血型不规则抗体检测（共7篇）
血型不规则抗体检测 篇1
不规则抗体是指不符合ABO血型系统Landstemer法则的血型抗体, 即抗-A、抗-B和抗-AB以外的血型抗体, 此抗体常因输血或妊娠等免疫刺激产生, 多为Ig G抗体, 是引起免疫性输血反应、新生儿溶血病、血型鉴定困难及疑难配血 (型) 等的主要原因之一。因此, 输血前不规则抗体筛查和鉴定可减少因血型不合引起的输血反应, 确保安全用血。特别对于患有特殊病种如:肿瘤、肝病、新生儿以及有妊娠史、输血史的患者更为重要。在交叉配血前进行抗体的筛查及抗体性质的鉴定, 可为临床输血安全, 预防新生儿溶血病的发生提供有力的保障, 降低输血反应发生的风险。现将桂林医学院附属医院 (以下简称“我院”) 输血科进行的不规则抗体筛查和鉴定情况报道如下:
1 资料与方法
1.1 一般资料
2010年1月~2013年12月我院各临床科室输血患者不规则抗体筛查共计29 208例, 其中男11 932例 (40.85%) , 女17 276例 (59.15%) ;年龄1 d~98岁, 平均 (42.5±2.3) 岁。
1.2 主要试剂与仪器
微柱凝胶Coomns检测卡、专用标本离心机和孵育器 (西班牙Daina公司) ;筛选细胞、谱细胞 (上海血液生物) ;KA-2200型血型血清学多用离心机 (日本久保田) 。筛选细胞包括以下红细胞血型系统的常见抗原:Rh、MNSs、P、Lewis、Kell、Duffy、Kidd等。检测试剂均在有效期内并严格按照试剂及仪器说明书操作使用。
1.3 方法
1.3.1 标本要求及处理
输血前采集患者静脉血2 m L, 用EDTA抗凝在室温下以1900 r/min离心10 min, 分离血浆。
1.3.2微柱凝胶技术
分别向微柱孔内加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号0.8%~1.0%的抗体筛查细胞各50μL, 并向微柱孔内加入25μL血浆, 将卡放入专用孵育器内孵育15 min后, 置专用离心机内离心9 min。
1.3.3 结果判定
红细胞与相应抗体发生凝集, 不能通过凝胶的缝隙, 被挡在微柱上端者, 试验结果为阳性;红细胞未与相应的抗体发生凝集, 红细胞通过凝胶的缝隙到达微柱底部, 试验结果为阴性。
1.3.4 抗体鉴定
用1~10号谱细胞对阳性结果进行抗体特异性鉴定。
2 结果
2.1 待测样本不规则抗体阳性检出率
在29 208例输血患者的不规则抗体筛查中, 共检出不规则抗体90例, 阳性率为0.31%。
2.2 不规则抗体特异性鉴定结果
90例不规则抗体阳性标本中, 检出同种抗体71例, 其中抗-D 2例 (2.22%) , 抗-E 19例 (21.11%) , 抗-Ec10例 (11.11%) , 抗-c 3例 (3.33%) , 抗-Mur 11例 (12.22%) , 抗-M 7例 (7.78%) , 抗-N 2例 (2.22%) , 抗-s 1例 (1.11%) , 抗-Lea 8例 (8.89%) , 抗-Leb 2例 (2.22%) , 抗-JKa 1例 (1.11%) , 抗-JKb 2例 (2.22%) , 抗-P1 2例 (2.22%) , 抗-Dia 1例 (1.11%) ;冷抗体7例 (7.78%) ;自身抗体12例 (13.33%) 。
2.3 各红细胞血型系统中不规则抗体分布情况
各红细胞血型系统中不规则抗体的发生分别为Rh系统34例 (47.89%) 、MNSs系统21例 (29.58%) 、Lewis系统10例 (14.08%) 、Kidd系统3例 (4.23%) 、P系统2例 (2.82%) , Diego系统1例 (1.41%) 。其中, 以Rh系统所占比例最高 (47.89%) 。
2.4 Rh血型系统中不规则抗体的分布情况
Rh血型系统中检出的不规则抗体按照所占比例从高到低排列依次为:抗-E 19例 (55.89%) >抗-Ec10例 (29.41%) >抗-c 3例 (8.83%) >抗-D 2例 (5.88%) 。
2.5 不规则抗体在不同性别所占比例和发生频率
90例不规则抗体阳性标本中, 女56例 (62.22%) , 发生频率为0.32%;男34例 (37.78%) , 发生频率为0.28%。
3 讨论
随着输血检测技术的发展, 因为血型不合而引起的溶血反应比较少见, 而血型不规则抗体引起溶血性输血反应成为主要原因。近年来, 血型不规则抗体的筛查越来越多地应用于临床输血, 尤其是孕妇、多次输血患者、自身免疫性疾病患者、肿瘤患者、严重消耗性疾病患者等均为血型不规则抗体的高危携带者, 应作为重点筛查对象, 保障输血的安全性和有效性。不规则抗体产生的数量和质量变化与抗原、B细胞、T细胞及附属细胞等多种因素密切相关。当机体受到抗原刺激后 (大部分是在T细胞的辅助作用下) , B细胞增殖并分化成熟为记忆细胞或浆细胞。记忆细胞只在其细胞膜上表达抗体, 当再次受到同一抗原刺激后, 则可快速引发免疫反应。例如在输血免疫时, 尤其是多次输血, 红细胞血型系统的抗原 (多是少见抗原) 可刺激机体产生相应抗体, 当再次输血时, 由于组织相容性复合体MHCⅠ和MHCⅡ分子通过调节T细胞的反应, 调控机体抗体反应, 同时还在神经内分泌作用、B细胞免疫耐受、细胞因子等综合因素的作用下, 在诸如多发性骨髓瘤、肿瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肺结核、肝硬化、自身免疫性疾病、严重消耗性疾病等疾患中, 血清中的Ig M和Ig G类抗体会增高。在进行临床输血治疗时应进行血型不规则抗体筛查, 对于筛查阳性者应并进一步明确不规则抗体的性质, 以最大程度减少输血并发症的发生[1]。
不规则抗体筛查其目的是确保输血的安全。选用灵敏度高、特异性好、结果准确的方法进行输血前常规的抗体检测, 可发现具有临床意义的不规则抗体, 对保证临床输血安全有着极为重要的意义。检测红细胞血型不规则抗体的方法很多, 以往通常使用间接抗人球蛋白实验筛查抗体, 是为了解决部分抗体的剂量效应[2]而采用的, 此实验耗时耗人工不利于常规检测, 近年来开展的微柱凝胶技术解决了上述问题, 微柱凝胶技术是在传统的抗人球蛋白试验反复基础上发展起来的, 克服了传统试管液体介质Coombs试验需多次洗涤等繁琐、费时的缺点, 其基本原理是利用微柱凝胶的微孔过滤作用及免疫化学抗原抗体特异性反应, 红细胞若没有被致敏或没有遇到相应的红细胞抗体, 则在离心过程中会直接离心到凝胶底层, 表示不存在致敏红细胞和相应抗体;若有特异性的抗体与红细胞结合, 对于Ig M类抗体, 则直接形成可见的复合物, 对于Ig G类抗体则此复合物再与多特异的抗球蛋白结合形成可见的复合物, 并被阻隔在凝胶层顶部, 即表示存在致敏红细胞和相应抗体[3], 具有标准化程度高、重复性强、试验结果明确可靠、标本用量少、保存时间长等优点[4], 不失为输血前血型不规则抗体筛查的较好方法, 本研究采用这一方法对29 208例输血患者进行不规则抗体检测, 检出阳性抗体90例, 不规则抗体阳性检出率为0.31%, 与相关文献报道相符[5]。当不规则抗体筛查阳性时, 必须进一步做抗体鉴定, 确定其特异性后, 选择输注无相应抗原的红细胞, 才能确保患者的输血安全。
实验结果显示, 检测出的不规则抗体大多数属于Rh血型系统, 占阳性抗体的37.77% (34/90) , 临床输血中Rh血型系统的意义仅次于ABO血型系统。虽然Rh血型系统5种抗原的免疫性强弱依次为D>E>C>c>e[6], 但本次实验检出抗-D抗体比例不高, 阳性者仅2例, 而抗-E抗体阳性为19例, 其阳性比例远高于抗-D抗体, 有文献报道临床输血产生抗-E抗体的概率要比抗-D高2.5倍[7], 本实验也呈现与此相符的结果, 考虑其原因可能:目前各家医院对输血患者都开展了Rh (D) 抗原的检测, 对Rh (D) 阴性患者进行了同型输血, 故临床上产生抗-D抗体的概率及检出率均降低, 而Rh (E) 抗原尚未列入常规检查中, E抗原阴性患者的输血则为随机性, 并未进行配合性输血, 致使Rh (E) 阴性患者通过输血接受E抗原刺激后产生抗-E抗体的概率增多, 临床上检出率也就相应的增高, 基于这一因素我国人群中Rh (E) 抗原阴性频率高于Rh (D) 抗原, 而E抗原是Rh血型系统中除D抗原之外最强的抗原之一, 输血患者中的Rh (E) 抗原阴性的存在, 将可能成为引起输血不良反应的一个隐患[8]。临床上凡是以Ig G性质出现的不规则抗体, 理论上都可以引起新生儿溶血病, 对有输血史和妊娠史的孕妇尤为重要, 若检出不规则抗体, 应及时作相应的预防和治疗, 可避免新生儿溶血病和输血不良反应的发生。此次实验也鉴定出MNSs血型系统不规则抗体21例, Lewis系统不规则抗体10例, 分别占抗体阳性的29.58% (21/90) 和14.08% (10/90) , 据文献资料提示MNSs系统的复杂性仅次于Rh系统[9], 抗M及抗N抗体多数以Ig M形式存在, 其反应温度为4~22℃, 因而对于输血而言, 只有在37℃或抗球蛋白试验阳性时, 该抗体才具临床意义[10], 除了抗M及抗N抗体外, 抗Mur抗体也可引起交叉配血困难和溶血性输血反应发生[11]。筛查中检出Lewis系统为抗-Lea抗体8例, 抗-Leb2例。Lewis血型抗体以Ig M类为主, 在37℃抗球蛋白介质中有反应, 可以结合补体导致体内溶血的发生, 此抗体的检出具有临床意义。由于Lewis血型系统的抗体的效价及亲和力较低, 在日常工作中容易漏检[12], 当检测结果出现弱阳性或可疑情况时, 应高度注意是否有此类抗体的存在, 最好重复试验或改用抗球蛋白试验等其他方法进一步证实, 以免漏检。
本次抗体筛查检出非特异性自身抗体阳性12例, 占阳性抗体的13.33%, 此类情况以自身免疫性疾病患者、恶性血液病和恶性肿瘤患者居多, 其次为感染性疾病患者。自身抗体阳性多见于自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜等疾病, 大部分为温抗体, 在本实验中常出现多凝集现象, 造成交叉配血困难。当患者存在较强的温自身抗体时, 需鉴别是否同时存在同种抗体, 在37℃体内由于自身抗体的作用, 使自身红细胞上的所有抗原位点都可封闭而掩盖同种抗体, 有可能引发严重的溶血性输血反应发生[13]。此时应建议临床医师尽量不采用输血治疗, 先疾病治疗, 待患者抗体效价降低或消失后再输血。
此次研究发现, 90例抗体阳性患者中, 男性患者34例, 女性患者56例, 男性阳性检出率0.28% (34/11 932) , 女性阳性检出率0.32% (56/17 276) , 与文献报道相近[14], 提示女性产生不规则抗体的概率高于男性。这可能与女性在妊娠或流产等生理或非生理的因素影响下, 机体受到免疫刺激有关, 且同时存在着输血和妊娠双重免疫机会, 所以女性的不规则抗体检出率高于男性患者[15]。
从29 208例次输血患者中筛查出的90例抗体阳性患者, 均采用Diagnostic Coomns检测卡进行抗体鉴定和交叉配血, 输血时选择了各自对应抗原阴性的血液制品给予输注, 患者在输血过程中和输血后均未发生不良反应, 达到了安全输血的疗效。
综上所述, 在输血前对输血患者进行不规则抗体筛查, 可及时发现患者体内存在具有临床意义的不规则抗体, 特别对女性患者尤为重要。抗体筛查对保证输血安全, 避免输血反应的发生起着非常重要的作用。
摘要：目的 分析微柱凝胶技术对输血患者进行血型不规则抗体的筛查情况及临床应用。方法 对2010年1月2013年12月于桂林医学院附属医院输血患者29 208例进行不规则抗体检测, 统计分析阳性结果 , 鉴定阳性抗体的特异性。结果 29 208例患者中, 检出不规则抗体阳性者90例, 阳性率为0.31%。特异性抗体以Rh血型系统居多, 抗-D抗体占2.22%、抗-E抗体占21.11%、抗-Ec抗体占11.11%;MNSs系统抗-Mur抗体11例 (12.22%) 、抗-M抗体7例 (7.78%) ;Lewis系统抗-Lea抗体占8.89%;冷抗体占7.78%。非特异性抗体占13.33%。结论 输血前对患者血液进行血型不规则抗体筛查并鉴定其特异性, 输注不含相应抗原的血液, 避免溶血性输血反应的发生, 对确保输血安全有效有重要的临床意义。
关键词：微柱凝胶技术,不规则抗体筛查,安全输血,输血反应
血型不规则抗体检测 篇2
1材料与试剂
1.1标本来源
2013年7月至2014年7月,我院申请输血患者22 558例,标本采集条件为真空采血针采集EDTAK2抗凝全血3 ~ 5 m L,1 760 g离心5 min。
1.2仪器与试剂
ORTHO Autovue Innova全自动血液免疫检测系统,单克隆抗A、抗B血型正定型试剂( 美国IMMUCOR ) ,Ig M单克隆Rh D血型定型试剂( 美国IMMUCOR) ,标准反定细胞 ( 以下简称Ac、Bc、Oc,美国BIO-RAD) 、3系抗筛细胞( 美国BIO-RAD) ; 16系谱细胞( 荷兰Sanquin) ,抗球蛋白检测卡( 美国Ortho Biovue) 、血型检测卡( 美国Ortho Biovue) ,操作方法参照相关说明书进行。
2方法
2.1血型及不规则抗体筛查
采用ORTHO Autovue Innova全自动血液免疫检测系统,严格按照仪器使用说明书要求检测患者ABO及Rh D血型和不规则抗体筛查,对ABO血型正反定型不一致的患者标本,采用试管法复查; 对抗筛阳性患者,进一步进行抗体鉴定。
2.2抗体鉴定
患者血清与谱细胞分别在盐水介质和抗人球蛋白介质中检测,根据患者血清与谱细胞反应格局,并结合患者对应红细胞血型表型,鉴定患者血清中不规则抗体特异性。
2.3抗体类型鉴定
在盐水介质中凝集,抗人球蛋白介质不凝集的抗体为Ig M类抗体; 在盐水介质中不凝集,抗人球蛋白介质凝集的抗体为Ig G类抗体; 对于在盐水和抗人球蛋白介质都凝集的抗体,采用2-Me与患者血清等量混合,于37 ℃水浴30 min,再进行抗体鉴定,如果破坏后盐水和抗人球蛋白介质凝集均消失,提示抗体类型为Ig M,如果盐水介质凝集减弱或消失,抗人球蛋白介质仍有凝集,提示Ig M和Ig G类抗体均存在。
2.4对于怀疑不规则抗体干扰血型的处理
明确患者血清中抗体特异性,筛选对应抗原阴性的献血者红细胞,配置成反定细胞,重新进行血型鉴定。
2.5O细胞冷吸收方法
对于不规则抗体筛查阳性,但无法明确抗体特异性的患者标本,采用多人份O细胞混合,用生理盐水洗涤三次,制备成压积红细胞,与患者血清等量混合,于4 ℃冷吸收30 min,再对患者血清标本进行血型鉴定。
3结果
2013年7月至2014年7月期间共完成血型检测22 558例,其中57名患者因不规则抗体的存在,干扰血型鉴定。通过调查发现MNS、Rh、Lewis、Duffy、P血型系统产生的不规则抗体均发现可干扰血型鉴定,其中MNS系统41例,Rh血型系统10例,Lewis系统4例,Duffy和P系统各1例。抗-M最多,37例,占64. 91% , 其次为抗E相关抗体,5例,占8. 77% ; 从不规则抗体类型统计发现Ig G与Ig M类混合抗体最多,占37例,单纯Ig G类抗体14例,单纯Ig M类抗体6例。 具体分析结果见表1。
4讨论
ABO血型系统是人类最早发现的血型系统,也是与输血安全相关的最重要的血型系统,ABO血型不合输血可以导致溶血性输血反应,严重的急性溶血性输血反应,发病急骤、来势凶险,若处理不及时可危及患者生命; 因此,ABO血型鉴定是输血前检测的必检项目之一,准确的血型鉴定是保证输血安全、提高输血疗效、减少或杜绝溶血性输血反应的直接保障。
不规则抗体是指正常ABO血型系统以外的抗体,主要因机体受到免疫刺激产生缺乏对应抗原的抗体,主要包括Ig G和Ig M两种类型。不规则抗体可干扰ABO血型鉴定,表现为反定型不应该凝集的一侧出现凝集,O细胞可出现阳性或阴性反应,导致血型正反定型不一致,患者自身对照一般为阴性。 因无论自制还是商品化反定细胞均为人源红细胞制备,而人类红细胞血型系统非常复杂,红细胞表面抗原除包含ABO血型系统抗原外,还有众多其他血型抗原存在,目前已发现33个血型系统[3],当受检者血清中存在不规则抗体,而反定细胞上存在对应抗原时,即可发生抗原抗体反应,在合适的条件和介质中引起肉眼可见红细胞凝集,干扰血型鉴定。
本次研究发现影响血型鉴定的不规则抗体主要为Ig M类占75. 44% ,主要原因为Ig M类抗体为五聚体,可在盐水介质中引起肉眼可见的红细胞凝集, 干扰血型鉴定; 但有14例患者单纯存在Ig G类抗体,也干扰血型鉴定,其原因可能为血型检测所用的血型鉴定卡中加入某些增强介质,如PEG等,虽一定程度上提高了反应的灵敏度,缩短了反应时间,提高了检测效率,但也会导致某些Ig G类抗体在无抗人球蛋白介质存在的情况下发生凝集,给对血型鉴定带来干扰。曹微微等对55481例住院拟输血患者进行红细胞血型不规则抗体分析,发现各血型系统抗体分布为Rh系统抗体最多为59. 79% ,MNS系统其次为24. 74% ,Lewis系统第三为3. 09%[4]。 本次研究发现影响血型鉴定的不规则抗体与文献报道一致,但由于在人类血清中MN血型系统产生的不规则抗体多为Ig M类型,也有少量Ig G类型存在, 因此从扰血型鉴定方面统计发现MNS系统最多,占71. 93% ,其次为Rh血型系统,占17. 54% 。
当血型鉴定出现正反定型不一致时,首先应排除人为因素、试剂因素及样本自身因素的干扰,然后严格按照操作规程重复试验,根据具体问题分析原因并采取相应处理措施。当血型反定型不该凝集的一侧出现凝集,而且不规则抗体筛查阳性时,应注意排除不规则抗体干扰。排除办法为选择对应抗原阴性的红细胞制备成反定细胞,重新进行血型鉴定,这样既可以明确患者血型,又达到了进一步验证抗体鉴定结果的目的。如果无法明确抗体特异性,也可采用多人分O细胞混合,吸收患者血清后,再进行血型鉴定,该方法可一定程度排除同种抗体干扰。
参考文献
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[2] 临床输血技术规范.卫生部,2000Technical Specifications of Clinical Blood Transfusion.Ministry of Health,2000
[3] Reid M E,Lomas-Francis C,Olsson M L.The blood group antigen facts book.Third Edition,Academic Press is an imprint of Elsevier,2012:8—23
血型不规则抗体检测 篇3
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2012年5月~2014年5月本院的1000例血清样本, 其中600例样本为男性的血清样本, 400例样本为女性的血清样本, 患者年龄22~73岁, 平均年龄46.7岁。
1.2 方法
进行研究的仪器为微柱凝胶专用的孵育器、不规则的抗体筛查细胞、抗人球蛋白的微柱凝胶卡、离心机等, 进行鉴定的谱细胞为1-11号。
操作的方法:早上8:00抽取5 ml受试者的静脉血, 静置30 min于常温之中, 待其凝固完全, 再进行2 min低速度的离心分离血清, 剔除多余的纤维蛋白。在微柱凝胶筛检卡上标注抗人球蛋白, 将50μl的10.8%的Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ型不规则抗体注入筛查细胞于3个微柱的凝胶管之中, 再抽取待检血清50μl注入, 采用专用孵育器进行15 min的微柱凝胶孵育, 先在900 r/min的速度下离心2 min, 再在1500 r/min速度下离心3 min。结果的判定主要依据肉眼观察[3]。
1.3 评价标准
阳性:在凝胶柱的上端或者中间发生红细胞的凝聚及悬浮;阴性:在凝胶柱的底部发现沉降的游离状红细胞。
2 结果
2.1 不规则抗体的检出率
在1000例的血清样本之中, 共筛查出不规则抗体80例的血清样本, 占血清总量的8.0%。
2.2 抗体特异性的检测结果
在筛查出的80例不规则抗体中, 30例抗D, 阳性率为37.50%;21例抗E, 阳性率为26.25%;15例抗DC, 阳性率为18.75%;14例抗e, 阳性率为17.50%。
3 讨论
不规则抗体大部分为Ig G型, 如果在盐水的介质之中这些抗体一般不可能发生聚集, 一般在某些特殊的介质作用下, 如抗人球蛋白及酶等, 联合致敏的红细胞引起凝聚反应的发生。在临床输血治疗中, 多数不规则抗体均与溶血输血反应的发生密切相关, 临床极易发生一些不良反应, 严重影响患者的生命健康, 因此, 为了保证患者在输血过程中的安全, 避免患者出现二次损伤, 发生输血反应, 应该对不规则的抗体进行筛查[4,5]。在进行临床多种疾病的治疗过程之中, 应逐渐规范输血过程, 有助于恢复患者的身体健康, 为提高临床疗效奠定基础。近些年, 我国医学相关部门正在不断地更新与完善输血的标准与规范, 输血的检测等方面正在逐渐规范, 对于一些相对比较弱的ABO亚型抗原, 在临床中可以敏感地检测出其不规则抗体, 从而可以对溶血性的输血反应发生起到有效的预防作用。
选取本院的1000例血清样本进行不规则抗体的筛查, 结果表明, 筛查出了80例不规则血型抗体, 其中30例抗D, 21例抗E, 15例抗DC, 14例抗e。Rh血型的系统包含多种抗原抗体, 如抗D、抗DC、抗E和抗e等, 作为一种复杂血型系统Rh血型为抗原抗体, 该抗原性的强弱为抗e<抗c<抗C<抗E<抗D, 主要的原因是Rh血型不相符合妊娠与输血等因素相关联, 其中最易引起严重输血反应的就是抗D, 其最甚时会导致新生儿溶血, 最终导致其死亡。此外, 输血次数较多的患者会产生抗E进而诱发溶血反应。因此, 在临床输血过程中严格对血型进行分类, 如ABO血型、Rh血型, 其中Rh血型是比较复杂的, 一定要保证输血血型的统一性, 避免出现输血类型的不统一, 形成不规则抗体引起患者发生输血不良反应。本研究通过微柱凝胶中抗人球蛋白筛查不规则抗体, 受益于微柱凝胶的抗人球蛋白具有比较高的灵敏度、结果比较容易判断、试验进行比较方便快捷、标本的用量比较少的优点, 从而可以得到比较准确稳定的结果[6]。
综上所述, 临床在进行输血治疗之前, 应首先筛查有无不规则抗体, 避免出现不规则抗体影响输血过程的顺利完成, 最大程度的提高患者的临床疗效, 值得推广使用。
参考文献
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血型不规则抗体检测 篇4
1 材料与方法
1.1 研究对象
来自2010年1月至2011年6月来我院妇科门诊就诊的O型孕妇共计248人, 年龄24～38岁, 孕期为12～38周, 其中配偶A型116人, B型102人, AB型23人, 孕妇Rh D阴性7人, 配偶Rh D阳性。
1.2 试剂与仪器
0.8%ABO反定型红细胞悬液和抗人球微柱凝胶卡 (均长春博讯生物技术有限责任公司生产) 批号:20091209、20101103;0.2mol/L 2-巯基乙醇 (2ME) (上海血液生物医药责任有限公司) ;TO-3A型血型血清学用离心机和FYQ免疫微柱孵育器 (长春博研科学生物仪器有限责任公司) ;电热恒温水箱 (天津市泰斯特仪器有限公司) 。
1.3 试验方法
1.3.1 标本预处理
取200µL孕妇血清标本和200µL 0.2mol/L 2-巯基乙醇应用液充分混匀, 试管加塞盖置37℃水浴60min, 充分裂解血清中IgM类抗体, 吸经2-ME处理的血清用生理盐水做倍比稀释, 稀释度分别为1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512, 留待进行平行试验。
1.3.2 MGI
取微柱凝胶试剂卡做好标记在微孔内各加入50µL与孕妇配偶相同血型的0.8%标准红细胞悬液, 再依次加入上述处理的稀释度为1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512的血清50µL, 置专用孵育器内37℃孵育15min, 再放入专用离心机离心5min (900转/分, 2min;1500转/分, 3min) , 结果判定以出现1+号凝集的最高稀释度的倒数为抗体效价。
2 结果
结果判定以出现1+号凝集的最高稀释度的倒数为IgG抗-A (B) 和抗-D的价效, IgG抗-A (B) 价效≥64为异常, 抗-D检出者为阳性, 未检出者为阴性。
在所检测的241例O型血孕妇中, 配偶血型组合 (O-A) 、 (O-B) 、 (O-AB) 的例数116、102和23, 抗体效价≥64有81例, 异常检出例占总数的33.6% (81/241) 其中IgG抗-A测定有139, 例效价≥64有36例, 异常检出占总抗-A的14.9% (36/241) , IgG抗-B测定有125例, 例效价≥64有45例18.67% (45/241) 。结果见表1。其中19例gG抗-A (B) 效价≥64, O型血孕妇所生新生儿作HDN血清学检查, 结果见表2。
注:与IgG抗-A (B) 效价为64比较, *P<0.01
3 讨论
新生儿溶血病 (HDN) 是指母婴血型不合引起的同族免疫性溶血。有报道说ABO溶血病占新生儿溶血的85.3%, Rh溶血病占14.6%, MN溶血病占0.1%。ABO血型不合中约1/5发病, RhD血型不合者约1/20发病。本病主要是母婴间血型不合而产生同族血型免疫反应的遗传性疾病。其次是RH系统, 胎儿由父母新方面遗传来的显性抗原恰为母亲所缺少, 此抗原侵入母体, 产生免疫抗体, 通过胎盘绒毛膜进入胎儿血循环与胎儿红细胞凝集、使之破坏而出现溶血, 引起贫血、水肿、脾肿大和生后短时间内出现进行性重度黄疸, 甚至发生胆红素脑病。常导致胎儿早期流产或新生儿贫血, 甚至造成新生儿死亡等严重后果。已知的可发生新生儿溶血病的20多个血型系统200余个血型抗原中, 以ABO系统最为常见, 其次RH系统, 每个血型系统在遗传上都是独立的, 并按孟德尔法则遗传。引起新生儿溶血病以的ABO系统为最多, 次为Rh系统, ABO血型系统引起防新生儿溶血病的比例比RH系统多[1]。检测母亲血清中是否存在IgG性质抗-A (B) 抗体及效价, 就可对ABO系统HDN发生进行预测, ABO溶血病通常以母亲为O型, 子女为A型或B型的发病率为高[2], 所以IgG-A (B) 水平的测定对胎儿溶血症状的减轻, 新生儿HDN发病率的降低有着非常重要的意义。对待妊娠约20周的、ABO血型不合的孕妇, 特别是存在原因不明的流产、早产、死胎等情况的, 需要动态监测血型抗体效价, 若母亲的IgG-A (B) ≥128, 结果很可能是婴儿已经受害, 若IgG-A (B) ≥512, 几乎98.1%发病[3]。表2结果表明新生儿HCN发病率与母体内的IgG血型效价呈正相关[4]。此时就需要格外重视, 并积极采取措施降低孕妇体内Ig G水平。
HDN的发病率随着母体内的IgG类血型抗体水平增高而增大, 所以对母体IgG-A (B) 和抗-D效价进行有效的检测, 可避免免疫性溶血的发生, 有利于早期诊断和治疗。我院采用微柱凝胶免疫试剂卡检测IgG血型抗体效价孕妇进行产前干预治疗, 可明显降低HDN的发病率。
摘要：目的 探讨对孕妇血清中IgG类血型抗体效价与新生儿溶血病 (HDN) 之间的关系, 对孕妇血清中血型抗体效价的检测, 了解IgG抗-A (B) 和抗-D水平在孕妇中的分布情况, 为预防及治疗HDN提供重要的试验依据。方法 采用微柱凝胶技术分别分别对241例O型血孕妇和7例RhD阴性血孕妇血清gG抗-A (B) 和抗D水平做出检测。结果 在所检测的241例O型血孕妇中, 配偶血型组合 (O-A) (、O-B) 、 (O-AB) 的例数116、102、和23, 其中IgG抗-A测定有139, 抗体效价≥64有36例, 异常检出例占总数的14.9% (36/241) , IgG抗-B测定有125例, 效价≥64有45例, 异常检出例占总数的18.6% (45/241) 。其中19例gG抗-A (B) 效价≥64, O型血孕妇所生新生儿中, 有4例患HDN, 阳性率占21.1%, 7例gG抗-A (B) RhD阴性血孕妇血清中1例检出gG抗-D抗体, 抗体检出率占14.3%。结论 HDN的发病率随着母体内的IgG类血型抗体水平增高而增大。
关键词：微柱凝胶技术,血型IgG抗体效价,新生儿溶血病
参考文献
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血型不规则抗体检测 篇5
1 材料与方法
1.1 材料
(1) 上海血液生物医药有限责任公司生产的抗A、抗B血型定型试剂 (单克隆抗体) 。 (2) 自配0.2mol/L 2-巯基乙醇 (2-Me) :称取2-Me80mg, 溶于10m L pH7.4磷酸缓冲液中[3]。 (3) 生产的微柱凝胶Coombs卡。 (4) 2%A/B型红细胞悬液 (取3份无溶血、无脂血的A型和B型献血员血液混合后以生理盐水洗涤3次, 取沉淀物以生理盐水配制为2%的红细胞悬液) 。 (5) 血型血清多用离心机, 37℃专用免疫微柱孵育器等。
1.2 检测方法
(1) 阳性质控物的定值:取以上批号的抗A和抗B血型定型试剂0.05mL, 加入0.35mL生理盐水混合, 置37℃孵育30min, 然后倍比稀释, 稀释度为1∶16~1∶2048, 使用经校准的移液管、新鲜配制2%A型和B型红细胞悬液, 在最佳实验条件下以微柱凝胶抗人球蛋白卡连续30次测定其抗A和抗B的效价, 以2+为滴度的判定终点。 (2) 阴性质控物的定值:取以上批号的抗A和抗B血型定型试剂0.05mL, 加入新鲜配制0.2mol/L 2-巯基乙醇 (2-Me) 0.35mL混合, 置37℃处理30min。在最佳实验条件下以微柱凝胶法连续30次测定其抗A和抗B的效价。
1.3 将定值后的质控物用于常规检测
将定值后的阳性和阴性质控物插入日常孕妇血清IgG抗A、抗B抗体测定的标本中按操作规程进行测定, 每周测定2次, 共测定10周。
1.4
实验数据以SPSS分析软件进行数据统计。
2 结果
用微柱凝胶法连续30次测定IgM单克隆抗体抗A、抗B血型定型试剂作为阳性质控物的定值结果见 (表1) ;阴性质控物定值以红细胞不出现凝集, 全部沉积在微柱凝胶底部为阴性, 用微柱凝胶法连续30次测定IgM单克隆抗体抗A、抗B血型定型试剂的测定结果均为阴性。
将定值后的质控物用于常规检测的结果:将定值后的阳性和阴性质控物插入日常孕妇血清IgG抗A、抗B抗体测定的标本中按操作规程进行测定, 每周测定2次, 共测定10周 (表2) 。
3 讨论
新生儿溶血病 (HDN) 是由于胎儿与母体的血型不合引起的, 症状的轻重取决于母体抗体的滴度。如果不及时治疗, 将留下永久脑损伤后遗症, 严重者危及生命。
大量的免疫血液学试验证明, 只有分子量较小的Ig G免疫抗体能通过胎盘进入胎儿体内, 因此也只有Ig G类抗体可以造成新生儿溶血病[4]。由于免疫产生的血型抗体多数为Ig G抗体, 而天然存在的血型抗体多数为Ig M抗体, 因此天然存在的Ig M类的抗体不能通过胎盘引起新生儿溶血病。造成ABO-HDN的抗体主要是IgG抗-A、IgG抗-B及IgG抗-AB, O型母亲的血清或血浆中天然就存在Ig G抗体, 很容易引起新生儿溶血病[1]。因此, 从理论上来说, 用于检测孕妇血清中的ABO血型抗体实验的质控物应采用Ig G。但目前的血型定型试剂, 无论是采用献血者血清制作的标准血清, 还是动物免疫血清或单克隆抗体, 均为Ig M类抗体, 近年有机构试开始用Ig A类抗体作为血型定型试剂[5], 预实验表明, Rh D (Ig G) 定型试剂的效价低, 稳定性较差, 价格昂贵等, 且未在临床实验室普及使用, 因此目前仍以Ig M类抗体的血型定型试剂为主。
从本文的实验结果来看, 采用按国家生物制品标准生产的单克隆IgM抗A/抗B血型定型试剂作为质控物, 经过以生理盐水系列稀释并进行与测定标本相同的实验操作后, 可观察到与微柱凝胶法测定抗A和抗B的效价相同的阳性判断终点“2+” (大部分红细胞沉积在微柱底部, 剩余红细胞凝块留在微柱凝胶的中间, 无红细胞凝集于凝胶之上) , 表明此抗A/抗B血型定型试剂可作为有效的阳性质控物。同时, 经2-Me处理后的抗A/抗B血型定型试剂所得实验结果均为阴性, 表明此抗A/抗B血型定型试剂可作为有效的阴性质控物。
定量分析的室内质控最常用的方法是Levey-Jin-ning控制图法, 本实验为滴度测定, 属于半定量的试验。半定量试验的室内质控允许范围可参照秦晓光所采用的滴度测定质控允许波动范围标准为不超过几何均数的上、下一个滴度确定[7]。质控物的定值先用血型定型试剂在最佳条件下进行多于20次测定, 将所得滴度计算其几何均数及标准差并按秦晓光所提出的方法确定质控范围。在本文的实验中, 抗A血型定型试剂几何均值为1∶2001, 抗B血型定型试剂几何均值为1∶630, 以此值正负一个稀释度作为质量控制的允许波动范围, 抗A为1∶1024~1∶2048, 抗B为1∶512~1∶1024。在日常实验中, 若有质控标本的滴度超出这个范围, 可应视为失控。
本文采用的质控物是上海血液生物医药有限责任公司生产的抗A、抗B血型定型试剂 (单克隆抗体) , 主要成分为分泌抗人A型和抗人B型血型抗原单抗的杂交瘤细胞培养上清液, 是日常血型定型的试剂, 保质期为2年。对其进行稳定性观察, 将定值后的阳性和阴性质控物插入日常孕妇血清Ig G抗A、抗B抗体测定的标本中按操作规程进行测定, 每周测定2次, 共测定10周。同批号的抗A血型定型试剂的效价判断终点范围均在1:1024~1:2048之间, 同批号抗B血型定型试剂在1:512~1:1024之间。表明血型定型试剂只要按其要求保存, 可在70天的时间内保证有良好的稳定性, 并符合临床化学控制品的要求[8]。
本实验采用微柱凝胶法, 在1986年由Lappierre建立, 此法易于操作标准化、自动化、判读客观和可靠、敏感度高、结果可长期保存、有利于大量标本操作等优点[9]。但若运输过程中保存条件不良而造成抗人球蛋白卡的变质、红细胞悬液含有其他颗粒物质或本身出现污染变质、所用试剂发生了变化、血样本的血浆蛋白异常等因素会干扰实验结果的判读。
试验中所使用的2%A/B型红细胞悬液是取3份无溶血、无脂血的A型和B型献血员血液混合后以生理盐水洗涤3次, 取沉淀物以生理盐水配制为2%的红细胞悬液, 在实验前配制, 以保证其红细胞较为新鲜及不受细菌的污染, 并保持有稳定的抗原性。若阳性质控物在控, 表明实验所用红细胞悬液处于稳定状态。若阳性质控物失控, 可考虑所用红细胞悬液处于不稳定状态, 影响实验结果的判读;若阴性质控物结果出现明显双群, 可考虑为所用红细胞悬液含有颗粒物质, 形成凝块, 应寻找红细胞悬液是否不符合实验要求。
本实验使用0.2mol/L 2-巯基乙醇 (2-Me) 用作灭活IgM的试剂, 其具有专一的特异性, 只破坏Ig M抗体, 但不破坏Ig G抗体, 因此不论Ig M抗体效价高低, 用过量的巯基试剂均可灭活。目前用于灭活Ig M的2-Me有商品化的产品供应, 也可按有关文献所介绍的方法进行配制。但由于巯基试剂的缺点, 见光易分解, 试剂容易失效, 保存期短, 应对其质量进行监控。若实验中2-Me可灭活血型定型试剂中的高浓度Ig M而使结果出现阴性, 则表明本次实验中2-Me质量仍处于稳定的状态。反之, 若阴性质量控制液出现阳性结果, 则表明2-Me没有处于最适比和反应条件中, 或2-Me本身的质量发生了改变, 应更换或重新配制试剂。
本实验过程中, 加样、稀释等步骤也需要进行监控, 如移液器及吸头是否准确, 操作人员用移液器进行加样、稀释时的手法是否规范统一, 稀释时的生理盐水放置时间是否过长导致蒸发, 反应时间是否过短, 孵育温度是否合适等。在本实验中若出现质控品失控, 在排除了2-Me和红细胞悬液等的因素后, 可考虑为以上提及的各种因素, 应重新进行测定。
4 结论
综上所述, 采用IgM单克隆抗体抗A和抗B血型定型血清作为质控物可对微柱凝胶法检测孕妇ABO血型抗体IgG进行监控, 为实验结果提供保证, 避免产生错误的结果误导临床诊疗。
参考文献
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血型不规则抗体检测 篇6
1 资料与方法
1.1一般资料
选择2012 年1 月~2013 年1 月杭州市第一人民医院就诊的夫妇血型不合的O型孕妇380 例为研究对象, 丈夫为A型者测IgG抗-A, 丈夫B型的测IgG抗-B, 丈夫AB型的同时测IgG抗-A和抗-B。 孕龄24~40 周;孕妇年龄21~40 岁。 采用凝聚胺法再次测定抗体效价, 为避免RH系统的干扰, 所选孕妇均为RHD阳性, 且不规则抗体筛检阴性。
其中按照ABO血型检测系统, 入选孕妇中首次妊娠者共计238 例, 既往有妊娠史包括流产史者共142 例; 按照孕妇年龄分为21 ~30 岁组 (126 例) 和>30~40 岁组 (254 例) 。
1.2 仪器
BASO血库专用离心机;DiaMed (达亚美) 凝胶卡专用孵育器和离心机。
1.3 试剂
0.01 mol/L二硫苏糖醇 (DTT) :取0.77 g DTT溶于500 mL生理盐水;DiaMed公司的2 号稀释液和Liss/Coombs凝胶卡;0.8%及5%的A型和B型红细胞悬液用献血员血液自制;上海血液生物医药公司的抗A抗B定型试剂、IgM抗D试剂、筛选细胞;珠海BASO公司凝聚胺试剂盒。
1.4 方法
1.4.1 微柱凝集法孕妇血清200 μL+0.01 mol/L的DTT溶液200 μL, 混匀后置37℃孵育30 min, 以破坏IgM类抗体。 另取洁净试管8 支, 编号1~8, 第1 管加达亚美2 号稀释液300 μL, 其余7 管各加稀释液200 μL。取孵育后血清100 μL加于第1 管, 混匀, 取出200 μL加入第2 管, 依次倍比稀释, 第8 管取出200 μL弃去。 这样1~8 管的稀释度分别是1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024。 取出达亚美Liss/Coombs卡, 做好标记, 各孔加入0.8%的A型 (或B型) 红细胞悬液50 μL, 再分别加1~8 号管中不同稀释比的液体25 μL。将加好样的凝胶卡置于专用孵育器内, 37℃孵育15 min。将孵育好的凝胶卡置于专用离心机, 1000 r/min离心10 min。 判读结果:1~8 管的IgG抗-A (抗-B) 效价分别为8、16、32、64、128、256、512 和1024。
1.4.2 凝聚胺法取洁净小试管10 支, 编号1~10, 第1 管加0.01 mol/L的DTT溶液100 μL及孕妇血清100 μL, 混匀后37℃孵育30 min。 其余9 管各加等渗盐水100 μL。 从孵育后第1 管吸取100 μL加入第2管混匀, 吸取100 μL加入第3 管, 依次做倍比稀释, 第10 管取100 μL弃去。 各管分别加5%A型 (或B型) 红细胞悬液1 滴, 混匀, 各加低离子液 (LIM) 0.65 mL, 混匀, 各加凝聚胺 (Polybrene) 溶液2 滴, 混匀后3400 r/min离心10 s。 倒去上清液, 但不能沥干, 管底约需残留0.1 mL液体。轻轻摇动, 观察红细胞是否凝集, 若不凝集则实验失败。 最后滴加悬浮液 (resuspending) 2 滴, 轻摇试管, 观察凝集是否散开, 肉眼为不凝者需镜检核实。 以最高稀释度凝集管确定抗体效价, 1~10 管分别是2、4、8、16、32、64、128、256、512、1024。
1.4.3 血型鉴定ABO血型鉴定、RHD血型及不规则抗体筛检根据操作规程[2]。
2 结果
2.1 孕妇血清IgG-A或IgG-B抗体效价测定
在380 例ABO血型不合孕妇中, > 1 次妊娠孕妇检出IgG抗A (B) 效价≥ 1∶64 者比例[77.5% (110/142) ]多于1 次妊娠者[39.5% (94/238) ], 差异有高度统计学意义 (P < 0.01) ;年龄> 30~40 岁孕妇IgG抗A (B) 效价≥ 1:64 者[61.4% (156/254) ]多于21~30 岁孕妇[38.1% (48/126) ], 差异有高度统计学意义 (χ2=9.24, P < 0.01) 。 见表1。
2.2 两种检测方法在IgG抗A (B) 效价中的效率比较
380 例血型不合孕妇中, 微柱凝集法检测IgG抗A (B) 效价≥ 1∶64 者共352 例, IgG抗A (B) 效价< 1∶64者28 例, 凝聚胺法检测IgG抗A (B) 效价≥1∶64 者共302 例, < 1∶64 者78 例, 两者≥1∶64 者所占比例比较, 差异有统计学意义 (χ2=4.87, P < 0.05) 。 见表2。
注:与凝聚胺法比较, *P < 0.05
3 讨论
HDN起源于胎儿从父亲方继承了母亲方所没有的红细胞抗原, 这些抗原可能受到来自母血的免疫抗体的攻击, 因为母体的IgG类抗体可以自由通过胎盘屏障, 使胎儿红细胞遭受破坏, 出现黄疸、水肿、肝脾肿大、贫血, 甚至死胎、新生儿死亡等溶血症状。 在所有抗体中, 只有IgG类抗体能够通过胎盘, 因此只有IgG才可能引发HDN。 造成ABO血型系统HDN的抗体主要是IgG抗-A和IgG抗-B, 这些抗体常常无需经过明显的免疫刺激就可“天然”存在于一些O型人体内, 所以O型孕妇第一胎就可能发生HDN, 这有别于Rh系统的HDN[3]。 IgG抗-A (B) 的浓度 (效价) 是影响ABO HDN严重程度的重要因素, 一般认为抗体效价≥ 64 才可能造成HDN, 所以, 当母体抗体效价≥64 时, 发生HDN的可能性就较高了。当然, HDN的严重程度还受新生儿ABO抗原的强弱、 不同IgG亚类和胎盘功能等因素影响[4]。
凝聚胺 (polymatching) 法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度, 减少红细胞周围的阳离子云, 促进血清中的抗体与红细胞相应抗原结合, 再加入带正电荷的高价阳离子多聚物一凝聚胺, 中和红细胞表面存在的大量负电荷, 缩短细胞间距, 形成可逆的非特异性聚集, 并使IgG型抗体能直接凝集红细胞。 加入中和液后, 仅由凝聚胺引起的非特异性聚集, 会因电荷中和而分散, 而由抗体介导的特异性凝集则不会散开[5]。 本试验是红细胞膜抗原与抗体在凝胶介质中发生的凝集反应, 通过具有分子筛作用的凝胶颗粒构成的胶体介质, 使游离红细胞和聚集红细胞得以分离。手工凝聚胺可用于不完全抗体的测定与鉴定及交叉配血。本法的特点是:灵敏度比抗球蛋白法高1~20倍, 速度快, 准确度高于酶试验[6]。 微柱凝集作为一项免疫学检测新技术, 是凝胶过滤技术和抗原抗体反应的结合, 在欧美等发达国家已作为常规性检测技术应用于临床[7], 由于凝胶颗粒具有分子筛作用, 抗原抗体反应后的红细胞通过离心经过微柱, 无IgG结合的红细胞穿过凝胶到达底部, 而红细胞上若有IgG抗体结合则会被凝胶中的抗IgG拉住, 红细胞被阻止在凝胶柱上层或中间。 本法有操作简便、结果准确、敏感性高、标本量少、易标准化等诸多优点[6]。 具体表现为:①简便。操作如同试管法及玻片法一样简单、方便, 样本不需要经过洗涤, 对阴性结果不需要确证实验, 适用于大量标本检测, 解决了抗球蛋白试验因程序复杂耗时较长而未能在临床常规应用的问题。多份检测标本一次离心即出结果, 有利于临床大量标本应用, 单份标本多项指标一次离心出结果, 简化了实验程序。②准确。结果清晰明确, 可重复性强, 将凝集结果从传统的显微镜下平面识别模式转换至卡式立体肉眼判断, 避免因经验不足对结果判断的影响。 ③敏感。 微柱凝集法对临床不完全抗体的检测敏感性恰到好处, 假阳性和假阴性率均低。④结果保存时间长。室温条件下, 试验结果即标本原始反应格局一般可保存数日至数周。其结果还可以拍照存档, 数据可以永久保存, 并可以远程传输, 甚至允许远程多方会诊。⑤标本用量少。其标本量仅为传统试管法的1/10~1/5, 尤其有利于新生儿及某些特殊血液病标本的检测。 ⑥标准化。 微柱凝集卡、检测试剂、专用离心机、判读仪及工作程序和结果判定均易于规范化、标准化。⑦安全。整个操作过程能够最大限度减少接触血液标本及病原微生物的机会, 减少医源性感染。但是, 微柱凝集技术也有其局限性, 由于需严格按照试剂盒操作规程操作, 使得工作人员的依赖性增大, 不利于专业技术的积累和提高。 微柱凝集检测系统是商业化产品, 因此其成本较传统的血清学试验 (如凝聚胺技术) 高出许多。微柱凝集抗人蛋白试验及微柱凝胶免疫检测技术的本质是血凝试验, 这在理论上为制备抗原抗体包被的红细胞为指示红细胞, 以间接血凝试验来检测红细胞抗原抗体以外的其他血液细胞、肿瘤标志物、病原微生物, 以及机体其他可溶性抗原抗体, 如对药物抗体、自身抗体等的检测都提供了比传统血凝试验更加敏感、准确、简便的方法。所以说微柱凝集技术必将在临床医学各个领域有更为广阔的发展。
尽管凝聚胺法与微柱凝集法都是检测不完全抗体的敏感方法, 但本次比对发现, 在应用于IgG抗体效价方面, 微柱凝集法的敏感度远高于凝聚胺法, 绝大多数标本的结果相差1~2 个量级, 差异程度远高于其他研究结果[8,9,10,11]。 本研究结果中, 妊娠次数> 1 次的孕妇其产生IgG抗A (B) 效价≥ 1∶64 的比例高于仅有1 次妊娠者, 且>30~40 岁间的孕产妇其出现IgG抗A (B) 效价≥ 1∶64 者比例高于21~30 岁者, 说明高龄及有多次妊娠的产妇其出现ABO-HDN的概率较高, 临床上应尤其对符合上述特点的孕妇定期进行IgG抗A (B) 效价检查, 对IgG抗A (B) 效价≥ 1∶64 者及时采取相应预防及治疗手段。未发现两种方法的结果差异性在检测不同抗体 (抗-A与抗-B) 中有所不同。快速准确测定IgG抗体效价, 能在预测ABO HDN的发生及疾病程度上为临床提供有效的信息。临床上通常以效价64 作为有可能发生HDN的临界指标, 更为敏感的微柱凝集法能够更早发现孕妇IgG抗体的异常, 可尽早医学干预, 因而也具有更大的临床价值。鉴于传统的凝聚胺法与微柱凝集法灵敏度的较大差异, 测定的结果不具直接可比性, 建议实验室建立两种方法各自不同的参考值。
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微柱凝胶检测不规则抗体临床研究 篇7
1 资料与方法
1.1 一般资料
本院2008年2月至2009年12月申请输血的患者1020例。男610例，女410例，年龄2～72岁。
1.2 标本采集
受血者输血标本采集EDTAK2抗凝血3～5ml，供血者标本由血袋连接血辫中留取。
1.3 仪器与试剂
仪器ID-Centrifuge12SII、ID-Incubator37SI微柱凝胶工作测试系统、微柱凝胶检测卡 (抗A、抗B、抗D、A型红细胞、B型细胞、Cit管) 、抗体筛选细胞由达亚美 (Diamed) 公司提供，抗人球蛋白试剂、人ABO血型反定型细胞试剂由上海血液生物医药有限公司提供，聚凝胺试剂由台资珠海贝索生物技术有限公司提供。
1.4 方法
微柱凝胶检测不规则抗体筛查:向已标示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ微柱凝胶管中分别加入抗体筛选细胞悬液50μl及受血者血浆25μl，置37℃孵育15 min。取出1000 r/min离心5 min，观察结果。以红细胞全部沉于微柱底部为阴性，聚于微柱上面或凝胶中部者为阳性。对检出的阳性标本再进行抗体特异性鉴定。
采用间接抗人球蛋试验对阳性标本进行确证: (1) 取试管3支，标明受检管、阳性对照管、阴性对照管; (2) 按下表将各反应物加入相应试管内; (3) 混匀，置37℃水浴1 h，用生理盐水洗涤3次。末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去，每管各留红细胞悬液1滴; (4) 每管各加适当浓度抗人球蛋白血清1滴，混匀，以1000 r/min离心1min，观察结果; (5) 结果判定。阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性，表示受检血清中有不完全抗体 (或受检红细胞上有相应抗原) 。见表1。
2 结果
1020例中2例不规则抗体筛查阳性，采用间接抗人球蛋白试验确证，微柱凝胶法与间接抗人球蛋白法两者实验结果相同。抗体筛查特异性见表2。
3 讨论
临床采用微柱凝胶免疫法检测受血者输血前不规则抗体，检出率为0.19% (2/1020) ，与间接抗人球蛋白检测方法比较，两者结果相同。红细胞不规则抗体筛查的经典方法为抗人球蛋白法，此方法操作复杂，不易判读结果，因此在临床开展受到限制，近年发展起来的微柱凝胶免疫检测技术是在传统的抗人球蛋白试验的基础上发展发起来的新型检测方法，在国外输血界已成为常规检测方法[1,2]，已被国际公认为标准检测方法。此方法免除了传统间接抗人球蛋白试验反复洗涤红细胞的操作，试验简便快速、灵敏度高、结果稳定可靠，反应清晰判断结果准确、易于标准化、一卡六管多项检测。临床应用比间接抗人球蛋白灵敏度高2～7个滴度，实验时间可缩短50%[3]。
综上所述，输血前受血者进行抗体筛查有助于血液的选择。可防止因输注含有与抗体相应抗原的血液而引起溶血性输血反应，保证临床输血安全性[4]。本院采用微柱凝胶免疫技术检测不规则抗体、血型鉴定、交叉配血试验，体会到此检测方法集快速和准确性为一体，简化了操作过程，一卡可检测输血相容多个项目，最大限度消除了人为判断因素造成的实验误差，可捕捉到十分微弱的抗原抗体反应，减少了非特异性和假性反应，值得推广应用。该方法应用对保证临床输血安全、减少溶血性输血反应起到了非常重要的作用。
摘要：目的 输血前抗体筛查可发现具有临床意义的不规则抗体, 避免受血者因输血引起的溶血性反应。方法 采用微柱凝胶法对1020例受血者进行不规则抗体筛查, 选用抗球蛋白方法进行鉴定, 用以观察不规则抗体检出的阳性率。结果 不规则抗体筛查阳性2例, 检出率为0.19%。结论 在输血前受血者进行抗体筛查有助于血液的选择。可防止因输注含有与抗体相应抗原的血液而引起溶血性输血反应, 保证临床输血安全性具有重要的意义。
关键词：不规则抗体,微柱凝胶法,血型,临床输血
参考文献
[1]Cate JC, Reilly N.Evluation and implementation of the gel test for indirect antiglobulintesting in a community hospital laboratory Arch Pathol Lab Med, 1999, 123:693.
[2]Langston MM, procter JL, Cipolone KM, et al.Evluation of the gel system for ABO grouping and D typing.Transfusion, 1999, 39:300-368.
[3]林甲进, 朱碎永.微柱凝胶法在输血前抗体筛检中的应用.临床输血与检验杂志, 2002, 12 (4) :41.