梗死体积

梗死体积（共5篇）

梗死体积 篇1

脑血管疾病是一种常见且严重危害人类健康的疾病, 致死率、致残率极高, 其死亡率和致残率均位于我国首位。脑血管疾病以缺血性脑血管疾病为主, 占70% 左右[1,2,3], 而急性脑梗死在急性缺血性脑血管疾病中最为常见, 且患病人数逐年增加, 但其临床治疗效果还不是很好。如何减少以及预防急性脑梗死患者的发病率是临床研究人员一直关注的问题。研究表明, 急性脑梗死与患者性别、年龄、血脂、家族史等有一定关联, 且糖尿病、高血压、心脑血管疾病患者为主要发病人群[4]。近年来, 临床研究者对急性脑梗死患者血小板、凝血系统、纤维蛋白原等异常变化有一定了解, 发现这些异常变化与脑梗死有着密切关系。本次研究选取200 例急性脑梗死患者以及100 例健康人士作为研究对象, 取得较好结果, 现整理如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2015年1月1日-5月30日收治入本院进行治疗的200例急性脑梗死患者 (观察组) 及同期于本院进行体检的100例健康人士 (对照组) 作为研究对象。观察组患者均符合急性脑梗死临床诊断标准, 其中, 男113例, 女87例;年龄27~89岁, 平均 (59.6±10.2) 岁, 按照美国国立卫生研究院卒中量表 (NIHSS) 评分将急性脑梗死患者分为轻度、中度、重度3个亚组;轻度患者103例, 其中男58例, 女55例;年龄24~86岁, 平均 (54.4±9.5) 岁;NIHSS评分低于4分, 神经功能轻度缺损;中度患者74例, 其中男42例, 女32例;年龄26~79岁, 平均 (53.2±8.4) 岁;NIHSS评分为4~15分, 神经功能中度缺损;23例重度患者, 其中男15例, 女8例;年龄22~84岁, 平均 (54.2±9.4) 岁;NIHSS评分高于15分, 神经功能重度缺损;对照组中, 男58例, 女42例;年龄32~84岁, 平均 (60.2±9.3) 岁。经过体检, 显示该组人员无血液疾病、免疫疾病、严重肝肾功能障碍、恶性肿瘤、慢性炎症等。两组研究对象的性别、年龄等一般资料比较, 差异均无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 排除标准 (1) 患有严重血液疾病; (2) 合并脑出血患者; (3) 慢性炎症疾病患者, 如胆囊炎、关节炎、血管炎等; (4) 具有多发性硬化、风湿病等免疫性疾病患者; (5) 恶性肿瘤患者; (6) 伴严重肝肾脏功能不全者; (7) 入院前3 个月有心绞痛、心肌梗死等病史。排除近期服药影响凝血系统药物患者[5,6,7]。

1.3 方法 观察组患者入院后, 提前几天避免高脂饮食并戒酒, 于验血前一晚正常进食后开始禁食、禁水[8,9]。次日清晨空腹抽取肘静脉血2 mL于抗凝管中, 抗凝管为EDTA-K2 真空抗凝管, 然后放于两手掌心中轻轻、缓慢滚动2~3 圈, 使血液与抗凝剂混匀[10,11]。血细胞分析仪为美国贝克曼库尔特公司生产, 型号为LH750;凝血分析仪为日本Sysmex公司生产, 型号为CA1500, 通过该全自动凝血分析仪对两组人员各项凝血指标以及血小板参数进行检测。所有血液标本需在4 h内检测完毕[12], 以免影响检测结果。

1.4 观察指标 两组凝血系统相关参数比较, 如血小板 (PLT) 、血小板压积水平 (PCT) 、平均血小板容积 (MPV) 、血小板分布宽度 (PDW) 、纤维蛋白原 (FIB) 、凝血酶原 (PT) 时间、活化部分凝血活酶 (APTT) 时间水平、国际标准化比值 (INR) 。

1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0 软件对所得数据进行统计分析, 计量资料用 (±s) 表示, 比较采用t检验, 计数资料以率 (%) 表示, 比较采用 χ2检验或确切概率法, 以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组凝血系统相关参数比较 与对照组比较, 观察组的PLT降低, PDW、MPV及FIB均升高, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。两组的PCT、PT、APTT、INR比较差异均无统计学意义 (P>0.05) , 见表1。

2.2 急性脑梗死患者轻度、中度、重度3 个亚组MPV与FIB水平比较 中度、重度亚组FIB水平均明显高于轻度亚组 (P<0.05) , 且重度亚组FIB水平明显高于中度亚组 (P<0.05) 。3 个亚组的MPV比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 见表2。

2.3 急性脑梗死与凝血系统相关参数、血小板的多因素Logistic回归分析 通过多因素Logistic回归分析, 显示平均血小板容积 (MPV) 增大与纤维蛋白原 (FIB) 水平升高均为引发急性脑梗死的危险因素, 见表3。

3 讨论

脑血管疾病严重威胁人类生命安全, 其中以缺血性脑梗死为主。急性脑梗死是由于患者发生急性脑供血障碍, 造成脑组织长时间缺血、缺氧, 以至于引发神经功能损伤[13,14,15], 具有极高的致死率、致残率, 严重影响患者生活质量的同时增加了其家庭经济负担与精神负担。我国老年人口增多, 步入人口老龄化社会, 脑梗死的发病率随之逐年增加。研究发现, 脑梗死患者初次发病以后, 其在短时间内再次发生脑梗死的几率会增大, 患者身体健康水平随着发病次数的增多而降低[16,17], 最终出现残疾, 甚至死亡。临床对脑梗死的治疗主要是通过干预纤溶酶原激活物联合其他治疗方法[18], 同时制定合理的护理方案, 给予正确的饮食护理、用药指导等, 具有较好的治疗效果, 提高了患者的生活质量, 但是要彻底治愈急性脑梗死, 减少其发病率, 做好预防措施的这条道路还很漫长, 还需临床研究人员的不断努力探讨、研究。在急性脑梗死的治疗中, 发现并有效控制各种危象因素对其治疗以及早期预防具有重大意义[19], 可能会减少脑卒中发生率, 降低其致残、致死率等。

本次研究选取收治入本院进行治疗的200 例脑梗死患者 (观察组) 和同期于本院进行健康体检的100 例健康人士 (对照组) 作为研究对象, 同时按照美国国立卫生研究院卒中量表 (NIHSS) 评分[20]将急性脑梗死患者分为轻度、中度、重度3 个亚组。此次研究发现, 观察组血小板含量为 (198.32±54.47) ×109/L, 低于对照组的 (219.41±52.13) ×109/L;观察组平均血小板容积为 (10.16±1.44) fL, 血小板分布宽度为 (17.11±2.23) %, 分别高于对照组的 (9.12±1.31) fL (、16.21±0.91) %, 差异均有统计学意义 (P<0.05) ;而观察组凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间水平、国际标准化比值与对照组相比, 差异均无统计学意义 (P>0.05) 。血小板与血栓的形成有巨大的关系, 是血栓的主要组成部分, 随着血液循环其体积会不断增大。而血小板参数变化可反映血小板的生成和衰老情况, 血小板分布宽度可反映血小板体积变化, MPV可反映巨核细胞生成情况[21]。较大体积的血小板于脑梗死发生之前已存在于血液循环中, 这说明脑梗死发生前, MPV即已增大。当急性脑梗死患者发病时间达到48 h后, 患者MPV升高并释放到外周血液循环, 这可说明MPV增大是脑梗死危险因素中的一个独立因素。同时MPV增大反映出骨髓巨核细胞正在进行大量增殖, 血小板黏附聚集性增强, 因此血液极易凝固, 造成血栓形成加速, 血小板随之减少[22]。血小板分布宽度 (PDW) 可反应血小板体积变化, 其大小变化与MPV变化呈正相关。体积较大的血小板, 其糖原、辅酶、腺嘌呤核苷酸、血小板因子Ⅲ含量较多, 对胶原、凝血酶的聚集增多, 这使血小板易于黏附、聚集。而5- 羟色胺、β- 血栓蛋白释放增多, 可使血栓体积增大, 加速其形成[23]。此次研究中的多因素Logistic回归分析进一步证明了MPV与急性脑梗死相关, 可促进脑梗死发生, 而3 个亚组MPV比较, 结果发现其与患者神经功能损伤程度无关联, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。血液黏稠度与血浆中纤维蛋白原 (FIB) 水平呈正相关, FIB水平升高, 血液黏稠度随之增加, 促进血栓形成, 也是急性脑梗死的独立危险因素之一。此次研究发现, 观察组纤维蛋白原水平为 (3.79±0.78) g/L, 高于对照组的 (3.25±0.41) g/L, 且多因素Logistic回归分析说明FIB是急性脑梗死的危险因素, 这与赵美荣等[24]的研究报告是相同的。3 组亚组FIB水平比较结果, 中度亚组FIB水平为 (3.98±0.79) g/L, 高于轻度亚组的 (3.59±0.62) g/L, 而重度亚组FIB水平为 (4.93±0.94) g/L, 高于中度亚组的 (3.98±0.79) g/L, 说明血浆FIB水平升高, 患者神经损伤程度越严重。这是由于FIB对中枢神经系统具有毒性作用, 能引发细胞衰亡、神经退变, 最终导致神经功能损伤[25]。

综上所述, 纤维蛋白原和血小板平均体积的异常变化与急性脑梗死的发生和发展具有一定关系, 纤维蛋白原和血小板平均体积参数变化可用于临床急性脑梗死的治疗中, 值得临床应用并推广。

梗死体积 篇2

（一）【教学内容】

教科书第45~46页的例

1、例2。【教学目标】

1.让学生亲历猜测、观察、动手的过程，感知物体的体积及体积的含义。2.知道常用的体积单位有cm3、dm3、m3。

3.在说一说、做一做的过程中对cm3、dm3形成比较明确的表象。【教具学具】

教具：量杯、土豆、绳子、杯子、视频展示台。

学具：装满沙的杯子、橡皮块、积木等。【教学重点】

物体的体积及体积的意义。【教学难点】

体积的意义。【教学过程】

一、导入新课 课件展示：比一比： 抽生说。

生：图(1)是比较两条线段的长短，图(2)是比较两个平面图形的面积大小，图(3)是比较两个长方体的大小。

师补充：说得对，图(3)是比较两个立体图形体积的大小。今天我们就来认识物体的体积。

二、教学例1 1.实验（1）猜一猜：

出示装有带颜色水的量杯和土豆。师：如果将土豆放入水中，水位会不会发生变化？怎样变化？为什么？（2）看一看：将土豆放入水中，水位上升。

（3）想一想：把土豆从水中取出，水位又会发生什么变化？为什么？ 教师将土豆从水中取出，水位下降。（4）说一说：

分组讨论刚才的实验过程及水位变化的原因。

汇报：把土豆放入水中，水位会上升，因为土豆占了原来一部分水的空间位置，水就往上升，把土豆从水中取出后，土豆占有的空间又被水填上去了，所以水位就下降。以前学的《乌鸦喝水》中，乌鸦就是运用这个方法喝到水的。师：说得真好。从刚才的实验中我们体会到水位的上升和下降是因为土豆占有一定的空间。（5）做一做：

将杯中的沙子全部倒出，把你们的橡皮块或积木放进去，再把沙往杯子里装，你发现了什么？

生：剩了一部分沙，装不进杯子里。

师：谁能说说这是为什么？生回答后师概括：对，积木和橡皮块也占了一定的空间，放到杯子里就挤占了原来沙的空间，所以，沙就装不完了。2.概括

师：通过刚才的两个实验，你知道了什么？ 小组讨论，抽生说。

师：通过实验，我们体会到了土豆、橡皮块、积木占有一定的空间。师：是不是只有土豆、橡皮块、积木才会占有一定的空间呢？(不是)师：对。比如说我们的书包装课本、文具盒等物品，放的书越多，书包剩下的空间就越小，就是因为这些课本、作业本、文具盒会占一定的空间。你还能举例说明物体占有一定空间吗？(如晚上洗脚，吹气球等。)抽生说一说，也可同桌互说。3.归纳

请一大一小个子的两个学生站在一起，比较所占空间的大小。

师：物体所占空间的大小，叫做这个物体的体积。如某某的体积大，某某的体积小。抽生举例说明物体的体积大小。

三、教学例2

师：同学们，和长度、面积一样，我们也常常需要给物体的体积确定单位。1.师生共做。

（1）画一条边长为1cm的线段，标出长度。（2）画一个边长为1cm的正方形，标出边长和面积。2.从学具袋中拿出一个小正方体，量出它的棱长为1cm。师：这个小正方体的体积就是1立方厘米。

师：谁能用自己的语言描述1立方厘米的大小？抽生说一说。

师：对，棱长为1cm的正方体的体积为1立方厘米，用字母表示为1cm3，读作1立方厘米。让学生在练习本上写一写1cm3，读一读。3.列举生活中体积为1cm3的物体的例子。

师：知道了1cm3的大小，你能举出身边哪些物体的体积大约是1cm3吗？ 生：我的小指头尖的体积大约是1cm3。生：一颗骰子的体积大约是1cm3。让学生用手比划一下1cm3的大小。4.小组活动。

用几个体积为1cm3的小正方体拼摆成不同的长方体，并说一说，这些长方体的体积分别是多少立方厘米？ 5.认识1立方分米。

师：同学们，我们除了以“立方厘米”作为物体的体积单位，还常常需要使用一些较大的体积单位，比如立方分米，你知道1立方分米是多大吗？

学生讨论后回答：1立方厘米是棱长为1厘米的小正方体的体积，那么1立方分米就是棱长为1分米的正方体的体积。

师：对，棱长为1分米的正方体的体积是1立方分米，也可写作1dm3。请同学们在练习本上画一个棱长为1dm的正方体，看看它的体积有多大。

6.找一找，生活中哪些物体的体积大约是1dm3？哪些物体的体积比1dm3大？哪些物体的体积比1dm3小？

四、全课小结 同学们，今天这节课我们学习了什么？你有什么收获？

梗死体积 篇3

磷酸腺苷活化蛋白激酶 (AMP-activated protein kinase, AMPK) 是进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶, 是异质三联体, 包含α催化亚基 (α1、α2) 和β、γ调节亚基 (β1、β2、γ1、γ2、γ3) , 通过α亚基上苏氨酸-172的磷酸化被激活[6,7]。AMPK是许多生物 (从酵母到哺乳动物) 关键的能量监控器, 也是细胞能量平衡的关键调节器, 当细胞能量供应缺乏时, AMPK被激活[8,9]。在细胞水平, 激活AMPK通过抑制消耗ATP的合成代谢途径, 同时激活产生ATP的分解代谢途径维持能量储备, 启动级联反应确保代谢适应和细胞生存力[10]。在外周, AMPK调节细胞新陈代谢, 减少能量储备, 增加能量利用, 为能源不足细胞提供ATP[11]。此外, AMPK也是主要代谢转换器, 控制细胞和整体能量平衡, 有研究表明AMPK通过与线粒体生物发生、蛋白质合成和降解途径的相互作用在细胞生长中发挥重要作用[12]。因此, 已将靶向AMPK治疗糖尿病、肥胖、癌症和心血管病等多种疾病。中枢神经系统神经元、神经胶质细胞和血管内皮细胞中均有AMPK表达, AMPK在中枢神经系统广泛分布的特点为其成为有效神经保护靶标提供重要生物学基础[13,14,15]。有研究已经提出AMPK代表内源性的神经保护通路, 该信号通路在脑卒中病理生理过程中发挥重要作用[16]。在本研究中, 笔者制作小鼠脑缺血再灌注模型, 检测缺血侧脑组织中AMPK蛋白表达, 观察抑制AMPK后小鼠的行为结局和脑梗死体积, 现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物分组和处理

清洁级健康成年雄性昆明小鼠66只, 体重25~30 g, 由新疆实验动物研究中心提供 (许可证号:SCXK新2011-0001) 。按照随机数字表法将其分为假手术组、盐水对照组 (脑缺血再灌注损伤模型组) 、药物干预组 (Compound C给药组) , 每组22只。药物干预组小鼠在造模、线栓刚插入时立即腹腔注射AMPK特异性抑制剂Compound C, 即6-{4-[2- (1-哌啶基) 乙氧基]苯基}-3- (4-吡啶基) 吡唑并[1, 5-A]嘧啶20 mg/kg (美国Sigma公司) , 盐水对照组在相同时间点给予等量生理盐水腹腔注射, 假手术组则不予任何药物[17]。

1.2 方法

1.2.1 制作动物模型

采用改良线栓法制作短暂性右侧大脑中动脉栓塞模型[18]。应用氯胺酮复合麻醉剂 (氯胺酮、安定、阿托品按2∶1∶1配伍, 0.9%氯化钠注射液稀释至15 m L, 新疆医科大学一附院动物实验研究中心) 以1.5~2 m L/kg体重腹腔注射麻醉小鼠。沿颈部正中线纵行剪开2 cm切口, 暴露右侧颈总动脉、颈外动脉及颈内动脉, 在颈外动脉远端距分叉处约6 mm处斜剪一切口, 将0.22 mm硅胶线栓 (北京沙东生物技术有限公司生产) 缓慢插入, 沿颈内动脉向前推进约10 mm, 有轻微阻力时则停止进入, 此时开始记录缺血时间, 缺血60 min后, 缓慢拔出线栓恢复血流再灌注, 缝合手术切口。小鼠清醒后出现对侧肢体偏瘫, 表示模型制作成功。假手术组仅分离颈总、颈外和颈内动脉, 不插入线栓, 术中控制小鼠体温在37℃左右。

1.2.2 神经功能评分

再灌注24 h后, 按Longa等[19]方法对各组小鼠进行神经功能评分。评分标准如下:0分:无神经功能缺损征象;1分:缺血对侧前肢内收;2分:行走时向瘫痪侧转圈;3分:行走时向瘫痪侧倾倒;4分:不能自发行走、意识丧失或死亡。1~3分为模型成功, 0、4分及出现癫痫发作、取材时发现脑出血者均予剔除并随机补充。

1.2.3脑梗死体积测定

再灌注24 h后, 颈椎脱臼法处死小鼠, 速取脑组织, 置入-20℃冰箱速冻10 min, 离额极2 mm向后连续等距切取4个冠状脑片, 间距2 mm, 将切片放进1%的2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑 (TTC, 美国Sigma公司) 磷酸盐缓冲液中, 37℃恒温箱避光孵育20 min, 再在4%多聚甲醛 (美国Gibco公司) 液中固定2 h, 数码相机照相。正常脑组织染成红色, 梗死组织为白色。采用Image pro plus 5.0软件测量梗死面积, 计算梗死灶体积:V=∑ (S1+S2) ×d/2, V为总体积;S1、S2分别表示切片头侧和尾侧面积;d为切片厚度。为除去患侧脑水肿因素, 脑梗死体积 (%) =脑梗死体积/非梗死侧大脑半球体积×100%。

1.2.4 Westem-Blot法检测缺血侧脑组织中AMPK和磷酸化的AMPK (p AMPK) 蛋白表达

再灌注24 h后, 处死小鼠, 速取脑组织在冰上分离缺血侧脑皮质和海马, 分别置于细胞裂解液中低温匀浆、离心、取上清, 置-80℃冰箱保存。用BCA蛋白定量试剂盒 (江苏海门碧云天生物试剂有限公司) 测定蛋白浓度, 行SDS-PAGE电泳, 再用蛋白转移装置将蛋白转移到PVDF膜上。AMPK、p AMPK (Thr172) 和β-actin用相应抗体检测, β-actin为内参照。加入一抗[p AMPK (Thr172) (1∶1000, 美国CST公司) 、AMPK (1∶1000, 美国CST公司) 、β-actin (1∶5000, 武汉博士德生物工程有限公司) ]溶液, 4℃孵育过夜, 将PVDF膜移入TBST溶液 (包含4%牛血清白蛋白和0.1%Tween-20) 中, 室温下轻振荡10 min;再将膜置于二抗[羊抗兔Ig G (1∶5000, 武汉博士德生物工程有限公司) ]溶液中孵育, 最后用ECL化学发光试剂盒 (江苏海门碧云天生物试剂有限公司) 显色。测定每一条带灰度值, 用p AMPK (Thr172) 灰度值/AMPK灰度值表示p AMPK蛋白相对表达量。

1.3 统计学处理

使用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计学分析, 计量资料以 (±s) 表示, 多组间比较用单因素方差分析, 组间两两比较用LSD法, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠脑缺血再灌注损伤后缺血侧脑组织中p AMPK蛋白表达

假手术组小鼠脑组织中有少量p AMPK蛋白表达, 包括皮质 (0.700±0.197) 和海马 (0.690±0.228) , 盐水对照组包括皮质 (1.410±0.322) 和海马 (1.510±0.418) , 和假手术组相比p AMPK蛋白表达明显增加, 比较差异有统计学意义 (皮质:P=0.000;海马:P=0.000) ;给予20 mg/kg Compound C干预后, 可显著抑制p AMPK蛋白水平, 包括皮质 (0.930±0.229) 和海马 (0.960±0.378) , 与盐水对照组比较差异有统计学意义 (皮质:P=0.005;海马:P=0.017) 。三组间比较皮质和海马p AMPk蛋白表达比较差异均有统计学意义 (F1=12.000, F2=8.530;P1=0.001, P2=0.003) , 各组小鼠脑皮质和海马区p AMPK蛋白表达见图1、2。

*与假手术组比较, P<0.01;△与盐水对照组比较, P<0.01

*与假手术组比较, P<0.01;△与盐水对照组比较, P<0.05

2.2 神经功能评分

假手术组小鼠未出现神经功能缺损症状, 评分0分;盐水对照组小鼠可见明显神经功能缺损症状, 如Horner征, 左侧前肢无力, 行走时身体向左侧旋转, 甚至彻底向左侧跌倒或不能行走, 提尾时左前肢屈曲, 评分 (2.63±0.52) 分;药物干预组小鼠仅出现轻微神经功能缺损症状, 表现不能完全伸展左侧前爪或爬行时向左侧倾斜, 评分 (1.88±0.64) 分。药物干预组神经功能评分与盐水对照组比较显著降低, 比较差异有统计学意义 (P=0.005) 。三组间比较差异有统计学意义 (F=64.658, P=0.000) , 各组小鼠神经功能评分见图3。

*与假手术组比较, P<0.05;△与盐水对照组比较, P<0.01

2.3 脑梗死体积

再灌注24 h后, 假手术组小鼠TTC染色脑组织完全红染, 无肉眼可见梗死灶, 组织结构清晰;盐水对照组和药物干预组小鼠TTC染色后均可见脑组织苍白色梗死灶, 内部结构消失, 肿胀明显, 部位主要累及大脑中动脉供血区 (包括皮质和海马) , 脑梗死体积分别为 (49.57±9.71) %与 (24.07±7.74) %, 与盐水对照组比较, 药物干预组脑梗死体积显著缩小, 比较差异有统计学意义 (P=0.006) 。三组间比较差异有统计学意义 (F=39.959, P=0.000) , 各组小鼠脑组织TTC染色及脑梗死体积比较分别见图4、5。

*与假手术组比较, P<0.01;△与盐水对照组比较, P<0.01

3 讨论

缺血性脑卒中是一个严重的能量缺乏状态, 乳酸积聚、自噬和再灌注期间失调的葡萄糖转运蛋白导致的葡萄糖增加都会加重卒中损伤, 在缺血缺氧性脑损伤早期, 以能量代谢障碍为中心环节[11]。磷酸腺苷活化蛋白激酶 (AMPK) 是关键的应激与代谢感受器, 涉及许多调解途径, 位于多个代谢通路的交叉点, 对于调解能量平衡有非常重要的作用, 故AMPK在缺血性脑卒中中的重要性已逐渐得到重视[20]。

笔者应用小鼠脑缺血再灌注模型, 在缺血1 h、再灌注24 h后, 应用Westem-Blot法检测小鼠缺血侧脑组织中p AMPK蛋白表达, 结果显示p AMPK蛋白水平显著升高, 即AMPK被过度激活, 小鼠出现明显神经功能缺损症状, 大片脑梗死灶形成, 说明AMPK激活在缺血脑中是有害的。

脑梗死发生时, 氧糖缺乏导致神经元细胞遭受兴奋性毒性和氧化损伤, 在修复损伤过程中, 许多能量消耗过程 (如一连串的氧化和细胞死亡路径) 被激活, 这些途径过度激活导致完全的能量衰竭, ATP减少, 同时AMP增加, 能量衰竭是启动脑梗死神经元损伤的主要因素。AMPK通过AMP感觉能量水平变化, 激活能源恢复过程, 抑制能源消耗过程, 通过调节一系列分解代谢和合成代谢过程适应细胞的新陈代谢[21]。然而, 作为机体针对缺血应激的代偿性反应, 有研究指出过度的AMPK激活可能在应激条件下具有不利作用[22]。缺血情况下, 脑组织ATP供应不能满足需要, ATP/AMP降低, AMPK在脑中迅速激活, 最初的AMPK激活旨在恢复缺血脑中的能量平衡, 然而细胞死亡启动后, 试图进一步从代谢受损的细胞中产生ATP只会导致损伤恶化和更严重的代谢障碍, AMPK激活可促成病理条件下 (包括卒中和AD) 的神经元细胞死亡[23,24]。AMPK是糖酵解强烈刺激素, 大脑中AMPK作为能量感受器, 在应对增加的代谢应激时激活糖酵解, 进而在缺血脑卒中产生乳酸盐, 缺血诱导的AMPK激活通过增加卒中诱导的乳酸酸中毒加重卒中损伤[25,26]。有研究表明, NMDA或谷氨酸兴奋性毒性引起初级皮层或小脑颗粒细胞中AMPK激活, 长时间的AMPK活化可同时激活ATP相关的细胞死亡过程——兴奋性毒性的凋亡, 增加促凋亡Bcl-2家族成员bim (参与凋亡和线粒体去极化的关键蛋白) 的转录活性, 导致神经元生存力逐步丧失[27]。AMPK活性增加是启动自噬级联反应的关键信号, 可以激活自噬, 研究表明自噬促进缺血后神经细胞死亡[28,29]。

为了解抑制AMPK激活在缺血脑卒中的效应, 笔者给予AMPK特异性抑制剂Compound C干预, 结果显示缺血侧脑组织中p AMPK蛋白表达显著减少, 即抑制了AMPK激活。另外, 小鼠神经功能评分显著降低, 脑梗死体积明显缩小, 表明在缺血条件下抑制AMPK激活可以减轻脑卒中损伤。以上结果强烈支持笔者关于抑制缺血脑卒中AMPK过度活化发挥神经保护效应的假设。

Zhang等[30]发现在H2O2处理的SH-SY5Y细胞中AMPK和p AMPK的表达显著上调, 这是一个自我代偿反应, 减少能量利用, 增加能量产生。然而, 体外过度AMPK激活对SH-SY5Y细胞是有害的, 抑制AMPK激活可以抑制氧化应激, 增加细胞抗应激能力。另外, 有研究证实谷氨酸在HT22细胞中诱导AMPK活性增加, AMPK活化促成谷氨酸氧化毒性诱导的神经元细胞死亡, 抑制AMPK激活能保护神经元免受氧化毒性损伤[31]。当沙鼠前脑缺血后, 海马CA1区中AMPK被瞬时磷酸化, 抑制AMPK激活通过减少海马CA1区中ATP损耗和乳酸积聚保护神经元免受缺血缺氧性损伤[32]。在缺血性脑卒中急性能量缺失阶段, 抑制AMPK活性可能诱导一种“神经元冬眠”形式, 和低温的作用机制一样, 减少能量需求和随后的代谢衰竭, 可能延长再灌注治疗的时间窗[33]。AMPK激活导致Kif5轴突动力蛋白驱动蛋白轻链磷酸化, 破坏了它和磷脂酰肌醇-3-激酶 (phosphatidylinositol-3-kinase, PI3K) 的联系, 故PI3K不能靶向轴突末梢, 使轴突极化和生长被抑制[34,35]。AMPK激活抑制缺血事件后的轴突发生, 急性抑制AMPK激活则对卒中发挥保护作用。AMPK信号参与脑缺血预处理, 温和短暂的代谢应激通过缓慢减少AMPK活性导致神经元发生代谢耐受效应[36]。文献[37]指出, 在小鼠局灶性脑缺血模型中, 脑组织中AMPK活性增加, 基因敲除法抑制AMPK活性具有神经保护作用, 这与本研究结果一致。

《体积和体积单位》评课稿 篇4

导入是课堂教学的一个有机组成部分，是实际教学的前奏，用好的导入可以抓住学生，控制课堂，促进学生积极思维。本节课中教者没有以传统的教学方法引出今天所讲的主题，而是用学生熟悉的乌鸦喝水的故事引入堂课，一下子把学生的注意力吸引过来，接着提出乌鸦是怎样喝到水？瓶中的水增加了吗？为什么水会升上来的？让学生切身感悟到石头占有了水的空间，在激发学生学习兴趣的同时又迁移了难点。

二、紧密联系生活，挖掘生活素材

数学来源于生活，生活中处处有数学。教者在这节课增加了很多生活中的素材。为了突破每个体积单位的实际大小这一难点，教者非常注重从学生的生活实际出发，让学生联系生活学习数学。如介绍完1立方厘米，1立方分米后让学生在学具中找出1立方厘米，1立方分米的学具，再列举生活中体积接近1立方厘米1立方分米的物体；介绍完立方米后，老师用三把尺子围出1立方米，并在里面站同学，这样的活动让学生对每个体积单位形成具体的表象，符合学生的认知规律。再通过游戏猜一猜涂改液，纸盒，讲台，门卫室录音机等这些学生经常接触的实物的体积，一方面能使学生更好的理解各个体积的`实际大小，另一方面，让学生真正体验到数学是从生活中来，又回到生活中去。

三、注重知识的内在联系，帮助学生建立完整的知识体系

梗死体积 篇5

1 材料与方法

1.1 实验动物

36只健康雄性SD大鼠 (山西医科大学实验动物中心提供) , 体重230 g～270 g。

1.2 药品及试剂

重组人促红素注射液 (北京四环生物制药有限公司) , Nrf2、HO-1兔抗鼠多克隆抗体 (北京博奥森生物技术有限公司, 免疫组化用) , PV-6001二步法免疫组化检测试剂盒 (北京中杉金桥生物技术有限公司) , 辣根过氧化物酶标记的二抗 (北京中杉金桥生物技术有限公司) 。

1.3 分组

随机将36只SD大鼠分为假手术组 (n=12) 、缺血组 (n=12) 和rhEPO治疗组 (n=12) 。每组随机选取6只行免疫组化。

1.4 模型制作与取材

1.4.1 模型制作

采用改良的Zea-Longa法[3]制备pMCAO 模型。大鼠在术前24 h禁食, 术前4 h禁水, 10%的水合氯醛 (0.35 mL/kg) 腹腔注射麻醉后, 仰卧位, 取颈正中切口, 暴露并钝性分离左侧颈总动脉 (CCA) 、颈外动脉 (ECA) 、颈内动脉 (ICA) 。结扎ECA远端、CCA近心端, 用动脉夹夹住ICA, 在CCA近分叉处约5 mm处剪一“V”型小口, 将预先准备好的直径约0.26 mm的蘸有石蜡的尼龙线头轻轻插入CCA, 从CCA分叉处计算, 插入18 mm～20 mm时稍遇阻力即可停止, 并结扎CCA, 逐层缝合筋膜、皮肤, 建立pMCAO模型。假手术组除插入鱼线约10 mm外, 其余操作与缺血组相同。rhEPO治疗组在缺血2 h时腹腔注射rhEPO 5 000 IU/kg, 假手术组与缺血组则给予等量的生理盐水。参考 Zea Longa评分标准, 评分为0分和4分者均剔除。缺血24 h后处死大鼠。

1.4.2 取材

造模完成后, 各组随机取6只在相应时间点心脏灌注去血后, 断头取脑, 经10%中性甲醛固定24 h后, 取视交叉后1 mm～4 mm脑组织, 石蜡包埋, 切片行免疫组化。

1.5 脑梗死体积的测量

大鼠在缺血24 h后以10%水合氯醛麻醉后断头取脑, 以生理盐水冲洗后, 将脑组织迅速置于-20 ℃冰箱冻存20 min后取出, 去除嗅球、小脑和低位脑干, 切除额极和枕极, 以2 mm间距行冠状位切片, 共5片, 然后浸于2%的TTC (2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑) 磷酸盐缓冲液中, 置于37 ℃的水浴箱中染色30 min, 再在4%的多聚甲醛溶液中固定12 h, 取出后用数码相机照相, 最后利用图像分析软件计算出梗死区域的面积, 为了消除脑水肿的影响, 梗死区域体积用占对侧大脑半球体积的百分比来表示。

1.6 免疫组化检测Nrf2及其HO-1的表达

免疫组化方法严格按说明书染色步骤进行, 抗原修复后, 孵育一抗, Nrf2和HO-1兔抗鼠多克隆抗体分别按1∶100和1∶200稀释。每片在高倍镜 (400倍) 下随机选取损伤侧 (左侧) 皮层范围内5个非重叠视野, 利用Image-Pro Plus软件计算平均阳性细胞数。

1.7 统计学处理

采用SPSS11.5统计软件包进行分析, 数据用均数±标准差$(\overline{x}\pm s)$表示, 多组间比较采用单因素方差分析和Student-Newman-Keuls (SNK-q) 检验。

2 结 果

2.1 各组大鼠脑梗死体积比较

TTC染色结果:脑组织梗死灶呈白色, 正常组织呈红色, 部分组织表现为由白色向红色过渡区。缺血组左侧半球梗死灶主要位于额顶叶皮质及纹状体。假手术组无梗死体积。与缺血组相比, rhEPO治疗组脑梗死体积明显减小, 有统计学意义 (P<0.01) 。详见表1。

2.2 免疫组化测定脑组织中Nrf2及HO-1的分布与表达

假手术组可见HO-1在细胞浆中有少量表达;缺血组阳性细胞增多, 阳性细胞主要为缺血区的神经元和星形胶质细胞。与假手术组相比, 差异有统计学意义 (P<0.01) ;rhEPO治疗组阳性细胞增多更为明显, 与缺血组比较差异有统计学意义 (P<0.01) 。

假手术组中有少量Nrf2浆阳性细胞, 无明显核阳性细胞。缺血组可见明显的Nrf2核阳性细胞, 核阳性细胞主要为缺血区的神经元和星形胶质细胞。与假手术组比较, 差异有统计学意义 (P<0.01) ;rhEPO治疗组可见大量的核阳性细胞, 与缺血组比较, 差异有统计学意义 (P<0.01) 。表明rhEPO能增加核内Nrf2的含量。详见表2。

3 讨 论

Nrf2是新近发现的一种对氧化应激非常敏感的基因转录因子, Nrf2的缺失或激活障碍, 会使细胞对氧化应激的敏感性提高[4]。卒中发生前Nrf2的激活能够清除缺血半暗带区的自由基。HO-1是一种重要的抗氧化酶, 又称热休克蛋白32 (HSP32) , 在各种理化因素如发热、氧化应激等状态下, 可在脑中大量被诱导、表达, 从而发挥作用。rhEPO在缺血性脑损伤中具有抗氧化作用, 但其抗氧化作用机制是否与Keap1-Nrf2/ARE抗氧化系统有关, 尚不清楚。

本研究通过观察大鼠局灶性脑缺血模型Nrf2及HO-1的表达, 进一步探讨rhEPO的抗氧化作用机制。免疫组化结果证实, 假手术组有少量的Nrf2和HO-1阳性细胞;缺血组Nrf2核阳性细胞和HO-1阳性细胞增多, 提示急性脑缺血发生后, Nrf2与Keap1分离, 转位进入胞核, 进而与核内的ARE结合, 上调HO-1;rhEPO治疗组与缺血组相比, Nrf2核阳性细胞和HO-1阳性细胞明显增多, 提示rhEPO可能促进了Nrf2的核转位。本研究表明, 脑缺血发生后, 脑中Keap1-Nrf2/ARE抗氧化系统被激活, rhEPO可能通过激活该抗氧化系统来发挥抗氧化作用。

假手术组中有少量的阳性细胞, 表明机体在生理状态下, 有少量的Nrf2和HO-1蛋白的表达, 并处于转录翻译与降解的平衡状态, 这样就维持了生理条件下机体内的氧化/抗氧化系统的平衡。由于本研究只局限在蛋白水平, rhEPO对Nrf2、HO-1核酸水平的影响以及调控机制尚不明确。

有研究表明, PI3K[5]、PKC/络氨酸[6]、MAPK[7]等细胞内信号传导途径在该抗氧化系统的激活机制中起了非常重要的作用。但有关rhEPO对该系统的激活机制的研究甚少, Hwang等[8]研究表明HO-1的上调是通过激活PI3K和ERK激酶而实现的。Gene等[2]的研究认为, rhEPO通过PI3K、MAPK途径, 促进Nrf2的核转位, 从而上调HO-1的表达。对于rhEPO激活该氧化系统的具体机制有待进一步研究。

rhEPO能在急性脑缺血大鼠模型中发挥神经保护作用, 其机制可能与上调缺血半暗带中Nrf2和HO-1的表达, 参与Keap1-Nrf2/ARE抗氧化系统有关。

摘要：目的 研究重组人促红细胞生成素 (rhEPO) 对急性脑缺血大鼠脑组织中核因子E2相关性因子2 (Nrf2) 及血红素加氧酶 (HO-1) 表达的影响, 探讨rhEPO的抗氧化作用机制。方法 随机将36只雄性SD大鼠分为假手术组、缺血组和rhEPO治疗组。采用线栓法制作大鼠永久性局灶性脑缺血 (pMCAO) 模型。rhEPO治疗组在缺血2h后腹腔注射rhEPO 5 000IU/kg, 模型组和假手术组在等时间点给予等量的生理盐水。TTC (2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑) 法测量脑梗死体积, 免疫组化方法测定脑组织中Nrf2及HO-1的表达。结果 rhEPO治疗组与缺血组相比, 脑梗死体积减小, 各组脑组织中Nrf2及HO-1的表达量按假手术组、缺血组、rhEPO治疗组依次增高, 各组间差异均具有统计学意义 (P<0.01) 。结论 急性脑缺血后, 脑组织中Keap1-Nrf2/ARE抗氧化系统被激活, rhEPO可能通过激活该氧化系统而发挥脑保护作用。

关键词：脑缺血,重组人促红细胞生成素,E2相关性因子2,血红素加氧酶,Keap1-Nrf2/ARE抗氧化系统

参考文献

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[2]Gene S, Akhisaroglu M, Kuralay F, et al.Erythropoietin restoresglutathione peroxidase activity in 1-methyl-4-phenyl-1, 2, 5, 6-tetrahydropyridine-induced neurotoxicity in C57BL mice andstimulates murine astroglial glutathione peroxidase production invito[J].Neuresci Lett, 2002, 321:73-76.

[3]Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, et al.Reversible middle cere-bral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke, 1989, 20 (1) :84-91.

[4]Kobayashi A, Ohta T, Yamamoto M.Unique function of the Nrf2keap1pathway in the inducible expression of antioxidant and de-toxifying enzynmes[J].Methods Enzymol, 2004, 378:273-286.

[5]李薇, 邵建林, 衡新华.脱氟烷诱导神经元HO-1mRNA表达信号通路的研究[J].昆明医学院学报, 2008 (2) :51-55.

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[7]Papaiahgari S, Kleeberger SR, Cho H, et al.NADPH oxides andERK signaling regulates hyperoxia-indueed Nrf2-ARE tran-scriptional response in pulmonary epithelial cells[J].J Biol Chem, 2004, 279 (40) :42302-42312.