高致病性禽流感防治

高致病性禽流感防治（精选10篇）

高致病性禽流感防治 篇1

禽流感是禽流行性感冒的简称, 是由A型禽流行性感冒病毒引起的一种禽类 (家禽和野禽) 传染病。根据禽流感病毒致病性的不同, 分为高致病性禽流感 (HPAI) 和低致病性禽流感 (LPAI) 。HPAI表现为较严重的全身性、出血性、败血性症状, 死亡率较高;LPAI表现为轻度的呼吸道症状、消化道症状, 产蛋下降, 死亡率较低。高致病性禽流感被世界动物卫生组织 (OIE) 定为A类传染病, 我国规定为一类动物传染病。本文仅就禽流感病毒病的临床症状、诊断技术及疫苗研发现状和综合防治措施问题等以科普知识问答形式介绍如下, 希望能够对广大基层养殖户有所帮助。

1 什么是流感?什么是禽流感?

流感是由一类流感病毒引起的感染症或疾病综合征, 流感病毒感染人称作人流感, 感染禽类称作禽流感, 还有猪流感和马流感等。

流感病毒是一种属于正粘病毒科的负链RNA病毒, 其基因组由8个单股RNA片段构成, 共编码10个与病毒结构和功能有关的蛋白质。其中的病毒粒子内部蛋白核蛋白 (NP) 和基质蛋白 (M) 属于比较保守的病毒结构蛋白, 依其可将流感病毒分成A、B和C三个型, B和C型流感仅存在于人类。

A型流感依据病毒表面结构蛋白血凝素 (HA) 和神经胺酸酶 (NA) 抗原性的不同, 分为不同的血清亚型。现已发现16种不同的H抗原型和9种不同的N抗原型, 故理论上共有144种亚型组合。

16种H型和9个N型均可以在禽体内发现, 但大多数禽病毒对鸡是低致病性的, 只有H5和H7两个亚型被高度重视, 这是因为历史上世界各国发生的高致病性禽流感均是由H5或H7亚型病毒所致, 当然, 不是所有的H5或H7亚型禽流感病毒都表现出高致病性。可以感染人的流感病毒, 以前仅发现H1、H2和H3 3个H型, 近几年, 发现H5、H7和H9亚型也可以感染少量人群, 特别是H5亚型流感病毒可以引起严重发病甚至死亡。

通常认为禽流感病毒是人流感病毒的庞大基因库, 是人流感病毒发生变异的新基因的来源, 这种联系是通过中间宿主 (如猪) 来实现的。因为人和禽流感病毒均可感染猪, 对于两者来讲, 猪就成了一个混合器, 由此可能产生出能感染人的新流感病毒, 例如2009年袭击全球的人H1N1流感病毒就与猪、禽流感病毒关系密切。

2 禽流感有哪些临床表现及病理变化?

禽流感的临床症状十分复杂, 根据感染禽的种类 (鸡、火鸡、鸭、鹅等) 、年龄、性别以及感染病毒亚型类别的不同, 表现出的症状多种多样。症状可涉及呼吸道、消化道、生殖道及神经系统。根据感染病毒致病性高低、传播途径、禽种类的不同, 禽流感感染的潜伏期短到几个小时, 长到几天不等, HPAI潜伏期较短或无潜伏期, 以突然死亡和高死亡率为主要特征, 病程较长者可出现头和面部水肿, 冠和肉垂发绀, 脚鳞出血等症状。发病率和死亡率常可达100%。剖检以出血性病变为主, 常见的有喉头气管出血, 心冠脂肪出血, 直肠、泄殖腔出血, 扁桃体出血;另外, 腺胃乳头出血、溃疡, 肝、脾、肾肿大, 头部、眼睑浮肿, 肉冠、肉垂发绪、充血、坏死。蛋鸡的卵泡畸形, 甚至萎缩。组织学病变为水肿、充血和血管周围淋巴细胞管套的形成, 主要表现在心、脾、肾、脑及肉垂、消化道、卵巢等脏器和组织。心、脾、肾有实质性变化和坏死。脑的病变为坏死灶、血管套、神经胶质化等一系列非化脓性脑炎的变化。

3 禽流感通过什么途径传播?

感染禽可从呼吸道、眼结膜和泄殖腔排毒, 病毒可通过感染禽和易感鸟的直接接触和/或间接接触而传播。感染禽可从泄殖腔排毒, 并通过接触媒介物来传播病毒, 与病禽接触的鸟类、哺乳动物、饲料、饮水、设备、补给品、笼子、衣服、运输车、昆虫、共用设备、运输的人、活鸟市场本身等都可能成为携带者。有大量证据表明AIV可水平传播, 但没有证据显示AIV能垂直传播, 然而, 值得注意的是当母鸡被感染时, 病毒可在蛋的表面和内部存在。

4 对禽流感病毒病的诊断技术有哪几种?

禽流感临床症状和剖检病变变化较大且无特征性, 并与新城疫症状极为类似, 因此根据临床症状和病理变化很难做出准确诊断, 所以多年来禽流感的确诊一直依赖于病毒的分离鉴定, 但是为防止病毒扩散, 该工作需要在P3级实验室内完成。其它常用的实验室诊断包括检测病原的RT-PCR、荧光定量RT-PCR试验, 检测血清抗体的血凝抑制和神经氨酸酶抑制试验, 以及胶体金、间接酶联免疫吸附试验 (ELISA) 、间接免疫荧光试验 (IFA) 等。

5 高致病性禽流感疫苗有哪些?

自从1996年从广东省鹅体内分离到H5N1亚型高致病力禽流感病毒后, 研究人员就开始疫苗研发工作。近几年, 先后成功研制出多种疫苗, 包括H5N2亚型灭活疫苗、重组H5N1亚型灭活疫苗、H5N1亚型禽痘重组活载体疫苗和新城疫载体禽流感活疫苗。

H5N2亚型灭活疫苗是最早开始研制的疫苗, 该疫苗的种毒株是自然分离到的H5亚型弱毒株。2004年禽流感流行时期, 我国用该疫苗对家禽进行强制免疫, 很快控制了高致病禽流感疫情的进一步蔓延。但是由于该疫苗毒株在鸡胚上生长能力不够理想, 国家禽流感参考实验室很快又通过反向遗传技术得到新的具有低致病性和高生长能力的理想疫苗毒株, 研制出重组H5N1亚型灭活疫苗。该疫苗包含GS/GD/1/96的HA和NA基因, 抗原性与现地流行毒株更加匹配, 免疫后产生的HI效价和抗体持续期都明显好于H5N2亚型灭活疫苗, 免疫保护性更好。重组H5N1亚型灭活疫苗从2004年末开始在现地广泛使用, 并且出口越南、蒙古、埃及等地。

除灭活疫苗外, 国家禽流感参考实验室还研制出两种活载体疫苗, 一种是用禽痘病毒作为载体, 插入禽流感病毒的HA和NA基因, 通过禽痘病毒在家禽体内复制, 表达HA和NA蛋白, 诱导机体产生免疫保护抗体;一种是用新城疫La Sota毒株病毒作为载体, 通过反向遗传操作, 插入流感病毒HA基因, 构建的新城疫活载体禽流感疫苗。新城疫作载体的抗禽流感疫苗具有很多优点, 如生产工艺简单, 免疫接种容易, 可以同时预防禽流感和新城疫两种重要传染病等。除此以外, 还有一种处在研制阶段的抗禽流感新型疫苗———DNA疫苗, 又称基因疫苗或者核酸疫苗, 是将携带禽流感病毒HA基因的真核表达质粒DNA通过肌肉注射或基因枪直接导入机体细胞, 使外源基因借助于机体内源性表达系统表达并提呈给宿主免疫系统, 诱导产生特异性的免疫应答反应, 从而达到免疫目的的新型基因工程疫苗。DNA疫苗同其它疫苗相比较有以下优点:核酸疫苗的免疫原单一, 只有编码所需抗原的血凝素基因被导入细胞得到表达, 载体本身没有抗原性, 无散毒和病原毒力返强的威胁;与传统的全病毒灭活疫苗相比, DNA疫苗防制H5亚型高致病力禽流感具有免疫保护期长、不干扰常规血清学免疫监测的突出优点。

6 对高致病性禽流感防治措施有哪些?

我国对高致病性禽流感的防控实行的是免疫和扑杀相结合的综合防治政策, 根据这一策略国家制订了一系列高致病性禽流感的预防、控制、扑灭等都制定了严格的措施和程序, 包括:疫情报告、疫情诊断、疫点疫区的隔离封锁、扑杀、消毒、紧急免疫接种、紧急应急体系、经费的来源和保证等。这些措施被相关国际组织和大多数国家认为是行之有效的。

养殖场要注意的防范措施有远离居民区、集贸市场、交通要道以及其他动物生产场所和相关设施;不从疫区引进种蛋和种禽;对过往车辆以及场区周围的环境, 孵化厅, 孵化器, 鸡舍笼具, 工作人员的衣帽和鞋等进行严格的消毒;采取全进全出的饲养模式, 杜绝鸟类与家禽的接触;在养殖场中应专门设置供给工作人员出入的通道, 对工作人员及其常规防护物品应进行可靠的清洗及消毒;严禁一切外来人员进入或参观动物养殖场区。在受高致病力流感威胁的地区应在当地兽医卫生管理部门的指导下进行疫苗的免疫接种, 定期进行血清学监测以保证疫苗的免疫预防效果确实可靠。

良好的饲养管理条件是预防禽流感的关键。家禽不应与猪一起混养, 因为家禽的流感病毒可以感染给猪, 而人的流感病毒也能传染给猪。当这两种不同的病毒粒子共同感染一个细胞时, 容易产生新型流感病毒粒子, 这种新型流感病毒常能形成大的流行, 而造成很大的危害。另外, 鸡也不宜与鸭鹅等水禽混养, 因此水禽中各种亚型的流感病毒的携带率很高, 有的不表现任何临床症状, 其粪便中的病毒感染鸡只后, 可造成禽流感的发生与流行, 从而导致严重的经济损失。

高致病性禽流感防治 篇2

高致病性禽流感（Highly Pathogenic Avian Influenza, HPAI）是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的以禽类为主的烈性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物传染病，我国将其列为一类动物疫病。

为预防、控制和扑灭高致病性禽流感，依据《中华人民共和国动物防疫法》、《重大动物疫情应急条例》、《国家突发重大动物疫情应急预案》及有关的法律法规制定本规范。适用范围

本规范规定了高致病性禽流感的疫情确认、疫情处置、疫情监测、免疫、检疫监督的操作程序、技术标准及保障措施。

本规范适用于中华人民共和国境内一切与高致病性禽流感防治活动有关的单位和个人。诊断

2.1 流行病学特点

2.1.1 鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、雉鸡、鹧鸪、鸵鸟、孔雀等多种禽类易感，多种野鸟也可感染发病。

2.1.2 传染源主要为病禽（野鸟）和带毒禽（野鸟）。病毒可长期在污染的粪便、水等环境中存活。

2.1.3 病毒传播主要通过接触感染禽（野鸟）及其分泌物和排泄物、污染的饲料、水、蛋托（箱）、垫草、种蛋、鸡胚和精液等媒介，经呼吸道、消化道感染，也可通过气源性媒介传播。

2.2 临床症状

2.2.1 急性发病死亡或不明原因死亡，潜伏期从几小时到数天，最长可达21天；

2.2.2 脚鳞出血；

2.2.3 鸡冠出血或发绀、头部和面部水肿；

2.2.4 鸭、鹅等水禽可见神经和腹泻症状，有时可见角膜炎症，甚至失明；

2.2.5 产蛋突然下降。2.3 病理变化

2.3.1 消化道、呼吸道粘膜广泛充血、出血；腺胃粘液增多，2.3.2

2.3.3 输卵管的中部可见乳白色分泌物或凝块；卵泡充血、出血、萎缩、破裂,2.3.4脑部出现坏死灶、血管周围淋巴细胞管套、神经胶质灶、2.4 血清学指标

2.4.1 未免疫禽H5或H7的血凝抑制(HI)效价达到24及以上（附件1）；

2.4.2 禽流感琼脂免疫扩散试验（AGID）阳性(附件2)。2.5

2.5.1 反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测，结果H5或H7亚型禽流感阳性（附件4）；

2.5.2 通用荧光反转录-聚合酶链反应（荧光RT-PCR）检测阳性（附件6）；

2.5.3 神经氨酸酶抑制（NI）试验阳性（附件3）；

2.5.4 静脉内接种致病指数（IVPI）大于1.2或用0.2ml 1:10稀释的无菌感染流感病毒的鸡胚尿囊液，经静脉注射接种8只4-8周龄的易感鸡，在接种后10天内，能致6-7只或8只鸡死亡，即死亡率≥75%；

2.5.5 对血凝素基因裂解位点的氨基酸序列测定结果与高致病性禽流感分离株基因序列相符（由国家参考实验室提供方法）。

2.6 结果判定 2.6.1 临床怀疑病例

符合流行病学特点和临床指标2.2.1，且至少符合其他临床指标或病理指标之一的;非免疫禽符合流行病学特点和临床指标2.2.1且符合血清学指标之一的。

2.6.2 疑似病例

临床怀疑病例且符合病原学指标2.5.1、2.5.2、2.5.3之一。2.6.3 确诊病例

疑似病例且符合病原学指标2.5.4或2.5.5。3 疫情报告 3.1 任何单位和个人发现禽类发病急、传播迅速、死亡率高等异常情况，应及时向当地动物防疫监督机构报告。

3.2 当地动物防疫监督机构在接到疫情报告或了解可疑疫情情况后，应立即派员到现场进行初步调查核实并采集样品，符合2.6.1规定的，确认为临床怀疑疫情；

3.3 确认为临床怀疑疫情的，应在2个小时内将情况逐级报到省级动物防疫监督机构和同级兽医行政管理部门，并立即将样品送省级动物防疫监督机构进行疑似诊断；

3.4 省级动物防疫监督机构确认为疑似疫情的，必须派专人将病料送国家禽流感参考实验室做病毒分离与鉴定，进行最终确诊；经确认后，应立即上报同级人民政府和国务院兽医行政管理部门，国务院兽医行政管理部门应当在4个小时内向国务院报告；

3.5 国务院兽医行政管理部门根据最终确诊结果，确认高致病性禽流感疫情。疫情处置

4.1 临床怀疑疫情的处置

对发病场（户）实施隔离、监控，禁止禽类、禽类产品及有关物品移动，并对其内、外环境实施严格的消毒措施（附件8）。

4.2 疑似疫情的处置

当确认为疑似疫情时，扑杀疑似禽群，对扑杀禽、病死禽及其产品进行无害化处理，对其内、外环境实施严格的消毒措施，对污染物或可疑污染物进行无害化处理，对污染的场所和设施进行彻底消毒，限制发病场（户）周边3公里的家禽及其产品移动（见附件9、10）。

4.3 确诊疫情的处置

疫情确诊后立即启动相应级别的应急预案。4.3.1 划定疫点、疫区、受威胁区

由所在地县级以上兽医行政管理部门划定疫点、疫区、受威胁区。疫点：指患病动物所在的地点。一般是指患病禽类所在的禽场（户）或其它有关屠宰、经营单位；如为农村散养，应将自然村划为疫点。

疫区：由疫点边缘向外延伸3公里的区域划为疫区。疫区划分时，应注意考虑当地的饲养环境和天然屏障（如河流、山脉等）。

受威胁区：由疫区边缘向外延伸5公里的区域划为受威胁区。4.3.2 封锁

由县级以上兽医主管部门报请同级人民政府决定对疫区实行封锁；人民政府在接到封锁报告后，应在24小时内发布封锁令，对疫区进行封锁：在疫区周围设置警示标志，在出入疫区的交通路口设置动物检疫消毒站，对出入的车辆和有关物品进行消毒。必要时，经省级人民政府批准，可设立临时监督检查站，执行对禽类的监督检查任务。

跨行政区域发生疫情的，由共同上一级兽医主管部门报请同级人民政府对疫区发布封锁令，对疫区进行封锁。

4.3.3 疫点内应采取的措施

4.3.3.1 扑杀所有的禽只，销毁所有病死禽、被扑杀禽及其禽类产品； 4.3.3.2 对禽类排泄物、被污染饲料、垫料、污水等进行无害化处理；

4.3.3.3 对被污染的物品、交通工具、用具、禽舍、场地进行彻底消毒。

4.3.4 疫区内应采取的措施

4.3.4.1扑杀疫区内所有家禽，并进行无害化处理，同时销毁相应的禽类产品；

4.3.4.2 禁止禽类进出疫区及禽类产品运出疫区；

4.3.4.3 对禽类排泄物、被污染饲料、垫料、污水等按国家规定标准进行无害化处理；

4.3.4.4 对所有与禽类接触过的物品、交通工具、用具、禽舍、场地进行彻底消毒。

4.3.5 受威胁区内应采取的措施

4.3.5.1 对所有易感禽类进行紧急强制免疫，建立完整的免疫档案；

4.3.5.2 对所有禽类实行疫情监测，掌握疫情动态。

4.3.6 关闭疫点及周边13公里内所有家禽及其产品交易市场。4.3.7 流行病学调查、疫源分析与追踪调查

追踪疫点内在发病期间及发病前21天内售出的所有家禽及其产品，并销毁处理。按照高致病性禽流感流行病学调查规范，对疫情进行溯源和扩散风险分析（附件11）。

4.3.8 解除封锁 4.3.8.1 解除封锁的条件

疫点、疫区内所有禽类及其产品按规定处理完毕21天以上，监测未出现新的传染源；在当地动物防疫监督机构的监督指导下，完成相关场所和物品终末消毒；受威胁区按规定完成免疫。

4.3.8.2 解除封锁的程序

经上一级动物防疫监督机构审验合格，由当地兽医主管部门向原发布封锁令的人民政府申请发布解除封锁令，取消所采取的疫情处置措施。

4.3.8.3 疫区解除封锁后，要继续对该区域进行疫情监测，6个月后如未发现新病例，即可宣布该次疫情被扑灭。疫情宣布扑灭后方可重新养禽。

4.3.9 对处理疫情的全过程必须做好完整详实的记录，并归档。5 疫情监测

5.1 监测方法包括临床观察、实验室检测及流行病学调查。5.2 监测对象以易感禽类为主，必要时监测其他动物。5.3监测的范围

5.3.1 对养禽场户每年要进行两次病原学抽样检测，散养禽不定期抽检，对于未经免疫的禽类以血清学检测为主；

5.3.2 对交易市场、禽类屠宰厂（场）、异地调入的活禽和禽产品进行不定期的病原学和血清学监测。

5.3.3 对疫区和受威胁区的监测

5.3.3.1 对疫区、受威胁区的易感动物每天进行临床观察，连续1个月，病死禽送省级动物防疫监督机构实验室进行诊断，疑似样品送国家禽流感参考实验室进行病毒分离和鉴定。

解除封锁前采样检测1次，解除封锁后纳入正常监测范围； 5.3.3.2 对疫区养猪场采集鼻腔拭子，疫区和受威胁区所有禽群采集气管拭子和泄殖腔拭子，在野生禽类活动或栖息地采集新鲜粪便或水样，每个采样点采集20份样品，用RT-PCR方法进行病原检测，发现疑似感染样品，送国家禽流感参考实验室确诊。

5.5 在监测过程中，国家规定的实验室要对分离到的毒株进行生物学和分子生物学特性分析与评价，密切注意病毒的变异动态，及时向国务院兽医行政管理部门报告。

5.6 各级动物防疫监督机构对监测结果及相关信息进行风险分析，做好预警预报。

5.7监测结果处理

监测结果逐级汇总上报至中国动物疫病预防控制中心。发现病原学和非免疫血清学阳性禽，要按照《国家动物疫情报告管理办法》的有关规定立即报告，并将样品送国家禽流感参考实验室进行确诊，确诊阳性的，按有关规定处理。免疫

6.1 国家对高致病性禽流感实行强制免疫制度，免疫密度必须达到100%，抗体合格率达到70%以上。

6.2 预防性免疫，按农业部制定的免疫方案中规定的程序进行。6.3 突发疫情时的紧急免疫，按本规范有关条款进行。6.4 所用疫苗必须采用农业部批准使用的产品，并由动物防疫监督机构统一组织、逐级供应。

6.5 所有易感禽类饲养者必须按国家制定的免疫程序做好免疫接种，当地动物防疫监督机构负责监督指导。

6.6 定期对免疫禽群进行免疫水平监测，根据群体抗体水平及时加强免疫。检疫监督 7.1产地检疫

饲养者在禽群及禽类产品离开产地前，必须向当地动物防疫监督机构报检，接到报检后，必须及时到户、到场实施检疫。检疫合格的，出具检疫合格证明，并对运载工具进行消毒，出具消毒证明，对检疫不合格的按有关规定处理。

7.2屠宰检疫

动物防疫监督机构的检疫人员对屠宰的禽只进行验证查物，合格后方可入厂（场）屠宰。宰后检疫合格的方可出厂，不合格的按有关规定处理。

7.3引种检疫

国内异地引入种禽、种蛋时，应当先到当地动物防疫监督机构办理检疫审批手续且检疫合格。引入的种禽必须隔离饲养21天以上，并由动物防疫监督机构进行检测，合格后方可混群饲养。

7.4监督管理

7.4.1禽类和禽类产品凭检疫合格证运输、上市销售。动物防疫监督机构应加强流通环节的监督检查，严防疫情传播扩散。

7.4.2生产、经营禽类及其产品的场所必须符合动物防疫条件，并取得动物防疫合格证。

7.4.3各地根据防控高致病性禽流感的需要设立公路动物防疫监督检查站，对禽类及其产品进行监督检查，对运输工具进行消毒。保障措施

8.1 各级政府应加强机构队伍建设，确保各项防治技术落实到位。8.2 各级财政和发改部门应加强基础设施建设，确保免疫、监测、诊断、扑杀、无害化处理、消毒等防治工作经费落实。

8.3 各级兽医行政部门动物防疫监督机构应按本技术规范，加强应急物资储备，及时演练和培训应急队伍。

高致病性禽流感防治 篇3

关键词：H5N1高致病性禽流感；Sf9昆虫细胞；HA蛋白；免疫反应

中图分类号： S855.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0024-04

收稿日期：2014-03-14

基金项目：国家自然科学基金（编号：31360212）；广东省深圳市科技研发资金基础研究计划（编号：JC201105201028A）。

作者简介：申慧芳（1976—），女，山西长治人，博士，副教授，主要从事食品安全生物学研究。E-mail：hethershen@gmail.com。禽流感（avian influenza）是由禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）引起的一种禽类传染病，其中高致病性禽流感（high pathogenic avian influenza，HPAI）H5N1亚型更是养禽业的一大灾难性疾病，不仅给养禽业带来了巨大的经济损失；同时，它正在突破种间屏障，引起人类感染，从病禽直接感染人类病死率高达60%[1]，给公共卫生带来威胁。可通过减少禽对禽的传播以及禽对人类的传播，并进行有效的免疫来保护养禽业的健康发展[2]。预防H5N1高致病性禽流感的传统疫苗是由鸡胚生产的。然而这种方法生产疫苗存在很大的风险，如由于病毒致死鸡胚而影响疫苗生产[3]。另外，高致病性禽流感的疫苗生产和处理需要生物安全三级实验室[4]。因此，寻找一种可以替代传统疫苗而又高效安全的疫苗就成了当务之急。

血凝素蛋白（hemagglutinin，HA）是禽流感病毒最重要的结构蛋白，在病毒吸附、穿膜及决定病毒的宿主特异性和致病力方面均起着关键的作用[5]。HA蛋白也是AIV诱导保护性免疫的主要抗原，它刺激机体所产生的抗体可以中和病毒、抵抗感染[6-7]。因此，HA蛋白成为发展亚单位疫苗的首选[8]。当流感疫情发生时，只要分离到流行毒株，进行HA基因测序就可以进行序列合成并表达蛋白，这种方式周期短、产量高，将在流感疫情高发时代替传统疫苗进行快速有效地控制病症的流行。

本试验选用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统进行重组HA蛋白表达，用表达的HA蛋白和H5N1禽流感全病毒灭活疫苗进行体液免疫和细胞免疫评估，为今后研制快速、高效、安全的H5N1禽流感疫苗提供有效的依据。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1菌株与质粒E. coli DH5α菌种（笔者所在实验室保存）；E.coli DH10Bac菌种、pFastbacDual质粒、Sf9昆虫细胞、Cellfectin Ⅱ Reagent购自Invitrogen公司；pMD-18 T载体、Taq DNA 聚合酶、T4 DNA 连接酶、限制性内切酶均购自TaKaRa公司；sf 900 Ⅱ SFM、Graces Insect Cell Culture Medium 购自 GIBCO公司；质粒提取试剂盒购自天根生物工程公司；DNA 胶回收试剂盒、预染蛋白质 Marker 购自Fermentas公司；显影液定影液购自碧云天生物技术研究所；ECL显色液、DAB显色液均购自BBI公司；H5N1高致病性禽流感高免血清购自广东温氏研究院；HRP标记的兔抗鸡IgG购自KPL公司；其他试剂均为国产分析纯。

1.1.2试验动物6周龄BALB/c小鼠（体质量16～18 g/只）购自中山大学实验动物中心。

1.1.3阳性对照疫苗本研究免疫组用的阳性对照为肇庆大华农生物药品有限公司生产的重组禽流感病毒灭活疫苗 H5N1亚型，Re-5，兽药生字（2006）190022098；证书编号：（2007）兽药GMP 证字178号。

1.2试验方法

1.2.1HA 基因的获得参照GenBank中注册的禽流感病毒A/goose/GD/96（H5N1）毒株（序列号HA：NC_007362.1），將HA基因送去Invitrogen公司进行核苷酸序列合成。根据合成的序列设计用以扩增HA基因的特异性引物，其中上游引物H5N1-HA-F：5′-CGCGGATCCGATGGAGAAAATAGTGC-3′（含BamHⅠ酶切位点）；下游引物H5N1-HA-R：5′-CCGGTCGACTTAAATGCAAATTCTG-3′（含SalⅠ酶切位点）。 PCR扩增体系为50 μL，其中5×PCR buffer 10 μL，dNTP（各2.5 mmol/L）4 μL，模板1 μL，引物各1 μL，Taq酶 0.5 μL，灭菌双蒸水补至50 μL。纯化的PCR产物经 BamHⅠ 和SalⅠ双酶切，连接至经相同限制性内切酶酶切的质粒pFastbacDual，转化DH5α感受态细胞。酶切鉴定后，筛选出重组质粒 pFastbacDual-HA。将阳性重组质粒 pFastbacDual-HA 转化DH10Bac感受态细胞，通过蓝白斑筛选和PCR鉴定后，抽提重组杆粒rBacmid-HA，PCR鉴定时使用的通用序列参照Bac-to-Bac杆状病毒表达系统使用手册。所有引物均由上海生物工程有限公司合成。

1.2.2重组蛋白HA的表达重组的rBacmid-HA通过CellfectinⅡreagent转染进昆虫细胞Sf9。将Sf9细胞置于含有10% FBS（胎牛血清）的Grace昆虫细胞培养基，28 ℃孵育。当6孔板中每孔细胞浓度为1×106个/mL时，让其吸附 1 h。将 1 μg rBacmid-HA（Bacmid空杆粒作为阴性对照）溶于 100 μL 不完全培养基中（不含血清或双抗的Grace培养基）；将5 μL Cellfectin溶于100 μL不完全培养基；两者混合均匀在室温孵育 15～45 min后加入Sf9细胞，28 ℃孵育 5 h，弃去转染培养基，加入新鲜培养基。当细胞出现明显病变后（第 1 代约需4 d），收集含病毒的培养上清，即为第一代重组病毒，记为P1。P1代病毒种子液量少、效价低，用 P1继续感染Sf9细胞产生效价高的P2种子液。P2代病毒液感染细胞后，收集感染72 h 后的细胞培养上清直接用于后续检测。细胞用PBS（磷酸盐缓冲液）洗3次，经3次反复冻融后超声破碎，然后在4 ℃、12 000 g 条件下离心 10 min，取上清，用12% SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺）胶进行蛋白电泳检测。

1.2.3表达产物的鉴定将 SDS-PAGE电泳中得到的蛋白用半干法转至PVDF（聚偏二氟乙烯）膜上，含3%BSA（牛血清白蛋白）封闭；1 ∶1 000的H5N1禽流感高免血清作为一抗，1 ∶5 000的HRP标记的兔抗鸡IgG作为二抗，用ECL进行显色。

1.2.4间接免疫荧光试验（IFA）通过间接免疫荧光试验观察重组蛋白在Sf9细胞的表达及定位。在6孔板中以 1×106个/mL 的浓度接种Sf9细胞，贴壁2 h后，接种约0.5个MOI（病毒感染复数）的重组杆状病毒上清。感染48 h后，用PBS 清洗细胞3 次；用4%多聚甲醛固定细胞15 min，PBS 洗细胞3 次；用预冷的100%甲醇（4 ℃）处理10 min，PBS清洗3次；3% BSA室温封闭1 h，PBS 清洗3 次；以H5亚型免疫阳性血清为一抗（1 ∶200），37 ℃ 孵育1 h，PBS清洗细胞3 次；用1 ∶1 000倍稀释的FITC（异硫氰酸荧光素）标记的荧光二抗，37 ℃避光孵育1 h，PBS 清洗细胞3 次；置于荧光显微镜下拍照。

1.2.5油乳液疫苗的制备将定量后的细胞破碎液与油乳剂按2 ∶1体积混合，高速匀浆，获得的油乳剂疫苗4 ℃保存备用。

1.2.6动物分组与免疫试验选取体质量16～18 g的6周龄BALB/c 雌性小鼠随机分成3组，分别为重组HA蛋白组、H5N1禽流感灭活疫苗组和PBS组（阴性对照），每组10只。采用颈部皮下多點注射，从6周龄开始进行免疫，此后每间隔14 d加强免疫1次，共免疫3次，每次免疫剂量为10 μg/只，以HA蛋白含量为标准。3次免疫后，每组随机取5只试验小鼠，眼球取血，室温下分离血清，用HI和ELISA方法检测H5N1抗体水平。每个试验组随机取3只小鼠，取脾脏，用淋巴细胞分离液分离脾淋巴细胞，进行酶联免疫斑点试验（ELISPOT），检测分泌IFN-γ与IL-4细胞因子的细胞数量。

1.2.7血凝抑制试验（HI试验）参照《国家流感中心标准操作规程》中的“流感/禽流感病毒血凝抑制试验（HI）操作细则”进行操作。

1.2.8间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测IgG抗体采用棋盘法确定最佳的抗原包被浓度、血清稀释度。用 100 μL/孔包被96孔板，用1%BSA封闭，加入用0.1% BSA稀释的待检血清于上述已包被的反应孔中，充分洗涤后，加入 1 ∶10 000 的HRP标记的羊抗鼠IgG抗体，在酶标仪上读取450 nm下的吸光度（D450 nm）。

1.2.9酶联免疫吸附斑点试验按达科为生物公司“酶联免疫吸附斑点试验操作细则”进行操作，将ELISPOT板斑点计数，并将重组HA蛋白组、全病毒灭活疫苗组及PBS组分别作数据间的t检验，进行统计学分析。

2结果与分析

2.1HA基因的克隆

以合成的A/duck/Guangdong/22/2002（H5N1）禽流感HA基因为模板，进行PCR扩增，将HA的PCR产物和 pFastBacDual 经BamHⅠ和SalⅠ双酶切后，回收并连接，连接产物转化DH5α感受态细胞，经琼脂糖凝胶电泳检测及测序，获得扩增产物大小为1 707 bp，与预计扩增片段长度相符合（图1），表明已筛选出重组质粒pFastBacDual-HA。

2.2重组杆粒构建

将重组质粒pFastBacDual-HA转化到DH10Bac中，通过庆大霉素、卡那霉素、四环素3种抗性和Blue-Gal蓝白斑筛选得到阳性单菌落克隆，提取杆粒rBacmid-HA，用特异性引物M13通过PCR鉴定重组杆状病毒，与预期结果一致（图2）。

2.3Western blot鉴定重组HA蛋白的表达

将rBacmid-HA病毒种子液以1倍感染复数（MOI=1）接种Sf9昆虫细胞，收集72 h后的细胞培养上清，超声破碎，进行Western blot分析，一抗为H5N1亚型禽流感高免血清，二抗为HRP标记的兔抗鸡IgG，以野生杆状病毒表达蛋白作为对照。如图3所示，出现分子量约70 ku的单一多肽，证明重组杆状病毒表达了HA蛋白。在昆虫细胞中，重组HA蛋白没有裂解为HA1和HA2亚基。

2.4间接免疫荧光结果

重组杆状病毒感染Sf9细胞48 h后进行IFA，从而鉴定及定位重组HA蛋白的表达，结果显示，重组蛋白高效表达于细胞表面（图4）。

2.5体液免疫

2.5.1免疫BALB/c小鼠血清中HI效价用重组的HA蛋白油乳液、全病毒灭活疫苗和PBS免疫BALB/c小鼠，检测3免后小鼠血清中HI效价。结果显示，免疫重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组显著高于PBS对照组，而重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组差异不显著（图5-A）。

2.5.2免疫BALB/c小鼠血清中IgG抗体水平检测用间接ELISA检测BALB/c小鼠血清中IgG抗体，结果显示，重组HA蛋白组与全病毒灭活疫苗组IgG抗体均有升高，两者显著高于PBS组（P<0.05），重组HA蛋白组与全病毒灭活疫苗组差异不显著（图5-B）。

2.6免疫小鼠脾淋巴细胞中分泌细胞因子IFN-γ和IL-4检测

用大肠杆菌BL21表达的HA蛋白作抗原，刺激3次免疫后小鼠脾淋巴细胞，通过ELISPOT技术对产生的细胞因子IFN-γ和IL-4进行检测。结果显示，重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组脾淋巴细胞经刺激后分泌细胞因子IFN-γ和IL-4的细胞数量均显著高于PBS组（P<0.05），但重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组之间差异不显著（图6）。

3结论与讨论

H5N1型高致病性禽流感病毒在世界范围内分布广、危害性大，不仅造成了养禽业的巨大损失，也影响到人类健康和安全。目前，尚无特效药物用于临床治疗，接种疫苗是预防和控制该病发生的主要手段和途径。传统疫苗用鸡胚生产，生产周期长、生物安全性要求高，无法应对流感病毒的大范围流行。本研究用昆虫杆状病毒表达系统生产的重组HA蛋白，表达效率高、周期短、生物安全性好。 HI试验结果显示：重组HA蛋白与全病毒灭活苗免疫产生的效价相一致，HI效价的高低与攻毒免疫保护有直接的相关[9-15]，HI效价越高对禽流感病毒感染的保护效果越好，保护的时间越长；ELISA结果表明：重組HA蛋白的IgG抗体与全病毒灭活疫苗之间无显著差别；ELISPOT试验结果表明：重组HA蛋白组可诱导产生强烈的细胞免疫应答，有利于机体对感染病毒和细胞的直接杀伤，从而快速清除机体内的病毒。

本试验从通过获得H5N1 HA基因序列到转染昆虫细胞，进行HA蛋白高效表达（分子量约70 ku），以及感染细胞裂解，制备油乳液，全部过程只用了约30 d；通过BALB/c小鼠免疫，刺激机体产生较强的体液免疫和细胞免疫反应，为禽流感基因工程亚单位疫苗的研发奠定了基础。

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高致病性禽流感防治顺口溜 篇4

相信科学相信党, 群策群力度难关。

禽流感, 病毒传, 首先传染鸡、火鸡,

其次传染鸭和鹅, 有的也把人传染。

病禽皮肤、头冠绀, 脸部水肿眼流泪,

咳嗽鼻塞难呼吸, 神经症状与腹泻。

发现病禽先隔离, 再请兽医来确诊,

其它禽类快免疫, 防止传染莫迟延。

平时预防是关键, 定期消毒莫大意,

禽舍内外勤打扫, 垃圾死禽不乱倒。

轮换喷洒消毒液, 福尔马林、碘制剂,

进出禽舍戴口罩, 饭前饭后把手洗。

手套、雨靴、工作衣, 消毒水里常浸洗,

禽舍通风常换气, 观察鸡群多留意。

多学习、勤动手, 致富路上大步走,

高致病性禽流感防治 篇5

一、高度重视、完善组织领导、责任落实到人卫生局领导班子高度重视人感染高致病性禽流感的防治工作，成立了人禽流感疫情应急处理领导小组，组长由县卫生局局长xxx同志担任，副组长由卫生局副局长xxx同志担任，行政办、党委办、计财处、应急办、防保科、医政科、信息科、县疾病预防控制中心、县卫生执法监督所负责人为成员。领导小组具体负责我县人禽流感疫情应急处理领导工作。领导小组办公室设在局应急办。其主要职责是：收集人禽流感疫情发生、发展及处理的有关信息，掌握动态，实时分析，为领导决策提供依据；组织专家制定防治人禽流感疫情的应急策略；组织实施各项预防控制措施，对落实情况进行督查；统一调配应急资源，及时协调解决应急工作中的困难和问题。领导小组办公室下设应急、预防控制、医疗救治、物资保障、宣传教育、督查工作等六个工作组。应急组：由应急办牵头，负责组织制定和实施“禽流感”防制工作应急处理预案等。防治人禽流感疫情应急专家组、预防控制组：由局防保科牵头，负责组织制定和实施人禽流感疫情预防控制措施，包括流行病学调查、现场卫生学处理，疫情监测与评价等。医疗救治组：由医政科牵头，负责组织制定和实施人禽流感疫情患者的治疗方案等。物资保障组：由局计财科牵头，负责本文来自应急物资(如消毒药品、防护用品、治疗药品等)的储备、生产和调度，保证供应；负责应急设施的建设和应急设备的采购，以及其它后勤保障。宣传教育组：由局信息科牵头，负责制定和实施全市医疗机构防治人禽流感疫情培训，组织开展健康教育。督查工作组：由局党委办牵头，负责制定和实施全市防治人禽流感疫情督察方案，及时发现应急工作中存在的困难和问题并予以解决和纠正，对违法违纪和渎职行为进行处理等。疫情应急专家组，由县属各单位流行病学、临床医学等方面专家组成。负责对全县防治人禽流感疫情应急准备和处理提出咨询和建议；指导全县防治人禽流感疫情应急预案和技术方案的制定和修订；对全县人禽流感疫情的调查处理进行技术指导和评估；承担县防治人禽流感疫情应急处理领导小组安排的其它技术工作。

二、召开会议、制定方案我局及时召开了县属各医疗卫生单位负责人会议，通报全世界和全国疫情，传达市卫生局会议精神，安排部署了下一步工作，同时下发了《xx县卫生局防控人感染高致病性禽流感工作技术方案》和《xx县卫生局防控人感染高致病性禽流感应急处理预案》；将畜牧部门反馈的我县规模养禽场情况发到了各镇，要求各镇摸清本底，有备无患，恢复日报告制度，每日5点前向县重大动物疫病防控指挥部有事报事，无事报平安。接受了市禽流感防控督查工作组的检查，局领导参加了会议并汇报了卫生系统已经完成的防控工作和下一步工作打算。另外，我局制定和印发了《xx县卫生局关于实行卫生系统按区域包干负责高致病性禽流感防控督查工作的通知》。由县卫生执法监督所、县疾控中心、县人民医院、县中医院、县二医院、县妇幼保健院组成检查工作组，每日到所负责区域进行高致病性禽流感防控督查工作，各镇卫生院同时分片包干负责辖区内村卫生站、个体诊所、社区卫生服务站的禽流感防控督查工作。

三、建立疫情监测哨点，加强信息沟通

要求各县属和驻县各医疗卫生单位，接诊发热病人时，详细询问流行病史，并按要求及时上报，加强监控力度。局应急办同时与县畜牧局建立了防治人感染高致病性禽流感协调联动信息互通机制，局应急办将从全县各医疗卫生单位收集的“人感染高致病性禽流感”有关信息及时向畜牧局进行通报。

四、应急演练为进一步提高卫生系统对人感染高致病性禽流感的应急处置能力，局突发公共卫生事件应急办公室于2005年11月2日下午2时组织了一次防控人禽流感疫情实战演习。该次演习由卫生局局长曾志强任总指挥，分管副局长xxx具体指挥，县疾控中心、县医院和xxx镇卫生院为演习单位。局防保科、应急办、医政科和疾控中心相关人员组成三个考查组，分别对镇卫生院处理环节、疾控中心处理环节和县医院处理环节进行现场考查。xxx镇卫生院、县疾控中心应急小分队及县人民医院的急救人员在整场演习中表现出色，很好地运用了平时学到的应急处置疫情相关知识，完成工作快捷、规范，使演习取得了比较圆满的效果。考查组同时也指出了各演习单位存在的一些细节问题，要求各演出单位在今后工作中严格改进。通过此次演习，卫生系统应急处置人禽流感疫情的能力得到了提高，为今后处理疫情打下了坚实的基础。

高致病性禽流感防治 篇6

1 高致病性禽流感的发病及流行特点

1.1 禽流感易感动物的种类

许多家禽和野禽都对禽流感病毒敏感, 家禽中火鸡、鸡、鸭是自然条件下最常受感染的品种, 珍珠鸡、家鹅、鹌鹑、雉鸡、鸽、麻雀、乌鸦、燕子等禽类均可感染。

1.2 高致病性禽流感的潜伏期和流行特点

高致病性禽流感一年四季均可发生, 但在冬季和春季多发, 因为禽流感病毒在低温条件下抵抗力较强, 潜伏期从数小时到数天, 最长可达21天, 各种禽种和不同日龄的禽类均可感染。高致病性禽流感发病急、传播快, 其发病率和死亡率可达100%, 目前, 尚未有有效药物治疗。

1.3 禽流感的传播途径

传播途径有两种:一是健康禽与病死禽直接接触传染;二是健康禽与病毒污染物间接接触传染。禽流感病毒存在于病禽和感染禽的消化道、呼吸道和禽体的脏器组织中, 病毒可随眼、鼻、口腔分泌物及粪便排出体外, 含病毒的分泌物及粪便、死禽尸体污染的任何物体如饲料、饮水、空气、禽舍笼具、饲养管理用具、运输车辆、昆虫以及各种携带病毒的飞鸟和水禽常成为传染源, 是禽流感病毒的重要传播途径。

2 高致病性禽流感的临床症状与病理变化

2.1 临床症状

急性感染的禽流感无特定的临床症状, 在短时间内可见食欲废绝, 体温骤升呼吸道症状、下痢, 后期出现神经症状伴随大量死亡。

2.2 病理变化

因感染毒株毒力的强弱, 病程长短和禽种的不同而变化不一。主要表现为头肿、肉髯、冠出血、小腿和趾部皮下出血, 腺胃乳头出血及输卵管炎等。

3 高致病性禽流感的综合防治措施

(1) 坚决贯彻以预防为主的防治策略, 切实加强疫情监测, 做好预情预警预报工作。防控禽流感坚持以人为本, 坚持预防为主, 严格执行《中华人民共和国动物防疫法》、《中华人民共和国传染病防治法》。认真贯彻“加强领导、密切配合、依靠科学、依法防治、群防群控、果断处置”的方针, 采取综合防控措施。

(2) 加强国家海关进口的禽类和国内流通领域的检疫监管, 严防高致病性禽流感病毒从国外传入, 做好家禽流通领域的检疫监测。

(3) 执行和完善养禽场的经常性生物安全措施, 防止禽流感病毒传入养禽场。

高致病性禽流感 篇7

1 病原学

禽流感病毒属正黏病毒科A型流感病毒属。为单股负链RNA病毒, 病毒粒子呈中等大小, 螺旋对称, 有囊膜, 囊膜上有含血凝素 (HA) 和神经氨酸酶 (NA) 活性的糖蛋白纤突。

正黏病毒科包括A、B和C三种类型的流感病毒属。B型和C型流感病毒属一般只见于人类。所有的禽流感病毒都是A型。A型流感病毒也见于人、马、猪, 偶然还见于水貂、海豹和鲸等其他哺乳动物及多种禽类。

流感病毒的抗原结构分H和N两大类。H代表血细胞凝集素 (Hemagglutinin) 有如病毒的钥匙, 用来打开及入侵人类或牲畜的细胞;N代表神经氨酸酶 (Nneuramidinase) , 是帮助病毒感染其他细菌的酵素。根据HA和NA的抗原特性将A型流感病毒分成若干亚型, 目前已经发现15种特异的HA亚型 (分别以H1～H15命名) 和9种特异的NA亚型 (分别以NI～N9命名) , 通过各自的变异可以产生许多不同亚型的毒株。1980年世界卫生组织对流感病毒毒株的命名作了修订, 一株流感病毒的名称包括: (1) 抗原类型 (A、B或c) ; (2) 宿主来源 (除人外) ; (8) 地理来源; (4) 毒株编号; (5) 分离年份; (6) 圆括号内为HA亚型和NA亚型。例如, 一株1968年在威斯康星的火鸡中分离到的A型流感病毒, 鉴定为A/火鸡/威斯康星/1/68 (H8N4) 。

高致病性禽流感 (HPAI) 被OIE定为A类烈性传染病。OIE判定高致病性禽流感病毒的标准是:

(1) 取8只4～6周龄易感鸡, 静脉内接种0.2mL 1∶10稀释的感染性尿囊液, 10 d内死亡率≥75%, 即死亡6、7、8只易感鸡的任何流感病毒。

(2) 分离物符合以上标准以后, 其他鸡群可根据流行病学、临诊症状、相同血凝素亚型病毒的抗体鉴定来确定是否感染高致病力禽流感病毒。

(3) 对在致病力试验中致死率不足75%, 即致死1～5只鸡 (在8只鸡中) 或血凝素不是H5或H7的病毒都需进一步试验和验证。

(4) 如果分离到的禽流感病毒在8只鸡中只能致死1～5只接种鸡, 并能在没有胰蛋白酶的条件下在细胞培养物上生长, 产生致细胞病变作用或形成蚀斑, 必须先测定其HA相关多肽的氨基酸序列, 才能确定分离物是否为高致病力毒株。

目前所知的15个HA亚型都可以从禽类分离到, 但属于高致病力禽流感病毒的多为H5和H7亚型。

流感病毒对乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂均敏感。常用消毒药容易将其灭活, 如福尔马林、β一丙内酯、氧化剂、稀酸、去氧胆酸钠、羟胺、十二烷基硫酸钠和铵离子、卤素化合物 (如漂白粉和碘剂) 、重金属离子等都能迅速破坏其传染性。

流感病毒对热比较敏感, 56℃加热30 min、60℃加热10 min, 65～70℃加热数分钟即丧失活性。病毒对低温抵抗力较强, 在有甘油保护的情况下可保持活力1年以上。该病毒对冻融作用较稳定, 但反复冻融多次, 最终会使病毒灭活。

禽流感病毒为了生存而不断发生变异, 以逃脱动物产生的特异性抵抗力。人们为了预防禽流感也研制出了各种疫苗。但机体在产生特异性抵抗后, 病毒为逃脱机体的扑杀而不断发生着变异, 这样原有的抗体即失去作用, 病毒就可使动物发病。因此, 就目前的防疫技术和手段而言, 禽流感病毒是无法消除的。

2 流行病学

禽流感在一年四季均可发生, 但以冬春季节多发。主要原因是:第一, 禽流感病毒对温度比较敏感, 随着环境温度的升高, 病毒存活时间缩短。另外, 夏秋时节光照强度相对较高, 阳光中的紫外线对病毒有很强的杀灭作用。夏秋时节禽舍通风强度远远高于冬春季节, 良好的通风可以大大减少鸡舍环境中病毒的数量。因此, 病毒侵入鸡体内的机会和数量就明显减少, 感染机率下降。同时, 良好的通风也减少了不良气体对鸡呼吸道黏膜的刺激, 对维持呼吸道黏膜的抵抗力具有重要意义。

2.1 易感动物

流感病毒感染多种家禽和野禽, 鸡和火鸡易感性最高。感染的症状、严重程度与感染的毒株有关多数毒株的感染没有临床症状, 某些毒株如H9会导致产蛋下降等, H5和H7亚型的某些毒株可导致严重感染, 伴有中枢神经症状, 1周内致死。某些高致病性毒株如H5N1亚型还可能直接感染人类。

水禽如鸭、鹅可带毒并通过排粪散毒, 一般不表现症状。但近年来鸭鹅亦有感染高致病力毒株并发病死亡。从鸭分离到的流感病毒比其他禽类都多已分离出流感病毒的其他禽鸟有:珍珠鸡、鹅、鹌鹁雉、鹧鸪、八哥、麻雀、乌鸦、寒鸦、鹰、编织鸟、鸽、椋鸟、岩鹧鸪、燕子、苍鹭、加拿大鸭、番鸭、雀形目的鸟、鹦鹉、虎皮鹦鹉、海鸥, 海鸠等海鸟。

2.2 传染源

病禽是主要传染源, 野生水禽是自然界流感病毒的主要带毒者, 鸟类也是重要的传播者。

2.3 传播途径

传播途径主要经消化道传播, 也可通过伤口、呼吸道、眼结膜传染。禽流感在禽群之间的传播主要依靠水平传播, 如空气、粪便、饲料和饮水等。垂直传播的证据很少, 但有证据表明实验感染鸡的蛋中有禽流感病毒的存在。因此, 不能完全排除垂直传播的可能性。

3 临床症状

禽流感潜伏期从几小时到几天不等, 其长短与病毒的致病性、感染病毒的剂量、感染途径和被感染禽的品种有关。一般为3～5 d。《陆生动物卫生法典》规定为21 d。临床症状依感染禽类的品种、年龄、性别、并发感染程度、病毒毒力和环境因素等而异。可表现为呼吸道、消化道、生殖系统、神经系统异常等其中一组或多组症状。如病鸡精神沉郁, 减食及消瘦;蛋鸡产蛋量下降或停止;轻度到严重的呼吸道症状, 包括咳嗽、打喷嚏等;头部和脸部水肿, 无毛皮肤发绀;神经紊乱;拉黄白、黄绿或绿色稀粪。隐性感染不表现任何症状。

有时疾病暴发很迅速, 在没有明显症状时就已发现鸡死亡。发病率和死亡率与临床症状一样差异很大, 取决于禽类种别和毒株以及年龄、环境和并发感染等, 通常表现高发病率和低死亡率。但高致病力病毒感染时, 发病率和死亡率均可达100%。

4 病理变化

禽流感的病理变化因感染毒株毒力的强弱、病程长短和品种的不同而异。

在鸡和火鸡的许多病例中, 轻微病变可见于鼻窦中, 特点是卡他性、纤维素性、浆液纤维素性、黏液脓性或干酪性炎症。气管黏膜可能水肿, 并伴有浆液性到干酪样不等的渗出物。气囊可能增厚并有纤维素性或干酪样渗出物。可能有卡他性到纤维素性腹膜炎和“卵黄性腹膜炎”;火鸡可能有盲肠炎或肠道卡他性到纤维素性肠炎。

高致病力毒株可引起充血、出血和渐进性坏死等病变。初期病变可能还伴有窦肿胀的头部水肿及肉髯和鸡冠发绀、充血和出血。腿部也可见充血和出血, 肝、脾、肾、肺常可见到坏死灶。严重时可见鸡冠肉髯极度肿胀并伴有眶周水肿、脚趾肿胀, 并有淤斑性变色。内脏病变包括各种浆膜和黏膜表面的小出血点, 特别是腺胃黏膜可见点状或片状出血, 腺胃与食道交界处、腺胃与肌胃交界处有出血带或溃疡。沿胰脏的长轴常有淡黄色斑点和暗红色区域。高致病力病毒感染时, 有时由于在大体病变形成之前病鸡已迅速死亡而可能没有明显的病变。

当检查病禽的大体病变时, 应考虑到流感病毒感染可能伴随细菌感染, 因此病变可能反映病毒和细菌两者的影响。

禽流感的病理组织学变化的特征是水肿、出血和血管周围淋巴细胞性管套, 病变主要在心肌、脾、肺、脑和肉髯, 肝和肾病变程度较轻。肝、脾和肾实质变性和坏死。脑的病变包括坏死灶、血管周围淋巴细胞性管套、神经胶质灶、血管增生和神经元变化。

5 诊断

(1) 临床诊断。根据临床症状和病理变化可做出初步诊断, 确诊需进一步做实验室诊断。

(2) 实验室诊断。在国际贸易中, 尚无指定诊断方法, 替代诊断方法为琼脂凝胶免疫扩散试验和血凝抑制试验。

(3) 病毒分离鉴定。取样处理后接种9～11日龄SPF鸡胚, 37℃孵育4～7 d, 分离病毒。而后进行血凝试验、电镜检查或琼脂凝胶免疫扩散试验 (检测病毒存在) 、定型试验 (用特定抗血清确定亚型) 、致病性试验 (取经稀释尿囊液对4～8周龄SPF鸡静脉接种, 计算静脉接种指数 (IVPI) 来确定病毒的致病性) 。

(4) 血清学试验。血凝和血凝抑制试验、琼脂凝胶免疫扩散试验 (特异性高, 技术要求低, 适用于大范围普查) 、间接ELISA和Dot-ELISA (具简便、快速、敏感、特异, 可用肉眼判定等特点, 适用于口岸检疫、疫病监测和早期快速诊断) 。用于血清学检查, 应采用急性期、恢复期的血清 (于一20℃下冷冻保存) 。

其他己报道的方法有:病毒中和试验 (SN) 、反转录聚合酶链反应 (RT-PCR) 、免疫荧光技术 (IF) 及核酸探针技术 (因操作复杂或技术有待完善, 目前尚未普及) 。

6 鉴别诊断

应与鸡新城疫、鸡支原体病、鸟疫和其他呼吸道疾病相区别。鸡新城疫与禽流感有明显的区别, 其病原是两种完全不同的病毒。禽流感病毒是正黏病毒科, 新城疫病毒是副黏病毒科。鸡新城疫病毒感染在早期可见典型临床症状:潜伏期较长, 有呼吸道症状, 下痢, 食欲减退, 精神萎顿;后期出现神经症状。在目前养殖条件下, 新城疫疫苗免疫鸡群不会发生典型的新城疫, 感染鸡群一般表现为轻微的呼吸道症状、神经症状和产蛋鸡群的产蛋下降, 死亡率很低。

7 防治

第一, 良好的饲养管理条件是预防禽流感的关键。加强饲养管理是预防所有动物传染病的前提条件, 只有在良好的饲养管理条件下才能保证家禽处于最佳的生长状态并具备良好的抗病能力。从禽流感预防角度来说, 必须将饲养管理和疾病预防作为一个整体加以考虑, 通过采取严格的饲养管理措施, 防止禽流感的发生。

第二, 对禽流感的预防必须采取综合性的预防措施。养殖场应远离居民区、集贸市场、交通要道以及其他动物生产场所和相关设施等;严禁从存在该病的国家和地区引进种蛋和种禽;对过往车辆以及场区的周围环境、孵化厅、孵化器、鸡舍笼具、工作人员的衣帽和鞋等进行严格的消毒;采取全进全出的饲养模式;杜绝鸟类与家禽的接触;在养殖场中应专门设置供工作人员出入的通道, 对工作人员及其常规防护物品应进行可靠的清洗和消毒;严禁一切外来人员进入或参观动物养殖区;我国已成功研制出用于预防H5Nl高致病性禽流感的疫苗, 非疫区的养殖场应在当地兽医卫生管理部门的指导下及时对鸡群进行疫苗的免疫接种和抗体检测, 从而达到防止禽流感发生的目的。

第三, 当发生疫情时应严格按照兽医卫生防疫的相关规定进行处理, 做到早发现、早报告、早隔离、早治疗。

(1) 封锁隔离。

发现可疑病禽应立即向当地动物防疫监督机构报告, 经国家兽医部门确诊是高致病性禽流感时, 应在畜牧兽医部门的指导下按《动物防疫法》及其有关规定封锁疫点, 采取紧急、强制性的控制和扑灭措施, 防止疫情扩散。

(2) 消毒。

对高致病性禽流感污染的所有场所及设备、病禽的排泄物及工作服等进行严格消毒。流感病毒可以随感染发病禽的粪便和鼻腔分泌物排出而污染禽舍、笼具、垫料等。流感病毒对消毒剂及热比较敏感。对污染的禽舍进行消毒时必须先用去污剂清洗以除去污物、再用次氯酸钠溶液消毒, 最后用福尔马林和高锰酸钾熏蒸消毒。铁制笼具也可采用火焰消毒。由于粪便中含病毒量很高, 因此, 在处理时要特别注意。粪便和垫料应通过掩埋和生物发酵方法来进行处理, 对处理粪便和垫料所使用的工具要用火碱水或其它消毒剂浸泡消毒。

(3) 强制免疫。

我国将高致病性禽流感疫点周围半径3 km范围划为疫区。因为疫点周围半径3km范围内的禽是最易受到感染的, 疫区周围3～5km范围内的所有禽粪紧急采取强制免疫接种, 以建立免疫带。

(4) 扑杀。

为了保证高致病性禽流感疫情能够得到完全彻底扑灭, 《动物防疫法》规定将疫区内的所有禽类进行扑杀。

(5) 无害化处理。

注射高致病性禽流感疫苗九注意 篇8

1) 疫苗应在2～8℃冰箱保鲜层贮藏保存。使用前要认真检查, 疫苗应在有效的保质期内、瓶口无松动、颜色为乳白色;若发现疫苗过期、包装破损、瓶口松动、破乳分层、颜色改变等现象则不得使用。

2) 疫苗使用前置常温2 h左右, 使用时充分摇匀, 注射过程中保持匀质、严防太阳光暴晒。疫苗开封后应于24 h内用完。

3) 注射器和针头要严格消毒 (煮沸后至少3 min以上) , 针头选择9～12号为宜。

4) 疫苗注射的当天早晨家禽要禁饲, 注射前应先了解需免疫家禽的近况并进行检查, 对患病家禽、阉割家禽和长途运输家禽暂时不免疫, 待其稳定一段时间、生理活动正常后再免疫。

5) 操作时视家禽个体大小用隔离栏板将其分成20～30羽为一个小区, 以防止家禽的冲撞和挤压 (也可把家禽赶进多个笼内) , 逐只进行预防注射, 注射后放至备用的另一区域, 以防止漏接种和重复接种。

6) 每过一户要更换针头 (若是养禽场每注射1 000羽至少要更换1枚针头) , 注射方法应优先采用颈部皮下注射, 部位应选在家禽颈背部下三分之一处, 针头向下与皮肤呈45度角进针, 针头进入皮下即可推注疫苗液。如颈部羽毛太密, 也可采用臂头三角肌、胸肌或腿肌肌肉注射。

7) 免疫程序和疫苗注入量: (1) 生产蛋鸡和肉种鸡2周龄首次免疫, 注射剂量为0.3 mL;5周龄时加强免疫, 注射剂量为0.5 mL;以后每间隔5个月加强免疫1次、注射剂量为0.5 mL; (2) 对8周龄出栏肉用鸡, 在10日龄时一次性免疫, 接种剂量为0.5 mL; (3) 火鸡、鸭和鹅2周龄首次免疫, 接种剂量为0.5 mL;5周龄时加强免疫, 接种剂量为1 mL;以后每间隔5个月加强免疫1次, 接种剂量为1 mL。

8) 接种后做好档案记录, 内容包括:禽主的地址、姓名 (场名) , 家禽的品种、年龄, 疫苗的来源、批次, 接种时间、接种人签名等。

防控高致病性禽流感的主要措施 篇9

防控禽流感, 健全和强化生物安全措施是基础, 实施综合性防治是关键。

1 加强饲养管理

科学饲养, 饲喂优质饲料, 提供营养全价平衡的饲粮, 按时饲喂, 不可过饥、过饱, 以增强鸡群的体质。

精心照料鸡群, 鸡舍内应保持适宜的温度, 不可骤然变化;勤换、勤晒垫草, 保持地面干燥, 防止潮湿积水;保持合理的密度、光照和良好的通风, 以减少或消除对呼吸道粘膜有损伤的致病因素, 降低呼吸道类疾病;特别是寒冷季节, 要重视鸡舍保温和通风的兼顾。

确保饲料、饮水充足, 减少各种应激反应, 提高鸡群的抵抗力。

由于农户养鸡大多是分散放养, 又多是鸡鸭鹅猪混养, 容易引起疫情的发生。从切断疫情传播途径方面考虑, 必须改变传统的饲养方式, 变散养为圈养, 变混养为分开饲养。

对病、弱、残鸡要严格分群, 隔离饲养。

2 强化生物安全措施

2.1 加强环境消毒措施

环境污染严重是禽流感发病的重要原因之一, 要控制禽流感, 就要降低环境中野毒的含量。禽流感病毒在外界环境中的存活能力尤其是抗高温的能力较差, 因此, 应严格消毒, 消灭传染源, 切断传染途径, 防止疫病的侵袭和传播。整个鸡场内的环境、道路应定期清扫, 每周用2～3%的烧碱溶液消毒两次。鸡舍和饲养用具每周要进行两次以上的消毒, 消毒药可用0.2～0.3%过氧乙酸溶液、2～5%漂白粉混悬液、10～20%生石灰乳剂或10～20%草木灰热溶液等, 最好两种以上交替使用。鸡舍、孵化器、种蛋可用福尔马林熏蒸消毒:按每立方米容积准备福尔马林14毫升, 加高锰酸钾7克、水7毫升的比例放入瓦盆中, 在室内密闭熏蒸24小时。器械用具消毒或工作人员洗手, 可用2～5%来苏儿溶液或0.1%新洁尔灭溶液等。消毒池可放1～3%的火碱液。饲槽、饮水器等饲喂用具, 每天要洗刷保持清洁, 每2天用0.2～0.3%过氧乙酸浸洗消毒一次。同时, 可用0.3%的喷雾灵、0.3%的次氯酸钠、0.5%的菌毒灭进行经常性的带鸡消毒。

2.2 鸡场实行“全进全出”制

避免各种日龄的鸡群混养;尤其要注意鸡与水禽或其他鸟类不能在同一养殖场中饲养。鸡群特别是发病鸡群淘汰后, 鸡舍要及时清粪、认真冲洗、严格消毒, 空舍1～2个月后方可进鸡。

2.3 防止外来人员、动物带入病毒

对进入鸡场的人员、车辆和物品等 (尤其是来自疫区的) 要严格控制, 经彻底消毒后, 方允许进入。饲养员更换鞋帽, 消毒后才能进入鸡舍。鸡场要经常灭鼠、蚊、蝇, 严防飞鸟、昆虫、猫和狗等动物进入鸡舍和饲料库。防止不同鸡场、鸡舍的饲养人员串场、串舍、借用各种用具、串换饲料。不从疫区引进种蛋、种鸡和商品鸡雏, 即使从外地引入, 此前要对输出地的疫情和输出场的防疫情况进行考察。

2.4 注意粪污水管理

粪便和污水是造成场区和周围环境污染的主要原因, 成为病原微生物存在的场所。因此, 农户和饲养场都要注意粪便和污水的管理, 粪便不能乱堆乱放, 必须集中堆积发酵处理, 提高卫生水平。

2.5 场地建设

养鸡场不能建在村里、村边、路边, 要远离居民区、集贸市场、交通要道以及其他动物生产场所和相关设施;场与场、户与户之间必须有一定的距离, 不能连片。鸡场的生产区和生活区要区分开, 生产区清洁道和污染道分设。鸡舍的保温、采光、通风、消毒和污物、污水排放设施要齐全, 设有病鸡隔离圈舍;鸡舍的门窗及通风口要加防鸟网, 防止飞禽进入舍内。这在一定程度上可减少疫病互相传播的机会。

2.6 做好疫病防治

做好马立克氏病、鸡传染性法氏囊病、鸡传染性贫血和禽网状内皮增生症、鸡球虫病等疾病的防治工作, 减少或消除饲料霉变、霉菌毒素, 以避免特异性和非特异性免疫抑制现象的发生。防止鸡群被葡萄球菌、大肠杆菌等细菌的感染。

2.7 加强检疫工作

可以有效防止疫病的传播。对进口的各种家禽、鸟类实施严格的隔离检疫, 而后转至内地的隔离场饲养, 再纳入健康鸡场饲养;加强禽类销售市场的管理, 未经检疫的禽类不准出售, 交易的禽类应集中屠宰, 污水、羽毛及内脏等要作无害化处理, 屠宰场所坚持每日消毒。

2.8 做好应急准备工作

鸡群发生高致病性禽流感, 要上报有关部门, 进行及时的诊断、确定疫区、封锁隔离、捕杀淘汰。当周围的鸡场发生禽流感时, 应对鸡场进行紧急免疫;当鸡场内其它鸡舍发生禽流感时, 应对未发病鸡群进行紧急免疫禽流感疫苗。

3 适时免疫预防

适时有效的免疫是当前防控高致病性禽流感的有效手段。目前我国禽流感疫苗主要为油乳剂灭活苗, 有H5N1和H9N2两个亚型, 免疫方法多采用颈背部皮下注射。参考免疫程序如下:

8周龄出栏的肉仔鸡、快大鸭:10日龄免疫, 剂量为0.5毫升。

100日龄出栏的肉鸡:15日龄首次免疫, 剂量为0.3毫升;40～45日龄再次免疫, 剂量为0.5毫升。

产蛋鸡、种鸡:15日龄首次免疫, 剂量为0.3毫升;35～40日龄进行一次加强免疫, 剂量为0.5毫升;4月龄左右再进行一次加强免疫, 剂量为0.5毫升;以后每间隔4个月, 加强免疫一次, 剂量为0.5毫升。

4治疗方法

鸡群发生低致病性禽流感, 在发病初期参考用药:金刚烷胺0.03%饮水;阿司匹林0.03%拌料;发生非典型禽流感可用禽流感油苗紧急接种, 可减轻发病程度。

高致病性禽流感的危害及防控措施 篇10

禽流感按照对禽类损害程度的不同, 可分为高致病性禽流感、低致病性禽流感及无致病性禽流感。除了无致病性禽流感没有明显症状和危害外, 禽流感皆会造成禽类的死亡。高致病性禽流感是由特定亚型的A型流感病毒引起的急性、高度致死性禽类传染病, 发病时会产生全身性、出血性、和败血性病症, 在我国被列为一类传染病。鉴于该病传播迅速、流行广泛、多宿主感染及高致病力的特征, 其已成为目前人类健康和公共卫生面临的最大威胁。因此, 本文就高致病性禽流感的危害及防控措施问题进行重点阐述。

2 主要危害

给养禽产业造成巨大损失, 影响禽产品的出口和国际声誉;造成餐饮业旅游业损失;污染环境、水源、土壤等, 直接危害人类健康和社会稳定。

2.1 病毒毒力分类

高致病性禽流感:全身性、出血性和败血性病症, 死亡率高。

低致病性禽流感:轻度呼吸道、消化道症状, 死亡率低。

无致病性禽流感:一般无症状。

2.2 病原

根据病毒粒子核蛋白 (NP) 、膜蛋白 (MP) 的抗原及基因特性不同, 分A、B、C三型。

A型:易变异, 可引起禽、人、猪、马及海洋哺乳动物暴发流行, 死亡率极高。

B型:变异较慢, 只对人感染, 流行局限。

C型:很少变异, 人、猪中存在, 温和, 散发性流行。

2.3 变化特征

2.3.1 血清型多

高致病流感病毒根据血凝素 (HA) 和神经氨酸酶 (NA) 抗原性的差异分不同亚型:HA16种即H1~H16;NA9种, 即N1~N9, 其中H5、H7属高致病性病毒, H1、H2、H3人类易感染。

2.3.2 变异性强

由于该病毒基因组合率高使变异率加快。

2.4 病原抵抗力

该病毒对高温、酸、碱、紫外线溶剂及各种消毒药敏感。16℃水加热30分钟, 60℃水加热10分钟即可杀死;阳光直射40~48小时可杀死。

2.5 流行特点

一年四季均可发生, 冬、春季节最易发。并且流行广泛。

2.6 易感动物种类多

最易感的动物是火鸡及家鸡发病率、死亡率都高, 其次是鸭、鹅常带毒, 隐性感染。其它如猫、狗、狐及人等哺乳动物也是易感动物。

3 高致病性禽流感特征

3.1 临床症状

最急性型:禽群通常无明显症状即突然死亡。急性型:脚鳞片, 大腿肌肉出血, 头水肿, 眼睑浮肿, 流泪, 鸡冠发绀, 产蛋急降, 蛋小畸形, 软皮蛋多, 体温骤升, 高度沉郁不食;神经症状, 共济失调, 不能站立和运动, 停产。鸭鹅感染后头颈扭曲, 两腿劈开, 鹅侧卧或仰翻, 隐性带毒者不表现症状, 雏鸭鹅大批死亡。

3.2 剖检变化

出血是主要特征, 常见腺胃乳头、冠状沟脂肪、肠粘膜、泄殖腔盲肠、扁桃体、卵巢和输卵管等处出血、肝肿大。

4 防控措施

根据高致病性禽流感特征、毒力情况、病毒抵抗力及流行特点, 以及对人类的危害必须加强对养禽业的管理, 做好防控措施。

4.1 免疫接种

根据流行特点进行免疫接种, 对规模饲养场按免疫程序免疫, 散养户春秋两季强制免疫, 新补栏禽及时补免。免疫呈现如下:

(1) 种鸡、蛋鸡免疫

雏鸡7~14日龄时用重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗初免;3~4个月后强免;开产前再强免;以后4~6个月根据免疫抗体检测结果用H5亚型二价灭活苗免疫一次。

(2) 商品代肉鸡免疫

7~10日龄时用禽流感、新城疫重组二联活疫苗首免, 两周后加强免疫一次。

(3) 鸭、鹅免疫

雏鸭鹅14~21日龄时用重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗初免, 隔3~4周再免, 以后隔4~6个月根据免疫抗体检测结果, 用H5亚型二价灭活苗免疫一次。

(4) 散养禽免疫

春秋两季重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗进行一次集中强免, 以后定期补免。

(5) 调运家禽免疫

调运出县境禽类, 在调运前2周进行一次重组禽流感病毒H5亚型二价灭活强免。

(6) 紧急免疫

发生疫情时, 对受威胁区域内的所以禽类进行一次强制免疫, 受到疫情威胁时据边境30公里所有家禽进行一次强免。免疫方法按使用说明规定进行。但需要说明的是农业部要求蛋鸡首免用H5N1亚型灭活苗, 也可用禽流感、新城疫重组二联活疫苗。

4.2 消毒

消毒是防控禽流感发生和流行的主要措施之一。常用的消毒方法有:

(1) 物理性消毒:清扫、冲洗、火烧等方法;

(2) 生物性消毒:对粪便杂草、垫料等发酵处理;

(3) 化学性消毒:利用消毒剂喷洒、浸泡、熏蒸。一般禽舍用火碱或高锰酸钾, 福尔马林熏蒸, 笼具车辆、用具等氯制剂。

4.3 综合性防控措施

(1) 防控时注意的问题

疫苗要使用有效的, 量要足, 方法得当, 对H9亚型免疫不要忽视。对水禽免疫应引起重视, 用二价苗免疫有效保护期短, 应及时加强免疫。

(2) 完善防控措施

构建重大动物疫病保障体系, 加强防疫基础建设, 做好培训工作, 提高基层防疫人员业务能力, 完善应急管理体制, 时刻做好疫情发生准备工作, 坚持高致病性禽流感预警报告技术, 坚持早、快、严的原则, 实行防控工作动态管理, 严防疫情扩散和蔓延, 减少经济损失。