血清CTGF（精选3篇）
血清CTGF 篇1
肝脏纤维化是慢性肝病患者发展的普通后果, 如何早期对肝脏纤维化进行判断, 是医师给予患者早期治疗的关键。临床对肝脏纤维化的诊断, 可使用肝脏细胞活检、超声、CT等[1]。血清CTGF是一种较为敏感的评价肝炎纤维化程度的指标, 我院为分析其对纤维化程度的判断价值, 现进行了本次实验, 现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
将我院2009年2月至2011年9月收治的165例慢性乙型肝炎患者根据其纤维化程度进行分组, 并将同期在我院进行健康体检的健康者50例作为对照组。
慢性乙型肝炎患者中, 男性100例, 女性65例, 患者年龄在25～78岁, 平均 (48.27±10.83) 岁。所有患者均经过肝穿刺活组织检查, 根据中华医学会病毒性肝炎防治标准对患者肝硬化程度进行分期, 包括S0期31例, S1期35例, S2期32例, S3期43例, S4期24例。各期患者之间性别、年龄等无明显差异, P>0.05, 具有可比性。
健康组50例, 其中男性31例, 女性19例, 年龄在26～79岁之间, 平均 (47.27±11.27) 岁。所有健康者均经过血常规、生化、B超等检查证实无肝脏疾病。
乙型肝炎组与健康组比较, 性别、年龄等一般情况无明显差异, P>0.05, 具有可比性。
1.2 方法
对所有患者均进行肝组织穿刺活检, 肝细胞的标本长度选择为1.0～1.5cm[2], 将石蜡切片进行常规的脱蜡至水后, 在每片滴入胃蛋白酶50μL, 在孵育20min后, 再滴入50μL的50g/LBSA封闭液在温箱内孵育20min, 随后给予稀释的一抗 (兔Ig G) , 孵育1h, 滴入二抗, 再次孵育20min。使用苏木精衬染[3]。
阳性呈棕色, 阴性呈蓝色。在40倍物镜下进行分析。
1.3 数据处理
将本次试验所得数据录入SPSS17.0软件包进行统计学分析, 计量资料采用 (均数±标准差) 表示, 即 (χ—±s) , 组间对比采用t检验。取95%可信区间, 当P<0.05时, 为差异有统计学意义。
2 结果
经检测结果发现, 肝硬化程度越高的患者, 其血清CTGF水平越高, 其中S0与S1组与健康组比较, 无明显差异, P>0.05;S3以上组患者CTGF均高于健康组, P<0.05, 差异有统计学意义, 详见表1。
3 讨论
CTGF, 即结缔组织生长因子, 为富含半胱氨酸肝素结合蛋白的分泌性多肽, 在心脏、胎盘、肺部、肝脏等均有表达。首次于1991年在人体的脐静脉内皮细胞条件培养基中被发现, 属于即刻早期基因CCN的一种[4]。病理条件下, CTGF的过度表达, 与各种增生性或纤维化疾病有十分密切的关系。
CTGF能够促进细胞的增殖, 作TGF-β的下游因子, 其能够通过升高细胞周期, 使细胞从G1进入S期, 进而促进细胞的有丝分裂。而表皮生长因子与肝素均能够增强CTGF的促有丝分裂作用。其还能够对细胞外基质的调节, 促进细胞的粘附和细胞表型的转化, 提升促纤维化效果。而肝纤维化是由于细胞外基质的合成增多, 降解减少, 过多沉积在肝脏内。
我院的本次实验也证实, CTGF与肝脏的纤维化程度有密切的关系, 患者的纤维化程度越高, 其发生CTGF越高, 反之亦然, 组间比较, 差异十分明显, P<0.05。进一步说明了, 血清CTGF水平变化对慢性乙型肝炎肝脏纤维化程度可起到较好的判断作用, 可辅助医师诊断。
摘要：目的 探讨血清CTGF水平变化对慢性乙型肝炎肝脏纤维化程度的判断价值, 以供临床参考。方法 将我院2009年2月至2011年9月收治的165例慢性乙型肝炎患者根据其纤维化程度进行分组, 并将同期在我院进行健康体检的健康者50例作为对照组, 分别测定两组被检者的血清CTGF水平变化。结果 经检测结果发现, 肝硬化程度越高的患者, 其血清CTGF水平越高, 其中S0与S1组与健康组比较, 无明显差异, P>0.05;S3以上组患者CTGF均高于健康组, P<0.05。结论 血清CTGF水平变化对慢性乙型肝炎肝脏纤维化程度可起到较好的判断作用, 可辅助医师诊断。
关键词：血清CTGF,慢性乙型肝炎,肝脏纤维化,纤维化
参考文献
[1]康海燕, 董江龙, 李兵顺, 等.乙型肝炎患者肝脏结缔组织生长因子及碱性成纤维细胞生长因子与肝纤维化的关系[J].中国综合临床, 2009, 25 (2) :208-209.
[2]许文进, 康海燕, 董江龙, 等.慢性乙型肝炎肝组织TGF-β1及CTGF与肝纤维化的相关性研究[J].现代中西医结合杂志, 2011, 20 (9) :1044-1045.
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[4]但杰, 高鹏, 申力, 等.TGFβ1和CTGF在非酒精性脂肪性肝炎肝组织中的表达及意义[J].世界华人消化杂志, 2008, 16 (32) :3637-3641.
血清CTGF 篇2
1 资料与方法
1.1 一般资料
所有病例均为2010年12月~2012年12月在本院肾内科就诊的门诊及住院病例中符合诊断标准和纳入标准的患者, 共84例, 按就诊先后顺序随机分为对照组和观察组各42例。观察组中男28例, 女14例;年龄28~72岁, 平均 (48.2±22.8) 岁;其中慢性肾炎21例, 糖尿病肾病14例, 高血压肾病3例, 痛风性肾病2例, 狼疮性肾病2例。对照组中男26例, 女16例;年龄25~70岁, 平均 (45.9±18.8) 岁;其中慢性肾炎20例, 糖尿病肾病15例, 高血压肾病4例, 痛风性肾病1例, 狼疮性肾病2例。两组在性别、年龄、病种构成比方面均无显著性差异 (P>0.05) , 具有可比性。慢性肾功能衰竭按以下标准加以标准:有慢性肾脏病史和慢性肾功能衰竭临床表现, 内生肌酐清除率 (CCr) <50%, 血清肌酐 (SCr) >177μmol/L, 肾脏超声检查有双肾血流稀疏或肾脏萎缩。排除妊娠或哺乳期妇女及对本药过敏者、精神病患者, 以及合并心血管疾病、严重肝功能不全、内分泌及风湿系统疾病、严重感染和肿瘤等患者。
1.2 治疗方法
两组患者均给予低优质蛋白饮食、积极控制血压、纠正贫血、纠正水电解质紊乱和酸碱失衡、利尿剂的使用等基本治疗, 合并感染者使用抗生素。观察组在基本治疗的基础上, 给予尿毒清胶囊5粒, 3次/d, 1月为1疗程, 连续治疗2个疗程;对照组在基本治疗的基础上加服包醛氧淀粉5克, 3次/d, 疗程同观察组。2月后统计临床疗效, 包括临床症状及各项生化指标的变化。
1.3 观察指标
两组患者均于入院后次日晨抽取空腹静脉血10 m L, 于治疗后12周再次抽空腹静脉血进行检测。所有血样均在冷藏于-20℃之冰箱中密闭保存待用。双抗体夹心酶联免疫吸附法 (ELISA) 测定血清TGF-β1和CTGF, 测定试剂盒购自上海生工生物工程技术有限公司, 按操作说明书进行检测。血BUN和Scr、肌酐清除率 (Ccr) 测定均用常规生化方法检测。
1.4 疗效标准
显效:治疗后, 症状或体征明显减轻或消失, Scr降低≥30%;有效:治疗后, Scr降低≥20%, 自觉症状改善;无效:不符合显效或有效条件者, 自觉症状无改善。
1.5 统计学方法
所有数据用采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析, 计量资料以均数±标准差 (±s) 表示, 组间比较采用t检验, 检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 两组疗效比较
观察组总有效率为85.7%, 明显高于对照组总有效率66.7%, 差异有显著性 (P<0.05) 。见表1。
2.2 两组治疗前后肾功能指标比较
两组患者在治疗后各项指标与治疗前比较, 两组BUN、Scr均明显降低, 差异有显著性 (P<0.05) ;但治疗后对照组患者Ccr升高不明显 (P>0.05) 。观察组在治疗后, BUN、Scr降低较对照组更为明显, Ccr升高更为明显 (均P<0.05) 。见表2。
注:1) 与治疗前比较, P<0.05;2) 与对照组比较, P<0.05
2.3 两组治疗前后血清CTGF、TGF-β1变化情况
注:1) 与治疗前比较, P<0.05;2) 与对照组比较, P<0.05
观察组在降低CTGF、TGF-β1上有明显疗效, 治疗前与治疗后比较有非常显著性差异 (P<0.05) 。对照组CTGF、TGF-β1水平在治疗前与治疗后比较差异无显著性 (P>0.05) 。见表3。
2.4 两组不良反应
两组患者均未出现严重不良反应, 观察组仅少数患者出现腹胀和腹泻, 经对症治疗后缓解, 两组均未观察到发热、皮疹等过敏反应, 所有患者均耐受治疗。
3 讨论
尿毒清颗粒是以清除尿毒素为主的中药复方制剂, 其能够降低血肌酐、尿素氮, 稳定肾功能, 改善贫血, 提高血钙, 降低血磷、血脂, 广泛应用于慢性肾功能衰竭 (chronic renal failure, CRF) 的各期治疗。尿毒清颗粒的主要成分是由大黄、黄芪、甘草、何首乌、白芍、茯苓、白术、丹参和川芎等组成[4]。其中大黄能减少肠道氨的重吸收, 抑制尿素合成, 增加尿素和肌酐排泄;降低血浆中分子物质;影响肾内的细胞因子IL-6和TNF-α的产生从而抑制系膜细胞增生, 抑制TGF-β1刺激的细胞外基质合成;抑制氧自由基产生, 改善脂质代谢紊乱。黄芪、首乌和白芍具有益气生血、利水消肿等作用, 有调节免疫和减轻肾小球纤维化及明显降低尿蛋白、保护肾脏的作用。茯苓、白术和党参具有健脾益肾和利水消肿作用;丹参和川芎具有活血化瘀、扶正祛邪、健脾益肾、通腑降浊和活血化瘀等功效。有文献报道, 黄芪合用川芎嗪注射液治疗糖尿病肾病取得较好疗效, 其机制与改善血液流变性, 从而抑制肾组织纤维化有关[5]。
肾纤维化是各种肾脏疾病慢性进展到最后导致慢性肾功能衰竭的共同机制, 而以肾间质细胞外基质沉积为主要表现的肾间质纤维化过程是影响肾脏功能的重要因素。目前认为TGF-β1是导致肾间质纤维化的最重要的致病因子, TGF-β1是一组新发现的调节细胞生长和分化的TGF-β超家族成员之一。它是糖尿病肾病发生发展过程中致肾小球硬化和间质纤维化的最重要的细胞因子, TGF-β1具有促使肾组织细胞外基质聚集的作用, 它能在蛋白质转录和翻译水平上影响和上调胶原蛋白m RNA的表达, 还能使胶原组织合成增加。并且通过下调基质金属蛋白酶的表达以及促进纤溶酶原激活物抑制剂 (matrix metalloproteinases, MMPs) 和组织金属蛋白酶抑制剂 (tissue inhibitor of matrix metalloproteinases, TIMPs) 的合成使细胞外基质的降解减少。而大量实验已证实结缔组织生长因子 (connective tissue growth factor, CTGF) 是TGF-β1的下游信号因子, 在TGF-β1诱导下, 可由多种细胞分泌并介导TGF-β1的促进细胞增殖和细胞外基质 (ECM) 合成等作用, TGF-β1导致肾间质纤维化的作用是由CTGF完成的。CTGF作为TGF-β1的下游因子, 与肾间质纤维化的关系成为研究的热点。目前, 国内外有关TGF-β1和CTGF在肾间质纤维化中的研究以系膜增生性肾病、糖尿病肾病、Ig A肾病、狼疮性肾炎等肾脏疾病较多见。
本研究发现, 观察组加用尿毒清颗粒治疗在临床疗效方面明显优于对照组, 同时尿毒清胶囊能使血清尿素氮、肌酐均显著下降, 内生肌酐清除率升高, 较对照组有明显优势。上述结果表明, 尿毒清胶囊不仅能改善慢性肾功能衰竭患者的临床症状, 更能降低血清中尿素氮、肌酐水平, 提高内生肌酐清除率, 从而改善肾功能, 改善患者的整体状况, 延缓透析治疗。同时本实验也发现, 尿毒清颗粒明显降低了观察组患者血CTGF、TGF-β1水平, 提示尿毒清可通过降低CTGF、TGF-β1在肾组织的表达, 减少细胞外基质的聚集, 抑制成纤维细胞的增值和胶原合成等作用而达到护肾与抑制纤维化作用。其作用机制可能与尿毒清颗粒中的大黄、黄甚、丹参等成分有关。国内也有研究报道尿毒清胶囊对肾功能衰竭大鼠肾组织胶原沉积、TGF-β1表达具有抑制作用[6]。
虽然透析疗法和肾移植已成为慢性肾功能衰竭替代治疗的有效方法, 但因费用昂贵使其在基层医院的开展受到很大的限制。以尿毒清为主的中西医结合治疗方法能值得基层医院推广使用。同时, 研制以CTGF为靶点的药物可能成为减轻CRF患者肾脏组织纤维化进展从而延缓病情进展的一条可行途径。
参考文献
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[2]COZZOLINO M, DUSSO AS, SLATOPOLSKY E.Role of calciumphosphate product and bone-associated proteins on vascular calcification in renal failure[J].J Am Soc Nephrol, 2001, 12 (11) :2511-2516.
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[4]曾瑜.尿毒清治疗慢性肾功能衰竭病人的疗效观察[J].广西医学, 2005, 27 (9) :1445-1446.[4]ZENG Y.Efficacy of Niaoduqing treatment of chronic renal failure patients[J].Guangxi Medical Journal, 2005, 27 (9) :1445-1446.Chinese
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血清CTGF 篇3
1 材料与方法
1.1 主要试剂
纯度95%EGCG(美国Sigma公司)为粉末状,临用前溶于生理盐水中,过滤除菌。CTGF ELISA试剂盒(晶美生物公司);Trizol试剂(美国Gibco BRL公司);逆转录试剂盒(美国Promega公司)。
1.2 细胞培养与分组
人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)购自美国ATCC细胞库,5%CO2,37℃,按1∶2～1∶3传代,细胞生长成片时用于实验。分为EGCG组和对照组。EGCG组分别加入25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的EGCG作用48h。对照组不予处理。
1.3 ELISA检测CTGF的蛋白含量
取细胞培养上清液,并立即置于液氮中保存,细胞计数,严格按照试剂盒说明书操作,检测上清液中CTGF的蛋白含量。
1.4 半定量RT-PCR检测CTGF mRNA的表达
按Trizol试剂说明书提取各组细胞总RNA,按照Takara反转录试剂盒操作流程获得总CDNA,再以此CDNA为模板进行PCR反应,引物序列为上游5'-CAT CTT CGG TGG TAC GGT GT-3';下游5'-AGG AGG CGT TGT CAT TGG TA-3'。反应条件为:预变性95℃5min,变性5℃30s,退火56℃30s,延伸72℃50s,循环23次,结束循环后再延伸72℃10min,4℃终止。每组样本实验重复3次。
2 结果
2.1 各组HK-2细胞中CTGF mRNA及其蛋白表达比较
从表1中可以看出EGCG组HK-2细胞中CTGF mR-NA及其蛋白表达均较对照组显著降低(P均<0.01),且呈浓度依赖性(P均<0.01)。
3 讨论
CTGF是1991年由Braham等在人脐静脉内皮细胞的条件培养中分离纯化得到的一种细胞因子。CTGF具有多种功能,目前大量研究显示,CTGF是TGF-β1的下游因子,主要参与组织纤维化的形成。有学者认为CTGF可能是调节肾小管上皮细胞转分化的重要因子。YoKoi等[4]用CT-GF反义寡聚核苷酸转染鼠肾间质成纤维细胞,TGF-β1刺激引起的FN,collmRNA和蛋白上调被明显减弱。由于CTGF主要介导TGF-β1的负面效应,却不介导其正面效应,故直接抑制CTGF的表达也许可以避免在上游阻断TGF-β1带来的副作用。因此CTGF可以作为抗肾间质纤维化的新靶点。
本研究发现EGCG抑制HK-2细胞表达CTGF,且呈浓度依赖关系,现具体机制不明确。以往研究表明,EGCG有抗肝、肺纤维化的作用,机制为抗氧化及影响TGF-β1/smad通路有关。故推测EGCG抗肾间质纤维化也可能与上述两因素有关。针对TGF-β和Smads的治疗只能阻断纤维化的起始和进程,并不能逆转纤维化,而CTGF作为TGF-β的下游介质,是一个更具有特导性靶位,所以针对CTGF,开发能抑制CTGF产生和激活的药物将会开创治疗纤维化疾病的新里程。本研究发现,EGCG能抑制HK-2细胞表达CTGF,为肾间质纤维化的防治提供了一种可能的有效途径。
摘要：目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达的影响并探讨其可能的机制。方法:体外培养HK-2细胞,EGCG分别以25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L作用于体外培养的HK-2细胞48h。用ELISA法和RT-PCR检测HK-2细胞CTGF蛋白含量及mRNA表达水平。结果:与对照组比较,EGCG组HK-2细胞CTGF表达显著下降(P<0.01),且呈浓度依赖关系。结论:EGCG能抑制HK-2细胞CTGF的表达。
关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯,肾小管上皮细胞,结缔组织生长因子
参考文献
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