保存效果（精选10篇）
保存效果 篇1
隐裂牙是口腔内科的常见病, 隐裂牙多发生于大力咀嚼的牙齿, 如前磨牙和磨牙, 尤其上下颌第一磨牙多见, 牙折的方向和深度往往有不确定性, 患者的反应症状也轻重不一。症状多以渐进性加重, 如患者没有及时就诊, 病变会逐渐累及牙髓, 诱发不可复性牙髓炎, 最后导致根尖周病变, 引起患者的牙齿肿胀及咀嚼疼痛。隐裂牙由于裂隙的存在, 抗力较差, 正常的咬合力也可能将患牙完全裂开而不能修复。为提高牙齿隐裂的治愈率, 该院自2005年对隐裂牙进行了系统治疗与观察, 对于口腔门诊中疑似牙隐裂的患者进行了详细检查, 提高了牙隐裂的早期确诊率。该研究的目的在于表明早期的明确诊断是治疗隐裂牙成功的首要因素, 早期明确诊断后运用根管治疗和全冠修复的方法将大为提高隐裂牙的治疗成功率。该科自2005年以来共诊治隐裂牙216例, 经治疗后患者均取得了满意的治疗效果。现报道如下。
1 临床资料
收集2005—2012年治疗病例216例, 男女无明显差异, 年龄12~75岁, 其中男143例, 女73例, 平均年龄41.50岁, 其中冷热敏感患者123例, 患者无自发痛症状及晚间痛症状, 属早期就诊患者。因自发痛及晚间疼痛不能入眠患者35例, 属于不可复性牙髓炎患者, 因咀嚼痛及根尖周肿胀患者58例, 属于累及根尖周病变的患者。隐裂牙224颗, 左下颌第一磨牙24例, 第二磨牙17例, 前磨牙16例。左上颌第一磨牙24例, 第二磨牙14例, 前磨牙13例。右下颌第一磨牙25例, 第二磨牙22例, 前磨牙12例。右上颌第一磨牙23例, 第二磨牙13例, 前磨牙9例。另外因外伤或不明原因导致前牙隐裂22例。
2 治疗前检查
早期患者多以咀嚼不适或冷热疼痛就诊, 临床检查患者牙齿无明显龋坏, 多数患者不能描述引起疼痛的明显诱因, X线检查患者描述牙痛区域的牙根无阴影及根折。如临床大夫经验较少, 往往会给予患者一些抗生素治疗, 多日后患者会以牙齿疼痛加剧或牙齿裂开再次就诊, 这样不但延误了患者病情, 使牙齿丧失牙髓活力, 还有可能导致患牙的拔除。早期诊断是保留活髓的关键, 保留活髓对于牙齿在口腔内的存在年限的长短具有重要的意义, 活髓牙的牙体组织坚硬并且韧性较好, 抗折力要比死髓牙好, 因此在牙体病治疗时, 应以保留活髓为首要目的, 但在治疗前对于以后可能出现的继发牙髓炎的情况和慢性牙髓炎后出现根尖周炎的情况, 要与患者进行充分的沟通, 避免以后医患矛盾的出现。在遇到咀嚼不适或冷热疼痛的患者就诊时, 如牙齿无明显龋坏, X线检查牙根无明显破坏, 首先详细询问病情, 患者有无咀嚼硬物史, 特别是咀嚼食物时有骤然疼痛史, 有时患者为酒后, 使用牙齿开酒瓶等情况, 如有以上情况, 应详细检查疼痛区域牙齿, 有无牙釉质崩失, 牙齿有无细微裂痕, 如目视不能辨别, 可采用牙齿表面涂碘酊5 min后擦去, 裂隙处有残余碘酊, 或将荧光剂涂予患牙表面, 数分钟后擦去, 荧光剂残留在裂隙处, 也较容易诊断。
3 牙髓活力检查
对于冷热敏感的牙齿, 为了判断牙髓是否可以保留, 诊断明确后, 用牙髓活力测量仪测试牙髓活力, 判断有无保留牙髓的可能性, 如牙髓活力好, 尽量保留牙齿的牙髓, 以增加牙齿使用寿命。如牙髓已是不可复性牙髓炎, 或牙髓无活力, 尽早做根管治疗。不论能否保留牙髓, 确诊隐裂牙后首先要给予牙体预备, 制作临时冠, 临时冠多用自凝塑料和树脂制成, 佩戴临时冠后调低咬合, 避免颌接触, 防止隐裂牙在治疗过程中裂开。治疗过程中, 严禁患者使用患牙, 避免治疗过程中患牙意外折裂。
4 临床治疗
首先与患者讲清病情及治疗方案, 与患者达成共识, 签订病情知情书及治疗同意书, 签后开始治疗。可保留牙髓者, 局麻下给予牙齿预备, 暂时佩戴临时冠, 避免牙齿劈裂。2周后无牙髓炎症状, 给予永久性全冠修复。牙髓不能保留者, 拍数字牙片确定根管长度, 局麻下去除残髓, 洗扩根管, 手扩要扩至40号根管锉, 机扩时扩至F1, 视情况封药或开放, 同时给予牙齿预备, 佩戴临时冠。封药一周后, 无明显叩击痛, 去除旧充填物, 将根管内干燥, 将碧蓝糊用30号扩大针送至根管口, 然后依次送入40~15号牙胶尖, 反复侧压器侧压, 完成根管充填, 充填完成后, 拍X片检查有无欠充, 无欠充永久充填, 充填材料最好用粘接性较好的玻璃离子或树脂, 备洞尽量接近裂隙底部, 以增加牙体的抗力。治疗完成后, 佩戴临时冠观察2周, 无临床不适症状, 给予永久性全冠修复。热凝牙胶充填比侧压充填有更好的临床效果, 特别对于侧枝根管的充填比较完全, 可有效降低根尖周病的复发率。
5 疗效评价
5.1 成功标准
全冠修复一年后, 口内检查, 患牙无松动, 或松动度低于一度, 牙周无溢脓, 没有明显牙周袋, 牙齿咀嚼功能良好。X线片检查, 牙齿根尖周无阴影, 根分叉无阴影, 牙根无明显吸收。好转, 患者咀嚼无明显不适感, 冷热刺激不明显, 长期咀嚼有劳累感。失败, 牙齿松动二度以上, 不能行使咀嚼功能或咀嚼疼痛, 根尖周窦道不愈, 根分叉溢脓治疗无效。
5.2 治疗效果
该科治疗216例患者中, 随访病例145例, 最长随访8年, 其中因牙周病牙齿脱落3例, 因根尖窦道不愈拔除2例, 根分叉病变溢脓刮治无效拔除4例。随访145例患者151颗隐裂牙, 失败9颗, 成功121颗牙齿。好转21颗牙齿, 成功率80.1%, 取得的较高的成功率和良好的治疗效果。
3讨论
失败原因分析:①隐裂牙裂隙较深, 病变达根分叉或根部, 全冠修复后不能封闭裂隙, 细菌沿裂隙进入到根分叉区或根部, 导致治疗失败。②患者严重的牙周病, 牙齿松动脱落。③牙齿根尖周病变时间较长, 根尖周有大量炎性物, 牙根吸收严重也是治疗失败的原因之一。隐裂牙的保留关键在于详细的询问病史和仔细的临床检查, 只有这样才能早期明确诊断, 诊断明确后及时给予全冠保护才能防止患牙牙髓坏死或完全劈裂。过去的隐裂牙在治疗中, 往往将早期的隐裂牙症状误诊为牙本质过敏和咬合创伤, 脱敏治疗可缓解症状, 后期却给患牙治疗带来了更大困难。牙髓的坏死及根尖周病变由于裂隙的存在可能累及根分叉病变从而导致治疗失败。经随访病例观察, 早期诊断保留牙髓活力的患牙咀嚼功能良好, 牙根无吸收, 而死髓牙3年后均有不同程度的牙根吸收, 这将减少患牙使用寿命。失败病例除1例牙周病患者是活髓牙, 其余均为死髓牙或根尖周病变的患者, 因此早期详细的检查和诊断才是隐裂牙治疗成功的主要因素。
参考文献
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保存效果 篇2
关键词：淫羊藿；菟丝子；大鼠；附睾精子；精子活率指数
中图分类号： R321.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）03-0145-03
精液冷冻保存技术已有200多年的历史。人的精液冷冻保存可以追溯到20世纪40年代末。目前，精液冷冻保存在我国主要应用于人类精子库，目前，已经建立了较为成熟的精液冷冻保存体系。全国各生殖中心对人精液冷冻保护剂的需求量比较大，市场上人精液冷冻保存剂几乎全部被国外的生物公司所垄断，国内只有部分科研院所自行配制畜禽精液冷冻保护剂，还没有我国自行开发的人类精液冷冻保护剂应用于临床。笔者前期研究表明，对少弱精患者进行精液冷冻保存，可以获得尽可能多的处理后活动精子总数（PTMS），并应用于宫腔内人工授精（IUI），使更多的患者可以接受IUI技术治疗，减少治疗费用，让不孕不育患者以最小的代价获得妊娠[1]。现有的人类精液冷冻保存系统适合人的正常精液。本研究探讨中药水提液对大鼠精液冷冻保存效果，旨在为冷冻保存少弱精患者精液提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
15周龄清洁级SD雄性大鼠（南京医科大学实验动物中心），取附睾精子用于冷冻保存研究。菟丝子（安徽井泉集团中药饮片有限公司），批号：20110803。淫羊藿（安徽省万生中药饮片有限公司），批号：20110701。2种药材均购自江苏省中医院药剂科。M16 Medium（Sigma公司），批号：11A832。
1.2 方法
1.2.1 菟丝子、淫羊藿中药提取液的制备 取干净菟丝子、淫羊藿各500 g，分别加8倍蒸馏水（4 000 mL）浸泡30 min，武火煮沸，文火再煮30 min，滤布过滤，滤渣再加5倍量水（2 500 mL），同上法再处理2次，各煮沸30 min，合并3次滤液。将合并的滤液旋蒸，浓缩至1 000 mL。将浓缩液置于冰箱中静置沉淀，去除悬浮粒子（24 h）。将菟丝子滤液于70 ℃水浴中浓缩至 1 g/mL （每mL药液相当于1.00 g生药量），淫羊藿滤液浓缩至 2 g/mL （每mL药液相当于2.00 g生药量）。将浓缩滤液 2 500 r/min 离心20 min，取上清液 200 mL，加入等量蒸馏水稀释后过夜，2 500 r/min离心 20 min 后再30 000 r/min高速离心20 min，提取上清液最终定量为菟丝子0.5 g/mL（每mL药液相当于0.50 g生药量），淫羊藿滤液浓缩至1.00 g/mL（每mL药液相当于1.0 g生药量）。将上清液经0.45 μm滤器过滤，冷藏保存备用。
1.2.2 固体物质含量测定 取菟丝子、淫羊藿水提取液各 2 mL，置恒重的称量瓶中，于120 ℃电热恒温干燥箱中干燥 3 h，使溶液缓慢挥发，直到其中的固体成分完全干燥为止，准确称量，重复2次，取平均值。溶液固含量计算见公式（1）：
固含量=干燥后固体重量/溶液总重量×100%
（1）
1.2.3 稀释液的配制 375.0 mmol/L Tris（51.11 mg/mL）+124.0 mmol/L柠檬酸（26.06 mg/mL）+41.0 mmol/L葡萄糖（8.12 mg/mL）。50 mL稀释液含2.555 5 g Tris+1.303 g柠檬酸+0.406 g葡萄糖。用375.0 mmol/L Tris将稀释液的pH 值调整到7.0，用三蒸水将渗透压调整到375 mOsm。
1.2.4 基础液的配制 基础液Ⅰ：M16培养液+50 μg/mL硫酸链霉素+75 μg/mL青霉素+0.1 mol/L棉籽糖+0.05% SDS+20%卵黄（95%）。基础液Ⅱ：首先自行配制mKRB培养液，配方如下：CaCl2·2H2O 1.71 mmol/L，MgSO4·7H2O 119 mmol/L。KCl 4.78 mmol/L、KH2PO4 1.19 mmol/L、NaHCO3 25.07 mmol/L、NaCl 94.6 mmol/L、葡萄糖 5.56 mmol/L、丙酮酸钠 0.5 mmol/L、乳酸钠 21.58 mmol/L、硫酸链霉素 50 μg/mL、青霉素 75 μg/mL。在mKRB培养液中一次性加入01 mol/L棉籽糖、005% SDS、20%卵黄。基础液Ⅰ、基础液Ⅱ加入卵黄后，连续混匀30 min后6 000 r/min离心30 min，取上清后再次离心30 min，用HCl调整溶液pH值为7.3，然后用 045 μm 滤膜过滤，将配制好的基础液低温保存备用。
1.2.5 试验分组 试验Ⅰ：对照组C1：PBS（5%）+基础液Ⅰ（95%）；菟丝子组T1A：0.5 g/mL菟丝子提取液（1%）+PBS（4%）+基础液Ⅰ（95%）；菟丝子组T1B：0.5 g/mL菟丝子提取液（2.5%）+PBS（2.5%）+基础液Ⅰ（95%）；菟丝子组T1C：0.5 g/mL菟丝子提取液（5%）+基础液Ⅰ（95%）。淫羊藿组Y1A：1 g/mL淫羊藿提取液（1%）+PBS（4%）+基础液Ⅰ（95%）；淫羊藿组Y1B：1 g/mL淫羊藿提取液（25%）+PBS（2.5%）+基础液Ⅰ（95%）；淫羊藿组Y1C：1 g/mL 淫羊藿提取液（5%）+基础液Ⅰ（95%）。将大鼠精液与冷冻液按1 ∶ 1、1 ∶ 2（体积比）混合，分装于冷冻麦管中。
试验Ⅱ：对照组C2：PBS（10%）+基础液Ⅰ（90%）；菟丝子组T2A：0.5 g/mL菟丝子提取液（2.5%）+PBS（7.5%）+基础液Ⅰ（90%）；菟丝子组T2B：0.5 g/mL菟丝子提取液（5%）+PBS（5%）+基础液Ⅰ（90%）；菟丝子组T2C：0.5 g/mL 菟丝子提取液（10%）+基础液Ⅰ（90%）。淫羊藿组Y2A：1 g/mL淫羊藿提取液（2.5%）+PBS（7.5%）+基础液Ⅰ（90%）；淫羊藿组Y2B：1 g/mL淫羊藿提取液（5%）+PBS（5%）+基础液Ⅰ（90%）；淫羊藿组Y2C：1 g/mL淫羊藿提取液（10%）+基础液Ⅰ（90%）。将大鼠精液与冷冻液按 1 ∶ 1、1 ∶ 2（体积比）混合，分装于冷冻麦管中。
nlc202309041315
试验Ⅲ：对照组C3：基础液Ⅱ；菟丝子组T3A：0.5 g/mL菟丝子提取液（0.5%）+基础液Ⅱ（99.5%）；菟丝子组T3B：0.5 g/mL菟丝子提取液（1%）+基础液Ⅱ（99%）；菟丝子组T3C：0.5 g/mL菟丝子提取液（1.5%）+基础液Ⅱ（98.5%）。淫羊藿组Y3A：1 g/mL淫羊藿提取液（1.5%）+基础液Ⅱ（98.5%）；淫羊藿组Y3B：1 g/mL淫羊藿提取液（2.5%）+基础液Ⅱ（97.5%）；淫羊藿组Y3C：1 g/mL淫羊藿提取液（35%）+基础液Ⅱ（96.5%）。
各组精液冷冻保护液配制完成后，均经0.22 μm滤器过滤后备用。
1.2.6 附睾尾部精子的获取与稀释 每只大鼠用2 mL 10%水合氯醛腹腔麻醉后解剖，分离附睾尾，放置于盛有2 mL稀释液的353037培养皿中，取附睾尾部浆液分析测定精子密度（N）、精子活率（SMI），用稀释液将精子密度调整到2 000万/mL备用。使用Makler计数板调整密度。
1.2.7 装管 将精液与冷冻保护液按照1 ∶ 2（体积比）分装于冷冻麦管和冷冻管中。
1.2.8 冷冻与解冻 将分装好的麦管或冷冻管放入4 ℃冰箱30 min，在距离液氮表面1～2 cm的液氮蒸汽中熏蒸 10 min，然后直接投入液氮中。将冷冻麦管从液氮中取出，37 ℃ 水浴中静置10 s，然后将冻存精液转移到353037培养皿中，在37 ℃培养箱中培养10 min，检测解冻后精子活率及畸形率。将冷冻管从液氮中取出，37 ℃水浴中静置10 min，完全解冻后检测精子活率及畸形率。
1.2.9 精子活率测定 滴1滴精液于载玻片表面，加载盖玻片，记录活动精子数、前向活动精子数、不活动精子数，精子活率指数计算公式如下：
2.6 菟丝子、淫羊藿水提液最佳添加浓度的确定
添加1%菟丝子提取液、2.5%淫羊藿提取液的冷冻保护剂解冻后可以见到活动精子。添加1%菟丝子提取液（T3B）的冷冻保护剂解冻后精子活率指数最高，与其他组差异显著；添加3.5%淫羊藿提取液（Y3C）的冷冻保护剂解冻后精子活率指数最高，但与2.5%淫羊藿提取液（Y3B）组无显著差异。
3 结果与分析
比其他哺乳动物精子相比，大鼠精子尾巴更加细长，且头部呈狭小细长的镰刀状[2-3]。这些结构上的特殊性决定其对一些环境变化极其敏感，如物理损伤、pH值变化、渗透压变化、温度变化等[4-5]。研究人员对大鼠精子进行不同程度离心，结果表明，700 r/min 离心5 min 后精子活力明显低于未离心组，离心3 次后精子质膜完整性近乎0。因此，大鼠精子冷冻过程中应尽量避免外界损伤。大鼠精子冷冻难度较大，主要是由于精子质膜的脂质含量、成分不同造成的[6]。陈荪红将大鼠、小鼠、人类精子在人类精子的低渗肿胀检测液中孵育30 min 后，人类精子尾部出现尾间弯曲肿胀或完全肿胀，小鼠精子也出现类似人类精子现象，而大鼠精子与上述2种精子明显不同，其尾部未出现任何弯曲肿胀现象[7]。Hammerstedt 等对不同动物精子质膜的磷脂成分进行比较，发现大鼠精子质膜与牛、羊等有明显区别，说明大鼠精子冻存难度较大与其成分特异的细胞膜有关[8]。大鼠作为体型适中的试验动物被应用于很多研究领域，再加上人类疾病模型的增多，需要建立成熟的保种方法。然而，大鼠精子结构的特殊性导致其精子冷冻还处于探索阶段，如果了解了大鼠精子细胞生物膜结构，然后针对该特性进行生物学机理研究，有可能取得突破性进展，开发出适合的冷冻程序、冷冻保护剂。在以后的工作中，应选择菟丝子、淫羊藿、丹参等单味中药的有效成分用于大鼠精液冷冻保存研究。
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尿培养管保存细小标本的效果 篇3
1 资料与方法
1.1 一般资料统计2014年3-10月手术室细小标本送检共计532例次。均按照《手术室病理标本处理流程》规范处置。
1.2 方法将直径<0.8cm的手术标本定义为细小标本;随机将标本保存分为实验组 (311 例次) 和对照组 (221 例次) , 比较固定标本所需时间、标本固定液及内容物外漏发生率。
1.2.1 实验组:采用尿培养管盛装固定:一次性使用无菌导尿包 (广东省湛江市事达实业有限公司生产) 内塑料试管, 收集后低温等离子灭菌备用;采集标本时现开现用。标本取样后, 手术医生、洗手护士及巡回护士三方共同核对标本名称、数目及患者信息, 由洗手护士将组织放入试管, 注入95%无菌乙醇溶液固定标本, 密封管口, 装入标识患者基本信息的一次性使用病理标本袋, 术毕送检登记。
1.2.2 对照组:采用抗生素瓶盛装固定:将用完抗生素的小瓶及瓶塞清洗干净, 倒置将水控干, 瓶身及瓶塞晾干备用。标本取样后, 三方共同核对标本信息无误后, 由巡回护士接取下台, 放入备好的抗生素瓶内, 转至标本存放间注入10%甲醛固定标本, 盖好瓶塞, 并用胶带加固瓶口密封, 装入标识患者信息的一次性使用病理标本袋, 完善登记。
2 结果
尿培养管固定标本无1例内容物外漏, 固定液外漏率为33.03%下降至3.54%, 大大缩短了保存标本所需时间, 见表1。
3 讨论
3.1 利于病理标本妥善保存手术室普通标本按规定必须浸入10%甲醛溶液或95%乙醇溶液内, 使蛋白质凝固, 终止或减少分解酶作用, 防止自溶, 保持组织、细胞的离体前结构状态。我院仍是手工书写标本标识信息。由于玻璃瓶塞松动, 固定液外漏会造成标签模糊、字迹不清, 给运送工人核对带来不便与困难, 甚至有标本内容物漏出的隐患。而尿培养管为标准化、规范化设计, 且密封帽具有防滑功能, 质量得以保证;排除因暴力操作导致试管口裂痕外, 其密封效果严实稳固, 有效防止转运过程中震动、挤压等致使密封帽脱落造成标本固定液或内容物外漏现象发生。
3.2 提高病理标本处理效率尿培养管为一体化包装, 使用方便快捷、一步到位。术中直接提供给洗手护士, 一次性完成标本的留取及固定, 减少传统抗生素瓶盛装时接取标本、放置固定液及胶带密封瓶口等环节, 极大地缩短标本处理时间, 也避免了同一台手术多个病理标本时, 洗手护士与巡回护士在交接过程中产生混淆。同时, 试管体透明可见, 方便查看标本是否存在、能否满足病检需求, 显著提高护士工作效率。
3.3 优化病理标本处理流程在留取和送检标本过程中, 由于操作不当或疏忽大意, 易发生标本污染现象。尿培养管收集后统一低温等离子灭菌;按照国家卫生部2012《消毒技术规范》要求, 采用棉拭子擦拭法采样, 试管体菌落总数≤1cfu/cm2, 且未检出致病菌。术中需要留取细小标本时即开即用, 摒弃抗生素瓶未灭菌处理带来的污染风险, 完善标本处理流程, 提高标本处理质量, 保证手术标本安全, 确保病检结果真实性。
3.4 减少医护人员职业危害甲醛溶液是目前组织病理学技术常规应用的组织固定液[4]。因其具有较强刺激性、毒性、腐蚀性且易挥发, 对人体皮肤、黏膜、眼睛、呼吸道具有强烈刺激作用, 并有致畸性、致癌性, 严重者可引起肺水肿甚至导致死亡。手术室人员长期处于职业暴露危险中, 做好职业防护具有重要意义。尿培养管密封紧实, 有效防止固定液外漏、挥发, 使护理人员免受其刺鼻气味, 对自我保护起到重要作用。
病理标本管理是手术室护理管理工作中一项重要内容[5]。留取和送检过程中, 医护人员应分工明确, 责任落实, 确保标本安全管理;杜绝因交接不清、责任不明确, 引发标本遗漏、丢失、混淆、污染等现象, 影响疾病的诊断和治疗, 给患者带来巨大痛苦, 造成医患纠纷[6]。
摘要：目的:介绍尿培养管保存手术标本的应用方法;持续改进标本的安全管理。方法:使用尿培养管盛装、固定直径<0.8cm的细小手术标本, 与传统保存方法作比较, 观察使用的优越性及安全性。结果:尿培养管密封严实稳固, 标本固定液渗漏率明显减少, 标本内容物无外漏, 送检时间显著少于传统方法。结论:尿培养管保存标本方便快捷、安全有效;可以避免固定液外渗浸湿标本信息, 杜绝标本混淆;减少了医护人员的职业危害。
关键词：尿培养管,标本,效果
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如何保存膳食营养 篇4
日常生活中，我们会选择各种肉类、蛋类以及蔬菜、水果以摄取营养，保持身体健康。然而怎么做才能最大限度地保留食物中的营养成分，避免营养流失？这方面我们还有些误区。尽管很多人都知道，新鲜蔬菜尽量生吃、凉拌，用微火、沸水清蒸的方法制作菜肴更有营养，但是淘米多少次为宜？蔬菜炒前是不是都要先用水焯一下？饭后百步走，有利于营养吸收吗？类似的问题还是常常在家庭成员间引起争论。
先洗后撕少动刀
洗涤之后的原料（尤其是蔬菜和水果）不要切得过碎，以免原料中易氧化的营养素与空气接触机会增多而加大损失。另外浸泡、挤压、腌制等，也容易导致维生素C及矿物质的损失。因此，加工原料时一定要先洗后切，能用手撕的蔬菜就用手撕，尽量少用刀，因为铁会加速维生素C的氧化。
家庭购买各种食物尤其是新鲜的蔬菜、水果，要视人数及平时就餐的具体情况而定，切忌购买过多。如食品储存过多，不能及时食用，则放置时间越长营养素损失越多。
蔬菜并非都要焯
为了去异味、缩短烹调时间、造型需要等，某些原料需要作水焯处理。水焯时一定要大火沸水，加热时间短，操作迅速，原料较多时可分次下锅，沸进沸出。这样，动物性原料可因骤受高温，蛋白质迅速凝固，从而保护原料内部的营养素。植物性原料尤其是蔬菜，不仅能减少色泽的改变，同时还可减少维生素的损失。
当然能不水焯的蔬菜，尽量不焯，以减少蔬菜经过水焯后损失的一部分维生素。但对于某些含草酸较多的蔬菜如苋菜、菠菜等，水焯是必要的，因为通过水焯可以除去较多的草酸，降低形成结石的几率，有利于钙、铁在体内的吸收。
急火快炒盖锅盖
在烹调蔬菜时，为了保持颜色的清亮而加碱，破坏了蔬菜的营养素。碱会造成食物中维生素和矿物质的大量损失，特别是维生素B1几乎全部损失，维生素B2也会损失一半。因此，烹制各种食物时，尽量不加碱。
炒菜时要急火快炒，避免长时间炖煮，而且要盖好锅盖，防止溶于水的维生素随蒸气跑掉。炒菜时应尽量少加水。炖菜时适当加点醋，既可调味，又可保护维生素C少受损失。做肉菜时适当加一点淀粉，既可减少营养素的流失，又可改善口感。
炒菜过程中尽量晚放盐。由于渗透压的作用，早放盐会使蔬菜中的维生素和矿物质过多丢失。另外提倡现做现吃，主要是减少原料特别是蔬菜在放置过程中营养素的氧化损失。如蔬菜炒熟后，放置1小时，维生素C会损失10%左右，放置2小时会损失14%左右。下面的蔬菜，还会随时间延长，而使水溶性维生素过多丢失。
少淘几遍损失少
谷类食物是我国大多数地区居民膳食维生素B1的主要来源，维生素B1主要含在大米、小麦的表面上，谷物加工过于精细可导致维生素B1大量丢失。所以淘米最好不要超过2遍，也不要使劲揉搓。
另外要少吃加工非常精细的食物，多吃粗加工的食物。精加工会使面粉中的营养大大流失，经过道道工序的淘洗、加工，其中的叶酸盐会减少90%，维生素E损失90%以上，维生素B5损失60%，铬、锰、铁、钴、铜、锌、镁等矿物质的含量减少70%以上。
即使是加工起来相对简单的冷面，经过一煮、一捞两道程序，其中49%的维生素B1、57%的维生素B2和22%的维生素B3等营养也会随之损失。
饭后不要立刻走
饭后立即走动，可能会让体内营养流失。这是因为饭后的食物，需要大量的血液来帮助消化器官运作，若立即运动或散步，则四肢血液量增加，胃肠的血液供应量相应减少，不利于食物消化，影响人体对营养的吸收。饭后如果立刻洗澡，皮肤毛细血管会扩张充血，进而使消化系统的血流量不足，也会影响消化吸收。
据研究，食物在消化道停留的时间，脂肪约为5小时，蛋白质约为2小时，糖类约为1小时。在饭后休息30分钟至1小时后，再开展小运动量活动为宜。
保存效果 篇5
1 材料和方法
1.1主要药品和试剂
葡萄糖 (成都科龙化工试剂场, 分析纯) 、二水柠檬酸三钠 (重庆川东化工集团有限公司) 、碳酸氢钠、EDTA、氯化钠、氯化钾、青链霉素 (华北制药股份有限公司) 、双蒸水等。
1.2 主要仪器
超纯水制备器 (Pure Lab TMPlus, Pall公司德国) ;生物显微镜 (olympuscx31) ;精密ρH计 (梅特勒-托利多DELTA320) ;渗透压计 (MICRO-OSMOMAT210) ;电子分析天平 (ESJ-182D沈阳) ;保温箱 (Electrolux BCD-233) ;保温水壶、水浴锅等。
1.3 精液采集
手握法收集5头繁殖历史清楚, 达到体成熟, 健康无病公猪的精液。收集富含精子部分, 4层纱布过滤除去胶体, 检查活率, 密度, 在37℃的环境下0.5 h内送抵实验室。
1.4 精液的稀释
1.4.1 稀释液:
稀释液以市场常用Modena[1]和BTS[2]液为对照, 以本所自配液Ⅰ、Ⅱ为试验组, 观察稀释液对精液的保存效果。4种稀释液配方见表1。
1.4.2稀释程序:
将稀释液置于水浴锅中加热到34℃, 至36~37℃。然后对采集的公猪精液检查活力、密度, 分别以1∶1稀释, 在室温下放置2~3 h, 用纱布包好, 放入17℃冰箱。
1.5 精液品质检查
1.5.1 精子活率测定:
取1滴精液于载玻片, 40倍相差显微镜下观察, 采用10级评分法评定。
1.5.2 精子畸形率测定:
用凡那他氏镀银法染色。取1滴精液抹片, 自然风干, 滴胡氏固定液1 min, 水洗10 s。后将染色液滴在载玻片上, 缓慢加热汽化为止, 水洗30 s。加0.25%的硝酸银2~3滴, 滴一滴氨水, 左右摇晃, 产生浑浊的黄褐色, 用酒精灯加热, 产生白雾状为止。水洗, 干后镜检。
1.5.3 精子顶体完整率检测:
用考马斯亮蓝染色。将考马斯亮蓝R250 50mg溶于100 m L蒸馏水, 煮沸溶解, 0.45μm滤膜过滤。加入3.5 m L高氯酸, 配成CBB高氯酸染色液染色。染色前, 将染色液置于37℃水浴锅中预热10min, 将精子涂片置于CBB高氯酸染色液中浸染5~7 min;水洗, 干后镜检。
1.5.4 精子质膜完整性检查:
采用低渗肿胀法。取50μL的精液, 放入37℃1 m L低渗果糖液中, 混匀。30 min后, 取1滴于血细胞计数板上, 40倍相差显微镜下观察5个视野, 至少数200个精子, 计算弯尾精子的百分率。
1.5.5 精子存活时间检测:
取精液1m L置于载玻片, 40倍相差显微镜下观察5个视野, 每隔1 h检测1次活率, 当活率下降一半时, 每隔0.5 h检查1次, 直至活率降为0.4为止。
1.6 试验设计
1.6.1 不同稀释液对猪精子质量的影响:
将收集的猪精液分为4份, 每份用不同的稀释液稀释。试验采用单因素方差分析, 每组重复5次, 比较解冻后猪精子的活率、畸形率、质膜完整率、顶体完整率, 从中选出稀释效果最好的稀释液。
1.6.2 数据处理:
采用SPSS 13.0软件one-way ANOVA进行方差分析。
2 结果与分析
2.1 稀释液对精子存活时间和生存指数的影响
由上表可见, 4种稀释液, 存活时间以BTS液和自配液Ⅰ液最佳, 存活时间为136 h和147 h, 显著优于其他组 (P<0.05) ;自配液Ⅱ液保存精子的时间最短, 效果最差。虽然Modena液的存活时间比较长, 但是其生存指数显著低于BTS液和自配液Ⅰ (P<0.05) , 自配液Ⅱ液是同组中生存指数指标最差组, 仅有36.2, 极显著低于其他组 (P<0.01) , BTS液和自配液Ⅰ组差异不显著 (P≥0.05) 。
2.2 保存24 h后, 不同稀释液对猪精子形态的影响
由表3可知, 使用不同稀释液保存24 h后, 自配液Ⅱ液畸形率显著高于其他组 (P<0.05) , 弯尾率显著低于其他组各组 (P<0.05) 。BTS液、Modena液和自配液Ⅰ液各组间畸形率和弯尾率差异不显著 (P≥0.05) 。自配液Ⅰ液的顶体完整率明显优于其他组 (P<0.05) , Modena液和自配液Ⅱ液是同组指标最差的。
2.3 几种稀释液对母猪受胎率及产仔数的影响
由表4可知, 使用不同的稀释液稀释精液, 受胎率以稀释液Ⅱ液效果最差 (P<0.05) , 稀释液Ⅰ效果好于BTS和Modena;比较活仔数和产仔数, 各组差异不明显 (P≥0.05) 。
3 讨论
3.1 4种稀液的稀释效果
稀释液的主要作用在于扩大精子的利用率, 增强体外存活时间[3]。好的稀释液不在于稀释液所含的营养成分有多高, 配方有多复杂, 而在于稀释液是否能够给精子提供体外存活的条件[4]。影响精子体外生存的条件主要与渗透压、p H值、离子平衡等方面有关[5]。试验表明, 虽然稀释液Ⅰ配方简单, 但效果优于其他组, Modena液配方复杂, 但稀释效果并不理想。稀释液Ⅱ的稀释效果不理想可能是因为K、Ca离子失衡。
%、h
%
%、头
3.2 安钠咖在稀释液中的作用
本次试验比较了4种稀释液的稀释效果, 结果稀释液Ⅰ的效果最好。稀释液Ⅰ中含有安钠咖, 安钠咖是安息香酸钠与咖啡因合成的药物, 咖啡因能作用于细胞上的特异受体, 抑制磷酸二酯酶活性, 增强c AMP, 加速细胞新陈代谢[6、7、8]。本次试验研究表明, 稀释液中添加安钠咖, 添加量5 m L时, 其稀释效果显著高于其它组。
3.3 适合生产中推广的稀释液
从精子活率、生存指数及配种后受胎率及产仔数等指标来看, 采用稀释液Ⅰ配方简单, 并且可提高精液的有效利用, 在受胎率及产仔数上接近甚至超过一般本交水平, 适合生产中推广应用。
参考文献
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[7]文国艺.咖啡因预处理解冻精液对牛体外受精的影响.西南农业学报, 2000, 13 (2) :95-98.
保存效果 篇6
1 温度对于猪精液保存效果的影响
猪人工授精精液都是采用液态常温保存, 这是由猪精子本身的生理生化结构特点决定的。Althhouse等[1]研究表明, 猪精液稀释后低于12℃时容易发生冷休克, 而且随着温度的降低, 精子的存活时间和活精子数量呈急剧下降态势。猪精液在高温条件下能量代谢加剧, 精液中细菌繁殖速度加快, 致使精液在短时间内就会衰亡。林峰等[2]将精子活力为50%和30%的稀释精液在15~20℃和21~25℃的温度下保存, 结果表明, 在15~20℃温度下精子存活时间显著高于21~25℃, 说明在15~20℃之间的温度区域内对保存猪稀释精液最有利。将BTS稀释过的长白猪精液分别在25℃、20℃、15℃和10℃下保存, 经过一段时间后发现, 在20℃的温度条件下精子活力、顶体完整率和p H方面的不利影响最小。潘越博等[3]将稀释精液在15℃、16℃、17℃和18℃温度下保存, 通过对精子活力、存活时间和生存指数等指标检测, 结果发现在17℃的保存条件下效果最好, 但是各温度之间差异不显著。从目前的研究和实践效果看, 种公猪精液的保存温度都采用16~18℃。
2 稀释液对于猪精液保存效果的影响
2.1 稀释液的作用和成分
稀释液的主要作用就是延长精子在体外的生存时间, 因此稀释液要具有能够提供精子新城代谢的基本物质、中和代谢产生的有毒废物、维持细胞膜稳定和阻止精子获能、维持渗透压和降低细菌生长的作用。稀释液的成分包括营养剂 (葡萄糖、果糖) 、稀释剂 (氯化钠、蔗糖) 、保护剂 (柠檬酸、磷酸二氢钠) 及抗生素 (青霉素、链霉素、庆大霉素等) 。营养剂主要为精子提供营养成分, 保持基本的新陈代谢, 还可以起到维持基本渗透压的作用。周岐生等[4]研究证实, 用蜂蜜代替葡萄糖能提高精子的存活率, 并且有一定的抗菌作用。
2.2 稀释液的p H对猪精液保存效果的影响
新鲜猪精液的p H值一般为7.2~7.5, 在常温情况下, 精子离开体外由于自身的新陈代谢和环境影响活力迅速下降, 而要在常温下一定时间内保存, 一般利用其在偏酸性环境来抑制精子的代谢和运动, 从而延长存活时间。通过p H来抑制精子的代谢是可逆的, 当p H恢复到7左右时, 精子能保持正常活力。在此基础上, 为了确定猪常温保存稀释精液的最佳p H, 林峰等[2]针对不同p H对猪精液保存效果的影响, 实验比较了在p H6.5~6.9和p H6.0~6.4条件下猪精液的保存效果。经对比试验发现, 猪精液p H为6.0~6.4的保存效果明显好于6.5~6.9。
2.3 稀释液中添加抗生素对猪精液保存的影响
猪精液在体外保存过程中, 精液中所含的有害微生物会和精子争夺营养物质, 而且还会代谢出有毒有害的废弃物, 改变精子的生存环境, 严重影响精子的活力和保存效果。这些微生物包括大肠杆菌、沙门氏菌、棒状杆菌、变形杆菌和克雷伯菌等, 因此在猪精液的稀释过程中往往加入一些对细菌生长有抑制作用的抗生素。许国林等[5]试验证明, 在稀释液中添加庆大霉素能有效抑制猪精液中的细菌生长, 并且在受精率上要比添加青霉素和链霉素的猪精液高、不良作用小。也有研究表明, 在从猪精液中提取的细菌中, 环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星对其也有很好的抑制作用。
3 结论
在猪精液保存过程中, 温度和稀释液的环境都对其活力有着重大影响。目前大多数猪精液保存手册通常提到15~20℃的保存温度, 可以更加精确到16~18℃范围。在恒温箱保存条件之下, 温度设为17℃为最佳。在稀释配制过程中, 注意添加改善猪精子生存和代谢环境的成分, 能够提高猪精子的活力和受精率。
参考文献
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[2]林峰, 杨婷, 陈玉霞, 韩雪蕾, 等.温度与稀释液p H对猪精液常温保存效果的影响[J].家畜生态学报, 2012, (4) :66-68.
[3]潘越博, 黄龙艳, 米占峰.不同稀释液和温度对猪精液稀释常温保存效果的影响[J].国外畜牧学:猪与禽, 2010, (006) :72-74.
[4]周岐生, 陆增康.公猪精液液态低温保存试验[J].畜牧与兽医, 1986, (04) :151-153.
保存效果 篇7
本研究采用Bio-Oss Collagen骨胶原进行拔牙后牙槽窝内植骨,Bio-Gide可吸收生物膜覆盖创口,观察其临床效果,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 研究对象
选取2012年1月-2014年12月在本院口腔科治疗且符合纳入标准的患者80例。其中,男性43例,女性37例;年龄20~60岁,平均(42.1±6.3)岁。本研究获得本院伦理委员会的批准。纳入标准:①所有患者为单颗后牙(前磨牙或磨牙)拔除;②患者牙周组织健康,需拔除的患牙有≥1颗邻牙;③邻牙健康无复体;④患者对本研究知情同意,签署知情同意书。排除标准:①有中、重度牙周疾病或患牙正处于急性炎症期无法植骨的患者:②邻牙龋坏或已做修复体的患者;③患有未控制的全身疾病或因疾病需要正在服用影响组织愈合药物的患者;④妊娠期患者。随机将80例患者分为治疗组和对照组,每组40例,治疗组男性22例,女性18例;平均年龄(41.7±5.8)岁。对照组男性21例,女性19例;平均年龄(42.8±6.1)岁,两组患者在年龄和性别构成方面比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
1.2 手术方法
两组患者采用微创技术拔除患牙,术前1 h给予抗生素口服,采用复方盐酸阿替卡因局部麻醉。采用微创技术拔牙时尽量避免翻瓣、损伤牙槽窝及牙龈。患牙拔除后,常规采用挖勺搔刮牙槽窝,去除拔牙窝内肉芽组织,暴露新鲜骨创面。采用3%过氧化氢溶液,0.12%醋酸氯己定溶液及生理盐水冲牙窝。对照组采用8字缝合,自然愈合。治疗组患者则将经生理盐水浸泡后的Bio-Oss Collagen骨胶原(瑞士Geistlich公司)植人牙槽窝,平齐或略高于牙槽嵴顶,再用Bio-Gide可吸收生物膜(瑞士Geistlich公司)覆盖牙槽窝,最后应用可吸收线行8字形缝合,固定胶原膜不移位。术后两组患者口服头孢呋辛及替硝唑1周,西吡氯铵含漱液2周,嘱其2周内进软食。
1.3 观察指标
1.3.1 牙槽嵴宽度和高度的变化量
两组患者分别在拔牙后即刻和拔牙后6个月后进行锥形束CT检查并拍照,采用Planmeea Romexis Viewer 3.6.0 R测量牙槽突宽度和高度,并计算其变化量。调整CT图像,使其在冠状位鼻底水平、鼻中隔垂直、矢状位上鼻底水平,确定测量的参考线,颊舌侧牙槽嵴顶的连线到参考线的距离为牙槽嵴的高度。若颊舌侧牙槽嵴不平齐,则选择靠冠方的一侧牙槽嵴进行测量。在牙槽嵴顶连线根方3 mm处测量牙槽突颊舌向整体的水平宽度为牙槽嵴宽度,2次测量的差值为牙槽嵴高度计宽度的变化值,负值代表维度减少,正值代表维度增加。
1.3.2 牙间乳突高度和唇舌向宽度的变化量
术前及术后6个月于拔除的患牙近、远、中各留两颗牙体的范围内取印模并灌注超硬石膏模型,测量牙间乳头高度,既近中邻面牙间乳头顶点至近中邻牙切角的垂直距离与远中邻面牙间乳头顶点至远中邻牙切角的垂直距离的差值;测量龈缘中点根向2 mm处唇舌向厚度,即唇舌向宽度。
1.3.3 植入种植体的直径和长度
记录拔牙后牙槽窝软组织的愈合情况和有无感染。记录6个月后植入种植体的直径和长度。
1.4 统计学方法
采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析,计量资料以均数±标准差( ±s)表示,用t检验,计数资料以率表示,用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者牙槽嵴高度和宽度变化的比较
两组患者牙槽嵴高度和宽度变化量比较,经t检验,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组患者的牙槽嵴宽度和高度减少量均低于对照组。见表1。
2.2 两组患者牙间乳突高度和唇舌向宽度变化的比较
两组患者牙间乳突高度和唇舌向宽度变化量比较,经t检验,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组患者的牙间乳突高度和唇舌向宽度减少量均低于对照组。见表2。
2.3 两组患者种植体直径和长度分布
两组患者4.8 mm直径种植体比例比较,经χ2检验,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组高于对照组;治疗组种植体长度分布与对照组比较,经χ2检验,差异有统计学意义(P<0.05)(见表3)。两组患者种植体种植后未出现种植体周围感染、松动或脱落等不良反应。
(n=40,mm,±s)
[n=40,例(%)]
3 讨论
随着种植技术和应用材料的发展,牙齿缺失后种植修复被越来越多的患者采纳。牙齿缺失后,自然愈合的牙槽窝会发生生理改建,牙槽嵴出现活跃的骨吸收反应。有研究报道,在拔牙术后3~6个月骨量吸收速度较快,随后呈现稳定趋势,逐渐减少,前6个月水平骨量减少可高达29%~63%,垂直骨量减少11%~12%[6]。由于咀嚼刺激的丧失,牙槽嵴会发生不可逆的废用性萎缩,进一步造成牙槽嵴的高度和宽度降低,对后期人工牙根的植入、义齿的修复均产生不利影响[7]。尤其是对于合并重度牙周炎症的患者,牙齿支持组织丧失较多,牙槽嵴往往呈现低、窄等较差的条件,对后期义齿修复的长期固位和功能存在不利的影响。传统的开放式上,颌窦提升术可以解决牙槽嵴萎缩和上颌窦底过低的问题,但手术需在上颌窦前外侧壁上钻孔开窗,手术步骤较复杂,术后患者局部肿胀、疼痛明显,同时手术需要植入大量人工骨,既增加患者痛苦又增加经济负担[8]。而牙槽嵴保存术可以最大程度地保存拔牙后的牙槽骨及牙龈组织,减少牙槽嵴过度吸收及萎缩,为后期的修复治疗奠定良好的基础[9]。
后牙区是行使咀嚼功能的主要区域,因拔除后牙槽窝形态不规则、根尖方向骨量较少等,常选择延期种植,所以良好的生物力学环境对于种植体的长期效果至关重要。研究报道与拔牙窝自然愈合相比,拔牙后在牙槽窝内植入植骨材料并使用屏障膜可显著减少牙槽嵴吸收,维持牙槽骨的外形[10,11]。牙槽窝的填塞可维持牙槽嵴的高度、宽度和外形,填塞材料要求有良好的生物相容性和生物安全性,而且能促进新骨的形成;而膜主要是起机械屏障作用,阻止牙龈组织向牙槽窝内生长[12]。本研究治疗组将Bio-Oss Collagen骨胶原应用于拔牙后牙槽窝内填充,并采用Bio-Gide可吸收生物膜覆盖创口,结果显示,治疗组患者的牙槽嵴宽度和高度减少量、牙间乳突高度和唇舌向宽度减少量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组患者牙槽嵴高度变化量的平均值为正值,考虑是新骨形成所造成的。动物实验研究显示,Bio-Oss异种移植材料不仅可以保持骨再生空间,还可以为宿主的骨组织提供生物支架,促进骨组织再生,拔牙后填塞Bio-Oss人工骨对牙槽嵴吸收具有预防作用[13]。
本研究对两组患者的移植直径和长度进行分析,结果显示,治疗组4.8 mm直径种植体的比例为60.0%,高于对照组的32.5%(P<0.05);治疗组8、10和12 mm种植体长度分别占10.0%、62.5%和27.5%,与对照组(45.0%、42.5%和12.5%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。上述结果进一步说明,将Bio-Oss Collagen骨胶原和Bio-Gide可吸收生物膜应用于牙槽嵴保存术,可有效保护拔牙后牙槽嵴和其周围软组织的萎缩。
摘要：目的 分析异种移植材料应用于后牙牙槽嵴顶保存术的临床效果。方法 选取2012年1月-2014年12月该院口腔科治疗拔除后牙并要求种植修复的80例患者为研究对象。将患者随机分为治疗组和对照组,每组40例。治疗组微创拔牙后,于牙槽窝内植入Bio-Oss Collagen骨胶原,并采用Bio-Gide生物膜覆盖于牙槽窝表面;对照组微创拔牙后直接给予缝合,待自然愈合。在拔牙术后即刻及6个月后测量并计算牙槽嵴宽度与高度的变化量、牙间乳突高度变化量及唇舌向宽度变化量。记录两组患者6个月后植入种植体直径及长度。结果 治疗组患者的牙槽嵴高度变化量为(0.37±0.96)mm,大于对照组[(-0.65±1.32)mm],差异有统计学意义(t=-3.952,P=0.000)。治疗组患者的牙槽嵴宽度变化量为(-0.84±0.91)mm,低于对照组患者[(-2.13±1.17)mm],差异有统计学意义(t=-5.504,P=0.000)。治疗组患者的牙间乳突高度变化量为(-0.11±0.23)mm,低于对照组患者[(-1.32±0.76)mm],差异有统计学意义(t=-10.124,P=0.000)。治疗组患者的唇舌向宽度变化量为(-0.04±0.23)mm,低于对照组患者[(-1.02±0.78)mm],差异有统计学意义(t=-7.622,P=0.000)。治疗组16(40.0%)例患者种植体直径为4.1 mm,24(60.0%)例患者种植体直径为4.8 mm;对照组27(67.5%)例患者种植体直径为4.1mm,13(32.5%)例患者种植体直径为4.8 mm,经χ2检验,差异有统计学意义(χ2=6.084,P=0.014)。治疗组4(10.0%)例患者种植体长度为8 mm,25(62.5%)例患者种植体长度为10 mm,11(27.5%)例患者种植体长度为12 mm;对照组18(45.0%)例患者种植体长度为8 mm,17(42.5%)例患者种植体长度为10 mm,5(12.5%)例患者种植体长度为12 mm,经χ2检验,差异有统计学意义(χ2=12.683,P=0.002)。结论 Bio-Oss Collagen骨胶原和Bio-Gide可吸收生物膜作为拔牙后牙槽窝的骨代材料能够更好地维持牙槽嵴顶高度及宽度的稳定性,有利于后期牙体种植操作的开展。
保存效果 篇8
关键词：猪精液,冷冻液,海藻糖,维生素C,精子活率,复苏率
研究主要采用细管法冷冻猪精液, 比较了在冷冻稀释液中添加不同浓度海藻糖、维生素C对猪精液冷冻保存效果的影响, 以期在实验室获得一种较好的猪精液细管冷冻方法。
1 材料与方法
1.1 公猪来源
公猪来自广西大学牧场, 约3.5岁, 身体健康, 无生殖器官疾病, 繁殖力旺盛。用手握法采精, 选择精液活率在60%以上的用于冷冻试验。
1.2 溶液的配制
清洗液 (BTS) 配方:葡萄糖0.2 mol/L, 柠檬酸钠20.4 mmol/L, 碳酸钠11.8 mmol/L, 乙二胺四乙酸 (EDTA) 3.4 mmol/L, 氯化钾10.1 mmol/L, 青霉素62.5 mg/L, 链霉素62.5 mg/L, 加超纯水100 mL。乳糖-卵黄液 (即基础液) 配方:α-乳糖11%, N-乙酰葡萄糖胺0.05%, 卵黄20%, 加超纯水50 mL。冷冻液配方:①乙二醇5%, 海藻糖 (25, 50, 100 mmol/L) ;②乙二醇5%, 维生素C 5% (10 mg/L) 。所配的溶液均用0.22 μm过滤器进行过滤。除BTS外, 其他的必须现配现用。
1.3 精液的采集
在采精液之前, 给公猪饲喂2 d的鸡蛋, 以加强公猪的营养, 提高精液的质量。精液的采集采用手握法, 采出的精液色味正常, 且经4层纱布过滤滤掉胶体, 收集精子丰富的精液转移到细口瓶中, 放于保温壶中在0.5 h内运到实验室 (注意在运送过程中尽量减少震动) , 置于室温中, 避免光线照射, 立刻检查精子的活率。
1.4 精液的稀释与低温平衡
第1步离心去浆:将精液在室温下保持约0.5 h, 分装到离心管中, 约2.5 mL, 把BTS按1∶1加到精液中稀释, 在室温条件下以2 000 r/min离心5 min, 除去上清液, 得到高浓度的精液, 使精子密度达到3×108个/mL。
第2步稀释平衡:将基础液放在室温下平衡, 每管按照1.5∶1 (精液∶基础液) 加入精液中, 轻轻摇动, 使其混合均匀, 将所得的精液悬浮液放置于15 ℃的冰水中, 平衡1.5 h。
第3步再次稀释平衡:首先将冷冻液置于15 ℃ 的冰箱中平衡10～20 min, 每管按1∶2 (冷冻液∶混合液) 加入精液悬浮液中, 轻轻摇匀, 用0.25 mL的聚乙烯细管将加有冷冻液的精液装好, 然后用酒精灯封口。再将其用纱布包裹好, 放入5 ℃的冰箱中平衡1 h, 取活率60%以上的精液进行冷冻保仔。
1.5 精液液氮熏蒸平衡和冷冻保存
把液氮倒入泡沫盒, 连同细管架一起预冷若干分钟后, 将合格的精液细管水平摆放在支架上, 盖好泡膜盒的盖子, 在距液氮面上3 cm处熏蒸3 min后, 迅速用镊子将细管置于液氮中约5 min, 再转移到液氮罐中进行保存。
1.6 精液的解冻
解冻时, 取泡沫盒或500 mL的大烧杯, 装入39 ℃的温水, 从液氮罐中取出精液冷冻细管, 在室温中停留3～5 s, 迅速将细管投入到温水中, 尽量使其快速、同时浸入水中, 再轻轻搅动使其受热均匀, 解冻30～40 s后取出, 用干净的纱布把水吸干, 备用。
1.7 精液品质的检查
用剪刀剪开细管的两端, 将精液滴到预先准备好的盖玻片或载玻片上, 置于光学显微镜下, 从低倍到高倍检查精子的活率和复苏率 (冷冻前精液的活率/解冻后精液的活率×100%) , 并记录结果。
1.8 试验设计
1.8.1 添加不同浓度的海藻糖对猪精液冷冻保存效果的影响
以乳糖-卵黄液为基础液, 加5%乙二醇保护剂的冷冻稀释液, 以不添加海藻糖为对照组, 其他3组分别添加浓度为0.025, 0.05, 0.1 mol/L的海藻糖, 以精子冻后活率和复苏率为指标, 观察其对精液冷冻保存效果的影响。
1.8.2 添加维生素C对猪精液冷冻保存效果的影响
以乳糖-卵黄液为基础液, 以添加5%的乙二醇为冷冻保护剂的冷冻稀释液为对照组, 维生素C组添加10 mg/L维生素C作为冷冻稀释液。以精子冻后活率和复苏率为指标, 观察它们对精液冷冻保存效果的影响。
所得试验数据用平均数±标准误表示, 用方差分析差异显著性。
2 结果
2.1 不同浓度海藻糖对猪精液冷冻保存的影响 (见表1)
注:同列数据肩注字母不同表示差异显著 (P<0.05) 。
2.2 维生素
C对猪精液冷冻保存的影响 (见表2)
注:同列数据肩注字母不同表示差异显著 ( P<0.05) 。
3 讨论和小结
3.1 海藻糖
目前, 在精液冷冻稀释液中, 其主要成分可以分为稀释剂、营养剂、保护剂以及其他添加剂四大种类, 国内外研究者使用的稀释剂成分较多, 添加量各异。金一等的研究表明:添加0.1 mol/L 海藻糖处理组顶体完整的精子百分比显著高于对照组。张树山[1]报道, 海藻糖与乙二胺四乙酸 (EDTA) 结合使用也可取得较好效果, 其中海藻糖的最佳添加水平为0.035 g/mL。Jelinkova L等[2]研究证明, 海藻糖在哺乳动物精液冷冻保存中的作用类似于其他双糖, 尤其是蔗糖, 但必须和渗透性冷冻保护剂结合使用才能有效保护精子。其采用在渗透性抗冻保护剂 (乙二醇) 中添加海藻糖的方法来保护通过体外受精形成的原核胚, 取得了很好的效果。
但是在本试验过程中, 添加0.025 mol/L的海藻糖与对照组相比, 冻后精子活率和复苏率差异不显著 (P>0.05) ;而添加0.05 mol/L和0.1 mol/L海藻糖, 冻后精子活率和复苏率都比对照组差 (P<0.05) 。由此表明, 在猪精液冷冻保存液中添加一定浓度海藻糖 (0.025, 0.05, 0.1 mol/L) 对精子没有起到保护作用。这可能存在以下原因:第一, 在精液冷冻液中, 添加海藻糖的浓度过高或过低, 使其渗透压与精液的渗透压不相等, 从而在精液冷冻液过程中加速了精子的死亡。第二, 在精液冷冻液中已经有葡萄糖存在, 再添加海藻糖则使冷冻稀释液中的糖类浓度过高, 从而抑制了精子的活动, 加速了精子的死亡。对此, 在以后的研究中仍需进一步探讨。
3.2 维生素C
精液在低温保存时, 精子暴露在有氧环境中, 容易发生氧化, 特别是精液在冷冻和解冻时可产生自由基[3,4,5]。自由基的氧化性很强, 能氧化精子质膜的不饱和脂肪酸, 导致精子磷脂发生过氧化, 从而干扰精子代谢。另外, 精子发生氧化产生的自由基, 特别在DNA 和蛋白质中的含量较高, 可以导致细胞高度突变和异化, 如果遗传基因被破坏, 可使精子授精能力减弱而导致不育。而维生素C 作为一种有效的自由基清除剂, 添加于精液中可以有效地维持精细胞基因的完整和保护精子质膜免受氧化, 使精子细胞中的遗传基因DNA 能通过维生素C的抗氧化功能得到保护。
在试验中, 将10 mg/L维生素C添加到猪精液冷冻稀释液中, 能有效提高精子冻后活率和复苏率 (P<0.05) , 这说明添加10 mg/L维生素C可以提高猪精液冷冻保存效果。
参考文献
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男女分工 保存遗产 篇9
非洲西部的阿尔及利亚历史悠久，拥有不同的民族，传统音乐品种非常丰富，最著名的有古典音乐“努巴”、传统音乐“阿如比”、“哈吾兹”、“卡坠娅”、“哈乌非”等。有的传统音乐品种主要在男人中传承，表演者都是男性，有的却由妇女传承，表演者都是女性。如“努巴”、“阿如比”、“哈吾兹”由男人传承，“卡坠娅”、“哈乌非”则由女人保存。这种男女分工、各负其责、保存传统音乐遗产的现象，在全世界都很罕见。
“努巴”是阿尔及利亚传统音乐中最重要的遗产。阿尔及利亚保存有15套努巴，其中三套不完整，只保留了第五部分。阿尔及利亚的努巴有三个流派，及特拉姆森派、阿尔及尔派和康斯坦丁派，各派演唱、演奏的努巴结构有所不同，但都包括以下六个部分：4/4拍中板的“杜西亚”；一组为“穆瓦沙哈”诗歌谱写的独唱歌曲“穆沙塔尔”，这组歌曲一般为6/8拍的慢板；4/8拍中板的一组歌曲“布达伊赫”；慢板的一组歌曲“达尔吉”；中板的歌曲“伊斯拉夫”，一般为5/8拍，此部分之前常加有一个叫“杜西亚·伊斯拉夫”的独奏曲作为间奏以供演唱者休息；全曲的终曲“赫拉斯”，为6/8拍的快板，结尾时速度放慢。特拉姆森派有时会增加一个部分作为尾声，这部分被称为“国王的努巴”。阿尔及尔派有时在第一部分“杜西亚”之前加一个前奏，是慢板或散板。阿尔及利亚的“努巴”由称为“雅吾克”班子表演，这种班子一般由四到六个男子组成，女子从不参加。他们主要在节日以及婚礼、割礼、庆祝男孩子诞生的家庭庆祝活动中演出，也在咖啡店演出。
“努巴”的诞生地是西班牙，在1492年传入后，对阿尔及利亚音乐影响很大，“阿如比”便是在它的影响下出现的，“阿如比”的意思是“正宗、本土的”，针对安达鲁西亚音乐而言，强调它是本地人的创造。“阿如比”由男子乐队和一个男歌唱家组成的班子表演，形式和“努巴”相仿，一套“阿如比”由不同形式的分节歌组成，歌与歌之间有时插有器乐曲。
“哈吾兹”是17世纪初在特拉姆森附近形成的一种音乐形式，传到康斯坦丁和阿尔及尔后，传遍了全国。“努巴”产生于9世纪，其歌词所用的语言比较古老，一般群众听不大懂。“哈吾兹”则要求其诗歌的语言要尽量通俗，接近日常的口语，所以很受群众欢迎。“哈吾兹”歌词题材很广泛，有歌颂伊斯兰教和圣贤的、有描写自然风光的、也有歌唱爱情的。“哈吾兹”的旋律比“努巴”简单，一首“哈吾兹”一般包括两到三个段落，每个段落采用不同的固定节奏型。“哈吾兹”由男人表演。
“卡坠娅”一般在订婚、结婚、割礼仪式“努巴”演出后，由女子乐队“姆萨玛”表演。“卡坠娅”用方言演唱，以爱情为主要题材，它的旋律优美动听，一首歌包括三个段落，其中的第二段一般是一首采用3/8或6/8拍的轻快的可用来伴舞的歌曲。
“哈乌非”是一种诗歌的形式，一首歌有数节，一节中又有4到5行，根据一定的旋律框架即兴编唱，内容非常广泛，既有反映宗教内容的，也有反映世俗生活的。“哈乌非”由妇女演唱，摇篮曲和儿歌也属于此类，除摇篮曲和儿歌外，还包括劳动歌、哀悼歌、在伊斯兰教斋月时唱的各种歌曲。
保存效果 篇10
1 资料与方法
1.1 一般资料
资料来源于笔者所在医院检验科门诊抽取的10份新鲜样本, 每瓶3 ml。将其进行充分混匀分装, 均匀分为6瓶, 放在不同条件下进行保存、检验。A组分装完成后立即进行常规生化检测;B组放在4℃冰箱中进行保存, 并留待检测;C组放在25℃室温下进行保存, 并留待检测。
1.2 测定方法
三瓶试剂都利用东芝TBA-2000FR全自动生化分析仪进行十七项指标[2]的检验, 分别为总蛋白 (TP) 、白蛋白 (ALB) 、总胆固醇 (TC) 、甘油三酯 (TG) 、葡萄糖 (GLU) 、尿酸 (UA) 、总胆红素 (TB) 、直接胆红素 (DB) 、丙氨酸氨基转氨酶 (ALT) 、天门冬氨酸氨基转氨酶 (AST) 、α-羟丁酸 (HBD) 、肌酸肌酶 (CK) 、尿素氮 (BUN) 、肌酐 (Cr) 、钾 (K+) 、钠 (Na+) 、氯 (Cl-) 。其中, 测定TP利用双速尿法;测定ALB利用溴甲酚绿法;测定TC、TG、UA、Cr、BUN利用酶法;测定GLU利用己糖激酶法;测定TB、DB采用钒酸盐氧化法;测定ALT、AST采用速率法。其中, A组立即进行检测;B组和C组分别存放8、24、32 h后进行检测。
1.3 观察指标
对比不同室温下和不同时间下的生化检测结果。
1.4 统计学处理
采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析, 计量资料用均数±标准差 (±s) 表示, 比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
A组 (立即检验组) 和B组 (4℃冰箱冷藏组) 两组检验的十七项指标中, 对于个别酶 (ALT、AST、HBD等) 及K+、Na+、Cl-在采集8 h内, 其检验结果与A组检验结果比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) ;但在存放超过8 h后, 其检测结果变化明显, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。而其余项目对比, 差异均无统计学意义 (P>0.05) 。详见表1。
组别时间TP (g/L) ALB (g/L) ALT (U/L)
A组 (立即检验组) 和C组 (25℃室温条件组) 两组比较, 所有检验结果在8 h后均有明显变化, , 差异有统计学意义 (P<0.05) ;24 h后会产生偏差更大, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。详见表2。
3 讨论
临床检验结果的正确性, 直接关系着临床诊断的准确性, 其对于临床研究和治疗有着重要的作用, 也关系到患者的康复状况等[3]。因此, 就对临床检验和诊断提出了更高的要求。当人体发生生理或病理变化时, 人体的血液也会发生相应变化, 因此, 血液成分的检验成为临床检验的重要指标[4]。但血清标本离开人体后在不同的条件下会发生不同的反应和作用, 从而对检验结果产生影响, 导致检验结果出现偏差[5]。因此, 探讨血液标本的储存方法和保存时间对于检验结果的准确性和可靠性十分必要。
生化检测是临床常用的检测手段, 其通过测量人体血清中的不同生化成分指标来进行病理的判断, 从而为临床诊断提供必要的依据和参考[6]。血液标本的质量直接影响到检验的准确性[7]。随着临床上血细胞分析仪器的广泛应用, 很多血液检验也变得相对容易。一般情况下, 血液标本采集后要立即进行送检, 但有的以期上要求抗凝的血液标本放置一段时间后再进行检验, 因此, 要充分了解不同检验机器的工作原理和试验条件, 从而保证标本检验的准确性。血清标本伴随着保存时间、保存温度等客观条件的变化, 会使化检测结果发生改变。因此, 实验室内的检测人员要根据每个检测指标的保存时间和保存条件, 合理的控制血清标本储存条件, 保证血清标本符合检验要求, 从而保证检测结果的正确性。
3.1 血液标本的保存方法对生化检测结果的影响
本研究中, CK、BUN、Cr的生化检测结果, 在4℃冰箱中保存8 h后, 结果变化最大 (P<0.05) , 而丙氨酸氨基转氨酶 (ALT) 和门冬氨酸氨基转氨酶 (AST) 指标则在冰箱保存24 h后变化最大 (P<0.05) , 另外尿酸 (UA) 的变化也较为明显 (P<0.05) 。说明, 对于个别酶 (ALT、AST、HBD等) 及K+、Na+、Cl-应在采集后8 h内进行检验, 否则存放时间越长其检测结果相差越大。
3.2 血液标本的保存时间对生化检测结果的影响
3.2.1本研究中, 在4℃条件下保存的血清标本, 个别酶 (ALT、AST、HBD等) 及K+、Na+、Cl-在放置8 h后, 其存放时间越长其检测结果相差越大, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 其余指标皆无明显变化;在25℃条件下保存的血清样本, 所有检验结果在8 h后均有明显变化 (P<0.05) , 24 h后会产生很大偏差 (P<0.05) 。因此就要对标本及时进行常温下处理和分析, 尽早完成检验, 防止因为时间的延长而造成检测结果的不稳定。
3.2.2本研究证明了血液标本的存放时间对酶测定的影响较大, 丙氨酸氨基转氨酶 (ALT) 、门冬氨酸氨基转氨酶 (AST) 、α-羟丁酸 (HBD) 、肌酸激酶 (CK) 在室温下, 8h内检测结果就会发生很大偏差 (P<0.05) , 说明保存时间越长, 酶类的测定结果就越不准确, 这是因为, 当血液标本放置时间过长, 血液中红细胞中的物质就会发生外渗透, 从而产生溶血现象, 也就会使得血浆内外浓度分布不均, 从而导致指标异常[8]。而BUN和Cr的指标在24 h内变化不大 (P>0.05) , 但是超过24 h后, 其指标检验结果差别较大 (P<0.05) 。
标本放置的时间长短会在很大程度上对检验结果造成影响。比如, 脂蛋白中的胆固醇在进行存放时, 其脂蛋白结构可能会发生改变甚至破裂[9], 影响检验结果;而且脂蛋白之间还可能会出现脂质交换, 所以, 即使在低温环境下, 也能让标本长时间放置, 否则可能会影响检验结果。因此, 在进行临床生化检验时要合理安排各个项目的检测顺序, 保证项目在最佳检测时间内进行检测。如果要进行复检, 最好重新进行血液标本的抽取[10]。
3.3 时间、温度等对K+、Na+、Cl-的影响
本研究可以很明显发现, 常温条件下 (25℃) K+、Na+、Cl-的检验结果在8 h后均有明显变化 (P<0.05) , 24 h后会产生很大偏差 (P<0.05) 。说明, K+、Na+、Cl-的检查要及时进行。同时说明统一标本在不同时间进行检测分宜, 其结果可由于实验标本存放时间和存放方法不同发生变化。
由以上讨论, 笔者可以发现在常温情况下, 对于丙氨酸氨基转氨酶 (ALT) 、天门冬氨酸氨基转氨酶 (AST) 、α-羟丁酸 (HBD) 、肌酸激酶 (CK) 的检测应在8 h内完成, 而对于总蛋白 (TP) 、白蛋白 (ALB) 的检测则应在24 h内完成。在冷冻条件下 (4℃) 保存在样本, 对于尿素氮 (BUN) 、肌酐 (Cr) 、个别酶 (ALT、AST、HBD等) 及K+、Na+、Cl-检测应在8 h内完成, 从而保证检验结果的准确性。
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