脱落细胞（精选9篇）
脱落细胞 篇1
宫颈癌的发病率和死亡率在女性生殖道恶性肿瘤中均居第二位,全世界每年新发病例在47万例以上,中国贫困地区每年新发病例达15万以上(占31.9%)[1]。我国从20世纪60年代开始进行宫颈癌的筛查,一直寻找高效、合理的普查方法,从而提高诊断的准确性。近年来,受到广泛关注的阴道细胞学检查,使宫颈癌的发病率和死亡率比过去有很大幅度的降低,且对患者不造成任何痛苦和损伤。阴道细胞学检查是目前早期发现肿瘤效果最佳的检查方法,特别适用于贫困地区宫颈癌的早期诊断,具有十分重大的临床意义。现对笔者所在城市803例已婚妇女阴道脱落细胞普查,结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料
对2009年10月～2010年9月在笔者所在站门诊检查803例已婚妇女阴道脱落细胞,患者年龄22～56岁,平均年龄(38.5±2.9)岁。其中城区381例,农村422例。
1.2方法
(1)标本采集前的准备,受检者24 h之内禁止性交、盆浴和阴道灌洗;所有工具应消毒、清洁、干燥、不粘附任何化学药品和润滑剂,采集标本前将窥阴器、宫颈刷、细胞保存液准备好,以便标本可立即置于细胞保存液中。(2)标本采集,用窥阴器暴露宫颈,在直视下手持宫颈刷柄,将刷头中央区较长的刷丝从子宫颈外口插入子宫颈管8 mm处,周边区刷丝顶部在子宫颈粘膜面,力度适中,顺时针缓慢旋转3～5圈,稍微停留一下,取出宫颈刷,用镊子或戴手套的手指夹紧刷头底座,拔脱刷头,将刷尖向下垂直方向浸泡在细胞保存液中,旋紧瓶盖,轻轻摇晃。(3)细胞保存液,由武汉呵尔医疗科技发展有限公司生产。(4)制片、固定与染色,将装有保存液和刷头的标本收集管,加0.1%DTT消化液放在振荡器上振荡2 h。然后将消化后的细胞悬液以800转/min离心5 min,弃上清液后,加50%酒精以800转/min的转速每次5 min,分别清洗、离心两次。然后将用固定液稀释的细胞悬液,放入细胞涂片离心机甩片5 min,制得的细胞片立即放入95%酒精固定液中,15 min后进行巴氏染色,操作按《全国临床检验操作规程》进行[2]。
1.3 诊断标准
以2001版TBS(The Bethesda System)报告系统为标准。
1.4 统计学方法
0软件包处理,采用χ2检验,α=0.05为检验标准。
2 结果
2.1 803例受检验者中,城区381例,农村422例。
上皮内病变或恶性病变阴性(negative for intraepithelial lesion or malignancy,NILM)共272;炎症反应性细胞改变共480例;萎缩反应性细胞改变9例;不典型的腺细胞1例;意义不明的非典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells ofundetermined significance,ASCUS) 17例;非典型鳞状上皮内病变,不排除高度病变(atypical squamous cells,cannot exclude high-grade squamous intraepithelial lesion,ASC-H)7例;低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,L-.SIL) 10例;高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,H-SIL)或原位癌(Carcinoma in situ,CIS) 6例;鳞状细胞癌(squamou ssarcoma,SCC)1例;不典型腺细胞改变1例。结果见表1。
2.2 ASCUS以上病例共42例,占5.
23%。其中城区15例,患病率为3.94%;农村27例,患病率为6.40%。城区和农村两组患病率比较无统计学意义(χ2=2.45,P>0.05)。对AS-CUS以上患者,定期复查,阴道镜检查或活检确诊。
2.3 反应性细胞改变,特别是炎症反应性细胞改变,共检出480例,占60.
1%,是妇科最常见、最多的病例。由于炎症的长期刺激,导致宫颈发生鳞状上皮化生,核增大乃至细胞癌变,故应积极治疗,定期复查。
2.4 霉菌感染者,共检出145例,患病率为18.
06%,其中城区58例,农村87例。城区组和农村组患病率比较有统计学意义(χ2=3.94,P<0.05)。霉菌感染在农村比城区严重。霉菌属于芽生酵母菌,假菌丝由长型芽孢组成,沿其纵轴有缩窄。假菌丝穿插于上皮细胞中,形态似烤肉串。在液基薄层制片中,烤肉串现象很常见,当假菌丝不明显时,串肉现象可作为诊断依据。
2.5 滴虫感染者,共检出63例,患病率为7.
85%,其中城区29例,农村34例。城区组和农村组患病率差比较无统计学意义(χ2=1.65,P>0.05)。在液基制片中,滴虫虫体变圆,显得更小;有时退变的胞质碎片或巨噬细胞会被误认为滴虫,故滴虫诊断时应认真、仔细。滴虫往往和纤毛菌同时存在,液基中的纤毛菌通常成团,当发现纤毛菌时应仔细检查找滴虫。由于长期滴虫感染可能导致上皮细胞癌变,所以有滴虫感染时,出现细胞核增大、深染、核质比异常时,应先治疗滴虫后复查。
3 讨论
3.1 标本的采集和制片是细胞学判读的重要先决条件。
子宫颈细胞学的主要任务是筛选鳞状上皮病变和鳞状细胞癌,标本的采集最好选在月经中期10～12 d左右,因为在此期的脱落细胞多为表层细胞。宫颈刷在刷取细胞时,时常会有这样的情况,刷子转5圈,但刷子上没有多少细胞,此时可以多转2～3圈。宫颈液基细胞学对细胞数也有了明确的规定,不低于5000个细胞。但各个过程都按标准操作,也会出现“不满意”的标本,此时应通知临床,并重新取材,如果还是取不到“满意”的标本,就应该引起重视,建议患者做更进一步的检查,并对患者进行随访,因为有部分被判读“不满意”的标本,来自高危的患者[3]。
3.2 人乳头瘤病毒(human pappiloma virus,HPV)感染已被证实是导致宫颈癌病变的主要因素。
免疫学研究表明,HPV感染的高峰年龄在20岁,持续10～20年感染之后发展为癌前病变或浸润癌,故HPV的感染在已婚或有性生活的女性中,可发生在任何年龄段[4]。而HPV迄今为止已发现70多种类型,高危HPV持续感染者的宫颈病变进展的风险度高于低危者,发生在宫颈癌的相对危险性比正常妇女更高。所以在宫颈癌的防癌普查中,HPV的检测应引起重视,有条件的医院应该把HPV的检测单独列出检测。由于不推荐30岁以下的女性做以HPVDNA检测为基础的筛查,所以应重点在30岁以上的女性中检测高危型HPV,即HPV16、18型。近年来,美国默克和英国葛兰素史克两家公司已经成功研制出预防HPV感染的子宫颈疫苗,在临床试验中取得了良好的效果,有望成为防治子宫颈癌的有效途径。
HPV相关性鳞状细胞的变化起始被描述为核周空亮伴胞质周边浓缩,并称为“挖空细胞化”。但应与炎症反应的核周边空晕相区别,所以诊断挖空细胞时,应重点观察有没有核的变化和挖空区是不是规则,挖空区形态规则多为炎症反应所至。由于区分“挖空细胞化”和宫颈上皮内瘤变Ⅰ级的形态标准不能统一,且区分没有临床意义,临床的处理原则相同,2001版TBS把它们统一归属于低级别鳞状上皮内病变。2001年美国阴道镜和子宫颈病理学会(the American Society for Colposcopy and Cervical Pathology,ASCCP)建议低级别鳞状上皮内病变的早期处理措施应是阴道镜检查。但在LSIL的患者中65%的病变可自行消退,20%的病变持续存在,保持不变,只有15%的病变进展。鉴于不能预测的15%,笔者对大部分LSIL患者给予了阴道镜检查并物理治疗,对有条件随访的患者,对其采取定期检查,严密监测的处理方法。3.3观察细胞应全面分析,注意综合特征,不能靠1～2个诊断标准和细胞形态来诊断。反应性细胞改变属良性病变,与炎症、放射性影响、子宫内避孕器(IUD)、萎缩等因素有关。本次普查中,检出了炎症反应性细胞改变(报告典型的修复和萎缩反应性细胞改变)。炎症反应性细胞改变,核增大,有双核或多核细胞,但只要核形规则,染色质分布均匀,都偏向于非肿瘤性。萎缩是一个正常的老年性现象。当雌激素水平低下,如绝经后或口服抑制雌激素的避孕药后宫颈上皮变薄,几乎全由副基底层细胞构成,核质比高,与高级别鳞状上皮内病变难以区别,可以给予少量雌激素或停止使用避孕药,1周后再刷片检查,萎缩性改变的上皮即行消失,而癌细胞不会消失。
3.4 子宫颈易受各种物理、化学、生物等因素的影响。
局部上皮发生充血、水肿时,涂片中的上皮细胞发生变化,核亦可增大,与鳞状上皮内病变类似,不易鉴别,故有一定的误诊率。一旦发生可疑,没有条件多次复查,可以作活检来确诊。
HSIL与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ级和CINⅢ级的含义相同,也与中度和重度非典型增生和原位癌含义相同。细胞形态显示的核质比增大,核深染,核膜不规则。与传统涂片相比,液基涂片中黏液被分解,传统涂片背景中出血、坏死或颗粒性蛋白质性残留物在液基涂片中也都被消除,细胞大部分单个排列,可以看得更清楚,但失去了提供诊断参考的癌性背景和成串的HSIL细胞;诊断性细胞更少,有时只看到少数几个HSIL细胞,不足以诊断。
3.5 女性生殖系统是由与外界相通的管道型器官组成的,卵巢除外。
而卵巢脱落的细胞可由输卵管伞端进入生殖系统,故任何部位的细胞都可出现在阴道脱落细胞中。但阴道脱落细胞首先是鳞状上皮内病变和鳞癌的筛查手段,作为其他部位的检查手段是不可靠的,本次只检测出腺细胞异常1例,可能是受到取样和判读等原因的制约。
摘要：目的 通过分析本地区已婚妇女阴道脱落细胞的情况,了解本地区妇女的健康状况。方法 采用巴氏染色法,以2001版TBS报告系统为标准分类。结果 检查本地区803例已婚妇女的阴道脱落细胞,得出NILM,改变272例,炎症反应性细胞改变共480例,萎缩反应性细胞改变9例,意义不明的非典型鳞状上皮细胞17例,非典型鳞状上皮内病变、不排除高度病变7例,低级别鳞状上皮内病变10例,高级别鳞状上皮内病变或原位癌6例,鳞状细胞癌1例,不典型的腺细胞1例。其中ASCUS以上病例共42例(5.23%),城区15例(3.94%),农村27例(6.40%),两组患病率无统计学意义(P＞0.05)。两组霉菌比较有统计学意义(χ2=3.94,P＜0.05)。两组滴虫比较无统计学意义(χ2=1.65,P＞0.05)。结论 定期妇科检查有利于已婚妇女生殖健康,早期发现各种妇科疾病,从而提高其生活质量。
关键词：阴道脱落细胞,TBS,宫颈癌
参考文献
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[3]张金库,张浙岩.子宫颈液基细胞学诊断图谱.第1版.北京:人民军医出版社,2006:15.
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脱落细胞 篇2
水稻根和籽粒细胞分裂素和脱落酸浓度与籽粒灌浆及蒸煮品质的关系
以10个不同基因型水稻品种和杂交稻组合为材料,分析了结实期水稻根系和籽粒细胞分裂素和脱落酸(ABA)浓度的变化及其与籽粒灌浆速率和稻米蒸煮品质的关系.结果表明,灌浆早期(花后0～12 d)根和籽粒玉米素+玉米素核苷(Z+ZR)浓度以及灌浆中期(花后13～26 d)根和籽粒ABA浓度与籽粒起始生长势、平均灌浆速率、最大灌浆速率、糙米重呈显著或极显著正相关(r=0.726* ～ 0.984**),与活跃灌浆期呈极显著或极显著负相关(r=-0.749* ～-0.834**).灌浆中、后期 (花后27 ～40 d)根和籽粒Z+ZR浓度与活跃灌浆期呈显著或极显著正相关(r=0.689* ～ 0.932**),但灌浆后期Z+ZR 浓度与灌浆速率呈极显著负相关(r=-0.826** ～-0.927**).灌浆中期和后期根和籽粒 Z+ZR浓度与胶稠度及碱化值呈显著或极显著正相关(r=0.722* ～ 0.896**),与直链淀粉含量呈显著或极显著负相关(r=-0.633* ～-0.778**).灌浆中期根和籽粒ABA浓度与胶稠度及碱化值呈极显著负相关(r=-0.883** ～-0.913**), 与直链淀粉含量呈极显著正相关(r=0.803** ～ 0.871**).不同灌浆期ZR或ABA处理对籽粒灌浆、稻米胶稠度和直链淀粉含量的影响 ,与内源激素同灌浆特征参数和稻米蒸煮品质指标的关系基本吻合.表明根和籽粒细胞分裂素和ABA对籽粒灌浆和稻米蒸煮品质起调控作用,其调控的`正、负效应取决于灌浆的时期.
作 者：常二华 王朋 唐成 刘立军 王志琴 杨建昌 CHANG Er-Hua WANG Peng TANG Cheng LIU Li-Jun WANG Zhi-Qin YANG Jian-Chang 作者单位：扬州大学江苏省作物遗传生理重点实验室,江苏扬州225009刊 名：作物学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA AGRONOMICA SINICA年，卷(期)：200632(4)分类号：S511关键词：水稻 根系 细胞分裂素 脱落酸 籽粒灌浆 蒸煮品质
脱落细胞 篇3
【关键词】宫颈刮片 细胞学检查 宫颈癌普查
【中图分类号】R-1 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2015）02-0279-01
对于女性身体健康方面，宫颈癌已经严重威胁了女性的身体健康。宫颈癌作为一种恶性肿瘤，在临床上的发病率已经越来越高。通过有关的流行病学研究报告的结果我们可以看到，宫颈癌在女性患者中的发病率仅次于乳腺癌，同时也是一种比较常见的生殖系统肿瘤疾病。宫颈刮片脱落细胞学检查主要是利用专门的刮片，对采集的少量宫颈细胞染色，观察细胞是否出现异常形态，属于宫颈癌检查的首选手段。这种检查方法操作简单可行，不会对患者造成伤害，所以在临床上的使用范围及认可度都是比较高的。本文主要是通过回顾性分析沙湾县妇幼保健院自2013年1月—2014年12月进行宫颈刮片脱落细胞学检查的，研究宫颈刮片脱落细胞学检查在宫颈癌普查中的作用。
1、资料与方法
我院自2013年1月—2014年12月进行宫颈刮片脱落细胞学检查的患者5800例，患者的年龄区间为35—65岁，平均年龄为42.1岁。
1.1方法
所有患者进行宫颈刮片脱落细胞学检查。首先需要采集患者的标本，主要步骤及方法为：使患者的宫颈外口充分的暴露，利用专门的宫颈刮片插入到患者的宫颈管中，根据宫颈的外口为中心点，鳞状和柱状上皮细胞的交汇处将宫颈刮片旋转一周，获取较少量的分泌物及黏膜组织。抽出患者体内的宫颈刮片，将取得的标本置于载玻片上，固定在95%的乙醇中，时间为30min，取出，染色，利用自动分析对处理后的标本进行检测。
1.2临床诊断标准：
I级：没有核异质细胞发生
II级：出现轻度核异质细胞
III级：检查结果为轻度的非典型增生性细胞
IV级：检查结果为重度的非典型增生性细胞
V级：发现癌细胞
对比观察：将宫颈刮片脱落细胞学检查的结果与患者的病理学结果进行对比，并对结果进行分析，同时分析不同年龄段的患者进行宫颈刮片脱落细胞学检查的结果及宫颈发生病变的情况。
2、结果
宫颈刮片脱落细胞学检查结果：在本次分析的5800例患者中，有2800例患者没有出现核异质细胞，2902例患者出现了比较定都的核异质细胞，其余的98例患者有非典型增生细胞。所有患者总以44—55岁的患者检查结果异常率较高，有68例患者，为2%；98例宫颈刮片脱落细胞学检查结果异常的患者中，有90例患者为轻度不典型增生细胞，4例患者为重度不典型增生细胞，其余4例为癌细胞。
病理学检查结果：在宫颈刮片脱落细胞学检查结果异常的98例患者中，通过病理学诊断，为炎症患者81例，轻度不典型增生患者6例，重度不典型细胞增生患者为6例，发现癌细胞的患者为5例。
3、讨论
宫颈癌属于一种在临床上较为常见的恶性肿瘤，同时也是对女性身体健康和生命安全严重威胁的一种疾病，对于宫颈癌的发病机理目前已经得到明确，这说明我们可以预防宫颈癌的发生。但是一旦患者发生了宫颈癌的病变，对于治疗的难度就增加了，并且治疗后的效果并不十分理想。对于早期已经发现的宫颈癌前病变，如果得到了有效的治疗和处理，是可以防止病情进一步发展的，也及避免了宫颈癌的发生。
宫颈刮片脱落细胞学检查作为临床上对宫颈癌的筛查手段，已经得到了多数研究人员及临床工作者的肯定。这种检查手段，操作简单，易于掌握，并且不会对患者造成痛苦，受到了越来越多的患者的欢迎。利用宫颈刮片脱落细胞学检查方法，对于大范围的宫颈癌普查，具有非常重要的意义和作用，对于及时发现宫颈癌前病变及降低宫颈癌的发病率，是非常有效的。同时已经检查出现了宫颈癌前病变的患者，需要通过进一步的病理检查结果来进行确诊。
在本次的研究结果中，进行检查的5800例患者中通过宫颈刮片脱落细胞学检查，有98例患者出现了轻度不典型细胞增生，在这98例患者中，有90例患者为轻度不典型增生细胞，4例患者为中度不典型增生细胞，其余4例为癌细胞。而病理学诊断获得的结果为宫颈刮片脱落细胞学检查结果异常的98例患者中，炎症患者81例，轻度不典型增生患者6例，重度不典型细胞增生患者为6例，发现癌细胞的患者为5例。从這个结果中我们可以看到，虽然使用宫颈刮片脱落细胞学检查比较方便易行，但是获得的假阴性结果也是比较高的。所以在临床检查过程中，为了降低出现假阴性结果，在获取标本的时候，一定要按照规定的操作进行，以便可以得到合格的检验标本，取得准确的检查结果。
由以上的讨论我们可以看到，在对宫颈癌普查的过程当中，进行宫颈刮片脱落细胞学检查是有效的方法，可以及早的发现宫颈癌的癌前病变，可以展开有效的干预办法，降低宫颈癌患者的发病率。
参考文献：
[1]贾兴盛，宫颈刮片9852例脱落细胞学检查筛查宫颈癌的结果分析[J].河北医药.2010.32（4），490--491
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[3]李文梅，宫颈刮片脱落细胞学检查在宫颈癌普查中的作用[J].蚌埠医学院院报.2014.39（7），867--869
[4]张艳娟，宫颈刮片脱落细胞学联合阴道镜在宫颈癌初筛中的价值分析[J].中国卫生产业.2014.4（8），102--103
脱落细胞 篇4
1 实验
1.1 仪器及试剂
King Fisher提取纯化仪 (美国Thermo Scientific公司) , King Fisher Flex提取工作站 (美国Thermo Scientific公司) , FL磁珠法DNA提取试剂盒 (长春博坤生物科技有限公司) , LC- 超微量磁珠法DNA提取试剂盒 (长春博坤生物科技有限公司) , Power Plex 18D扩增试剂盒 (美国Promega公司) , 9700 型PCR扩增仪 (美国ABI公司) , 3500XL遗传分析仪 (美国ABI公司) , 日用棉签。
1.2 检材
本文所用检材分为两种, 一种是日常案件检材, 具体为笔者过去半年所受理的652 份脱落细胞类检材, 细分为3 类:a.手脚接触类, 包括手印、指纹、脚印、汗斑以及手脚接触可能遗留脱落细胞的作案工具上采集的擦拭物等;b.口腔接触类, 包括瓶口拭子、吸管拭子、食物残渣、口罩等;c.随身衣物类, 包括衣裤、帽子、手套、皮带、眼镜等;第二种为笔者自制的实验检材, 包括使用棉签在人体皮肤上刮取的脱落细胞检材及常规血斑检材。
1.3 脱落细胞DNA的纯化
1.3.1 kingfisher FL纯化方案
剪取检材放进0.5ml离心管, 加入400ul已混好DTT (100:1) 的裂解液 (液面浸没检材) , 95℃裂解30 min, 10000 rpm离心3min, 取上清液加入FL磁珠法DNA提取试剂条中并在King Fisher纯化仪上进行DNA纯化, DNA模板洗脱体积为40ul。
1.3.2 kingfisher flex工作站纯化方案
剪取检材放进工作站专用0.5ml离心管, 加入20ul蛋白酶K (10mg/ml) 及380ul消化液UL (液面浸没检材) , 56℃消化60 min, 3000 rpm离心10min, 取上清液通过kingfisher flex工作站进行提取纯化, DNA模板洗脱体积为40ul。
1.4 DNA扩增及检测
使用Power Plex 18D试剂进行扩增, 反应总体积为10ul, 含DNA模板2ul, Master Mix 2ul, Primer Pair Mix 2ul, 纯水4ul;反应在ABI 9700 型扩增仪上进行, 应用试剂专用程序扩增29 个循环, 扩增产物使用ABI 3500XL遗传分析仪进行电泳检测, 应用Genemapper ID3.2 软件对结果进行基因分型。
1.5 结果表征
1.5.1 检出率
DNA模板经扩增及电泳分型后, 获得13 个以上STR基因座及Amelogenin基因座分型 (包括混合分型) 且峰值达到100rfu以上为“检出”。结果为“检出”的检材占检材总数的比例为“检出率”。
1.5.2 检出峰值
在检出的检材中, 将Amelogenin基因座中X及Y的峰值平均数定义为该检材的检出峰值, 未检出结果的检材, 其检出峰值为0。
2 结果与讨论
2.1 案件检材检验结果
本文所用案件检材, 其中336 份采用kingfisher FL方案进行纯化, 316 份使用kingfisher flex工作站方案进行纯化, 经扩增及电泳分型后的检验结果如表1。
2.2 实验检材检验结果
使用棉签在人体手臂相邻皮肤所划分好的5 个区域施加相同力度分别擦拭1 次, 2 次, 3 次, 4 次, 5 次, 每次两根棉签平齐一起擦拭, 共10 根棉签样本, 然后擦拭次数相同的棉签分别使用两种方案进行纯化。另外制取一份FTA卡血液样本, 使用0.5mm打孔仪截取两片, 分别使用两种方案进行纯化。得到的检出峰值如表2。
2.3 两种方案运行参数 (表3) 。
2.4 讨论
从表1 可以看出, 口腔接触类检材的检出率最高, 其次是随身衣物类检材, 最低的是手脚接触类检材。从载体上提取人体脱落细胞DNA的含量和纯度, 受个体差异、与载体接触时间、载体性质等诸多因素的影响[1]。口腔接触类检材与口腔直接接触, 而口腔黏膜上皮细胞具有代谢旺盛、更新快、易脱落的特点, 在外力作用下容易脱落到相应载体上[2], 因此此类检材上的人体脱落细胞相对其他两类较多。而随身衣物类一般与身体接触时间较长, 载体上遗留积累的人体脱落细胞比手脚接触类等短暂接触类的要多。同时, 在案发现场勘查时, 口腔接触类以及随身衣物类的检材采集更有针对性, 因此, 随身衣物类检材的检出率次之, 手脚接触类最低。
分析表1 及表2 数据可知, 在DNA微量的情况下, kingfisher flex方案的检验结果都比kingfisher FL方案好。两者的提取效率不一致主要是由DNA释放方式的差异而决定的。在kingfisher FL方案中, 检材是在高温 (95℃) 、高盐的条件下破坏细胞膜及核膜蛋白, 并使核酸酶失活而释放DNA的[3]。在高温环境中, 其中一部分DNA是处于解螺旋单链状态的, 其分子稳定性差, 容易降解, 使得DNA浓度降低;另一方面, 在裂解液温度下降恢复到常温的过程中, 单链的DNA分子会进行“复性”, 但由于体系中存在杂质以及金属离子, 会一定程度影响“复性”, 从而使得裂解液中依然存在较多的单链DNA分子, 这部分单链DNA分子也会损失一部分, 使得DNA模板浓度降低。而kingfisher flex方案中, 检材是在低温 (56℃) 条件, 在蛋白酶K的作用下破坏细胞膜及核膜蛋白而释放DNA的。释放出来的DNA分子绝大部分是以双链形式存在, 稳定性较好, 不易降解, 得到的DNA模板浓度高。因此, 对于微量DNA检材, kingfisher flex工作站方案的纯化效果会比kingfisher FL方案好。
由表2 还可以看出, 当检材的DNA含量很微量时 (擦拭次数少) , kingfisher flex方案的纯化效果明显优胜, 但随着检材DNA含量的增加, 两种方案的效果逐渐接近, 对于常规检材 (血斑) 而言, 两者的检验效果相当, 这个规律提示我们在工作中可以区分两者的最佳使用范围, 当遇到疑难超微量检材时, 首选采用kingfisher flex方案进行纯化, 当遇到常规检材或采集质量较好的微量检材时, 可采用kingfisher FL纯化方案。
表3 是Kingfisher FL纯化仪与kingfisher flex工作站运行参数, kingfisher flex工作站最大的优点就是可高通量处理样本并适用于超微量检材的提取, 这对于案件多、特别是微量生物检材多的地区是一个很大的帮助, 自动化的工作站可以减少实验人员的工作量, 有效避免人工操作可能引起的差异及错误, 极大地提高工作效率[4]。
3 结论
在案件任务重、实验人员缺乏的工作环境下, 利用自动化工作站提取生物检材DNA可以有效的避免人为错误并极大的提高工作效率。对于微量脱落细胞检材特别是超微量DNA疑难检材, kingfisher flex纯化方案的综合效果优于kingfisher FL方案, 在检材DNA含量较多时, 两种纯化方案效果相当。
摘要：本文比较了实验室常用的kingfisher flex工作站纯化方案及kingfisher FL纯化方案的检验效果。日常案件检材的检验结果表明运用kingfisher flex方案对微量脱落细胞DNA进行纯化的检测结果优于kingfisher FL方案。实验检材检验结果也提示在微量范围内, kingfisher flex方案优于kingfisher FL方案, 在检材DNA含量较多时, 两种纯化方案效果相当。
关键词：kingfisher flex,kingfisher FL,脱落细胞,微量,DNA纯化
参考文献
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脱落细胞 篇5
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器OLYMPUSBX 51光学显微镜、甲醇固定液, 生理盐水, 瑞-吉氏复合染色液。
1.2 方法
1.2.1 乙醇现场固定法口腔脱落细胞玻片制备
受试者清水漱口, 用一次性木质压舌板轻刮一侧颊黏膜2次, 将2次刮物洗脱在滴有生理盐水的载玻片上, 细胞计数后自然风干, 滴无水乙醇固定, 自然风干, 装盒。在另一侧颊黏膜重复上述步骤。
1.2.2 常规法口腔脱落细胞玻片制备
受试者清水漱口, 一次性的木质压舌板从侧面轻刮2例颊黏膜, 将2次刮取物用2ml缓冲液 (0.01mol/L Tris·HCl、0.1mol/L EDTA、0.02mol/LNaCl) 冲洗到5ml离心管内, 轻轻吹打、混匀后, 1000r/min (离心半径=13cm) 离心10min, 弃去上清液重复1次, 然后将细胞稀释到 (1～2) ×106个/L。取1滴在载玻片上, 风干, 无水乙醇固定1min。
1.2.3 口腔脱落细胞微核试验
用上述2种方法制备的口腔脱落细胞玻片分别于4、8、24、30h后进行Giemsa染色, 高倍镜下读取每例1000个胞膜、核膜完整的颊黏膜上皮细胞, 记录微核数。核判断标准:与主核完全分开, 直径小于主核的1/3, 呈圆形或椭圆形, 边缘光滑, 微核染色和折光率与主核一致, 位于胞质内。选择制片中部胞核胞质完整的转化的淋巴细胞, 每例观察1000个, 计数淋巴细胞微核数, 以千分率表示。
1.2.4 外周血微核试验
采用Wusnhou方法[2], 取受检者外周血1ml于37℃恒温下培养72h, 常规方法收获细胞 (收获前不加秋水仙素) 。用0.075mol/LKCl低渗液37℃下处理3min后, 加入新配制的甲醇∶冰醋酸3∶1固定液1ml, 预固定一二分钟。然后1000r/min离心3min, 去上清液, 加固定液固定二三分钟。滴片, 自然干燥, Giemsa染色。
1.2.5 2种口腔脱落细胞制片方法保存时间的比较
统计学分析3种试验方法, 在不同保存时间的微核率均不呈正态分布, 并且经变量变换亦不能转为正态分布, 故采取秩和检验比较各组中不同保存时间的微核率的差异, 并进行两两比较。
2 结果
2.1 乙醇现场固定法
每侧刮取的细胞数达到600个, 2张玻片的细胞能够满足观察1000个细胞的要求。
2.2 乙醇现场固定
见表1。口腔脱落细胞在0、4、8、24、30h后进行微核试验与常规法口腔脱落细胞微核试验及外周血培养法微核试验的结果比较, 在0h 2种方法的微核率差异无统计学意义 (P>0.05) ;与外周血培育法结果差异也无统计学意义 (P>0.05) 。乙醇现场固定法口腔脱落细胞在30h细胞出现变形, 肿胀, 可观察的细胞减少, 微核率下降 (1.45±0.27) , 与常规法口腔脱落细胞微核率及外周血培养法微核率差异均有统计学意义 (P<0.05) 。而常规法口腔脱落细胞在4h后微核率下降 (2.45±0.26) , 差异无统计学意义 (P>0.05) , 8h微核率明显下降 (1.32±0.28) , 差异有统计学意义 (P<0.05) 。30h后由于多数细胞肿胀变形, 无法进行有效观察。
注:与常规法口腔脱落细胞微核率Oh比较, #P<0.05;与外周血培养法微核率比较, *P<0.05。
3 讨论
微核试验创建于20世纪70年代中期[3,4], 因其快速、简便, 易于操作, 广泛用于职业人群的细胞遗传损害的健康监护及对一些遗传毒性物质的研究中[5]。
在本次研究中, 我们使用了Giemsa染色, 微核试验还常用荧光染色[6], 但是荧光染料保存时间短, 且需要荧光显微镜才能进行观察。一些常用的荧光染料能快速进入活细胞中与DNA结合, 具有遗传毒性。同时, Giemsa染色在微核检测的特异性及清晰程度上与荧光染色类似, 封片以后便于保存。
目前, 常用微核检测方法是人外周血淋巴细胞, 在人群研究中, 血液采集由于其创伤性而难度较大, 而口腔脱落细胞的无创取材增加了人群研究的依从性, 特别对于一些需要重复多次取样的研究尤为突出。在需要到现场进行取样的情况下, 由于现场条件有限, 常规的试验方法无法实施, 特别在夏季炎热气候条件下, 如何延长样本的保存时间显得尤为重要。本研究发现使用无水乙醇现场固定口腔脱落细胞制片的标本在24h后仍然能够进行有效的微核试验, 其微核率与常规检测法及外周血培养法微核试验差异无统计学意义。可见, 利用无水乙醇现场固定口腔脱落细胞可以在现场完成制片工作并保存, 提供了一定的时间回到实验室再进行后续试验, 为现场研究提供了条件。
摘要：目的建立乙醇现场固定口腔脱落细胞进行微核试验的方法。方法利用无水乙醇现场固定口腔脱落细胞, 保存0～30h后进行微核试验与常规口腔脱落细胞微核试验、外周血淋巴细胞微核试验进行比较。结果乙醇现场固定法的口腔脱落细胞在4、8、24h后的微核率与常规口腔脱落细胞微核率和外周淋巴细胞法微核率 (Oh) 差异无统计学意义 (P>0.05) , 而常规法口腔脱落细胞在保存4h后则出现微核率下降, 与外周血培养法的微核率差异有统计学意义 (P<0.05) 。结论无水乙醇现场固定口腔脱落细胞能够有效延长保存时间, 微核试验结果稳定, 适合用于现场采样。
关键词：口腔脱落细胞,无水乙醇固定,微核试验
参考文献
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[5]蒋东方.微核实验在职业人群接触危害评价应用中的研究.中国职业医学, 2000, 27 (4) :43-44.
脱落细胞 篇6
1 资料来源
选择2013-07—2014-04就诊于山西省汾阳医院门诊HR-HPV阳性, 且均有宫颈活检结果的宫颈脱落细胞学标本84例。患者年龄27~62岁, 中位年龄37岁, 均为有性生活妇女, 其中宫颈活检结果为正常12例、CINⅠ20例、CINⅡ20例、CINⅢ20例、SCC12例。用荧光原位杂交技术检测宫颈脱落细胞和宫颈活检组织中h TERC基因扩增情况。
2 实验方法
应用荧光原位杂交技术, 按照参考文献分别检测宫颈脱落细胞和宫颈活检中h TERC基因拷贝数, h TERC/CSP3DNA双色荧光探针 (购自广州安必平科技有限公司) 。h TERC DNA探针作为检测探针, 杂交到3号染色体长臂, 荧光信号为红色 (四甲基罗丹明) ;CSP3DNA作为对照探针, 杂交到3号染色体着丝粒, 荧光信号为绿。正常细胞为单个细胞核中红绿信号各2个, h TERC基因扩增异常细胞为单个细胞核中红信号>2个, 绿信号≥2个。每张片子随机计数100个细胞, 记录阳性信号细胞的个数和信号模式, 绘制ROC曲线, 确定高度鳞状上皮内病变 (CINⅡ/Ⅲ/SCC) 的阳性界值。本实验宫颈脱落细胞中验临界值为6%, 宫颈活检中的临界值为11%, 分别如图1和图2所示。
3 统计学分析
采用SPSS1 6.0统计软件进行分析, 比较各级病变中h TERC基因的扩增的阳性率;采用卡方检验, 检验水准α=0.05;利用Spearman秩相关检验, 分析h TERC的表达与宫颈病变的相关性。
4 实验结果
4.1 宫颈脱落细胞中h TERC基因的检测结果
在84例患者中, 50例h TERC扩增阳性。在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC组所对应的宫颈脱落细胞中h TERC基因扩增的阳性率分别为8.33% (1/12) 、15.00% (3/20) 、80.00% (16/20) 、90.00% (18/20) 、100% (12/12) , 五组间比较差异具有统计学意义 ( (x2=48.858, p<0.001) 。Spearman秩相关检验显示宫颈脱落细胞中h TERC的扩增与宫颈病变的恶性程度呈正相关, rs=0.713, p<0.001) 。
宫颈脱落细胞中h TERC的扩增在预测≥CINⅡ病变中的敏感度、特异度, 分别为92.00%和82.35%.
4.2 宫颈活检组织中h TERC基因的检测结果
在84例患者中, 54例h TERC扩增阳性。在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC组所对应的的宫颈活检中h TERC基因扩增的阳性率分别为16.67% (2/12) 、25.00% (5/20) 、80.00% (16/20) 、95.00% (19/20) 、100% (12/12) , 五组间比较差异具有统计学意义 ( (x2=42.332, p<0.001) 。Spearman秩相关检验显示宫颈脱落细胞中h TERC的扩增与宫颈病变的恶性程度呈正相关, rs=0.671, p<0.001) 。
宫颈活检组织中h TERC预测≥CINⅡ的敏感度、特异度, 分别为87.03%和83.33%.
5 讨论
h TERC与端粒酶逆转录酶、端粒酶结合蛋白等共同参与端粒的组成, 在人类端粒酶RNA基因中, 在长约450个碱基的人端粒酶RNA序列中, 有一段长11个核苷酸区域, 发生在该模板区域的h TERC突变, 将导致端粒酶功能改变, 从而出现染色体异常。h TERC基因由Feng等于1995年首次从肾癌293细胞系e DNA文库中筛选出, 定位于3q26区, 是合成端粒重复序列的模板。其模板序列为5’—CUAACCCUAAC—3’。虽然大量实验证明, HPV感染是宫颈癌的主要致病因素, 甚至95%的癌前病变患者携带HPV癌基因;但在15%~20%HPV持续感染病例中, 只有低于5%发生宫颈癌。只有当病毒持续感染且整合入宿主细胞, 才会发展为宫颈高度鳞状上皮内病变。目前研究显示, h TERC在宫颈病变中的表达与宫颈病变具有一定的相关性。本课题较之前的研究不同, 主要集中在对HR-HPV感染的宫颈脱落细胞和宫颈活检组织中的表达, 通过检测宫颈脱落细胞与宫颈活检中h TERC基因的表达, 发现二者的表达具有很好的一致性, h TERC的表达与宫颈病变的恶性程度呈正相关, 预测宫颈高度上皮内病变的敏感度和特异度均较高。宫颈脱落细胞中h TERC的表达完全可以替代宫颈活检组织中h TERC的表达, 对宫颈病变的活检结果提供一定的预测价值。对于h TERC扩增阳性的宫颈低度病变应密切随访, 对于h TERC扩增阴性的宫颈低度病变可延长随访时间;而对于h TERC扩增阳性的宫颈高度上皮内病变, 要警惕宫颈浸润癌的可能, 并且及时治疗。
关于FISH检测宫颈高度鳞状上皮内病变中h TERC最佳界值的确定, 目前主要有两种方法:一种为均数加减3倍的标准差;另一种为以宫颈活检为≥CINⅡ为金标准, 绘制受试者特征曲线 (ROC曲线) , 我们在这里更推荐后者。该界值的范围国内外报道多在5%~20%, 本研究中应用ROC曲线确立宫颈脱落细胞中和宫颈活检中高度鳞状上皮内病变界值, 分别为6%和11%, 二者的误差考虑为宫颈活检组织中FISH细胞杂交的成功率略高于宫颈脱落细胞。对于不同文献报道中界值的误差考虑, 与样本含量、是否合并HPV的感染及感染类型具有一定的相关性。总之, 宫颈脱落细胞、宫颈活检组织中h TERC基因扩增与宫颈癌前病变和宫颈癌的发生相关, 利用FISH技术检测h TERC的扩增, 可对HR-HPV阳性患者病理诊断和可能的进展进行预测, 避免宫颈癌前病变的诊断不足、宫颈低度病变的过度治疗, 对长期无价值的随访等具有一定的意义。
摘要：通过检测HR-HPV感染的宫颈脱落细胞和宫颈活检中hTERC的表达, 并对实验结果进行比较分析, 探讨其与宫颈病变的相关性。对84例HR-HPV阳性 (宫颈活检结果为正常及慢性炎12例、CINⅠ20例、CINⅡ20例、CINⅢ20例、SCC 12例) 应用荧光原位杂交技术 (FISH检测) , 分别检测患者的宫颈脱落细胞和宫颈活检组织中hTERC的表达;应用受试者工作特征曲线 (ROC曲线) , 分别确立细胞学和组织学中宫颈高度鳞状上皮内病变的最佳界值。实验结果为:①在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC组所对应的宫颈脱落细胞中, hTERC基因扩增的阳性率分别为8.33% (1/12) 、15.00% (3/20) 、80.00% (16/20) 、90.00% (18/20) 、100% (12/12) , 与宫颈病变的恶性程度呈正相关 (rs=0.713, p<0.001) 。②在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC组所对应的的宫颈活检中, hTERC基因扩增的阳性率分别为16.67% (2/12) 、25.00% (5/20) 、80.00% (16/20) 、95.00% (19/20) 、100% (12/12) , 与宫颈病变的恶性程度呈正相关 (rs=0.671, p<0.001) 。③宫颈脱落细胞中hTERC的扩增在预测≥CINⅡ病变中的敏感度、特异度, 分别为92.00%和82.35%;宫颈活检组织中hTERC预测≥CINⅡ的敏感度、特异度, 分别为87.03%和83.33%.实验可以得出:hTERC在HR-HPV阳性宫颈病变患者宫颈脱落细胞和宫颈活检组织中的表达具有一致性, hTERC在预测HR-HPV阳性且宫颈细胞学检查为异常的宫颈病变的病理结果中具有重要的意义。
关键词：hTERC,宫颈,脱落细胞,活检
参考文献
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脱落细胞 篇7
1 材料与方法
1.1 材料
本研究收集2005～2008年胸腹水患者563例, 男346例 (61.5%) , 女217例 (38.6%) , 年龄12～101 (平均62) 岁, 胸水401例 (71.2%) 、腹水162例 (28.8%) 。
1.2 方法
① 取新鲜积液10 ml, 于大试管内, 以2500转/min离心5 min, 弃上清, 取沉渣涂片5～8张, 晾干, 瑞-姬双染8～10 min, 水洗, 晾干, 镜检;②根据需要作细胞染色或染色体、基因、CD系列或细菌染色。
2 结果
2.1 胸、腹水各种疾病分析
① 恶性癌肿发病率最高, 249例 (44.23%) , 腺癌223例 (89.56%) , 未分化癌8例 (3.22%) , 鳞状细胞癌6例 (2.41%) , 恶性淋巴瘤5例 (2.01%) , 白血病3例 (1.21%) , 腺鳞癌2例 (0.81%) , 恶性间皮瘤、恶性纤维组织细胞瘤分别有1例 ( 0.41%) ;②癌肿种类, 胸水肺癌最常见, 其次胃癌、食管癌、肝癌、乳腺癌;腹水肝癌、肠癌、胆管癌、生殖器癌等;③良性疾病有314例, 其中急性炎症29例 (9.24%) , 慢性炎症119例 (37.90%) , 混合炎症51例 (16.25%) , 肝硬化33例 (10.51%) , 结核29例 (9.24%) , 肾衰尿毒症各12例 (3.83%) , 糖尿病3例 (0.96%) 、肝肾综合征2例 (0.64%) , 风心病、全心衰、冠心病、血小板增多症各1例 (0.32%) , 其他16例 (5.10%) 。
2.2 有诊断价值的特殊主细胞
在恶性疾病中, 恶性淋巴瘤细胞在积液中呈弥散增殖和浸润, 为44.67%;其次是癌细胞如鳞癌细胞、腺癌细胞、腺鳞癌细胞、未分化癌细胞分别为32.67%、18.49%、15.50%、7.00%;白血病细胞则较少见, 为4.03%。
在良性疾病中, 急性炎症的主体诊断细胞为中性粒细胞, 在积液中弥散浸润 (79.18%) ;混合感染的主体诊断细胞为中性粒细胞和淋巴细胞 (72.13%) ;慢性炎症的主体诊断细胞为成熟淋巴细胞 (69.82%) ;Sezary综合症的主体诊断细胞为Sezary细胞 (14.36%) ;结核的主体诊断细胞为类上皮细胞、结核结节 (9.20%) ;肝硬化与肾衰、尿毒症缺乏具有较高特异性的诊断细胞。
2.3 背景相关细胞
在恶性疾病中, 成熟淋巴细胞是主要背景细胞成分, 在积液中呈弥散分布, 白血病、腺鳞癌、恶性淋巴瘤、鳞癌、未分化癌、腺癌, 分别为74.17%、65.00%、50.40%、49.83%、44.56%、40.66%。
在良性疾病中, 急性炎症缺乏背景细胞成分;慢性炎症中间皮细胞较多 (15.06%) ;混合炎症中, 组织细胞 (9.02%) 和间皮细胞 (9.67%) 相混杂;Sezary和结核的背景细胞仍以淋巴细胞为主, 分别为74.55%和64.31%;肝硬化的背景细胞主要是淋巴细胞 (42.48%) 和间皮细胞 (37.31%) ;肾衰尿毒症的背景细胞淋巴细胞 (28.67%) 、间皮细胞 (45.45%) 。
心包液标本中恶性肿瘤比率极高, 5例中有4例, 均为腺癌, 恶性细胞多呈弥散分布, 淋巴细胞为主要的背景细胞, 其次是间皮细胞, 另有一例慢性炎症标本。
3 讨论
3.1
浆膜腔积液脱落细胞成分对浆膜腔疾病诊断及鉴别诊断意义极大[1,2,4]。
随着各种高科技技术不断问世, 有人错误地认为高新技术可代替浆膜腔脱落细胞形态学检验诊断。由于上述的误导, 漏诊、错诊屡见不鲜, 严重影响医疗质量, 经观察研究及不断改进检查方法, 证明该项技术诊断准确率明显高于其他传统方法[1,3,4,5]。
3.2
浆膜腔积液脱落细胞病理学可做良性疾病诊断和鉴别诊断作者除了细致认真的阅片, 查找有否恶性肿瘤细胞及特殊异常细胞外, 还要进行脱落细胞分类, 同时做结核抗体、流式细胞仪分析, 通过诊断主细胞及相关背景细胞进行研究, 打破传统观点, 文献报道结核患者淋巴细胞>90%以上, 经过我们观察, 结核患者主要能够找到类上皮细胞及结核结节, 在29例结核中, 只有4例淋巴细胞≥90%, 相反, 在恶性肿瘤中, 淋巴细胞都明显增高, 与结核无法区别[3,4]。急性化脓性炎症以中性粒细胞为主体细胞, 缺乏相关背景细胞, 慢性炎症与混合性感染虽然二者都有淋巴细胞、组织细胞、浆细胞、激活免疫细胞为背景, 但前者以淋巴细胞为主;后者以组织细胞为主。肝硬化与肾衰尿毒症虽然都以淋巴细胞和间皮细胞为主要背景细胞, 但各有特定的组织脱落破碎细胞。
3.3
浆膜腔积液脱落细胞检查的经验体会
3.3.1 标本采集、涂片、染色、检查 ①标本要新鲜, 不超过30 min, 低速离心涂片5～8张, 瑞-姬双染色, 该染色方法较其他方法更能清楚看到脱落细胞的细微结构, 有助于良、恶性细胞诊断和鉴别诊断[1,2,3];②在阅片时, 先用低倍镜仔细耐心查找, 再用油镜认真准确识别全部涂片, 特别是边、尾端, 有时癌细胞极少, 仅在某一张涂片和某一部位能找到稀少有诊断价值的细胞[4,5]。
3.3.2 抓住恶性肿瘤细胞特点不放 ①癌细胞成堆成团相互融合, 界限不清;②核增大, 常大于正常核2倍以上;③核仁增大, n/N>0.25以上, 有畸形;④浆少、偏碱, 有空泡。根据有否黏液空泡、黏液蛋白;或角化珠、角化蛋白;或裸核、镶嵌状结构判断癌细胞种类及分化程度高低。
3.3.3 主体诊断细胞对浆膜腔脱落细胞诊断意义 主体诊断细胞是浆膜腔疾病诊断主要依据。各种疾病都具有不同诊断价值主体细胞。对诊断和鉴别诊断, 及分型、预后都有重要诊断价值。
对主体细胞要仔细观察, 认真识别, 抓住细胞的主要特征及特殊结构进行诊断及鉴别诊断, 如胞浆有黑色素颗粒应考虑黑色素瘤;如瘤细胞呈花瓣状、葡萄状、印戒状, 有黏液空泡, 提示高分化黏液腺癌;对散落或成堆蝌蚪状、纤维状、蛇形、有角化珠, 提示高分化鳞状细胞癌;对成堆成团、浆少、裸核、核呈瓜子形呈镶嵌状结构, 按照体积大小, 提示大细胞癌或小细胞癌的诊断;有大量原、幼淋巴细胞出现, 提示白血病或淋巴肉瘤可能;有大量浆细胞出现, 考虑多发性骨髓瘤;如见到大量间皮细胞, 核大有畸形、上皮样或纤维状、圆形, 核仁大, n/N>0.25, 提示恶性间皮瘤;有大量中性粒细胞, 提示急性化脓性炎症;有大量嗜酸性细胞, 伴少数淋巴细胞, 未见特殊异常细胞, 考虑嗜酸性细胞增多症[4,5,6]。
3.3.4 相关背景细胞对浆膜腔脱落细胞诊断价值 相关背景细胞在某些非典型病例, 在诊断和鉴别诊断有一定的帮助, 必须给予重视[4,5]。
结核病, 除了看到少数类上皮细胞及结核结节外, 背景有大量成熟淋巴细胞相伴;如中性粒细胞增多, 提示结核并发细菌感染的可能;又如肝硬化可有一定数目的肝细胞, 另伴有间皮细胞、少数淋巴细胞;霍奇金淋巴瘤虽然仅见少数主体诊断R-S细胞, 同时可见五花八门的淋巴细胞、嗜酸性细胞、组织细胞为背景。综上所述, 抓住主体诊断细胞不放, 参考相关背景细胞成分很重要, 是提高浆膜腔积液脱落细胞病理学诊断水平的关键[3,4]。
3.3.5 对一些难诊断标本, 要结合端粒酶活性、核仁组成区嗜银蛋白 (AgNOR) 、染色体检查、流式细胞仪分析 (FCM) 、荧光染色、免疫组化、电镜检查、生化检查等高新技术, 及特殊细菌染色进行诊断和鉴别诊断。
参考文献
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脱落细胞 篇8
1.1 一般资料
本文收集受检者31292例中, 其中男20920, 女10372, 年龄18～92 (平均48) 岁, 经其它多种方法确诊为肺癌者1783例, 而癌痰细胞学检查阳性者为1655例, 痰细胞学阳性诊断率为92.8%。
1.2 检查方法
嘱患者嗽口并做深呼吸几次, 随后咯出积于喉及鼻腔的陈腐分泌物, 再用力从肺部深处咳出4～5口痰, 置于腊盒内, 立即送检。再用竹签挑取带有血丝的粘液、乳白色痰丝、或透明蛋清样有弹力状痰1mL左右, 置于玻片上, 然后用竹签将唾液或多余痰液刮去, 剩余痰约0.2mL (黄豆粒大小) , 用竹签拉成1.2cm×3cm, 厚约1～2mm的痰膜, 用等量酒精950ml与乙醚固定15～20min, 行HE染色, 少数病例做巴氏染色及Saccamanna浓集痰法。
2 结果 (表1)
在15150例中, 经他法确诊为肺癌者965例, 痰细胞学检查阳性者830例, 其发生部位与痰细胞检出例数的关系如表2。
3 讨论
本文检查阳性率为92.8%, 与国内外先进水平是一致的。我们认为如下几方面是提高痰病理细胞学诊断的关键[1～3]。 (1) 痰标本必须合格, 即切实是从肺内深处咳出来的。 (2) 痰标本必须新鲜, 否则因痰内酶较多, 使细胞自溶分解影响阳性率。 (3) 必须仔细准确挑取痰的有效部分, 至少制片3张。 (4) 血丝粘痰、乳白色痰丝、透明蛋清样有弹力痰, 癌细胞检出率最高;灰黑色痰、泡沫痰、口水很少检出癌细胞。鲜血痰如伴有淋巴增多, 多提示肺不张或肺结核出血的可能。早期肺癌, 肺泡细胞癌咳痰、咳血为本病初发症状。有1/3病例咳血为肺癌唯一初发症状, 而97%以上病例伴有血丝痰。 (5) 涂片厚薄适宜, 过厚影响观察, 过薄阳性低。 (6) 我们选用快速HE法, 对粘稠较厚痰标本, 具有很强染色能力, 细胞结构清晰, 癌细胞与非癌细胞经染色后有明显着色差异。 (7) 精心观察、反复查找、准确报告。例如癌细胞易引起出血和凝固坏死, 其间杂有零乱蓝色棕色碎片, 提示癌阳性背景。如涂片有大量炎症细胞及尘埃细胞、无中层、基底细胞、柱状上皮等深层细胞, 提示痰留取不合格所致。在辨认细胞时要抓住主要特征[4～6]。如鳞癌胞浆偏酸, 形态多形性, 有角化珠;腺癌, 成堆成团核偏位, 胞浆有空泡, 常成桑椹样、花瓣状、戒指样结构等特点;未分化癌细胞呈浆少、裸核、镶嵌结构[7～8]。
本文从表2看出肺癌右肺上叶者较下叶者癌细胞检出阳性率高;我们认为这主要是肺叶距支气管较近, 癌细胞易于咳出之故;但中心型肺癌已发展到晚期, 癌肿与周围组织有广范性粘连, 特别是癌肿周围有较厚纤维性假气膜, 堵塞支气管口, 此时痰细胞检出很困难。本文1例中心型肺癌, 癌肿距支气管只有3cm, 肿物大小为9.0cm×8.0cm, 但由于癌肿与心包明显粘连, 被较厚的结缔组织包裹, 压迫支气管出口, 虽经10次痰检都未得到阳性结果。
癌肿组织类型对痰细胞检出的影响, 从表1可见, 鳞癌较其它类型肺癌检出率高, 这可能是此类癌肿多起源于支气管, 癌细胞容易脱落加之这种癌细胞较为典型, 容易辨认而检出率高;其次为未分化癌 (特别小细胞未分化癌) ;腺癌检出率较低且易误诊。本文中有4例认为腺癌细胞, 经反复追访检查表明, 误诊原因系把异型增生之肺泡上皮误认为是腺癌细胞。肺泡细胞癌检出率一般较腺癌低, 本文有26例, 检出率低的原因, 我们认为与其组织特点有关;癌细胞立方形或矮柱状排列于肺泡壁上, 有的脱落到肺泡壁内, 当病人咳痰时癌细胞可随稀薄蛋清样痰咳出。
文献记载癌细胞的检查次数与癌细胞的检出阳性率成正比。我们认为连续2次检出率即可达到85%以上。痰的癌细胞有人错误的认为只有晚期才能查到。本文有1例曾经在全国各地经CT、气管镜检查, 均未明确诊断, 但经我们3次查痰都找到了典型的未分化癌细胞, 最后手术切除, 病理证实小细胞肺癌[4～8]。因此, 我们认为痰的脱落细胞病理学检查, 对咳嗽、咳血为本病第一初发症状的病例, 虽然其它检查阴性, 而痰的脱落细胞检查却有可能明确诊断。而且对某些肺癌如肺泡细胞癌、鳞癌等是必不可少的早期诊断手段之一。
摘要：目的提高肺癌痰脱落细胞检出准确率。方法通过31292例痰标本脱落细胞检查, 以及多种影响因素观察研究。结果肺癌痰脱落细胞准确率, 与痰标本的留取、精选有效部分涂片、应用HE染色、认真仔细查找, 准确熟练辩认等环节密切相关, 对肺癌细胞病理学分型有一定帮助。结论痰脱落细胞检验诊断其方法简单易行, 准确可靠, 经济适用, 弥补CT、MRI、X线等其它方法不足, 对肺癌早期诊断早期治疗, 有重要诊断价值。
关键词：肺癌,脱落细胞病理学,结果分析
参考文献
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脱落细胞 篇9
质控包括质量保证和质量控制。质量保证有人员、设施和环境、设备等方面的硬件保证。质量控制包括标本质量的控制和诊断质量等方面的质量控制。
1 全程化质量控制脱落细胞病理学检验的必要性
由于脱落细胞学的诊断全过程中, 每一个环节都存在着可造成诊断误差的因素, 而且诊断取决于诊断医生的主观经验与观察, 并非依靠数据化的科学仪器, 因此, 应严格进行规范化、标准化操作, 把好每个环节的质量关, 将质量控制贯穿检验全过程。脱落细胞学诊断报告发出后, 更应建立对病人的随防制度, 加强与临床医师的联系, 并与临床医生定期进行病例分析与讨论, 及时反馈诊断信息与临床诊断的符合率和准确率。
2 全程化质量控制脱落细胞病理学检验的优越性
实践表明, 脱落细胞学检验在下列情况时容易发生误诊:标本采集是脱落细胞学检验的第一步, 取材的优劣直接关系到检查结果, 取材不标准, 可出现假阴性;涂片的质量是保证正确诊断的重要条件之一, 涂片厚薄不均, 容易漏诊;标本不新鲜, 固定不及时, 细胞自溶或腐败;编号错误, 张冠李戴、造成诊断错误;标本污染;染色不佳, 细胞结构不清晰;观察时不仔细, 经验不足, 造成遗漏。
通过在兰州市第一人民医院实施全程化质量控制脱落细胞学检验, 发现杜绝了标本交叉污染, 为检验准确率的提升保证了前提条件。检出阳性率显著提升, 漏诊率降低。脱落细胞病理学检验实施全程化质量控制后, 人员专业素养得以提升, 操作规程进一步优化完善, 全程化质量管理意识明显增强, 有效杜绝了误诊及差错, 减少了假阴性及漏诊;制片质量优良率达95%及以上, 多次室内和室间质控均为优良。
3 如何实施全程化质量控制脱落细胞病理学检验
3.1 确保人、材、物达标, 为全程化质量管理奠定基础
3.1.1 确保环境条件达标
设置相应的功能区, 包括标本接受、存放、取材、制片、诊断、档案储存区等, 并配备紫外线灯等消毒设备、紧急喷淋装置及洗眼器等。
3.1.2 科学有效管理仪器
仪器设备是进行所有医疗工作的基础, 加强设备维护与保养至关重要, 要落实责任制, 由专人负责管理与维护保养, 确保仪器设备处于最佳状态, 为顺利开展诊疗工作奠定硬件基础。
3.1.3 保障试剂的质量管理
脱落细胞病理学检查使用的试剂种类繁多, 要对试剂进行合理分类, 区分管理, 易燃、易爆、强腐蚀性等危险品按有关规定分别设库、单独贮存, 并规范登记管理。同时, 要加强采购与配置管理, 通过合法渠道, 采购有注册资质、质量过关的试剂原料, 并按操作标准进行试剂配置, 防止出现固定不好, 染色不佳, 制片不良等情况。
3.1.4 严格实行人员资格准入制度
所有进行细胞学初筛及诊断的人员都须有医学院校临床专业背景, 重视岗前培训的必要性和重要性, 开展不低于6个月的专业培训, 经考核合格后才能进行细胞学的初筛与阅片工作。
3.2 强化检验过程管理, 建立健全工作制度
1) 脱落细胞病理学检验工作环节有标本收集、标本接收、制片、阅片、报告打印、报告审核、报告发出、病人随诊和归档等环节。每个环节都应制定严格的规章制度并严格执行。标本采集一般是在临床或门诊科室进行, 病理细胞学专业人员有责任与相关科室沟通, 并对标本的采集问题提出建议, 以求保证采集标本的质量, 在接收标本与编号时严格进行查对制度, 防止责任差错事故, 以免编号错误或张冠李戴。
2) 对脱落细胞学和组织学结果进行对照, 凡是诊断不一致的病例要组织全科人员进行反复分析、讨论、学习, 总结经验, 查漏补缺, 形成制度, 常态化坚持。必要时, 请外院专家会诊或开展培训。
3) 实验室要制定员工能力评估体系, 每年评估员工落实全程化质量控制管理的情况。对新进员工, 在最初6个月至少进行2次能力评估。
4) 建立年度统计报告, 将病例数、敏感度、假阴性或假阳性率、制片优良率、诊断准确率、诊断符合率、阳性检出率等纳入统计报告范围, 并与前一年度数据进行比较, 客观制定各项质量指标, 客观评价诊断结果, 不断总结经验和教训, 及时改进工作。
3.3 严格执行技术规程, 做好标本质量控制
3.3.1 标本采集
采集的方法应简便, 使受检者痛苦小, 易配合, 不致引起并发症或促进病变传播。尽可能从病变区直接采集细胞, 对于内脏肿块的脱落细胞学检查, 必要时可与仪器定位结合, 在B超、CT或X线透视引导下抽取胸腹水或细针吸取细胞活检。
保持采集的标本新鲜, 避免细胞自溶或腐败。采集标本时要避免污染, 减少干扰物混入, 如尿液采集采用患者晨起中段尿, 女患者还应避免月经期留取尿标本。
3.3.2 标本接收
严格细致做好查对和交接环节工作, 若对申请单填写的内容或标本有疑问, 应及时查明原因, 对申请单填写的缺项和漏项应督促送检方补充完整, 核对无误后方可接收登记。记录好标本接受日期和时间, 要求交接双方人员签字。所有接受的标本应做好病理编号, 对标本、容器和申请单增加病理标识。对标记不清和不符合要求的标本拒收并明确记录, 记录内容包括标本类型、送达时间、拒收理由和记录时间。
3.3.3 涂片制作
良好的涂片质量是保证正确诊断的重要条件之一, 为防止漏诊, 同一标本至少一次做两张涂片。涂片时要动作轻巧, 避免人为损伤脱落细胞。涂片要厚薄适宜, 力求均匀, 涂片太厚, 细胞容易重叠;涂片太薄, 片中细胞数量过少, 易造成漏诊。尿、胸、腹水等液体标本, 要先行离心, 倾去其上清液, 取其沉淀物涂片。
3.3.4 固定与染色
固定的技术在于保持细胞形态与生活状态时相似, 防止细胞自溶或细菌性腐败, 保持细胞内蛋白质、糖等成份以便着色, 常用固定液为乙醚乙醇固定液和95%乙醇固定液, 常用固定方法有带湿固定法;滴加法;还可用干燥固定法。一般固定时间为15~30min;对粘液较多的样品, 固定时间可适当延长。
脱落细胞涂片常采用HE染色和巴氏染色。HE染色要红蓝清楚, 细胞核呈蓝色、细胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色, 钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。巴氏染色色彩多样而鲜艳, 细胞核结构清晰, 细胞核呈深蓝色, 核仁呈红色, 胞质透明性好, 颗粒分明;底层及表层网状核细胞质均染成蓝绿色, 表层核固缩细胞的胞质染成淡红色或淡蓝色。无论HE染色还是巴氏染色, 其中苏木精染色是最为重要的环节。染色过深, 难以观察其结构;太浅又难以作出正确判断。因此对染色液的质量和染色时间应严格掌握, 予以保证和规范。在固定染色过程中防止细胞污染, 固定液、染色液定期过滤、更换。如有疑问时可进行反复多次制片、检查, 以确保诊断无误。
3.4 诊断的质量控制
实行分级诊断制度, 三级阅片制度, 对病理细胞学诊断进行质量控制。阳性报告要由主治医师或五年以上医师签发, 并实行双签制度;疑难病例由多人讨论或高级医师签发。不能确定诊断时, 可提请再次送检或请外院会审, 必要时进一步做活组织检查。执行细胞病理学复核制度和疑难病例讨论制度, 每月至少1次, 参加省读片会, 并做好相应记录。
3.5 室内室间质控联系
室内控制包括自查和互查, 自查即当日自我检查;互查则为多名专业质控小组成员抽查当日10%~30%的病例复查, 并进行室内质控记录备查, 每月对病例进行总结分析, 对复查有较大漏诊、有重要疑问、报告病例与总体偏离较大的初筛人员实行一定的措施加以改进, 如减少工作量或进行培训。
室间制控则定期参加质控中心采用的一系列办法连续地、客观地评价各实验室的实验结果, 并发现室内质控不易发现的不准确性, 了解各实验室之间结果的差异, 并帮助校正, 使具有可比性。
参考文献
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