梅毒的实验室诊断方法论文(精选9篇)
梅毒的实验室诊断方法论文 篇1
关键词:梅毒,实验诊断
梅毒是苍白螺旋体引起的一种慢性经典性病, 近年来发病率在我国呈明显上升趋势。它的实验诊断方法很多, 大致可分为病原体检查和血清学试验。病原体检查需特殊设备 (荧光显微镜) , 操作人员不易掌握, 基层单位一般很少采用。笔者对502份血清样本采用RPR和胶体金梅毒抗体试纸条联合检测作初筛试验, 用TPPA作确证试验收到较好的效果。现将检测结果分析报告如下。
1 材料与方法
1.1 血样样本
收集门诊及住院患者205份, 体检者297份;其中男性398例, 女性104例。
1.2 试剂
RPR试剂盒 (上海实业科华生物技术有限公司生产) 。胶体金梅毒抗体检测试纸条 (北京蓝十字生物技术有限公司出品) 。TPPA试剂盒 (日本富士株式会社) 。以上试剂盒均贴有防伪标签。
1.3 方法
用RPR和胶体金梅毒抗体试纸条作初筛试剂, 用TPPA作确证试验。
2 结果
体检者297份样本RPR和胶体金抗体检测试纸长均为阴性。门诊及住院患者205份样本RPR阳性3例, 胶体金梅毒抗体试条3例阳性, TPPA证实3例均为阳性。
3 讨论
近年来, 我国的性病呈一定的蔓延之势, 梅毒也不例外, 如不及早控制, 必将成为社会问题。因此, 运用快速、准确、先进的分析方法进行诊断和疗效观察尤为重要。梅毒的实验诊断可分为病原体检查和血清学试验[1]。病原体检查包括暗视野显微镜检查法、Fontana-Tribomdexn镀银染色法、浓盐酸蒸汽显示法、单克隆免疫荧光法 (DFI) 、聚合酶链检测法 (PCR) 等。这些方法在基层医疗单位受条件限制, 不易普及。梅毒血清学试验方法很多, 大致可分为非特异性的类脂质抗体试验和特异性的密螺旋体抗原试验两大类。
3.1 非特异性的类脂质抗原血清试验用心磷脂作抗原, 测血清中抗心磷脂抗体。
包括: (1) 性病研究实验室试验 (VDRL) ; (2) 不加热血清仅应素试验 (USR) ; (3) 快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) ; (4) 甲基胺红不加热血清试验 (TRUST) 。这类试验对梅毒的敏感性高, 与梅毒的临床症状相关性好, 患者治愈时, 这些试验转阴性;复发及再感染时, 这些试验转阳性, 根据滴度的变化还有助于判断疗效, 具有重要的临床应用价值。且试验操作简便、快速, 试剂成本价格低廉, 被各级医疗单位广泛应用。但由于试验是非特异性的, 系统性红斑狼疮、风疹、传染性肝炎、肝硬化、风湿性心脏病、活动性肺结核等均可引起梅毒反应素慢性生物学假阳性, 效价可达需要 1∶64~1∶128, 且持续6个月至数年以上[2]。
3.2 特异性的密螺旋体抗原血清试验用梅毒螺旋体或其成分作抗原测定血清中抗梅毒螺旋体抗体。
包括: (1) 荧光螺旋体抗体吸收试验 (FTA-ABS) :被认为是“金标准”试验, 具有特异性强、敏感性高的特点。但试验需有质量优良的荧光显微镜和技术熟练的操作人员, 才能得到较为准确的试验结果; (2) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) ; (3) 梅毒螺旋体明胶凝集试验 (TPPA) , 原理与TPHA基本相同, 操作较TPHA方便, 出结果较快。 (4) 酶免法 (TP-ELISA) :是近年来广泛用于诊断梅毒的新方法, 其检测结果与FTA-ABs和TPPA比较, 差异均无显著性[3]。 (5) 梅毒金标测试条或测试卡, 具有简便快速、不需特殊设备、且可单分测定的特点, 在临床免疫学检验中应用广泛, 但必须建立完善的质量控制体系, 选用高质量的试条。这类试验敏感性和特异性均高, 可用作证实试验, 但不能用于疗效观察。
综上所述, 两类血清学试验各有优缺点。在临床应用时, 以快速、准确的试验为首选。有作者建议用ELISA法梅毒特异性抗体实验取代RPR、TRUAT或UST等方法, 并对可疑标本加做TPHA确试实验[2]。有的学者报道[4]用TPPA和RPR联合检测可减少漏检, 提高诊断率。国产胶体金梅素抗体试纸条价廉, 质量还有待进一步观察, 笔者只将它与RPR联合检测用初筛试验, 用TPPA作确证试验, 收到一定的效果。但由于条件限制, 观察病例较少, 可能还有一些问题没有发现, 如假阴性、试条的“前带”或“后带”现象等问题, 还需进一步探索。基层医疗单位建议使用胶体金快速检测试验结合非特异性的类脂质抗原血清试验对疑诊梅毒的患者进行筛选, 综合考虑梅毒特异性抗体和非特异性抗体的滴度变化水平才能真实评价治疗效果。
参考文献
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梅毒的实验室诊断方法论文 篇2
【关键词】 梅毒检验;梅毒螺旋体;结果准确率
梅毒是因梅毒螺旋体感染而引起的慢性疾病,该病病程通常比较长,在临床上的表现比较复杂,传染性较强,母婴传播及性传播是其主要的传播方式,对人体危害较大,严重的会损伤到患者全身的组织及器官。近几年来,梅毒的发病率具有逐渐升高的趋势。为了人们的健康,本文主要对ELISA、TRUST以及TPPA三种检测梅毒的方法作简要介绍,并对三种方法的特异性及敏感性作简要探讨。
1 资料和方法
1.1 一般资料 以2010年3月——2013年3月我院收治的212例患者梅毒患者为观察组,其中男性112例,女性100例;年龄18-72岁,平均年龄32.14岁;其中早期梅毒患者50例,Ⅰ期梅毒患者67例,Ⅱ期梅毒患者76例,Ⅲ期梅毒患者19例。选取同时期的220例非梅毒人员为对照组,在性别及年龄方面,过程组和对照组情况相似,在统计学方面,没有比较明显的差异,具有一定的可比性[1]。
1.2 检测试剂 TRUST由(上海荣盛生物科技有限公司)提供。ELISA试剂为英科新创(厦门)科技有限公司。TPPA为(日本富士瑞必欧株式会社)生产。
1.3 检测方法 抽取受检者2ml肘静脉血,把血清分离出来,并根据相关标准分别用合格的ELISA、TRUST和TPPA试剂并严格按说明书操作对血清进行检测。并在试剂有效期内使用。
1.4 统计学方法 对检测数据进行整理,并用SPSS16.0统计软件进行分析统计;对资料进行计算时,采用χ2检验,在统计学方面有比较明显的差异,具有一定的统计学意义(P<0.05)。
2 结 果
在阳性检出率方面,Ⅰ期梅毒及早期梅毒TPPA比较高,而TRUST和ELISA则比较低;此外,Ⅲ期梅毒及Ⅱ期梅毒ELISA的阳性检出率也比较高,而TRUST和TPPA则比较低,差异明显,具有一定的统计学意义(P<0.05)[2]。TRUST的特异度及灵敏度比ELISA和TPPA低很多,而且在阴性检出率及阳性检出率方面,ELISA和TPPA也比TRUST低很多,在差异性方面比较明显,因此,具有一定的统计学意义(P<0.05)。
3 讨 论
当人体感染梅毒螺旋体之后,血清中就会出现特异性抗螺旋体抗体及非特异性抗类脂质抗体,根据这两种抗体,就可以对患者体内的梅毒血清进行检测。ELISA以重组梅毒螺旋体的多肽为抗原来对血清中的抗体含量进行检测,特异性及敏感性高达97.1%和96.7%,且假阳性率比较低,可用于大规模的梅毒检测机临床诊断。用TPPA对梅毒特异性梅毒螺旋体抗体进行血清学检测,主要原理是把纯化的致病性梅毒中的菌株成分包在人工做成的明胶颗粒上作为抗原,并通过抗原抗体反应,进而把血清中的抗体检测出来。根据本研究可知,用TPPA对212例患者进行检测时,阳性检出率高达96.8%,具有很高的特异性及敏感性。但是此方法操作复杂,成本较高,因此,在大量的检测试验中很少运用。TRUST主要用于梅毒非特异性抗类脂质体抗体的血清检测,它使用类脂质作抗原来检测患者血清中的抗类脂质体抗体,从而对梅毒进行检测。在212例患者中,检测特异性为96.8%,敏感性为87.9%,在假阴性率方面较明显。在220例健康人员中,假阳性检出率为3.4%,比其他两种方法高。由此可知,此方法不利于对梅毒进行确诊,但适用于梅毒的治疗。对三种检测结果进行比较可知,适合用于梅毒疗效观察检测的是TRUST,適合梅毒标本的大批量检测的是ELISA,且有着比较高的准确率,适合TRUST 和ELISA检出标本的验证性检测的是TPPA。三种检测方法的相互应用能在很大程度上使误诊和漏诊的发生得到有效减少,在临床上有着非常重要的意义。
参考文献
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梅毒实验室检测方法的研究进展 篇3
1 病原体直接检测
1.1 暗视野显微镜检查TP (DF) :
暗视野显微镜可直接观察到病灶分泌物中运动活跃的苍白螺旋体, 结合临床症状可直接诊断梅毒。该法操作简单, 且经济、快速, 但敏感性较低, 检测阳性率为65%~70%, 主要受病程、某些外加因素以及检测人员技术水平影响, 而且对部分二期梅毒皮疹、隐性梅毒或口腔病灶标本不适用。
1.2 镀银染色方法检查TP (Wartbin starry) :
由于TP具有亲银性, 可将TP染成棕褐色或黑褐色, 且层次清楚, 反差明显, 形态清晰, 背景为黄色, TP易被着色辨认, 封片后可以永久保存标本。缺点是镀银染色液需新鲜配制, 且不能观察TP的运动方式, 易与类似TP的其他物质混淆, 故临床应用很少, 多用于科研和教学。
1.3 免疫荧光抗体染色:
该法将TP用异硫氰酸荧光素标记的抗TP抗体或单克隆抗体染色, 利用抗原抗体特异性反应, 荧光显微镜观察抗原抗体复合物出现绿色荧光, 表明检测标本中含有TP, 但需要荧光显微镜设备, 技术条件要求较高。
2 梅毒血清学检测
梅毒血清学检测根据所用抗原不同可分为非特异性抗体检测和特异性抗体检测两大类[2]。
2.1 非特异性抗体检测
2.1.1 康瓦试验:
是最早检测梅毒患者体内抗体的方法, 这种试验的抗原采自牛心肌粉酒精浸液。此试验操作复杂, 易出现假阳性, 目前这种试验已被临床淘汰。
2.1.2 性病研究实验室试验 (VDRL) :
该法属于微量玻片法, 以心磷脂为抗原, 加入胆固醇增强灵敏性和加入卵磷脂以提高抗原性, 定性及定量检测血清中的抗类脂质抗原的非特异性抗体。该实验操作简单、快速, 2 h内出结果。但是技术要求高, 抗原悬液不稳定, 要求待测血清新鲜而且需要加热灭活, 结果需要借助显微镜观察。
2.1.3 不加热血清反应素玻片试验 (USR) :
本法是VDRL检测技术改良后的方法, 改良措施是在抗原悬液中加入了二胺四乙酸二钠灭活补体从而使悬液更加稳定可保存4个月, 又在悬液中加入了氯化胆碱可对待测血清直接化学灭活从而减少了加热灭活步骤, 从而在检测时更加快速、方便。缺点是需要借助显微镜, 主观性强, 易出现漏检。
2.1.4 快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) :
利用从牛心中提取出来的有效成分—心磷脂、卵磷脂及胆固醇组成抗原, 然后用特制的活性炭颗粒进行吸附, 通过肉眼观察白色纸板上有无黑色凝集颗粒出现而直接进行结果判断。该方法操作简便、迅速, 适用于大批量标本检测。缺点是当抗体含量过高时, 易出现假阴性反应, 即前带现象 (promne phenomenon) , 会有漏检;还易出现生物学假阳性反应, 但是RPR试验可检测抗体滴度变化, RPR滴度变化是观察治疗效果、复发或再感染的重要指标。
2.1.5 甲苯胺红不加热血清反应素试验 (TRUST) :
该法用类脂质 (从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇) 为抗原来检测血清中的抗类脂质抗体, 原理与RPR试验类似, 只是以甲苯胺红染料颗粒代替活性炭颗粒做吸附剂。试验结果清晰易读, 简便快速, 稳定性好, 但对一期梅毒、三期梅毒及隐性梅毒进行检测时会出现假阴性反应, 尤其是三期梅毒。
2.2 特异性抗体检测
2.2.1 荧光密螺旋体抗体吸收试验 (FTA-ABS) :
试验以非致病性密螺旋体Reiter株作为抗原来吸收待测血清, 排除了同属抗原交叉结合的可能性, 特异性好。而且该法因采用了整条螺旋体进行检测, 敏感性高。文献报道FTA-ABS对各期梅毒检测的特异性达到92%, 对一期梅毒的敏感性为80%, 二期为99%~100%, 三期为95%~100%[3];缺点是使用了活菌, 存在一定的潜在危险性。而且需要使用荧光显微镜, 对设备和操作要求较高, 所以该法的使用受到了限制。
2.2.2 TP血球凝集试验 (TPHA) :
用羊或火鸡红细胞做抗原载体, 吸附从兔睾丸中提取的粗制TP粉碎物抗原, 检测血清中TP特异性抗体。由于试剂制备过程排除了各种非特异性反应, 敏感性和特异性均较高。但试剂成本较高, 操作较麻烦, 且易发生自凝现象和生物学假阳性[4]。
2.2.3 TP明胶凝集试验 (TPPA) :
主要是把致病性TP的精致菌株成分包被在人工载体明胶粒子上检测血清中相应的抗体, 该试验是TPHA的改良方法。姜泽升[5]对98例梅毒患者给予TPPA检测后, 其合计阳性率为100%, 结果表明TPPA具有敏感性高、特异性高等特点, 是目前国内公认的梅毒确证方法, 梅毒确诊的“金标准”[6]。但因其操作复杂, 反应时间长, 不易保存且出具滴度结果时成本较高, 故临床上TPPA常用于对筛检为阳性标本进行确诊。
2.2.4 TP酶联免疫吸附试验 (TP-ELLISA) :
该法采用基因工程体外表达得到的TP特异抗原 (常用Tp N47 Tp N15 Tp N17) 包被微孔滴定板, 同时检测血清中的抗TP-Ig M和抗TP-Ig G抗体, 利用酶的放大效应, 提高检测的灵敏度, 因采用了纯化的基因重组抗原, 提高了其检测的特异性。在低危人群中筛查的灵敏度可达到93.8%~99%, 并可实现自动化[7]。Sun[8]报道TP嵌合基因重组抗原 (Tp N15-47-17) 及单一抗原Tp N47 Tp N15 Tp N17分别构建双抗原夹心ELISA, 平行检测965份梅毒阳性血清, 结果证实前者比后者敏感度提高。由于此法操作简便, 不受样本纤维蛋白和溶血等影响, 一次可完成多份标本的检测, 试验结果由仪器分析, 客观而准确, 特别适用于大批血源标本的筛检。
2.2.5 TP胶体金试验 (CGT) :
运用双抗原夹心法的原理, 以胶体金作为标志物, 用特异性TP抗原作为包被和标记抗原, 在硝酸纤维素膜上进行反应来检测待测血清中的TP特异性抗体。Nessa[9]用此法检测684份女性性工作者, 与TPPA方法相比较, 灵敏度为94.45%, 特异性为92.6%, 认为这是一种非侵袭性的梅毒快速筛查方法。Lin[10]等采用优化了的具有梅毒特异性的重组蛋白TPN17和TPN47作为标记抗原, 建立检测血清中梅毒抗体Ig M的TP金标法, 经过多年的验证, 其敏感性、特异性分别为98.21%和99.04%。
2.2.6 蛋白印迹试验 (WB) :
该试验是通过电泳转移硝酸纤维膜抗原条上含有TP的各种成分来确认是否梅毒感染。近年来多采用具有高度免疫原性重组多肽抗原进行检测, 有更好的敏感性和特异性。Welch[11]报道WB法用于梅毒确认试验优于TPPA, 对二期梅毒、早期梅毒、神经梅毒阳性率为100%。对于生物学假阳性标本、r球蛋白增高和自身抗体的标本检测没有假阳性和可疑反应。
2.2.7 化学发光免疫测定 (CLIA) 。
该法的原理为:标本或包被有重组TP抗原的微粒子与稀释液混合后, 标本中的抗TP抗体同微粒子上包被的TP抗原结合, 清洗后, 加入标记吖啶脂 (acridinium) 的抗人Ig M或Ig G抗体, 在进行另一步洗涤程序后, 加入预激发液和激发液, 通过测定反应液的相对光强度来检测血清TP特异性抗体水平。该法从检测到结果判定均由仪器自动完成, 操作方便, 人为干扰少, 结果客观准确。Antonella[12]等用RPR、CLIA、TPHA、WB、ELISA五种方法对131份梅毒血清进行水平检测, CLIA法的敏感性最高, 为99.2%, 由此可见该法在梅毒特异性抗体检测中具有一定的优势。
2.3 基因诊断技术检测:
近年来, 聚合酶链反应 (polymerase chainreaction, PCR) 技术已得到广泛应用。PCR是一种体外扩增DNA技术。当存在模板DNA、底物、上下游引物和耐热DNA聚合酶时, 经过多次变性、复性、延伸反应的循环过程, 模板DNA就可得到大量扩增。进行PCR检测, 选择特异性高的靶基因是DNA扩增首先考虑的问题。目前已有几套扩增梅毒螺旋体DNA的基因如47ku、39ku (bmp) 、TPF1 tmp A、tmp B、Pol A编码基因[13]。但是除梅毒螺旋体DNA多聚酶Ⅰ基因 (TP-Por A) 特异性较高外, 大部分与其他微生物具有一定的同源性, 特异性还不理想[14,15]。梅毒PCR检测方法有常规PCR、巢式PCR、逆转录PCR、多重PCR和实时PCR。常规PCR只需要设计一对相应的引物, 扩增后需做凝胶电泳鉴定, 故操作比较繁琐, 同时扩增产物极易受到污染造成假阳性。巢式PCR先用一对外引物进行第一轮PCR, 然后再使用第一对引物扩增的DNA序列内部的一对引物再次扩增, 因其采用2对引物进行2轮扩增, 因此敏感性和特异性均有所增强[16]。逆转录PCR是提取组织或细胞中的总RNA, 以其中的m RNA作为模板, 采用Oligo (d T) 或随机引物利用逆转录酶反转录成c DNA;再以c DNA为模板进行PCR扩增, 而获得目的基因或检测基因表达。用于逆转录PCR设计引物的靶基因是16sr RNA, 也需要Southern印迹杂交试验来保证其特异性, 因此, 操作比较繁琐, 临床上不常使用。多重PCR是在同一个反应管中用多对引物同时扩增几条DNA片段, 目前常用于与其他病原体同时检测[17]。实时荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入荧光基团, 利用对荧光信号积累的实时检测来监测整个PCR进程, 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[18]。由于PCR是直接检测TP-DNA, 所以其检测的敏感胜和特异性均高于血清学检测, 此外, 良好的特异性使PCR技术在鉴别梅毒与其他螺旋体感染时显现了其独特的应用价值。PCR检测尤其适用于微量TP检测, 如先天性梅毒、早期梅毒。这是因为人体感染TP后要到4~10周才产生一定水平的抗体, 特异性抗体比非特异性抗体早约1周出现;缺点是PCR检测的假阳性较高, 检测敏感性会受标本来源和所处病期的限制。此外, PCR检测对实验室条件和操作人员有一定的要求, 且检测成本较高。因此, PCR不能替代血清学检测, 只能作为血清学检测的补充。
2.4脑脊液的检查:
用于诊断神经梅毒, 包括细胞计数、蛋白定量、VDRL、PCR检测和胶体金法。脑脊液细胞数和总蛋白量增加不是一种特异性反应, 只有脑脊液VDRL试验才是神经梅毒的可靠性诊断依据[19]。
3 展望
梅毒的实验室诊断方法论文 篇4
【摘 要】目的:探讨检测梅毒螺旋体病毒的三种不同方法的各自优劣势。方法:选取1304例患者,均同时对梅毒螺旋体的3种化验室检测方法进行检查(梅毒酶联免疫法吸附试验ELISA 、梅毒螺旋体抗体明胶凝集试验TPPA、梅毒甲苯胺红不加热血清试验TRUST共3种),统计分析所得各项数据。结果:1304例患者经临床确诊为梅毒阳性者41例,阴性者1263例;经ELISA方法化验检查,阳性者共39例,10例假阳性者,6例呈现假阴性;经TPPA 方法化验检查, 阳性者共40例,无假阳性者(0例),3例呈現假阴性; 经TRUST 方法化验检查,阳性者共17例,9例假阳性者,51例呈现假阴性。结论:梅毒酶联免疫法吸附试验与梅毒甲苯胺红不加热血清试验可互补不足,联合应用可提高梅毒螺旋体的检出率,再采用梅毒螺旋体抗体明胶凝集试验以排除假阳性进行确诊。
【关键词】检测;梅毒螺旋体;ELISA;TPPA;TRUST
【中图分类号】R759.1 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2012)09-0345-01
梅毒实验室检测技术评价 篇5
1 梅毒螺旋体抗原血清试验用活的或死的梅毒螺旋体或其成分来作抗原测定抗螺旋体抗体
这种试验敏感性和特异性均高, 一般用作确认试验[1]。这种试验是检测血清中抗梅毒螺旋体Ig G或Ig M抗体, 该抗体即使患者经过足够治疗, 仍能长期存在, 甚至终身不消失, 血清反应持续存在阳性。适用于血站献血员的筛查。
1.1 荧光密螺旋体抗体吸收试验 (fluorescent treponemal antibody!αbsorption test, FTA-ABS)
是以Reiter株抗原吸收待检血清, 保证了试验结果的特异性;以整条梅毒螺旋体检测血清中抗体, 提高了试验的敏感性。文献报道FTA-ABS对各期梅毒检测的特异性达到92%, 它的主要缺点是需荧光显微镜设备[2], 当标本荧光微弱病情可疑时, 试验结果判定常带有主观色彩。另外, 还有报道其提取物为活菌, 存在一定危险性, 故其应用受到很大限制[3]。美国常用此试验作为梅毒的确认试验[4]。
1.2 梅毒螺旋体血球凝集试验 (treponema pallidum hemagglutination assay, TPHA)
是用生物细胞 (火鸡或羊红细胞) 做抗原载体, 吸附从兔睾丸中提取的粗制梅毒螺旋体粉碎物抗原, 检测血清中特异性梅毒螺旋体抗体, 是目前国内许多医院常用的梅毒血清确认试验。试剂制备过程排除了各种非特异性反应, 因此TPHA的敏感性和特异性较高。缺点是试剂成本较高, 操作较麻烦, 不利于献血员大量标本的筛查。且易发生自凝现象和生物学假阳性[5]。另外, 其测定过程中包括多次吸液过程, 易造成操作者差错, 结果又依赖于操作者肉眼判断和解释, 而且结果不易于保存, 尤其不利于血站作为资料保存。
1.3 梅毒螺旋体明胶凝集试验 (treponema pallidum particle ag-glutination, TPPA)
TPPA作为梅毒抗体检测的确证方法, 有着很高的敏感度和特异性, 操作较简便, 结果清晰易判断, 但价格昂贵且结果判断难以自动化。
1.4 梅毒螺旋体免疫印迹试验 (western immunoblotting technique)
是80年代发展起来的一种检测技术, 它结合了免疫学和分子生物学的特点, 敏感性高, 特异性强。有报道[6]认为免疫印迹法用于梅毒诊断优于FTA-ABS和TPHA方法, 对早期潜伏梅毒、神经梅毒的阳性率均为100%, 对于非螺旋体标本 (包括正常标本、生物学假阳性标本以及γ球蛋白增高或抗核抗体的标本) 检测没有假阳性或可疑反应。免疫印迹法操作简便, 不要求试验仪器和环境, 结果容易判定, 但成本较高。
1.5 梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验 (enzyme!linked immunosorbent assay, TP-ELISA)
TP-ELISA方法检测梅毒螺旋体最早出现于1975年, 是用双抗原夹心法测定梅毒特异性抗体。TP-ELISA方法主要检测梅毒螺旋体Ig G和Ig M抗体, 文献报道TP-ELISA方法的敏感性高于FTA-ABS方法[7], 对Ⅰ期梅毒的诊断灵敏度为93.8%, 诊断特异性为100%。TP-ELISA方法检测操作简便, 不受样本中纤维蛋白和溶血等影响, 一次可进行多份样本的检测, 用酶标仪分析, 客观准确, 结果便于保留及标准化管理, 可用作筛查和确认试验。因此, TP-ELISA方法被公认为梅毒血清学诊断实验的首选方法。
1.6 胶体金免疫技术 (TPAb)
是在酶免结合基础上发展起来的, 利用免疫胶体金技术和免疫层析原理, 通过硝酸纤维素上包被特异性梅毒基因重组抗原, 以检测标本中特异性的梅毒抗体。众所周知, 近年来梅毒的发病率逐年上升, 为防止流动采血车上的血源浪费, 我们需要一种更为快速、便捷、特异、敏感的方法来满足实际工作的需求, 而梅毒螺旋体特异性抗体胶体金法 (TPAb) 则具有简单、快速、不需任何仪器的特点, 其敏感性, 特异性, 准确性都较高。因此, 可推荐应用于流动采血车。
2 螺旋体抗原血清试验用心磷脂作抗原, 测定血清中抗心磷脂抗体, 此类试验为非特异性抗体检测试验
2.1 快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)
是80年代问世的非特异性梅毒血清学试验, 所用抗原为标准的牛心肌脂抗原, 该方法操作简便、迅速, 适用于大量标本检测, 目前许多血站用RPR试验对献血者进行梅毒普查。缺点是当感染者接受治疗或疾病处于非活动期时, 抗体水平会迅速下降或消失, 容易出现假阴性反应, 即前带现象 (prozone phenomenon) , 从而造成漏检;还易出现生物学假阳性反应。对潜伏期梅毒、神经梅毒不敏感。
2.2 甲苯胺红不加热血清反应素试验 (TRUST)
TRUST所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇, 试验结果清晰易读, 简便快速, 稳定性好, TRUST法比RPR效价测定高一个滴度[8]。缺点是许多因素影响结果, 如高脂血症和抗心磷脂抗体阳性的血清均可干扰而出现假阳性结果[9]。
3 基因诊断技术检测梅毒螺旋体 (TP-PCR)
TP-PCR检测梅毒螺旋体DNA, 特异性很强, 敏感性很高, 是目前诊断梅毒螺旋体的先进方法。PCR检测梅毒螺旋体的DNA, 其敏感性、特异性均优于血清学方法。由于临床标本可能含有大量人细胞和微生物, 建立对梅毒螺旋体高度特异的PCR方法是很重要的。但不利于血站大批量的标本检测。
总之, 对于血站的梅毒检测选择一种敏感性和特异性均高的检测方法非常重要。以上几种检测方法各有优缺点。实验人员可根据各自的需求选择实验方法。研究人员仍在继续寻找更为敏感、准确、全面的检测方法。
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梅毒的实验室诊断方法论文 篇6
1 材料与方法
1.1 非特异性抗体检测样品
样品编码:GSTP1201、GSTP1202、GSTP1203、 GSTP1204、GSTP1205用TRUST。
1.2 特异性抗体检测样品
样品编码GSTP1201、GSTP1202、GSTP1203、 GSTP1204、GSTP1205用ELIS。
1.3 仪器、试剂、操作步骤
1.3.1 仪器
移液器、洗板机、梅标仪FA2100 KJ201A型振荡器、水浴箱。
1.3.2 试剂
(1) TRUST梅毒甲苯胺红不加热血清诊断试剂。生产厂家:上海荣盛生物有限公司, 批号20120301, 有效期20120317。
(2) ELST梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒 (梅联免疫法) 试剂。生产厂家:珠海丽珠试剂有限公司, 批号20120304, 有效期20130311。
1.3.3 操作步骤
本人于 2012/8/15在编码64-4、名称为兰州市安宁区疾控中心艾滋病病毒抗体初筛实验室, 根据TRUST 梅毒甲苯胺红不加热血清诊断试剂盒、ELST 梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒 (梅联免疫法) 操作步骤进行实验检测。
2 结果与分析
2.1 梅毒非特异性抗体监测结果分析 (见表1)
备注:+代表阳性, -代表阴性, (-) 表示没有滴度。
2.2 梅毒特异抗体检测
酶联免疫吸光度结果见表2。
2.3 分析能力验证 (见表3和表4)
3 结束语
实验室质控ELISA原始记录5% ;阳性对照5%;阴性对照5%;临界值算术5%, 合计得分20.0%、综上PT得分80.0%, 本实验室PT得分100.0%。本次实验很成功。
通过检测实验了解到梅毒血清学诊断, 必须要用两种或两种以上实验方法才能确诊为梅毒阳性。这对临床确诊有很大意义。
摘要:通过开展实验室能力验证活动, 客观评价本实验室的检测结果, 帮助实验室人员尽可能发现检测中存在的问题, 不断提高中心实验室的梅毒抗体检测水平。
关键词:爱滋病,梅毒抗体,检测
参考文献
[1]梅毒诊断标准WS273-2007.中华人民共和国卫生标准[S].北京:人民卫生出版社, 1900.
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[3]卫生部.全国艾滋病检测技术规划 (2009修订版) [S].
梅毒的实验室诊断方法论文 篇7
1 对象与方法
1.1 血清标本
患者血清来自山西医科大学附属运城市中心医院性病门诊、输血、介入检查治疗及术前, 经梅毒酶联免疫吸附实验 (TP-ELISA) 检测阳性老年患者血清, 年龄51~85岁, 其中51~60岁老年患者35例, 60~70岁老年患者28例, 71~85岁老年患者16例;男女性别大致相等, 分离血清当日检测。
1.2 方法
用梅毒酶联免疫吸附实验 (TP-ELISA) 检测待测血清, 阳性标本用甲苯胺红不加热血清反应素 (TRUST) 和经梅毒Reiter株吸收剂稀释血清后, 进行苍白密螺旋体明胶颗粒凝集实验 (TPPA) 检测。梅毒酶联免疫吸附实验 (TP-ELISA) 采用ELISA法, Clinibio酶标仪, 试剂均由科华公司提供, 严格按说明书操作。甲苯胺红不加热血清反应素 (TRUST) 实验试剂购自北京万泰生物药业有限公司。TPPA试剂购自日本富士瑞必欧株式会社。梅毒Reiter株吸收剂稀释剂由军事医学科学院微生物研究所提供, 均为国家批检合格试剂。严格按试剂说明书操作。
2 结果
79例用梅毒酶联免疫吸附实验 (TP-ELISA) 检测阳性标本, 甲苯胺红不加热血清反应素 (TRUST) 检测阳性79例。经梅毒Reiter株吸收剂稀释血清后, 进行苍白密螺旋体明胶颗粒凝集实验 (TPPA) 检测, 阳性者74例 (表1) 。
3 讨论
梅毒血清学检查是目前很多医院检验科常规开展的项目。近年来, 由于在实施手术、腔镜检查、输血等治疗前均须做此项检测, 我们检测的这些老年患者的血样, 有的是山西医科大学附属运城市中心医院手术前对梅毒诊断不明确的, 有的是患有自身免疫性疾病, 还有的是血液病、多次输血以及为性病门诊的患者, 绝大多数患者无梅毒的临床症状及感染史。出现梅毒酶联免疫吸附实验 (TP-ELISA) 检测假阳性, 国内有关学者考虑有以下原因: (1) 这些老年患者所患的基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和 (或) 抗T.pallidum抗体的交叉抗原; (2) 这些老年患者体内可能螺旋体共生, 诱导产生抗属、群或科特异抗原的交叉反应抗体[3,4]; (3) 目前TrAT试验所用的市售商品试剂盒中, 除FTA-ABS配吸收剂外, 其他TPPA、金标记多疫层析、ELISA等均未配置吸收稀释剂, 待测血清均未用吸收剂吸除与非梅毒螺旋体交叉反应的抗体。
综上所述, 老年患者体内可能有螺旋体共生, 诱导产生抗属、群或科特异抗原的交叉反应抗体;故TP-ELISA和TRUST检测全为阳性也就不难解释, 但绝大多数梅毒血清学试验阳性的年轻患者, 有病史及相应的临床症状, 诊断是明确的。目前大多数医院所用的梅毒血清试验的试剂盒中都无梅毒Reiter株吸收剂稀释剂, 我们经过试验分析发现60~70岁年龄段的患者经过梅毒Reiter株吸收剂稀释后行TPPA的检测阳性比前两种方法少2例患者, 71~85岁年龄段少3例患者, 所以我们建议凡是60岁以上的老年患者的梅毒阳性血清最好用梅毒Reiter株吸收剂稀释血清后, 进行苍白密螺旋体明胶颗粒凝集实验 (TPPA) 检测, 并结合临床综合分析, 并按照性病诊疗规范的要求, 动态观察, 不要过早的下结论, 以免给患者造成不必要的精神压力和身心伤害, 也不应掉以轻心, 以免延误治疗。
摘要:目的 应用不同的实验方法及试剂对老年患者的血清标本进行检测, 分析老年患者梅毒血清学阳性率偏高的原因。方法 用梅毒酶联免疫吸附实验 (TP-ELISA) 检测待测血清, 阳性标本用甲苯胺红不加热血清反应素 (TRUST) 和经梅毒Reiter株吸收剂稀释血清后, 进行苍白密螺旋体明胶颗粒凝集实验 (TPPA) 检测。结果 用梅毒酶联免疫吸附实验 (TP-ELISA) 方法初检山西医科大学附属运城市中心医院性病门诊、输血、介入检查治疗及术前老年患者血清, 共检测出79例阳性患者;用甲苯胺红不加热血清反应素 (TRUST) 检测79例阳性血清, 共检测出79例阳性患者;用经梅毒Reiter株吸收剂稀释血清后, 进行苍白密螺旋体明胶颗粒凝集实验 (TPPA) 检测79例阳性血清, 共检测出76例阳性患者。结论 老年患者的基础性疾病可能使机体释放诱导产生交叉抗原;老年患者体内可能有螺旋体共生, 诱导产生交叉反应抗体;待检测血清须用梅毒Reiter株吸收剂稀释后再进行抗体实验。
关键词:梅毒,老年患者,梅毒Reiter株吸收剂
参考文献
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梅毒的实验室诊断方法论文 篇8
关键词:梅毒螺旋体,Tp-ELISA,RPR,TPPA,血清学
梅毒是由梅毒螺旋体感染人体引起的经典的性传播疾病, 其临床表现极具复杂性, 很容易造成漏诊、误诊。目前梅毒的诊断主要是根据临床表现及血清学检查。梅毒血清学检测方法很多, 不同的检测方法又各有其特殊的诊断价值, 同时也各有其局限性。笔者就目前常用的三种检测方法即酶联免疫吸附试验 (Tp-ELISA) 、快速血浆反应素环卡实验 (RPR) 、梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验 (TPPA) 对本院皮肤科门诊及住院患者18 360份标本进行检测, 分析其各自的应用特点, 现报告如下。
资料与方法
样本来源:18 630份标本来自2012年6月-2013年8月皮肤科患者, 年龄17~79岁。
方法:TP-ELISA试剂由北京万泰生物药业股份有限公司提供;TPPA法试剂来自日本富士株式会社;RPR法试剂由上海荣盛生物技术有限公司提供;TP-ELISA使用仪器:MK3型酶标仪、TECANM8/R2R型洗板机。所有试剂均在有效期内使用, 所有血清标本分别用ELISA、RPR法检测, 对于结果阳性者我们用TPPA法进行确认试验检测, 所有操作严格按照说明书进行。
结果
18 360份标本检测TP-ELISA阳性478例, 检出率2.60%;RPR法检出梅毒阳性336例, 检出率1.83%;其中RPR和/或TP-ELISA阳性标本共计770例, RPR和TP-ELISA均阳性标本有217例, 针对770例RPR和/或TP-ELISA阳性标本经梅毒确诊实验TPPA的检测结果发现, TPPA法检测阳性413例, RPR的假阳性率9.74% (75/770) , 假阴性率25.45% (196/770) , TP-ELISA的假阳性率8.44% (65/770) , 无假阴性率, RPR灵敏度52.54% (217/413) , 特异性74.32% (217/292) , TP-ELISA的灵敏度100% (413/413) , 特异性86.40% (413/478) , 见表1。
讨论
梅毒螺旋体感染人体后会产生两类抗体, 一类是直接针对梅毒螺旋体的抗体, 另一类是针对类脂质的抗体。因此, 梅毒血清学试验有非Tp抗原试验和Tp抗原试验两大类。目前在我国绝大多数医疗结构非Tp抗原试验常用快速血浆反应素环卡试验 (RPR) 。目前RPR主要用于梅毒的筛查及疗效观察。由于RPR试验以心磷脂为抗原, 检测可出现生物学假阳性, 主要见于急性病毒性感染、自身免疫性疾病等。本项中有75例生物学假阳性反应, 经特异性方法检测为阴性结果。该方法具有操作简便、快捷、不需显微镜等优点, 缺点是抗体含量过高时, 易出现假阴性结果, 造成漏诊、误诊, 同时对潜伏期梅毒和神经梅毒亦不敏感。
酶联免疫吸附实验 (TP-ELISA) 是一种基于基因工程的特异性检测技术, 其灵敏性和特异性均较高, 它是以重组的梅毒螺旋体抗体包被固相板条, 与待检血清或血浆标本中的抗梅毒螺旋体抗体结合形成抗原抗体符合物, 通过酶结合底物显色, 用酶标仪测定结果[1]。特异性抗体在梅毒的潜伏期 (约感染2周后) 即产生, 对梅毒的早期辅助诊断有较好的价值。TP-ELISA试剂成本低, 操作简单, 适合标本量大的医疗卫生机构作为梅毒的筛查检测, 由于该法同时检测梅毒患者的Ig G和Ig M抗体, 而梅毒患者即使治愈后, 体内的Ig G类抗体仍然存在、甚至持续终身[2]。因此, TP-ELISA阳性只能说明正在感染或曾经感染过梅毒。临床工作中对于筛查阳性标本仍需进一步进行非梅毒螺旋体血清实验复检, 确证是否为梅毒现症感染, 从而确定是否需要进行更进一步的祛梅治疗。
梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) , 临床上常用作梅毒的确诊试验, 它是用超声裂解梅毒螺旋体抗原致敏明胶粒子, 致敏粒子与待测血清或血浆中的梅毒螺旋体抗原结合, 产生肉眼可见的颗粒凝集。梅毒螺旋体感染人体后约2~4周即可检测到抗梅毒螺旋体抗体, 此抗体特异性高, 可达98%以上, 所以检测到梅毒螺旋体抗体阳性可确证为现在或既往有过梅毒螺旋体感染。患者感染梅毒螺旋体后产生的抗梅毒螺旋体抗体一般能保持终身, 梅毒患者即使经过正规治疗后, 即梅毒螺旋体抗原血清实验仍可阳性, 故梅毒螺旋体抗原血清实验不能作为疗效观察指标。同时梅毒螺旋体抗原血清实验亦不能区分既往感染和现症感染, 实验阳性结果应进一步进行非梅毒螺旋体血清实验, 以判断是否为梅毒现症感染。另外, TPPA虽然灵敏度和特异性均较好, 但在检测时需将样本作系列稀释, 操作繁琐, 不能自动化, 且结果以肉眼判断, 易受主观判断影响, 不适于大批量标本筛查而只能作为梅毒抗体检测的确诊方法[3]。
综上所述, 现在用于检测梅毒螺旋体血清学的方法很多, 各种检查方法各有其优缺点。RPR主要用于梅毒的筛查及疗效观察, Tp-ELISA法是大样本筛查梅毒的理想方法, TPPA用于梅毒的确诊试验。必要时可将Tp-ELISA、RPR和TPPA联合检测以便减少临床误诊、漏诊的发生, 从而减少不必要心理和经济负担。
参考文献
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[2]李梅, 张菊梅.TPPA在梅毒血清学试验中的临床应用价值[J].甘肃医药, 2011, 30 (1) :43-45.
梅毒抗体检测方法的对比分析 篇9
1 资料与方法
1.1 一般资料
选自2009年2月~2010年2月我院住院和门诊诊断和治疗的梅毒患者129例,其中男性99例,女30例,年龄18~75岁,平均35.9岁。本组病例中早期潜伏期梅毒21例,一期梅毒39例,二期梅毒58例,不明期梅毒11例。
1.2 方法
1.2.1 标本采集
对129例梅毒患者,采取肘部无菌静脉血5 ml,3 000 r/min离心5 min,提取血清。
1.2.2 仪器及试剂
XK95I型多用振荡器由江苏江堰市新康仪器厂生产。START IVD ELISA全自动酶免仪;LD5-2A离心机,北京医用离心机厂。TRUST试剂由上海荣盛生物公司提供,TP-ELISA检测试剂为上海科华公司产品,TPPA试剂由日本富士瑞必欧株式社提供。
1.3 实验方法与原理
所有检测操作程序和结果判断均严格按照试剂盒说明书进行,并在试剂盒有效期内使用。TRUST法:采用活化心磷脂卵磷脂胆固醇配制VDRL抗原重悬于甲苯胺红特制溶液中与梅毒患者血清中的反应素发生粉红色凝集。分别取50μl的待测血清和TRUST试剂置于纸卡中,混匀8 min后肉眼观察凝集情况,使阳性结果出现红色絮状凝集现象。TP-ELISA法:包被精制基因工程表达的梅毒螺旋体特异性抗原,与梅毒血清抗体发生特异结合,产生显色反应。TPPA法:用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒与血清中的梅毒螺旋体抗体结合,产生可见的凝集反应,明胶颗粒为玫瑰红色。
2 结果
129例梅毒患者进行3种方法的检测,TRUST法检测阳性92例,阳性率为71.37%;TP-ELISA法检测阳性112例,阳性率为86.82%;TPPA法检测阳性129例,阳性率为100%;
3 种方法检测阳性率经统计学分析比较,P<0.05有显著性差异。同时对3 种检测方法的敏感度、特异性进行比较,具体见表1。
经统计学分析,TP-ELISA、TPPA两种检测方法比较,P>0.05无显著性差异;TRUST检测方法与TP-ELISA、TPPA两种检测方法比较,P<0.05有显著性差异。
3 讨论
梅毒是由苍白螺旋体引起的一种经典的性传播慢性感染性疾病,它可以引起全身性的感染及病变。其传播方式有经性接触传播、血液传播和母婴垂直传播3种[1]。近年来梅毒的发病率呈明显上升趋势,2008年国家卫生部公布27种法定报告的甲、乙类传染病中,梅毒发病由原来的第7位上升至第5位。梅毒的诊断依赖病史、症状、体征,暗视野显微镜检查和血清学检查。梅毒感染者血清中可产生非特异性反应素抗体和梅毒螺旋体的特异性抗体,血清学检测是实验室诊断梅毒的重要依据之一,它在梅毒的诊断、治疗及研究方面均有重要意义。
TRUST是采用活化心磷脂卵磷脂胆固醇配制VDRL抗原重悬于含甲苯胺红特制溶液中与梅毒患者血清中的反应素发生粉红色凝集,因而检测出梅毒。TRUST由于其廉价、快速、方便以及其所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇,其测定效价比RPR、USR高一个滴度等特点,所以广泛用于临床住院和门诊患者的梅毒筛查;其敏感性及特异性较差,对早期梅毒、晚期梅毒及治疗后梅毒检测的敏感性低以及对神经梅毒的不敏感性,常出现假阴性而漏检,其可作为梅毒疗效观察或随访有否复发或再感染的指标[2]。
TP-ELISA是随着近年梅毒螺旋体基因工程的研制成功而发展起来的一种血清学检测方法,是利用重组梅毒螺旋体的特异性抗原包被酶标板孔,并采用双抗原夹心法检测血清标本中的梅毒特异性IgM和Ig G抗体,极大地提高了试验的敏感性和特异性[3],对早期和晚期梅毒都有较高的检出率。用ELISA法检测的TP抗体稳定,即使经抗梅毒治疗后,抗体仍继续存在,甚至终生存在,用仪器判读试验结果[4]。本实验中TP-ELISA的敏感性、特异性均很好,与TPPA的符合率高,无显著性差异(P>0.05),该方法重复性好,结果稳定可靠。
梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)是使用螺旋体毒株制成抗原,是全螺旋体纯化抗原,在抗原组成上比较全面,不易产生假阳性,特异性较高,灵敏度高。梅毒螺旋体感染后,此抗体在体内持续存在,可终身保留,检测结果不随病情发展和治疗而变化,故TPPA作为梅毒的确诊试验,对各期梅毒的检测结果都有较好的稳定性,不易出现假阳性反应。是目前公认的较好的梅毒确认方法,具有很高的敏感性和特异性[5],但是试剂较贵,以肉眼判断结果,不宜大批量检测,一般作为TRUST和TP-ELISA等初筛阳性以及潜伏期梅毒和一些非螺旋体试验阴性又高度怀疑为梅毒患者的确认试验,也可用于排除用非特异性抗体检测所致的假阳性[4]。
由结果可知,临床上进行大量人员的高危人群梅毒筛查时宜采用TP-ELISA检测方法,由于其敏感性和特异性较高而且检测方法简便,假阳性率和假阴性率较低等特点易采用TP-ELISA检测方法[6]。对TRUST和TP-ELISA等初筛阳性以及潜伏期梅毒和一些非螺旋体试验阴性又高度怀疑为梅毒患者的确认试验采用TRUST检测方法[5]。在临床应用过程中积极掌握梅毒血清学检测方法的特点对梅毒的诊治可提供重要的参考依据,减少假阳性率和减少假阴性率,为梅毒及早发现、及早诊断提供明确诊断的依据。
摘要:目的:探讨梅毒抗体检测方法并进行对比分析。方法:选自2009年2月~2010年2月我院住院和门诊诊断和治疗的梅毒患者129例,采用TRUST、TP-ELISA、TPPA,3种梅毒血清学检测方法结果进行观察。结果:在3种方法检测的129例梅毒患者中,TRUST法检测阳性92例,阳性率为71.37%;TP-ELISA法检测阳性112例,阳性率为86.82%;TPPA法检测阳性129例,阳性率为100%。3种方法检测阳性率经统计学分析比较,P<0.05有显著性差异。结论:进行大量人员的高危人群梅毒筛查时宜采用TP-ELISA检测方法;对TRUST和TP-ELISA等初筛阳性以及潜伏期梅毒和一些非螺旋体试验阴性又高度怀疑为梅毒患者的确认试验采用TRUST检测方法。
关键词:梅毒抗体,检测,甲苯胺红不加热血清试验,酶联免疫吸附法,明胶颗粒凝集法,对比分析
参考文献
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