金属蛋白酶

金属蛋白酶（精选9篇）

金属蛋白酶 篇1

卵巢上皮性癌(epithelial ovarian carcinoma,EOC)是妇科中常见的恶性肿瘤[1],因其发病隐匿,大多数的患者明确诊断时已属于癌症晚期,其病死率已位居女性生殖系统恶性肿瘤的首位。新生血管不仅仅为肿瘤细胞的增殖提供养分,同时是肿瘤细胞进一步侵袭的重要的途径,为肿瘤的生长及转移创造有利的条件[2]。近年来研究[3]表明,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteins,MMPs)在肿瘤血管的生成中起重要作用。本研究采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-perosidase,SP)检测60例卵巢上皮性癌、16例良性卵巢肿瘤组织和10例正常卵巢组织中MMP-2及MMP-9的表达,探讨与局部血管生成的关系,为临床上深入地了解卵巢上皮性癌中肿瘤血管的生成提供临床参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取本院2007年2月~2010年9月诊治的60例EOC患者初次切除后的卵巢石蜡包埋组织标本,年龄33~67岁,平均年龄(47.5±13.3)岁;根据国际妇产科联盟(Intemational Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)标准进行临床分期及病理组织学的分级,其中临床分期Ⅰ~Ⅱ期24例,Ⅲ~Ⅳ期36例;高分化~中分化程度35例,低分化程度25例;术后对60例EOC患者进行随访2~6年。并取同期因子宫良性疾病手术而切除卵巢的患者的石蜡包埋组织标本其中正常卵巢组织10例,患者年龄35~64岁,平均年龄(47.2±12.4)岁,术前未做任何的化疗及放疗;良性卵巢肿瘤组织16例,年龄34~68岁,平均年龄(48.9±15.1)岁。对数据进行分析比较。

1.2 方法

1.2.1 实验试剂

即用型鼠抗人MMP-2、MMP-9、CD34单克隆抗体及SP免疫组织化学超敏染色试剂盒和二氨基联苯氨(diaminobenzidin,DAB),均由美国Maxim公司生产,购于迈新生物技术有限公司。

1.2.2 方法

标本取材后采用5.0%的甲醛缓冲液固定,进行常规脱水和石蜡包埋,切取5.0μm石蜡切片,放置于54℃烘箱中。MMP-2、MMP-9和CD34表达情况的检测采用免疫组织化学SP法,按照MMP-2、MMP-9、CD34鼠抗人的单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒和DBA显色液试剂盒中各自的说明进行操作,每组染色均以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.2.3 观察标准

显微镜下观察细胞的染色情况,细胞浆或细胞核中出现黄色或棕黄色颗粒作为阳性判定的标准。按照5.0%以上细胞浆或细胞核呈棕黄色染色为表达阳性,<5.0%的细胞着色或细胞与背景一致不着色定位阴性(-),5.0%~30.0%的细胞阳性染色定为(+),30%~50.0%的细胞阳性染色定为(++),阳性细胞>50.0%定为强阳性(+++)。微血管密度(microvessel density,MVD)的计数:先在40倍镜下全面观察用免疫组织化学SP法进行CD34染色的切片,确定MVD的最高点;然后在200倍镜下记录5个视野内的微血管数,取其平均值作为该病例的MVD值。

1.3 统计学处理

采用SPSS11.5统计学软件对数据进行处理分析,各组MMP-2、MMP-9与临床病理特征的关系采用χ2检验,MVD与临床病理特征的关系采用t检验,MMP-2和MMP-9与MVD的相关性应用Spearman分析,检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 MVD在3种组织中的表达

CD34呈棕黄色细颗粒状,在卵巢肿瘤组织间质血管内皮细胞胞浆呈阳性表达,EOC、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织的MVD分别为(41.25±32.12)、(14.27±9.58)和(7.43±5.47),EOC组中的MVD与卵巢良性肿瘤组比较显著升高(P<0.05)。

2.2 MMP-2和MMP-9在3种组织中的表达

MMP-2和MMP-9免疫组织化学的阳性产物均呈棕黄色细颗粒状,主要定位于肿瘤细胞的胞浆和胞核。60例EOC中MMP-2和MMP-9的阳性率分别为67.45%和72.41%,显著高于卵巢良性肿瘤组及正常组(P<0.05)。

2.3 EOC中MMP-2和MMP-9的表达与临床病理特征的关系

EOC中MMP-2和MMP-9的表达与肿瘤大小无关(P>0.05),与细胞的分化程度、转移和肿瘤分期具有相关性(P<0.05),结果见附表。

2.4 卵巢上皮性癌中MMP-2、MMP-9与MVD表达的相关性分析

MMP-2和MMP-9的表达均与MVD表达呈正相关,相关系数为(r=0.254,r=0.246,P<0.05)

3 讨论

MMPs是蛋白水解酶中较为重要的一类。资料显示[4,5],肿瘤细胞除了能分泌MMPs外,还能分泌血管生成因子,如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),诱导内皮细胞产生MMPs。降解细胞外基质和基底膜[6,7],进一步促进肿瘤新生血管的生成。

据资料,MMP-9在EOC的表达与局部肿瘤血管生成的关系的报道较少,本文通过研究,将正常卵巢组织与卵巢上皮性癌组织进行对比分析,结果显示卵巢上皮性癌中MMP-9的阳性表达率显著升高(P<0.05),这与王喜梅[8]的报道相一致,从而证实了MMP-9在卵巢上皮性癌中过度表达,促进肿瘤血管的生成。MMP-2是分子量为72 kD的Ⅳ型胶原酶,主要的作用底物为4、5型胶原,主要由肿瘤细胞、成纤维细胞以及炎性细胞分泌,研究[9]表明,其在肿瘤介导的细胞外基质降解中发挥着重要的作用,基质膜和基质的降解对血管生成所必需的内皮细胞极为重要,MMP-2被认为是肿瘤血管生成关键因素之一。通过本次研究结果显示,MMP-2及MMP-9的表达率高的EOC患者,其肿瘤血管生成的能力越强[10],因此,卵巢上皮性癌中MMP-2和MMP-9表达的增强,可能与卵巢上皮性癌的发生发展具有相关性(r=0.254,r=0.246,P<0.05)。检测EOC中MMP-2及MMP-9的表达有助于进一步了解肿瘤血管的生成情况。

综上所述,MMP-2及MMP-9与EOC的血管生成显著相关,是EOC相关的一种癌蛋白,在EOC的发生和发展中发挥着重要的作用,对蛋白的表达有正向的调节作用,进而可以影响EOC血管的生成。

参考文献

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[8]王喜梅.应用组织微阵技术研究MMP-9与TIMP-1在卵巢上皮性癌肿瘤中的表达及临床意义[J].肿瘤防治研究,2005,32(8):480-482.[8]WANG XM.Study the expression of MMP-9 and TIMP-1 inepithelial ovarian carcinoma using tissuemicroarray(TMA)[J].Cancer Research on Prevention and Treatment,2005,32(8):480-482.Chinese

[9]ROTHENBERG ML,NELSON AR,HANDE KR.New drugs onthe horizon:matrix metallop roteinase inhibitors[J].Stem Cells,1999,17:237-240.

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金属蛋白酶 篇2

金属蛋白研究中几个值得注意的动向

本文叙述了金属蛋白和金属酶研究中近年来几个值得注意的发展动向,即与金属离子相关的疾病(特别是神经退行性疾病)、金属离子在蛋白质的折叠、聚集和装配中的.作用、金属伴侣分子、金属蛋白的设计和构建、金属蛋白与 DNA 相互作用.

作 者：黄仲贤 作者单位：复旦大学化学系化学生物学实验室,上海,300433刊 名：化学进展 ISTIC SCI PKU英文刊名：PROGRESS IN CHEMISTRY年，卷(期)：14(4)分类号：O643.3 TQ51关键词：金属离子相关疾病 折叠 金属伴侣分子 金属蛋白 DNA

金属蛋白酶 篇3

关键词 骨性关节炎 金属蛋白酶 软骨细胞

试剂、仪器及实验材料 

主要试剂：①化学试剂：碳酸氢钠、磷酸氢二钠、硫酸镁、考马斯亮兰、MTT、甘氨酸、Tris、SDS、TEMED、二甲基亚砜。②细胞培养试剂与培养板。③聚合酶链式反应（PCR）试剂：RNA提取试剂盒，RNA PCR相關试剂盒。主要仪器：（略）

实验材料：新西兰大白兔，鹿茸多肽，骨肽注射液。

实验方法

动物模型及分组：雄性新西兰白兔8只，3～5个月龄，体重2.5～3.5kg，平均2.85kg。按组间均衡一致的原则随机分为两组，每组4只。采用内侧副韧带、前后交叉韧带切断并切除内侧半月板Hulth骨性关节炎模型，实验组均行内侧副韧带、前后交叉韧带切断并切除内侧半月板；对照组仅行侧膝关节切开术，但不行前交叉韧带切断并切除内侧半月板术。

MTT法检测鹿茸多肽对软骨细胞生长的影响，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测软骨细胞分泌金属蛋白酶，RT-PCR法检测软骨细胞中金属蛋白酶mRNA表达。

统计学方法：均值间差异比较采用组间t检验，数据统计以（X[TX-]±S）表示。

结果与分析

鹿茸多肽对兔骨关节炎软骨细胞增殖的影响：10μg/ml、50μg/ml的鹿茸多肽均不影响软骨细胞的活性，而在72小时内100μg/ml、200μg/ml、500μg/ml及1000μg/ml的鹿茸多肽对软骨细胞的增殖均有促进作用，与对照组有显著性差异（P<0.05、P<0.01）。依据实验原则（用量最小，疗效最好），判定100μg/ml为促进软骨细胞增殖的最佳药物作用浓度。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测软骨细胞分泌金属蛋白酶：金属蛋白酶1、3在正常、骨性关节炎软骨细胞及不同浓度鹿茸多肽作用软骨细胞分泌的胞外基质中未见异常表达。

RT-PCR法检测软骨细胞中金属蛋白酶mRNA表达实验结果：金属蛋白酶1、3在正常软骨细胞核酸中未见明显表达，而在骨性关节炎软骨细胞中其含量却出现高表达，并且在经鹿茸多肽、法滋隆作用后的骨性关节炎软骨细胞核酸中未见金属蛋白酶1、3表达。

讨 论

骨性关节炎中关节软骨进行性破坏和丧失的机制还不清楚，但其病理过程可划分为三个相互交叉的阶段，即软骨基质的改变，软骨细胞对组织损伤的改变，软骨细胞合成代谢衰退及软骨组织的进行性丧失［1］。可见，软骨细胞作为关节软骨中惟一一种细胞，其功能决定着骨性关节炎的转归，软骨细胞功能的异常是骨性关节炎变化的开始和关键［2］。软骨细胞发生损伤后，受损的软骨细胞发生变性，使软骨细胞细胞周期发生变化，细胞内合成调控机制发生改变，使正常软骨细胞代谢发生改变，增生修复与降解出现紊乱，最终导致骨性关节炎的发生。

鹿茸多肽对软骨细胞生长的影响［3］：本实验研究发现，低剂量鹿茸多肽促进软骨细胞增殖的作用并不明显，中、高剂量鹿茸多肽对骨性关节炎软骨细胞具有显著促进作用。

鹿茸多肽作用前后软骨细胞分泌到胞外基质及胞内产生的金属蛋白酶表达的比较：本实验发现，金属蛋白酶1、3在正常及骨性关节炎软骨细胞和鹿茸多肽作用后正常及骨性关节炎软骨细胞分泌的胞外基质中，均未见异常表达；而在骨性关节炎软骨细胞核酸中，金属蛋白酶1、3均出现高表达，并且在鹿茸多肽及法滋隆作用后骨性关节炎软骨细胞核酸中，金属蛋白酶1、3均受到明显抑制。出现此种现象的原因可能为：金属蛋白酶胞外分泌的含量低，或被金属蛋白酶抑制剂-1结合；缺乏细胞因子或生长因子的协同作用，细胞因子及生长因子对软骨细胞分泌功能及增殖的调节，是成熟个体软骨发育及维持内环境稳定的关键。根据细胞外刺激的不同，软骨细胞可被诱导，分别进行异化基质降解或同化基质形成的功能过程。

本研究提示，鹿茸多肽对兔骨性关节炎软骨细胞具有促进增殖作用，兔骨性关节炎软骨细胞直接分泌到胞外的金属蛋白酶（MMP-1、3）含量无差异，金属蛋白酶（MMP-1、3）在兔骨性关节炎软骨细胞核酸中高表达。可以推断，骨性关节炎软骨细胞细胞周期及细胞功能均发生改变，金属蛋白酶对骨性关节炎软骨基质的降解作用，可能是与骨性关节炎发病相关的细胞因子协同作用的结果；鹿茸多肽可能通过软骨细胞细胞核酸的金属蛋白酶的表达，进而调整病理性软骨细胞功能，使病理性软骨细胞向正常软骨细胞转化。

参考文献

1 郑召民，陈清汉.骨性关节炎血流动力学及代谢研究的现状和未来.河南医学研究，1994，3（2）：188-192.

2 J Bryan.Studies on donal cartilage strains Ⅱ selective effects of diffeveuf growth comditions.Experimental Cell Reseach，1988，52：327-337.

金属蛋白酶临床应用展望 篇4

关键词：金属蛋白酶,免疫反应,临床应用

现代医学证明各种疾病都与机体的免疫反应, 即炎症反应息息相关。其过程包括了宿主防御、白细胞迁移、细胞因子调节、上皮重构和伤口愈合等等。越来越多的研究表明金属蛋白酶参与了机体炎症反应的方方面面。因此调控金属蛋白酶的活性和功能具有很大的临床应用价值。

比如众所周知的心血管疾病, 大家也许知道冠心病的发生与遗传、生活习惯 (包括抽烟) 等有较大的关联性。目前科学家们进一步发现金属蛋白酶在心血管疾病中也有很大作用。伦敦大学的Shu Ye教授以及其它一些地区的研究团队就发现, 金属蛋白酶A D A M T S 7基因的缺陷或许是导致动脉粥样硬化等心血管病的主要因素[1]。A D A M T S 7能够将血管壁上的结构蛋白降解, 使得血管壁更加灵活并不容易形成动脉粥样硬化小块, 从而降低了心血管疾病发生的风险;而患有心血管疾病的病人中有一半以上都有ADAMTS7的缺陷。因此开发提高此蛋白酶功能的新药物是重要的研究方向。

又例如血栓性血小板減少性紫癜就是由于单一金属蛋白酶ADAMTS13功能缺失造成的疾病, 如不治疗死亡率高达90%。目前最具前景的治疗手法即是补充ADAMTS13重组蛋白。但是补充重组蛋白最大的问题是有可能引起机体产生更多抑制性的抗体。美国宾夕法尼亚大学和费城儿童医院的包佳玲博士率先发现A D A M T S 1 3的C末端部分重组蛋白既具有活性功能又不会引起内源性抗体产生。这一发现无疑将解决长期以来补充全长ADAMTS13蛋白所造成的抗体抑制问题并有望应用到临床上[2]。包佳玲博士的另一项关于金属蛋白酶Meprin的研究也有非常重要的应用前景。由于Meprin能破坏细胞间连接并促进单核/巨噬细胞在炎症部位的迁移, 控制其活性即可应用于多种炎症反应的调控, 包括炎症性肠病的临床治疗[3]。

再如之前提到, 金属蛋白酶在癌症的侵袭和转移等生物学行为中起着至关重要的作用。其中对于基质金属蛋白酶 (MMPs) 更是有非常系统和深入的研究。MMPs的作用机理是使组织结构松弛, 以便癌细胞转移;并且在胞外基质降解的同时, 有助于为新的血管生长提供空间。因此抑制MMPs的活性就成为了治疗的关键。目前为止, 由英国生物技术公司开发的Batimastat (BB294) 是最早合成并应用于临床试验的MMPs抑制剂, 是一种与作用底物肽链结构相似的异羟肟酸衍生物。动物实验显示MMPs抑制剂具有很好的抗肿瘤作用: (1) 能有效地减少肿瘤肝脏转移的数目和大小, 并造成原发癌的中心坏死; (2) 能促使纤维组织包绕肿瘤生成, 进而能显著地减少肿瘤的生长与局部浸润; (3) 具有抗肿瘤血管生成作用; (4) 能与多种药物联合应用, 增强抗肿瘤作用。但无毒性增加。目前BB294作为抑制结肠癌恶性发展的辅助用药已进入Ⅲ期临床试验阶段[4]。

不仅西医通过上述种种方法来调控金属蛋白酶在疾病中的作用, 我们传统中医中药也可以通过调控金属蛋白酶的活性来治疗和控制疾病。天津中医药大学的孟庆楠等人就发现, 在对心肌梗死的治疗中, 姜黄素可以通过显著抑制M M P 2、M M P 9的表达, 并降低胶原容积百分比、改善胶原的重构, 达到良好的抗炎活血化瘀、防治心肌梗死的作用。除了人工合成和药物, 一些天然的食物中也含有金属蛋白酶的抑制剂。例如Demeule等研究了绿茶中所含的儿茶酚对MMP2和M M P 9的抑制作用, 发现绿茶中的EGCG与ECG对MMP有较强的抑制作用[5]。

上面主要提到了控制基质蛋白的活性来治疗疾病, 但其实基质金属蛋白酶对维持人体的正常生理功能也具有非常重要和关键的作用。例如, 在皮肤组织的结构和功能, 尤其是创伤愈合过程中, MMPs的正常功能是不可或缺的。创伤愈合是一个复杂有序和精细的病理生理学过程, 包括纤维蛋白凝块的形成、新生组织的上皮覆盖、胶原的重塑等病理进程。以上过程均需要细胞外基质的降解, 并涉及到多种病理平衡的失调。MMPs作为降解细胞外基质的重要蛋白, 对调节创伤愈合有重要的作用。

综上所述, 金属蛋白酶对于我们人类正常的生理机能, 以及病理的疾病产生, 都有非常关键性的调节作用。如何在临床应用上做到平衡的调控其活性, 将是控制炎症性疾病以及调节正常生理机能的重要发展方向。

参考文献

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金属蛋白酶 篇5

1 对象与方法

1.1 对象

选取2007年10月至2008年10月在包头市中心医院产科住院分娩的产妇80例。排除有妊高征、心脏病、肝炎、肿瘤等其他病史及其它因素致胎膜早破的患者。根据妊娠周期、有无胎膜早破, 分为早产早破组、早产临产组、足月早破组、足月临产组4个组, 每组20例。各组孕妇成功分娩后, 取胎膜组织2块 (早破孕妇在其早破周围) , 取材大小约为1 cm×1 cm, 生理盐水冲去组织表面残留, 放于10%甲醛中固定。

1.2 试剂

MMP-2、TIMP-2、TNF-α一抗及二抗均购自武汉博士德生物工程有限公司。一抗均为兔抗人多克隆抗体。

1.3方法

将所取得组织置于10%甲醛固定, 常规脱水及石蜡包埋组织标本, 连续4μm切片。采用免疫组化方法的链霉亲和素生物素过氧化物酶法, 实验步骤按说明进行。用捷达801图像分析系统分别测定各组羊膜上皮阳性细胞面积积分光密度值, 用阳性积分光密度值表示MMP-2、TIMP-2、TNF-α蛋白表达的相对含量。

1.4 统计学分析

实验结果以均数±标准差表示, 应用SPSS11.5统计学软件分析系统进行t检验分析, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 羊膜和绒毛膜细胞中MMP-2蛋白表达情况比较

MMP-2蛋白表达主要分布在羊膜和绒毛膜上皮细胞及间质细胞, 其中, 在羊膜上皮细胞中的表达最强。早产早破组MMP-2蛋白表达的相对含量高于早产临产组, 差异有统计学意义 (P<0.01) 。足月早破组MMP-2蛋白表达的相对含量高于足月临产组, 差异有统计学意义 (P<0.01) , 见表1。

a为与早产临产组比较P<0.01;b为与足月临产组比较P<0.01

2.2 羊膜和绒毛膜细胞中TIMP-2蛋白表达情况比较

TIMP-2蛋白表达主要分布在羊膜和绒毛膜上皮细胞及间质细胞, 其中, 在羊膜上皮细胞中的表达最强。早产早破组TIMP-2蛋白表达的相对含量低于早产临产组, 差异有统计学意义 (P<0.01) 。足月早破组TIMP-2蛋白表达的相对含量低于足月临产组, 差异有统计学意义 (P<0.01) , 见表2。

a为与早产临产组比较P<0.01;b为与足月临产组比较P<0.01

2.3 羊膜和绒毛膜细胞中TNF-α蛋白表达情况比较

早产早破组TNF-α蛋白表达的相对含量高于早产临产组, 差异有统计学意义 (P<0.01) 。足月早破组TNF-α蛋白表达的相对含量高于足月临产组, 差异有统计学意义 (P<0.01) , 见表3。

a为与早产临产组比较P<0.01;b为与足月临产组比较P<0.01

3 讨论

PROM是37周后孕妇分娩的常见并发症, 及时有效的护理至关重要。PROM的致病机制尚不清楚, 研究发现可能与生殖道感染、胎位不正、宫颈相关病变等因素相关。研究表明PROM可能由MMP和TIMP之间的失衡引起, 从而导致了胎膜细胞外基质中维持胎膜张力和弹性作用的Ⅰ~Ⅳ型胶原的降解, 降低胶原纤维含量, 以致其它成分排列紊乱, 进而发生PROM。Fortunato[4]在实验中发现在发生PROM时羊水中MMP-2的浓度和活性增加, 同时羊水中的TIMP-2浓度降低, TIMP-2能与MMP-2结合成非共价键化合物, 抑制MMP-2发挥作用。此外, MMP-2能激活MMP-9, MMP-2和MMP-9是Ⅳ型胶原酶, 它们是唯一能降解细胞外基质主要骨架蛋白-Ⅳ型胶原的蛋白水解酶。Riley通过动物实验研究发现, MMP-2在整个孕期均存在, 但中孕水平渐降, MMP-9孕期含量甚微, 但分娩发动前, 羊水中含量急剧上升, 而其抑制物TIMP-2随孕龄增加反而降低。Vadillo等[5]研究发现发生PROM孕妇与足月分娩和早产孕妇相比, 胎膜组织和羊水内的MMP-2和MMP-9含量升高, 而TIMP-2降低, 与Riley的研究结果不同。

MMP可受到内源性抑制物、基质金属蛋白酶抑制剂TIMP家族的抑制。TIMP是MMP的天然活性抑制物, 研究已证实TIMP能抑制MMP的所有活性。已发现的TIMP有4种, 即TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4。TIPM主要在3个方面调节MMP的作用: (1) 酶原活化阶段:TIMP-2与MMP-1前体结合, 形成稳定复合物, 阻碍其自我激活; (2) 活化的MMP阶段:如TIMP-1和TIMP-2可直接与活化的MMP形成紧密的1:1复合体; (3) MMP降解阶段:TIMP对MMP降解有抑制作用。

TNF-α主要由革兰阴性细菌的内毒素刺激单核-巨噬细胞产生, 感染、创伤、缺血或者中毒均可刺激TNF-α表达。在正常的生理状态下, 组织的TNF-α表达很低。但巨噬细胞一旦激活, 组织中就分泌大量的TNF-α。

本研究发现, 胎膜组织中MMP-2表达升高, TIMP-2表达降低是PROM发生的重要原因, MMP-2通过大量降解胎膜中的胶原, 在胎膜早破发生、发展中起重要作用, TNF-α等炎性因子的释放与聚集会促进MMP的活性。

参考文献

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金属蛋白酶 篇6

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源

本组研究中宫颈组织石蜡标本均取自2002年6月~2008年12月在我院妇科门诊进行宫颈活检、住院患者手术切除的组织,慢性宫颈炎20例、CINⅠ级15例,CINⅡ级15例,CINⅢ级15例,宫颈癌42例。宫颈癌临床分期采用FIGO标准,其中宫颈癌Ⅰ期14例,Ⅱ期21例,Ⅲ期7例,全部病例在术前均未接受放疗、化疗。所选病例无高血压、糖尿病等合并症。

1.1.2 试剂

MMP-2和MMP-9均为兔抗人单克隆抗体,购自北京中杉金桥生物技术公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学染色

按免疫组织化学二步法进行,石蜡切片经二甲苯脱蜡、酒精水化后,微波炉中修复抗原,用1︰50 MMP-2一抗及MMP-9一抗作用过夜,生物素二抗孵育,链亲和素-生物素过氧化合物酶复合物作用后经DAB显色封片观察。每批实验以扁桃体为阳性对照,以PBS代替第一抗体作为阴性对照。

1.2.2 结果判定标准

用低倍和高倍镜观察全片,MMP-2及MMP-9阳性染色为在细胞浆内出现棕黄色颗粒,根据阳性细胞数所占比例及染色强度分为以下几级:无染色细胞(-);阳性染色细胞数<20%(+),染色淡黄,个别可黄至棕黄色;阳性染色细胞数20%~50%(++),染色黄色:阳性染色数>50%(+++),强度黄至棕黄色,少数为淡黄色。对CIN及宫颈癌病例,进行病变部位MMP-2和MMP-9测定。

1.3 统计学方法

采用等级资料中多个样本比较的秩和检验,及列联表资料的χ2检验,检验水准α=0.05。

2 结果

2.1.1 MMP-2在慢性宫颈炎、各级CIN、宫颈癌组织中的表达

MMP-2主要表达于宫颈上皮细胞胞浆内,从下表显示:在慢性宫颈炎,MMP-2的阳性细胞率表达很低,仅为5%,在各级CIN、宫颈浸润癌阳性表达高,其阳性表达强度随CIN级别增高而增强,至宫颈癌表达强度最高,差异有显著性,见表1。

注:H=64.34,P<0.005

2.1.2 MMP-2在各级宫颈癌组织中的表达

MMP-2在宫颈癌上皮细胞中表达阳性率达100%,但宫颈癌的临床分期与MMP-2的表达强度差异无显著性,见表2。

例

注:χ2=7.02,0.1

2.2.1 MMP-9在慢性宫颈炎、各级CIN、宫颈癌组织中的表达

MMP-9主要表达于宫颈上皮细胞胞浆内,从下表显示:在慢性宫颈炎,MMP-9的阳性细胞率表达很低,在各级CIN、宫颈浸润癌阳性表达高,其阳性表达强度随CIN级别增高而增强,至宫颈癌表达强度最高,并差异有显著性,见表3。

例

注:H=57.19,P<0.005

2.2.2 MMP-9在各级宫颈癌组织中的表达

MMP-9在宫颈癌上皮细胞中表达阳性率达100%,宫颈癌的临床分期与MMP-9的表达强度差异有显著性,见表4。

例

注:χ2=11.83,0.01

3 讨论

细胞外基质(extracellular matrix,ECM)有间质性基质和基底膜两种形式,恶性肿瘤侵袭正常组织及转移必须突破ECM,尤其是基底膜,基底膜的主要成分为Ⅳ型、Ⅴ型胶原、弹力蛋白等。ECM的降解主要依靠蛋白水解酶,基质金属蛋白是其中最为重要的一类,几乎能降解ECM的所有成分。明胶酶MMP-2、MMP-9的降解底物为Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原、纤维蛋白、弹力蛋白等,由此推论:组织中明胶酶的改变与肿瘤的侵袭、转移有关。

肿瘤转移是一个多步骤过程[1],MMP-2和MMP-9降解ECM的能力从各个方面影响肿瘤进展,主要分为以下两个方面:(1)肿瘤血管形成及肿瘤生长。血管形成是肿瘤生长的前提条件,MMP-9被认为是形成新生血管的关键因素,在人神经母细胞瘤异种移植模型中,MMP-9缺乏可导致血管形成减少,以及肿瘤微血管覆盖的外周细胞不连贯[2]。将B16-BL6黑色素瘤细胞种植入MMP-2缺乏的鼠体内,可观察到血管形成减少。(2)转移。肿瘤的转移仍依赖于其血管的形成。在鼠肉瘤模型,MMP-9的抑制可阻断肿瘤的转移[3]。大量的研究显示MMP-2、MMP-9与恶性肿瘤的的进展有关[4]。

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤,宫颈上皮瘤样变是其癌前病变。从该研究来看,MMP-2和MMP-9在慢性宫颈炎组织中的表达极低,而CIN各级组织中的表达率高,随着CIN级别增高,其表达强度逐渐增强,至宫颈癌表达强度最高,并差异有显著性。与GAIOTTO等[5]的研究结论相似。表明MMP-2和MMP-9与从宫颈癌前病变发展至宫颈癌这一过程相关。

ZHAI等[6]使用原位杂交技术测定正常宫颈、低度CIN、高度CIN及浸润癌组织中膜型基质金属蛋白酶(membertype-matrixmetalloproteinase,MT-MMP)的表达,结果显示随着宫颈病变的进展,MT-MMP的表达逐渐增强,而MT-MMP能激活MMP-2酶原,推断MT-MMP的表达增强导致MMP-2的水平增高。

ARGUELB-RAMIREZ等[7]的研究表明MMP-2和MMP-9的表达与宫颈癌的临床分期密切相关。但笔者在测定不同临床分期宫颈癌组织中的MMP-2和MMP-9水平时发现:虽然这两种明胶酶在宫颈癌组织中的表达很高,但MMP-2的表达强度与宫颈癌的临床分期无关,MMP-9与其临床分期差异有显著性,说明MMP-2在宫颈癌的形成中是一个早期事件,在宫颈癌的进展中,MMP-9起着更重要的作用。有研究显示,MMP-9主要在浸润性癌组织中表达,在原位癌中表达弱,在许多恶性肿瘤,血清可溶性MMP-9的水平能反映肿瘤的转移与否,通常被认为是恶性肿瘤的一项预后指标[8]。MEYER等[9]报道,对于远处转移的肿瘤细胞,MMP-9还有保护性抗凋亡的作用。

综上所述,表明MMP-2和MMP-9在从宫颈癌前病变进展至宫颈癌这一过程中起着重要作用,其表达增强与CIN的分级有关,MMP-9还与宫颈癌的临床分期相关。由此推论,对于宫颈炎、CIN、怀疑宫颈癌的宫颈活检组织进行MMP测定,有助明确诊断,并有助于判定预后。

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[7]ARGUELB-RAMIREZ J,PEREZ-CARDENAS E,DELGA-DO-CHAVEZ R,et al.Matrix metalloproteinases-2,-3and-9secreted by explants of benign and malignant lesions of the u-terine cervix[J].Int J Gynecol Cancer,2004,14(2):333-340.

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金属蛋白酶 篇7

1资料与方法

1.1一般资料

60例肝硬化患者均为台州恩泽医疗集团路桥医院2011年1月~2012年6月收治的, 按照中华医学会肝病学分会以及寄生虫与传染病学分会于2000年制定的诊断标准[5], 纳入乙型肝炎病毒感染转为肝硬化病程, 经过病理学检查确诊为肝硬化患者。 其中代偿组患者30例, 男17例, 女13例, 年龄32~77岁, 平均 (48.26±5.13) 岁;失代偿组患者30例, 男19例, 女11例, 年龄33~81岁, 平均 (49.82±7.21) 岁;正常对照组30例, 男18例, 女12例, 年龄32~80岁, 平均 (48.11±4.87) 岁, 均为健康体检人群, 无乙肝肝硬化等相关疾病。 三组一般资料比较, 差异均无统计学意义 (P > 0.05) , 具有可比性。

1.2方法

所有受试对象均于清晨同一时间空腹采血, 静脉抽取血量为2 m L。血液样品放置短时间后, 3000 r/min离心5 min, 取上清液, -80℃保存。测定时, 提前20 min将血清样品拿出放置室温解冻, 再将ELISA试剂盒在室温中 (22~25℃) 放置30 min, 让其平衡用。MMP-3的测定与TIMP-1的测定按照试剂盒说明说严格操作。 自制标准曲线。

1.3统计学方法

采用统计软件SPSS 17.0对数据进行分析, 正态分布计量资料以均数±标准差 (±s) 表示, 两独立样本的计量资料采用t检验。 以P < 0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1代偿组与正常对照组血清MMP-3、TIMP-1表达情况比较

代偿组患者血清MMP-3水平显著高于正常对照组血清MMP-3水平, 差异有统计学意义 (P < 0.05) ; 代偿组患者血清TIMP-1水平显著高于正常对照组, 差异有统计学意义 (P < 0.05) ;代偿组TIMP-1/MMP-3值为 (0.088±0.010) , 比正常对照组TIMP-1/MMP-3值 (0.086±0.010) 有所升高, 但差异无统计学意义 (P > 0.05) 。 见表1。

注:TIMP:基质金属蛋白组织抑制因子;MMP:基质金属蛋白酶

2.2失代偿组与正常对照组血清MMP -3、TIMP -1表达情况比较

失代偿组患者血清MMP-3水平显著高于正常对照组, 差异有统计学意义 (P < 0.05) ;失代偿组患者血清TIMP-1水平显著高于正常对照组, 差异有统计学意义 (P < 0.05) ;失代偿组患者TIMP-1/MMP-3值为 (0.103±0.020) , 显著高于正常对照组 (0.086±0.010) , 差异有统计学意义 (P < 0.05) 。 见表2。

注:TIMP:基质金属蛋白组织抑制因子;MMP:基质金属蛋白酶

2.3代偿组患者血清MMP-3水平与失代偿组患者比较

失代偿组患者血清中MMP-3水平显著高于代偿组患者, 差异有统计学意义 (P < 0.05) ;失代偿组患者血清TIMP-1水平显著高于代偿组患者, 差异有统计学意义 (P < 0.05) ;失代偿组患者TIMP-1/MMP-3值显著高于代偿组患者, 差异有统计学意义 (P < 0.05) 。

3讨论

肝硬化在临床上是常见的慢性进行性肝脏疾病, 该病通常是由于一种或者多种原因的长期反复作用而导致的肝脏损伤[6]。 我国肝硬化患者多为肝炎相关性肝硬化, 还有少部分为血吸虫性肝硬化以及酒精性肝硬化[7]。 肝硬化在病理组织学上主要表现为肝脏多部位出现肝细胞坏死、肝脏结缔组织增生、肝细胞结节性再生以及形成纤维隔[8], 从而造成肝小叶结构损伤以及形成假小叶, 进一步病变导致肝脏变形、变硬而形成肝硬化。 由于肝脏具有较强的代偿功能, 肝硬化早期一般不表现出明显症状, 肝硬化后期主要表现为门脉高压以及肝脏功能损害[9]。 严重者可累及多器官, 肝硬化晚期通常会出现肝性脑病、上消化道出血、 脾脏功能亢进、腹水以及癌变等症状[10,11]。

细胞外基质的合成与分解主要靠MMPs和TIMPs调节。 MMPs家族中MMP-3、MMP-9、MMP-13等是降解细胞外基质的主要酶[12]。 在肝纤维化的病理进程中, 其关键作用的并不是基质金属蛋白酶含量的减少, 而是基质金属蛋白酶组织抑制因子酶含量的增加。 TIMPs的作用是以1 ∶1的方式和MMPs结合形成TIMP-MMP复合体, 竞争性阻断MMPs和底物结合从而发挥的催化作用, 从而达到抑制MMPs功能的作用, 进而导致细胞外基质含量的增加、沉积。当基质金属蛋白酶组织抑制因子与基质金属蛋白酶结合后, 由于结合是不可逆的[13], 因此基质金属蛋白酶组织抑制因子也丧失了活性。TIMPs有多种亚型, 包括TIMP-1~TIMP-4, 但肝脏中表达的TIMPs只有TIMP-1和TIMP-2。

有研究结果表明, TIMP-1可以调节MMP-3的表达[14]。 此外, 通过一种MMP的活性TIMP-1还可以抑制已经激活的肝星状细胞的凋亡[15]。 上述研究结果显示, 在肝脏纤维化进程中TIMP-1是一个重要的因素, 而且TIMP-1还可能作为独立调节因子在肝硬化进程中发挥作用。

MMP-3/TIMP-1比值对于肝硬化进程具有一定的影响作用, 此作用可能不是由于MMP-3单独变化而造成了胶原蛋白降解减少, 而是由于TIMP-1的增加抑制了MMP-1的活性, 从而导致二者比例失调, 进而造成肝脏纤维组降讲解减少, 以上作用持续进行, 造成肝纤维化持续形成并加重, 最终造成肝硬化。 此外, MMP-3/TIMP-1的比值与TIMP-1的表达与肝硬化程度存在相关性。 有研究者的研究结果也表明血清中MMP-3/TIMP-1的比值与肝硬化进程密切相关[16,17]。

摘要：目的 探讨肝硬化患者血清中的基质金属蛋白酶-3 (MMP-3) 和基质金属蛋白组织抑制因子-1 (TIMP-1) 值对于肝硬化进程的影响。方法 分析台州恩泽医疗集团路桥医院2011年1月2012年6月收治的30例乙型肝炎后肝硬化代偿期患者 (代偿组) 及30例失代偿期患者 (失代偿组) 的临床资料, 30名健康者作为正常对照组。采用BAS-ELISA法测定MMP-3的血清含量, 同时采用ELISA双抗体夹心法测定TIMP-3的浓度;计算TIMP-1/MMP-3的比值。对比两组患者的MMP-3、TIMP-1的临床指标的异同。结果 ①代偿组患者血清MMP-3水平[ (20.32±3.10) ng/mL]显著高于正常对照组血清MMP-3水平[ (17.45±2.30) ng/mL], 差异有统计学意义 (P<0.05) ;代偿组患者血清TIMP-1水平[ (1.72±0.40) ng/mL]显著高于正常对照组[ (1.49±0.30) ng/mL], 差异有统计学意义 (P<0.05) ;代偿组TIMP-1/MMP-3值为 (0.088±0.010) , 比正常对照组TIMP-1/MMP-3值 (0.086±0.010) 有所升高, 但差异无统计学意义 (P>0.05) 。②失代偿组患者血清MMP-3水平[ (22.73±5.20) ng/mL]显著高于正常对照组[ (17.45±2.30) ng/mL], 差异有统计学意义 (P<0.05) ;失代偿组患者血清TIMP-1水平[ (2.24±0.30) ng/mL]显著高于正常对照组[ (1.49±0.30) ng/mL], 差异有统计学意义 (P<0.05) ;失代偿组患者TIMP-1/MMP-3值为 (0.103±0.020) , 显著高于正常对照组 (0.086±0.010) , 差异有统计学意义 (P<0.05) 。③失代偿组患者血清中MMP-3水平显著高于代偿组患者, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;失代偿组患者血清TIMP-1水平显著高于代偿组患者, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;失代偿组患者TIMP-1/MMP-3值显著高于代偿组患者, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。结论 代偿期肝硬化患者MMP-3以及TIMP-1皆显著升高, TIMP-1/MMP-3比值有升高趋势。失代偿期肝硬化患者MMP-3以及TIMP-1皆显著升高, TIMP-1/MMP-3比值显著升高。MMP-3/TIMP-1的比值与TIMP-1的表达与肝硬化程度有关。

金属蛋白酶 篇8

目前已发现20多个MMPs家族成员, 这些成员可以具有如下的基本结构: (1) 信号肽区和前肽区:信号肽的功能是引导翻译后的产物至胞浆内质网。前肽区内含有一个半胱氨酸和两个保守区域, 它的裂解与MMPs的激活有关, 此区域在酶的活化过程中将被水解掉。 (2) 铰链区与类红素蛋白结合区:此区的作用与大多数MMPs的底物特异性有关。 (3) 跨膜区:只存在于膜型MMPs中, 可将其固定于胞膜上。 (4) 催化区:包括Zn2+和Ca2+结合区;此外, MMPs还具有Zn2+结合的活性位点, 通过特定的催化区识别和裂解相应的细胞外基质, 在细胞外间隙激活, 以酶原形式分泌, 需激活产生活性, 活化后可被相应的抑制剂抑制。

二MMPs的激活和调节

除了少数几种MMPs是在细胞内外活化外, 其他MMPs均以无活性的酶原形式分泌到细胞外, 依靠外源性酶水解切掉酶原结构所激活。体内一些蛋白水解酶如:胰蛋白酶、血浆纤溶酶、激肽释放酶等选择性的裂解前肽片段, 使酶原处于一种活化的中间状态。随后, 一些已被激活的MMPs便可以裂解这些处于活化中间状态的酶原。其中, 纤溶酶系统是MMPs最重要的激活剂, 特别是尿激酶型纤溶酶原激活剂可以启动瀑布式酶联激活过程而导致间质的降解。另外, 通过MMPs之间的相互作用也可以激活, 如MMP-3是pro-MMP-9最有效的体内天然活化剂。

MMPs的调节机制分为基因水平调节、酶原活化调节和活化后调节。 (1) 基因水平调节:多细胞因子、细胞外基质成分、原癌基因产物、激素等均可诱导多种细胞表达MMPs。前列腺素、促性腺激素、秋水仙碱可诱导或促进MMPs的合成或分泌。目前对MMPs的激活机制进行了广泛研究, 其中AP-1结合位点是研究的一个热点。该位点位于转录起始位点上游约70碱基处, 在MMPs启动子激活中起着重要作用。 (2) 酶原活化后调节:绝大多数MMPs都是以无活性的酶原形式由细胞合成分泌的, 酶原在细胞外被激活成为具有活性的酶, 参与组织重建、修复、细胞迁移、炎症反应、肿瘤侵袭和转移。MMPs可被体内存在的天然激活剂激活, 也可在体外被特定的化学物质所激活, 如糜蛋白酶和胰蛋白酶可激活MMP-3和MMP-8。一些MMPs也可以激活其它的MMPs。 (3) 活化后调节。此阶段主要是基质金属蛋白酶抑制因子 (tissue inhibitor of matrix metalloproteinases, TIMPs) 对MMPs的抑制。TIMPs是MMPs重要的抑制因子, 表达于肿瘤组织和间质细胞[1~2].TIMPs主要在酶原活化阶段和MMPs活化阶段抑制MMPs的激活。

三MMPs与恶性肿瘤的关系

恶性肿瘤是人类健康最严重的疾病。恶性肿瘤无限生长及其转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因, 其转移和侵袭依赖与细胞外基质降解和肿瘤间质新生血管。这个过程需要一系列蛋白水解酶参与。其中基质蛋白酶是最重要的一类酶。在乳腺癌、食管癌、胃癌、直肠癌、肺癌等多种癌组织中可检测到MMPs含量增加。Shiozawa认为, MMP-1存在于结直肠癌的癌细胞和癌周的间质细胞, 与结直肠癌浸润深度、淋巴结转移以及Ducks分期呈正相关性。

大量研究表明, MMPs在肿瘤转移中的核心作用是通过降解ECM, 促进肿瘤的侵袭和转移。其中最重要的是M M P-2、M M P-9、MMP-7, MMPs活性增加, 会加速细胞外基质的降解作用, 从而促进肿瘤细胞的浸润和转移。将MMP-7和MT-MMP完整c DNA导入无转移潜能或转移潜能较弱的细胞, 受转染细胞的侵袭和转移能力大大提高。ECM的过度降解是由于MMPs及其抑制剂表达不平衡而导致的, 这种失衡可以是MMPs过度表达, 也可以是其抑制剂TIMPs表达降低引起。研究证明, TIMPs均有明显的抑制肿瘤细胞侵袭和转移的作用。

MMPs在肿瘤新生血管形成过程中发挥重要的作用。实验中抑制MMP-2活性可使肿瘤体积减少70%, 将肿瘤细胞移植入MMP-2或MMP-9基因缺失的鼠, 与正常对照鼠比较, 肿瘤血管生成明显减少。另外, MMP-2与MMP-9的表达与血管内皮生长因子呈正相关性, 这也预示其在肿瘤血管形成中有着协同作用。

摘要：基质金属蛋白酶 (matrixmetal loproteinases, MMPs) 是一组结构相近、功能复杂的蛋白水解酶, 因其需要Zn2+等金属离子作为辅助因子而得名。MMPs通过参与细胞表面和细胞外基质蛋白的降解或激活过程来调控细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质 (extracel lular matrix, ECM) 之间的相互作用, 是正常细胞与肿瘤细胞微环境的重要调节因子。

关键词：基质金属蛋白酶,MMP,恶性肿瘤

参考文献

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金属蛋白酶 篇9

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2015年1月-2016年3月于本院进行诊治的房颤患者59例作为观察组,另选同时间段的体检健康人员59例作为对照组。观察组男33例,女26例,年龄40~72(55.2±5.7)岁;临床分类:阵发性房颤患者22例,持久性房颤患者20例,永久性房颤患者17例;欧州心律学会(EHRA)分级:Ⅰ级患者11例,Ⅱ级患者15例,Ⅲ级患者18例,Ⅳ级患者15例。对照组男32例,女27例,年龄40~73(55.0±5.9)岁。2组性别、年龄等资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法

采集2组研究对象的外周静脉血,将血标本离心5min,离心速度设定为3000r/min,然后采集血清部分进行检测,检测指标为血清炎性因子及基质金属蛋白酶指标,炎性因子检测指标为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP),基质金属蛋白酶检测指标为MMP-2、MMP-9及TIMP-2,上述检测指标的检测方式均为ELISA法,试剂盒也为上述7项指标的ELISA试剂盒。然后将2组的血清炎性因子及基质金属蛋白酶指标进行检测与比较,同时比较观察组中不同临床分类(阵发性、持久性、永久性)与EHRA分级患者的上述血清指标,并采用Logistic分析炎性因子及基质金属蛋白酶指标与房颤的关系。

1.3 统计学方法

采用SAS5.0软件进行统计分析,计量资料以±s表示,组间比较采用t检验;计数资料以率(%)表示,组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

注:与对照组比较,*P<0.05;与永久性患者比较,#P<0.05;与阵发性患者比较,△P<0.05;与EHRA分级Ⅳ级患者比较,▲P<0.05;与EHRA分级Ⅲ级患者比较,☆P<0.05;与EHRA分级Ⅱ级患者比较,★P<0.05

2 结果

2.1 血清炎性因子

观察组的血清炎性因子指标均高于对照组,且不同临床分类与EHRA分级患者的上述血清指标也存在明显差异(P均<0.05),见表1。

2.2 血清基质金属蛋白酶指标

观察组的血清基质金属蛋白酶指标均高于对照组,且不同临床分类与EHRA分级患者的上述血清指标也存在明显差异(P均<0.05),见表2。

2.3 炎性因子及基质金属蛋白酶指标与房颤的关系分析

经Logistic分析显示,血清炎性因子及基质金属蛋白酶指标均与房颤有密切的关系(P均<0.05),见表3。

3 讨论

房颤在临床并不少见,关于房颤的各方面研究在临床均十分常见,而关于本病发生发展过程中的疾病相关指标的变化研究虽也较为常见[2],但是关于此方面的细致研究却十分不足,因此找到较好的评价指标十分必要。炎性因子是在临床中多类疾病中表达明显异常的指标,TNF-α、IL-6及hs-CRP作为炎性反应中的重要因子,对其在房颤患者中的变化研究也可见[3,4],且研究多数认为房颤患者存在不同程度的炎性反应,但是关于其在此类患者中的细致变化研究,包括其与房颤的关系研究十分不足,且差异较大[5],因此关于炎性因子与房颤的探究仍十分必要。另外,基质金属蛋白酶是与心房重构密切相关的指标,而其中的MMP-2、MMP-9及TIMP-2即是此类患者中表达较为明显的指标[6,7],房颤患者的心房重构是研究中较为为突突出出的的方方面面[[88]],,但但是是对对于于其其在在房房颤颤患患者者中中的的变变化化研研究究十十分分不足,因此此方面的关系探究也极为必要。

本文就炎性因子及基质金属蛋白酶指标与房颤的关系进行探究,主要为将房颤患者的血清炎性因子及金属蛋白酶指标与健康同龄者进行比较,结果显示,房颤患者的上述血清指标均呈现明显的高表达状态,同时不同临床分类与EHRA分级房颤患者的血清表达水平差异也较为明显,表现为发病时间较长患者与EHRA分级较高患者的表达水平较高,同时经Logistic分析显示,上述指标均与房颤有密切的关系,从而肯定了血清炎性因子及基质金属蛋白酶指标在房颤患者中的检测意义[9,10]。综上所述,房颤患者的血清炎性因子及基质金属蛋白酶指标均呈现高表达状态,且患者的临床分类与EHRA分级对其表达影响较大,与疾病有密切的关系,应给予积极的监测与干预。

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