凝血因子检测

凝血因子检测（精选8篇）

凝血因子检测 篇1

深静脉血栓形成 (deep venous thrombosis, DVT) 是普外科手术后常见并发症, 是指在各种影响因素的作用下, 静脉内的血液异常凝固, 从而阻塞管腔, 导致深静脉回流受阻, 造成深静脉功能不全的病症[1]。故除仔细观察临床症状和体征外, 凝血检查在预测性诊断下肢静脉血栓中发挥着重要作用, D-D及凝血因子是对诊断DVT有重要参考作用[2,3]。本文通过分析普外科术后患者D-D及凝血因子指标水平的变化, 探讨其在普外科术后预防DVT的临床价值, 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院普外科2014年1月-2015年1月收治的行普外科手术的48例患者, 男31例, 女17例, 年龄44~81岁, 平均 (57.8±14.5) 岁, 其中术后无深静脉栓塞32例 (非DVT组) , 术后有深静脉栓塞16例 (DVT组) , 均经彩色超声多普勒确诊, 两组的年龄、性别、病种比较差异均无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 纳入标准

均为来院体检后确认为无创伤史、血栓栓塞性疾病史、肿瘤病史及心血管疾病史的健康者, 且两组患者均未行DVT预防治疗。所有患者入院前3个月均未服用影响凝血功能药物, 无凝血功能障碍, 且所有患者均无糖尿病、高黏血症及血液病等疾病史。

1.3 方法

1.3.1 彩色多普勒超声检查

术后受试者采用采用GELOGIQ9型多功能彩色超声仪, 探头频率1.5~13.0 MHz检查, 检查前患者保持空腹, 让其保持一定的姿势, 将探头置于需检查处, 观察静脉管腔的内径、静脉管壁、腔内有无异常回声与血流状态, 并进行加压试验, 观察静脉腔能否压闭, 然后用彩色信号观察血流充盈情况, 若被加压处管腔压闭, 血流量少则认为该处管腔内无血栓, 否则, 管腔内有血栓。血栓类型: (1) 急性血栓:管腔出现明显地增宽, 清晰度较高, 内径扩大, 低弱回声。 (2) 亚急性血栓:管腔变细或趋向正常, 回声增强。 (3) 慢性血栓:管腔内径缩小, 中强或强回声。当测试过程中彩色多普勒没有血流信号时说明当管腔完全受阻, 当血流信号较为微弱并有明显缺损时说明管腔部分阻塞。彩色多普勒超声提示静脉管腔内回声不等的实性团块, 管腔内彩色血流信号及频谱信号消失或减少, 静脉加压后管腔无塌陷, 诊断DVT。

1.3.2 D-D检测

患者均于术前和手术后第1、3、7天抽取静脉血, 置于含有1/10体积109 nmol/L枸橼酸钠抗凝液的试管中, 立即充分混匀, 3000 rpm, 离心10 min, 收集上层液 (血浆, 黄色) 。D-D采用Sysmex CA6000全自动血凝分析仪及Dade Behring试剂进行检测。

1.3.3 纤维蛋白原 (FIB) 测定

采用PT导出法, 使用美国库尔特公司生产的ACL-200凝血仪及PT试剂。所有测定均在4 h内完成, 标本要求无溶血, 无脂血。检测仪器按操作规程校正, 每天做室内质控, 待室内质控符合要求后再进行标本测定, 采血需用硅化或塑料器皿。

1.4 统计学处理

使用SPSS 13.0统计软件进行分析, 计量资料采用 (±s) 表示, 比较采用配对t检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组手术前后D-D比较

与术前相比, 两组患者术后第1、3天D-D水平明显增加, 与术前比较差异均有统计学意义 (P<0.05) ;而术后第7天非DVT组D-D水平降至术前, 与术前比较差异无统计学意义 (P>0.05) , DVT组则明显增高, 与术前比较差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表1。

μg/L

*与手术前比较, P<0.05;△与非DVT组比较, P<0.05

2.2 两组手术前后凝血因子水平比较

与术前相比, 两组FIB术后第1、3天则较术前增加, 差异均有统计学意义 (P<0.05) , 术后第7天非DVT组逐渐接近正常水平, 与术前比较差异无统计学意义 (P>0.05) ;而DVT组则继续增高, 与术前比较差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表2。

*与手术前比较, P<0.05;△与非DVT组比较, P<0.05

3 讨论

普外科手术治疗过程中, 由于患者凝血和纤溶系统的动态平衡被打破, 容易导致深静脉血栓[4]。手术后腹胀、肠麻痹、半卧位、术后制动和长期卧床等都使静脉血流明显减慢, 血黏度增高。若术后输血、补液不足、脱水等都能导致深静脉血栓形成[5]。深静脉血栓是指血液中凝血因子的活化在静脉内不正常的凝结, 使静脉血流不畅, 血栓形成后, 黏附于静脉壁, 部分血栓可自行溶解, 脱落造成静脉栓塞[6,7]。目前认为外科手术是DVT的一个重要诱因, 有资料显示, 未经抗血栓治疗的脊髓损伤患者静脉血栓栓塞症发生率高达60%~80%, 髋、膝关节骨折或关节置换手术后静脉血栓栓塞症发生率为40%~60%。泌尿外科手术、神经外科手术、骨科手术和妇产科手术可使静脉血栓栓塞症的发生危险增加6~22倍[8,9]。DVT所引发的肺栓塞可以从无症状到猝死, 应该引起普外科手术医生的重视, 一定要有“未病先防”的前瞻意识, 对具有危险因素的患者应及时采取积极的预防措施。

一般来说, 人体自身的凝血及抗凝系统保持着严格的动态平衡, 而纤溶系统是体内最重要的抗凝系统。D-D是纤维蛋白单体在Ⅻa因子的作用下形成稳定的交联纤维蛋白, 而后经纤溶酶降解的产物, 其含量的升高时常提示继发性纤溶活性的增强[10,11]。手术治疗过程中患者血液呈高凝和纤溶亢进状态, 主要因为 (1) 麻醉剂的使用, 使肌肉处于松弛状态而失去收缩功能, 导致血流滞缓; (2) 大剂量应用止血药物, 造成血液呈高凝状态; (3) 术中可能发生的缺氧、酸中毒、休克等; (4) 血管内皮细胞损伤可激活内源性凝血途径, 组织液中的组织因子、凝血活酶激活物激活外源性凝血途径等。本研究显示, 与术前比较, 手术后D-D第1、3天水平明显增加, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。其主要的原因是凝血及纤溶系统的平衡因手术应急或创伤被打破了, 血管内皮细胞损伤又能激活内源性凝血途径及凝血活酶激活物激活外源性凝血途径[12]。术后第7天随着凝血和纤溶系统的逐步平衡, 已经形成D-D片段逐步降解, 其水平明显下降。如果患者D-D水平未下降至术前水平且有升高趋势, 提示激发性纤溶持续存在, 应检查患者是否有DVT及采取抗凝溶栓治疗。血浆D-D的检测方法主要包括LAREX、ELISA等, 其中LAREX检测方法较为简单, 有着速度快、半定量的特点, 能较好地临床诊断指导价值[13]。

凝血因子包括很多种类, 其中FIB是经肝脏合成的一种血浆糖蛋白, 是血浆中含量最高的凝血因子, 在凝血酶的水解作用之下可形成肽A以及肽B, FIB在参与止血的过程当中是以不溶性纤维蛋白的性质出现的[14]。人体内凝血活酶的活性与FIB含量有直接的联系, 因此也是导致血栓发生的危险因素, 在临床上可作为人体高凝状态和纤溶亢进的分子标志物[15]。其在凝血酶的作用下释放出纤维蛋白肽A和纤维蛋白肽B后, 生成纤维蛋白单体, 沉积于血管壁, 损伤血管内皮细胞, 增加血液黏稠度和影响白细胞及游离脂肪酸, 从而促使血栓形成[16,17]。在病理条件下或机体受损时, 出血与组织受损处的止血或血管血栓的形成是一种复杂的、不断变化的病理生理过程, 各种止血因素的改变是造成机体出血或血栓形成的直接原因[18]。凝血功能结合D-D是判断机体止血与凝血系统变化, 诊断与观察血栓形成, 抗凝治疗的常用项目[19]。本研究显示, 两组患者的FIB在术后第1、3天较术前有所增加, 差异均有统计学意义 (P<0.05) , 而非DVT组术后第7天逐渐接近正常水平, 但DVT组仍继续升高, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。术后7 d FIB与D-D仍然异常, 拟可作为深静脉血栓的形成的警示指标。

深静脉血栓的形成与许多高危因素有关, 而外科手术是重要的诱发因素, 围手术期预防DVT对手术的成功有举足轻重的作用。FIB和D-D是凝血功能的重要检测指标, 也是预防血栓形成的实验室标志。为避免普外手术后深静脉血栓形成后严重影响患者术后生活质量甚至导致的死亡, 应采取以下措施: (1) 手术前注意保持水电解质平衡, 纠正因禁饮食及肠道准备等引起的脱水, 对潜在感染者加强抗染治疗, 若发现FIB、D-D异常应及时纠正[20]。 (2) 术中手术操作应轻柔, 尽量减少对组织的损伤和对血管的挤压及挫伤, 控制失血量, 减少输血, 并检测FIB、D-D, 一旦FIB、D-D异常, 迅速调整手术方案, 减少手术时间与麻醉时间[21,22]。 (3) 术后7 d FIB、D-D异常, 可予静脉滴注低分子右旋糖酐或低分子肝素2~3 d, 尽量减少止血药物的应用[23]。鼓励患者早期下床活动或床上被动活动, 促进下肢静脉回流, 防止或减少腹胀、尿潴留等情况的发生[24,25]。

综上所述, 本研究观察到FIB和D-D可作为凝血功能的重要检测指标, 围手术期动态监测FIB、D-D的变化, 结合危险因素评估, 可早期预防及发现DVT, 并及时处理, 这对预防术后DVT等并发症的发生有很重要的临床价值。

摘要：目的:探讨D-二聚体 (D-Dimer, D-D) 与凝血因子检测对普外科手术患者术后深静脉栓塞形成 (deep vein thrombosis, DVT) 的预防价值。方法:选取2014年1月-2015年1月本院收治的普外科手术患者48例作为研究对象, 分为术后无深静脉栓塞32例 (非DVT组) , 术后有深静脉栓塞16例 (DVT组) 。分别于术前及手术后第1、3、7天检测静脉血中D-D、纤维蛋白原 (FIB) 。结果:与术前相比, 两组的术后第1、3天D-D、FIB水平明显增加, 与术前比较差异均有统计学意义 (P<0.05) ;术后第7天非DVT组D-D、FIB水平下降至术前水平, 与术前比较差异均无统计学意义 (P>0.05) ;而DVT组D-D、FIB水平则明显增加, 与术前比较差异均有统计学意义 (P<0.05) 。结论:D-二聚体与FIB检测对普外科术后深静脉栓塞发生有较好的预防价值, 值得临床推广。

关键词：普外科手术,D-二聚体,凝血因子,深静脉血栓

妊娠期孕妇凝血四项检测结果分析 篇2

【摘要】目的：了解妊娠期妇女凝血四项检测结果及临床意义。方法：用日本生产的Sysmex CA-50半自动血凝分析仪检测血浆凝血酶原时间（PT），活化部分凝血酶时间(APTT)，凝血酶时间（TT）和纤维蛋白原（FIB）。结果：早期妊娠与正常对照组比较，PT、APTT、TT、FIB值差异不显著；中期妊娠与正常对照组比较PT、APTT、TT、FIB值差异显著；晚期妊娠与正常对照组比较PT、APTT、TT、FIB差异显著。结论：了解妊娠期孕妇凝血四项的变化，对预防产妇意外、血栓形成和防止DIC的发生有一定的临床指导意义。

【关键词】妊娠；孕妇；凝血四项

【中图分类号】R446.11+2【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)08-0127-01

凝血四项指标主要包括血浆凝血酶原时间（PT）及其衍生的国际标准化比值（INR），活化部分凝血酶时间(APTT)，凝血酶时间（TT）和纤维蛋白原（FIB）。凝血四项可用于出血性疾病的筛查与诊断，还可以用于血栓前状态的检查，弥漫性血管内凝血（DIC）的诊断，以及各种抗凝治疗的用药指导和预后估计等^[1]；以及术前常规检查等。妊娠妇女机体产生一系列变化，其中包括凝血功能的变化，大部分凝血因子增加，血小板增加，可溶性纤维蛋白单体含量增加，血液呈高凝状态。适度高凝状态是一种生理性保护，可以防止产时的过量出血^[2]。为了解妊娠期孕妇凝血四项变化情况，作者对45名孕妇整个妊娠期的早、中、晚期进行跟踪检测，现将结果报告如下。

1资料和方法

1.1临床资料45例标本来源 2007年7-12月份到我院保健门诊或建卡的孕妇，年龄20～40岁，平均年龄28.5岁，同时检测正常对照组50例，也是来源于我院保健门诊非孕育龄妇女。年龄19～42岁。孕妇组：均按第六版《妇产科学》孕期标准分类，早期妊娠为：妊娠12周末以前；中期妊娠：妊娠13～27周末，晚期妊娠：妊娠28周后。

1.2标本采集用0.109mol/L枸盐酸钠抗凝管早上空腹静脉采血2ml摇均后立即送检。

1.3仪器和试剂仪器由日本希森美康株式会提供及时配套血凝试剂进行检测。其型号为Sysmex CA-50。

1.4方法严格按照Sysmex CA-50半自动血凝分析仪和原装配套试剂说明书进行操作。

1.5统计学处理计算各组检测结果采用 ±s，样品均数采用t检验对结果进行分析。

2结果

各妊娠期结果详见表1。

本次检测结果显示，早期妊娠与正常对照组比较，PT、APTT、TT、FIB值差异不显著；中期妊娠与正常对照组比较PT、APTT、TT、FIB值差异显著；晚期妊娠与正常对照组比较PT、APTT、TT、FIB差异显著。

3讨论

凝血系统包括外源性凝血系统和内源性凝血系统。外源性凝血途径主要包括凝血活酶形成过程中的组织因子、Ⅶ因子，凝血酶和纤维蛋白形成过程中共同通路上所涉及的因子Ⅴ、因子Ⅹ、凝血酶原和纤维蛋白原。因此，PT是检查外源性凝血因子的一种过筛试验，是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原和凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的缺陷或抑制物的存在。由于除了钙离子和TF之外，其余凝血因子均为蛋白质，由肝脏合成，因此，PT可作为肝脏合成蛋白质功能的检测。APTT是反映内源性凝血系统最常用和较敏感的筛选指标，测定凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的凝血活性，也受因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ的影响。是监测肝素用量的首选指标。TT是反应共同凝血途径的试验，而因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ为外源性和内源性凝血系统所共同需要的因子。当肝脏疾病引起肝细胞损害时，肝脏合成凝血功能减退，引起维生素K依赖因子凝血因子（Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ）等合成减少，从而使PT、TT、APTT延长；FIB是由肝脏合成的一种糖蛋白，在凝血过程中具有非常重要的作用，FIB具有增强细胞间的桥联力和减少细胞表面负电荷作用。

妊娠妇女对机体产生一系列生理变化，其中包括凝血功能的变化，适度高凝是一种生理性保护，可防止产时的过量出血。从妊娠3个月左右起，孕妇的凝血系统和纤溶系统发生变化；血浆纤溶蛋白原的含量逐渐增加，大部分凝血因子（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅻ）增加，血小板增多，可溶性纤维蛋白单体含量增加，纤溶酶原激活物活性下降而其抑制物水平升高，血液呈高凝状态^[3]。这种生理性变化随着孕妇孕周的增加而加剧，是对机体的一种保护措施，有利于胎盘剥离而形成血栓，减少产后出血。在凝血同时，继发纤溶活动也开始，以清楚子宫螺旋动脉和静脉窦内的血栓，加速子宫内膜的再生和修复。这种变化持续到产后3～4d开始逐渐恢复至正常^[4]。孕妇从怀孕起，FIB逐渐增高，高水平的FIB可以增加血液粘度，使血流缓慢，呈现高凝状态。如凝血系统异常增高，可导致机体内环境改变，容易导致DIC的发生，所以动态观察孕妇凝血功能的变化，及时采取相应的措施，减少产后出血，对积极预防和治疗DIC前期具有重要意义。

参考文献

[1]贺航咏，杨媛华.凝血4项的临床应用[J].中国医刊，2008，43（1）：15-17.

[2]张金霞.妊娠期凝血四项的检测及其临床意义[J].中外医疗，2008，15：140-141.

[3]徐勇，霍梅，徐宏斌.几种内皮细胞损伤与凝血活化分子标记物在妊高娠症患者血中的变化[J].血栓与止血学，2001，7（2）：73-74.

[4]韦继明，陈彦华，谢汉雄，等.凝血、抗凝及纤溶指标在正常妊娠中的变化和对妊娠高血压综合征诊断的意义[J].上海医学杂志，1999，22（2）：125.

凝血因子检测 篇3

1 TF的分子结构

TF结构基因长度为12.4kb, 定位于染色体lp21-1p22, 由6个外显子和5个内含子组成, TF是一个分子量为47 k D, 由263个氨基酸残基组成的单链跨膜糖蛋白, 由胞外区、跨膜区和胞浆区三个结构域构成: (1) 胞外区由219个氨基酸残基所组成, 包括2个二硫键及4个结合FVII/FVIIa的关键氨基酸残基, 后者是启动外源性凝血级联反应的关键部位。 (2) ) 跨膜区是一个由23个氨基酸残基组成的疏水结构, 与磷脂紧密结合, 功能尚未明确。 (3) 胞内区由21个氨基酸残基组成, 其中存在3个与TF功能活性关系密切的丝氨酸残基, 能被活化的蛋白激酶C (PKC) 磷酸化而激活。TF启动子-278 bp至+121 bp区域包含CD40L反应元件, 其中包括活化蛋白-1 (AP-1) 、核因子KB (NF-KB) 和早期生长反应基因-1 (Egr-1) 结合位点。[1]

2 TF的表达细胞及其分布

2.1 表达细胞

传统认为, 就TF的表达而言, 体内细胞可分为3类: (1) 大部分血管内膜以外组织细胞均固有性表达TF。 (2) 血管内皮细胞与血液中单核细胞正常时并不表达TF, 只有在受促炎性细胞因子与损伤因素作用时呈现诱生性表达。 (3) 无核的细胞为红细胞、血小板和淋巴细胞不表达TF。

关于中性粒细胞是否表达TF, 多年来存有争论。有些学者认为中性粒细胞本身或活化血小板通过白细胞分化抗原40/白细胞分化抗原40配体 (CD 40/CD 40L) 和/或P一选择素/P-选择素糖蛋白配体-1 (PS/PSGL-1) 可能促使中性粒细胞表达TF。但多数学者认为中性粒细胞的TF可能来自单核细胞的混杂或摄取源于单核细胞的微颗粒所致。嗜酸性粒细胞表达TF似已成定论, 并可能与嗜酸性粒细胞增多症的血栓倾向有关[2]。

血小板尽管没有细胞核, 但是能够保持有从巨核细胞来源的m RNA, 这些m RNA在细胞的整个生命过程中都是完整的, 体外实验中已经发现血小板可以合成蛋白质[3]。因此, 血小板对组织因子的表达作用的真正来源是巨噬细胞。

2.2 组织因子的分布

组织因子在上述细胞表达后, 根据其存在形式在人体有不同的分布, 而根据其存在部位大概可以分为: (1) 各种正常的组织细胞, 其中在脑、肺和胎盘中表达较为丰富。 (2) 血管内皮及血管壁, 正常状态下血管内皮极少或几乎不表达组织因子, 只有在炎症因子或损伤状态下才诱生性表达, 当内皮细胞损伤, 内皮下及血管平滑肌, 血管外膜组织因子暴露, 这些组织因子与凝血, 血栓形成关系密切。 (3) 循环血液中, 这些组织因子被称为循环性组织因子, 包括:颗粒来源组织因子 (Mp TF) 、变拼组织因子 (as TF) 和血细胞组织因子 (存在于细胞膜表面) , Mp TF和血细胞组织因子被认为与心血管事件、败血症及凝血障碍如弥慢性血管内凝血相关, as TF只有在含磷脂丰富的环境中才表现出较强的促凝活性[4]。目前循环性组织因子的研究引起学者广泛关注与研究兴趣[5]。

3 组织因子的凝血功能及其与血栓性疾病的关系

TF与Ⅶ因子 (FⅦ) 结合成复合物, 并促使无活性的FⅦ变成有性的FⅦa, 除此之外, TF还可增加FVIIa和TF/FⅦa的蛋白水解酶和淀粉酶活性, 使X因子 (Fx) 转变为FXa, 进而使纤维蛋白原变为纤维蛋白, 完成外源性途径的凝血过程。TF/FVIIa复合物还可以使Ⅸ因子 (FⅨ) 变成FⅨa, 并进而作为Ⅷa因子 (FⅧa) 的辅助因子激活FX, 从而参与内源性凝血途径[6], TF病理情况下过度表达及活性异常将导致血栓的形成。

3.1 组织因子与动脉血栓

动脉血栓形成与动脉粥样硬化关系密切, 大部分研究认为, 动脉斑块破裂后, 斑块中及血管内皮下组织因子暴露于血浆, 从而启动外源性凝血过程, 导致血栓的形成。Andrew D.Blann等研究发现外周动脉血栓病人血浆中组织因子水平较对照组升高, 大量报道证实冠状动脉粥样硬化病人较健康对照组同样具有组织因子表达上升[7]。在动脉粥样硬化过程中, 粥样斑块中巨噬细胞表达大量组织因子, 高水平组织因子暴露引发血栓形成和心肌梗死, 抑制组织因子活性将减少血栓疾病的发生[8]。正常或者病理状态下血管内皮破坏, TF暴露于外周血, 在动脉血栓形成中起关键作用, 并且其作用主要表现在凝血过程的起始阶段, 即启动凝血[9]。

3.2 组织因子与静脉血栓

国内对组织因子与静脉血栓形成关系的相关研究较少, 认为静脉血栓疾病组织因子表达无明显升高或升高无统计学意义, 国外近来出现相关报道, 认为组织因子在蛋白及m RNA水平与静脉血栓性疾病相关, Yuko Kamikura等研究表明静脉血栓形成患者白细胞组织因子m RNA表达较健康自愿者升高, 静脉血栓合并癌症或DIC患者m RNA表达升高更加明显, 同时, 静脉血栓病人血浆中TF抗原水平显著升高[10]Lauro M.Vieira等研究表明, 不管是否经PLS处理, 下肢静脉血栓患者单核细胞表面组织因子表达及血浆水平都较对照组要高, 说明组织因子表达与静脉血栓疾病发生关系密切[11], 静脉血栓患者血管内皮并无损伤, 内皮下组织因子并没有暴露于血浆, 因此组织源性组织因子不能启动凝血, 有关研究表明, 此时血栓的启动和延伸主要靠血细胞源性组织因子, 即存在于血浆当中的组织因子在发挥作用[12]。

4 组织因子的非凝血功能

4.1 组织因子与血管新生

除了在胚胎发育时期的血管生成中发挥作用之外, TF尚参与后天的血管生成-血管新生, 特别是在肿瘤血管。有学者将含有TF的质粒转染到动物模型的肿瘤细胞中, 分别在体外和体内观察表达TF以及与肿瘤血管形成, 体外转染后表达TF的效率与血管生长无明显相关;但体内实验证实, 与对照组相比, 高表达TF的肿瘤细胞生长较快, 血管形成较丰富, 低表达TF者则相反[13]。国外亦有学者在临床研究中证实, 非小细胞癌、前列腺癌和乳腺癌患者的肿瘤细胞表面和血管内皮细胞表面有TF和促血管内皮生成因子 (VEGF) 的高度表达, 这些细胞因子的表达程度与肿瘤局部血管形成密度相关[14]。

4.2 TF与肿瘤侵袭、转移

TF的非凝血功能中, TF与肿瘤生长、侵袭、转移的关系的研究备受关注。TF在恶性黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌等多种肿瘤细胞及肿瘤血管内皮细胞表面的表达均异常增高。近年来国外临床观察及体内、体外实验均证实FⅦa/TF复合物具有促进肿瘤生长、侵袭、转移的作用。高表达TF的实体瘤 (如黑色素瘤、直肠癌、胰腺导管腺癌) 细胞转移能力强, 且由转移病灶建立的亚系的TF表达较母系高;以抗TF单抗阻断TF受体功能, 可使滞留于严重联合免疫缺陷 (severe combined immunodeficient, SCID) 小鼠肺部血管的肿瘤细胞数减少、肺转移灶减少[15]。

4.3 组织因子与动脉粥样硬化

血管平滑肌细胞、泡沫细胞、单核细胞、细胞外基质以及内皮细胞中均有TF表达, 在动脉粥样硬化斑块旋切标本中, 不仅检测到TF蛋白, 而且这种TF蛋白具有活性。应用免疫组化和RT-PCR的方法检测动脉粥样硬化斑块中的细胞成分和 (或) 非细胞成分, 结果发现, 两者都含有不同浓度的TF和TF m R-NA, 并且TF含量与斑块血栓形成直接相关。临床研究表明, TF的表达见于动脉粥样硬化的各个阶段。顽固性心绞痛患者斑块中TF活性、抗原含量和血浆中TF浓度显著高于稳定型心绞痛患者;病理学研究亦证实, 不稳定性斑块的纤维冒薄, 脂质斑块易于破裂, 渗入斑块内的单核细胞、巨噬细胞及淋巴细胞受各种因素刺激表达大量TF[16]。

4.4 组织因子与胚胎发育

组织因子影响胚胎发育主要通过TF的非凝血功能及在血管形成中的作用来实现的。近期国外研究提示, TF在胚胎发育过程中发挥重要作用。在小鼠及人胚胎发育早期阶段, 外胚层、内胚层细胞上特别是具有多向分化能力的上皮细胞表面, TF均有高水平表达, 而靶向破坏TF基因, 则可导致胚胎死亡[17]。亦有研究认为, TF维持胎盘、胚胎结构和子宫内正常止血机制的作用, 与其调控蛋白酶生成、启动依赖FⅦa的细胞信号传导、影响细胞黏附的非凝血功能有关[18]。另外, 有研究组观察了TF基因敲除的小鼠死亡率, 结果发现, 小鼠 (TF-/-) 在胚胎期第10天, 即出现溶血反应导致死亡, 他们推测小鼠胚胎期死亡的原因主要是TF缺乏, 引起凝血功能受损或血管形成不成熟, 他们的研究提示, TF在小鼠胚胎期血管形成中有重要作用[19]。

4.5 组织因子与炎症

生理情况下, 与血液直接接触的细胞均不表达TF, 但各种炎症介质及内毒素等刺激下, 血管内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞能够表达TF。研究发现, 细菌LPS、炎症细胞因子 (如TNF-a、IL-1) 等可引起炎症中毒性休克, 其作用机制之一就是炎症因子诱导TF表达上调, TF的表达增多引起凝血级联反应, 诱发血栓形成及DIC。Croce等认为, 凝血-炎症网络在动脉粥样硬化的发生发展中扮演重要的角色。TF主要就是通过这个网络把炎症和血栓连接起来的, 使两者共同促进CHD的发生发展。凝血-炎症网络是由参与凝血系统与炎症反应系统之间形成恶性循环的物质组成, 这些物质密切相关, 在连接凝血和炎症的过程中发挥着不同的作用, 其中, 以TF最为关键[20]。这表明TF于炎症及凝血系统相互关联。此外, Randolph[21]等的研究为TF参与炎症反应提供了直接证据:炎症初期, 大部分单核巨噬细胞跨越内皮细胞进入其下的结缔组织中, 而炎症消退时则由淋巴管内皮细胞基底部向腔内面迁移 (反向迁移) , 重新进入淋巴管道引流。此迁移过程中, 单核巨噬细胞与内皮细胞之间的黏附由TF介导;抗TF单抗或可溶性TF可抑制两种细胞之间的黏附。

5 结语

组织因子作为一种跨膜糖蛋白, 在凝血及某些非凝血过程中都起着至关重要的作用。目前对组织因子的研究并不完善, 组织因子除参与以上所述生理及病理过程外, 可能还具有更大的潜在功能, 且在某些生理病理作用机制尚未明确。对组织因子检测、抑制或者利用其特殊的生物学特性, 有利于临床某些疾病的诊断与治疗。

摘要：组织因子 (TF) 是一种跨膜糖蛋白, 通过与凝血因子Ⅶ相互作用参与凝血过程, 在动静脉血栓形成过程中起重要作用。近来, 人们发现TF具有信号传导受体的功能, 可通过介导多种信号转导, 参与肿瘤侵袭、转移, 血管新生, 动脉粥样硬化, 炎症等病理、生理过程。本文就TF的凝血及非凝血功能作一综述。

凝血因子检测 篇4

1 临床资料

例1, 男性, 24岁, 1992年4月16日因扁桃体反复发炎5年, 末次发作于1个月前收入院准备手术治疗。既往3年前因外伤做过开胸手术。无长期服用非甾体类抗炎药物史, 无出血病史。术前常规检查血常规及出凝血时间、尿常规、心电图及胸片均正常。常规术前准备后行局麻下双侧扁桃体切除术。术中局麻药用1 %利多卡因40 mL+0.1 %盐酸肾上腺素5滴。手术顺利, 术中出血不多, 无残体。术后安返病房。回病房后, 吐痰中带有血丝。半小时后双侧扁桃体术腔开始渗血, 采用沾有立止血药棉球压迫止血, 缝扎止血, 2个小时后右侧术腔止住渗血, 左侧仍然不能止住, 后再次进手术室行左侧颈外动脉结扎后, 才止住左侧扁桃体术腔渗血。事后追问病史, 病人述做开胸手术时, 曾查出过凝血功能不正常。病人认为上次开胸手术都做了, 故这次手术前没有叙述。术后复查出凝血时间, 凝血时间稍延长。当时建议患者去外地做凝血因子检查, 病人失去联系。

例2, 男性, 32岁, 2008年12月5日因扁桃体反复发炎3年, 末次发作于3个月前收入院准备手术治疗。既往有2年急性肾炎病史, 肾内科医生建议其切除扁桃体。无长期服用非甾体类抗炎药物史。术前常规检查血常规及凝血四项, 尿常规, 心电图及胸片均正常。

常规术前准备后行局麻下双侧扁桃体切除术。术中局麻药用1 %利多卡因40 mL+0.1 %盐酸肾上腺素5滴。手术顺利, 无残体。术中切除扁桃体后双侧扁桃体术腔出渗血, 棉球压迫止血, 双极电凝止血, 缝扎止血, 效果不好。立即给病人输血浆200 mL。经过近3 h才止住出渗血, 大约出血800 mL。术后第2天及第3天, 病人仍有痰中带血。术后追问病史, 患者述其父及女儿均有鼻出血不易止血史, 其女儿在北京一家医院确诊遗传性Ⅺ缺乏症 (丙型血友病) 。建议患者做凝血因子检查, 后来病人被确诊患遗传性Ⅺ缺乏症 (丙型血友病) 。

2 讨论

扁桃体手术是耳鼻咽喉科常见手术, 术后出血是常见并发症, 发生原因多为:长期服用非甾体类抗炎药物、术中止血不彻底、术后缝扎线脱落、扁桃体残体、术后感染等, 而凝血因子异常引起扁桃体术后出血极少见。由于术前只常规检查血常规及凝血四项, 尿常规, 心电图及胸片。只有凝血四项异常的病人才做进一步检查。使得血常规及凝血四项正常而凝血因子异常的病人漏查, 造成严重术后并发症。例1做了颈外动脉结扎后, 才止住扁桃体术腔出血。例2输血浆后才止血。例1由于当时受条件所限, 只是查出凝血时间延长, 病人未能确诊为哪一型凝血因子缺乏症。例2患遗传性Ⅺ缺乏症 (丙型血友病) , 是少见的常染色体隐性遗传性出血性疾病, 男女均可发病。本病的凝血障碍程度较轻, 一般须由实验室检查确诊。本病实验室检查特点为:全血凝血时间延长或正常, 出血时间、凝血酶原时间、纤维蛋白含量和其他血浆凝血因子均正常[2]。由于本院为基层医院, 缺乏检测凝血因子活性及做血清、血浆纠正试验及血小板聚集试验等的条件, 在诊断过程中只能根据所具有的实验室条件进行诊断。本病在临床上自发出血少见, 一般在外科手术之后, 特别是在拔牙、扁桃体术后出血不止时被发现。所以术前详细询问病史是非常重要的。有些其他凝血因子异常的病人, 如Ⅷ因子缺乏、维生素K依赖性凝血因子缺乏症等, 因病人平时有自发性出血症状:鼻出血、血尿、皮肤瘀斑、肌肉关节血肿、黏膜出血等而不易误诊或漏诊。我科所遇到的2例病人平时无自发出血症状, 术前常规检查血常规及凝血四项正常, 没有详细询问既往史及家族史, 引起术中及术后出血, 值得警惕。

参考文献

[1]李保实.中国医学百科全书耳鼻咽喉科学[M].上海:上海科学技术出版社, 1983:167-173.

凝血因子检测 篇5

1 材料与方法

1.1 研究对象

随机抽取经体格检查合格、ALT、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、RPR等检测阴性的无偿献血者血样23份, 其中男性19份, 女性11份, 最大为55岁, 最小18周岁。按正常献血过程使用ACD-B保养液血袋采集血液。

1.2 试剂与仪器

凝血因子试剂均采用美国DADE BEHRING产品 (乏V因子血浆批号为lot 503546A、乏VIII因子血浆批号为lot 536595A、乏X因子血浆批号为lot 504283A) ;TECO COATRON M4血凝仪 (德国TECO公司) ;SDJ-20血浆速冻机 (天津, 天商冰冻科技有限公司) ;KJX-111冰冻血浆解冻箱 (苏州医用仪器厂) ;J6 M1大容量低温离心机 (美国BECKMAN CO.) ;MDF 460B低温冰箱 (日本SANYO.CO) 。

1.3 方法

血液采集后严格按照国家规定分离新鲜血浆, 4h内速冻至-35℃, 制备成新鲜冰冻血浆, 同时留取血浆样本置4℃保存21d, 作为普通血浆样本。第3天取出标本, 按照试剂说明书操作, 测定新鲜冰冻血浆的凝血因子V、VIII、X含量;同时取出新鲜冰冻血浆按规程制备冷沉淀, 留取制备冷沉淀后血浆测定其凝血因子V、VIII、X含量;在第21天测定普通血浆样本的凝血因子V、VIII、X含量。

1.4 统计学分析

采用SPSS统计软件进行分析。

2 结果

2.1 检测得3种血浆中凝血因子Ⅴ、Ⅷ、X的含量, 见表1。

各测定的标准曲线均使用试剂配套的标准血浆测定后制作, 其样本要求为9∶1枸橼酸抗凝。而本测定样本为ACD-B抗凝 (4∶1) , 检测结果其浓度或含量为人体正常值0.89, 本研究主要对几种血浆的相应成分进行对比, 所以表中数据仍按实际测定数值报告。

采用非参数检验Kruskal Wallis Test对3种不同血液制品凝血因子Ⅴ、Ⅷ、X的含量进行分析。

3 种血液制品两两分组对比, P值均<0.001。

3 讨论

从本实验结果可以看出:普通冰冻务血浆置4℃保存21d后, 不稳定凝血因子Ⅴ、Ⅷ含量较新鲜冰冻血浆有很大程度的下降, 基本接近完全失去活性;稳定凝血因子X含量也有着一定程度的下降。去冷沉淀血浆是新鲜冰冻血浆在约2～4℃解冻后离心, 分离沉淀的白色絮状物 (冷沉淀) 后所得到的血液成分, 不稳定凝血因子Ⅴ、Ⅷ基本上都分离到冷沉淀中, 其含量较新鲜冰冻血浆有很大程度的下降, 基本接近完全失去活性;稳定凝血因子X含量也有着很大程度的下降。

新鲜冰冻血浆富含凝血因子Ⅴ、Ⅷ、X, 所以在临床上经常用在:凝血因子缺乏、肝病患者获得性凝血功能障碍、口服抗凝剂过量的出血、抗凝血酶Ⅲ缺乏、TTP、血浆置换等[1]。但目前临床上还有将新鲜冰冻血浆和红细胞悬液混合输注;将新鲜冰冻血浆用于补充白蛋白、免疫球蛋白等各种蛋白成分和扩大血容量等。造成了新鲜冰冻血浆大量浪费, 同时也增大了疾病传播的风险。

普通血浆是由保存期内的全血分离的血浆, 与新鲜冰冻血浆的主要区别是缺乏V因子和VIII因子[2], 由于稳定凝血因子X等下降的幅度不是很大, 在临床上常应用于补充稳定凝血因子[2,3]。

去冷沉淀血浆是新鲜冰冻血浆制备冷沉淀后剩下的血浆。目前, 临床上经常把这2种血浆等同使用。本实验结果表明, 其不稳定凝血因子、稳定凝血因子的含量都明显低于正常血浆 (P值均<0.001) , 其临床的使用价值有局限。对于需补充凝血因子的疾病不能达到治疗目的, 不能把之与普通血浆等同使用, 更不能把去冷沉淀血浆标识为普通血浆而应用于临床。

英国血液学标准委员会输血工作组于2004年发布的英国血液病协会新鲜冰冻血浆、冷沉淀和去冷沉淀血浆使用指南中指出:去冷沉淀血浆去除了Ⅷ因子和纤维蛋白原, 缺乏vWF大分子量多聚体, 但含有WF金属蛋白酶。目前常被应用于血栓性血小板减少性紫癜的血浆置换治疗[4], 这是去冷沉淀血浆比较明确的使用价值。

摘要：目的了解新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆和去冷沉淀血浆中凝血因子V、VIII、X在不同的保存温度和制备过程中的变化。方法采集23袋 (200mL/袋) ACD-B血液保存液保存的血液, 4h内分离制备新鲜冰冻血浆, 各袋均留2份标本;1份同新鲜冰冻一起置-35℃保存, 于第3天速融后检测凝血因子V、VIII、X含量;1份置4℃保存21d后检测凝血因子V、VIII、X含量;新鲜冰冻血浆于第3天取出制备冷沉淀, 留取去冷沉淀血浆标本1份检测凝血因子V、VIII、X含量。结果普通冰冻血浆和去冷沉淀血浆中的凝血因子均低于新鲜冰冻血浆 (P<0.001) 。结论新鲜冰冻血浆主要用于补充体内各种凝血因子的缺乏;普通冰冻血浆用于补充体内稳定凝血因子的缺乏, 去冷沉淀血浆的使用价值有局限性, 不能把之与普通血浆等同使用。

关键词：新鲜冰冻血浆,普通冰冻血浆,去冷沉淀血浆,凝血因子

参考文献

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凝血因子检测 篇6

1 病例报告

患者, 女, 65岁, 主述:左上牙牙龈出血2日。病史:2日前开始左上牙牙龈自发出血, 在外院检查血常规和凝血时间位于正常值范围之内, 但皮肤时有瘀斑。有先天性心脏病病史 (房间隔缺损) , 已做瓣膜缺损修补 (已30余年) , 当时手术后无出血倾向。今年起始偶有牙龈出血, 平时无发热、口干症状, 不喜饮水。无血尿。有肝炎病史, HBs Ag (+) , HBe Ab (+) , HBc Ab (+) 。否认药物过敏史, 无长期服用药物史。育有2子, 无家族遗传史。检查:颊侧楔状缺损, 冷热诊 (-) , 叩诊 (-) , 松动 (-) , 牙龈见活动出血。全口牙龈充血、水肿 (图1) , 龈上牙石II度, 龈下较多牙石, 全口牙龈退缩2~5 mm。咬合未见明显异常。辅助检查:血常规未见明显异常;凝血时间检查均在正常值范围之内。诊断:慢性牙周炎。治疗计划:局部治疗, 止血;择期全口龈上洁治。复诊, 制定进一步牙周治疗计划。治疗过程:初诊, 龈上洁治, 浅龈下刮治, 冲洗, 止血, 置牙周塞治剂。第2日, 患者复诊, 自述晨起时口腔内大量血凝块, 牙龈仍有自发出血, 量多。检查见牙龈活动出血, 表面血凝块覆盖;后局麻下明胶海绵填塞止血, 唇腭侧龈乳头拉拢缝合, 置塞治剂。手背有瘀斑, 已有部分吸收。第3日, 患者复诊, 述晨起时口内仍有血凝块, 唾液带血。检查区腭侧塞治剂部分脱落, 龈沟少量渗血, 重新放置塞治剂。第4日, 患者复诊, 自觉出血症状无明显改善, 影响进食、睡眠。检查见患者精神状态较差, 口腔内见牙龈活动出血, 表面大量血凝块覆盖, 后局麻下明胶海绵填塞止血, 唇腭侧龈乳头拉拢缝合, 置塞治剂。建议患者综合医院血液科就诊治疗。血液科就诊情况如下:查体, 未见肝脾肿大, 心率欠整齐, 偶有期外收缩。辅助检查:血常规, WBC:3.62×109/L, PLT:137×109/L, Hb:111 g/L。分类, NAC:2.47×109/L, N:68.2%, L:26.2%, 未见明显异常。凝血时间检查, PT:12.8 S, APTT:32.70 S, FIB:2.8 g/L, TT:17.0 S, D:Dime:0.07 mg/L, PT-INR:1.12, 均在正常值范围之内。血型, A型, Rh阳性。凝血因子检查, 血管性血友病因子抗原 (v WF:Ag) 、血管性血友病因子活性 (v WF:A) 、因子VIII促凝活性 (VIII:C) 位于正常范围之内。抗核抗体 (ANA) : (-) , 抗着丝点抗体 (ACMA) : (-) , 抗增殖细胞核抗原抗体 (APCNA) : (-) 。 (抗核抗体在多种自身免疫病中, 如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、混合性结缔组织病等均呈不同程度的阳性率;抗着丝点抗体在CREST综合征、雷诺综合征、多种自身免疫性疾病中检查为阳性。抗增殖细胞核抗原抗体为系统性红斑狼疮特异性抗体) 。尿常规未见明显异常。肾功、尿素氮 (肌酐) 均在正常值范围之内。未能确切诊断出血原因。处置:暂用冷沉淀10 g静脉注射 (冷沉淀指血浆冷沉淀, 其中含有VIII因子及纤维蛋白原, 可治疗缺乏VIII因子及纤维蛋白原而出血不止的患者、血友病患者或血管性血友病患者) 。1周后患者复诊无明显出血, 拆线。

患者于我院就诊后经多次综合医院血液科就诊检查, 于3个月后通过尿素溶解试验 (本例患者尿素溶解实验的结果是30 min内完全溶解, 对照组-其子, 24 h不溶解) 确诊为获得性凝血因子XIII缺乏症。患者口腔症状出现14周后表现出全身症状 (无外伤史) , 左腿从大腿上部开始出现皮下血肿、瘀斑, 后延及足部, 肿胀疼痛, 不能行走 (图2) 。后该患者在血液科住院治疗17d, 予以输注冷沉淀、止血治疗 (使用止血芳酸、止血敏、注射用卡络磺钠) 、血浆支持 (输注去病毒血浆1 700ml, 新鲜冰冻血浆1 450 ml, MAP红细胞悬液2单位) , 地塞米松治疗, 出血情况控制, 病情稳定。出院后, 继续予以激素口服治疗。建议定期复查。

2 讨论

遗传性XIII因子缺乏症会引起软组织挫伤、黏膜出血和致命性颅内出血。发病率约为1/500万, 为常染色体隐性遗传, 男女均可患病, 男略多于女, 往往有近亲婚配史。纯合子患者血浆中因子XIII低于正常人的1%时则发生出血。临床表现为延迟性出血, 新生儿患者以脐带残端出血为多见, 其次为皮下出血, 血肿及外伤后持久出血不止, 或外伤后延迟至12~36 h后才出血, 伤口愈合不良。自发性出血或关节腔出血少见, 严重缺乏者亦可有关节积血、颅内出血。

A:足背部皮下血肿;B:足心部皮下血肿;C:小腿皮下血肿

获得性XIII因子缺乏症由抗FXIII的自身抗体引起, 产生FXIII抑制物, 这种自身免疫性疾病通常发生于中老年人, 发病年龄较大, 无性别差异。产生这种获得性FXIII抑制物的患者易发生严重出血。FXIII抑制物可以通过防止激活FXIII, 来干扰FXIII的活性、功能或改变纤维蛋白底物的反应性, 导致纤维蛋白单体间交联异常, 使患者血浆纤维蛋白凝块不稳定, 从而出现严重的反复自发性出血, 出血部位广泛, 常表现为皮肤黏膜瘀斑、软组织及肌肉血肿、内脏出血、术后延迟性出血甚至颅内出血等。FXIII抑制物产生原因不明, 与长期摄入药物, 如异烟肼、青霉素、苯妥英钠、胺碘酮等[1,5]有关, 一些自身免疫性疾病 (如类风湿性关节炎、系统红斑狼疮及未明原因的单克隆丙种球蛋白血症[6,7,8]) 也可导致FXIII抑制物的产生。有部分FXIII抑制物在正常人体内自发产生[9]。1%的遗传性FXIII患者在接受FXIII浓缩物替代治疗后可产生FXIII抑制物。目前报道的FXIII抑制物绝大部分为多克隆或单克隆Ig G, 以Ig G1优势表达为主, 可作用于纤维蛋白多聚体形成过程中的各个环节。本例患者无长期摄入药物史, 经临床检查无自身免疫性疾病, 血液科医生推测可能的发病原因是不明原因诱发FXIII抑制物在其体内自发产生, 但诱发因素有待进一步明确。

XIII因子缺乏症造成出血的可能机制为:A:损伤部位缺乏稳定的纤维蛋白网, 血凝块易溶解破碎, 影响止血功能。B:损伤部位的纤维蛋白溶解活性往往超过本病患者纤维蛋白的稳定性, 影响局部止血堵塞物的作用, 同时影响伤口愈合。

诊断可通过实验室检查进行, 尿素溶解实验是目前临床上检测FXIII缺乏的初筛实验, 是一种定性的方法。原理:在钙离子作用下, FXIII能使溶解于尿素溶液的可溶性纤维蛋白单体聚合物变为不溶性的纤维蛋白。因此, 含FXIII的血浆钙化凝固后不再溶于尿素溶液中, 而缺乏FXIII的血浆则聚合物可溶于5 mol/L尿素溶液中。操作:将血凝块溶于5 mol/L尿素溶液或1%单氯醋酸溶液中, 观察其溶解时间。其参考值范围为24 h内纤维蛋白凝块不溶解。临床意义:若纤维蛋白在24 h内, 尤其是2 h内完全溶解, 表示FXIII缺乏, 见于先天性FXIII缺乏或获得性FXIII缺乏。重症患者血栓弹力图的检查异常。

治疗原则:停用可疑药物。血浆置换、免疫抑制剂、丙种球蛋白、血浆冷沉淀物、因子Ⅷ浓缩剂、利妥西单抗等[10], 目的在于降低抑制物浓度, 提高FXIII活性, 控制出血症状, 均可获得止血效果。如果不予以治疗, 这些患者便有危及生命的出血危险。但因很多治疗均为个案报告, 故疗效并不确切。

获得性XIII因子缺乏症发病时往往出现全身的出血症状, 如皮肤大面积血肿和瘀斑, 但本例患者是以牙龈出血为首发症状, 全身症状是在首发症状出现后近3个半月才表现出来, 罕见报道。牙龈出血的临床病因统计分析表明[11], 约3.4%的牙龈出血病例是因全身性因素引发, 其中约11.8%的病例是因为凝血机制障碍, 血液系统疾病引发的牙龈出血往往表现为自发性、量多且止血困难。本例患者常规检查都无明显异常, 但不同寻常的止血困难, 且牙龈炎症情况与出血状态不一致, 引起了临床口腔医生的注意。本例患者虽历时3个月才得以确诊, 但确诊与口腔科医生的提醒是密不可分的, 若出现严重的全身症状, 仍长时间不能确诊, 可能会贻误病情, 增加患者的痛苦, 且可能会威胁到生命。本例患者的出现开阔了临床口腔医生对于牙龈出血病因的思路。牙龈出血是口腔科门诊与急诊中常见的就诊原因, 对于牙龈出血的患者应全面询问病史, 检查口腔情况, 实验室检查是必不可少的, 与全身因素相关的牙龈出血患者, 应针对病因早期治疗。对于伴有全身疾病的牙龈自发出血患者而言, 控制牙龈炎症是先决条件, 炎症减轻, 止血就容易。本例患者患有慢性牙周炎, 局部刺激即结石的存在使牙周组织产生炎症反应, 龈沟内上皮和毛细血管增生扩张, 与牙结石摩擦引起牙龈出血, 而且结石的存在使毛细血管破裂后难以闭合, 加上凝血机制的问题, 使牙龈出现自发出血, 且止血困难。如出现此类情况需提高警惕, 不要进行创伤较大的治疗, 以免造成不良后果。此类患者待全身条件允许时, 建议进行牙周基础治疗, 防止牙龈炎症导致牙龈出血的反复发生, 给患者心理和精神上带来痛苦。应做好牙龈出血的宣教、防治工作, 日常的口腔护理也必不可少, 口腔卫生的良好保持可防止牙龈炎症的发生。

摘要：获得性凝血因子ⅩⅢ缺乏症极罕见, 笔者在临床工作中发现1例以牙龈出血为首发症状的获得性凝血因子ⅩⅢ缺乏症。对此症进行分析, 并对相关文献进行了复习。

关键词：获得性凝血因子ⅩⅢ缺乏症,牙龈出血

参考文献

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[10]Lim W, Moffat K, Hayward CP.Prophlactic and perioperative replacement therapy for acquired factor ⅩⅢ deficiency[J].J Thmmb Haemost, 2004, 2 (6) :1017-1019.

凝血因子检测 篇7

1 对象与方法

1. 1 对象

1. 1. 1 T2DM组收集2011 年5 月—2012 年7 月我院门诊和住院的T2DM患者104 例, 诊断符合1999 年WHO糖尿病诊断标准。所有入选病例均无DM急性代谢并发症、出血史或血栓性疾病史。除外近期烟酒史、妊娠、口服避孕药者、口服抗凝剂和类固醇激素治疗者、肿瘤、外伤、泌尿系感染、各类肾炎、尿路梗阻及肝肾疾病患者。根据尿白蛋白排泄率 ( UAER) 分为非微量白蛋白尿组 ( DM + NAU组, UAER < 30 mg /24 h) 53 例和微量白蛋白尿组 ( DM + MAU组, 30 mg /24 h≤UAER≤300 mg /24 h) 51 例。

1. 1. 2 健康对照组取自某单位健康检查人群, 共50例。经病史询问、体格检查正常, 无血栓、出血及肝肾疾病史, 无感染性疾病、肝肾血液系统及其他可以引起凝血及纤溶功能改变的疾病。2 周内未服用过影响血栓和止血的中西药物。

1. 2 检测方法

1. 2. 1 记录临床资料所有研究对象均测量血压、身高、体重, 询问吸烟史, 并计算体重指数 ( BMI) 。

1. 2. 2 血标本采集受检者晨起空腹肘前静脉采血, 枸橼酸钠0. 109 mmol/L ( 1 ∶ 9) 抗凝, 2 h内3 000r / min离心15 min, 分离上清血浆, 分装置于- 80 ℃ 贮存。1 个月内检测。

1.2.3血浆总FXI和还原型FXI测定将血浆与巯基标记试剂MPB孵育使蛋白的游离巯基被标记。将血浆稀释后通过丙酮沉淀去除游离的马来酰亚胺-丙酰-生物胞素 (MPB) 。将蛋白溶于磷酸盐吐温缓冲液 (PBST) 中, 血浆的最终稀释度为1∶100。将样本加入到链抗生物素蛋白 (streptavidin) 预包被的、2%BSA/PBS-Tween (0.1%) 封闭的96孔板上。洗涤后先后加入一抗 (兔抗人FXI单克隆抗体) 、二抗 (碱磷酶标记的抗兔Ig G) 。加入显色底物后在405 nm处读数。将10名健康志愿者的混合血浆作为内部参照。采用商品化FXI试剂盒测定血浆中总FXI水平。以样本A值与内部参照A值的比值表示样本还原型FXI的水平, 同时用总FXI进行校正, 计算出还原型FXI的相对水平。

1.2.4生化指标测定血糖测定用己糖激酶法, 糖化血红蛋白 (Hb A1C) 用高效液相法, 肝肾功能、血脂采用日立Modular P型全自动生化分析仪测定。血浆纤维蛋白原 (FIB) 、凝血酶原时间 (PT) 、活化部分凝血活酶时间 (APTT) 均采用磁珠法由STA血凝全自动分析仪自动完成检测。UAE测定采用免疫比浊法。胰岛素测定用放免法。采用稳态模型计算胰岛素抵抗指数 (HOMA…IR) =FPG×FIns/22.5。

1. 2. 5 统计方法所有数据均用SPSS 13. 0 统计软件进行分析。用方差分析、多元逐步回归分析和Logistic分析进行相应统计处理。以P <0. 05 为差异有统计学意义。

2 结果

2. 1 基本情况见表1。3 组年龄、性别比例相似。DM + NAU组和DM + MAU组病程相似, 具有可比性 ( P > 0. 05) 。

注: DM—糖尿病; NAU—非微量蛋白尿; MAU—微量蛋白尿;CON—对照。

2. 2临床及生化指标比较见表2。DM + NAU组和DM + MAU组BMI、空腹血糖 ( FPG) 、Hb A1C、HOMA-IR、甘油三脂 ( TG) 和FIB均高于CON组 ( P < 0. 05 ) , DM + MAU组较CON组血浆总胆固醇 ( TC) 、低密度脂蛋白胆固醇 ( LDL-C) 增高, 高密度脂蛋白胆固醇 ( HDL-C ) 降低 ( P < 0. 05 ) 。 与DM + NAU组相比, DM + MAU组TG、FIB升高, APTT缩短 ( P < 0. 05) 。

注: DM—糖尿病; NAU—非微量蛋白尿; MAU—微量蛋白尿; CON—对照。TC—总胆固醇; LDC-C—低密度脂蛋白胆固醇; HDL-C—高密度脂蛋白胆固醇; FIB—血浆纤维蛋白原; PT—凝血酶原时间; APTT—活化部分凝血源酶时间; VAER—尿白蛋白排泄率。

2.3还原型FXI的表达见表3。CON组、DM+NAU组和DM+MAU组的血浆总FXI表达水平无差异 (P>0.05) 。与CON组相比, DM+NAU组和DM+MAU组的血浆中还原型FXI的水平均明显增加, DM+MAU组的还原型FXI的水平高于DM+NAU组, 在用总FXI水平进行校正后, 差异仍有统计学意义 (P<0.05) 。

注: DM—糖尿病; NAU—非微量蛋白尿; MAU—微量蛋白尿;CON—对照。FXI—内源性凝血因子Ⅺ。与CON组比较, aP < 0. 05; 与DM + NAU组比较, bP < 0. 05。

2. 4 回归分析见表4。以UAER作为因变量, 将年龄、病程、BMI、FPG等可能的影响因素作为自变量, 按α = 0. 05 水准, 进行多元逐步回归分析, 结果显示, Hb A1C ( β = 0. 23 ) 、TC ( β = 0. 13 ) 、FIB ( β = 0. 25 ) 、还原型FXI ( β = 0. 59 ) 与UAER呈正相关, HDL-C ( β = 0. 18) 与UAER呈负相关。

注: Hb A1C—糖化血红蛋白; TC—总胆固醇; HDL-C—高密度脂蛋白胆固醇; FIB—血浆纤维蛋白原; FXI—内源性凝血因子Ⅺ。

3 讨论

研究证实, DM患者存在血液高凝状态且动脉血栓形成的危险增加。约80% 的DM患者死于动脉血栓性并发症。DM血栓形成危险增加的机制涉及多条通路。血小板功能亢进、凝血因子的活化增强和抗凝、纤溶下降都使血栓形成的倾向增加[3-5]。研究发现, DM患者内源性凝血途径的激活增强, 血浆中FXIII、FIX、FXII、FIB等凝血因子的水平增加[6]。另有研究显示, 高凝状态是造成DN肾损伤的重要原因之一[7-9]。我们的研究发现, T2DM患者血浆中FIB水平增加, 提示存在血液高凝。与CON组相比, DM + MAU组的血浆中APTT明显缩短, 提示内源性凝血途径的激活增强, 这与国内外的报道一致[7-8]。目前关于FXI在DM中的表达尚无定论[6，10-11]。早期研究发现, T2DM患者较正常对照组血浆中FXI的表达和活力均增高[10-11]。但也有研究得出了相反的结果[6]。我们的研究显示, 与CON组相比, T2DM患者的血浆中总FXI水平没有变化, 这与以往多数报道不同。可能与病例数相对较少有关, 需扩大样本量, 进一步深入研究。近年的研究发现, 蛋白质内部二硫键的氧化还原反应涉及了蛋白质功能与活性的改变, 并具有重要的病生理意义[12]。FXI是由两条相同的多肽链通过一个链间二硫键形成的同二聚体, 通过启动接触活化在内源性凝血通路中发挥重要作用[13]。在内源性凝血途径被激活后, FXI被活化为FXIa。游离的FXIa在与 α1-抗胰蛋白酶 ( A1AT) 形成复合物后在循环中通过肝脏被清除。越来越多的证据表明, FXI的活化指标-FXIa-A1AT复合物在DM中增加并与MAU的进展相关[1，14]。我们的前期研究发现, 氧化状态的FXI分子可以被还原性物质- 硫氧还蛋白 ( TRX-1) 还原, 还原型FXI被激活为FXIa的能力明显增强。在体内研究中, 我们发现正常人血浆中FXI存在氧化和还原两种形式。与正常人相比, 伴有动静脉血栓的抗磷脂综合征 ( APS) 患者血浆中还原型FXI的水平明显增加, 由此加强内源性凝血途径的激活并促进血液的高凝状态[2]。与APS一样, T2DM也属于氧化应激相关性疾病。作为一种代偿, DM患者血浆中的TRX-1 的表达增加, 以对抗氧化应激诱导的细胞损伤[15]。结合前期研究结果, 我们推测T2DM患者血浆中还原型FXI的水平增加, 并可能参与了DM高凝状态的发病和MAU的出现。本研究测定了T2DM伴有MAU患者和正常对照人群血浆中还原型FXI的相对水平。结果显示, 与对照组相比, T2DM患者的血浆还原型FXI水平明显增加, 且伴有MAU患者的还原型FXI明显高于单纯DM组, 在用总FXI水平进行校正后这种差异依然显著。统计学分析显示, 除了血糖、血脂等目前已明确的DN危险因素外, 还原型FXI水平亦与MAU呈独立正相关。该发现可能提示了DM高凝状态及DN发病的新颖机制。

凝血因子检测 篇8

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年3月-2013年3月本院收治的72例因刀伤、烧伤、车祸及手术等导致的严重创伤失血患者作为此次研究的对象。将其平均分成3组, 即联合输注冷沉淀凝血因子与单采血小板组、单独输注冷沉淀凝血因子组与单独输注单采血小板组, 每组各24例。其中, 患者年龄18~72岁, 平均年龄为 (40±1.3) 岁;全部病例的输血量均>3000 m L;血型的分布情况为:A型31例、B型21例、AB型11例、O型9例, 均为Rh (D) 阳性;失血原因为肝脾破裂、腹腔闭合性外伤、全身多发性骨折、股动脉破裂、血气胸等造成的失血性休克者58例, 重度脑挫伤出血休克者14例。此外, 3组病例的其他一般情况差异均无统计学意义 (P<0.05) , 故具有可比性。

1.2 仪器与试剂

全自动血凝仪 (日本西森美康CA500) 及原装配套试剂测定PT、APTT、TT、FIB;血细胞计数仪 (XS-800) ;试剂为西森美康公司生产。冷沉淀凝血因子与采血小板均由宁夏血液中心提供, 其中每400 m L全血制备1U冷沉淀凝血因子, 每单位冷沉淀凝血因子含纤维蛋白原含量≥150 mg, Ⅷ因子≥80 U;每1个治疗量含2.5×1011个血小板。

1.3 检测指标

检查3组病例输血前后的凝血功能, 具体包括凝血酶原时间 (PT) 、活化部分凝血活酶时间 (APTT) 、纤维蛋白原定量 (FIB) 、凝血酶时间 (TT) 及血小板计数 (PLT) 等。此外, 还需检查输注前后3组病例的凝血酶原时间、出血时间、纤维蛋白原含量 (定量免疫电泳法) 及血常规。

1.4 输注指征

(1) 冷沉淀凝血因子: (1) 纤维蛋白原的浓度低于1.0 g/L, 大量微毛细血管出现渗血或出血; (2) 患者的PT、APTT、TT高于正常人的1.5倍; (2) 血小板计数 (PLT) :低于100×109/L[1,2]。

1.5 统计学方法

选用软件SPSS15.0对病例的样本资料进行统计分析, 其中计量资料以±s表示, 差异比较选择t检验;而计数资料以%表示, 差异比较选择χ2检验, 均以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血输注量的比较情况

治疗前, 3组病例血凝效果的差异无统计学意义 (P>0.05) , 见表1。

2.3 联合输注组治疗前后检验结果的比较

24例患者的白细胞、血小板在输注冷沉淀凝血因子和单采血小板前后无明显变化 (P>0.05) , 故无统计学分析意义。而出血时间和凝血酶原时间明显缩短 (P<0.05) , 纤维蛋白原含量明显升高 (P<0.05) , 差异有统计学意义, 见表3。

3 讨论

严重创伤失血患者因各种原因发生大量或反复出血, 而过多消耗了体内的纤维蛋白原、血小板、凝血酶原及其他凝血因子的数量;同时在抢救与抗休克治疗时, 会输入大量的代血浆和晶体液等液体, 又进一步稀释、降低了各种凝血因子与血小板等的浓度, 同时给患者输注的库存血均是在2℃~6℃保存, 且时间都在24 h以上, 其Ⅷ因子与Ⅴ因子等凝血因子会随保存时间的延长而丢失活性, 从而失去改善凝血系统和止血的作用[4]。此外, 患者在输血后, 其血液中的枸橼酸会与钙离子相结合, 从而造成严重的凝血障碍。其中少数患者发生DIC后, 会出现继发性纤溶亢进, 进而加重了凝血障碍。假如仅仅给患者输注悬浮红细胞, 不但无法起到改善凝血功能和止血的作用, 而且会使凝血障碍进一步恶化, 故大量输血输液后12~48 h应密切观察伤口出血情况, 高度警惕出凝血功能障碍[5]。

单采血小板富含血小板和少量FIB、Ⅴ因子、Ⅷ因子, 在正常生理情况下, 血小板有维持血管壁完整性的功能, 一定数量的血小板是维护血管壁正常结构和通透性的重要条件, 临床上主要用于血小板生成障碍、血小板破坏增强和血小板功能失常, 以及大量失血引起的血小板减少。而冷沉淀凝血因子则含有丰富的Ⅷ因子与纤维蛋白原, 输注冷沉淀凝血因子可直接增加患者血液中纤维蛋白原和因子Ⅷ复合物的浓度, 从而迅速提高血小板的聚集能力, 缩短失血时间, 因此对避免DIC、改善凝血障碍等具有十分重要的意义[6]。

在抢救严重创伤失血、产科DIC等患者时, 虽然给予常规输注少量全血、大量成分血治疗后, 患者Hb虽出现一定的升高, 但其凝血功能依然异常, 仍有出血和渗血等情况存在。而通过此次研究可以看出:联合输注冷沉淀凝血因子与单采血小板12~24 h后, 患者的PT、TT、APTT明显降低, 而FIB明显升高;其中大部分患者在输注后4~12 h失血基本得到控制, 若以输注后24 h出血停止为评价指标, 则有效止血率高达93%。而两组单独输注组的有效止血率明显低于联合输注组, 因此对于输血后引发凝血障碍的急性大出血患者, 冷沉淀凝血因子与血小板联合输注比单独输注的止血作用更加显著。其中, 输注冷沉淀凝血因子需要注意:纤维蛋白原的正常血浆浓度为2~4 g/L, 最低止血浓度为0.5~1.0g/L, 应维持血中纤维蛋白原水平在0.5~1.0 g/L, 故建议冷沉淀凝血因子每10 kg输注1~1.5 U[7]。

综上所示, 冷沉淀凝血因子与单采血小板联合输注对于严重创伤失血患者具有十分明显的止血效果, 该方法可以快速有效地改善患者的凝血障碍, 缩短出血时间, 加快创伤组织的修复, 有助于患者更快的痊愈。故具有较好的临床应用价值。

摘要：目的 探讨冷沉淀凝血因子与单采血小板联合输注对于严重创伤失血患者的临床治疗作用。方法 将72例严重创伤失血的患者随机分为3组, 单独输注冷沉淀凝血因子组;单独输注血小板组;冷沉淀凝血因子与单采血小板联合输注组, 并比较输注效果。对3组患者在输注前、输注后进行血常规、出血时间及纤维结合蛋白含量测定。结果 患者联合输注血小板和冷沉淀凝血因子后与输注前相比, 出血时间明显缩短。结论 对严重创伤引起失血过多的患者, 联合输注冷沉淀凝血因子与单采血小板的止血作用更为明显。且联合输注血小板和冷沉淀凝血因子可提高患者血浆纤维结合蛋白含量, 缩短出血时间, 加快创伤组织的修复, 有助于患者更快的痊愈, 故值得临床借鉴和使用。

关键词：冷沉淀凝血因子,单采血小板,联合治疗,严重创伤失血

参考文献

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