超声功率300 W、超声次数3次。

参考文献

芦荟多糖 篇5

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

昆明种小鼠30只,雌雄兼用,由黑龙江省肿瘤研究所提供,动物合格证号:医动字9-3-2。S180荷瘤小鼠购于黑龙江省肿瘤研究所。

1.1.2 主要试剂与药物

纯度75.6%库拉索芦荟多糖及88.0%木立芦荟多糖,由中科院上海药物研究所提供。抗bcl-2多克隆抗体,山羊抗兔IgG二抗,免疫组化检测试剂盒,DAB显色剂均购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.1.3 仪器

血球计数板(上海市求精生化仪器厂生产),电子天平(上海第二仪器厂),切片机(莱卡公司,德国),显微镜(奥林巴斯AH-2型,日本)。

1.2 实验方法

1.2.1 芦荟多糖对S180小鼠的肿瘤抑制率

将传代8～10 d健康状况良好的S180荷瘤小鼠脱颈处死,酒精浸泡消毒,无菌状态下取出腹水,并用无菌生理盐水按一定的比例稀释成瘤细胞悬液(瘤细胞含量约为2×107/ml)。取纯系昆明种小鼠30只,每只小鼠右腋窝皮下接种0.2 ml。将接种瘤细胞的小鼠随机分为三组,每组10只:1组为模型组;2组为库拉索芦荟多糖组[25 mg/(kg·d)];3组为木立芦荟多糖组[25 mg/(kg·d)]。于肿瘤接种24 h后,连续灌胃给药10 d,给药容量为0.2 ml/10 g,模型组给予同容量生理盐水,停药后24 h脱颈处死小鼠,剖取瘤体,称取其重量,计算肿瘤抑制率,肿瘤抑制率=1-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重[2]。

1.2.2 免疫组织化学染色检测分析

给药10 d后,处死小鼠,剥离瘤组织,10%甲醛固定肿瘤组织,石蜡包埋,以5μm厚度连续切片,常规二甲苯脱蜡至水,采用SP法检测瘤组织bcl-2蛋白的表达。免疫组化过程严格按照试剂盒要求进行。结果判定以细胞浆内有棕黄色颗粒为阳性表达,高倍镜下(20×)随机选取5个视野,用Image-Pro Plus 6.0软件(Media Cybernetics公司)测定每个视野下棕黄反应物面积,计算阳性表达率(阳性表达率=阳性表达面积/总面积),然后进行组间比较。

1.3 统计学处理

数据以均数±标准差表示,组间比较以SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析,P<0.05为有显著性差异。

2 结果

2.1 芦荟多糖对S180小鼠的肿瘤抑制率

模型组瘤重(583.40±74.46)mg;库拉索芦荟多糖组及木立芦荟多糖瘤重分别为(335.30±58.02)mg、(294.40±30.52)mg,两组的抑瘤率分别为42.53%和45.54%,可见,两种芦荟多糖在25 mg/(kg·d)剂量时可明显抑制小鼠移植性肿瘤S180的生长。

2.2 芦荟多糖对瘤组织中bcl-2表达的影响

bcl-2蛋白阳性表达染色主要定位于肿瘤细胞浆内(图1),模型组瘤组织细胞浆中见大量棕黄色颗粒,两种芦荟多糖组瘤组织细胞浆中阳性表达较模型组明显减少。图像分析结果显示,两种芦荟多糖组瘤组织中bcl-2阳性表达率明显减少,显著低于模型组(P<0.05),而两种芦荟多糖组bcl-2阳性表达率之间比较差异不显著(表1)。

与模型组比较,*P<0.05Compared with the model group,*P<0.05

3 讨论

AP作为药用品种芦荟含有的主要生物活性物质之一,其抗肿瘤活性已成为近年来我国芦荟研究的热点。已有研究主要采用的AP纯度为30%～50%,观察到AP对小鼠移植性实体瘤的生长有一定的抑制作用[3]。笔者观察了不同剂量[100 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)、25 mg/(kg·d)]纯度为75.6%库拉索芦荟多糖及88.0%木立芦荟多糖的抗肿瘤作用(正待发表中),结果发现,两种芦荟多糖[25 mg/(kg·d)]对荷瘤小鼠的肿瘤抑制率达到40%以上,显示出较好的体内抗肿瘤作用,且两种芦荟多糖的抗肿瘤作用无明显差异,与文献报道相似。

关于其抗肿瘤作用机制目前多数研究认为,AP主要是通过增强机体的细胞和体液免疫功能发挥作用,此外,AP也可以降低肿瘤细胞膜钠泵活性[4]、增加红细胞免疫功能[5]等发挥抗肿瘤作用。

肿瘤的发生、发展不仅与机体的免疫功能有关,也与细胞凋亡异常密切相关。针对肿瘤细胞凋亡失衡进行干预成为肿瘤治疗的一种新策略,许多与凋亡有关的基因已经成为抗肿瘤新药设计的靶点。bcl-2是凋亡抑制蛋白,是调控肿瘤细胞凋亡的关键蛋白[6],其在多种肿瘤中的表达增强已经被证实,几种通过减少细胞中bcl-2含量的药物已开始应用于癌症化疗,抑制bcl-2的表达在肿瘤治疗方面受到广泛关注。

本组实验应用免疫组织化学方法检测了两种芦荟多糖对S180荷瘤小鼠肉瘤组织中凋亡相关蛋白bcl-2表达的影响,结果表明两种芦荟多糖可以显著降低bcl-2表达水平,提示芦荟多糖的体内抗肿瘤作用可能与下调blc-2表达、进而影响肿瘤细胞的凋亡有关。

陈伟、陈丹[7,8]等的研究表明,库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞具有激活作用,木立芦荟多糖可以提高免疫抑制小鼠白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子α等的水平,而巨噬细胞所释放的效应分子也被研究证实可参与细胞凋亡的调节过程,并对bcl-2的表达产生影响[9,10]。因此,推测两种芦荟多糖可能通过促进免疫细胞释放效应分子(IL-2、TNF-α),下调bcl-2表达,促发肿瘤细胞凋亡,从而抑制肿瘤生长。

参考文献

[1]Antoni F,Emma S,Sanchez S.Compositional features of polysaccharides from Aloe Vera(Aloe barbadensis Miller)plant tissues[J].Carbohydrate Polymers,1999,39(2):109-117.

[2]徐淑云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].2版.北京:人民卫生出版社,1991.

[3]邹翔,汲晨锋,高世勇,等.3种芦荟多糖抗肿瘤作用的比较分析[J].哈尔滨商业大学学报:自然科学版,2004,20(1):14-17.

[4]彭海生,张秀娟,贾绍华,等.芦荟多糖对荷瘤小鼠肿瘤细胞钠泵的影响[J].哈尔滨商业大学学报:自然科学版,2003,19(1):6-7.

[5]贾绍华,张秀娟,彭海生,等.库拉索芦荟多糖对S180小鼠红细胞膜脂流动性的影响[J].哈尔滨商业大学学报:自然科学版,2002,18(5):499-501.

[6]Rosse T,Olivier R,Monney L,et al.Bcl-2prolongs cell survival after Bax-induced release of cytochrome c[J].Nature,1998,391(6666):496-499.

[7]陈伟,林新华,陈俊,等.库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的体外激活作用[J].中国药学杂志,2005,40(1):34-37.

[8]陈丹,王瑞国,包国荣,等.闽产木立芦荟多糖对小鼠免疫功能的影响[J].福建医科大学学报,2005,39(2):154-155.

[9]王媛,陈惠英,刘文虎,等.TNF与U937细胞的bcl-2基因表达及细胞周期的关系[J].临床肿瘤学杂志,2000,5(1):10-12.