痰培养法

痰培养法（精选7篇）

痰培养法 篇1

为评价痰标本直接厚涂片法和改良罗氏培养法检测抗酸杆菌对肺结核的诊断价值, 笔者对377例肺结核患者同时应用这两种方法进行抗酸杆菌检测。现将结果报道如下:

1 材料与方法

1.1 标本来源377例痰标本均为我所2011年住院患者, 临床诊断为肺结核。

1.2 实验室检测方法

(1) 痰标本直接厚涂片法:采用国际防痨协会及中国防痨协会推荐的萋尔-尼尔逊抗酸染色法, 镜检结果按照结核病细菌学检验规程的标准报告[1], 抗酸染色试剂采用珠海贝索生物技术有限公司试剂。 (2) 改良罗氏培养法:培养基采用珠海贝索生物技术有限公司酸性罗氏培养管。

1.3 统计学方法

计数资料计算百分率, 采用χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果与讨论

痰标本直接厚涂片法抗酸染色镜检, 阳性1 1 3例 (30.0%) ;改良罗氏培养法镜检, 阳性168例 (44.6%) ;两组比较差异有高度统计学意义 (χ2=17.16, P<0.01) 。改良罗氏培养法可以提高抗酸杆菌阳性检出率, 与施鸿生等的报道一致[2]。两种方法阳性检出率均高于王莉等[3]的报道, 可能与本组病例为住院病人, 留取的痰标本多为夜间及清晨痰有关。

结核分枝杆菌培养不但对肺结核诊断具有决定性意义, 培养阳性的病例还可进一步做药敏试验, 进行耐药监测。我国耐药结核病疫情非常严重, 是27个耐药结核病高负担国家之一, 耐多药患者数量位居全球第二位, 作为中-盖项目实施单位, 改良罗氏培养法及比例法药敏试验还可验证涂阳病例的基因芯片耐药情况, 进行当地的耐药情况监测。但是由于肺结核病强调早期诊断、早期治疗, 改良罗氏培养法虽然阳性率高, 但周期长, 所以痰涂片检查作为现代防痨策略的重要组成部分, 仍将作为检查结核杆菌的首选方法。痰涂片阳性率与患者排菌量明显相关, 阳性涂片时痰液中菌量必须大于1×104/ml, 所以提高痰涂片阳性率, 痰标本质量是关键[4]。据施鸿生等[2]报道, 患者的清晨痰及夜间痰均为合格的痰标本, 而即时痰阳性率较低。为提高阳性率, 应对病人加强宣教, 指导患者配合留取合格的痰标本, 对于细胞数小于1 0个/H P的稀水痰, 应嘱病人重新留取。同时, 按照《痰涂片镜检标准操作及质量保证手册》[5]保证痰涂片镜检的质量。

痰标本直接厚涂片法镜检可以早期发现和诊断肺结核, 提高痰涂片的阳性率, 但应重视留痰的质量和保证镜检质量;而培养法可以提高肺结核的确诊率, 并进行耐药监测。所以临床医生应重视痰标本的留取质量, 确保痰涂片镜检质量, 对进一步提高肺结核病的实验室诊断水平具有重要临床意义。

参考文献

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[2]施鸿生, 王鹏飞, 陆镪, 等.传染性肺结核病例不同检出和诊断方法评价[J].中华结核和呼吸杂志, 1997, 20 (5) :301-304.

[3]王莉, 杨振华, 姜宏.痰标本直接涂片镜检与培养法联合检测对肺结核的诊断价值[J].中国社区医师 (医学专业) , 2008, 10 (11) :92.

[4]李国刚, 董彬, 李俊娟, 等, 不同性状、不同留置时间痰标本涂片抗酸杆菌检出率比较[J].实用预防医学, 2009, 16 (5) :1589-1590.

[5]中国预防控制中心.中国结核病防治规划痰涂片镜检标准操作及质量保证手册[M].北京:中国协和医科大学出版社, 2009.

痰培养法 篇2

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年1月-2014年2月周口市传染病医院以及国家耐药基线调查监测点扶沟筛查出的痰培养阳性患者的检测结果。

1.2 比例法药敏试验

对分离培养出的菌株同时进行结核分枝杆菌菌种和异烟肼药敏试验, 菌种鉴定使用对硝基苯甲酸 (PNB) 鉴别培养基, 异烟肼药敏试验 (0.2μg/m L) 为比例法, 以上试验均按照《结核病诊断实验室检验规程》进行。

1.3 熔解曲线法检测INH耐药

按照熔解曲线法结核分枝杆菌异烟肼耐药突变检测试剂盒 (批号:14060401, 厦门致善生物科技有限公司) 说明书操作。

1.4 质量控制

对熔解曲线法与比例法药敏试验检测结果不一致的样本进行测序验证, 测序由河南省疾病控制中心结核病参比室所协助完成。采用SPSS 17.0软件对结果进行数据分析。

2 结果

2.1 比例法药敏检出情况

共收集涂阳标本352例, 重症涂阴痰标本161例进行分离培养和菌种鉴定。352例涂阳标本去除污染、培阴和非结核分枝杆菌6例, 获得346株菌株;161例涂阴标本34例培养阳性, 剔除污染1例, 获得33株菌株。经比例法药敏试验验证分离出的379株结核分枝杆菌, 284株异烟肼敏感, 95株异烟肼耐药。

2.2 熔解曲线法检出情况

对379例培养阳性的痰标本经熔解曲线法检测, 其中91株为异烟肼耐药株, 288株为异烟肼敏感菌株。熔解曲线法检测典型结果见图1。

注:图中A、B、C、D分别为四个检测通道的典型熔解曲线结果。A图1:510 CAG→CAC突变型, 2:511 CTG→CCG突变型, 3:野生型;B图1:516 GAC→TAC突变型, 2:516 GAC→GTC突变型, 3:野生型;C图中1:526 CAC→TAC突变型, 2:523GGG→GAG突变型, 3:野生型;D图1:531 TCG→TGG突变型, 2:531TCG→TTG突变型, 3:野生型。图中纵坐标“d F/d T”表示荧光强度对温度的负倒数

2.3 灵敏度和特异度 (见表1)

2.4

测序验证 (见表2)

3 讨论

近年来, 随着理化技术与生物技术的发展, 不断涌现出以分子生物学为基础的耐药结核分枝杆菌快速检测手段, 为快速筛选耐药结核病打开了广阔的前景[3,4]。结核分枝杆菌分子耐药主要通过检测结核分枝杆菌的基因位点是否突变实现, 突变能引起INH耐药的基因有Kat G、inh A、achp C、ndh、Kas, 其中Kat G和inh A为两个主要的结核杆菌耐INH的突变方式[5]。DNA微阵列芯片技术晶芯 (中国, 博奥) [6]和线性探针膜杂交技术Geno Type MTBDRplus assay (德国, HAINS) [7], 这两种方法均只检测Kat G和inh A位点, 而荧光PCR探针熔解曲线法在以上基础上又增加了ahp C启动子区 (-44~-30以及-15~3位点) [8], 因此也获得更高的灵敏度。该研究中出现有3例假阴性结果 (熔解曲线法敏感比例法耐药, 测序为突变型) , 分析原因可能为菌株存在杂合子 (同时存在敏感与耐药菌株) 。试验中也有部分杂合子被熔解曲线法检测出突变, 说明熔解曲线法检测杂合子的灵敏度与敏感耐药菌株所占比例有关, 但也可能受仪器的检测精度影响。

该研究结果表明, 熔解曲线法可以直接用痰标本3 h左右获得药敏结果, 为临床早期抗结核化疗合理用药缩短了时间, 适用于耐多药结核病的快速筛查。且与线性探针以及Gene expert需要昂贵的专用设备不同, 熔解曲线法用现有的实时荧光定量PCR分析仪就能操作, 不需另外购买设备, 适合在市级医院推广。

摘要：目的 评价荧光定量PCR探针熔解曲线法快速筛选痰中耐异烟肼结核分枝杆菌菌株的检测效能。方法 筛选收集培养阳性肺结核患者的痰标本, 对鉴定为结核分枝杆菌的痰标本同时使用比例法药敏试验和PCR探针熔解曲线法进行耐异烟肼检测。结果 与比例法比较, 熔解曲线法检测异烟肼灵敏度为86.31% (82/95) , 特异性为96.83% (275/284) , 二者一致率为94.20% (357/379) 。结论 荧光PCR探针熔解曲线法可快速检测培阳痰标本中的结核分枝杆菌耐异烟肼突变基因, 适用基础结核病实验室对耐异烟肼结核病患者的快速筛查。

关键词：痰,结核分枝杆菌,熔解曲线法,异烟肼

参考文献

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[2]全国第五次结核病流行病学抽样调查技术指导组, 全国第五次结核病流行病学抽样调查办公室.2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告[J].中国防痨杂志, 2012, 34 (8) :485-508.

[3]wittwer ct, kusukawa N.Tietz textbook of clinical chemistry and molecular diagnostics[J].Nucleic acid technique, 2005, 37:1407-1449.

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[5]Kaufmann SE, Rubin E.Handbook of Tuberculosi:Molecular Biology and Biochemistry[J].Weinheim:Wiley-VCH, 2008.

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[7]Hain Lifescience.Geno Type MTBDRplus-Your Test System for a Fast and Reliable Way to detect MDR-TB[EB/OL].http://www.hain-lifescience.de/en/products/microbiology/mycobacteria/genotype-mtbdrplus.html

痰培养法 篇3

1 仪器与试药

1.1 仪器:

安捷伦1100高效液相色谱仪;安捷伦1100紫外检测器;Alliance柱温箱;奥豪斯Explorer专业型分析天平 (奥豪斯仪器上海有限公司) ;3L) (LM-C300超声波清洗器 (武汉朗玛瑞特仪器有限公司) ;德国IKA RV10旋转蒸发仪 (上海楚柏实验室设备有限公司) ;Histoon Lab S-5实验室超纯器 (科尔顿 (中国) 有限公司) ;BOC EDWARDS真空泵 (北京科宇翔贸易有限公司) ;HH-4数显电子恒温水浴锅 (江苏省金坛市宏华仪器厂) 。

1.2 色谱柱:安捷伦C18色谱柱 (218 mm×4.6mm, 5μm) 。

1.3 对照品:柚皮苷购自中国药品生物制品检定所。

1.4 试剂:甲醇、乙腈为色谱纯;水为纯化水, 其它试剂均为分析纯。

1.5 试药:橘红痰咳液 (批号:101001, 101002, 101003) 。

2 测定方法确定

2.1 色谱条件

依据查阅文献及考查的结果[1,2,3,4], 确定色谱条件如下。流动相:甲醇-醋酸-水 (38:0.5:62) , 检测波长:283nm, 流速:1.0m·min-1。柱温:30℃。理论板数按柚皮苷峰计算应不得低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取柚皮苷对照品适量, 置容量瓶中, 加甲醇制成每1m L含0.02mg的溶液, 即得。

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 萃取液的选择

取供试品20ml, 加入10ml水稀释, 分别采用乙醚、醋酸乙酯萃取4次, 每次30ml, 蒸干萃取液, 残渣用5ml甲醇溶解, 过滤, 取续滤液, 即得。结果含量:醋酸乙酯含量高, 所以采用醋酸乙酯。

2.3.2 萃取次数的选择

取供试品20ml, 加入10ml水稀释, 分别采用醋酸乙酯萃取2、3、4次, 每次30ml, 蒸干萃取液, 残渣用5ml甲醇溶解, 过滤, 取续滤液, 即得。三种萃取次数结果无明显差异, 为保证提取完全并缩短处理时间, 采用醋酸乙酯萃取3次。

2.3.3 供试品溶液的制备

取供试品20ml, 加入10ml水稀释, 分别采用醋酸乙酯萃取3次, 每次30ml, 合并醋酸乙酯液, 蒸干醋酸乙酯层, 残渣用5ml甲醇溶解, 过滤, 取续滤液, 即得。

2.4 专属性试验

依照处方取除化橘红以外的药材, 按样品制备工艺制成阴性对照样品, 照2.3.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液, 依上述方法测定, 结果在柚皮苷出峰处阴性液无色谱峰, 结果阴性试验没有干扰, 表明本方法专属性良好。

2.5 精密度试验

精密称取柚皮苷对照品适量, 加甲醇使溶解, 制成浓度为0.02mg·m L-1的供试品溶液。照上述色谱条件, 精密吸取10μl, 连续进样6次, 记录峰面积。结果, RSD=0.76%, 表明本方法精密度良好。

2.6 对照品的线性考察

精密称取柚皮苷对照品1.6mg, 置25ml容量瓶中, 加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 分别精密吸取1.5、2.5、3.0、3.5、4.5m L, 置于5m L量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL, 注人液相色谱仪, 依照2.1项下的色谱条件测定, 记录色谱峰。以峰面积 (Y) 为纵坐标, 对照品进样量 (X) 为横坐标, 绘制标准曲线, 计算回归方程。结果表明, 柚皮苷在0.0192~0.0576mg·m L-1范围内呈良好的线性关系。

2.7 重现性试验

称取同一批的橘红痰咳液样品6份, 按测定方法项下的方法制备供试品溶液, 测定含量, 并计算样品的RSD值, 结果RSD为0.81%, 结果表明此方法的重现性良好。

2.8 准确度试验

精密称取已知含量的样品6份, 分别加入一定量的柚皮苷对照品, 上述方法进行测定, 计算回收率, 平均回收率为99.3%, RSD=0.56%。结果表明此方法的回收率良好。

2.9 样品稳定性试验

取同一批橘红痰咳液样品, 按2.3项下的供试品制备方法制备供试品, 将供试品置室温下放置, 分别于第0、2、4、6、8、10、12小时, 精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪中, 记录色谱图。测定橘红痰咳液中柚皮苷的RSD=0.79%。结果表明供试品12小时内稳定。

2.1 0 样品含量测定

依照上述含量测定方法, 测定橘红痰咳液三批样品中柚皮苷的含量, 结果三批样品的含量分别为0.321、0.310、0.309mg·支-1。

3 讨论

3.1 流动相的选择

分别考察乙腈-水-磷酸溶液 (80∶420:0.2) , 乙腈-水-磷酸溶液 (20∶80:0.2) , 甲醇-醋酸-水 (38:0.5:62) , 甲醇-水 (20∶80) 不同比例的流动相, 结果以甲醇-醋酸-水 (38:0.5:62) 为流动相为流动相, 供试品各峰分离效果最好, 故选用甲醇-醋酸-水 (38:0.5:62) 为流动相为流动相。

3.2 检测波长的选择

制备柚皮苷对照品稀释液照紫外-可见分光光度法 (中国药典2010版一部附录ⅤA) , 于190~900nm波长范围内进行全波长光谱扫描, 记录吸收光谱。在283nm处有最大吸收峰, 故选用283nm为检测波长[5]。

本实验表明此方法可用于橘红痰咳液中柚皮苷的含量测定。橘红痰咳液中柚皮苷的含量为不低于0.30mg·支-1。

摘要：建立反相高效液相色谱法测定橘红痰咳液中柚皮苷的含量。方法:采用安捷伦C18色谱柱 (218 mm×4.6mm, 5μm) , 甲醇-醋酸-水 (38:0.5:62) , 检测波长为283nm, 流速为1.0ml/min, 柱温为30℃。柚皮苷在0.0192～0.0576mg.mL-1范围内呈良好的线性关系 (r=0.99996) 。柚皮苷平均回收率分别为99.3%。结论:本法简便、准确, 可用于橘红痰咳液中柚皮苷的含量测定。

关键词：橘红痰咳液,含量,测定

参考文献

[1]陈新, 柯康保.HPLC法测定橘红痰咳液中柚皮柑的含量[J].中药材, 2000, 23 (8) :489

[2]徐海燕, 金艺, 张亿霞等.HPLC同时测定胃力片中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量[J].中成药, 2010, 32 (8) :1355-1357.

[3]张筱芳, 沈敏.HPLC法测定壮骨胶囊中柚皮苷的含量[J].西北药学杂志, 2010, 25 (6) :411-412.

[4]赵庆春, 闵鹏, 史国兵等.HPLC同时测定常山胡柚汁中柚皮芸香苷、柚皮苷和新橙皮苷的含量[J].沈阳药科大学学报, 2010, 27 (9) :737-740.

老年患者622例痰培养结果分析 篇4

1 材料与方法

1.1 标本来源

选取2009年1月—2010年12月我院内科和外科病区疑为呼吸道感染的老年患者,嘱其漱口后,咳深部痰送检。

1.2 方法

按照《全国临床检验操作规程》对痰标本进行检测。将痰标本同时分别接种到血琼脂平板,巧克力琼脂平板及麦康凯琼脂平板上,经35 ℃,24～48 h培养,选择纯培养及优势生长的菌株进行分纯。采用法国生物梅里埃公司VITEK2鉴定系统进行细菌鉴定。真菌培养分离采用科玛嘉假丝酵母菌显色培养基,鉴定采用法国生物梅里埃公司AP 120 CAUX鉴定条鉴定。

1.3 药敏试验

采用英国Oxoid公司抗菌药物药敏纸片,用K-B药敏纸片扩散法进行药物敏感试验。药敏结果判断标准按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)2002年版临床标准进行结果判断。

1.4 统计与处理

应用SPSS 10.0软件对资料进行统计分析,多次培养阳性者,仅录入首次资料。

1.5 质量控制

室内质控选取中国生物制品检定所标准菌株,大肠埃希菌ATCC25922,铜绿假单胞菌ATCC27853,金黄色葡萄球菌ATCC25923,白色假丝酵母菌ATCC6093。

2 结果

2.1 菌群分布

从送检的622例痰标本中分离出197份阳性标本,检出202株病原菌,阳性率31.7%;革兰阴性杆菌94株,占46.5%;革兰阳性球菌21株,占10.4%;真菌87株,占43.1%。患者年龄60～98岁,平均79岁;其中男105例,女92例。202株病原菌分布及构成比见表1。

2.2 药敏结果

老年呼吸道感染患者的痰标本分离出的202株病原菌的药敏结果见表2、表3。

3 讨论

老年人生理性防御功制减退,且多合并各种严重的基础疾病,因而老年人更容易发生感染性疾病,尤其是占第1位的呼吸系统感染,多为多重感染和复杂耐药菌株感染。本组所选病例均为>60岁的老年患者,多数为我院内科及老年护理院的患者,住院时间长,合并有多种基础疾病,长期使用广谱抗菌药物,这些都是引起肺部感染和肺部真菌感染的常见原因[1]。本资料统计显示,我院老年肺部感染中革兰阴性杆菌占46.5%,革兰阳性球菌占10.4%,真菌感染占43.1%,这与有些报道不一致[2,3]。在我院革兰阴性杆菌感染的优势已明显减弱,革兰阳性球菌引起的感染明显减少,真菌的感染比率明显增加。革兰阴性杆菌感染中以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、鲍氏不动杆菌、鲁氏不动杆菌最常见,革兰阳性球菌以金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌最常见,真菌以白色假丝酵母菌最常见。在分离出的病原菌中,白色假丝酵母菌位于第1位,占40.6%。这些除与上述原因有关外,也与我院患者>90.00%来自农村,就医条件差、无法开展药敏试验、全凭医师经验用药等原因有关;多数患者经验用药效果不佳或久治不愈才送至我院;加上近年来新型抗菌药物在临床上的广泛使用,从而导致耐药菌株的产生尤其是多药耐药和高度耐药菌株的出现。

从细菌的药敏结果可以看出,所有的革兰阴性杆菌对亚胺培南的敏感率均>90.0%,主要原因是碳青霉烯类对大多数β-内酰胺酶高度稳定,与青霉素结合蛋白(PBPS)亲和力强,并能有效地渗透入细菌外膜进入周质间隙,具有杀菌活性强大等特点,因此可以作为早期治疗革兰阴性杆菌感染,是重症感染和复杂性感染经验性用药的首选药物[4]。肺炎克雷伯菌对阿米卡星、2～4代头孢、环丙沙星、庆大霉素、哌拉西林(他唑巴坦)、磺胺甲恶唑(甲氧苄胺)、妥布霉素都有较好的敏感性,对亚胺培南敏感率为100.00%,氧苄西林全部耐药,哌拉西林敏感性较低。大肠埃希菌的耐药现象比较严重,只有亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林(他唑巴坦)敏感性较好,这与近年来临床大量使用β-内酰胺类药物有关。鲍氏不动杆菌只有亚胺培南敏感率>90.00%,其余均在30.0%～70.0%。鲁氏不动杆菌对阿米卡星、氧苄西林(舒巴坦)、头孢三嗪、头孢他啶、头孢吡肟、庆大霉素、亚胺培南、哌拉西林、磺胺甲恶唑(甲氧苄啶)、妥布霉素的敏感率均达100.0%。革兰阳性球菌的耐药现象很严重,金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌都只有利福平和万古霉素的敏感率达100.0%,金黄色葡萄球菌对磺胺甲恶唑(甲氧苄啶)的敏感率为50.0%,对克拉霉素为33.33%,溶血葡萄球菌对磺胺甲恶唑(甲氧苄啶)、四环素敏感率为60.0%,其他所选药物均为零,这与以前的报道一致[5],这与大量头孢菌素进入临床并滥用有关。

综上所述,白色假丝酵母菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、鲍氏不动杆菌和鲁氏不动杆菌是引起我院老年患者肺部感染的常见病原菌,革兰阴性杆菌对常用的抗菌药物存在不同程度的耐药;革兰阳性球菌高度耐药,由于激素及大量广谱抗菌药物的不合理使用,破坏了呼吸道的正常菌群,增加了真菌的感染机会,本研究真菌的分离率达43.1%,应引起高度重视,引起老年患者呼吸道感染的病原菌分布及药敏情况有其相应特点,相关分析对指导临床合理使用抗菌药物有重要意义。因此临床应重视病原菌的培养,根据药敏试验科学合理地使用抗菌药物,以减少耐药菌株的产生,有效控制肺部感染,减少死亡率的发生。

摘要：目的 了解老年患者呼吸道感染的病原菌分布和耐药特点,指导临床合理使用抗菌药物,控制感染发生。方法 对江苏省无锡市第二人民医院2009年1月—2010年12月622例老年患者痰标本分离出的197份阳性标本进行病原学及药敏分析。结果 197份阳性标本中共分离出202株病原菌,有6例为混合感染;感染率最高的病原菌前5位依次为白色假丝酵母菌(40.6%)、肺炎克雷伯菌(12.4%)、大肠埃希菌(8.42%)、鲍氏不动杆菌(5.4%)、鲁氏不动杆菌(4.46%);常见革兰阴性杆菌对常用的抗菌药物存在不同程度的耐药,革兰阳性球菌高度耐药,只有利福平和万古霉素敏感率较高。结论 老年患者呼吸道感染以革兰阴性杆菌为主,且存在比较严重的耐药情况,真菌感染也不容忽视,临床应及早进行痰标本的细菌培养和对抗菌药物的耐药性监测,对指导临床合理用药至关重要。

关键词：老年患者,痰培养,病原菌,耐药

参考文献

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痰标本培养101例耐药性分析 篇5

细菌培养有血、尿、便、痰、胆汁、脑脊液、穿刺液、鼻咽拭子、脓及创伤感染等九大类标本, 痰培养阳性检出率最高 (这是笔者的经验) 。笔者从101例痰培养标本中检出82例有细菌生长, 阳性率为81%, 其男女比例:男∶女=67∶34, 年龄段 (以10年为一段, 20岁~29岁这一段用2来代替, 30岁~39岁用3来替换, 以此类推) :2∶3∶4∶5∶6∶7∶8=1∶1∶7∶18∶45∶22, 从这个比例中不难看出, 年龄在70岁~79岁之间发病最高, 80岁~89岁次之, 20岁~39岁这两段发病最少, 40岁以后逐渐增高, 70岁段达高峰, 80岁后稍微有所降低。谁说人生七十古来稀, 八十耄耋不用提?这说明随着医疗技术的不断发展, 人们的生活水平也在不断提高, 延年益寿已司空见惯, 那么, 怎样才能使生活质量进一步提高呢?为了使患者减少病痛折磨, 这就要求微生物检验尽早、准确无误地做出细菌耐药性分析, 为临床治疗提供可靠依据, 更好地为患者服务。

2细菌的分布

101例痰标本中检出82例有细菌生长, 其中肺炎双球菌36例, 金黄色葡萄球菌15例, 表皮葡萄球菌16例, 肺炎克雷伯杆菌5例, 变形杆菌3例, 大肠杆菌2例, 甲型链球菌2例, 乙型链球菌2例, 丙型链球菌1例。细菌分布情况见表1、图1。

3细菌的耐药性分析

见表2、图2~8。

4讨论

表1是9种细菌百分比, 图1是9种细菌饼图比例, 表2是9种细菌耐药情况出现的次数, 图2是9种细菌耐药性簇状柱形图, 图3~8是各种细菌耐药性簇状柱形图, 甲型、乙型、丙型链球菌由于例数太少未做簇状柱形图。从上述各种图表中不难看出细菌的耐药情况。

上述各种图表中除表2外, 其余内容均一目了然, 从图2~图8, 均由表2数据所得。表2的由来:表2里的每一个数据, 都是微生物实验室记载的真实数据, 是每一种细菌耐药性统计的结果, 有多有少, 每一种细菌的耐药性均不同。如丙型链球菌一栏, 无一耐药, 这个细菌只有1例, 做了20种药敏试验全敏感, 因此, 这一栏空缺。由于是纯手工操作, 我院规定, 一般标本培养不超过4 d (除血培养外) , 从接收标本之日起为第1天, 接种;第2天, 若有细菌生长, 做初步鉴定是球菌还是杆菌, 是阴性还是阳性, 再进一步做生化反应, 同时根据初步鉴定结果做药敏试验;第3天, 药敏试验结果一目了然, 现在只报敏感和耐药, 根据生化反应确定细菌, 为临床提供准确的药敏敏感程度。笔者总是把抑菌圈最大的放在第1位, 然后以此类推, 不敏感的也就是耐药的, 不分先后均报出。若是第2天无菌生长, 给临床打电话, 先通报一下;第3天仍无菌生长, 则报告结果。若是第3天细菌已鉴定出来, 但是药敏试验全耐药, 这个时候就不分是革兰阳性球菌还是阴性球菌, 阳性杆菌还是阴性杆菌, 把第2天做过药敏试验剩余的15种, 再做1次药敏试验 (所以, 有的细菌几乎每一栏都有数据) , 等第4天药敏试验结果出来, 再报告给临床。不至于治疗盲目用药, 做到对症下药, 药到病除, 既减轻了患者疾病痛苦, 又减轻患者的经济负担, 还提高了医院的声誉, 因此, 细菌培养工作在临床上有重要的作用。

痰培养法 篇6

关键词：益气活血,涤痰解毒法,不稳定型心绞痛,中西医结合治疗

冠状动脉粥样硬化性心脏病 (CAD) 患者中, 以不稳定型心绞痛等急性冠脉综合征 (以ACS) 为主要表现者占大多数。目前, 已证实ACS的共同病理机制是硬化斑块破裂并发血栓形成, 冠状动脉斑块的稳定型直接决定CAD患者的预后, 易损斑块可引起不稳定型心绞痛、甚至急性心肌梗死。动脉粥样硬化从稳定变为易损的过程, 涉及到炎症、免疫、代谢、凝血等多个环节。炎性反应是引起斑块易损的关键因素。因此, 稳定易损斑块是治疗不稳定型心绞痛的首要方法。虽然, 不少文献表明, 很多药物 (如他汀类、抗血小板药物、β-受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂等) 在稳定动脉粥样硬化斑块方面都有一定效果, 但其不良反应及部分患者药物抵抗现象常给治疗带来困难。结合中医近年来对CAD的临床研究成果, 认为痰、瘀、毒与动脉粥样硬化的炎性反应息息相关, 而痰、瘀、毒形成的关键是正气的虚损, 特别是心气的虚损。即因虚致痰、因虚致瘀、因虚致毒, 遂运用益气活血、涤痰解毒法, 自拟“舒心通痹方”联合西医治疗。观察临床病例20例, 疗效较好, 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 不稳定型心绞痛诊断标准[1]

静息心绞痛:持续时间>20min。新近发生的心绞痛:2个月内、加拿大心绞痛分级 (CCS) Ⅲ级以上。近期加重的心绞痛:2个月内、CCS分级Ⅲ级以上或增加Ⅰ级以上。

1.2 纳入标准

年龄≤75岁, 符合不稳定型心绞痛诊断标准。

1.3 排除标准

心源性休克、严重心力衰竭、新功能分级Ⅲ～Ⅳ级、严重心律失常 (持续性室性心动过速、心室颤动及心脏骤停等) 。

1.4 临床资料

2009年1月至2011年6月我院内科住院患者确诊为不稳定型心绞痛患者40例。按信封抽取法随机分为西药组 (常规西药治疗组) 20例、联合用药组 (涤痰、活血、解毒法联合西药治疗组) 20例。西药组20例:男性13例、女性7例, 年龄48～72岁、平均年龄 (60.6±8.9) 岁, 病程1～8年、平均患病 (5.16±1.62) 年。其中, 吸烟病例5例, 合并糖尿病3例, 合并高血压5例, 合并高血脂症6例。联合用药组20例:男性12例、女性8例, 年龄45～73岁、平均年龄 (61±9.4) 岁, 病程2～7年、平均患病 (5.48±1.51) 年。其中, 吸烟病例6例, 合并糖尿病4例, 合并高血压4例, 合并高血脂症7例。两组病例患者年龄、性别、病程及CAD危险因素等方面资料经比较差异无统计学意义 (P>0.05) 。

1.5 治疗方法

西药组:静脉滴注:硝酸甘油10mg、qd。口服:硝酸异山梨酯10mg、tid, 美托洛尔25mg、bid, 肠溶阿司匹林100mg、qd。皮下注射:低分子肝素0.1mg/kg、bid。联合用药组:舒心通痹方:黄芪50g、丹参20g、川芎15g、三七粉6g、葛根20g、瓜蒌15g、薤白15g、法半夏15g、水蛭6g、大黄酒制10g、延胡索15g、郁金15g。伴失眠者加合欢皮、酸枣仁;大便秘者加鸡血藤、全瓜蒌易瓜蒌仁, 甚者大黄加量至15g。气虚伴阴虚、虚阳浮亢见面红、口干、心烦、舌红、苔黄、脉细弱者, 上方暂减黄芪加太子参或西洋参、麦冬、黄连;痰湿化热、口苦口腻, 舌苔黄腻、脉滑数者, 加黄芩、黄连、虎杖。用法:每日一剂, 水煎服;合并高血压病患者:口服卡托普利25mg、tid, 不能控制者加硝苯地平缓释片10mg、bid;合并高脂血症患者:口服辛伐他汀20mg、qd;合并糖尿病患者:口服阿卡波糖50mg、tid (与第一口餐同服) , 不能控制者加二甲双胍缓释片或胰岛素使用。注:两组均连续治疗2周。

1.6 观察指标

心绞痛症状疗效、心电图改善率。

1.7 疗效评定标准

心绞痛症状疗效评定标准和心电图疗效评定标准参考文献[2]心绞痛症状疗效判断标准: (1) 显效:症状消失或基本消失。 (2) 有效:疼痛发作次数、程度及持续时间明显减轻。 (3) 无效:症状基本与治疗前相同。心电图疗效判断标准: (1) 显效:心电图恢复至大致正常。 (2) 有效:治疗后ST段回升0.05mv以上, 但未达到正常水平, 在主要导联倒置的T波变浅 (25%以上) 或者T波由平坦变为直立;房室或室内传导阻滞改善。 (3) 无效:心电图基本与治疗前相同。

1.8 统计学方法

应用SPSS11.0统计软件, 定量资料均数±标准差表示, 定性资料以频数表示, 组间比较采用单因素方差分析, P<0.05为有统计学意义。

2 结果

两组患者心绞痛症状疗效:西药组:显效5例, 有效10例, 无效5例;总有效率75%。联合用药组:显效8例, 有效10例, 无效2例;总有效率90%。联合用药组心绞痛疗效显著高于西药组 (P<0.05) 。两组患者心电图疗效:西药组:显效5例, 有效9例, 无效6例;总有效率70%。联合用药组:显效7例, 有效8例, 无效5例;总有效率75%。两组心电图改善率比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。

3 讨论

不稳定型心绞痛属中医“胸痹心痛”范畴。长期以来, 气虚血瘀视为冠心病心绞痛的基本病机, 而对痰、毒重视不够。临床上, 单纯益气活血治疗, 疗效常常有限。中医学认为:痰瘀同源, 《黄帝内经》《灵枢·痈症疽》云:“津液和调, 变化而赤为血”生理上阐明津血同源, 病理上即体现痰浊和瘀血的关系。又如《灵枢·百病始生》曰“凝血蕴里而不散, 津液涩渗, 着而不去而积成矣”, 邓铁涛融朱丹溪、王清任两家之长, 创“痰瘀相关”之论[3]。可见, 在CAD发病机制中, 痰瘀有着密不可分的关系, 且常常同时并存。并且, 痰瘀均为机体失调产生的病理产物, 久蕴体内, 加重脏腑功能及气血运行失常, 恶性循环, 以致邪气亢盛, 败坏形体而转化为毒。即痰瘀致毒。然“气为血之帅”“血为气之母”, 气虚行血无力必致血瘀;又气主行津、气虚则津液停滞而生痰浊。因此, 心气亏虚是产生瘀血痰湿的根本原因。亦是痰毒、瘀毒形成的首要条件, 即因虚致痰、因虚致瘀、因虚致毒, 由此可见, CAD特别是不稳定型心绞痛病因病机中, 属于标实证的痰、瘀为“常”, 毒为“变”, 心气虚则是根本。针对这一病因病理机制, 运用中医益气活血、涤痰解毒方法, 自拟“舒心通痹方”。方中:黄芪为君药, 大剂量使用益心气而达行心血、通心络, 托毒诸多功效。丹参、川芎、三七活血化瘀, 与黄芪相伍共凑益气活血作用。葛根辛甘升散、解心脉阴血之凝聚, 以达活血化瘀目的。瓜蒌、薤白、法半夏涤痰除湿以解痰毒, 水蛭活血通络、以毒攻毒。延胡索、郁金行气活血止痛。由于心绞痛患者心血不畅、心神失养, 常伴失眠, 而失眠更耗心气心阴。又因该类患者均为中老年、常伴腑气不通、大便干结, 用力解便易致粥样斑块脱落, 有出现心肌梗死之弊, 故均需及时处理。现代医学已研究证实, 方中黄芪具有提高人体免疫力、增加心肌收缩力等功效;丹参、川芎、三七等活血化瘀药物具有抗血小板凝聚、减轻血液黏滞度、改善心肌耗氧等作用。而大黄、水蛭有明显稳定动脉粥样硬化斑块、有抗炎的类效应。整方配伍使用使机体心气得充、痰浊得化、血脉得通、瘀毒得消, 机体内环境趋于平衡, 达到整体调节功效, 从而一定程度上提高了不稳定型心绞痛的临床疗效。

参考文献

[1]陈纪林, 范维琥, 杨元楠, 等.不稳定性心绞痛和非ST段抬高心肌梗死诊断标准与治疗指南[J].中华心血管病杂志, 2007, 35 (4) :295-304.

[2]翁维良.中药临床药理学[M].北京:人民卫生出版社, 2002:395.

痰培养法 篇7

1 临床资料

1.1 一般资料

本组96例痰培养阳性患儿，其中男60例，女36例；年龄19天～3岁6月，平均年龄14.29±0.58月；患儿均以不同程度的发热、呼吸困难、咳嗽、咳痰、鸣喘等症状入院，住院时间4～14d，平均住院时间8.94±0.63d。患儿入院后迅速完善血常规、胸片、痰培养、心肌酶谱及肝肾功能检查。

1.2 痰培养及药敏试验方法

1.2.1 痰液标本采集

应在抗生素使用前采集痰液标本，首先用生理盐水对患儿进行口腔护理以去除浅表固定定植菌；用一次性婴儿吸痰器于咽喉部吸痰入储存瓶，之后吸少量生理盐水冲管；吸痰管打结，标本及时送检。不合格的痰液标本弃用。

1.2.2 痰液标本培养

先于肉眼及显微镜下观察痰液标本的质量，肉眼观察痰液的颜色、粘度、性状、有无血丝、脓液及颗粒物存在；显微镜低倍镜下观察痰标本涂片的细胞数，判断送检标本是否适合做细菌培养。然后将合格标本用血平板和巧克力平板置于5%CO2、37℃饱和湿度的二氧化碳孵箱中培养12～24h后进行细菌的分离、鉴别以及药物敏感试验。

1.2.3 药敏试验

挑取可疑细菌，利用法国生物梅里埃公司的全自动微生物鉴定系统及API系统进行鉴定和药敏试验。药敏试验判断标准：以不同药物进入体内后血液中最高浓度与该药物体外最低抑菌浓度之间的关系所制定。一般情况下，最高血药浓度应高于待检菌最低抑菌浓度的4-8被为敏感，即用常规剂量治疗可获得临床疗效；而最高血药浓度/最低抑菌浓度等于1～2倍时为中介度，表示需要加大剂量或药物浓缩部位可有疗效；最高血药浓度/最低抑菌浓度小于1则为耐药，表示该药无疗效。

2 结果

2.1 辅助检查结果：

本组96例患儿血常规检查结果，其中白细胞数增加（超过12×109）者35例，白细胞数降低（低于4×109）者2例；心肌酶学指标肌钙蛋白升高者26例；肝功异常20例；C反应蛋白升高16例。

2.2 痰培养结果

共分离出菌株96株，其中G+菌2株，G-菌96株；分别为大肠埃希菌33例（34.38%）；肺炎克雷伯菌32例（33.33%）；阴沟肠杆菌8例（8.33%）；产酸克雷伯菌7例（7.29%）；植生拉乌尔菌5例（5.21%）；铜绿假单胞菌3例（3.13%）；肺炎链球菌2例（2.08%）；鲍曼不动杆菌2例（2.08%）；粘质沙雷氏菌1例（1.04%）；阿氏肠杆菌1例（1.04%）；产气肠杆菌1例（1.04%）；解尿氨酸拉乌尔菌1例（1.04%）。

2.3 药敏试验结果

耐药率监测见表1。G+菌对青霉素、头孢他啶、头孢噻腭钠、亚胺培南、环丙沙星、左氧氟沙星、哌拉西林舒巴坦、替考拉林、万古霉素均敏感。G-菌中对头孢唑啉敏感34例、头孢替唑敏感41例、头孢他啶敏感55例（中介1例）、头孢曲松敏感47例（中介2例）、头孢噻腭钠敏感43例（中介1例）、头孢吡腭敏感56例、哌拉西林他唑巴坦敏感89例、氨曲南敏感52例、厄他培南敏感85例、亚胺培南敏感89例、阿米卡星敏感82例、庆大霉素敏感71例、妥布霉素敏感64例（中介9例）、环丙沙星敏感73例、左氧氟沙星敏感70例、呋喃唑酮敏感53例（中介3例）、复方新诺明敏感55例、氨苄西林舒巴坦敏感36例（中介11例）、氨苄西林敏感4例。超广谱β内酰胺酶阳性者37例。

3 讨论

小儿下呼吸道感染是临床常见疾病，与小儿特殊的下呼吸道系统的解剖及生理特点有关，小儿气管、支气管狭小、软骨软、血管多、纤毛运动差，肺的弹性差、血管丰富、间质多、肺泡少，胸廓呈桶状、肋骨平、膈肌高、胸腔小、呼吸肌弱、纵膈大。而其呼吸系统的生理特点为，小儿的呼吸类型为腹膈式呼吸，年龄越小呼吸频率越大，易节律不齐，且小儿的各项呼吸功能指标的储备力低，气道阻力大[3]。小儿呼吸道的特异性、非特异性免疫功能均差，咳嗽反射弱、纤毛运动差难以清除吸入的尘埃，SIg A、G及亚类含量低体液免疫功能不完善，巨噬细胞、乳铁蛋白、溶菌酶、干扰素、补体等免疫屏障功能均不足。导致下呼吸道感染的病原菌包括细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体和原虫等。而细菌学检查能明确感染病原及药敏结果，有助于疾病的治疗、指导临床合理用药、流行病学资料调查和医院感染的监测[4]。其中，痰液标本是临床微生物学检验最常见的标本，而痰液标本的采集尽量在抗生素应用前进行，以提高阳性检出率和避免漏检[5]。

本组96例痰培养阳性患儿的痰液标本中，共分离出致病菌96株，其中G+菌2株，G-菌96株，可以看出我院下呼吸道感染患儿的主要致病菌为G-菌，且以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌所占比例较大。G+菌对青霉素、头孢他啶、头孢噻腭钠、亚胺培南、环丙沙星、左氧氟沙星、哌拉西林舒巴坦、替考拉林、万古霉素均敏感；而G-菌中对头孢他啶、头孢吡腭、哌拉西林他唑巴坦、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、较敏感。而对头孢唑啉、头孢替唑、头孢曲松、头孢噻腭钠、氨苄西林舒巴坦、氨苄西林的敏感性较差，产生了一定的耐药性。尤其是哌拉西林他唑巴坦敏感性高，大肠埃希氏菌敏感率91%、肺炎克雷伯菌93.8%、阴沟肠杆菌75%、产酸克雷伯100%。另有37例能产生超广谱β内酰胺酶。

综上所述，对痰液中的病原体进行分离培养不仅能使小儿下呼吸道感染的病原体得到确诊，而且还能建立在此基础上的药敏试验，避免临床滥用抗生素，指导临床合理用药，减少细菌耐药性的产生，缩短住院时间，减少患儿的痛苦，且操作简单，对患儿无损伤，值得临床推广应用。

关键词：下呼吸道感染,痰培养,小儿

参考文献

[1]陈淑萍.小儿下呼吸道感染930例痰培养及药敏结果分析[J].实用医学杂志, 2009, 25 (16) :2773-2774.

[2]王启广, 蔡瑞云, 唐小兰, 等.1518例下呼吸道感染患儿痰堵养及药敏结果分析[J].实用预防医学, 20l0, 17 (5) :990-993.

[3]吕兴, 梁星群, 吕波, 等.小儿肺炎痰细菌培养的检测及意义[J].中华医院感染学杂志, 2003, 13 (7) :81-83.

[4]薛辛东.儿科学[M].北京:人民卫生出版社, 2005:282-283.