串联质谱技术

2024-10-15

串联质谱技术（精选9篇）

串联质谱技术篇1

摘要：建立液相色谱—四极杆串联质谱联用技术, 测定酒类产品中γ-氨基丁酸。结果表明:γ-氨基丁酸的浓度在0.010.50 mg/L范围内呈现良好的线性关系, 相关系数r2=0.999 1。食品中γ-氨基丁酸的检出限为0.003 mg/L, 加标回收率在85%以上。该方法快速、灵敏、准确。

关键词：γ-氨基丁酸,酒类,液相色谱-四极杆串联质谱联用技术

γ-氨基丁酸 (GABA) 是一种天然存在的非蛋白组成氨基酸, 广泛分布在动植物体中, 是很重要的抑制性神经递质, 可改善脑、肾、肝等器官的生理活性, 还能促进人体内氨基酸代谢的平衡, 调节免疫功能。γ-氨基丁酸在2009年经卫生部批准为一种新资源食品, 能够被应用于饮料、巧克力及其制品、烘烤食品、糖果、可可制品等食品中, 但不用于婴幼儿食品。《国家食品安全标准食品添加剂使用标准 (GB2760-2011) 》将γ-氨基丁酸列入“表B.3允许使用的食品用合成香料名单”, 并规定:食品用香料、香精在各类食品中按生产需要适量使用。因此, γ-氨基丁酸在食品行业得到更广泛的研究和应用。在酒类产品中, γ-氨基丁酸也得到了广泛研究, 酒中添加适当剂量的GABA, 起到镇定、醒酒、促进乙醇代谢、增加饮用者酒量的作用。葡萄酒和果酒中添加适当剂量的GABA, 配制成GABA酒, 可以满足更多消费群体的需求, 如适合女性、中老年人群、白领人士享用的中高档花色果酒中可以添加GABA。

GABA具有对电化学、紫外、可见光不灵敏的特点, 对其测定不能使用直接测定的方法。关于GABA的测定, 近年来国内外有氨基酸分析仪测定[1,2,3]、柱层析荧光测定法、比色法[4]、薄层法[5]、纸电泳法[6]、毛细管电泳法[7]、离子色谱法[8]、高效液相色谱法[9,10]、液质联用法[11]等。但酒基体比较复杂, 一般由生物发酵而成, 干扰较严重。本文探索液相色谱—质谱联用法测定酒类中γ-氨基丁酸含量的方法, 该技术无须衍生化等特殊条件, 精密度和准确度符合要求。

1材料与方法

1.1试验仪器和试剂

试验用液质联用仪:液相色谱四极杆串联质谱 (电喷雾电离源 (ESI) ) 安捷伦6410, 液相色谱系统包括自动进样器。

试验试剂:γ-氨基丁酸标准样品 (含量为99%, SIGMA公司生产) , 甲醇 (色谱纯) 。

1.2仪器分析条件

1.2.1液相色谱条件。流动相组成:0.1%乙酸水溶液+甲醇 (4+6, 体积比) ;流速:200μL/min;注射体积:20μL;柱温:26℃。

1.2.2质谱条件。离子源:电喷雾离子源 (ESI) ;扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测 (MRM) ;干燥气温度:350℃;干燥气流速:10 L/min;雾化器压力;275.8 k Pa;毛细管电压:4 000 V。

1.3试验方法

白酒:直接移取1 m L试样过0.22μm滤膜;葡萄酒和果酒:移取5 m L试样冷冻离心 (10 000 r/min, 15 min, 2~4℃) , 取上清液过0.22μm滤膜, 根据其含量直接或稀释液相色谱—质谱/质谱测定。

2结果与分析

2.1γ-氨基丁酸分析条件确定

γ-氨基丁酸化分子量103, 在液质里选择正离子模式, 得到母离子[M+1]为103.9, 在一定碰撞电压和能量下, 失去NH3得到子离子M/Z:86.9, 再失去1个H2O得到子离子M/Z:68.9, 具体碰撞条件见表1, 母离子和子离子在液质中形成见图1, 色谱图见图2。

2.2前处理方法

γ-氨基丁酸在白酒含量较低, 一般直接过0.22μm滤膜进样测定。葡萄酒和果酒冷冻离心 (10 000 r/min, 15 min2~4℃) , 去除部分酒石酸盐类、单宁、果胶、色素等, 取上清液过0.22μm滤膜, 根据其含量直接或稀释进样。

2.3线性关系和检出限

配制不同浓度梯度的γ-氨基丁酸溶液, 其浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.10、0.20、0.50 mg/L。在试验设定条件, 将γ-氨基丁酸的质量浓度 (mg/L) 作为横坐标X, 将γ-氨基丁酸的峰面积作为纵坐标Y进行线性回归, 确定回归方程为Y=177.4X, 回归系数r2=0.999 1, 具有良好的线性关系。当信噪比 (S/N) =3时, 仪器检出限为0.003 mg/L。

2.4方法的精密度和回收率

取不含γ-氨基丁酸的白酒10 m L作为空白基质, 分别添加5 mg/L标液0.08、0.20、0.40 m L共3组, 每组6份, 进行平行试验。按照试验方法进行前处理和仪器分析测定, 计算回收率和精密度试验数据, 结果见表2。

从表2可以看出, 采用该方法能够使回收率达到85%以上, 相对标准偏差RSD小于6%。采用该方法能够获得较高的测量精密度和准确度。

2.5样品测定

依据《国家食品安全标准食品添加剂使用标准 (GB2760-2014) 》, 化学合成的γ-氨基丁酸可作为在食品生产中能够作为香料使用, 但要控制使用量和使用范围。在白酒中, γ-氨基丁酸是按生产需要适量使用。在市场抽取白酒样品近50组, 运用液相色谱—四极杆串联质谱联用技术测定, 共检出5组样品含有γ-氨基丁酸, 含量为0.1~0.8 mg/L。

3结论

运用液相色谱—四极杆串联质谱联用技术测定酒类中γ-氨基丁酸, 当浓度在0.01~0.50的范围内, 表现出良好的线性关系。该方法具有前处理方法简单、测定过程快速、灵敏度高、测定结果准确等优点。

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串联质谱技术篇2

应用高效液相色谱-串联质谱法测定海水中的氯霉素残留量, 流动相为V(甲醇)∶V(水)=80∶20. 采用负电喷雾离子源, 在多反应性监测模式下采集信号, 定性离子对为321/121、 321/152、 321/176, 定量离子对为321/152. 本方法的线性范围是0.1～100 μg/L, 相关系数为0.9993, 仪器检出限为0.01 μg/L, 回收率在81.7%～121.0%之间. 该方法适于海洋环境监测.

作者：叶赛胡莹莹张奎文那广水姚子伟王菊英马德毅 YE Sai HU Ying-ying ZHANG Kui-wen NA Guang-shui YAO Zi-wei WANG Ju-ying MA De-yi 作者单位：叶赛,胡莹莹,YE Sai,HU Ying-ying(国家海洋环境监测中心,国家海洋局近岸海域生态环境重点实验室,大连,116023;大连海事大学环境科学与工程学院,大连,116026)

张奎文,ZHANG Kui-wen(国家海洋环境监测中心,国家海洋局近岸海域生态环境重点实验室,大连,116023;大连水产学院生命科学与技术学院,大连,116023)

那广水,姚子伟,王菊英,马德毅,NA Guang-shui,YAO Zi-wei,WANG Ju-ying,MA De-yi(国家海洋环境监测中心,国家海洋局近岸海域生态环境重点实验室,大连,116023)

串联质谱技术篇3

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入我院2012 年8 月-2014 年6 月所收治的110 例失低出生体质量儿患者作为研究对象, 所有患者均是由家长签署知情同意书后加入该研究。其中男67 例, 女43 例, 胎龄为32~40 周, 平均 (34.1±2.27) 周, 体质量为1.86~2.43 kg, 平均体质量 (1.986±3.081) kg。

1.2 方法

(1) 标本采集方法:患儿出生72 h且至少哺乳3 次后, 采集其空腹足跟末梢血液滴注在专用滤纸上, 确保血斑的直径至少为8 mm, 当滤纸两面完全渗透后, 在室温条件下将其晾干, 放于4℃的冰箱中保存。 (2) 仪器与试剂:串联质谱检测所用的仪器为美国AB公司所生产的API3200 串联质谱检测仪以及日本岛津公司所生产的高效液相色谱仪。试剂主要有纯度为99.999% 的氮气, 80% 的乙腈 ( 流动相) , 50% 的甲醇水 ( 冲洗相) , 浓度为3 mol/L的盐酸正丁醇。采用串联质谱检测技术来对标本行衍生化处理, 然后对其行酰基肉碱以及氨基酸水平检测。

2 结果

该研究中有23 例患者在初步筛查时存在异常情况, 其概率为20.91%;其中有8 例患者为氨基酸水平异常, 概率为34.78%;12 例患者为酰基肉碱水平异常, 概率为52.17%;3 例患者为酰基肉碱以及氨基酸水平共同异常, 概率为13.04%。在氨基酸水平异常患者中有1 例患者为甲硫氨酸代谢异常, 2 例患者为精氨酸代谢异常, 1 例患者为亮氨酸代谢异常, 1 例患者为混合氨基酸代谢异常。在12 例酰基肉碱水平异常患者中有3 例患者为游离肉碱代谢异常, 5 例患者为丙酰基肉碱代谢异常, 4 例患者为混合酰基肉碱代谢异常。

3 讨论

大量临床研究资料证实[2], 基因突变是导致患者出现代谢异常的主要原因, 这主要是因为基因突变导致生化物质在储存、代谢以及合成时出现各种异常情况, 其主要包含了激素、脂肪、糖、有机酸以及氨基酸等多种物质的代谢缺陷。随着医学事业的不断发展, 新生儿疾病谱也发生了巨大变化, 感染性疾病的发生率逐年下降, 窒息相关疾病的发生率以及严重程度也有所下降, 但新生儿先天性缺陷的发生率却日益增多。据相关研究数据显示, 先天性代谢异常新生儿的出生率为1% 左右, 其发病率呈现出逐年上升的趋势[3]。

有研究指出[4], 低出生体重儿在出生早期很容易出现代谢紊乱的情况, 并出现并发症累及多个系统, 其中有一部分会进展成为先天性代谢异常。新生儿先天性代谢异常的临床表现较为复杂, 可造成患者体内任何系统与器官损害, 约80% 先天性代谢异常患儿存在神经系统损害情况, 临床表现主要为呕吐、拒食、顽固性惊厥、智力低下、脑瘫等, 严重时还会导致患儿昏迷或死亡。一般情况下, 先天性代谢异常患者确诊时, 其智力及身体已受到了不可逆的损伤, 错过了最佳治疗时间, 从而导致新生儿残疾或死亡。目前, 在低体重儿出生早期采用串联质谱检测技术来对其酰基肉碱谱以及氨基酸谱已成为预防先天性代谢失常的主要手段。

从该研究结果可知, 在氨基酸谱异常患者中, 甲硫氨酸、精氨酸、亮氨酸代谢异常占据了大部分, 说明低出生体重儿的基础代谢能力较差, 肝肾代谢功能尚未成熟, 从而导致氨基酸谱物质出现代谢异常的情况。此类患者若不对其进行及时干预, 就有可能导致患者出现高氨基酸血症代谢异常疾病。有研究显示[5], 在酰基肉碱代谢异常中, 有29% 左右的患者为丙酰基肉碱代谢异常。临床研究资料证实, 在所有先天性代谢异常疾病中, 丙酰基肉碱代谢异常会引起甲基丙二酸血症, 这也是有机酸代谢性血症中最为常见的遗传性代谢疾病。该研究中游离肉碱代谢异常的比例占30%, 人体内的肉碱是以酯酰肉碱与游离肉碱者这两种形式存在的, 肉碱可通过线粒体内膜转运长链脂肪酸的 β 氧化途径来发挥相应作用。对于低出生体重患儿而言, 由于其肉碱基础水平不稳定, 特别是对于极地或超低出生体质量新生儿, 其在出生后需要全静脉营养支持, 以此来维持患儿机体的动态平衡, 对于此类患儿如不早发现、早治疗, 就会使患儿因营养摄入不足、合成减少, 导致其肾脏出现吸收障碍, 最终使患儿出现肉碱缺乏症。

近年来, 在对先天性代谢疾病患者进行临床诊断时, 许多新技术在临床中得到了广泛应用, 串联质谱检测技术在高端实验室得到了广泛应用。在对新生儿是否存在先天性代谢异常进行检测时, 只需要几滴血就可以对十几种代谢产物做出准确的分析, 该检测技术对先天性代谢异常的诊断率可达21%, 其具有较高的临床应用价值。通过对大量临床资料以及该研究相关分析发现, 在对低出生体质量儿童是否存在代谢异常情况进行诊断室, 采用串联质谱检测技术与其他实验室检测指标、临床表现相结合的方式来进行诊断, 可以有效提高患者的检出率, 为此类疾病的预防奠定良好的基础。

参考文献

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串联质谱技术篇4

高效液相色谱-串联质谱测定鸡肉中氟喹诺酮类药物残留的研究

目的`:建立鸡肉中培氟沙星、单诺沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、沙拉沙星、环丙沙星、恩诺沙星和司帕沙星等9种氟喹诺酮类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法.方法:样品经磷酸盐缓冲液提取后,用Waters Oasis (R) MAX小柱进行净化、提取,Cloversil-C18柱(150mm×4.6 mm i.d,5μm)分离;柱温:30℃;流动相:甲醇/乙腈/0.2%甲酸(15/15/70,v/v/v);通过电喷雾电离离子化在多离子监测(MRM)模式下测定.结果:各氟喹诺酮在0.05～50.0 μg/kg范围内均呈良好的线性关系,相关系数>0.998,回收率在89.0%～110.0%之间,相对标准偏差(RSD)在2.8%～9.1%之间,检出限均为0.05 μg/ks.结论:所建方法简便、快速、干扰少、特异性强,是鸡肉中9种氟喹喏酮残留检测的理想方法.

作者：陈晓红姚浔平李小平Chen Xiao-hong Yao Xun-ping Li Xiao-ping 作者单位：浙江省宁波市疾病预防控制中心,浙江宁波,315010刊名：中国卫生检验杂志 ISTIC英文刊名：CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY年，卷(期)：18(7)分类号：O657.63关键词：鸡肉氟喹诺酮高效液相色谱-串联质谱

串联质谱技术篇5

超高效液相串联Q-TOF技术 (UPLC/Q-TOF-MS) 是一种快速、灵敏、精确的非靶向分析方法, 通过精确分子量和二级质谱裂解确定分子式和分子结构。相比于传统分析方法, 如高效液相串联低分辨率质谱, UPLC/Q-TOF-MS具有更好的分离效果和更高的分辨率。因此, 其更适用于中药中未知成分的快速分析和结构鉴定。近十年内, 大蓟中已被鉴定的成分有33种, 大蓟甲醇提取物成分的快速分析研究尚未见报道。因此, 有必要建立一种从大蓟提取液中直接进行成分分析的快速方法。

本研究建立了UPLC/Q-TOF法快速简便分析大蓟中的成分, 共鉴定出29种成分。其中一些二级裂解规律为第一次在ESI源中被报道, 首次在大蓟甲醇提取液中发现的是斑鸠菊酸、叔丁基羟基茴香醚、二氢辣椒素、大黄蒽醌和紫杉叶素。

1 材料与方法

1.1 试剂与材料

乙腈 (色谱纯) 和甲醇 (色谱纯) 均购自Merck公司 (德国, 达姆施塔特) 。甲酸 (色谱纯) 购自DIMA (美国, 弗吉尼亚州) 。亮氨酸-脑啡肽购自Sigma公司 (美国, 密苏里州) , 大蓟购自广州至信药材公司, 全草经过广东药学院刘基柱教授鉴定保存于本实验室, 编号:2001304081017。

1.2 样品制备

取大蓟全草1.0g切碎, 加入甲醇-水 (1∶1) 10mL60℃下水浴1h, 超声提取2次, 每次1h。提取液经10 000rpm高速离心2min, 微孔滤膜 (0.22μm) 过滤, 进样量为5μL。

1.3 色谱条件

超高效液相为Waters公司Acquity系统, 配置2元泵, 真空脱气并自动进样。色谱柱为Waters公司BRH分析柱 (50mm×2.1mm, 1.7μm) , 流速为0.3mL/min, 柱温为25℃, 流动相为为乙腈 (B) -0.1%甲酸水 (A) [5]。梯度洗脱:0~4min, 5%~20%B;4~10min, 20%~30%B;10~11min, 30%~45%B;11~16min, 45%~65%B;16~17min, 65%~100%B。

1.4 质谱条件

毛细管电压为3 000V, 锥孔电压为30V, 源温为100℃, 脱溶剂温度为350℃, 锥孔气流为50L/h, 脱溶剂气体为600L/h, 碰撞气体为氩气, 碰撞能量为25~45V, 质谱数据采集范围为m/z 50~1 000, 采用亮氨酸-脑啡肽作为参考标准溶液 (正离子模式下[M+H]+=556.2771, [M+H]-=554.2615) 。

2 结果

2.1 UPLC/Q-TOF分析条件优化

通过预实验, 将UPLC最佳流速设定为0.3mL/min[6]。通过对甲醇-水、乙腈-水、乙腈-异丙醇流动相体系进行考察, 同时考虑保留时间、加和离子和分离效果等因素, 最终选择乙腈-水 (含0.1%乙酸) 体系进行梯度洗脱。由于不同离子模式对离子对有竞争性抑制作用, 实验结果显示负离子模式灵敏度和信噪比均较高。

2.2 UPLC/O-TOF分析

本次实验中共有29个成分被鉴定出来 (见表1、表2) , 包括黄酮、黄酮糖苷、异黄酮、有机酸、酚酸和蒽醌类化合物。本研究中鉴定的成分已经通过Sci-finder数据库确认。

2.2.1黄酮和黄酮糖苷裂解

黄酮类在一级质谱中只有母离子存在, 无法鉴定其分子结构, 但黄酮类的二级质谱行为可确定B环和C环上的羟基数量和位置。因此, 将黄酮类的一级质谱与二级质谱相结合可准确鉴定出其分子结构。

本实验中, 毛地黄酮在负离子模式下产生了m/z 199的特征峰, 可能是由于A环和B环的作用, 导致C2H2O和CO2基团连续脱去[7]。负离子模式下C环脱去一个O原子, 但是该现象并未在芹黄素和槲皮素中发现, 可能是由于3-位没有羟基取代, 也可能是B环上羟基的供电子作用破坏了环上的共轭结构, 从而降低了C环的稳定性, 导致m/z269特征碎片离子的产生。在正离子模式下产生了m/z 241的特征峰, 是由于C环脱去CO2, B环脱去一分子H2O[8]。此外, 由于1, 3B+裂解容易脱去1分子H2O, 所以1, 3B+会产生m/z 117的碎片离子。

芹黄素的特征碎片是m/z 153和119。C环由于失去一个CO基团而紧缩, 产生了m/z 243的碎片。m/z 243的碎片可进一步裂解失去CO和H2O, 产生新的碎片m/z 197。特征碎片m/z 153可通过脱去一分子H2O而产生新的特征碎片m/z 171。

槲皮素由于在3-位上有羟基取代, 1, 3A+和1, 2A+都会产生特征例子m/z 179。1, 2A+容易脱去CO基团, 故m/z 151是槲皮素的主要碎片诊断离子。同时, 异黄酮类相对于黄酮类需要更高的碰撞能量才能得到特征碎片离子[9]。

B环上的羟基取代程度可影响黄酮糖苷的质谱裂解行为。B环上羟基越多, 在低能量撞击下脱去糖苷键碎片的强度越高。毛地黄酮-7-O葡萄糖苷在B环上有一个羟基取代, 比蒙花苷-7-O芸香糖苷和芹黄素-7-O吡喃糖苷产生的脱糖苷碎片丰度更高。此外, 糖苷键的取代位置对碎片也有影响, 槲皮素-3-O芸香糖苷在B环上有两个羟基取代, 但是相比于毛地黄酮-7-O葡萄糖苷则需要更高的碰撞能量才能得到黄酮碎片离子。羟基和O-糖苷键是供电子基团, 由于定位效应和共轭效应, B环上未被取代和3-位上有供电子基团的结构需要更高的碰撞能量。因此, 当毛细管电压和锥孔电压分别设定在3 000V和30V时, 槲皮素-3-O芸香糖苷的槲皮素残基可在一级质谱中被找到[10]

2.2.2新分离成分结构特征

首次在大蓟甲醇提取液中发现的是斑鸠菊酸、叔丁基羟基茴香醚、二氢辣椒素、大黄蒽醌和紫杉叶素。由于存在离子对竞争性抑制, 大黄素-甲醚、二氢辣椒素、叔丁基茴香基醚仅存在于正离子模式下, 斑鸠菊酸、半夏酸、紫杉叶素仅存在于负离子模式下。

大黄素-甲醚的主要碎片离子为脱落了一个甲基基团的m/z 270, 其结构是通过共轭作用保持稳定性的。此外, 由于3-位CO基团的脱落, 产生了m/z 242的碎片离子[11]。

二氢辣椒素的主要碎片离子m/z 290与文献报道的主要碎片离子m/z 137并不一致[12], 碎片离子m/z 136进一步失去一个CH2基团, 碎裂成为m/z 122的碎片离子, 这个裂解是ESI源中没有发现过的。二氢辣椒素的主要裂解途径是通过N-C键的断裂, 其主要碎片离子 (m/z 137) 也是由于N-C键断裂而产生的[12,13], 可能的机制见图1。

叔丁基茴香基醚的质谱信息可通过Wiley数据库进行鉴定, m/z 137是其主要的碎片离子, 但仍可以进一步失去一个CH4O基团, 碎裂为m/z 105形成另一个主要碎片离子。

斑鸠菊酸是第一次在ESI-MS中被报道, 其主要碎片为m/z 277 (M-H2O-H-) 和m/z 195 (M-C6H12O-H-) 。半夏酸的裂解方式和斑鸠菊酸类似。

紫杉叶素的母离子相继脱去一个二苯基基团和一个C3O3H5基团, 产生了m/z 241和m/z 151碎片离子。

3 结论

应用UPLC/Q-TOF-MS技术对大蓟甲醇-水提取物进行快速分析, 在17min内成功鉴定出29种成分, 其中5种化学成分为首次在大蓟中发现。本文阐明了电喷雾质谱中大蓟各成分的裂解规律, 并总结了大蓟中各类成分的主要碎片离子和异黄酮类中[1, 2A+-CO+H]+可作为3-位上是否有羟基取代的诊断离子。综上所述, UPLC/Q-TOF-MS技术可应用于大蓟成分的快速分析和结构鉴定。

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[9]HVATTUM.Study of the collision-induced radical cleavage of flavonoid glycosides using negative electrospray ionization tandem quadrupole mass spectrometry[J].Journal of Mass Spectrometry, 2003, 38 (1) :43-49.

[10]MA XIAOHONG.The electrospray ionization-mass spectra of Radix et rhizoma rhei[J].Journal of Hubei University (Natural Science) , 2006, 28 (4) :105-110.

[11]Zhang Q.Simultaneous quantification of capsaicin and dihydrocapsaicin in rat plasma using HPLC coupled with tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography B, 2010, 878 (24) :2292-2297.

串联质谱技术篇6

1 原理

饲料中的吉他霉素经甲醇水提取, Oasis HLB纯化, 初始流动相复溶, 过0.45μm滤膜, 上液质测定, 外标法确证及筛查。

2 样品制备

按照GB/T20195制备试样, 磨碎, 全部通过0.28mm孔筛, 混匀, 装入密闭容器中。

3 仪器设备

AB104-N电子天平、Agilent6410BQQQ液质联用仪、HITACHI CRG离心机。

4 操作步骤

4.1 试样提取

精确称取试样2g于250m L锥形瓶中, 准确加入20 m L提取液 (甲醇+水=20+80) , 振荡30 min, 转入离心管中, 10 000r/min离心5min, 上清液备用。

4.2 样品纯化

固相萃取柱 (6cc/200mg Oasis HLB) 分别用3m L甲醇和3 m L水活化, 准确移取5 m L上清液过柱, 清洗1:3m L5%甲醇及2%乙酸;清洗2:3 m L5%甲醇及2%氨水;清洗3:3m L65%甲醇及2%氨水, 近干后用甲醇洗脱, 收集洗脱液。在氮吹装置上50℃下用氮气吹干, 准确加入1m L初始流动相 (乙腈+0.1%甲酸水=90+10) 复溶, 过0.45μm微孔滤膜, 上LC-MS/MS测定。上机液中的药物浓度应稀释在线性范围内。

4.3 测定

4.3.1 液相色谱条件。

色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18 2.1×100 mm, 1.8μm;柱温:30℃;流动相:A:0.1%甲酸水溶液;B:0.1%甲酸乙腈, 梯度洗脱条件见表1。

4.3.2 质谱条件。

离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测MRM。使用前, 应调节各气体流量, 以使质谱灵敏度达到检测要求。质谱参数应优化至最佳。定性离子对、定量离子对及碰撞能量的参考值见表2。

min, %

流速:0.3 m L/min;进样量:5 u L。

m/z, V

4.3.3 定性测定。

在相同试验条件下, 样品中待测物的保留时间与标准工作液的保留时间偏差在±2.5%之内, 并且样品图谱中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近标准工作液中对应的定性离子对的相对丰度进行比较, 若偏差不超过表3规定的范围, 则可判定为样品中存在对应的待测物。

4.3.4 定量测定。

按照上述液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液, 以色谱峰面积进行单点或多点校正定量, 样品溶液中待测物的响应值应在仪器规定的线性范围内。上述色谱和质谱条件下, 对照品的工作曲线图、对照品的色谱质谱图和样品的色谱质谱图见图1~3。

5 结果计算

试样中某种待测物的含量X以质量分数 (mg kg) 表示, 按式 (1) 计算。

式中:

m1—计算机外标法自动计算所得到的某待测物的质量, 单位为微克 (μg) ;

m—试样质量, 单位为克 (g) ;

n—稀释倍数。

测定结果用平行测定的算术平均值表示, 结果保留三位有效数字。

6 重复性

同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于20%。

7 结果分析

串联质谱技术篇7

1 实验方法

1.1 仪器和试剂

超高效液相色谱-质谱联用仪为ACQUITY UPLC超高效液相色谱系统, ACQUITY TQD串联四级杆质谱, Mass Lynx TM工作站, 12通道固相萃取装置, 高速离心机, 氮吹仪, 电子天平。氯丙嗪标准品购自德国Dr.Ehrenstorfer标准品公司, 甲醇为色谱纯, 高氯酸, 实验用水取自Milli-Q纯水机 (Millipore, Bedford, MA, USA, 电阻率为18.2MΩ·cm) 。

1.2 标准溶液配制

标准储备液 (100μg·m L-1) :准确称取适量氯丙嗪标准品, 用乙腈定容于50m L棕色容量瓶中, 配制成100μg·m L-1的标准储备液, -5℃冰箱中保存, 有效期6个月。

1.3 色谱条件

色谱柱:Waters Acquity TMBEH C18柱, 规格为100mm×2.1mm (i.d) , 粒径1.7μm;流动相:乙腈-0.2%甲酸水, 流速0.25m L·min-1, 柱温:25℃, 进样量5.0μL。

1.4 质谱条件

离子源:电喷雾电离 (ESI+) , 检测器为TQD串联四级杆, MRM检测模式, 毛细管电压3.2Kv, 源温度120e V, 脱溶剂气温度300e V, 锥孔电压26e V, 碰撞能量22e V, 12e V, 碰撞气流量0.2m L·min-1。

2 猪肉样品前处理

准确称取猪肉样品2.00g, 加入20m L乙酸乙酯混合, 加入2m L 1mol·L-1氢氧化钠溶液, 充分振荡离心后将上清液转入蒸馏瓶, 再用10m L乙酸乙酯洗涤重复提取, 合并两次上清液, 50℃水浴旋转蒸干, 用2m L乙腈超声溶解残渣, 用4m L正己烷漩涡, 弃去上层备用。

用3m L甲醇, 3m L水活化C18小柱, 将待用提取液1m L上样, 分别用3m L 0.02mol·L-1盐酸, 3m L 0.1mol·L-1盐酸, 3m L甲醇清洗, 最后用3m L2%氨水甲醇溶液洗脱, 收集洗脱液在50℃下用氮气吹至近干, 用乙腈定容至1m L, 漩涡1min, 0.22μm的针头过滤器过滤后UPLC-MS分析。

3 结果

3.1 氯丙嗪色谱质谱检测结果

氯丙嗪的总离子流图及各级碎片离子图, 见图1, 氯丙嗪的保留时间为1.85min, 定量离子为319>86.3。

3.2 回收率实验

取兰州市区肉禽市场猪肉为基底, 在猪肉中加入盐酸克伦特罗标准对照品, 分别配制成浓度为0.5、2.0、10.0μg·L-1的加标溶液, 按照样品预处理方法处理样品, 每个浓度分别做3个平行, 考察不同加标浓度下的回收率, 平行测定3次, 结果见表1。

3.3 2011~2012年兰州市猪肉中氯丙嗪含量检测结果

应用上述检测方法, 连续两年对兰州市猪肉中氯丙嗪进行检测, 结果见表2。

4 讨论

在考察多种溶剂的提取效率后, 确定乙酸乙酯的提取效率较高, 氯丙嗪的离子化效应较低, 流动相加入甲酸后, 明显提高了氯丙嗪的离子化效应。加标回收率实验中, 目标物的平均回收率在75.9%~92.3%之间, RSD均小于10.0%, 同时, 随着加标浓度的降低, 回收率有所下降, 从RSD的结果来看, 本方法重现性良好。UPLC/MS法测定猪肉中氯丙嗪含量简单可行, 专属性强, 为市场肉质品中氯丙嗪监督检测提供了技术支持。

参考文献

[1]王贞媛, 李丹, 夏顺宁.LC/MS/MS法鉴别神速宁胶囊中添加的盐酸氯丙嗪成分[J].中国天然药物, 2007, 5 (3) :219-220.

[2]黄士新, 孙亚云, 曹莹.高效液相色谱法测定饲料中的违禁药物氯丙嗪[J].饲料研究, 2003 (8) :249-251.

[3]路平, 曲志娜, 谭维泉, 等.气相色谱-质谱法测定猪肝中氯丙嗪残留的研究[J].中国动物检疫, 2006, 23 (7) :309-311.

串联质谱技术篇8

关键词：牛肉,磺胺类药物,残留,液相色谱—串联质谱法

磺胺类药物(sulfonamides,SAs)是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物,广泛用于预防和治疗食源性动物的疾病,然而过量使用会导致该类抗生素在食用动物产品中残留[1]。人长期摄入含磺胺类药物的动物性食品后,药物会不断在人体内蓄积,当积累到一定程度后,就会对人体产生毒性作用,可导致肾受损害,破坏人的造血系统,引起溶血性贫血症、粒细胞缺乏、血小板减少症等;对于过敏体质的人,轻者引起皮肤瘙痒症,重者引起血管性水肿,甚至导致死亡[2]。因此,欧盟将磺胺类药物列为必须严格监控的药物,并规定动物源食品中磺胺的最大残留限量为100μg/kg,日本规定食品中不得检出SAs,我国也将磺胺类药物列为动物饲养过程中限制使用的药物[3]。因此,对动物源性食品中SAs的检测分析非常重要。

目前,国内外对SAs的分析检测方法主要有分光光度法[4]、酶联免疫吸附法[5,6]、气质联用法[7]、高效液相色谱法[2,3]及高效液相色谱—串联质谱法[8]等。分光光度法和酶联免疫吸附法定量不准确,高效液相色谱法虽然定量功能较强,但该法只能依据化合物的保留时间对样品进行定性,灵敏度不够高,对于一些含量低的样品无法检测;对于基质复杂的样品,其定性和定量结果容易受到基质的干扰,从而导致假阳性或者定量结果不准确;而目前液相色谱法及液质联用法对SAs残留分析主要集中在鸡肉[9]、鸡蛋[10]、水产品[11,12,13]、化妆品[14]和牛奶[2,4,15]等方面,对牛肉中残留测定的报道较少。液质联用法(HPLC-MS/MS)采用多重反应监测(MRM)模式,结合液相保留时间及MRM特征离子对进行定性和定量,可以大大减少由于保留时间相同而待测离子不同所带来的干扰,同时大大提高了检测灵敏度,尤其适于对牛肉这样基质复杂样品的分析。

该文选择国内外关注较多的磺胺嘧啶(SDZ)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺地索辛(SDT)、磺胺二甲嘧啶(SDM)、磺胺甲氧嗪(SMP)、磺胺甲噁唑(SMZ)、磺胺喹噁啉(SQX)共7种SAs为研究对象,建立高效液相色谱-串联质谱法同时测定牛肉中7种SAs的方法,该方法具有操作简便、灵敏度高等优点。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器。

Agilent 1260-6430QQQ液相色谱串联质谱联用仪(美国安捷伦科技有限公司),Buchi R-210型真空旋转蒸发仪(瑞士步琪有限公司);KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);L-550型离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)。

1.1.2 试剂。

甲醇、正己烷、乙腈均为色谱纯,德国Merck公司生产;无水硫酸钠,分析纯,广州化学试剂厂生产。7种标准品:磺胺嘧啶(SDZ)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺地索辛(SDT)、磺胺二甲嘧啶(SDM)、磺胺甲氧嗪(SMP)、磺胺甲噁唑(SMZ)、磺胺喹噁啉(SQX),均购于德国Dr.Ehrenstorfer公司,纯度均大于97%,分别用甲醇配制成浓度为1 000μg/mL的标准储备液。

1.2 检测条件

1.2.1 色谱柱。

ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1×150 mm,3.5μm);流速:0.5 mL/min;柱温:45℃;进样量:10μL;流动相:A为0.1%甲酸水溶液,B为甲醇溶液。梯度洗脱程序:0～3.5 min,20%B;3.5～6.0 min,20%～40%B;6.0～10.0 min,40%B;10.0～10.5 min,40%～20%B;10.5～12.0 min,20%B(post run:5 min)。

1.2.2 电离方式。

ESI+;毛细管电压:4.0 kV;干燥气温度:350℃;干燥气流速:11 L/min;雾化器压力:50 psi;监测模式:多反应监测(MRM);多反应监测各药物离子对及对应的驻留时间、碎裂电压和碰撞能见表1。

注:*表示定量离子。

1.3 试验方法

1.3.1 标准曲线的绘制。

用流动相稀释7种磺胺类药物标准品,配制成5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、100.0μg/L 5个等级的标准曲线,过0.22μm微孔滤膜后上机测定。以各定量离子色谱峰面积为纵坐标,对照溶液的浓度为横坐标,绘制标准曲线。回归方程及相关系数见表2。

1.3.2 样品提取。

用组织捣碎机捣碎牛肉混匀,准确称取4g(精确到0.01 g)于50 mL具塞离心管中,加入8 g无水硫酸钠,再加乙腈20 mL,35℃超声提取20 min,6 000 r/min离心10 min,取全部上清液至150 mL鸡心瓶中,再用20 mL乙腈均质残渣1 min,6 000 r/min离心10 min,合并上清液于150mL鸡心瓶中,50℃水浴旋蒸浓缩至近干,用2 mL甲醇涡旋溶解残渣待净化。

1.3.3 样品净化。

向上述溶解液中加入5 mL正己烷脱脂,涡旋2 min,转移至15 mL离心管中,4 000 r/min离心5 min,去除上层正己烷,重复脱脂1次。取下层溶液过0.22μm有机滤膜,供HPLC-MS/MS测定。

1.3.4 回收率测定。

在牛肉空白中分别添加10.0、20.0、40.0μg/L 3组浓度混合标准溶液,按照上述方法操作进行回收率测定。

2 结果与分析

2.1 准确度和精密度

7种磺胺类药物在5.0～100.0μg/L浓度范围内呈良好的线性关系,r2均大于0.997。在相同的分析条件下,在牛肉空白中分别添加10.0、20.0、40.0μg/L 3组浓度混合标准溶液进行回收率和精密度试验,做5个平行样,试验结果见表3。高、中、低3档加标回收率为92.5%～100.6%,相对标准偏差为2.0%～4.5%,表明该方法具有较好的精密度、准确度和回收率。

2.2 灵敏度

以最低浓度点5.0μg/L的响应值与空白样品中的噪声响应的3倍计算最低检出限,具体检出限结果见表3。7种SAs的检出限为1.0～4.5μg/L,检测灵敏度明显优于同类标准方法。

3 结论

串联质谱技术篇9

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Waters超高效液相色谱/ 串联质谱仪(ACQUITY UPLC/Quattro Premier);MassLynxTM4.0;Zymark全自动固相萃取仪;Accu BONDⅡODS C18固相萃取柱(1 000 mg,6 ml); TurboVapⅡ型氮吹仪(Caliper)。乙腈、甲酸均为液相色谱纯;水为Millipore纯水机出水;MCYST-LR标样为瑞士ALX公司生产(100 μg)。

1.2 液相色谱条件

传统的液相色谱测定MCYST-LR所需时间较长。本方法能在5 min之内完成,极大提高分析速度。图1为标样MRM的总离子流色谱图。流动相中加入适量甲酸可增强ESI+的灵敏度。本文对比了流动相中不同甲酸含量(V/V分别为0%、0.05%、0.10%)对灵敏度的影响,随着甲酸浓度的升高,能显著改善分析灵敏度。综合考虑,选择甲酸浓度为0.10%。本实验液相色谱条件为:Waters超高效液相色谱柱,C182.1 mm×50 mm×1.7 μm,柱温30℃,流动相为乙腈和0.10%(V/V)甲酸的水溶液,流速为0.25 ml/min,进样体积为5 μl,流动相梯度见表1。

1.3 质谱条件

995.7是MCYST-LR的[M+H]+离子质荷比,MCYST-LR裂解产生碎片较多,本实验中离子135.2为特征离子碎片,并且丰度最大,因此选择其为MRM定量分析时的子离子。见图2。本实验质谱条件为:采用ESI+离子源,毛细管电压为3.0 kV,锥孔电压60 V;离子源源温为100℃,脱溶剂气温度为350℃,流量为600 L/h,锥孔反吹气流量为50 L/h;碰撞池压力4.44×10-3mbar。

质量分析器低端分辨率LM1:13.0 V,高端分辨率HM1:13.0 V,离子能量1∶1.0;低端分辨率LM2:13.0 V,高端分辨率HM2:13.0 V;离子能量2∶4.0。

注:1为即时变化,6为线性变化。

1.4 样品的前处理

分别用10 ml甲醇、水活化固相萃取柱,流量为5 ml/min。取水样1.0 L,加入5 ml甲醇,上样速度为4 ml/min。用10 ml 5%甲醇的水溶液淋洗小柱,氮气吹干10 min,5 ml甲醇洗脱两次,氮吹仪浓缩至1 ml,待上机分析。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线

将MCYST-LR标准样品逐级稀释成1 000、100、50、10 μg/L,在上述检测条件下测定。以样品峰面积为纵坐标,样品浓度为横坐标,得到标准曲线,见图3。线性范围及相关系数见表2。在信噪比S/N=3的条件下,MCYST-LR检出限达到0.04 μg/L。

2.2 精密度和回收实验

取同一水样,分别加入高、中、低不同浓度的MCYST-LR标准溶液,样品按本文1.4方法进行处理,分析并测定其精密度及回收率。结果表明:相对标准偏差≤5.4%,平均相对标准偏差为4.71%;平均回收率为97.2%。

2.3 实际样品分析

在地表水全分析中,采集4个地表水水质样品,按上述方法进行分析MCYST-LR,分析结果为未检出。

笔者采用超高效液相色谱/ 串联质谱法,乙腈-水-甲酸作为流动相,对水中的MCYST-LR进行测定。结果表明,该法具有快速、准确、灵敏度高、分析周期短、适用范围广等优点,可满足WHO规定饮用水中MCYST-LR浓度低于1 μg/L限量直接测定的要求。