盐酸小檗碱（精选9篇）
盐酸小檗碱 篇1
三颗针为小檗科(Berberidaceae)小檗属(Beris)植物的俗称,其含有的生物碱主要有小檗碱,具有清热解毒、抗菌等作用[1]。盐酸小檗碱片常用于治疗肠道感染。其分析方法包括高效液相色谱法[1,2,3,4,5,6,7]、紫外分光光度法[8,9]、薄层扫描法[10,11]和毛细管电泳法[12,13,14,15]等。高效液相色谱分离效率较高、定量效果好、分析速度较快,但需分离柱、高压泵及较大量的流动相,分析成本较高,且流动相多为有毒溶剂,对环境有一定污染;紫外分光光度法易受共存成分的干扰;相比而言,微流控芯片分析技术所需样品量及缓冲液量少,分析耗费低,环境污染少,样品预处理简单[16,17,18]。可为三颗针与盐酸小檗碱片的质量控制提供一种新的分析方法。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
CZG 06-1微流控芯片分析仪(自制[21]);PMMA十字通道芯片(微通道上宽30μm,下宽100μm,深30μμm,进样通道为十字结构,分离通道长44 mm,有效分离长度43 mm,由大连理工大学微系统研究中心提供);微型压电陶瓷高压电源(自制[19])、非接触电导检测器(高频电导检测,自制[20]);数据处理软件(自制);SHZ-D (Ⅲ)型循环水式真空泵(巩义予华仪器有限责任公司);LK-400A中药粉碎机(温岭市创力药材器械厂);DA-3A超声波提取器(顺德乐从灵通电子厂)。
三羟甲基氨基甲烷(Tris),2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)(上海生工生物T—程有限公司);其他试剂为国产分析纯;水为双蒸馏去离子水。所有试剂使用前均经0.22μm的微滤膜过滤。盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110713-200609);三颗针(购自广州清平中药材市场,经广东省第二人民医院中药房副主任中药师郑艳平鉴定为三颗针);盐酸小檗碱片(赤峰蒙欣药业有限公司,批号:150203)。
1.2 对照品和样品溶液的制备
精密称取盐酸小檗碱对照品0.0100 g,配制浓度为1.00 mg/mL的对照品溶液。4℃保存,临用时稀释成各浓度的标准溶液。
将干燥三颗针药材粉碎,过三号(50目)筛,精密称取2.0000 g,加入20 mL无水乙醇浸泡过夜,超声频率60 kHz提取30 min,振摇后静置10 min,过滤;残渣加入10 mL无水乙醇,重复超声提取0.5 h,过滤,合并两次滤液,于蒸发皿上水浴蒸干乙醇,再用适量双蒸馏去离子水溶解,定容于10 mL容量瓶,得三颗针供试品溶液。4℃保存,临用时稀释成所需浓度的供试品溶液。
精密称取盐酸小檗碱片1片量(0.1218 g),加入适量双蒸去离子水,水浴1 h,超声频率60 kHz下提取30 min,过滤,滤液用双蒸去离子水定容于50 mL容量瓶,得盐酸小檗碱片供试品溶液。4℃保存,临用时稀释成所需浓度的供试品溶液。
进样前所有溶液均用0.22μm微孔滤膜过滤。
1.3 分离测定
新芯片使用前依次用1 mol/L HNO3、双蒸馏去离子水依次清洗芯片的通道20、10 min。实验前,先用0.1 mol/L NaOH冲洗活化通道20 min,然后用双蒸馏去离子水冲洗10 min,最后用缓冲溶液活化20 min。实验后,依次用乙醇、1 mol/L HNO3冲洗通道,再用水充满通道,以防止通道堵塞。进样电压100～500 V,分离电压500～5000 V。检测器优化的激发电压为60 V(VP-P)、激发频率为60 kHz。检测器的输出信号由数据工作站采集到微机中进行实时数据处理、图形显示和数据文件存储。实验在恒温(25℃)、恒湿(60%)条件下进行。
2 结果
2.1 线性关系、检出限
精密量取盐酸小檗碱对照品的储备液,配制成10～9.0×102μg/mL的系列标准溶液,在优化条件下测定。在10～4.0×102μg/mL范围内,盐酸小檗碱的峰面积(Y)与质量浓度(X)呈良好的线性关系,线性方程为Y=2.20×103X-1.56×104,相关系数r=0.997,检出限为10μg/mL(S/N=3)。
2.2 精密度、样品分析及重复性试验
以浓度100.0μg/mL的盐酸小檗碱对照品溶液,在优化实验条件下,重复进样6次,测得盐酸小檗碱峰面积的RSD为1.5%,说明精密度良好。另外精密量取三颗针及盐酸小檗碱片供试品母液稀释1/2,各自重复进样6次,根据线性方程,计算得三颗针供试品的平均浓度为1.35×102 pg/mL,稀释后的盐酸小檗碱片的平均浓度为91.6μg/mL。从而计算得三颗针中小檗碱的平均含量为0.14%,盐酸小檗碱片中小檗碱含量平均为91.6 mg/片。平均RSD值分别为1.3%(n=6),1.4%(n=6),重复性符合要求,具体样品分析图见图1。
2.3 回收率试验
将盐酸小檗碱供试品母溶液浓度稀释至2/3,根据线性方程,测得浓度为61.6μg/mL。再用标准加入法,按照三颗针供试品溶液及盐酸小檗碱片供试品稀释后溶液浓度的120%、100%、80%加入小檗碱标准品溶液,每组测定3次,并按线性方程计算测出量浓度,最终计算得样品加标回收率分别为:三颗针103%,盐酸小檗碱98.9%,回收率在85%～115%之间,符合要求,平均RSD值分别为1.3%和1.8%。见表1。
2.4 稳定性试验
按照“1.2”项下方法制备样品母溶液,并分别稀释至1/2,放置于4℃冰箱保存,并在0、4、8、12、24、36、48 h测定峰面积值的变化,结果峰面积RSD值为1.6%(n=7),表明样品溶液在48 h内稳定。
3 讨论
缓冲溶液的组分及浓度比例、分离电压、进样时间对分离产生了较大影响,因此实验考察了上述因素对实验结果的影响,具体讨论结果如下:
首先缓冲溶液的pH值决定各组分的电离程度。小檗碱pKa值为11.50,远大于7.00,在pH值<11.50的缓冲体系中呈电离状态,可进行电泳分析,故本实验考察了多个pH值<11.50的缓冲体系,包括MES-Tris、Tris-H3BO3、Tris-H3PO4、Tris-HCl、H3PO4-NaH2PO4、HAc-NaAc、硼酸-硼砂、柠檬酸-柠檬酸钠、三乙胺-H3BO3、三乙胺-H3PO4、二乙胺-H3PO4、二乙胺-H3BO3、乙二胺-H3BO3等。结果发现:在乙二胺-H3BO3缓冲体系中,盐酸小檗碱峰形较好,基线平稳,而在其他缓冲体系中,样品无法分离或分离效果较差。因此选择乙二胺-H3BO3缓冲体系,并考察了乙二胺(5～20 mmol/L)和H3BO3(5～20 mmol/L)不同浓度配比的缓冲体系对分离检测的影响。结果表明,当乙二胺浓度高时,峰形变差,响应值变小,可能是因为乙二胺浓度升高,体系pH值升高,盐酸小檗碱电离度降低,造成目标离子浓度降低;H3BO3浓度低时,出峰变慢,灵敏度降低,高浓度时,噪音变大。因此最终缓冲体系浓度定为乙二胺(5 mmol/L)-H3BO3(15 mmol/L)。除此之外,实验考察了5%～10%甲醇、5%～10%乙醇及0.5-3.0 mmol/L的SDS,0.2-4.0 mmol/Lβ-CD添加剂对样品分离及检测效果的影响,结果表明甲醇、乙醇、SDS对分离无显著帮助,而当加入0.4 mmol/Lβ-CD时,灵敏度较之前提高。因此考虑加入0.4 mmol/Lβ-CD作为缓冲溶液添加剂。
其次考察了分离电压1.0～3.0 kV对样品分离检测的影响,结果发现,较低的分离电压会使样品出峰时间延长,且出现拖尾现象。过高的分离电压,电流增大,焦耳热效应使基线噪音也随之增加。综合考虑峰形、响应值、噪音等因素,优化选择分离电压为2.5 kV。
最后考察了进样时间为5.0～20.0 s对分离检测的影响。结果表明,当进样时间延长时,出峰时间减小,响应值增大。但超过10.0 s,峰形有一定的拖尾。综合考虑,优化进样时间为10.0 s。
综上所述,本分析方法操作简单,消耗样品及试剂量小,分析速度快,可为三颗针及盐酸小檗碱片中小檗碱的含量分析提供新的方法。
盐酸小檗碱 篇2
【拼音全码】XiaoZuoJianJiaYangZuoZuoJiaoNang(XieNuo)
【主要成份】盐酸小檗碱。
【性状】小檗碱甲氧苄啶胶囊(谢诺)为胶囊剂，内容物为黄色颗粒，无臭，味苦。
【适应症/功能主治】用于敏感菌所致的胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染。
【规格型号】15mg*30s
【用法用量】一次1-3粒，一日3次。
【不良反应】恶心、呕吐、药疹、腹泻，停药后即消失;可发生瘙痒，皮疹，偶可呈严重的渗出性多形红斑;偶可发生无菌性脑膜炎，有头痛、颈项强直等现象。
【禁忌】1.对盐酸小檗碱和甲氧苄啶及磺胺类药物过敏者禁用。2.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的儿童禁用。3.新生儿及2个月以内婴儿禁用。
【注意事项】1.小檗碱甲氧苄啶胶囊(谢诺)可引起溶血性贫血，导致黄疸。2.用药期间应注意血象检查，在疗程长、服用剂量大、老年、螵养不良及服用抗癫痫药者，易出现叶酸缺乏症，如周围血象中白细胞或血小板已有明显减少，则应停药。
【儿童用药】1.盐酸小檗碱可引起溶血性贫血导致黄疸，故葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的儿童禁用。2.小檗碱甲氧苄啶胶囊(谢诺)中的甲氧苄啶可能干扰哺乳婴儿的叶酸代谢，新生儿及2个月以内的婴儿应禁用此药;儿童正处于生长发簖时期，肝肾功能还不完善，用药量应酌减。
【老年患者用药】老年患者由于抵抗力降低，代谢能力减弱，在服用小檗碱甲氧苄啶胶囊(谢诺)时应注意血象检查，如出现严重不良反应应立即停止用药。
【孕妇及哺乳期妇女用药】1.由于甲氧苄啶可穿过胎盘屏障，在胎儿循环及羊水中血药浓度接近母体血药浓度，因此小檗碱甲氧苄啶胶囊(谢诺)在妊娠期间应用必须权衡利弊后决定是否用药。2.由于甲氧苄啶可分泌至乳汁中，其血药浓度较高，有可能干扰哺乳婴儿的叶酸代谢，虽然在人类中尚未证实其问题存在，但小檗碱甲氧苄啶胶囊(谢诺)对乳母的应用必须权衡利弊后决定是否用药。
【药物相互作用】1.盐酸小檗碱与其他药物相互作用尚不明确;2.甲氧苄啶：(1)与骨髓抑制剂同时使用发生白细胞、血小板减少机会增多;(2)与氨苯砜同用，二者血药浓度均增高，氨苯砜血药浓度增高使不良反应增多且加重，尤其是正铁血红蛋白血症的发生;(3)抗肿瘤药物、2，4-二氨基嘧啶类药物同时使用，也不宜在应用其他叶酸拮抗剂药物治疗的疗程之间应用小檗碱甲氧苄啶胶囊(谢诺)，因为有产生骨髓再生不良或巨幼红细胞贫血的可能;(4)利血平同时使用可使甲氧苄啶消除增加和血浆半衰期缩短;(5)环孢菌素同用可增加肾毒性;(6)扰苯妥英的肝内代谢，增加苯妥英半衰期，减低其清除率;(7)普鲁卡因胺同时使用可减少肾清除，增加普鲁卡因胺代谢物的血药浓度;(8)抑制华法林的代谢，而增强其抗凝血作用。
【药物过量】如发现过量所致的不良反应，应即停药。
【药理毒理】盐酸小檗碱和甲氧苄啶有协同抗菌作用。盐酸小檗碱体外对多种革兰阳性及阴性菌均有抑制作用，其中对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、脑膜炎奈瑟菌、志贺菌属、伤寒杆菌、白喉杆菌等抑制作用较强。对阿米巴原虫也有一定抑制作用。甲氧苄啶主要干扰细菌叶酸代谢，选择性抑制二氢叶酸还原酶，阻止核酸的合成。因此二者合用的抗菌作用较单药增强，耐药性菌株减少。
【药代动力学】盐酸小檗碱口服吸收差。甲氧苄啶口服吸收完全，给药2小时到达血药峰浓度。吸收后广泛分布至体液及组织，在肝、肾、脾、肌肉、支气管分泌物、唾液、阴道分泌物、前列腺组织及前列腺液中的浓度均超过血药浓度。甲氧苄啶可通过血脑屏障，胎盘屏障并可分泌至乳汁中。甲氧苄啶主要由肾小球滤过，肾小管排出，50%～60%以药物原形排出，其余部分以代谢物形式排出。
【贮藏】密封，置阴凉处。
【包装】15mg*30s/盒。
【有效期】24月
【批准文号】国药准字H23022530
【生产企业】哈药集团制药总厂
小檗碱对养殖池塘生态环境的影响 篇3
关键词：小檗碱；生态环境；铜绿微囊藻
中图分类号：S955 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2015.07.004
Abstract： In order to investigate the possibility of using berberine to inhibit the cyanobacteria blooms in the aquaculture ponds and effects on environmental conditions， a pond was chosen and splashed berberine solution into the pond water. The indexes of water quality and the composition of plankton and biomass were monitored. The results showed that the berberine inhibited the DO， NO2-N and NH4-N， and promoted the COD and NO3-N. The berberine also inhibited the biomass of cyanobacteria and enhanced biomass of Chlomphyta and Bacillariophyta. Berberine， as an ecological regulator， could inhibit cyanobacteria blooms， improve the water quality， showing broad application prospects.
Key words： berberine； ecological environment； Microcystis aeruginosa
淡水养殖池塘是一个较为复杂的生态系统，由于多种因素的影响与干扰，常常致使池塘水质发生明显的变化[1]，其中最为明显的即为营养盐含量的显著上升，很多养殖池塘由于不合理的饲养方式及饲养密度，使水质呈污染状态，且富营养化程度很高[2]。当温度、pH值等其他环境条件适宜时，铜绿微囊藻可以在富营养化的水体中快速繁殖、生长，且易爆发形成水华。铜绿微囊藻的爆发可以在短时间内破坏养殖水环境的平衡，造成养殖对象不同程度的死亡[3-4]。对于铜绿微囊藻水华的控制可以通过物理方法、化学方法和生物处理等方法来实现，但存在着成本高、作用水体小、易造成二次污染及作用缓慢等缺点[5]，不适宜规模化大面积应用，迫切需要提出新的抑藻技术。
近几年兴起的化感物质抑藻的研究受到广大关注，被认为是一种高效、安全的新型抑藻技术[6-8]。小檗碱又称黄连素、小蘖碱、小檗硷，是一种常见的异喹啉生物碱，可以在中草药黄连、黄柏等植物的根茎中大量提取，由于其具有安全性高、来源性广等特点，已经被广泛应用于养殖水环境的调控中[9-10]。实验室的研究结果表明，小檗碱对铜绿微囊藻具有显著的抑制作用，并且检测到其浓度在20 mg·L-1时，抑藻效果明显，且对模拟池塘的生态系统不产生显著影响，这使小檗碱抑制蓝藻的实际运用有了更深入的理论支持[11]。本试验拟通过在爆发蓝藻水华的泥鳅养殖池塘中运用小檗碱进行抑藻试验，旨在探讨小檗碱在养殖池塘实际应用的可能性。
1 材料和方法
1.1 试验池塘及基本条件
试验池塘为位于天津市汉沽区某养殖厂的泥鳅养殖池塘，长58.3 m，宽19 m，深1 m。
1.2 试验设计及方法
试验所需小檗碱为由天津马克生物技术有限公司提供的标准品，纯度97.89%，制成小檗碱母液，备用。
2014年6月27日铜绿微囊藻大量爆发，全池泼洒浓度为小檗碱，使其浓度达20 mg·L-1，泼洒后每48 h采样1次，共采样5次，对相应水质理化指标进行测定并对浮游生物种类组成进行鉴定分类。
1.2.1 水化学样本的采集及测定 水化学样本的采集及测定均按照《渔业生态环境监测规范》[12]执行。测定的主要指标有pH值、溶解氧（DO）、化学需氧量（COD）、硝酸态氮（NO3-N）、亚硝酸态氮（NO2-N）、氨氮（NH4-N）、磷酸盐（PO43-P）。每个指标的测定均重复3次，数据以平均值±标准差表示。
1.2.2 浮游生物样本的采集及分析 浮游生物样本的采集及分析均按照《渔业生态环境监测规范》[12]执行。每个样品重复计数3次，每次误差小于15%为有效。在浮游生物计数的基础上采用细胞平均湿重法推算生物量。
2 结果与分析
2.1 小檗碱对泥鳅养殖池塘生态系统主要水化学指标的影响
2.1.1 酸碱度（pH值） 小檗碱对养殖池塘酸碱度（pH值）的影响如图1所示，使用小檗碱后池塘pH值明显降低，96 h后pH值逐渐增大，192 h时pH值达到7.62。
2.1.2 溶解氧（DO） 泼洒小檗碱后，养殖水体DO呈下降趋势（图2），在48 h后下降较为剧烈，192 h水体平均DO含量为2.12 mg·L-1。单因素方差分析结果表明，小檗碱作用时间显著影响养殖水体DO含量（P<0.01）。
2.1.3 化学需氧量（COD） 泼洒小檗碱后，池塘养殖水体COD含量呈上升趋势（图3），且泼洒48 h以后上升十分明显。COD含量在4.24～5.25 mg·L-1之间，平均值为2.69 mg·L-1，单因素方差分析结果表明，小檗碱作用时间对养殖水体COD含量有显著影响（P<0.01）。
2.1.4 硝酸态氮（NO3-N） 试验池塘水体NO3-N含量介于0.13～0.15 mg·L-1之间，平均含量为0.14 mg·L-1。随着小檗碱泼洒时间的增加，养殖池塘NO3-N含量逐渐增大，至192 h时NO3-N含量达0.15 mg·L-1（图4）。单因素方差分析结果表明，小檗碱作用时间显著影响养殖池塘内NO3-N含量（P<0.01）。
2.1.5 亚硝酸态氮（NO2-N） 随着小檗碱作用时间的延长，养殖池塘内NO2-N的含量逐渐减小（图5），在192 h时NO2-N含量为0.015 mg·L-1，并且达到最小值，单因素方差分析结果表明，小檗碱可以显著降低养殖池塘水体NO2-N含量（P<0.01）。
2.1.6 氨态氮（NH4-N） 泼洒小檗碱后，养殖水体NH4-N含量逐渐降低（图6），在192 h时降到0.20 mg·L-1，单因素方差分析结果表明，小檗碱可以显著降低池塘水体的NH4-N含量（P<0.01）。
2.1.7 磷酸盐（PO43--P） 泼洒小檗碱后，养殖池塘水体PO43--P含量呈先下降再上升的趋势（图7），于48 h时达最低，为0.03 mg·L-1，于192 h时达到高，为0.04 mg·L-1。
2.2 小檗碱对养殖池塘浮游生物组成的影响
2.2.1 浮游植物种类组成 5次采样共鉴定出绿藻门（Chlomphyta）、蓝藻门（Cyanophyta）和硅藻门（Bacillariophyta）共3门浮游植物。其中绿藻门9个属（种），分别为四尾栅藻（Scenedesmus quadricauda）、纤维藻（Ankistrodesmus spp.）、蹄形藻（Kirchneriella sp.）、四角藻（Teraedrom sp.）、鼓藻（Cosmarium sp.）、十字藻（Crucigenia sp.）、盘星藻（Pediastrum sp.）、集星藻（Actinastrum sp.）、弓形藻（Schroederia sp.）；硅藻门4个属（种）：有舟形藻（Navicula sp.）、小环藻（Cylotella sp.）菱形藻（Nitzschia sp.）、直链藻（Melosira sp.）；蓝藻门有4个属（种）：铜绿微囊藻（Microcystis aeruginosa）、平裂藻（Merismopedia sp.）、螺旋藻（Spirulina sp.）、席藻（Phormidium sp.）。优势种为蓝藻门铜绿微囊藻和席藻等。
2.2.2 浮游植物生物量 随着小檗碱作用时间的增加，蓝藻门浮游植物生物量逐渐减小（图8），由泼洒时的26.83 mg·L-1降低至192 h时的14.25 mg·L-1，下降了46.89%；硅藻门浮游植物生物量呈现先下降再上升的趋势，48 h时为10.85 mg·L-1，随后逐渐上升至192 h的15.30 mg·L-1；绿藻门浮游植物生物量随小檗碱作用时间的延长而增大，至192 h时为17.55 mg·L-1。
2.2.3 小檗碱对泥鳅养殖池塘铜绿微囊藻的影响 小檗碱对池塘铜绿微囊藻生物量的影响见图9，铜绿微囊藻生物量随小檗碱作用时间的延长而降低，在0 h时生物量为19.75 mg·L-1，192 h后生物量达到最小值为10.37 mg·L-1，单因素方差分析结果表明，铜绿微囊藻的生物量受到小檗碱作用时间的显著抑制作用（P<0.01）。
2.2.4 浮游动物组成及丰度 试验过程共鉴定浮游动物10属（种），小型浮游动物8属（种），为萼花臂尾轮虫（Brachionidae calyciflorus）、角突臂尾轮虫（Brachionidae angularis）、曲腿龟甲轮虫（Keratella ualga）、壶状臂尾轮虫（Brachionus aurceus）、螺形龟甲轮虫（Keratella cochlearis）和三肢轮虫（Filinia sp.）、侠盗虫（Halteria sp.）、拟铃壳虫（Tintinnopsis sp.），其中以角突臂尾轮虫为优势种；大型浮游动物2属（种），其中枝角类1属（种），为裸腹溞（Moiia sp.），桡足类1个属（种），为剑水蚤（Mesocyclops sp.）。
随着小檗碱作用时间的增加，浮游动物丰度逐渐减小（图10），变化范围为12.84～29.35 个·L-1，在192 h时丰度达到12.84 个·L-1，为最小值。单因素方差分析结果表明，小檗碱作用时间显著影响浮游动物的丰度（P<0.01）。
3 结论与讨论
3.1 小檗碱对养殖池塘主要水化学指标的影响
近年来，小檗碱作为一种新兴的药剂在养殖水体的生态调控中得到一定的应用。鱼虾对pH值的适宜范围是6.5～8.5之间。精养池塘一般控制在7～8.5之间，而此pH值范围恰好是微囊藻属种类大量繁殖的适宜pH值。本研究中泼洒小檗碱后水体的pH值逐渐下降至7.62，仍处在鱼类生长的适宜范围内，降低了微囊藻大量爆发的风险。水体DO含量对养殖对象的生存有着至关重要的作用，其含量往往是反映生物生长状况和污染状态的重要指标，而DO含量的多少主要是由池塘水中浮游植物光合作用的强弱决定。尽管在小檗碱泼洒后期，绿藻门和硅藻门浮游植物生物量有一定的上升，在一定程度上会加快光合放氧，但降解死亡浮游生物，尤其是大量铜绿微囊藻细胞需要消耗大量的氧气，导致泼洒小檗碱后池塘溶氧明显下降，COD含量明显上升。基于此，建议在利用小檗碱控制养殖池塘铜绿微囊藻水华时，需要辅以添加适宜的微生态制剂，降低COD的含量[11]。
亚硝酸态氮是氨转化为硝酸盐过程中的中间产物，同时也是氨氮的硝化产物，亚硝酸盐对鱼、虾的毒性较强，是养殖水域中诱发暴发性疾病的重要因素。本研究中，加入小檗碱后，水体的氨态氮和亚硝酸态氮含量明显降低，而硝酸态氮含量明显升高，说明小檗碱的加入使水体内的氮盐向着有益于浮游生物生长的方向变化。毕相东等[11]指出“小檗碱可以较好地降低养殖水体的NO2--N含量，促进水体健康养殖，提高养殖对象免疫力”与本研究结果一致。
3.2 小檗碱对泥鳅养殖池塘生态系统浮游生物的影响
黄连碱、小檗碱等8种生物碱对有害藻类的抑杀具有良好的作用效果，尤其对于蓝藻及绿藻的有害藻类生长均有一定的抑制作用[13]。20 mg·L-1的小檗碱对于泥鳅养殖池塘内的有害蓝藻具有一定的抑制作用，尤其对于铜绿微囊藻的丰度及生物量抑制效果十分明显，对于硅藻门及绿藻门存在不同程度的促进作用，由此可见，利用小檗碱治理或控制铜绿微囊藻的大量爆发对于生态环境的快速修复是十分可行的。蓝藻与细菌一样同属于原核生物，小檗碱通过破坏铜绿微囊藻的细胞超微机构、抑制DNA的转录及复制过程，从而使铜绿微囊藻细胞裂解[14]，削弱其光合作用等生理过程，小檗碱对于蓝藻的抑制效果较为明显[9]。在小檗碱作用下，浮游动物丰度逐渐减小，可能与由于养殖水体的DO含量随着小檗碱作用时间的延长而降低，使养殖水体DO含量不足，以及浮游植物光合作用的减弱有直接的关系。因此，在泼洒小檗碱后应适时增开增氧机，以维持养殖池塘良好的DO水平。
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盐酸小檗碱提取方法的改进 篇4
1 实验方法
取原药材 (黄连、三颗针、黄柏均可) 100g, 加8倍量水, 加热煮沸45min, 在煮沸过程中加石灰乳调节p H 10~12, 然后用4层纱布粗过滤, 收集滤液并用快速过滤滤纸过滤, 在滤液中滴加浓HCl调节p H1~2。最后, 加入浓度10%的固体Na Cl (W/V) 盐析, 搅拌使Na Cl完全溶解, 静置过夜即有盐酸小檗碱粗品析出, 抽滤后即得盐酸小檗碱粗品。
2 精制
将盐酸小檗碱粗品置于烧杯中, 加入50倍量蒸馏水煮沸1min搅拌溶解, 趁热抽滤, 滤液放冷后加浓HCl调节p H1~2放置, 即析出盐酸小檗碱精品。
3 检识反应
(1) 取盐酸小檗碱精品少许, 置试管中加入蒸馏水5~10 m加热溶解。然后加入浓度40%的Na OH 2滴, 溶液显橙色, 放冷后过滤。滤液中加丙酮数滴, 即产生黄色沉淀 (丙酮小檗碱) 。
(2) 在上述提取液中加漂白粉少许, 振摇后呈樱红色。
4 结果
据以上方法所得的物质经证明为盐酸小檗碱, 不但产率比传统工业法高, 而且节约时间。该方法在中专中药专业中药化学实验教学中值得推广。蒉
盐酸小檗碱淀粉微球的制备研究 篇5
本实验采用均匀设计优化制备盐酸小檗碱淀粉 (BH-CSMs) 载药微球的合成条件, 为研制一种性能优良的药物制剂提供理论基础。
1 实验部分
1.1 药品、仪器与设备
淀粉微球 (自制) , 盐酸小檗碱 (天津市科密欧科技有限公司, 津Q/T645-96A.R.) , 无水乙醇等均为分析纯试剂, 实验用水为蒸馏水。
JJ-1电动搅拌器 (金坛市环保仪器厂) , DZF真空干燥箱 (北京科伟永兴仪器有限公司) , TDL-40B离心机 (上海安亭科学仪器厂) ;KYKY1000B扫描电子显微镜 (中科院仪器厂) , VECTOR-22傅立叶红外光谱仪 (德国BRUKER公司) , D/max 2000PX-射线衍射分析仪 (日本理学公司) , UV75-18PC型紫外分光光度计 (日本岛津) 。
1.2 实验方法
1.2.1 盐酸小檗碱淀粉微球的制备
将80mL环己烷加入装有冷凝器和搅拌装置的250mL三颈瓶中, 升温至50℃, Span60与Tween60按m (Span60) ∶m (Tween60) =2∶1的比例加入, 得到油相。在30mL水中加入4g可溶性淀粉, 80℃溶解后加入氢氧化钠溶液, 调节pH到9~10。冷却至70℃加入一定量的盐酸小檗碱、继续冷却, 并加入一定量的N, N’-亚甲基双丙烯酰胺, 降温至40℃以下时, 加入0.6g过硫酸铵。将此水相加入上述油相中搅拌乳化。30min后, 加入0.6g亚硫酸氢钠, 升温至60℃反应约2h后停止, 分别用热水、无水乙醇、丙酮洗涤数次, 离心分离, 得产物。
1.2.2 标准曲线
准确称取一定量在90℃下充分干燥的盐酸小檗碱于100mL容量瓶中, 沸水溶解, 放冷, 加10g/Lα-淀粉酶, 稀释至刻度。吸取1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL、12.0mL分别置于100mL容量瓶中, α-淀粉酶水溶液定容至刻度, 超声溶解。以10g/Lα-淀粉酶水溶液作空白对照, 在261nm波长处测吸光度A, 得标准曲线回归方程为:y=
1.2.3 评价指标
每次取0.5gBH-CMSs, 加入10g/Lα-淀粉酶, 60℃下充分降解, 然后取滤液稀释到一定浓度范围, 用紫外可见分光光度计检测其浓度。计算载药量 (Y1) 和包封率 (Y2) , 如式 (1) 和式 (2)
2 结果与讨论
2.1 均匀设计
采用均匀设计实验, 探讨BH-CSMs的制备条件, 根据单因素考察结果, 确定影响包埋的主要因素有4个, 分别是盐酸小檗碱和淀粉的投料质量比 (A) 、交联剂的质量 (B) 、乳化剂的质量 (C) 、反应时间 (D) , 每因素10水平, 见表1。实验结果以包封率、载药率为衡量包埋效果的重要指标, 采用综合评分法, 对盐酸小檗碱淀粉微球制备方法进行优化, 加权系数的大小由指标的重要程度决定, 本实验分别取包封率和载药率权重系数为0.5, 按照综合评分=0.5 (包封率+0.5 (载药量计算。以综合评分作为筛选指标, 运用U10 (104) 表, 对以上4个因素进行考察, 见表1, 表2。
2.2 均匀设计结果
回归分析采用全回归法, 样本容量N=10, 显著性水平α=0.10, 拟建立回归方程Y=95.71-0.4209X1+0.0068X2+0.0142X3+0.0117X4。均匀设计方差分析见表3。可知在α=0.10时, 检验值Ft=16.81, 临界值F (0.10, 4, 5) =3.520, Ft>F (0.10, 4.5) , 回归方程显著, 回归方程在α=0.10水平上可信, 其结果有意义。标准回归系数B:B (1) =-0.7998, B (2) =0.01583, B (3) =-0.2695, B (4) =0.2229, 可见因素主次顺序为X1>X3>X4>X2, 即投药比>交联剂的量>乳化剂的量>反应时间。
2.3 条件优化
采用网格尝试法。优化的实验条件为盐酸小檗碱与淀粉微球比为0.05, 即投药0.02g, 淀粉4g, 交联剂用量0.9g, 乳化剂用量0.9g, 反应时间2h。
2.4 验证实验
取盐酸小檗碱按以上最佳制备工艺制备3批载药淀粉微球, 盐酸小檗碱平均包封率为87.96%, 平均载药药量为1.81%。接近预预期指标, 表明最佳制备条件可行。
2.5 包合物性质考察
2.5.1 盐酸小檗碱淀粉微球扫描电镜
取一定量的BH-CSMs真空干燥后, 在扫描电子显微镜下观测微球形貌及表面形态。扫描电镜图片分析表明, 载药微球表面比较光滑圆整。
2.5.2 载药微球的IR
图2中a线是BH红外谱线, b线是BH-CSMs微球的红外谱线。两线在3400~3300cm-1处都出现强的-OH伸缩振动吸收峰。1149.3cm-1, 1635.3cm-1处出现酰胺峰, 说明在载药微球中可溶性淀粉与N, N, -亚甲基双丙烯酰胺发生了交联反应。b线在1203.5cm-1处的信号峰可认为芳香脂肪醚C-O-C的吸收峰, 1388.7cm-1、1504.4cm-1、1597cm-1处芳环骨架振动峰均消失, 在1527.3cm-1、1534.6cm-1、1151.1cm-1处出现吸收峰, 峰较弱。这种变化可能是BH分子的萘环、共轭杂环基团与淀粉微球的羟基相互作用结果。两线比较可以看出淀粉微球包合盐酸小檗碱后并没有明显表现出包埋药物的特征峰, 说明和淀粉微球并不是简单的物理混合。
2.5.3 XRD分析
图3中a、b分别是盐酸小檗碱淀粉微球和淀粉微球的X-衍射图。由图中a线可知, 在2θ为20°时存在明显的衍射峰, 且衍射峰较平滑, 对应的结晶度为6.13%;由图中b线可知, 在2θ为20°时也存在明显的衍射峰, 但衍射峰较尖, 对应的结晶度为9.96%。对比可知, 盐酸小檗碱淀粉微球和淀粉微球的x-衍射图谱存在明显的不同, 都具有一定的结晶性, 但晶型不同, 盐酸小檗碱与淀粉微球发生了化学作用。
3 结论
(1) 通过均匀设计得出盐酸小檗碱淀粉微球微的最佳制备工艺条件是:盐酸小檗碱与CSMs投料比为0.05, 即盐酸小檗碱0.02g, 淀粉4g, 交联剂用量0.9g, 乳化剂用量0.9g, 反应时间2h。按优化工艺参数制得盐酸小檗碱淀粉微球平均包封率为87.96%, 平均载药量为2.81%。
(2) IR分析, XRD分析表明盐酸小檗碱包合进入淀粉微球中, 且具有一定的晶型分散在聚合物载体中, 结晶度有所下降。
摘要：采用包埋法制备盐酸小檗碱淀粉包合物微球, 通过均匀试验设计优化其制备工艺。采用电镜、红外、X衍射对包合物进行表征。结果表明, 影响盐酸小檗碱淀粉包合物微球制备因素的大小依次为:投药比>交联剂的量>乳化剂的量>反应时间。盐酸小檗碱与淀粉微球投料比为0.05, 交联剂用量0.9g, 乳化剂用量0.9g, 反应时间2h。盐酸小檗碱淀粉微球制备方法可行。
关键词：淀粉微球,盐酸小檗碱,包埋载药,均匀设计
参考文献
盐酸小檗碱 篇6
关键词：黄柏,盐酸小檗碱,减压内部沸腾,提取工艺
黄柏为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid.的干燥树皮, 习称 “川黄柏”。始载于 《神农本草经》, 为中医临床常用中药之一, 其味苦、性寒, 归肾、膀胱经, 具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮之功效[1]。黄柏含有小檗碱、巴马汀、药根碱、黄柏碱等成分, 同时还含有甾醇、柠檬苦素类化合物及青荧光酸等40多种化合物[2,3], 其主要成分为小檗碱 (Berberine) 。现代药理学研究表明黄柏具有较强的广谱抗菌性, 可抗病原微生物, 对葡萄球菌有较强的抑制作用。同时具有抗溃疡、降压、抗心律失常等作用[4,5,6]。目前报道提取分离黄柏中盐酸小檗碱的方法主要有乙醇回流提取、酸水提取、碱水提取、超声波提取以及酶法提取等[7,8,9]。其中传统提取方法时间长、温度较高、能耗大, 不利于含热敏性有效成分中药的提取。而提取黄柏的一些新方法, 如超声法、酶法等, 所需设备昂贵, 生产成本较高。减压提取可在较低温度下使溶液处于沸腾状态而进行动态提取, 既可保证药材中热敏性成分免遭高温煎煮破坏, 又能减少许多大分子杂质如淀粉、鞣酸、黏液质等的析出, 便于制剂的成型和稳定, 且提取速度快、成本低。同时, 通过减压控制温度提取, 可找到中药各类成分最适宜的沸腾状态下的提取温度, 对于改进中药提取工艺现状具有重要意义[10]。本实验采用减压内部沸腾提取方法研究黄柏中盐酸小檗碱的提取工艺, 确定了最佳工艺条件, 本研究为减压内部沸腾提取技术在中药生产的推广应用提供参考依据。
1 材料
LC-20AT高效液相色谱仪 (日本岛津公司) , RE52CS旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂) , ZK82A电热真空干燥箱 (上海实验仪器厂有限公司) , CP225D电子天平 (德国St-artorious) ;DZKW-4电子恒温水浴锅 (北京中兴伟业仪器有限公司) ;KQ250E型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) 。SHZ-D (Ⅲ) 循环水式真空泵 (天津华鑫仪器厂) 。
盐酸小檗碱对照品 (中国科学院成都生物研究所研制, 批号:MUST-14082410, 供含量测定用) 。乙腈为色谱纯 (赛默飞世尔科技有限公司) , 其余试剂均为分析纯 (成都市科龙化工试剂厂) 。水为超纯水。
黄柏药材, 购于成都市大丰中药材市场, 经成都中医药大学卢先明教授鉴定为《中国药典》2010年版一部收载黄柏Phellodendron chinense Schneid.的干燥树皮。
2 方法与结果
2.1 高效液相色谱法测定
2.1.1 色谱条件色谱柱:Diamonsil C18 (4.6×250mm, 5μm) ;填充剂:十八烷基硅烷键合硅胶;流动相∶ 乙腈-0.1%磷酸溶液 (50∶50) (每100mL加十二烷基硫酸钠0.1g) ;流速:0.8mL/min;柱温:25℃;检测波长为265nm;进样量5μL;理论塔板数不低于4 000。
2.1.2 对照品溶液制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量, 置10mL棕色量瓶中, 加流动相制成每1mL含0.1mg的溶液, 即制得浓度为100μg/mL的标准品溶液。
2.1.3 标准曲线制备分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液2、4、6、8、10μL, 依次进样, 测定峰面积, 按照设定的色谱条件进行分析, 以峰面积y及进样量x (μg) 进行回归, 其回归方程为:y=616 750x-88 126, (r=0.999 9) 。结果表明:盐酸小檗碱对照品在0.2~1.0μg范围内线性关系良好。
2.1.4 供试品溶液制备1黄柏原药材溶液制备:称取黄柏粉末 (过三号筛) 约0.1g, 精密称定, 置100mL量瓶中, 加流动相80mL, 超声处理 (功率250W, 频率40kHz) 40min, 放冷, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得;2样品溶液制备:精密量取2mL提取液 (传统提取法、减压提取法所得样品溶液) , 加流动相定容至25mL, 超声30min (功率250W, 频率40kHz) , 微孔滤膜 (0.45μm) 过滤, 备用。
2.1.5 系统适应性试验按“2.1.2”与“2.1.4”项下条件分别吸取对照品溶液及供试品溶液各5μL注入液相色谱仪, 在本色谱条件下对照品溶液、黄柏原药材、乙醇回流提取法与减压提取法中盐酸小檗碱保留时间分别为25.485、25.545、25.515、25.559min, 结果见图1。
2.2 减压内部沸腾法
取黄柏药材粉末, 加入一定乙醇溶液, 室温 (25℃) 下解吸一定时间, 提取容器置热水浴中, 快速加入适量热水, 同取后的滤渣, 按第1次提取相同条件进行, 合并2次提取液, 取样分析。
溶液105mL, 回流提取60
60min。共提取2次, 合并提取液, 备用, 取样分析。3结果解吸液考察
3.1以将
为60mL能充分解吸
液量为60mL。按“2.2”项下提取工艺, 分别加入40%、55%、70%、85%的乙醇溶液, 解吸30min, 然后进行提取, 得到样品溶液。取样分析, 考察解吸液对提取率的影响。结果见图2。结果表明, 当解吸液浓度为55%时, 盐酸小檗碱提取较完全。因此, 选择解吸液浓度为55%。
取黄柏药材粉末15g加入的乙醇溶液
55%1020304050min, 然后进行提取, 得到样品溶液。取样分析, 考察解吸时间对提取率的影响。结果见图3。结果表明, 随着解吸时间的增加, 盐酸小檗碱提取率逐渐上升, 当解吸时间达到30min时, 增加趋势不明显, 可能是物料已经解吸完全。故确定解吸时间30min即可。
取黄柏药材粉末1
入55%的乙醇溶液, 解吸30min, 然后分别加入4倍、7倍、10倍、15倍70℃的热水, 水浴温度70℃进行提取, 得到样品溶液。取样分析, 考察液料比对提取率的影响, 结果见图4。结果表明, 液料比为10∶1, 盐酸小檗碱提取较完全。
3.4提取压力影响
取黄柏药材粉末15g, 共4份, 按“2.2”项下提取工艺, 加入55%的乙醇溶液, 解吸30min, 加入70℃的热水150mL, 分别于真空度0.02、0.04、0.06、0.08MPa下进行提取, 得到样品溶液。取样分析, 考察提取压力对提取率的影响。结果见图5。结果表明, 当提取压力逐渐降低时, 液面有少量气泡, 提取液颜色较浅;当提取压力继续下降时, 液面出现大量气泡, 物料内解吸液沸腾, 提取液颜色加深;当提取压力下降到一定程度时提取液也开始沸腾, 提取液浑浊。因此, 提取压力较高时, 物料内部溶液及外部溶液不能沸腾, 提取率较低;而提取压力过低时, 物料内外有沸腾, 解吸液逸出较快, 压力不易控制, 导致提取不充分, 提取率下降。选择最佳提取真空度为0.06MPa即可。
3.5提取温度影响
取黄柏药材粉末15g, 共5份, 按“2.2”项下提取工艺, 真空度为0.06MPa, 提取温度分别为40℃、50℃、60℃、70℃、80℃条件下进行提取, 得到样品溶液。取样分析, 考察提取温度对提取率的影响, 结果见图6。结果表明, 提取温度升高, 盐酸小檗碱提取率也升高, 但温度太高时, 提取率降低;当提取温度为60℃与70℃时, 提取效果最好, 为减少能量损失过度, 则选择最佳提取温度为60℃。
3.6提取时间影响
取黄柏药材粉末15g, 共6份, 按“2.2”项下提取工艺, 加入55%的乙醇溶液60mL, 解吸30min, 加入60℃的水150mL, 真空度为0.06MPa, 水浴温度60℃, 提取时间分别为2、4、6、8、10、20min, 得到样品溶液。取样分析, 考察提取时间对提取率的影响, 结果见图7。结果表明, 提取时间短, 提取不充分, 提取时间为10min时, 提取基本完全。
3.7物料粒度影响
取黄柏药材粉末15g, 共3份, 按“2.2”项下提取工艺, 物料粒度分别为饮片、细粉、粗粉, 各加入55%的乙醇溶液60mL, 解吸30min, 加入60℃的水150mL, 减压提取 (真空度为0.06MPa, 水浴温度60℃) , 提取时间10min, 进行提取后得到样品溶液。取样分析, 考察物料粒度对提取率的影响, 结果见图8。结果表明, 物料粒度为饮片和粗粉时, 提取效果较差;而物料粒度为细粉时, 有利于有效成分的提取, 提取较完全。
3.8减压内部沸腾法与乙醇回流提取法的比较
根据上述单因素考察结果, 确定减压内部沸腾法提取黄柏中盐酸小檗碱的最佳工艺条件为:药材细粉加入55%的乙醇溶液60mL, 解吸30min, 加入60℃的水150mL, 减压提取 (真空度为0.06MPa, 水浴温度60℃) , 提取时间10min, 过滤。取第1次提取后的滤渣, 按第1次提取相同条件进行, 合并2次提取液, 即得。将减压内部沸腾法与按“2.3”项下乙醇回流提取法进行比较, 结果见表1。
表1结果表明, 与乙醇回流提取法比较, 采用减压内部沸腾法提取盐酸小檗碱, 提取时间缩短了2倍以上, 提取温度 (60℃) 低于传统提取方法, 利于节能降耗。采用HPLC法测定有效提取得率, 减压内部沸腾法提取得率明显高于乙醇回流提取法。综合分析, 减压内部沸腾法提取黄柏中盐酸小檗碱效果明显优于乙醇回流提取法。
4 讨论
目前, 中草药的提取方法对于提高中药制剂的内在质量和临床疗效极为重要。减压内部沸腾提取法作为常规提取方法的一种改进方法, 具有提取温度低、提取速度快、杂质少、成本低、适用范围广等优点。本实验通过单因素考察确定减压提取黄柏中盐酸小檗碱的最佳工艺条件为:药材细粉加入55% 的乙醇溶液60mL, 解吸30min, 加入60℃ 的水150mL, 减压提取 (真空度为0.06MPa, 水浴温度60℃) , 提取时间10min, 过滤;提取2次。比较2种工艺的提取效果, 减压内部沸腾提取法提取温度低, 提取时间缩短了2倍以上。本研究采用HPLC法测定盐酸小檗碱有效提取率, 结果表明, 减压提取的得率明显高于乙醇回流提取法, 比乙醇回流提取法更加节约时间, 在较低温度下使溶液处于沸腾状态进行动态提取, 可以保证药材成分免遭长时间高温煎煮破坏。同时减压提取法在不改变提取溶媒条件下, 较低温度下可增大热敏性有效成分的提取效率, 降低导致提取物易吸湿、强黏性的大分子物质的提取率;缩短提取时间, 降低能量消耗, 利于降低生产成本;并且提取设备简易、操作简单方便、费用低, 尤其适用于对热不稳定有效成分[12]。因此, 减压内部沸腾法对中药的提取, 值得进一步深入研究和推广应用。
参考文献
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盐酸小檗碱 篇7
1 仪器与材料
1.1 仪器
SSI二元高压液相色谱仪;Thermo可变波长紫外检测器和EZ Chrom Elite色谱工作站(美国科学技术公司);BDS Hypersil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);TU-1800S紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);KQ-50B型超声波提取器(昆山市超声仪器有限公司);AB265-S十万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)。
1.2 材料
盐酸小檗碱对照品,购自中国药品生物制品检定所,批号:110713-200208,供含量测定用;黄连取自中美华医(河北)制药原料库,产地四川,按2005版中国药典一部方法进行了鉴别检验,符合规定;乙腈为色谱纯;纯化水;磷酸、三乙胺、磷酸二氢钾均为分析纯。
2 方法[2]与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈—0.033mol/L磷酸二氢钾(含0.5%三乙胺,用磷酸调节p H至3.0)[3](30∶70)为流动相;检测波长为254nm。理论板数以盐酸小檗碱峰计算应不低于4 000。
在上述色谱条件下,盐酸小檗碱保留时间约13.5min,且阴性对照在相应的位置无干扰。如图1、图2所示。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取在100℃干燥5h的盐酸小檗碱适量,加甲醇制成每1m L含0.1mg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
取黄连药材适量,研细,称取0.1g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入甲醇100m L(每100m L加入盐酸1m L),加热回流提取1h,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4 线性关系考察
精密称取盐酸小檗碱对照品1.1680mg,置10m L容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制成对照品溶液。精密吸取对照品溶液2、5、8、10、12、15μL注入液相色谱仪,按拟定的色谱条件测定峰面积分别为317985、768251、1235748、1554219、1856922、2286145。以峰面积积分值为纵坐标,盐酸小檗碱进样量为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程:Y=1305801.7697X+14725.3952,R2=0.9997,盐酸小檗碱在0.2336~1.7520μg范围内呈良好的线性关系。见图3。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10μL,按上述色谱条件,连续进样5次,分别测定其峰面积,RSD=1.1%(n=5),表明仪器精密度良好。实验数据见表1。
2.6 重现性试验
取同一批黄连药材5份,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,依法测定盐酸小檗碱含量,RSD=1.6%(n=5),结果表明方法重现性良好。实验数据见表2。
2.7 稳定性试验
取同一份供试品溶液,按上述色谱条件,分别在不同时间(0、2、4、6、12h)进样10μL,测定盐酸小檗碱的峰面积,RSD=1.5%(n=5),结果表明样品溶液在12h内稳定。实验数据见表3。
2.8 加样回收率试验
取已知含量(含盐酸小檗碱11.09%)的供试品5份,每份取样约50mg,精密称定,分别加入已配制好的盐酸小檗碱对照品溶液(0.1200mg/m L)1m L,挥干,按“供试品溶液制备”项下的方法制成供试品溶液并依法测定,计算回收率,平均回收率为99.17%,RSD=1.78%(n=5),结果见表4。
2.9 黄连药材含量的确定
以同一批药材,随机抽样5份,按“供试品溶液制备”项下的方法制成供试品溶液并依法测定。同一批药材经河北省药检所按药典方法测定结果为9.1%;经比较,HPLC法测定结果高出薄层扫描测定结果约23%。药典规定黄连含盐酸小檗碱不得小于3.6%[4],为此我们规定以HPLC测定黄连含盐酸小檗碱不得少于4.5%。实验结果见表5。
3 讨论
(1)经对盐酸小檗碱甲醇溶液在200nm~400nm进行光谱扫描,有两个较大吸收峰分别为265nm和254nm,参考黄柏药材色谱条件选择254nm为检测波长。
(2)经对乙腈—0.1%磷酸溶液(50∶50)(每100m L加十二烷基磺酸钠0.1g),乙腈—0.033mol/L磷酸二氢钾(含0.5%三乙胺,用磷酸调节p H至3.0)(30∶70)等流动相条件选择,均能达到较好分离,但考虑到离子对试剂对色谱柱的性能影响较大,选择乙腈—0.33mol/L磷酸二氢钾(含0.5%三乙胺,用磷酸调节p H至3.0)(30∶70)为流动相,结果盐酸小檗碱与杂质峰分离度良好,峰形对称,经系统适用性试验,均能符合要求,且阴性样品无干扰。
(3)供试液制备方法参考《中国药典》2005版一部黄连药材的制备方法,经对回流提取与冷浸放置过夜提取效果比较,两者没有明显的区别,为缩短检验时间,确定回流提取为供试液制备方法,该方法分析迅速、准确。
(4)盐酸小檗碱含量受黄连药材产地、生长年限的影响较大,且本次试验测定黄连药材的批次数少,暂定盐酸小檗碱的含量不得少于4.5%,待积累一定数据后,再重新修订含量标准。
摘要：目的:研究黄连所含成分盐酸小檗碱的HPLC测定方法。方法:采用BDSHypersilC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾(含0.5%三乙胺,用磷酸调节pH至3.0)(30:70);检测波长:254nm;流速:1.0ml·min-1;柱温:室温;样品采用甲醇加热回流提取。结果:盐酸小檗碱在0.2336～1.7520μg范围内呈良好的线性关系,R2=0.9997(n=6),平均回收率99.17%,RSD=1.8%(n=5)。结论:该方法简便、准确、重现性好,可用于黄连药材中盐酸小檗碱含量的控制方法。
关键词：黄连,盐酸小檗碱,HPLC
参考文献
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[2]谢秀琼.中药新制剂开发与应用[M].北京:人民卫生出版社,2002.
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盐酸小檗碱 篇8
关键词：黄连,干姜,盐酸小檗碱,高效液相色谱法
黄连是多年生草本植物, 为毛茛科黄连属, 属苦寒药, 归经为心、脾、胃、肝、胆、大肠经, 功效为清热燥湿, 泻火解毒[1]。该药药用部位为根茎, 含多种生物碱, 主要成分为盐酸小檗碱, 又称黄连素 (Berberine) , 含量约为6%~13%[2,3]。干姜是姜科植物姜的根茎经晒干烘干等炮制过程后制得的干燥根茎, 其性味辛、热, 归脾、胃、心、肺经, 有回阳温中、化痰温肺的功效, 而黄连与干姜配伍在临床上常用于治疗糖尿病合并胃轻瘫见呕吐的患者[4,5,6]。干姜、黄连配伍出自《伤寒论》黄连汤、半夏泻心汤、甘草泻心汤、生姜泻心汤等方。干姜辛热燥烈, 散寒邪, 通凝滞, 有温中散寒、回阳通脉、温肺化饮之功效, 为温中散寒、振奋脾阳之要药;黄连大苦大寒, 大寒能清, 味苦性燥, 可清热燥湿, 泻火解毒, 二药伍用, 一温一寒, 寒温并施, 一辛一苦, 辛开苦降[7,8,9]。本文采用HPLC法对不同配比的黄连干姜煎煮药液中盐酸小檗碱的含量进行测定, 研究不同配比黄连干姜对其盐酸小檗碱含量的影响, 结果如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪 (美国戴安公司p680型) , 浙大智达N2000工作站, 分析天平 (上海越平科学仪器有限公司FA1004) , 快速混匀器 (姜堰市新康医疗器械有限公司XK96-A型) , 超声清洗器 (昆山市超声仪器有限公司KQ2200B型) 。
1.2 药品
盐酸小檗碱对照品 (纯度98%以上, 购自大连美仑生物技术有限公司) , 黄连和干姜 (哈药集团世一堂药材公司) 。
1.3 试剂
甲醇和乙腈 (色谱纯, 美国DIKMA技术公司) , 磷酸二氢铵 (天津市博迪化工有限公司) , 磷酸 (天津市富宇精细化工有限公司) 。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性实验
色谱柱为安捷伦C18柱 (4.6mm×150mm, 5μm) , 流动相为乙腈-0.01mol·mL-1磷酸二氢铵水-磷酸 (20∶79.9∶0.1) , pH值为3.4, 流速为1mL·min-1, 检测波长为345nm, 柱温为室温。理论塔板数按小檗碱计算不低于3 000。
2.2 对照品溶液制备
精密称取2mg小檗碱标准品置于10mL容量瓶中, 加入双蒸水稀释至刻度, 配制成0.2mg/mL的小檗碱标准液原液, 进一步依次稀释成0.2mg·mL-1, 0.1mg·mL-1, 0.05mg·mL-1, 0.025mg·mL-1和0.01mg·mL-1的小檗碱标准液, 经0.45μm微孔滤膜过滤后保存于4℃冰箱中备用。
2.3 供试品溶液制备
称取36g黄连生药, 平均分成6份, 每份6g, 分别标记为1~6号样品, 按照1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、6∶1的比例分别加入6g、3g、2g、1.5g、1g干姜, 6号样品不加入干姜, 每份样品加入8倍体积的双蒸水煎煮30min后收集煎液, 过滤残渣, 再加入8倍体积的双蒸水溶解残渣继续煎煮30min后收集煎液, 弃去残渣, 将两次煎液合并后保存于4℃冰箱中备用。药液处理后相关的数据见表1。
2.4 方法学考察
2.4.1 方法专属性考察
盐酸小檗碱标准品的保留时间为7.932min, 见图1。盐酸小檗碱样品的保留时间为7.948min, 见图2。
2.4.2 线性关系考察
取各浓度对照品溶液按上述色谱条件手动进样20μL测定, 以峰面积为纵坐标, 以对照品含量 (μg·mL-1) 为横坐标绘制标准曲线, 计算回归方程为:Y=49 164X-281 326, r=0.999 9, 结果表明盐酸小檗碱在10~200μg·mL-1范围内与峰面积线性关系良好。
2.4.3 精密度考察
精密吸取浓度为100μg·mL-1的对照品溶液120μL, 分6次连续进样, 测定结果见表2, 结果表明该方法精密度良好。
2.4.4 稳定性考察
取5号供试品溶液6份, 分别考察其在0h、2h、4h、6h、8h、10h内的稳定性, 结果见表3。结果表明样品中小檗碱的峰面积无明显变化, 表明样品在10h内稳定性良好。
2.4.5 重现性实验
取浓度为25μg·mL-1对照品溶液共6份, 同法分别测定6份对照品的峰面积, 结果见表4, 实验结果表明该方法重现性良好。
2.4.6 加样回收率实验
精密称取已知浓度的样品适量, 加入一定量的盐酸小檗碱对照品, 测定盐酸小檗碱含量, 计算回收率, 结果见表5。
2.5 样品含量测定
将1~6号样品从冰箱中取出, 每份样品经过0.45μm微孔滤膜过滤后取20μL进样测定, 每份样品进样6次, 实验结果见表6。
3 讨论
黄连的主要功效为清热燥湿, 泻火解毒;干姜的主要功效为温中散寒, 回阳通脉, 燥湿消痰, 温肺化饮。黄连苦寒而干姜大辛大热, 辛温散寒, 温中回阳, 因此使用干姜来抑制黄连苦寒伤胃的特性, 二药合用, 共奏辛开苦降、寒热并调之功。此配伍取“辛开苦降”之意, 为降血糖之经验药对。但是目前国内对于黄连和干姜的不同配比对于药液中的有效成分含量变化的影响研究不多, 而且同一药对中两味药的比例不同所产生的药效也是不同的, 因此笔者参考了《伤寒论》的半夏泻心汤、甘草泻心汤、生姜泻心汤和黄连汤中黄连和干姜的配伍比例, 设定了以上6种配伍比例, 尽量按照原方中的配伍比例来研究黄连干姜药对的配伍作用, 也更能体现原方的配伍内涵。
本实验以盐酸小檗碱为标准, 分别测定了不同配比的黄连干姜药对煎煮液与黄连单煎液中盐酸小檗碱的含量。比较发现, 不同配比的黄连干姜药液中盐酸小檗碱的含量与黄连单煎液中盐酸小檗碱的含量相比均有不同程度的升高, 其中以黄连干姜比例为6∶1时盐酸小檗碱的含量最高。因此, 黄连干姜药对的应用关键在于黄连、干姜的配伍比例, 合理调整配比可以发挥其最大疗效。
参考文献
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[8]丁娜, 都广礼.不同黄连药对配伍对2型糖尿病大鼠血糖的影响[J].实验中医药学, 2012, 13 (3) :29-30.
盐酸小檗碱 篇9
1 材料与方法
1.1 仪器与药品
索氏提取器 (自行设计) 、薄层层析用紫外灯365nm (北京光学仪器厂) , 香连丸 (湖北香连药业有限责任公司) , 盐酸小檗碱标准品 (中国药品生物制品检定所) 。
1.2 方法
1.2.1 供试品溶液制备
取香连丸约20粒, 研成粗粉, 取约0.1g, 精密称定, 置索氏提取器中, 加95%乙醇适量, 连续回流至提取液无色, 再常压蒸馏提取液至约10mL, 放至室温, 将液体移至25mL容量瓶中, 用少许95%乙醇洗涤容器, 洗液并入提取液中, 加95%乙醇调至刻度, 摇匀, 为备用液。
取一支2.0cm×30cm层析柱, 柱底覆盖少许脱脂棉, 柱内加入一定体积95%乙醇, 打开活塞, 让溶液慢慢流出。此时将已搅拌混均的氧化铝95%乙醇悬液 (层析氧化铝120～140目, 25～30g) 不断加入层析柱内, 至加完后, 轻敲柱体, 使各部分氧化铝均匀紧密一致。待氧化铝沉降稳定 (表面应平整) , 表面保持有少量溶剂 (0.5cm左右) , 关闭活塞。吸取0.1mL备用液通过氧化铝柱, 连续加入95%乙醇洗脱, 至流出液无色, 收集洗脱液置容量瓶中, 用95%乙醇调至刻度, 为供试品溶液。
1.2.2 对照品溶液制备
精密称取盐酸小檗碱标准品, 加甲醇制成每1mL含15μg的溶液, 即得。
1.2.3 测定方法
吸取供试品溶液及对照品溶液各3μL, 点于同一硅胶G薄层板上, 用展开剂 (乙酸乙酯∶氯仿∶甲醇∶浓氨水∶二乙胺=6∶2∶2∶1∶0.5, V/V/V) 展开, 置紫外灯 (365nm) 下检识。
2 结果与分析
2.1 香连丸中盐酸小檗碱的分离与纯化
盐酸小檗碱为黄色针状结晶, 在热乙醇中溶解度较大。根据报道[5], 选择95%乙醇为溶媒, 采用连续回流提取法加常压蒸馏提取, 易与香连丸中其他成分, 如挥发油、木香碱等分离, 且提取盐酸小檗碱浓度较大;根据盐酸小檗碱的极性特点, 采用氧化铝柱层析方法, 可以达到分离纯化盐酸小檗碱的作用。
2.3展开剂的选择
薄层色谱法对于样品能否实现满意的分离和检识, 取决于展开剂的选择。展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑, 本次实验根据盐酸小檗碱的化学性质, 尝试选用中等极性的溶剂体系, 即由氯仿相组成, 加入乙酸乙酯、甲醇来调节, 根据三者不同配比对展开效果进行评定。展开剂分别采用表1中的各种配比。
2.2薄层色谱法检测
从图2、图3中可以看出, 供试品与对照品均出现斑点, 证明供试品中有与对照品相同的成分, 二者斑点位置高度相同, 证明供试品中盐酸小檗碱的含量与标准品相同, 说明此方法有应用的可能性。
采用1号展开剂时, 点的样基本不变, 没有展开, 这可能与展开剂极性太弱有关, 采用5号展开剂时, 也没有展开, 这可能与展开剂极性太强有关, 3号展开剂效果最好, 可以清晰地将供试品及样品展开, 所以实验中选用3号展开剂, 另外考虑到薄层层析需要在硅胶这种酸性物质分离检识, 在展开剂里再加一点点二乙胺、氨水这类碱性物质, 以中和硅胶的酸性。展开剂即为:乙酸乙酯∶氯仿∶甲醇∶浓氨水∶二乙胺=6∶2∶2∶1∶0.5, V/V/V。
注:1、3斑点为供试品;2、4斑点为对照品。
3 结论
用95%乙醇作溶媒, 利用连续回流提取法和常压蒸馏法处理香连丸, 并用氧化铝色谱柱层析法分离纯化, 再利用薄层色谱法将香连丸中盐酸小檗碱分离出来, 分离效果较好;根据盐酸小檗碱的化学性质, 采用硅胶G薄层板及中等极性的展开剂, 对盐酸小檗碱具有良好的吸附效果, 从而利用薄层色谱法进行定性分析, 能准确快速地鉴定出香连丸中是否含有盐酸小檗碱。通过与对照品斑点高度相对比, 能够检测出供试品中盐酸小檗碱的含量是否符合标准, 从而实现定量分析。
本检测方法具有良好的稳定性和重现性, 方法简便易行, 适合在国内广大基层检测部门普遍推广。
参考文献
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