水通道蛋白1

水通道蛋白1（共8篇）

水通道蛋白1 篇1

胸外伤是临床常见病和多发病, 其致残率和致死率都非常高, 对机体健康和生命威胁极大。胸外伤多伴有肺挫伤, 肺挫伤必然伴随不同程度的肺水肿, 而后者则是胸外伤发生呼吸功能障碍、急性肺损伤 (ALI) 、呼吸窘迫综合症 (ARDS) 甚至死亡的主要病理改变和至要原因。本研究旨在通过检测大鼠挫伤肺组织内水通道蛋白, 阐明水通道蛋白在肺挫伤时与肺水肿关系, 为肺挫伤的临床诊治提供理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物模型制备和分组

健康成年SD大鼠20只 (雌雄不限) , 体质量200±5g左右, 购自北京大学医学部。随机分成对照组和实验组, 每组10只。实验组采用自由落体打击大鼠右侧胸部制作肺挫伤模型:腹腔注射10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉, 将大鼠仰卧位固定在动物台, 采用质量180g圆柱状金属棒打击大鼠右侧胸部3-6肋骨, 打击面积为2.83cm2的圆, 打击高度为1.0m, 与1h时断头处死动物。对照组仅麻醉后1h断头处死动物。

1.2 肺组织病理形态观察

取右肺部分组织甲醛固定、石蜡包埋, 切片5μm, HE染色观察。

1.3 肺组织中AQP1免疫组化检测

采用SP法, 各组均以PBS代替一抗设为阴性对照, AQP1抗体购置Santa Cruz公司, SABC试剂盒购置迈新公司。应用Motic Fluo 1.0图像分析系统进行结果分析, 测AQP1表达的平均灰度值 (OD值) 。

1.4 肺湿干比值测定

取右肺下叶以分析天平称湿质量, 置80℃烤箱连续烘烤48h, 去除水分后称干质量。肺湿干比值= (总质量-干质量) /干质量。

1.5 统计学处理

数据undefined表示, 用SPSS10.1统计学处理, 两组之间用t检验并作正态性检验和方差齐性检验。

2 结果

2.1 HE染色 对照组肺组织小叶结构清晰, 肺泡腔干净, 未见出血及水肿, 肺泡间质无肿胀, 实验组可见肺泡腔内少量红细胞漏出, 肺泡壁毛细血管扩张, 肺间质肿胀, 少量肺泡壁断裂。见图1、2

2.2 AQP1免疫组化染色

AQP1主要表达在肺泡毛细血管内皮细胞、脏层胸膜间皮细胞, 其中气管腔上皮细胞、肺泡上皮细胞有少量表达。对照组肺组织AQP1呈高表达, 平均灰度值为207.40±3.25, 实验组肺组织AQP1呈低表达, 平均灰度值为178.80±3.13, 两组比较有显著差异 (P<0.05) 。见图3、4

2.3 肺湿干比 (W/D) 对照组为4.4±0.3, 实验组为5.8±0.3, 两组比较有显著差异 (P<0.05) 。

3 讨论

肺挫伤是由于强大的暴力作用于胸部, 使胸腔骤然缩小, 增高的胸内压力作用于肺胀, 引起肺实质的出血、水肿。外力消除后, 变形的胸廓弹回, 在产生胸内负压的一瞬间又导致原来损伤区的的附加损伤[1]。外力使肺毛细血管和肺泡上皮细胞损伤, 引起肺间质充血水肿, 肺泡膜表面活性物质减少, 导致肺的通气/血流比例失调, 引发呼吸功能障碍。本实验在挫伤前、中、后均为使用呼吸机进行辅助呼吸, 较为接近真实状态下的肺挫伤发生发展过程。

AQPs为存在于动物、植物和微生物的一组小分子疏水性跨膜蛋白, 单体大小为26至34kD, 其可选择性通透水[2,3,4], 目前发现哺乳动物有6种AQPs在肺脏表达[5], 即AQP1、AQP3、AQP4、AQP5、AQP8、AQP9, 其中AQP1主要定位于微毛细血管内皮细胞的质膜、支气管周围血管床[6]。有研究表明[7], AQP1基因敲除小鼠肺泡-毛细血管间水的通透性较野生型降低了10倍。

本实验结果显示, 肺挫伤1h组大鼠的肺湿干比增大, 出现明现的肺间质肿胀的同时AQP1的表达明显下调。其机制可能是AQP1表达减少影响肺间质液体的重吸收, 从而使过多的液体在肺间质积聚。提示AQP1参与了肺挫伤早期肺水代谢的过程。

参考文献

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水通道蛋白1 篇2

目的 丙泊酚具有脑保护作用,其分子机制尚不清楚.水通道蛋白4 (aquaporin 4,AQP-4)与脑损伤后脑水肿有关.文中探讨大鼠脑缺血-再灌注损伤后AQP-4基因的表达规律及丙泊酚的作用.方法 雄性SD大鼠108只,体重(220±20)g,随机等分为3组,即假手术组:仅开颅,不做缺血再灌注处理;缺血再灌注损伤组(I/R组);丙泊酚组:I/R组、丙泊酚组经右股静脉置管后分别用微量泵持续给予等渗盐水2?ml/(kg・h)和丙泊酚20?mg/(kg・h),在大脑中动脉阻断前开始用药,至再灌注3?h后停止给药,各组又分为缺血2?h后再灌注0.5、1、3、6、12及24?h 6个亚组,每亚组6只大鼠.测定各组大鼠脑含水量,分别用RT-PCR和Western blot检测脑内各时相点AQP-4的mRNA和蛋白水平.结果 再灌注后3?h开始,脑组织含水量即有增加.与I/R组相比,再灌注损伤后3、6、12及24?h 丙泊酚组脑组织含水量均明显下降(P<0.05或0.01) .脑缺血-再灌注损伤后,脑组织AQP-4 mRNA表达升高(P<0.05或0.01),于12?h达峰值,而蛋白则于6?h达峰值.再灌注后24?h AQP-4 mRNA表达仍明显高于假手术组.与I/R组相比,丙泊酚组各点AQP-4 mRNA和蛋白的.表达均明显下降(P<0.05或0.01).结论 丙泊酚可部分抑制脑缺血-再灌注损伤后AQP-4的表达,减轻脑水肿,可能是其脑保护作用机制之一.

作 者：水祥兵 朱克军 任传路 缪明永 时多 SHUI Xiang-bing ZHU Ke-jun REN Chuan-lu MIU Ming-yong SHI Duo 作者单位：水祥兵,朱克军,任传路,SHUI Xiang-bing,ZHU Ke-jun,REN Chuan-lu(解放军第一00医院麻醉科,苏州,215007)

缪明永,时多,MIU Ming-yong,SHI Duo(第二军医大学生化教研室,上海,33)

水通道蛋白1 篇3

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

清洁健康雄性SD大鼠25只,体重220~260 g,由中南大学实验动物部提供。随机分为5组,每组5只:(1)A组:大鼠建立CCI模型后观察4天;(2)B组:大鼠建立CCI模型后观察7天;(3)C组:大鼠建立CCI模型后观察14天;(4)D组(正常对照):大鼠不做处理,自实验开始正常饲养观察16天;(5)E组(手术对照组):暴露左侧坐骨神经中段仅绕线,不结扎,自实验开始正常饲养观察观察16天。

1.2 材料

兔抗AQP1抗体和兔抗AQP2抗体购自中国Bioss公司。Revert AidTMH Minus First Strand c D-NA Synthesis Kit(K1631),DNase I(EN0521),Ribo LockTMRibonuclease Inhibitor,(EO0381)购自加拿大Fermentas公司。SYBR Green PCR Master Mix试剂盒(4309155)购自美国ABI公司。Mouse Beta-actin antibody(Mab-2008036)购自美国Pro Mab公司。

1.3 CCI模型的建立

参照BENNETT-XIE[4]方法,建立CCI模型。大鼠腹腔注射10%水合氯醛300~350 mg/kg麻醉,暴露左侧股骨后面中段坐骨神经,并于分叉前游离5~6 mm,用铬制4-0非可吸收线间隔1 mm结扎4道,松紧程度以引起小腿肌肉轻微颤动且不影响外膜血运为宜。术毕,逐层缝合。

1.4 标本采集与处理

A和B组大鼠分别于CCI后第4和7天处死取材,C组大鼠于CCI后第14天,D和E组大鼠观察14天处死取材:大鼠腹腔注射10%水合氯醛300~350 mg/kg麻醉,断头,随后操作于冰上进行。取L4~5脊髓节段(部分保留左侧传入神经以区分左右),部分脊髓取其背角立即置于液氮冻存RNA测定;其余脊髓用10%多聚甲醛固定24 h,经常规梯度乙醇脱水,二甲苯透明后石蜡包埋,以R135型切片机连续横断面切片,厚度3μM,烘箱烘烤6 h,供免疫组化用。

1.5 脊髓AQP1 m RNA表达的检测

采用Real time PCR检测脊髓AQP1的m RNA含量。实验采用美国ABI公司ABI-7500型荧光定量PCR及系统图形分析软件7500 Software V2.0.1,实验所用引物如下:LEFT PRIMER(5'-TCTCAAAC CACTGGATTTTC-3'),RIGHT PRIMER(3'-ATATCA TCAGCATCCAGGTC-5')。以GAPDH基因为内参;以D组检测样本为基准参照;采用2-ΔΔCT法计算其他样本的目的基因m RNA含量采用D组样本含量的相对倍数表示。

1.6 AQP1蛋白在CCI大鼠脊髓表达

取各组大鼠脊髓石蜡切片行脱蜡、水化、洗涤、抗原修复,正常山羊血清封闭液,室温10~15 min,滴加1∶400 Rabbit AQP1 antibody 50μL,置于湿盒内,4℃过夜;滴加1∶150二抗A液室温静置20min和2抗B液室温静置20 min;苏木精复染,中性树胶封片,显微镜下检查。观察各组切片的免疫组化阳性信号的表达部位。用Motic B5 professional series光学显微镜(美国Motic公司)观察切片免疫组化染色,采用Motic Image Advanced 3.0图像分析软件对AQPl免疫组化表达的阳性区面积、平均光密度进行测量。每张切片上,左右两侧脊髓背角各随机选择3个不重复高倍视野(×400),分别测量阳性区域面积、平均光密度,求其平均值,测量时进行光密度校正。

1.7 痛阈测定

分别于实验开始第1、3、6、9和16天(即造模前1天、造模后第1、4、7和14天)分别应用37370Plantar Test(Hargreaves's Apparatus,意大利Ugo Basile公司)和2390 Electronic von-Frey Anesthesiometer(美国IITC Life Science公司)测量所有大鼠的热痛阈(PWTL,单位:s)和机械痛阈(PWMT,单位:g)。

1.8 统计分析

实验数据中计量数据用均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS 13.0统计软件进行统计处理。组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD、SNK-q检验;组内比较采用配对t检验,检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 各组大鼠热痛阈和机械痛阈结果

各组大鼠左、右后肢基础热痛阈(PWTL)和机械痛阈(PWMT)无差别(P>0.05),见表1。

注:各组大鼠双后肢基础痛阈比较各组间差异无显著性,P>0.05

CCI术后大鼠均出现跋行,左足呈轻度外翻状,且有时出现舔足,左后肢悬空等保护现象。与CCI前比较,CCI后1 d左后肢已有机械痛阈的下降(P<0.05),CCI后4 d有热痛阈的下降(P<0.05),CCI各组与D组、E组比,痛阈均下降(P<0.05)。各组大鼠右后肢痛阈无差异(P>0.05)。见表2、3。

2.2 AQP1 m RNA的含量

AQP1 PCR扩增产物鉴定:PCR扩增曲线呈平滑S型,显示,平行孔间误差较小。见图1。AQP1PCR扩增产物熔解曲线曲线呈单峰状,没有出现杂峰,也未出现主峰的异常增宽,表明实验中未出现污染、引物二聚体和非特异性扩增。见图2。AQP1 PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳结果PCR扩增产物呈单一亮带,大小约为163 bp,与预期片段大小一致,说明PCR反应成功,扩增特异性好。

Real time PCR结果显示:D组和E组AQP1m RNA的含量差异无显著性(P>0.05),CCI各组大鼠脊髓AQP1 m RNA含量均高于D组和E组(P<0.05)。A、B和C组大鼠脊髓AQP1的m RNA含量分别为D组含量的1.688、4.876和5.806倍。见表4。

注:1)与D组比较,P<0.05;2)与E组比较,P<0.05;3)同组大鼠CCI左右痛阈比较,P<0.05

注:1)与D组比较,P<0.05;2)与E组比较,P<0.05;3)同组大鼠CCI左右痛阈比较,P<0.05

2.3 AQP1免疫组化结果

免疫组化染色示AQP1免疫组化阳性颗粒在各组脊髓灰质神经元中均有分布,其中CCI组大鼠的左侧脊髓背角AQP1阳性颗粒较脊髓其他区域多,C组左侧脊髓背角的AQP1阳性颗粒多于右侧脊髓背角。CCI组大鼠的左侧脊髓背角AQP1阳性颗粒多于正常对照组和假手术组。见图3、4。

注:1)与D组比较,P<0.05;2)与E组比较,P<0.05

AQP1阳性面积(AREA):D组左右两侧与E组同侧之间脊髓背角AQP1阳性面积比较无差异(P>0.05);A组左侧脊髓背角、B组左侧脊髓背角和C组左侧脊髓背角AQP1阳性面积均高于D组和E组同侧(P<0.01);C组脊髓背角AQP1阳性面积明显高于其右侧(P<0.01),见表5。

AQP1平均光密度(IOD):D组左右两侧脊髓背角与E组脊髓背角同侧之间AQP1平均光密度无差别(P>0.05);A组左侧脊髓背角、B组左侧脊髓背角和C组左侧脊髓背角AQP1平均光密度高于E组同侧(P<0.05);C组左侧脊髓背角比D组同侧平均光密度增高(P<0.05);C组左侧脊髓背角平均光密度高于其右侧(P<0.05)。各组右侧平均光密度无差别(P>0.05),见表5。

注:1)与D组比较,P<0.05;2)与E组比较,P<0.05;3)同组大鼠CCI左右比较,P<0.05

3 讨论

脊髓背角与神经病理性疼痛关系密切:Melzack-Wall疼痛闸门控制学说认为脊髓背角胶状质对疼痛的起“闸门”调节作用;脊髓背角含有诸多与疼痛有密切关系的物质,如:P物质、PKCγ和TRPV1等,这些物质在疼痛的发生发展中起着重要的作用。脊髓背角的小直径神经元(直径在23~30μm之间)发出主要负责处理温度和疼痛信息的伤害性感受的C类无髓神经纤维和Aδ有髓神经纤维[2,5]。邓伦斌等人对SNL的大鼠进行研究发现神经病理性疼痛大鼠背根神经节细胞受损后,其兴奋性增强,传导速度增快。过度兴奋的小直径神经元通过伤害性感受的C类无髓神经纤维和Aδ有髓神经纤维将兴奋传导至中枢引起疼痛。另外小直径神经元还发生自放电现象导致自发性疼痛和中枢敏化引起痛觉过敏[6]。

阻断钠离子通道的药物对治疗慢性痛有显著的疗效,其机制可能是神经损伤后脊髓传入神经元中的钠离子通道增加并且在损伤的轴突末端异常聚集,这些钠离子通道的增加可导致神经元反复的自发放电,并向中枢传导疼痛信号。对河豚毒抵抗的钠离子通道TTXr(the tetrodotoxin-resistant sodium channel)局限在伤害性感觉神经元上,TTXr与疼痛的产生发展有着密切的关系:在PGE2、5-HT、腺苷等物质的作用下,TTXr的兴奋阈值降低,其活化和失活的速率加快、变化的振幅增强,从而加快疼痛信号的传导。Nav 1.8钠离子通道是TTXr的其中一种,选择性地表达在传入神经元上(主要是伤害性感受器即C类无髓神经纤维分布的神经元),它在伤害性感受器的敏化过程中起着重要的作用:Jennifer等人对Nav 1.8基因SNS/PN3敲除的大鼠进行研究发现:该基因敲除的的大鼠对疼痛的反应性降低[7]。另外CCI模型可以诱发Nav 1.8通道的表达变化,免疫组化显示在CCI侧大鼠的背根神经节,SNS/PN3的免疫活性降低。大鼠损伤侧背根神经节Nav1.8和Nav l.9表达明显下降[8]。其机制可能是神经损伤后诱导此通道的营养型因子(如:NGF)减少及对其有抑制作用的生长因子(如:BDNF等)、细胞因子(如:L-1和IL-6)等升高有关。虽然Nav 1.8钠离子通道表达降低,但是它在损伤部位外周神经发生发生重分布和聚集,这种变化可能引起异常放电导致脊髓敏化,痛觉过敏。ZHANG等[9]人研究发现AQP1基因敲除的大鼠(AQP1-/-)脊髓背根神经节细胞中依赖Nav 1.8通道的钠流降低,神经细胞去极化减慢,从而疼痛信号的传导降低。本研究免疫组化结果显示AQP1在CCI侧脊髓背角有较强表达,PCR结果表明CCI组脊髓背角AQP1的m RNA含量明显升高,提示AQP1可能参与神经病理性疼痛的调节,推测AQP1可能通过调控Nav 1.8通道参与神经病理性疼痛的发生发展。

研究表明AQPl表达的上调可启动细胞内Caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3)的表达,诱发细胞凋亡[10]。研究发现Caspase-3加重神经病理性疼痛的痛行为[11]。另有研究表明给予Caspase-3的小RNA鞘内注射可在短期内减轻CCI大鼠热痛觉过敏。而阻断凋亡Caspase通路,抑制GAP-43的表达[12]。GAP-43(Growth associated protein-43),是一种神经特异性的质轴突膜蛋白,被称为轴突生长和再生的标志物[13,14]。它参与神经细胞外生长和再生以及突触发育形成,对神经发育和可塑性有重要作用。GAP-43可使脊髓LTP增强,导致中枢敏化,与病理性疼痛关系密切[15,16]。AQP1表达上调可导致细胞内Caspase-3增加,加剧细胞凋亡,产生的后续反应使GAP-43生成增加,最终可导致痛觉的中枢敏化,此过程可能导致病理性疼痛的形成和发展。

水通道蛋白1 篇4

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集2011年1月至2011年7月在中山大学附属第一医院妇科因卵巢型EMT行腹腔镜手术治疗并经病理证实为EMT患者36例,为EMT组,年龄22~42岁,平均31.42岁。选取同期因输卵管阻塞性不孕行手术的患者22例,为对照组,年龄25~43岁,平均年龄31.55。两组年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05)。每例患者术后均由病理证实,肝肾功能均正常,术前均未接受激素及其他抗子宫内膜异位症药物治疗。

1.2 标本的采集和处理 血清标本,术前用无抗凝剂真空采血管抽取患者空腹肘前静脉血5 ml,常温下静置1小时,以3000 r/min,离心10分钟,分别取血清1 ml加入到两管蓝色冻存管中,立刻保存在-80℃冰箱中冻存备用,共收集血清标本2×58例。腹腔液标本,腹腔镜检查时通过穿刺针吸取直肠子宫陷凹和膀胱子宫陷凹腹腔液,立即以3000 r/min,离心10分钟,分别取腹腔液1 ml加入到两管蓝色冻存管中,立刻保存在-80℃冰箱中冻存备用,共收集腹腔液标本2×58例。

1.3 血清和腹腔液中AQP1和VEGF表达水平的测定 人AQP1ELISA检测试剂盒由Blue Gene公司提供,人VEGF ELISA试剂盒购自R&D Systems 公司,包括底物、检测抗体、结合抗体、稀释液及终止剂等。严格按试剂盒说明书操作,每份标本测2孔,取其平均值,用空白孔调零,在450 nm波长下读取吸光度值,根据标准曲线得出AQP1、VEGF水平,其敏感浓度分别为ng/ml、pg/ml,批内及批间变异均<9.0%。血清及腹腔液均在同一批试剂盒内测定。

1.4 统计学处理 运用 SPSS 17.0统计软件进行统计学分析。数据以undefined表示,组间均数比较采用两独立样本的t检验,相关性采用Spearman等级相关分析,相关系数以r来表示,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组血清、腹腔液中AQP1、VEGF

表达水平 EMT 组血清中AQP1、VEGF水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);EMT 组腹腔液中AQP1、VEGF 水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表 1。

2.2 两组血清、腹腔液中AQP1、VEGF表达水平相关性

AQP1、VEGF在EMT组血清和腹腔液的表达均有显著正相关性(r=0.776,P=0.000;r=0.771,P=0.000);AQP1、VEGF在对照组血清和腹腔液的表达则均无相关性(r=-0.026,P=0.910;r=-0.040,P=0.860)。

3 讨 论

3.1 EMT发生与血管生成的关系

1927年,Sampson关于EMT发病机制的经血逆流学说至今仍然被广泛接受,但是不能解释普遍存在的生育期妇女经血逆流中仅约10%的妇女发生EMT。所以,近年来有学者提出关于EMT发病机制的 “在位内膜决定论”学说,提出子宫内膜细胞能够在腹膜表面植入并生长,血管发生是其重要因素之一,逆流进入腹腔内的功能性子宫内膜碎片(腺上皮细胞及间质细胞)必须通过黏附、侵袭和血管生成这一过程才可能发生异位、种植、生长,并引起病变和相关症状,而异位内膜细胞的黏附、种植和浸润性生长均依赖于局部新生毛细血管的形成。近年越来越多的研究表明,EMT属于血管生成依赖性疾病,建立并维持新的血管,使异位子宫内膜种植存活,是EMT形成的基础[4]。

3.2 AQP1与EMT发病机制的关系

近年来发现, AQP1在许多肿瘤组织的微血管内皮细胞中高度表达,参与肿瘤新生血管的形成[5]。EMT是一个具有侵袭能力的良性疾病,其异位内膜病灶的形成是一个“迁徙、黏附、血管形成”的过程,异位内膜种植、生长需要新生血管提供营养,与肿瘤具有相似之处[6]。VEGF是最为关键的血管形成刺激因子,是特异性血管内皮细胞最强的有丝分裂原,在肿瘤血管生成中发挥最主要作用。本文研究发现,EMT 组血清和腹腔液中AQP1、VEGF水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),且 AQP1、VEGF在EMT组血清和腹腔液的表达均存在显著正相关,而AQP1、VEGF在对照组血清和腹腔液的表达则均无相关性。本文的研究结果,结合近年来关于EMT患者血清和腹腔液中VEGF表达水平较非EMT患者升高的报道[7,8],进一步支持“在位内膜决定论”学说。说明AQP1和VEGF等血管生成促进因子不但通过腹腔和组织局部旁分泌途径发挥作用,也可能通过血液内分泌途径刺激机体内的异位内膜生成新生血管。EMT大多数情况下都局限于盆腔,而腹腔液是异位灶生长和发展的微环境,一旦腹腔液中AQP1、VEGF水平升高改变了腹腔的微环境,即会使腹腔血管生成活性增强。同时,腹腔血管通透性增强,大量的纤维产物渗出,募集大量的单核细胞至腹腔并激活为巨噬细胞,活化的巨噬细胞又分泌更多的VEGF,VEGF一方面继续促进血管形成;另一方面又不断增强血管通透性,形成正反馈过程,不断促使EMT的发生和发展[9,10]。

总之,AQP1在EMT患者血清和腹腔液中过表达,可能推动异位内膜黏附和侵袭,AQP1与VEGF可能通过促血管生成,共同促进异位内膜种植与生长,在EMT发生发展中扮演重要角色。

摘要：目的:研究子宫内膜异位症(EMT)患者血清和腹腔液中水通道蛋白1(AQP1)及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化及其相关性,探讨其在子宫内膜异位症发病中的作用。方法:采用酶联免疫吸附方法(ELISA),测定36例EMT患者和22例对照组血清和腹腔液中AQP1和VEGF的含量,进行相关性分析。结果:EMT组血清和腹腔液中AQP1、VEGF水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。AQP1、VEGF在EMT组血清和腹腔液的表达均有显著正相关性(r=0.776,P=0.000;r=0.771,P=0.000);AQP1、VEGF在对照组血清和腹腔液的表达则均无相关性(r=-0.026,P=0.910;r=-0.040,P=0.860)。结论:AQP1在EMT患者血清和腹腔液中过表达,可能推动异位内膜黏附和侵袭,AQP1与VEGF可能通过促血管生成,共同促进异位子宫内膜种植存活,是EMT形成的基础。

关键词：子宫内膜异位症,水通道蛋白1,血管内皮生长因子,血清,腹腔液

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水通道蛋白与妊娠相关疾病探讨 篇5

1水通道蛋白的结构、分布及调控

1991年, Arg等完成了对AQP1的克隆和鉴定, 从而确定了细胞膜上存在转运水的特异性通道蛋白。迄今为止, 已经从哺乳动物组织中鉴定出了13种水通道蛋白, 即AQP0、AQP (1～12) , 称为水通道蛋白家族。

1.1 水通道蛋白的结构

水通道蛋白家族成员不仅存在于哺乳动物组织中, 也存在于植物及微生物中, 由250～290个氨基酸组成。AQP的不同成员间的基因序列具有一定的同源性, 其差别主要存在于N端和C端。AQP是一种相对分子量为30KD的糖蛋白。其一级结构含6个跨膜区段并由5个环相连, 含有2个胞内环 (B、D) 和3个胞外环 (A、C、E) 。B环和E环为疏水性环, 其余为亲水性环。AQP整条分子前后两部分在序列上相似, 在膜上呈180°对称镜像结构, 接近氨基端和羧基端的B环和E环各有由3个氨基酸 (天冬氨酸-脯氨酸-丙氨酸) 组成的基元, 这是该蛋白家族成员具有高度同源的特征性结构, 并推断AQP的构成呈沙漏模式。其二级结构由40%的α-螺旋和42%～43%的β-片层及转角构成。它的三级结构以四聚体形式存在, 每个单体都是独立的功能性水通道, 在膜上处于反向相对位置的B环和E环对构成功能性水选择性通透十分重要, E环和B环呈显著疏水, 它们的任何变异都会引起水通道活性的下降。

1.2 水通道蛋白的分布及调控

水通道蛋白广泛分布于机体组织细胞中, 尤其与液体分泌和吸收有关的上皮细胞和内皮细胞含量丰富, 参与水的分泌、吸收及细胞内外水的平衡。它的调控机制大致分为2种, 一种是通过调节水通道蛋白的活性来调节它的功能;另一种是通过改变细胞膜上AQP的含量来调节水的跨膜流动。机体在特定的状态下, 某些因素可以通过一系列化学作用从而改变水通道蛋白的活性, 其中磷酸化和酸碱度的改变是最常见的引起AQP结构改变的因素, 从而调节AQP的活性。研究表明, AQP1、AQP2、AQP4、AQP5等水通道蛋白上的丝氨酸磷酸化可增加膜对水的通透性。此外, 发现至少有3种哺乳动物的水通道蛋白的活性为pH值所调节, 其表现主要是随着pH值的改变, AQP的活性增高或下调, 出现对水或甘油等小分子物质通透的选择性。另外, 机体内部理化性质的改变可引起细胞膜上AQP含量的改变, 从而对水代谢起调控作用。AQP5在高渗环境中被诱导表达, 皮质类固醇可诱导AQP1, 血管活性肠肽调节人结肠AQP3的表达, Ca2+可调节AQP0的水通透性。

2水通道蛋白在胎盘、胎膜组织的表达

正常的羊水循环对胎儿的生长和发育是必不可少的, 羊水过多或过少都会增加胎儿的畸形率和病死率, 胎儿的肾脏和肺是羊水的主要来源。另外, 胎儿吞咽羊水及羊水膜内转运的吸收方式被认为是羊水重吸收的关键调控方法。近年的研究表明, 羊水的膜内吸收即羊水通过胎盘胎儿面的羊膜、绒毛膜转运到胎儿血循环中, 是调节羊水平衡的根本途径之一[1]。但迄今为止, 关于水的跨绒毛膜吸收的分子学及细胞学机制仍未明确。研究水通道蛋白在胎盘胎膜上的表达及影响因素, 对了解羊水循环及调控进而寻找与之相关的妊娠期疾病的发病原因, 选择针对性的治疗方法具有重大意义。

水通道蛋白是一种能够加强水跨膜通透能力的膜蛋白, 参与多种水代谢的调控。Hasegawa等[2]研究表明在大鼠的胎盘上有AQP1表达, 而Johnston等[3]研究发现AQP1在羊的胎盘及绒毛膜内皮细胞上均有表达, 而胎盘和绒毛膜内皮上未发现;同时发现AQP3在羊的胎盘及绒毛膜上皮细胞上表达, 在羊膜则未表达。Wang等[4]通过人及动物实验的研究发现, AQP8在人和羊[5]的胎盘、羊膜、绒毛膜上均有表达。Liu等[6]研究表明, 在人和羊的胎盘AQP1、AQP3、AQP8均有表达, AQP1主要表达在血管系统, 而AQP3和AQP8表达在滋养细胞。并且, 在羊胚胎的发育过程中, AQP的表达水平高峰与羊水最大循环量的时期一致。Wang等[7]等用RT-PCR及North分析研究发现, AQP9在羊的孕早期的羊膜和尿囊表达, 并且以免疫组化方法证实, 表达于羊膜和尿囊的上皮细胞, 同时指出了AQP9作为水及包括尿素在内的中性小分子物质通道的功能。最近, 张睿等[8]用RT-PCR方法对正常足月妊娠的羊膜和绒毛膜的AQP1、AQP3、AQP8、AQP9进行测定发现, 4种AQP均有表达, 提示它们均为介导羊水通过膜内途径重吸收的重要通道, 在羊水量和成分的平衡调节中发挥作用。

3水通道蛋白与妊娠相关疾病

3.1 水通道蛋白与妊娠羊水量异常

妊娠期间, 母体、羊水及胎儿体液循环保持着水和电解质的双向交换, 使羊水循环维持平衡状态。适量的羊水可保证胎儿在羊水中自由活动, 免受挤压, 防止子宫压迫引起的胎儿畸形, 避免子宫或胎儿对脐带压迫导致的胎儿窘迫, 尤其减轻分娩时造成的胎儿缺氧及母体不适。同时, 它也是胎盘功能良好的表现。因此, 正常的羊水量对维持胎儿的生长发育是非常必要的。羊水量异常包括羊水过多和羊水过少。羊水过多的发病率约为0.2%～1.6%, 而羊水过少的发病率达8%～38%。羊水量的异常, 无论是羊水过多还是过少, 都将导致围生儿发病率和病死率明显升高。迄今为止, 发生羊水量异常的分子病理机制并不清楚, 且无确定有效的方法预防和治疗。

自从2000年Johnston等[3]研究发现胎盘胎膜上有AQP1和AQP3表达后, 陆续多次研究分别证明了AQP1、AQP3、AQP4、AQP8、AQP9在胎盘、胎膜有所表达。从而提出, 水通道蛋白与羊水的循环存在某种必然联系。Beall等[9]对妊娠10～19d小鼠的AQP0～10和羊水量相关性研究中发现, 胎盘和胎膜上可见AQP1、AQP3、AQP8、AQP9的表达, 未见其他AQP的表达。AQP1主要在胎盘血管表达, 而AQP3主要在胎盘滋养细胞表达。羊水量的多少与胎膜的AQP1的表达和AQP1、AQP9的表达呈负相关, 而与胎盘AQP3的表达呈正相关。认为AQP1主要调节羊水通过胎膜的水流量, 而AQP3主要是调节母体循环通过胎盘的水流量。Mann等[10]通过敲除AQP1基因建立了小鼠羊水过多模型, 发现敲除AQP1基因的小鼠在妊娠16～19d的羊水量较对照组明显增高, 同时羊水渗透压明显下降, 而胎盘和胎儿的重量无明显差异。虽然AQP1在肺和肾近曲小管均有表达, 但AQP1基因敲除并不会引起肺中肺泡液的清除率发生改变, 同时妊娠<20d的大鼠肾中AQP1 mRNA和蛋白质的表达水平均很低。因此推测, AQP1基因敲除后的妊娠小鼠的羊水过多的原因是由于羊水膜内转运途径减少而导致稀释的羊水显著增加, 提出特发性的羊水过多可能是由于胎膜的AQP1表达减少所致。Shioji等[11]用FGF2α受体缺陷小鼠建立了羊水过少模型, 通过免疫印迹和免疫组化方法进行研究, 发现出现羊水过少的时间约为孕20d, 指出孕20d是判定羊水过少模型的合适时间。并通过研究表明随着羊水量明显减少, 羊膜中AQP8的表达也明显减少。同时推测, 羊膜中AQP8的减少可能是胎盘老化所致, 也可能是随着羊水减少, 为维持羊水平衡而下调AQP8的表达。认为羊膜中AQP8的表达对羊水量的调节起重要的作用, 尤其是在羊水过少时。

但是, 关于水通道蛋白对羊水量异常的调控机制和方式有其不确定性。目前, 尚无足够的证据证明某种AQP是羊水量异常的发生的初始原因。虽然Beall等[9]证实胎盘AQP9的表达与羊水量呈负相关, 但最近Damiano等[12]在对AQP9的表达与尿素通过胎盘的量明显相关, 而与胎盘的水流量无关。Mann等[13]对妊娠37～40周的孕妇AQP1 mRNA表达的研究中发现, 羊水过多的孕妇胎膜AQP1的表达较羊水量正常的孕妇并未下降, 而是明显增加, 尤其是在羊膜, 其表达量增加达33倍。从而, 认为AQP1的表达改变不是引起羊水过多的原因, 而是羊水过多后的一种生理性的代偿反应。

3.2 水通道蛋白与妊娠高血压综合征

妊娠高血压综合征是妊娠期特有的疾病, 常发生于妊娠20周以后, 是引起孕产妇及围生儿死亡的主要原因之一。其主要表现有高血压、蛋白尿、水肿及心脑血管和肝肾等多脏器功能受损引起的病理改变。近年来, 妊娠高血压综合征的病因学研究已经从细胞病理、生化代谢的研究进入了分子生物学研究阶段, 并提出了多种学说解释其发病机理, 但至今其病因仍未能完全明确, 妊娠高血压综合征的发生与水通道蛋白是否有相关性及相关程度仍有待于进一步证实。

Damiano等[12]分别取正常妊娠和子痫前期患者的胎盘组织, 用RT-PCT、免疫组化等方法进行AQP9的鉴定, 结果发现胎盘上AQP9的表达, 子痫前期患者要比正常的孕妇高2.5倍, 而且Damiano通过免疫组化方法证实, 在子痫前期的胎盘中AQP9不仅存在于膜顶端和基底膜, 而且存在于胞质区域。Damiano研究发现, 在正常的胎盘对水的吸收速度为76pmol·g-1·m-1, 且可被Hgcl2所阻断;而子痫前期的患者胎盘对水的吸收速度要低于正常的胎盘而且对于Hgcl2的阻断不敏感。同时, 甘露醇的吸收与水的吸收一致。从而提出, 在子痫前期患者的胎盘上可能存在AQP9对水和甘露醇调控功能的下降或缺失。

3.3 水通道蛋白与宫颈成熟度

宫颈是由大约10%～15%的具有潜在的含有丰富的氨基葡聚糖和蛋白多糖的胶原纤维束为基质的平滑肌组织构成。这种胶原纤维束和氨基葡聚糖的相互作用, 在妊娠期间保持胎儿的宫内生长提供了重要的结构和机械强度。如改变宫颈的结缔组织, 例如:重组胶原网, 增加宫颈的水容量, 通过增加相关的透明质酸及降低硫酸软骨素和皮肤素来转换氨基葡聚糖的组成, 将会发生在妊娠期间如分娩过程一样的宫颈扩张。在不同的物种, 妊娠晚期都会出现为分娩做准备的宫颈的水容量的增加。Anderson等[14]通过对妊娠小鼠的宫颈水容量的监测发现, 同未孕小鼠和妊娠12d以前的小鼠相比, 在妊娠12～15d, 宫颈水的含量明显增加, 并且在15～19d保持持续的高水含量状态。至产后1d, 小鼠宫颈的水含量恢复到未孕状态。相比而言, 子宫的水含量在整个孕期保持平衡。

Anderson等通过对妊娠15d、19d、产后1d的小鼠的水通道蛋白在宫颈的表达的研究。结果表明, AQP3、AQP5、AQP8在3个时期均有表达:AQP3在未孕及中期妊娠的子宫颈表达较低, 在胚胎19d及产后1d存在表达高峰。AQP5和AQP8在胚胎12～15d表达明显增加, 但在胚胎19d及产后1d下降至基线水平;在妊娠15d和产后1d, AQP4在荧光纸上仅见轻微条带而在妊娠19d的时候不能出现, 但在分娩时却表现出一个很小的上升趋势;AQP7、AQP9可同时在妊娠15d的宫颈上表达, 但AQP7的条带在剩余的2个时间点都非常微弱而AQP9在妊娠19d及产后1d不能够被检测。并且, 无相关证据表明宫颈上有AQP1、AQP2、AQP6等表达。同时, Anderson等证实, AQP3主要表达于宫颈上皮细胞的基底细胞层, 而AQP4、AQP5和AQP8主要表达于顶端细胞层。由于类固醇5-a还原酶1类基因缺失而是宫颈延迟重塑的小鼠在妊娠19d及产后1d, 其AQP3、AQP4、AQP5、AQP8水平明显减少。脂多糖 (LPS) 导致早产的妊娠妇女与孕足月自然分娩的母鼠在孕期AQP4、AQP5和AQP8的表达方面有类似的趋势。从而证明, 在鼠妊娠及分娩期间, 水通道蛋白帮助其调节宫颈液体平衡。

3.4 水通道蛋白与妊娠期糖尿病

水通道蛋白1 篇6

关键词：肺胀,阳虚水泛,水通道蛋白-2,脑钠素,钠钾三磷酸腺苷酶

肺胀阳虚水泛证是肺胀病发展的末期,已到了阳虚至极不能运化、推动、温化、气化、蒸腾水湿的程度,水湿输布、运化、排泄功能障碍,以至于水湿不循常道而泛滥,泛溢肌肤而出现水肿,阳虚于下,水趋下行故脚肿显著,甚则腰以下水肿、全身水肿、胸腔积液、腹腔积液、心包积液( 痰饮、溢饮、支饮、悬饮) ,严重影响患者生活质量,甚至危及生命。肺胀阳虚水泛证的特点是阳虚与水泛同在,其证型的关键决定因素值得深入探讨,现从尿水通道蛋白-2( aquaporin-2,AQP2) 、血浆脑钠素( brain natriureticpeptide,BNP) 、钠钾ATP酶、血浆精氨酸加压素( ar-ginine vasopressin,AVP) 探讨其与肺胀的关联性。

1 对象与方法

1. 1研究对象

选择2012年10月至2013年6月云南省中医医院肺病科收治的119例肺胀病患者为观察对象,其中阳虚水泛证45例; 肺肾气虚证33例; 痰热郁肺证41例。其中男性96例,女性23例,平均年龄( 69±0. 24) 岁,病程5 ~30年。3组之间性别、年龄、病程等一般情况比较无统计学差异( P >0. 05) ,具有可比性。

1. 2 诊断标准

依据中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组《COPD诊治指南( 2007年修订版) 》的慢性阻塞性肺疾病急性加重期( AECOPD) 的诊断标准进行西医诊断[1],并符合《中医内科学》肺胀的阳虚水泛证、肺肾气虚证、痰热郁肺证之一的中医诊断[2]。

西医诊断依据症状有慢性咳嗽、咳痰和( 或) 呼吸困难及危险因素接触史; 存在不完全可逆性气流受限( 用支气管舒张剂后FEV1 /FVC < 70% ) 。

中医证候诊断分型:

( 1) 阳虚水泛证: 主症为咳嗽喘促,甚则倚息不得卧,咯痰清稀,心悸,面浮,下肢浮肿,甚则一身悉肿,腹部胀满有水,耳鸣,脘痞,纳差,濡泄,尿少,腰酸冷,形寒肢冷,面唇青紫,苔白滑,舌淡胖质暗,脉沉迟细弱。

( 2) 肺肾气虚证: 主症为呼吸浅短难续,咳声低怯,胸满短气,甚则张口抬肩,倚息不能平卧,咳嗽痰白如沫,咯吐不利,胸闷,心慌,形寒汗出,面色晦暗,舌淡或暗紫,脉沉细数无力,或有结代。

( 3) 痰热蕰肺: 主症为咳逆,喘息气粗,胸满,烦躁,目胀睛突,痰黄或白,黏稠难咯,或伴身热,微恶寒,有汗不多,口渴欲饮,溲赤,便干,舌质暗红或舌边尖红,苔黄或黄腻,脉数或滑数。

1. 3 纳入标准

( 1) 主要症状为慢性咳嗽、咳痰和( 或) 呼吸困难及危险因素接触史; 存在不完全可逆性气流受限,符合西医诊断为AECOPD者; ( 2) 符合肺胀的定义; ( 3) 符合中医诊断为肺胀阳虚水泛、肺肾气虚、痰热蕴肺证之一者。

1. 4 排除标准

( 1) 合并心、肺以外严重疾病及不合作者; ( 2)其他原因引起的水肿者; ( 3) 年龄在75岁以上者;( 4) 1周内服用利尿及严重影响内分泌、免疫、心功能的药物者。

1. 5 主要仪器与试剂

Sc-3614低速离心机 ( 科大创新股份有限公司中佳分公司) ; PYX-DHS隔水式电热恒温培养箱( 上海市跃进医疗器械一厂) ; Thermo Multiskan As-cent酶标仪( 美国Thermo公司) ; ROCHE E601全自动电化学发光分析仪( 德国ROCHE公司) ; MedisoftMicro 5000 provo2肺功能仪 ( 比利时Medisoft公司) ; AQP2试剂盒( 生产批次: 14881,上海江莱生物科技有限公司) 、AVP试剂盒( 生产批次: 10210,上海江莱生物科技有限公司) 、BNP试剂盒( 生产批次: 13768,上海江莱生物科技有限公司) 、Na+-K+-ATPase试剂盒( 生产批次: 12199,上海江莱生物科技有限公司) 。

1. 6 检测指标

用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测尿AQP2; 用放射免疫法检测血浆AVP水平; 用酶联免疫吸附法检测血浆BNP、钠钾ATP酶水平。

1. 7 统计方法

采用SPSS 16. 0统计软件分析检测结果。计量资料用均数±标准差( ±s) 表示,进行正态分布Kolmogorov-Smirnov和Shapiro-Wilk检验,呈正态分布的多组均数比较采用多因素方差分析,不呈正态分布的多组均数比较采用两个独立样本秩和检验,用相关分析法比较变量之间的相关性。

2 结果

由于部分患者未留置尿标本或未提供血标本,而未提供血样标本的患者较多,或因检测数据出现负值或显著偏差等而脱落,所以,所收集的患者尿样标本与血样标本例数不一致,组间观察例数与收集数据例数也不相同。

2. 1 各证型尿 AQP2的比较

各组尿AQP2数值经Descriptive Statistics Explore分析进行正态性检验,结果显示呈偏态分布,用非参数检验法两 个独立样 本 ( Two-Sample Kolmogorov-Smirnov Test) 检验,结果显示: 阳虚水泛证型组与肺肾气虚证型组AQP2比较无统计学差异( P > 0. 05) ;肺肾气虚证型组与痰热郁肺证型组AQP2比较无统计学差异( P >0. 05) ; 痰热郁肺证型组与阳虚水泛证型组AQP2比较无统计学差异( P >0. 05) ,见表1。

2. 2 各证型血浆 BNP 的比较

各组血浆BNP数值经Descriptive Statistics Ex-plore分析进行正态性检验,结果显示呈偏态分布,用非参数检验法两个独立样本( Two-Sample Kolmog-orov-Smirnov Test) 检验,结果显示: 阳虚水泛证型组与肺肾气虚证型组血浆BNP比较无统计学差异( P> 0. 05) ; 肺肾气虚证型组与痰热郁肺证型组血浆BNP比较无统计学差异( P > 0. 05 ) ; 痰热郁肺证型组与阳虚水泛证型组血浆BNP比较有统计学差异( P < 0. 05) ,见表2。

2. 3 各证型血浆钠钾 ATP 酶的比较

各组血浆钠钾ATP酶数值经Descriptive Statis-tics Explore分析进行正态性检验,结果显示呈偏态分布,用非参数检验法两个独立样本( Two-SampleKolmogorov-Smirnov Test) 检验,结果显示: 阳虚水泛证型组与肺肾气虚证型组血浆钠钾ATP酶比较无统计学差异( P > 0. 05) ; 肺肾气虚证型组与痰热郁肺证型组血浆钠钾ATP酶比较无统计学差异( P >0. 05) ; 痰热郁肺证型组与阳虚水泛证型组血浆钠钾ATP酶比较无统计学差异( P > 0. 05) ,见表2。

2. 4 各证型血浆 AVP 的比较

各组血浆AVP数值经Descriptive Statistics Ex-plore分析进行正态性检验,结果显示呈偏态分布,用非参数检验法两个独立样本( Two-Sample Kolmog-orov-Smirnov Test) 检验,结果显示: 阳虚水泛证型组与肺肾气虚证型组血浆AVP比较无统计学差异( P > 0. 05) ; 肺肾气虚证型组与痰热郁肺证型组血浆AVP比较无统计学差异( P > 0. 05) ; 痰热郁肺证型组与阳虚水泛证型组血浆AVP比较无统计学差异( P > 0. 05) ,见表2。

2. 5 各证型中因素相关性分析

各证型组内AQP2、钠钾ATP酶、BNP、AVP数值经双变量相关分析,结果显示在阳虚水泛证中,AQP2与BNP无相关性( P > 0. 05) ; AQP2与钠钾ATP酶无相关性 ( P > 0. 05 ) ; AQP2与AVP显著正相关( P < 0. 01) ; BNP与钠钾ATP酶显著正相关( P <0. 01) ; BNP与AVP显著正相关( P < 0. 01) ; 钠钾ATP酶与AVP显著正相关( P < 0. 01) 。

肺肾气虚证中,AQP2与BNP无相关性 ( P >0. 05) ; AQP2与钠钾ATP酶无相关性( P > 0. 05) ;AQP2与AVP无相关性 ( P > 0. 05) ; BNP与钠钾ATP酶显著正相关( P < 0. 01) ; BNP与AVP显著正相关( P < 0. 01) ; 钠钾ATP酶与AVP显著正相关( P < 0. 01) 。

痰热郁肺证中,AQP2与BNP无相关性( P >0. 05) ; AQP2与钠钾ATP酶无相关性( P > 0. 05) ;AQP2与AVP无相关性( P > 0. 05) ; BNP与钠钾ATP酶呈正相关( P < 0. 05) ; BNP与AVP无相关性( P >0. 05) ; 钠钾ATP酶与AVP无相关性( P > 0. 05) 。

3 讨论

3. 1 肺胀阳虚水泛证是阳虚并水泛

肺胀是多种慢性肺系疾患反复发作,迁延不愈,导致肺气胀满,不能敛降的一种病证,在《灵枢·胀论》、《金匮要略·肺痿肺痈咳嗽上气病脉证并治》等中早有记载[3,4],指明了肺胀的症状是以咳、喘、满、上气、甚则躁为特征。

肺胀常见的证候有风寒袭肺、外寒内饮、痰热郁肺、痰湿阻肺、痰蒙神窍、阳虚水泛、肺脾气虚、肺肾气虚、肺肾气阴两虚证等[5],阳虚水泛是肺胀的常见证候之一。汉代《金匮要略·水气病脉证并治》云“咳而喘,不渴者,此为肺胀,其状如肿”[4],严重时可出现“咳逆倚息,短气不得卧,其形如肿”的症状。本病证是由阳虚和水泛两方面构成的复合证型,阳虚和水泛存在着必然的因果关系,是阳虚引起了水泛,阳虚是内在的,隐而不见,水泛是外在的,显而可见。进入此期预示着阳虚到了极点,水湿不化已泛滥成灾。阳虚可累及肺、脾、肾、心等脏腑,但关键的脏腑是肺和肾。《内经·水热穴论》[6]云: “肾者至阴也,至阴者盛水也,肺者太阴也,少阴者冬脉也,故其本在肾,其末在肺,皆积水也。”“故水病下为胕肿大腹,上为喘呼不得卧者,标本俱病,故肺为喘呼,肾为水肿,肺为逆不得卧,分为相输,俱受者水气之所留也。”本病证以阳虚为本,水泛为标[7]。

慢性阻塞性肺疾病在发展过程中,由于气道壁和肺实质的慢性炎症及结构改变,最终导致气道管腔狭窄和进展性气流阻力增加,肺血管阻力增高,肺动脉压力增大,右心负荷加重,右心功能受损,引发右心功能衰竭。

从疾病症状来看,肺胀与慢性阻塞性肺疾病相类似,肺胀阳虚水泛证与慢性阻塞性肺疾病伴右心室衰竭相类似。

3. 2 肺胀阳虚水泛证的相关因子

在生理状态下的液体转运除了通过脂质双分子层弥散( 钠通道和Na+、K+-ATP酶共同构成细胞内外离子浓度差) 外,还有水通道蛋白( aquaporins,AQP) 介导逆浓度梯度的主动转运过程,水通道蛋白是一组与水通透有关的细胞膜转运蛋白。AQP2是肾脏调节水重吸收的重要分子,在调节机体水平衡中起着至关重要的作用[8,9]。AQP2受AVP调控。临床研究提示,心力衰竭患者尿液AQP2水平增高[10,11]。实验检测显示,肺气肿模型大鼠肾组织AQP2表达上调[12]。在慢性肺心病的发病中神经内分泌的激活是重要机制之一,这些被激活的神经内分泌物质主要包括AVP、心钠素( ANP) 、BNP、内皮素、血管紧张素等。临床研究表明,慢性阻塞性肺疾病急性发作期合并水肿患者血浆AVP、尿液AQP2明显增高[13],慢性肺源性心脏病患者血浆AVP、ANP明显增高[14]。而BNP与心力衰竭关系最为密切,研究表明,慢性肺源性心脏病心衰患者血清BNP明显增高[15],BNP是判断慢性肺心病患者右心室功能不全严重程度的指标之一[16],是慢性充血性心力衰竭肾阳虚证的参考指标[17]。但也有学者认为,血浆BNP浓度与中医证型无相关性[18]。肺心病心衰引起的水肿,既有心肌收缩力下降的因素,也有收缩力下降引起的系列神经内分泌异常,还有水通道本身的功能障碍。

阳虚的另一个特征与细胞膜钠钾ATP酶有关[19]。当钠钾ATP功能发生障碍时,细胞离子泵活性丧失,膜通透性增加伴随细胞内水分增加或( 和) 细胞内离子紊乱,当ATP酶活性严重下降将出现以胞质肿胀和核溶解为主要细胞损伤表现的“细胞胀亡”,轻度下降则会导致凋亡。研究发现,心肾阳虚型慢性充血性心力衰竭( CHF) 患者细胞钙泵活性低下,说明心肾阳虚型CHF患者体内的细胞膜上ATP酶活性低下[20,21]。慢性阻塞性肺疾病晚期由于长期慢性缺氧可导致肺血管广泛收缩和肺动脉高压,进而产生 慢性肺源 性心脏病 及右心衰竭[22],进入了肺胀阳虚水泛证阶段。

临床研究表明,多数肺胀病患者到69岁左右时需住院治疗,从中医的生理功能来看,此期已进入肺肾气虚、肾阳不足的年龄阶段; 从病理来看,由于长期病损,耗伤肺气、肺阴,肺气虚尤为显著,气虚则阳衰,有阳虚的病理基础。

本研究结果来看,肺胀阳虚水泛证与痰热郁肺证的BNP水平有显著性差异,提示BNP是肺胀阳虚水泛证与痰热郁肺证的鉴别点,是肺胀阳虚水泛证的特征因素之一。虽然阳虚水泛证、肺肾气虚证、痰热郁肺证各组之间的AQP2、钠钾ATP酶、AVP没有显著性差异,但阳虚水泛证的AQP2、钠钾ATP酶、AVP水平均较其他组增高。而且在阳虚水泛证中,除AQP2与BNP、钠钾ATP酶无相关性外,其他因素之间均有显著相关性,提示着BNP、钠钾ATP酶、AVP与阳虚水泛证有明显相关的趋势,符合肺心病右心衰的发展规律,是肺胀病阳虚水泛证的发展规律。研究表明,AQP2与AVP有显著相关性与以往的研究结果相类似[8,9],BNP与AVP的显著相关性与以往的研究结果也相同[14]。本研究表明,钠钾ATP酶与AVP显著相关,而且阳虚水泛证、肺肾气虚证、痰热郁肺证3组中均显示钠钾ATP酶与BNP显著相关性,提示血中钠钾ATP酶随着BNP、AVP的增高而增高,是肺胀病急性加重期的重要表现。BNP是心力衰竭的标志物,在肺胀病末期随着心功能不全的加重而升高,释放于血中的钠钾ATP酶数量增多而活性下降,组织细胞内的钠钾ATP酶相对不足、能量代谢低下,与阳虚有密切的联系,是阳虚的重要因子。AQP2水平受AVP的调控,AVP与BNP的水平是同步的,本研究结果显示钠钾ATP酶与BNP是显著相关的,提示钠钾ATP酶也是阳虚水泛的重要因子之一,依据因子间网络调控机制,间接反映AQP2、AVP也是肺胀阳虚水泛的内在因素。

3. 3 存在的问题

本研究没有得到肺胀阳虚水泛证与AQP2关联性的直接阳性结果,可能与下列因素有关: ( 1) 血标本和尿标本多为次日收集,部分患者拖延提供标本,检验室非工作日未收取标本,造成患者的血尿标本收集推后,与入院时间相距参差不齐,部分主要症状明显消退,特别是阳虚水泛证的水肿消退较快,样本与入院时的症状不同步,未能确切反映与证候的密切关联性。( 2) 试剂为国外进口国内组装,试剂的纯度及灵敏度可能存在差异。( 3) 检测的具体方法、步骤等操作细节可能缺乏严密地规范性。

水通道蛋白1 篇7

1 AQPs在水液转运和代谢中的作用

迄今为止, 从哺乳动物组织中克隆鉴定的AQPs已经有13种, 广泛分布于机体各种组织细胞中, 尤其是与液体分泌和吸收有关的上皮细胞及内皮细胞;并且研究发现其参与了机体水的分泌、吸收及细胞内外水的平衡等重要生理活动。它的发现为从分子水平揭示机体内水的转运和代谢机制提供了条件。近期研究发现AQPs的分布具有组织和细胞特异性, 参与了人体内多种重要的生理功能, 对维持人体正常生理状态具有重要作用, 例如:AQP0在晶状体纤维细胞中表达丰富, 与晶状体的透明度有关, 它的突变可能导致晶状体水肿和白内障, 小鼠缺乏AQP0将患先天性白内障[1];AQP1在胆管上皮质膜中有表达, 可能与其分泌功能有关[2];AQP2在肾中大量分布, 在调节肾脏水平衡中起重要作用;AQP5主要分布于各种腺体细胞, 与唾液分泌密切相关, 研究表明AQP5基因敲除小鼠唾液分泌明显减少[3], 并且AQP5还可能参与了肺内炎症时液体的异常转运[4]。

2 AQPs和脏腑功能的关系

中医学把体内一切正常水液称为津液, 包括各脏腑组织的内在体液和其正常分泌物, 如:唾液, 消化液, 泪液及尿液等。津液的生成、输布和排泄与各脏腑功能密切相关, 包括:肺、脾胃、肾、大肠和小肠等, 特别是肺脾肾三脏。《素问》曰:“饮入于胃, 游溢精气, 上输于脾, 脾气散精, 上归于肺, 通调水道, 下输膀胱, 水精四布, 五精并行”。中医学还认为津液是把各脏腑功能联系在一起的物质基础, 如果脏腑功能失调将影响津液的代谢, 破坏体内津液代谢的平衡, 正如《医学法律》所说“然则水病以肺脾肾为三纲矣”。津液代谢紊乱也必将进一步影响脏腑的功能, 《医学入门》所说“肺失宣降与通调, 则水不能布, 而致痰饮, 咳喘, 水喘”。津液的主要成分是水, 可以说无水则无津液, 现代医学认为水在体内的转运和代谢要通过AQPs, 可见津液代谢与AQPs密切相关, 而且AQPs在肺、消化系统和肾都有广泛表达, 说明AQPs可能和肺脾肾等脏腑功能密切相关, 研究生理状态下AQPs的分布和功能以及病理状态下AQPs的表达改变和机制, 将为中医学研究肺脾肾等脏腑功能提供新的思路和方向。

2.1 AQPs和肺主通调水道

肺位于上焦, 为水之上源, 主通调水道。通过肺的宣发和肃降对体内津液的输布, 运行和排泄起到调节作用。肺接受从脾转输而来的津液, 通过宣发作用输布至人体上部和体表, 通过肃降作用输布至肾和膀胱以及人体下部。因此肺的宣发和肃降不但能使水液运行的道路通畅, 还在维持机体水液代谢平衡中发挥重要的调节作用。如果肺的宣发和肃降功能异常, 则必然会影响机体水液代谢和平衡, 从而导致一些疾病的产生。如肺失清肃, 通调水道功能失司, 水液不行, 则聚而成痰, 停留于肺, 影响肺的呼吸功能;如果水液不能下输膀胱, 还能出现小便不利, 水肿等症状。由此可以看出肺在水液代谢的调节中起重要作用, 这可能和肺参与了体内AQPs的调节有密切关系, 王哲等[5]的关于实验性肺气虚证对大鼠肾组织AQP2的表达影响研究则为肺参与体内的AQP的调节提供了依据, 该研究表明肺气虚时, 肾脏AQP2表达增强。

2.2 AQPs和脾主运化

脾位于中焦, 为后天之本, 主运化水谷精微, 为体内津液代谢的枢纽, 能将津液上输于肺或直接布散全身, 以灌四旁。《太平圣惠方》“脾失健运, 则水湿内停, 而至水饮, 痰饮, 水泻”, 说明脾的运化功能与体内津液生成和输布也有密切相关。脾胃功能异常, 将导致体内津液代谢紊乱, 如《素问·至真要大论》所说“诸湿肿满, 皆属于脾”, 脾失健运, 水液停聚, 会形成水湿, 发为水肿, 并且脾虚时津液代谢紊乱形成的病理产物还会影响到其其它脏腑功能, 如肺的呼吸功能等。周正等[6]就从AQP4的表达变化探讨了脾胃湿热证的发生机理, 并证明AQP4的异常表达可能是脾胃湿热证的发生机制之一。王德山[7]等从脾虚大鼠结肠上皮细胞水通道蛋白8 (AQP8) 表达的变化探讨了脾虚泄泻的发生机制, 并认为AQP8表达下调可能是脾虚大鼠产生泄泻病理生理机制之一。这些研究都说明脾的运化功能与AQPs功能有内在相关性, 为今后脾的实质研究提供了新途径。

2.3 AQPs和肾主水

肾位于下焦, 《素问·逆调论》云:“肾者水脏, 主津液”, 在津液代谢中起主宰作用。肾主水液, 主要是指肾中精气的气化功能, 对于体内津液的输布和排泄, 维持体内津液代谢的平衡, 起着极为重要的调节作用。肾中精气的蒸腾气化作用是脾胃、肺等脏腑功能的动力, 推动了全身津液的输布。由肺下输至肾的津液, 通过肾的气化, 清者蒸腾, 经三焦上输于肺而布散全身, 浊者生成尿液注入膀胱, 排出体外。AQPs的正常表达可能是肾主水液的分子生物学基础[8], 肾阳对水液代谢的调节出现异常, 水通道蛋白表达异常可能是癃闭、淋证、水肿等水液代谢异常的发生机制。

3 AQPs和肺脾肾三脏功能相关性的关系

肺脾肾三脏在体内津液代谢中都有重要作用, 而且通过参与津液生成、输布与排泄, 把它们的功能密切联系在一起。某一脏腑的功能异常将会影响到全身的津液代谢, 也必将会影响到其它脏腑的功能, 如果能够从AQPs表达变化入手, 研究肺脾肾三脏在水液代谢中的作用及其相关性, 可能为肺脾肾三脏功能的相关性的研究提供新思路。如王哲等[5]的研究表明实验性肺气虚大鼠肾组织AQP2表达增强, 说明在机体水液代谢中, 肺和肾两脏相互配合, 共同维持水液代谢的平衡。如果肺失宣降, 通调水道失职, 将累及于肾, 而导致尿少, 甚至水肿。赵娴等[9]的研究也表明哮喘时肺失肃降状态下, 豚鼠尿液中AQP2的含量升高和肺的功能异常相关。

由此可见, AQPs在肺、消化系统和肾的正常表达可能是“肺主通调水道”、“脾主运化”和“肾主水液”的分子水平基础之一。通过研究AQPs的表达和调节机制, 将为揭示肺脾肾三脏的功能及其功能的相关性提供新途径, 为中医肺气虚证、脾气虚证、脾胃湿热证及肾虚证等证的本质研究提供新方向。

摘要：通过论述水通道蛋白和肺脾肾三脏在体内水液代谢中的作用, 探讨水通道蛋白和中医学肺脾肾三脏功能的内在相关性, 提出AQPs在肺、消化系统和肾的正常表达可能是“肺主通调水道”、“脾主运化”和“肾主水液”的分子水平基础之一。因此通过研究AQPs的表达和调节机制, 将为揭示肺脾肾三脏的功能及其功能的相关性提供新途径, 为中医肺气虚证、脾气虚证、脾胃湿热证及肾虚证等证的本质研究提供新方向。

关键词：水通道蛋白,肺,脾,肾

参考文献

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[5]王哲, 太史春, 李淑玲, 等.实验性肺气虚对大鼠肾组织AQP2的表达影响[J].中华中医药学刊, 2007, 25 (9) :1846-1848.

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[7]王德山, 张宇, 王哲, 等.脾虚模型大鼠结肠上皮细胞水通道蛋白8表达变化[J].中国中西医结合消化杂志, 2008, 16 (4) :71-73.

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水通道蛋白1 篇8

《黄帝内经》曰: “饮入于胃,游溢精气,上输于脾。脾气散精,上归于肺,通调水道,下输膀胱。水精四布,五经并行,合于四时五藏阴阳,揆度以为常也。”这些指出正常水液是通过肺脏的通调水道作用来输布全身的,故肺脏水液代谢功能的失调可以引起多个脏腑水液代谢紊乱。有学者通过Bradford法检测正常组和哮喘组豚鼠尿中水通道蛋 白2( aquaporin-2,AQP-2) 含量得出: 哮喘组豚鼠小便量显著减少( P < 0. 05) 、尿AQP-2显著升高( P < 0-01) ; 提示肺失宣降状态下,AQP-2表达的增加抑制了豚鼠体内水液代谢速度,导致小便量明显减少;故认为AQP-2的正常表达是保证肺主行水和肺通调水道功能的基础[1]。有研究发现慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者过多二氧化碳潴留能增加肾脏AQP-2的表达,过多AQP-2能增加肾集合管对水的重吸收,从而使患者水负荷过重导致外周水肿的发生,而患者在水肿发生前即有尿液AQP-2的增加[2]说明了慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者的肺脏呼吸功能的失调可很敏感引起肾脏中AQP-2基因的表达,进一步促进了水肿发生。

2 AQP-2 与肾脏水液代谢功能失调之间的关系

《素问·水热穴论》指出: “少阴何以主肾,肾何以主水? 歧伯对曰: 肾者,至阴也,至阴者,盛水也;肺者,太阳也,少阴者,冬脉也,故其本在肾,其末在肺,皆积水也。”因此中医上认为肾脏功能失常是机体水液代谢功能紊乱的根本因素。同时肾脏的气化功能在水液的正常运行中起重要作用。在基础研究中有国内外学者通过对小鼠的AQP-2基因敲除、活组织的检测及酶联免疫法等得出: AQP-2存在于肾内髓部集合管主细胞胞浆内囊胞和顶质膜,还存在于末端结肠上皮顶质膜及内耳内淋巴囊上皮细胞中; 特异性参与尿液浓缩[3]及稀释[4],与尿液的生成及变化有重大关系。现代生物学研究证实:AQP-2为抗利尿激素依赖式水通道蛋白,在抗利尿激素为零值时主细胞管腔膜AQP-2数量极少,水渗透通透性也极低; 当血浆抗利尿激素水平显著升高时主细胞管腔膜AQP-2水通道蛋白数量急剧增加,水渗透通透性也显著升高[5],这与中医因肾阳虚衰引起的水液泛滥极为相似。在相关疾病的临床观察中发现: 随着先天性肾积水患儿肾积水程度的加重,其尿液中的AQP-2的浓度和尿渗透压均进行性下降,提示肾脏AQP-2表达与肾脏积水程度密切相关,指出AQP-2变化是先天性肾积水肾脏浓缩稀释功能受损的重要分子基础之一[6]。另有报道显示:急性和慢性肾功能衰竭时AQP-2表达均降低,并指出AQP-2的变化与肾集合管上皮细胞损伤程度密切相关; 同时自由基、一氧化氮、肿瘤坏死因子等都会导致肾集合管AQP-2蛋白表达下降[7]。国外学者用链脲佐菌素诱导糖尿病发现几天后的糖尿病大鼠肾脏髓质顶端及基底部的AQP-2含量明显高于正常组[8],这也证实下消初期可引起AQP-2的增多。在中医治疗肾脏疾病方面研究发现: 黄芪能上调阿霉素肾病大鼠肾髓质AQP-2mRNA的表达,同时降低肾脏AQP-2蛋白表达,认为这是黄芪能改善阿霉素肾病大鼠水钠潴留状态的重要原因[9]。且临床复方治疗肾气虚型研究结果表明: 上调肾小管和集合管主细胞的AQP-2基因表达能达到治疗作用[10]。而在泽黄煎剂对糖尿病大鼠肾脏水通道蛋白表达的调节研究中发现: AQP-2蛋白在肾集合管表达,而在肾小球和肾间质未见表达; 且观察到在早期泽黄煎剂能减少动物的尿量和尿蛋白排泄率与在晚期可以利水消肿,增加尿量以减少尿蛋白排泄率似乎矛盾[11]; 这是否说明中医在治疗糖尿病肾病或者其他所有疾病的整个过程中都起到正性作用,甚至能降低最后事件的发生都是很值得探索的问题。

3 AQP-2 与脾胃水液代谢功能失调之间的关系

《素问·至真要大论》: “诸湿肿满,皆属于脾。”《脾胃论·脾胃盛衰论》: “百病皆由脾胃衰而生也。”中医学认为水液的生成有赖于脾胃的水谷运化。有专家通过总结国内外脾主运化水液与水通道蛋白的研究文献后得出: 津液代谢是联系脾胃功能与水通道蛋白2的纽带,认为水通道蛋白的正常表达可能是脾主运化水液的分子生物学基础[12]。有研究表明在脾胃湿热证中,湿重于热时测量尿中AQP-2明显减少,而在热重于湿时尿中AQP-2明显增多[13]。观察脾胃湿热证大鼠湿、热偏重模型及在三仁汤、白虎加苍术汤的干预下大鼠尿液中AQP-2的变化的实验发现: 脾胃湿热证大鼠湿、热偏重模型存在AQP-2含量增高,而三仁汤、白虎加苍术汤对大鼠尿液中的AQP-2含量具有调节作用,能降低已增高的AQP-2的含量; 说明AQP-2对脾胃湿热证型有重要鉴别作用,且得出中医祛湿的作用机制可能是通过降低人体AQP-2的含量来达到调整细胞内外的水液平衡[14]。另有实验研究认为,AQP-2在胃体中间粘膜组织的表达减少可能是湿阻中焦证临床证候产生的原因之一,亦可能是口渴口干等津液代谢失调的根本原因[15]。

4 AQP-2 与心脏水液代谢功能失调之间的关系

《素问·五脏生成篇》: “诸血者,皆属于心。”《素问·痿论》: “心主身之血脉。”中医上认为津血同源,心脏亦是参与了水液代谢平衡的调节,故心气、心阳虚等的发生可引起水液平衡失调。卢武生等[16]在监测心力衰竭模型大鼠尿中AQP-2时发现,随着心肌梗死的面积的逐渐增多,尿中的AQP-2的浓度也逐渐升高; 但尿中AQP-1及AQP-3的表达并无明显变化,而同时水潴留亦增加,导致低钠血症的进一步加重,这表明AQP-2是特异性增加的。临床研究也证明慢性心力衰竭患者尿中AQP-2与其血钠浓度呈负相关[17],提示AQP-2是慢性心力衰竭患者调节水潴留的关键性蛋白。以上研究为心阳虚证提供了新的思路和研究基础。在高血压病的病因研究中,Roxas[18]发现对盐敏感的Dahl SS /Jr大鼠给予高盐饮食后,其肾脏中的AQP-2的转录显著增加,这说明APQ-2的表达改变可能是引起高血压病的一个原因之一。

5 AQP-2 与肝脏水液代谢功能失调之间的关系

《金匮·水气病篇》曰: “肝水者,其腹大不能自转侧,胁下腹痛。”故指出肝脏的疏泄功能失调可引起水肿等病症的出现。在肝硬化腹水研究中发现:腹水大鼠模型肾脏皮髓质的AQP-2蛋白及其mR-NA全面上调,而在解释多项采用由BDL制备的肝硬化( 代偿) 动物模型的实验中发现,血浆抗利尿激素( 又称血管升压素,vascular vasopressin,AVP) 水平正常,AQP-2在肾皮质中的表达降低,而在内髓中无明显改变,其直接原因是AQP-2表达的下调,这也可能是肝硬化代偿阶段对于水潴留的一种适当反应; 当进展至失代偿阶段时,伴随着血浆AVP水平的增高才会出现AQP-2的上调,并认为丹参能下调肝硬化腹水时肾组织中AQP-2的高表达[19]。临床中证实肝硬化腹水患者存在AVP和肾脏AQP-2浓度增高,且血浆AVP的变化亦影响AQP-2的表达[20]。

6 AQP-2 与大肠水液代谢功能失调之间的关系

《脾胃论》指出: “大肠主津,小肠主液。”故当大肠功能失常,则大肠中的水液不得吸收,水与糟粕俱下,就可出现肠鸣、腹痛、泄泻等病症。Gallardo等[21]在研究大鼠 的结肠上 皮细胞时 发现AQP-2mRNA的确在远端结肠隐窝表达,表面吸收上皮细胞也有少量表达( 胃肠道的其他部位没有发现表达) ; 而且发现AQP-2蛋白与H+-K+-ATP酶共存表达于表面吸收细胞的顶部,并发现水剥夺可提高原位杂交信号及AQP-2蛋白表达水平; 这些可证实AQP-2存在于结肠并参与水液调节,这说明AQP-2与大肠分清泌浊功能有关系。有研究发现: 用宣白承气汤从 肠论治慢 性阻塞性 肺疾病得 出,使AQPsmRNA表达增强是其产生相关效应的作用环节之一; 进一步证实大肠分清泌浊功能与AQP-2的表达密切相关,亦从侧面证明运用中医治疗相关水液代谢疾病时AQP-2与疾病的好转存在明显的相关性[22]。

7 AQP-2 与子宫水液代谢功能失调之间的关系

《黄帝内经·五脏别论》云: “女子胞,主月事及胎儿,为女子先天之本。”中医学认为女子胞功能失调可以引起月经周期及白带分泌的异常。国外学者发现AQP-2能够在外源性雌激素的诱导下表达于小鼠子宫肌层和内膜的腺上皮和腔上皮细胞[23]。有实验从AQP-2在人不同时期子宫内膜中的表达入手,证实了AQP-2在人子宫内膜中的表达,且在月经周期的不同时期表达量不同,从而为揭示雌激素作用下的水在人子宫内的转运机制提供了理论依据。但由于本实验所取标本有限,增生期的标本也限于增生早中期,目前无晚期标本,因此有关AQP-2在人增生晚期内膜中的表达有待更深的研究; 而AQP-2在人子宫内膜液体分泌中作用亦有待于进一步探索[24]。另有学者通过对子宫肿瘤组织的病理切片研究后发现: AQP-2存在于子宫内膜上皮细胞胞质及胞膜,且参与了宫腔液体的增减[25],指出AQP-2的变化是引起子宫液体分泌变化的重要原因之一。

8 AQP-2 与膀胱水液代谢失调之间的关系

《素问·灵兰秘典论》: “膀胱者,州都之官,津液藏焉,气化则能出矣。”故膀胱功能的失调可引起尿失禁、少尿等病症。现代研究发现AQP-2定位于人膀胱黏膜上皮细胞的细胞膜及胞质中,在研究腺性膀胱炎患者中发现: AQP-2在炎症组织中表达较正常组织弱,即其相关组织中的阳性指数( 阳性指数 = 阳性面积/测量组织面积×阳性强度灰度值)较正常膀胱粘膜组织明显减少且差异有显著性( P < 0. 01)[26],这些都说明了膀胱功能的失调可引起AQP-2表达的异常,进一步可引起膀胱水液功能的失调而导致尿量减少。但临床上相关研究较少,故可以从AQP-2的表达来研究膀胱水液失调为相关疾病的治疗提供新方法。

9 小结

科学研究表明: 人体中的三分之二是水,没有水就没有生命; 并且它能决定大分子的结构、活性和反应,在生命的 过程中处 于中心地 位[27]。而AQP-2为水通道蛋白中一员,是人体各脏腑水液正常代谢所必须的非常重要的通道。综上可知:中医脏腑与水液代谢的关系可以通过AQP-2的变化来反映; 当人体水液代谢正常时,AQP-2在各脏腑中都有正常表达; 而水液代谢紊乱时相关脏腑都可出现AQP-2浓度及相关AQPmRNA表达的明显变化。通过进一步研究各脏腑对AQP-2浓度变化影响来了解人体水液代谢情况,不但可以为中医相关脏腑疾病的诊疗提供更加科学的依据,也为中医理论的现代化研究提供新方法和新思路,对指导中医临床诊疗规范和丰富中医理论均有重要意义。

摘要：经过多年的研究,目前对水通道蛋白2(aquaporin-2,AQP-2)的蛋白质基本结构、功能及作用机理方面都有较清晰的了解。但关于中医脏腑水液代谢功能失调与AQP-2关系的研究较少。从动物实验、临床观察、药物治疗等方面,都证实中医各脏腑的水液失调均可直接或间接引起AQP-2基因表达的变化,主要表现在相关组织或尿中APQ-2浓度的变化,并都存在相关性联系。这些为中医相关脏腑水液功能失调的深入研究提供现代医学基础。