血清凝集（共6篇）
血清凝集 篇1
虾类是我国水产养殖的重要种类，但近年来频繁暴发的各类疾病给养殖户带来了巨大的损失。同时抗生素等药物的广泛使用也带来了药物残留，环境污染，产生抗药性菌种等负面影响，因此对虾类免疫防御机制的研究逐渐受到重视。甲壳动物体液中不具有免疫球蛋白，缺乏抗体介导的免疫反应，然而它们却以不同的方式抵御病原体侵袭并能识别异己物质。甲壳动物的凝集素，其作用类似于脊椎动物的抗体，是甲壳动物体内的一种免疫识别因子。除充当识别因子、发挥凝集作用外，还具有高度的调理作用，可在吞噬细胞和异物颗粒间形成分子连接，促进吞噬细胞对异物的吞噬作用，从而达到免疫防御的目的[1,2]。目前国内对虾类血清凝集素的研究主要有中国对虾(Penaeus indicus)[3,4]、罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergil)[5]、日本对虾(Penaeus japonicus)[6,7]、南美白对虾(Litopenaeus vanaminas)[8,9]及蟹类[10]等血清凝集素的研究，而对日本沼虾(Macrobrachium nipponese)血清凝集素的特性还没有相关报道。
实验以日本沼虾为材料，研究其血清中的凝集素对不同动物血细胞的凝集效价、糖抑制及有关影响因素，以期为寻找凝集素新来源及病害防治方面提供科学依据和基础材料。
1 材料与方法
1.1 实验材料
实验用日本沼虾、鸡、鲢鱼均购自镇江市农贸市场，蟾蜍、兔和小鼠购自江苏大学医学院实验动物中心。乙酰甲胺磷乳油(30%)和敌百虫为江苏苏化集团有限公司产品。葎草黄酮、生姜黄酮、葎草多糖和桑叶多糖均由实验室用常规方法制备。α-乳糖，D-葡萄糖，D-半乳糖，D-山梨醇，D-甘露糖，D-果糖，D-阿拉伯糖，L-鼠李糖为上海国药集团化学试剂有限公司产品。实验用化学试剂均为分析纯。
1.2 实验方法
1.2.1 日本沼虾血清的制备
实验时取健康虾滤纸吸干表面水分，75%酒精擦拭消毒，无菌1 mL注射器(5号针头)从虾围心腔穿刺抽取血淋巴液，每尾抽取0.1～0.2 mL。多尾虾血淋巴混合，4℃放置12 h，待析出血清后，3 000 r/min离心5 min，取上清液，-20℃保存备用。
1.2.2 红细胞悬液的制备
分别采集鸡、鲢鱼、蟾蜍、兔和小鼠血液，保存于无菌Alsevers液中(与血液体积比为2∶1)，放4℃冰箱中备用(至多1周)。实验前2 500 r/min离心5 min，弃上清，用无菌生理盐水(鸡、兔、小鼠为0.85%NaCl;蟾蜍、鲢鱼为0.65%NaCl)洗涤血细胞2次，重复离心，以体积比配成2%的红细胞悬液备用。
1.2.3 动物血细胞凝集试验
凝集素效价测定采用微量滴定板凝集法。每孔加50μL生理盐水，第1孔分别加入虾血清和动物红细胞悬液50μL，混匀后，从第1孔中吸取50μL混合液加入第2孔，以此类推作倍比稀释，最后在每孔中加入50μL红细胞悬液(2%)，水平方向摇匀后，37℃培养箱中静置12 h。在低倍显微镜下观察各孔有无凝集块形成，以有细胞凝集现象的最高稀释倍数为该凝集素样品的凝集效价。以生理盐水作空白对照，每种血细胞作3个重复，以平均值作为凝集效价。
1.2.4 外界因素对日本沼虾血清凝集试验
温度对日本沼虾血清凝集试验：各取200μL日本沼虾血清置于Eppendorf离心管中，分别经4℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃和100℃水浴中保温20 min后，快速冷却，用0.85%生理盐水作倍比稀释，加入鸡红细胞悬液，检测凝集活性变化。
盐度对日虾沼虾血清凝集试验：分别用盐度1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14和15的NaCl溶液对日本沼虾血清作倍比稀释(用8.5‰做对照)，混匀加入鸡血细胞悬液，检测凝集活性变化。
金属离子和EDTA-Na2对日本沼虾血清凝集素活性：将分别含有10 mmol/L MnCl2、FeCl2、ZnCl2、CuCl2和CaCl2的生理盐水和含0、2、4、8、16、32、64mmol/L EDTA-Na2的生理盐水各50μL对日本沼虾血清作倍比稀释，混匀后加入鸡血细胞悬液，检测凝集活性变化。
不同p H值对日本沼虾血清凝集素活性：用1mol/L NaOH和HCl将生理盐水pH值分别调整为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12，以不同pH值的生理盐水对日本沼虾血清作倍比稀释，混匀加入鸡血细胞悬液，检测凝集活性变化。
有机磷农药对日本沼虾血清凝集素活性：用0.5、1.0、5.0、10.0、15.0和20.0 mg/L的乙酰甲胺磷和敌百虫溶液对日本沼虾血清进行倍比稀释，混匀后加入鸡血细胞悬液，检测凝集活性变化，以生理盐水作空白对照。
黄酮和多糖类物质对日本沼虾血清凝集素活性：将葎草黄酮、生姜黄酮、葎草多糖和桑叶多糖配制浓度为0.3 mg/mL，分别对日本沼虾血清作倍比稀释，混匀后加入鸡血细胞悬液，检测凝集活性变化。以生理盐水作空白对照。
2 结果
2.1 日本沼虾血清的凝集活性
日本沼虾血清对鸡、兔、小鼠、蟾蜍和鲢鱼的血细胞均产生不同程度的凝集(表1)。其中，日本沼虾血清对小鼠血细胞的凝集强度最高为64，鸡血细胞其次为32，兔、蟾蜍和鲢鱼均为16。由此小鼠和鸡血细胞对日本沼虾血清敏感性较高，可用于日本沼虾血清凝集素性质的测定，实验采用鸡血细胞。
2.2 温度对日本沼虾血清凝集素活性的影响
日本沼虾血清经50℃和60℃处理20 min后，血清凝集效价与未处理组(表1)相同。温度在80℃、90℃和100℃时，血清完全变成乳白色胨状物，无法检测(表2)。
注：“-”表示不发生凝集，下同。
2.3 盐度对日本沼虾血清凝集素活性的影响
随着盐浓度的升高，凝集活性呈现出先降低而后升高的总体趋势。盐度为13～15时，凝集活性最强效价达到64。盐度为5～7时，凝集活性最低效价为16。当盐度<4和8～12时，凝集活性效价为32(表3)。
2.4 金属离子和EDTA-Na2对凝集素活性的影响
实验结果显示Mn2+对日本沼虾血清凝集活性没有影响，Cu2+和Zn2+完全抑制了日本沼虾血清凝集素活性。Ca2+和Fe2+降低了日本沼虾血清对鸡红细胞的凝集作用，效价分别为16和4，而且Fe2+比Ca2+抑制作用更强(表4)。
金属离子螯合剂EDTA可以抑制日本沼虾血清凝集活性，当浓度为2、4、8 mmol/L时效价为8，当浓度为16 mmol/L时凝集活性被完全抑制(表5)。
2.5 不同p H值对凝集素活性的影响
实验结果显示日本沼虾血清在pH值2～12内均能凝集鸡血细胞。当pH值2、8、9、11、12时，效价为8;pH值3～5、7、10时，凝集效价较好为16;pH值6时，凝集效价最高为32(表6)。
2.6 有机磷农药对凝集素活性的影响
实验结果显示当乙酰甲胺磷的浓度在5～15mg/L时，日本沼虾血清的凝集活性不变，效价为32，浓度再高则引起效价降低。而敌百虫仅在更低浓度，即0.5～5.0 mg/L时，不会影响虾血清的凝集活性，高于5.0 mg/L则会引起凝集效价的快速下降，浓度达到20 mg/L时，效价仅为4，作用结果要强于同浓度下乙酰甲胺磷的作用，凝集效价为16(表7)。
2.7 黄酮和多糖类物质对凝集素活性的影响
实验结果表明，葎草、生姜黄酮和葎草、桑叶多糖在浓度为3 mg/mL时凝集效价均为128，凝集效价是日本沼虾血清对鸡红细胞的4倍(表8)。
2.8 糖对凝集素活性的影响
在实验的8种糖中，日本沼虾血清活性能被D-葡萄糖和D-果糖抑制，其他糖均出现不同程度的凝集。结果表明日本沼虾血清凝集素对D-葡萄糖和D-果糖具有特异亲和性(表9)。
3 讨论
日本沼虾血清凝集素无种属专一性。红细胞凝集现象是凝集素和其相应位点结合的结果，研究结果表明甲壳动物凝集素对动物血细胞的敏感性不同，凝集素对红细胞有的具有种属专一性，有的则没有[5,9]。实验结果表明日本沼虾血清凝集素对兔、鸡、小鼠、蟾蜍和鲢鱼的红细胞均产生一定的凝集，对小鼠和鸡血红细胞凝集效应最高。
日本沼虾血清凝集素具有热稳定性。多数甲壳动物的凝集素具有热不稳定性，不同虾热稳定效果不同，但变性温度一般在65～80℃[3,7,9]。实验结果表明，日本沼虾血清热稳定性较好。虾血清凝集素热稳定性的差异可能与其生活环境不同及凝集素分子的化学结构和活性位点的化学性质有关[11]。
牟海津等[3]在研究中国明对虾血清对鸡红细胞的凝集作用时发现，在一定盐度范围内，增加盐度可提高凝集活性。曹剑香等[9]对凡纳滨对虾血清凝集素特性研究中发现，盐度为4～60时检测到血清的凝集，当盐度为24～48时血清凝集素活性有所增强，认为对虾血清凝集活性的增强与对虾更适应于高盐度环境生长有关。对于淡水虾而言，水体盐度一般在1～5。从实验结果来看，低盐度日本沼虾血清的凝集素活性变化不大，当盐度达到13时凝集效价显著提高，这一方面可能与高盐度对虾体免疫机能的刺激作用有关，另一方面可能也显示日本沼虾对水体的盐度有较大的适应范围。
有文献报道，Ca2+能使凡纳滨对虾血清凝集素凝集活性明显增强[9]，而对中国对虾凝集活性没有影响[3]，罗氏沼虾和南美白对虾对Ca2+均有很强的依赖性[5,8]。实验中Ca2+对日本沼虾血清的凝集素活性表现出一定程度的抑制作用，可能原因在于凝集效价测定选用的红细胞类型不同，或者与凝集素本身的结构有一定的相关性，还有待于进一步研究。Cu2+和Zn2+完全抑制了日本沼虾血清凝集素活性，其原因可能是Cu2+和Zn2+使凝集素的结构发生变化，凝集活性丧失。
金属离子螯合剂EDTA的加入可以明显抑制凝集活性，当浓度达到16 mmol/L时凝集活性被完全抑制，说明在日本沼虾血清的凝集活动中，某些金属离子仍然是必不可少的。
不同血清凝集素保持凝集活力的pH值只范围略有不同[3,7,8,9]。实验结果表明日本沼虾血清在pH值2～12均能凝集鸡血细胞，在pH值3～7范围内凝集效果较好，pH值6时凝集效价最高，说明偏酸和偏碱性对凝集素活性有一定影响。
有机磷农药对日本沼虾血清凝集素活性具有一定影响，高浓度乙酰甲胺磷和敌百虫对凝集活性有抑制作用。随着有机磷农药生产和使用的逐年递增，在控制有害昆虫正效应的同时，也会随雨水冲刷等途径而进入河流、湖泊和海洋，对水生生物造成威胁[12]。实验中，不同浓度的乙酰甲胺磷和敌百虫溶液在一定浓度范围内对日本沼虾血清凝集活性变化有一定影响，高浓度乙酰甲胺磷和敌百虫对凝集活性有抑制作用。低浓度乙酰甲胺磷对血清中凝集素活性改变不显著，这是由于乙酰甲胺磷作为神经性毒剂，通过抑制突触部位乙酰胆碱脂酶的活性，使神经系统的正常活动受到干扰和破坏而导致死亡[13]。随着敌百虫浓度的增加，日本沼虾血清对鸡红细胞的凝集效价降低，说明高浓度敌百虫影响了虾的免疫机能。
实验结果中生姜、葎草黄酮和桑叶、葎草多糖凝集效价是日本沼虾血清对鸡红细胞的4倍，由此证明应用黄酮和多糖类物质作为免疫增强剂，可激活日本沼虾的非特异性免疫系统，起到加强防御的功能。近年来我国水产养殖规模不断扩大，集约化和工厂化程度越来越高，但养殖水域污染日趋严重，严重困扰着水产养殖业的健康发展。使用疫苗是预防疾病的可靠方法，但至今大部分病毒的疫苗尚未开发出来，且疫苗不具有广谱性，操作可行性差。开发无药残、抗菌谱广、食用安全、增强免疫功能的添加剂，成为当前水产饲料研究的热点[14]。从分布广、易获得的植物资源中提取黄酮和多糖等活性物质作为饲料添加剂提高虾免疫能力，具有较好的开发利用前景。
日本沼虾血清活性能被D-葡萄糖和D-果糖所抑制，D-山梨醇、D-阿拉伯糖和L-鼠李糖能增强凝集素活力。对血清中凝集素产生抑制作用的糖被认为其结构互补于凝集素结合部位结构，可推测出凝集素结合部位对糖的特异性。另一方面，凝集素对动物红细胞的凝集可看作是这些细胞表面的多糖或糖蛋白的识别性结合，这在无脊椎动物的免疫中起重要作用[11]。凝集素能够选择凝集脊椎动物血细胞和某些微生物细胞，并充当识别因子，可根据颗粒物质表面的糖基组成来区分“自己”和“异己”。因此，研究糖类的凝集抑制作用对于弄清血细胞凝集素的具体作用机理是十分必要的。
血清凝集 篇2
1 资料与方法
1.1 临床资料
选择2006年1月-2008年12月我院就诊的SLE患者48例为观察组,诊断符合1982年美国风湿病协会标准。其中活动期30例,非活动期18例;女39例,男9例,中位年龄35岁。确诊前均未用过糖皮质激素及免疫抑制剂类药物。SLE活动性指数(SLEDAI)的评分标准[1]:活动期患者SLEDAI≥9分,非活动期SLEDAI<9分。对照组36例为健康体检者,其中女20例,男16例,中位年龄34岁。2组患者在年龄、性别等方面,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
1.2 方法
采集清晨空腹静脉血3ml,离心后,取上清液置PC管中-20℃保存,同批检测,同时采血检测相关指标并收集相关临床资料。MBL水平测定用酶联免疫吸附法(ELISA),试剂盒由丹麦Antibodiyshop公司提供,严格按说明书进行。血清补体、抗ds-DNA抗体、抗ENA抗体谱及免疫球蛋白IgG、IgM、IgA等指标按常规方法测定。
1.3 统计学方法
计量资料以
2 结 果
2.1 2组患者血清MBL水平比较
观察组患者血清MBL水平为(1.85±0.76)mg/L,与对照组的 (3.10±0.61)mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.01)。
2.2 SLE患者血清MBL水平与病情活动性关系
48例SLE患者中活动期患者30例,血清MBL水平为(1.69 ± 0.55)mg/L,非活动期患者18例,血清MBL水平为(2.70 ± 0.46)mg/L,2者比较差异有统计学意义(P<0.01)。
2.3 SLE患者治疗前后血清MBL水平比较
对初诊SLE患者行糖皮质激素系统治疗6周后,检测治疗前后的血清MBL水平,治疗前为(1.68 ± 0.42)mg/L,治疗后为(2.85 ± 0.47)mg/L,2者比较差异有统计学意义(P< 0.05)。
2.4 SLE患者血清MBL水平与其他指标间的相关性分析比较
出现抗ds-DNA抗体(+)、抗Sm抗体(+)、低补体C3血症、高IgG血症患者的血清MBL水平均分别显著低于无上述表现者,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
3 讨 论
MBL遗传缺陷是常见的人类免疫缺陷之一。MBL是一种钙离子依赖的血清凝集素,它可以选择性识别病原体表面的甘露聚糖和N-乙酰葡萄糖,与多种细菌、病毒、真菌结合,通过凝集素激活补体系统以及作为调理素直接发挥吞噬作用,并可与病毒结合,中和病毒并抑制其复制扩散,通过这些作用以达到保护宿主抵御各种病原微生物的功效,在天然免疫中起着重要作用。近年来人们就MBL基因多态性,MBL浓度与疾病相关性进行了大量研究[2],证明MBL基因多态性,MBL低水平与感染性疾病直接相关,是造成许多自身免疫性疾病的根本原因之一。SLE患者血清水平与正常人比较显著降低,但与结构基因外显子1区第54号密码变异(东方人种变异频率较高)无相关性[3]。目前尚缺乏大陆地区人群血清MBL的正常参考值,国外对于人群血清MBL的正常参考值标准亦不一致,但大多数认为血清MBL水平<2.0 mg/L时易发生与免疫相关的疾病,如系统性红斑狼疮(SLE)等。本研究检测了48例SLE患者血清MBL水平,发现SLE患者血清MBL水平较健康对照组明显下降,治疗前活动期SLE患者血清MBL水平也显著低于经糖皮质激素系统治疗后的缓解期患者,且活动期SLE患者血清MBL水平显著低于非活动期水平,证实了MBL与SLE发病机制有关,且与疾病活动的程度呈正相关。进一步研究了SLE患者血清MBL水平与其他实验室相关特异性指标的关系,结果发现抗ds-DNA抗体(+)、抗Sm抗体(+)、低补体C3血症、高IgG血症患者的血清MBL水平均显著低于无上述表现者,提示MBL可能参与SLE的病理生理过程,在SLE患者体内存在多种多样的免疫复合物,其是否能与MBL结合以及结合的亲和力均影响MBL的生物学功能[4],低水平MBL不能有效激活补体,从而造成免疫复合物清除障碍[5]。总之,SLE患者血清MBL水平明显下降,而且与抗ds-DNA抗体,抗Sm抗体,补体C3,免疫球蛋白具有相关性,因此可通过检测血清MBL水平作为判断SLE病情变化的实验室指标。
注:与其对应的阴性组比较,*P<0.05
参考文献
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血清凝集 篇3
半乳糖凝集素-3(galectin-3)作为一种炎症因子,参与细胞黏附、增殖、凋亡以及炎症、免疫反应等过程。近来研究发现,它可通过介导纤维母细胞激活及巨噬细胞浸润,参与心衰的病理生理过程,同时可以预测患者的预后[2]。本文旨在探讨芪苈强心胶囊对慢性心力衰竭患者短期预后以及血清半乳糖凝集素-3水平的影响,为临床应用提供理论依据。
1 资料与方法
1.1 临床资料
入选2010年10月—2012年3月在我院心内科住院或门诊就诊的慢性心力衰竭患者108例。心衰诊断符合Framingham诊断标准[3]。排除标准:重度的瓣膜狭窄;肥厚或限制性心肌病;缩窄性心包炎、心肌炎;急性心肌梗死;心源性休克;严重肝、肾功能不全者;各种恶性肿瘤、外伤、结缔组织病、妊娠、哺乳者。按照美国心功能NYHA分级标准,108例患者中心功能Ⅰ级33例,Ⅱ级56例,Ⅲ级~Ⅳ级19例。男65例,女43例;年龄45岁~86岁(73.2岁±11.5岁)。心衰病因包括缺血性心脏病、高血压心脏病、扩张型心肌病。入组后,依据随机数字法1∶1将患者分为观察组和对照组,每组54例。两组患者在心衰病程、心功能分级、心衰病因组成、年龄、性别等方面,经检验不具有统计学意义(P>0.05),具有可比性。
1.2 治疗方法
两组患者除治疗原发病及伴发疾病,均选用ACEI/ARB制剂、β-受体阻滞剂、醛固酮受体拮抗剂,对心衰进行规范化治疗,心衰症状加重可酌情使用洋地黄制剂、利尿剂以及硝普钠等药物。观察组同时应用芪苈强心胶囊(石家庄以岭药业有限公司)4粒(1.2g,每克相当6.9g生药),每日3次,口服,疗程为6个月。
1.3 观察指标
记录两组患者治疗前后临床症状、心率、血压、心功能分级等情况,用彩色多普勒超声心动图仪(西门子公司,型号G60)测定患者每搏输出量(SV)、心输出量(CO)、心脏指数(CI)、左室射血分数(LVEF)及左室舒张末期内径(LVDD)。所有入选患者在入选时及治疗后半年时抽取静脉血10mL,其中5mL进行常规生化检查,包括血糖、血脂、肝功能、肾功能和电解质,另5mL静置离心(2 000r/10min),常规生化指标采用罗氏全自动生化仪检测。血清半乳凝集素-3的测定,采用ELISA法检测,试剂盒由上海亚培生物科技有限公司提供,检测范围:0~40ng/mL。
1.4 随访
通过门诊、电话或住院方式对患者进行随访,记录心脏不良事件(因心衰恶化再入院或全因死亡)的发生情况。
1.5 统计学处理
采用SPSS13.0软件。计数资料以百分率表示,组间比较采用χ2检验。计量资料以均数±标准差表示,组间比较采用t检验。
2 结果
2.1 两组患者心功能指标(见表1)
经过治疗,两组患者部分心功能指标,SV、CO、CL、LVEF较治疗前有改善(P<0.05),两组无统计学意义。治疗后两组患者LVDD较治疗前有减少趋势。
2.2 两组患者血清半乳凝聚素-3水平(见表2)
治疗后观察组血清半乳糖凝集素-3水平较之治疗前及对照组均减少(P<0.01)。
2.3 心脏不良事件
观察组心脏不良事件发生率19例(35.19%),明显低于对照组36例(66.67%),经检验,具统计学意义(P<0.01)。
2.4 不良反应
两组均未见明显的肝、肾功能损害及电解质紊乱。观察组出现干咳3例,对照组出现恶心2例,室性早搏3例。
3 讨论
芪苈强心胶囊是由黄芪、人参、附子、丹参、葶苈子、泽泻、玉竹、桂枝、红花、香加皮、陈皮组方[4]。方中黄芪益气利水,附子温阳化气,以治心气虚乏,用为君药;丹参和血、活血,葶苈子泻肺逐水,人参补气通络,针对气阳虚乏,络脉瘀阻,水湿停聚三大病理变化,共同为臣药;红花活血化瘀,泽泻利水消肿,香加皮强心利尿,玉竹养心阴以防利水伤正,陈皮畅气机以防壅补滞气,皆为佐药;桂枝辛温通络,温阳化气,兼引诸药入络,用为使药。药理及临床研究表明[5],芪苈强心胶囊既能增加心肌收缩力,提高心搏出量,改善肾血流,利尿消肿,改善心脏血流动力学指标。又能抑制肾素、血管紧张素-醛固酮系统,降低血管紧张素Ⅱ,抑制醛固酮升高,明显阻抑室壁厚度的增高,减少心室重塑,改善心力衰竭生物学基础。
本研究中两组患者经过规范抗心衰治疗,6个月后部分心功能指标明显改善(P<0.01)。虽然观察组治疗后部分心功能指标较对照组显示出改善趋势(P>0.05),可能受观察和治疗时间过短,样本数不足等因素影响。似乎不能证实芪苈强心胶囊在佐治慢性心力衰竭方面的功效。但是,观察组在6个月的随访期内,心脏不良事件发生率明显低于对照组(P<0.01),芪苈强心胶囊可能通过其他途径影响慢性心力衰竭的短期预后。
半乳糖凝集素-3是一种强大的促炎症因子,其在急性炎症中表现为刺激中性粒细胞激活和黏附,在慢性炎症中表现为刺激单核巨噬细胞及纤维细胞的活化。它对机体内环境的稳定和巨噬细胞功能的发挥具有重要作用[6]。
慢性心力衰竭过程中存在着持续性的全身性炎症反应[7]。众多的炎症细胞因子,如TNF-α、IL-1β、IL-6及TGF-β等,都属于天然免疫的效应蛋白,与心力衰竭过程中的病理生理学变化密切相关,炎症细胞因子的级联反应对于心衰的发生、发展具有重要作用[8]。而且,大部分炎症因子有负性肌力作用,可降低心肌收缩力及心输出量,促进自发性功能障碍、胰岛素抵抗、内皮损伤以及机体高凝状态[9,10]。这些病理改变无疑对心衰的控制不利。
本研究中观察组患者在使用芪苈强心胶囊后,血清半乳糖凝集素-3水平较之治疗前及对照组均明显减少(P<0.01)。推测芪苈强心胶囊可能是通过减轻炎性反应的促发,延缓心衰患者的病情进展,影响其预后。它同样是中药复方多环节,多途径,多靶点治疗优势的体现。
摘要：目的 观察芪苈强心胶囊对慢性心力衰竭患者血清半乳糖凝集素-3水平的影响。方法 将108例慢性心力衰竭患者按1∶1完全随机法分为观察组和对照组,每组54例。两组患者均予以规范的抗心衰治疗,观察组在此基础上加用芪苈强心胶囊4粒,1.2g,3次/日,口服,疗程为6个月。检测两组患者治疗前后心功能指标和血清半乳糖凝集素-3水平,6个月内心脏不良事件(因心衰恶化再入院或全因死亡)的发生情况。结果 两组患者经过治疗后,部分心功能指标均较治疗前有改善(P<0.05),但组间差异无统计学意义。治疗后观察组血清半乳糖凝集素-3水平较之治疗前及对照组均明显减少(P<0.01)。对照组治疗后血清半乳糖凝集素-3水平亦较治疗前有减少趋势。观察组心脏不良事件发生率明显低于对照组(P<0.01)。结论 芪苈强心胶囊能进一步降低慢性心力衰竭患者血清半乳糖凝集素-3水平,减少心脏不良事件的发生。
关键词：慢性心力衰竭,芪苈强心胶囊,半乳糖凝集素-3
参考文献
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血清凝集 篇4
卵巢肿瘤的转移与其扩散是恶性肿瘤重要的生物学特点, 也是卵巢肿瘤患者死亡的最主要的原因。半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 是半乳凝素 (Galectin-3) 家族的一员之一, 其能够识别糖脂与糖蛋白的特异性的低聚糖结构, 也参与了多种的生理过程与病理过程。包括了细胞生长、细胞凋亡、细胞黏附、新生血管形成、肿瘤浸润及肿瘤转移等。半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 在肿瘤的发生、发展及转移中起到了非常重要的作用[2]。半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 在一些肿瘤中成高表达水平, 但其在不同的肿瘤类型中, 如肺癌、宫颈癌、胃癌、胰腺癌、子宫内膜癌、乳腺癌、直肠癌、食管癌、及甲状腺癌等患者中的高表达水平、低生存、肿瘤的复发、预后差和对于化疗药物的敏感性降低相关。半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 对于一些肿瘤有可能成为一个非常有价值可靠的肿瘤转移的诊断指标及治疗的靶点, 进而指导临床。
1 资料与方法
1.1 实验对象
回顾性的分析了佳木斯大学第一附属医院2011-02～2012-11期间卵巢上皮性肿瘤患者术前组良性肿瘤19例、交界性肿瘤21例、恶性肿瘤36例, 术后组29例, 及正常健康非妊娠妇女对照组18例。患者年龄为45～63岁, 统计学上均无差异, 临床资料齐全。所有的患者术前均未经过化疗、放疗、及激素类药物治疗。
1.2 主要试剂及仪器
酶联免疫半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 试剂盒, 购于北京中衫金桥生物技术公司; TGW16离心机, -20℃冰箱, 由佳木斯大学提供。
1.3 试验方法
采集卵巢上皮性肿瘤患者术前组良性肿瘤19例、交界性肿瘤21例、恶性肿瘤36例, 术后组29例, 及正常健康非妊娠对照组18例的妇女血清标本。入院后术前各组在未经过任何治疗的情况下, 清晨空腹采集了外周静脉血2mL, 术后组与术后第3天采集了患者外周静脉血2mL, 2000r/min离心20min, 后取上清分别装于无菌的干燥试管, 置于-20°C储存备用。
1.4 统计学分析
应用SPSS13.0汉化版统计软件, 数据用均数±标准差undefined表示。各组间比较选用随机区组方差分析或t检验;相关分析采用Pearson直线相关析。P<0.05有统计学意义。
2 实验结果
卵巢上皮性肿瘤患者术前组、术后组及正常健康非妊娠妇女血清中半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 表达水平。
1 术前组与正常组比较差异有统计学意义 (t=3.32., P<0.05) 。2 术后组与术前组比较差异有统计学意义 (t=7.27, P<0.05) 。3 三组间比较差异有统计学意义 (F=443.15, P<0.05) 。
卵巢上皮性肿瘤术前各组间血清中半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 表达水平。
1 交界性肿瘤组与良性肿瘤组比较差异有统计学意义 (t=6.31, P<0.05) 。2 恶性肿瘤组与交界性肿瘤组比较差异有统计学意义 (t=7.41, P<0.05) 。3 三组间比较差异有统计学意义 (F=474.65, P<0.05) 。
3 讨论
卵巢肿瘤为女性生殖系统常见的三大肿瘤之一, 也是最高的恶性肿瘤。好发年龄为50～60岁的妇女, 到了70岁以后开始逐渐下降。卵巢肿瘤来源于卵巢表面生发上皮, 由于卵巢位于女性盆腔中的较深部位, 所以病变的早期不容易被发现, 但其的进展是非常迅速的。 目前对卵巢癌肿瘤尚无明确的早期诊断方法, 大约70%～80%的卵巢恶性肿瘤患者发现时成为晚期。治疗上非常困难, 五年的存活率约为30%～40%左右, 其死亡率居恶性肿瘤的首位, 严重的威胁了妇女的健康及其生命[3,4]。
多个研究小组报道表明, 卵巢肿瘤的转移与其扩散是恶性肿瘤重要的生物学特点, 也是其死亡的最重要的原因。半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 是半乳凝素 (Galectin-3) 家族的一员之一, 半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 是与细胞表面的基质相互作用的细胞内、外的血清凝集素, 属于S型凝集素, 它对于β-半乳糖有特别的亲和力, 通过其配体发挥了生物学的功能。其能够识别糖脂与糖蛋白的特异性的低聚糖结构, 也参与了多种的生理过程和病理过程[5]。包括了细胞生长、细胞凋亡、细胞黏附、新生血管形成、肿瘤浸润及转移等。半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 在肿瘤的发生、发展及其转移中发挥了非常重要的作用。现在各种研究中表明半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 在宫颈癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌、子宫内膜癌、甲状腺癌及食管癌等中的表达上调与本实验的研究相一致 (P<0.05) [6,7]。各研究中发现乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 与宫颈癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌、子宫内膜癌、乳腺癌、甲状腺癌及食管癌等多种肿瘤的分期、血管的生成、淋巴的转移、术后的复发及预后情况是密切相关的[8]。近几年来初步研究也已经证实了拮抗半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 能有效抑制肿瘤细胞的生长。近期的研究中表明了半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 在卵巢上皮性肿瘤组织中的发生和发展的过程中有过表达, 半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 可有助于预测卵巢肿瘤的发生、发展、治疗卵巢肿瘤及预后卵巢肿瘤的判断, 成为了非常有效的生物学指。在本实验研究中术前组卵巢上皮性肿瘤中良性肿瘤、交性肿瘤、恶性肿瘤患者的半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 有明显上升, 与本研究相一致。但在现国内外对卵巢癌组中糖凝集素-3 (Galectin-3) 的表达水平研究还是很少, 对于卵巢肿瘤患者血清中的半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 的检测还未见有报道。本实验可以对卵巢上皮性肿瘤的发机制、诊断、治疗及其预后情况等提供了一定的良好的实依据。
摘要：目的:本实验的目的是为了通过检测卵巢上皮性肿瘤患者和正常健康非妊娠妇女对照组血清中的半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 表达水平, 及其相关的临床意义。探讨半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 在卵巢上皮性肿瘤患者中的发病机制、诊断、监测、治疗以及预后的情况等提供一定的实验依据。方法:回顾性的分析了佳木斯大学第一附属医院2011年02月至2012年11月期间的卵巢上皮性肿瘤患者术前组良性肿瘤19例、交界性肿瘤21例、恶性肿瘤36例, 术后组28例, 及正常健康非妊娠妇女对照组18例。患者的年龄统计学均无差异, 临床资料齐全。应用了酶联免疫方法检测样本血清中半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 的表达水平。结果:半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 在术前组、术后组、健康非妊娠妇女对照组中均有表达。术前组及术后组的表达水平均明显高于正常健康非妊娠妇女对照组, 且差异具有统计学意义 (P<0.05) 。结论:通过检测卵巢上皮性肿瘤患血清中的半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 表达水平, 可作为临床上判断卵巢上皮性肿瘤良恶性程度高低的指标。对卵巢上皮性肿瘤疾病的诊断、治疗及其预后的情况等提供了一定良好的实验依据。
关键词：卵巢上皮性肿瘤,半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) ,酶联免疫
参考文献
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血清凝集 篇5
1 材料与方法
1.1 材料
抗原:禽流感病毒H5亚型 (re-6) 血凝抑制试验抗原, 哈尔滨维科生物技术开发公司。血清:20份新鲜鸭血清。
1.2 仪器用品
96孔90ºV型微孔板和BIOHIT可调移液器。
1.3 方法
1.3.1 红细胞悬液制备
1%、5%、10%、20%鸡红细胞悬液。1%鸡红细胞悬液按GB/T18936-2003方法制备。5%、10%、20%鸡红细胞悬液分别按照0.5、1、2 m L鸡红细胞原液溶于10 m LPBS制得。鸡红细胞原液在最后一次洗涤离心后去掉上清液后制得。
1.3.2 血凝抑制试验
按照GB/T18936-2003[1]。
1.3.3 鸡红细胞悬液与样品血清吸附处理的取液量及配比的确定
因本法采用在微孔板中逐孔加入待检血清和鸡红细胞悬液进行吸附, 为确保吸附处理后的样品上清液大于血凝抑制试验检测样品量0.025 m L, 并且不稀释样品致影响样品抗体效价测定, 故以1∶1配比吸附;同时, 加入微孔中的液体总量不至于溢出, 本法采用0.05 m L鸡红细胞吸附0.05 m L鸭血清。
1.3.4 吸附时间的确定
参考GB/T18936-2003中HA及HI试验中抗原抗体吸附时间在30~40 min, 为保证鸡红细胞对鸭血清非特异性凝集因子的最大限度的吸附及完全沉淀出上清液, 本法吸附时间采用60 min。
1.3.5 用于吸附的鸡红细胞悬液浓度的研究
鸡红细胞悬液吸附预处理及分组试验。为了寻求鸡红细胞悬液吸附处理鸭血清中非特异性凝集因子的最佳浓度, 选取5%、10%、20%, 30%鸡红细胞吸附预处理后进行对比试验, 以比较其检测效价和判定效果。在微孔板中进行吸附处理, 加贴膜覆盖以防挥发, 轻震后静置1 h, 吸取0.025 m L上清进行检测。
按以下5个分组进行鸭血清禽流感H5亚型抗体效价检测, 用1%鸡红细胞悬液对20份直接测定为7log2的不同鸭血清进行血凝抑制试验抗凝集效果统计。A组:直接测定;B组:0.05 m L待检血清+0.05 m L 5%鸡红细胞悬液吸附后测定;C组:0.05 m L待检血清+0.05 m L 10%鸡红细胞悬液吸附后测定;D组:0.05 m L待检血清+0.05 m L20%鸡红细胞悬液吸附后测定;E组:0.05 m L待检血清+0.05 m L 30%鸡红细胞悬液吸附后测定。
2 结果
4种测定方法凝集现象去除效果对比见表1;5种测定方法血清效价具体结果见表2 (效价单位为Log2) 。
表1中, 凝集数A:仅1~2孔出现凝集的份数;凝集数B:2孔以后出现凝集的份数;不凝集数:不出现凝集现象的份数;凝集率B:凝集数B/30, 其下降可反映去除两孔以后非特异性凝集因子的效果[2];去除凝集率:不凝集数/30, 其上升可反映完全去除非特异性凝集因子的效果。表2中, 将B、C、D方法分别和A法进行了比较, 结果表明B、C、D法测得的效价与A法差异不显著 (P) 。
3 讨论
从表1结果来看, 鸭血清经10%、20%、30%鸡红细胞吸附处理后, 非特异性凝集率 (总凝集率) 由A法的100%下降至C、D法的95%、75%、75%, 表明鸡红细胞吸附法能明显去除非特异性凝集因子。经10%、20%、30%鸡红细胞吸附处理后, 2孔以后的非特异性凝集率 (凝集率B) 由A法的95%下降至C、D、E法的30%、25%、25%, 表明.10%.20%鸡红细胞吸附在去除2孔以后的凝集现象效果均明显;去除凝集率由C法5%上升到30%、25%, 可见20%、30%鸡红细胞吸附处理比10%鸡红细胞吸附更能去除2孔以内的非特异性凝集因子甚至完全去除单个样品的凝集现象, 从表2结果来看, 鸭血清中非特异性凝集因子会使抗体效价出现1~2个滴度的误差, 因此有必要去除。
4 小结
试验表明30%、20%、10%鸡红细胞悬液吸附处理比5%鸡红细胞悬液吸附处理, 更明显降低血清中非特异凝集的影响, 10%及以上浓度鸡红细胞悬液即可对鸭血清中非特异性凝集因子明显去除, 20%、30%鸡红细胞悬液吸附在去除非特异性凝集上整体效果相当。出于便于鸡红细胞悬液制备的考虑, 采用较低鸡红细胞浓度, 即20%鸡红细胞悬液应用于日常检测进行对鸭血清废特异性凝集因子的去除。
摘要：禽流感血凝抑制试验中, 建立鸡红细胞吸附鸭血清非特异性凝集因子方法, 分别对鸡红细胞悬液与鸭血清吸附处理的取液量配比、吸附时间以及鸡红细胞浓度进行探讨。在确定取液量配比、及吸附时间后, 通过对同一批鸭血清样品分别经不同浓度的鸡红细胞悬液吸附处理后进行一系列对比试验, 找出鸡红细胞悬液吸附处理鸭血清中非特异性凝集因子的最佳浓度。对比发现, 采用在96孔90o微孔板中逐孔加入0.05 m L待检血清和0.05 m L20%鸡红细胞悬液吸附1 h以上能够获得理想效果。
关键词：禽流感抗体,非特异性凝集因子,鸡红细胞吸附,鸭血清
参考文献
[1]GB/T18936-2003, 高致病性禽流感诊断技术[S].
血清凝集 篇6
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2013年12月~2016年8月3210个检测标本, 所有检测标本均由我院提供。
1.2 方法
对3210个待检测标本进行梅毒金标法检测后显示67个标本为阳性。对这67个阳性标本分别进行TRUST与TPPA与两种方法联合检测进行判断。
TRUST:所选试剂均由上海荣盛药业有限公司提供, 选择仪器为KJ-201BD型振荡器及相关的配套试剂, 并严格依照说明书上的内容进行操作。
其中心磷脂可以作为实验抗体, 将其与抗原进行反应, 其中卵磷脂可进一步加强心磷脂的抗原性, 胆固醇可进一步加强抗体的敏感度, 将其置入无水乙醇中, 并将胆固醇析出后转变为载体, 后将心磷脂、卵磷脂置入水中可在其周围出现胶体状的包裹形态, 并出现胶体微粒。将其抗原微粒置入准备检测的血清内, 并将血清中的抗体进行反应, 可出现凝集颗粒。
TPPA:所用仪器与设备均由日本富士瑞必欧株式会社提供, 选KJ-201C型振荡器及其配套的试剂, 严格依照操作说明书上的内容进行操作。将梅毒螺旋体Nichols株的精制菌体成分包被于明胶颗粒上, 将其与检测样本的抗TP抗体进行有效结合, 可出现相应的凝集反应现象。
1.3 评价指标
对比TRUST与TPPA及两种方法联合检测结果。
1.4 统计学处理
采取SPSS20.统计学软件对数据进行分析, 计数资料用百分数 (%) , 采用x2检验, 计量资料用“±s”表示, 采用t检验, 以P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 两种检测方法的阳性检测与联合检测结果分析
3210个待检测标本中, 行梅毒金标法检测后显示67个标本为阳性, 对这67个阳性标本进行TRUST、TPPA与T R U S T联合T P PA检测后得知, 联合检测方法符合率明显高于单项检测方式, 比较组间数据差异有统计学意义 (P<0.05) , 详见下表1。
2.2 不同年龄段分布情况
分析不同年龄段梅毒螺旋体抗体阳性患者分布情况不一致差异有统计学意义 (P<0.05) , 男性检测阳性抗体主要集中的年龄段为16~60岁, 女性检测阳性抗体主要集中的年龄段同样为16~60岁, 详见下表2。
3 讨论
梅毒为性传播疾病的一种, 其病原体为梅毒螺旋体[3], 当人体受到感染后, 将引发Ig G、Ig M类特异性抗梅毒螺旋体抗体等情况, 其中Ig M抗体的持续时间较为短暂, Ig G抗体可在人体内终身存在, 但是具有较低的抗体浓度, 不能有效预防再感染情况。另外, 对于非特异性抗体来说 (临床上可称为反应素) , 主要是由于螺旋体破坏的组织细胞释放的类脂样物质与螺旋体自身的类脂与之泛白刺激机体引发的Ig M、Ig G抗体, 可在病毒感染是患者的血液中检出。临床上对梅毒进行诊断时, 采取血清学检测的意义重大。
本次研究对3210个检测标本分别进行TRUST与TPPA, 前者检测中的甲苯胺红颗粒性质较为稳定, 具有较为清楚的检测结果, 当检测出红色颗粒状后, 则可判定为阳性结果, 与TRUST、血清学试验等方式相比较, 便于进行临床观察分析。再者, TRUST检测的为反应素, 仅仅对于某些梅毒患者 (一期梅毒与二期梅毒[4]) 的适用性较高, 且对于现症感染患者的适用性也较高, 便于临床上对疾病复发、再感染情况进行详细的监测。但是值得一提的是, 采取TRUST的特异性不高, 假阳性结果较易出现, 对于恶性肿瘤、麻风病、自身免疫疾病、反复自然流产人群[5]进行血液检查后同样可显示出上述反应素。再者, TRUST检测后出现的阳性结果应及时与梅毒螺旋体抗原血清试验进行分析, 利于及时排除假阳性检测结果。另外, TPPA对于二期潜伏梅毒、三期潜伏梅毒患者较为适用, 在实际检测时也可用于既往感染、现症感染患者中, 若进行上述检验后显示检测结果为阳性, 则仅仅表示曾经受过感染或者正在感染, 不可判定为梅毒疾病活动与否, 也不可作为临床治疗的监测方案。笔者建议对梅毒进行诊断时可采取TRUST、TPPA联合检测方案, 但是综合分析各方面的因素 (工作量、成本、漏检等) , 应先给予TPPA检测, 及时排除阴性结果, 后给予TRUST检测方案, 并做好疾病的随访等工作[6]。
本次研究结果显示, TRUST检测的符合率为64.18%, TPPA检测的符合率为79.10%, 采取TRUST、TPPA联合检测的符合率为97.01%, 明显高于单一检测方式的符合率差异有统计学意义 (P<0.05) , 说明联合检测方式可有效提高临床检测符合率。提高医护人员的安全保护意识。同时对不同年龄段TPPA和TRUST检测梅毒抗体阳性患者分布情况进行分析可知, 男性与女性阳性检测患者年龄段主要集中在16~60岁。梅毒发生率正趋向年轻化, 梅毒预防、检测任重而道远。要求医务工作者通过多种手段进行有效检测。
综上所述, 采取TRUST与TPPA方法与梅毒检测的临床应用价值显著, 将两种方法联合进行检测更为适用。
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