相关靶点论文（共5篇）
相关靶点论文 篇1
骨重建是正常成年脊椎动物的骨骼保持自我更新的过程, 包括破骨细胞进行的骨吸收以及成骨细胞进行的骨形成[1]。维持这一动态平衡的稳态功能十分重要, 当此协调失衡, 骨吸收超过骨形成时, 即导致骨质疏松。骨质疏松是一种全身性的代谢性骨病, 以骨量减少、骨的微结构损伤为特征, 导致骨强度下降、骨折危险性增加, 严重影响了绝经后妇女以及老年人的健康[2]。
目前用于预防和治疗骨质疏松症的药物主要涉及以下两种机制:抑制骨转换和促进蛋白合成代谢。参与此过程的信号途径包括:NF-ΚB受体活化基因配体 (Receptor activator of nuc lear factor kappa B ligand, RANKL) 、Wnt信号通路、组织蛋白酶K。
1 RANKL/RANK信号通路
RANKL是连接于NF-ΚB受体活化因子 (RANK) 一种蛋白, 位于破骨细胞及其前体上, 由成骨细胞、T细胞及基质细胞产生。RANKL与RANK结合后被激活, 导致NF-KB转移至细胞核内, 使破骨细胞形成基因的转录增多, 最终促进破骨细胞的生成、分化和成熟。而体外研究也证实阻断RANK以及基因敲除RANK小鼠都会防止破骨细胞生成。
研究发现骨保护素 (OPG) 是RANKL/RANK信号通路的内源性调节因子, 可与过量的RANKL结合, 防止RANK活化, 抑制破骨细胞活性[3]。缺乏骨保护素的转基因小鼠很快会发生骨质疏松, 而产生过量骨保护素的小鼠则发展为非致命性骨硬化症。
骨质疏松的动物模型及绝经后妇女体内RANKL/RANK/OPG通路的改变与雌激素减少有关。研究发现绝经后妇女血清OPG水平随着年龄的增加而增加, 推测雌激素缺乏时RANKL与RANK浓度会增加, 使得破骨细胞功能活跃, 骨吸收增加, 骨丢失加快, 刺激机体代偿性骨形成增加, 血清OPG相应增加, 最终导致骨重构过程的失衡[4]。
此外, 雌激素通过调节成骨细胞和破骨细胞的活性, 间接调控炎症细胞因子的释放。研究发现去卵巢小鼠及绝经后妇女雌激素的缺乏与IL-6的增加有关, (绝经后妇女中是IL-1a) 。缺少IL-6的转基因小鼠由于雌激素的消耗而发生持续性骨量减少。雌激素不足时增加IL-6也可解释去卵巢小鼠成骨细胞数量的短暂增加。IL-1在骨质疏松的发病机制中可能也起了同样的作用。雌激素通过抑制IL-1的活化间接促进了破骨细胞的凋亡[5]。
Bai XC等[6]体外研究发现活性氧通过诱导成骨细胞 RANKL的表达而促进破骨细胞的生成和骨的吸收。除此之外, 还有TNF-α、IL-6、IL-11、骨保护素、IL-17和表皮生长因子等也可能与其有关, 最终促使骨质疏松的发生。
破骨细胞是体内唯一具有骨质破坏作用的细胞。研究提示:乳癌细胞高效表达甲状旁腺相关肽 (PTHrP) , 从而促进RANKL表达, 抑制OPG的分泌。逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR) 、免疫组化及酶联免疫吸附试验 (ELISA) 分析肿瘤组织及非肿瘤组织、健康组织中的RANKL/OPG比, 结果显示:严重溶骨性破坏患者RANKL/OPG比值比健康对照组明显升高, 提示OPG表达降低和或RANKL表达增加与溶骨性破坏正相关。因此, 恶性肿瘤骨转移过程中骨组织破坏的主要机制是肿瘤细胞刺激破骨细胞促进骨吸收, 导致骨组织发生溶骨性破坏, 并从骨基质中释放大量细胞因子, 促进肿瘤细胞在骨组织中的存活, 进而促进肿瘤细胞在骨组织中侵袭性生长, 释放出更多的细胞因子[7]。
2 Wnt信号通路
体内体外研究证实Wnt信号途径可促进成骨细胞的分化、增殖、存活, 是成骨细胞的正调节蛋白。激活Wnt通路可抑制破骨细胞活性, 下调RANKL, 增加骨保护素的表达。Wnt通路的主要内源性调节因子是硬化蛋白, 由骨骼细胞分泌, 通过与Wnt配体上LRP-5和LRP-6受体结合特异性抑制Wnt通路的活化, 最终抑制骨量形成。目前硬化蛋白抗体被用于治疗骨质疏松临床研究[8]。
DKK-1作为Wnt信号通路的抑制因子可抑制骨形成。许多骨量丢失疾病患者的血清DKK-1含量升高, 因此, 通过抑制DKK-1的活性来治疗这些骨量丢失疾病成为近年来的研究热点。
Anastasilakis检测了绝经后骨质疏松患者血清DKK-1的浓度并与年龄、性别匹配的健康人群比较, 发现骨质疏松组患者的DKK-1浓度显著高于对照组 (P<0.002) [9]。Wang将大鼠卵巢切除后给予DKK-1反义寡核苷酸治疗 (20ug/kg/d) 。4周后取大鼠股骨和胫骨评价其骨量、力学强度, 进行免疫组织化学检查, 并检测其破骨细胞的数量。发现DKK-1反义寡核苷酸能显著减轻卵巢卵巢切除后对大鼠体重、骨矿物质含量、骨密度及股骨最大负荷的抑制作用。同时还减少了卵巢切除术后依赖粒细胞集落刺激因子的原始骨髓巨噬细胞向破骨细胞的分化。形态计量学观察证实DKK-1反义寡核苷酸可增加成骨细胞数量, 减少破骨细胞数量, 并能缓解卵巢切除术后大鼠骨小梁的缺失。通过免疫染色证实在去卵巢大鼠骨微环境中临近骨小梁、骨内膜的成骨细胞及正在钙化的软骨细胞表达DKK·l及RANKL增多, 经DKK-1反义寡核苷酸治疗后, 其表达量减少。DKK-1反义寡核苷酸可抑制RANKL的表达, 从而抑制破骨细胞分化[10]。
3 组织蛋白酶K
组织蛋白酶K (Cathepsin K) 是溶骨过程中与骨基质的降解有关的主要酶类, 其选择性地大量表达于破骨细胞, 其生理作用底物正是在有机骨基质中含量达95%的Ⅰ型胶原, 除此之外它还能降解骨基质中的骨桥接素和骨连接素, 是破骨细胞中表达量最高、溶骨活性最强的一种半胱氨酸蛋白酶, 是骨吸收过程中的一个关键酶[11]。
人类组织蛋白酶K基因表达的变异会导致致密性成骨不全症 (一种以骨硬化症, 骨脆性增加, 身材矮小, 前额和枕部隆突, 囟门及颅缝增宽, 远端指骨肢端骨质溶解为特征的常染色体隐性遗传病) , 最终导致骨质疏松和骨脆性增加。而从敲除组织蛋白酶K基因小鼠体内获得的离体破骨细胞不能形成骨吸收陷窝、并抑制胶原分解。
体内外试验已证明抑制Cathepsin K的活性是治疗因骨的过度重吸收而引发的疾病 (如骨质疏松) 一个很可行的途径。由于Cathepsin K是降解骨支持蛋白-Ⅰ型胶原的关键酶, 因此, 组织蛋白酶K已作为治疗骨基质代谢异常的相关疾病, 特别是骨的过度重吸收的一个重要靶点, 也是近年来骨质疏松研究中的一个热点。
4 未来的机遇与挑战
以上的研究表明通过调控RANKL信号通路、Wnt信号通路、组织蛋白酶K, 对治疗骨质疏松、癌症引起的骨丢失以及骨关节疾病有着诱人的前景。如组织蛋白酶K 抑制剂通过对破骨细胞的抑制, 可缓解糖皮质激素的副作用, 对于治疗因大量使用糖皮质激素导致的骨质疏松有重要的临床意义。但任何新的治疗方法, 除了要考虑其有效性, 还要重视其安全性。上述三种信号通路与许多肿瘤的发生发展具有密切关系, 单纯抑制或激活上述信号通路会不会增加癌症的发生, 值得我们谨慎对待。例如, Wnt信号通路抑制因子DKK-1在诱导肿瘤细胞凋亡, 调控某些肿瘤细胞的浸润和侵袭方面发挥重要作用。综上所述, 对RANKL信号通路、Wnt信号通路、组织蛋白酶K靶向药物的安全有效剂量等一系列问题的研究显得十分重要, 其结果将有助于提供更安全有效的骨病治疗方案。
摘要：骨重建是正常成年脊椎动物的骨骼保持自我更新的过程, 当此协调失衡, 骨吸收超过骨形成时, 即导致骨质疏松。目前预防和治疗骨质疏松症的药物主要涉及的信号途径:NF-ΚB受体活化基因配体 (Recep-tor activator of nuc lear factor kappa B ligand, RANKL) 、Wnt信号通路、组织蛋白酶K。也成为近年来骨质疏松研究中的一个热点。
关键词：骨质疏松,NF-ΚB受体活化基因配体,Wnt信号通路,组织蛋白酶K
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相关靶点论文 篇2
1 资料与方法
1.1 主要试剂
主要试剂左旋多巴干粉剂 (L-dopa) 、维生素-C、α-突触核蛋白 (α-synuclein) 抗体均购自Sigma公司;同相p H梯度 (1PG) 胶条 (Ph3~10, NL, 17cm) 、四甲基乙二胺均购自Bio-Rad公司;鱼藤酮均购自国内。
1.2 方法
实验动物由重庆医科大学实验动物中心提供[许可证号:SYXK (渝) 20070001]为健康雄性C57b l/6小鼠, 12周龄, 40只, 体质量20~22 g, 随机分为实验组 (test group, TG) 和对照组 (control group, CG) 。经行为学观察及免疫组化[3]证实模型成功, 再将成功的帕金森小鼠模型分为对照组及实验组, 对照组予以等量生理盐水腹腔内注射, 实验组分别用3种不同剂量的左旋多巴按体重10、50、100 mg/ (kg.d) 作用不同时间 (1、3、5、7 d) 对行为学变化及免疫组化各项指标再次评估。
1.3 双向电泳
参照THOMAS G等[4]及小鼠解剖图谱[5], Wenbin Tu蛋白提取方法[6]提取纹状体蛋白质及定量, 得到的肽质量指纹谱数据, 再进行数据库搜索。
1.4 统计学方法
采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。计数资料用率表示, 计量资料用±s表示, 组间比较采用t检验。
2 结果
2.1
鱼藤酮慢性PD小鼠模型, 与正常对照组相比, 鱼藤酮组及腹腔内注射小、中、大剂量按体重10、50、100 mg/ (kg·d) 左旋多巴后爬杆时间, 游泳实验及自由活动实验均有显著统计学差异 (P均<0.05) [7]。
2.2 免疫组化结果
实验组纹状体内出现较明显突触核蛋白聚集, 实验组则相反[3]。小剂量左旋多巴注射后突触核蛋白聚集减少, 中至大剂量左旋多巴注射后突触核蛋白聚集较用药前明显。通过PDQuest软件对正常对照组小鼠与鱼藤酮致PD组及不同剂量左旋多巴组小鼠黑质蛋白质的电泳图谱2-DE图谱上的蛋白点进行分析, 选其中改变较明显且与神经系统退行性疾病有明确关系的蛋白点:胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) (图1-4) 。
3 讨论
蛋白质组学目前是生命科学各领域的研究热点, 尤其是在人类重大疾病生物标志物和药物治疗靶点的研究。PD (Pakinson's disease, PD) 是多发于中老年人的神经系统变性疾病, 病因未明, 引起PD的可能原因有:兴奋毒性、氧化应激、神经营养因子缺乏、免疫调节异常、线粒体机能障碍及细胞凋亡。鱼藤酮是目前帕金森动物模型中运用较多的神经毒物之一。左旋多巴是治疗帕金森病最常用的药物, 但多数PD患者在服用左旋多巴及其复方制剂数年后, 易发生易动症、开关现象、剂末效应等。本课题组在既往研究的基础上[8], 采用的鱼藤酮诱导慢性PD小鼠模型, 应用不同剂量左旋多巴治疗帕金森病小鼠模型根据其临床表现对其蛋白点进行研究分析, 寻找在帕金森病及左旋多巴作用后差异明显且与神经系统退行性疾病较密切的蛋白质, 为帕金森病的诊治奠定基础。
胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 是胰高血糖素原基因表达形成的由小肠L细胞分泌的一种肠促胰岛素。在中枢神经系统, GLP-1R在啮齿类动物及人脑内分布较广泛[9], 丘脑、小脑、脑干、穹窿、后区、外侧膈核、尾壳、海马和大脑皮层均有表达。GLP-1通过血脑屏障能在相应脑区与其受体结合发挥作用。GLP-1可调节神经细胞的多种生理过程, 例如:细胞存活及神经元轴突生长;抵御体外培养神经细胞的兴奋性、氧化损伤和死亡;降低神经元β前体蛋白 (βAPP) ;降低内源性Aβ水平[10];保护神经元抵御多种凋亡性刺激及诱导体外培养神经细胞的分化的功能[11]。在中枢神经系统中, GLP-1还能发挥生长因子和激素样作用, 调节细胞的有丝分裂、生长、分化和凋亡等过程。GLP-1可介导神经元重塑, 动物神经退行性疾病的模型中, GLP-1可以减少基底节脑胆碱乙酰转移酶的缺失, 对胆碱能神经元的保护作用, 对所有表达GLP-1细胞的营养作[11]。GLP-1可保护谷氨酸诱导的神经细胞免受损伤, 剂量依从性地保护Aβ1240、Aβ1242和Fe2+诱导的细胞免于死亡。这些实验表明GLP-1可能为调节氧化应激的标志物。
本研究发现, GLP-1蛋白在鱼藤酮模型中表达明显下调, 经左旋多巴治疗症状好转, GLP-在小鼠纹状体中蛋白表达左旋多巴治疗剂量升高, 中毒剂量仍然下调, 更进一步说明了GLP-1对神经元细胞的保护作用。鉴于GLP-1R在中枢广泛分布 (特别是在黑质纹状体内) , 且目前GLP-1的神经营养作用及在神经退行性疾病的研究中成为一个新的研究热点。综上所述, GLP-1蛋白是与帕金森病诊治密切相关的蛋白, GLP-1极有可能成为一种新的PD预防和治疗的有效手段。参考文献
摘要：目的 应用不同剂量的左旋多巴腹腔注射治疗帕金森病 (Pakinson's disease, PD) 小鼠模型, 在对其模型大脑纹状体蛋白质组学进行研究, 从蛋白质水平上揭示PD的本质, 有助于全面探讨其病理机制, 发现药物治疗靶点。方法 构建鱼藤酮诱导的慢性PD小鼠模型, 行为学及免疫组化证明模型成功, 同时应用不同剂量左旋多巴腹腔内注射, 提取小鼠脑纹状体蛋白质, 双向电泳技术分离蛋白, 用质谱进行分析, 统计学分析。结果 GLP-1蛋白 (胰高血糖素样肽-1) 在鱼藤酮PD模型中表达明显下调 (P<0.05) , 经左旋多巴治疗症状好转, GLP-1蛋白在PD小鼠纹状体中蛋白表达左旋多巴治疗剂量上调 (P<0.05) , 中毒剂量仍然下调 (P<0.05) , GLP-1对神经元细胞的保护作用。结论 本研究新鉴定出一个蛋白:GLP-1蛋白为目前神经退行性疾病的研究热点, GLP-1蛋白对神经元细胞有保护作用, 与帕金森病诊治密切相关。
关键词：胰高血糖素样肽-1,帕金森病,蛋白质组学
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多靶点治疗狼疮性肾炎疗效观察 篇3
1 资料与方法
1. 1 一般资料2012 年9 月- 2015 年5 月在我院门诊和住院的SLE患者24 例,年龄为16 ~ 60 岁,男女比例为1∶ 12。符合1997 年美国风湿病学会修订的SLE诊断标准,在SLE诊断成立的基础上,有肾脏受累的表现,如24h尿蛋白定量≥1000mg / d,伴或不伴细胞管型尿。且经肾活检诊断为 Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型LN患者。所有患者进行SLE活动性评分,即SLEDAI≥5分。排除标准: ( 1) 有严重感染; ( 2) 有狼疮脑病者; ( 3) 有肾功能不全,血清肌酐( SCr) > 265μmol/L; ( 4) 重叠其他风湿病( 如皮肌炎、干燥综合征等) ; ( 5) 妊娠或哺乳期妇女。随机分为M组及C组各12 例,2 组一般资料比较差异无统计学意义( P >0. 05) ,具有可比性。
1. 2 治疗方法M组( 多靶点组) : 诱导治疗期给予霉酚酸酯( MMF) 1. 0g/d,分2 次口服; 环磷酰胺( CTX) 0. 8g·次- 1·月- 1静脉滴注,持续使用6 个月。C组( 对照组) : 予CTX剂量: 体质量< 60kg者,0. 8g·次- 1·月- 1静脉滴注; 体质量>60kg者,1g·次- 1·月- 1静脉滴注; 均连续6 个月。2 组均联用激素、羟氯喹,用法相同。除狼疮危象患者预先予以甲强龙0. 5g,连用3d治疗外,泼尼松开始剂量为1mg·kg- 1·d- 1,早晨一次口服,持续服用6 ~ 8 周后逐渐减量,通常每1 ~ 2 周减量5mg,减量至30mg/d时维持一段时间。此后更缓慢递减,每2 周减2. 5mg至10mg / d维持。羟氯喹200 ~ 400mg / d,均观察6个月。
1. 3 观察指标及疗效评定标准( 1) 临床疗效。完全缓解:24h尿蛋白定量< 0. 3g,血清AIB≥35g / L,SCr正常或上升不超过正常范围15% ,无肾外狼疮活动; 部分缓解: 24h尿蛋白定量≥0. 3g,尿蛋白下降超过基础值的50% ,AIB≥30g/L,肾功能稳定[3]。无效。总有效率= ( 完全缓解+ 部分缓解) /总例数 × 100% 。( 2) 记录患者用药前以及用药后1 月、3 月、6 月时24h尿蛋白定量( U-Pro) 、肌酐( SCr) 、C反应蛋白( CRP) 、血清白蛋白( AIB) 、补体C3等化验指标。并监测肝功能、血糖、血常规、尿常规等。( 3) 观察治疗后的不良反应。
1. 4统计学方法应用SPSS 16. 0 统计软件进行数据处理。计量资料以± s表示,组间比较采用t检验; 计数资料以率( % ) 表示,组间比较采用 χ2检验。P < 0. 05 为差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 临床疗效M组3、6 个月总有效率均分别高于C组,差异均有统计学意义( P < 0. 05) 。见表1。
注: 与对照组比较,*P < 0. 05
2. 2化验指标2 组患者治疗后3 月、6 月时24h尿蛋白定量、SCr、CRP均较治疗前降低,AIB、补体C3 均较治疗前升高,差异均有统计学意义( P < 0. 05) 。治疗后3、6 个月M组24h尿蛋白定量、CRP、补体C3 波动幅度大于C组,差异有统计学意义( P < 0. 05) 。但2 组3、6 个月时SCr、AIB水平差异均无统计学意义( P > 0. 05) 。见表2。
2. 3 不良反应2 组不良反应发生率差异均无统计学意义( P > 0. 05) 。见表3。
3 讨论
美国风湿病学会( ACR) 关于LN的最新诊疗指南( 2012年)[4]以及欧洲EULAR/ERA-EDTA的最新指南[5]都推荐糖皮质激素联合MMF或CTX作为LN免疫抑制治疗诱导期的主要方案。羟氯喹已被ACR推荐为治疗LN的基础药物,具有影响粒细胞的吞噬功能和迁移,稳定溶酶体的作用可减少器官损害,有助于稳定SLE病情。
激素有抗炎抗免疫作用[6]。CTX能抑制淋巴细胞增殖,抑制抗原抗体反应。CTX与激素联用增强免疫抑制作用。但CTX对肾小球固有细胞( 足细胞、内皮细胞) 损伤无治疗作用,对LN的疗效有限。
MMF能抑制嘌呤从头合成途径,抑制淋巴细胞活化,抑制血管平滑肌细胞增殖[7]。近几年对黑人和拉美裔患者的分析和小型研究提示MMF作为诱导治疗对增殖性和膜性LN、新月体型LN以及SLE的肾外表现均有疗效[8]。多项临床研究表明,MMF较CTX更耐受且安全性更高,应用MMF诱导治疗可使LN患者受益,且适于欲保留生育能力的女性患者[9]。CTX副作用较大,而MMF在LN的治疗中疗效肯定、副作用小,但价格贵,限制其临床应用。
不同免疫抑制剂影响不同的免疫环节,联用作用于不同靶点的药物,例如: 激素抗炎、CTX抑制细胞增殖及抗原抗体反应、MMF抗血管炎性反应及抑制抗体合成、羟氯喹稳定溶酶体等可发挥协同作用,使疗效提高。与传统大剂量CTX冲击治疗比较,多靶点治疗组虽然采用多种治疗药物,但各种药物的剂量减少,免疫抑制剂的不良反应随之减轻[10]。
本研究结果表明,多靶点组及对照组均能有效控制LN,改善LN患者的化验指标如血清AIB、补体C3、CRP、Scr及24 小时U-PRO等。多靶点组完全缓解率高,总有效率高。所有患者均未出现严重不良反应。综上所述,多靶点治疗LN可增强疗效,安全度高。
摘要：目的 探讨多靶点治疗狼疮性肾炎(LN)的临床疗效。方法 将24例LN患者随机分为M组和C组。M组给予霉酚酸酯(MMF)、环磷酰胺(CTX)、激素、羟氯喹治疗,C组采用CTX、激素、羟氯喹治疗。对比2组治疗前后24小时尿蛋白(U-PRO)、肌酐(SCr)、C反应蛋白(CRP)、血清白蛋白(AIB)和补体C3定量变化。对比2组临床疗效和不良反应。结果 M组3、6个月总有效率均分别高于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2组患者治疗后3月、6月时24h尿蛋白定量、SCr、CRP均较治疗前降低,AIB、补体C3均较治疗前升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后3、6个月M组24h尿蛋白定量、CRP、补体C3波动幅度大于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。2组治疗3、6个月时SCr、AIB水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 多靶点治疗LN可增强疗效,安全度高。
关键词：多靶点治疗,狼疮性肾炎,狼疮性肾炎
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相关靶点论文 篇4
慢性疼痛除了人们熟知的头疼、牙疼, 还包括炎症痛、肿瘤癌症痛、神经源性痛、糖尿病疼痛和腰背痛等。这一研究在国家自然科学基金会和教育部基金资助下开展, 成果主要内容发表在近期的国际神经科学权威杂志《神经科学杂志》上。
实验数据表明, GLP-1受体激动剂对肿瘤癌症、糖尿病等疼痛抑制率达60%~90%。对GLP-1受体激动剂在不同慢性疼痛模型中的作用效力进行比较, 抑制福尔马林引起的持续性疼痛最有效, 依次优于对付神经结扎引起的神经源性疼痛、骨癌引起的机械痛、炎性疼痛、糖尿病疼痛, 对于抑制急性疼痛最无效。
王永祥教授通过实验首次发现, GLP-1受体的特异性表达于脊髓中的小胶质细胞中, 炎症刺激、周围神经损伤、糖尿病都会引起小胶质细胞的激活和数量增加, 且GLP-1受体随小胶质细胞的数量增加而增加。
实验检测还发现, GLP-1受体激动剂激动小胶质细胞上的GLP-1受体, 小胶质细胞释放内啡肽, 通过小胶质细胞与神经元突触继而作用于神经元阿片受体产生镇痛作用。
相关靶点论文 篇5
1 Apoptin
Apoptin由鸡贫血病毒 (CAV) 基因组中Vp3基因编码, 可特异性地诱导转化细胞和肿瘤细胞凋亡且其凋亡作用不依赖于野生型p53也不受Bcl-2过度表达的影响。Apoptin不杀伤人类正常二倍体细胞亦无毒副作用。Apoptin是非结构蛋白, 被证明是引起肿瘤细胞及转化细胞凋亡的活性成分[2]。Apoptin在正常健康细胞中分布在细胞质中, 而在转化细胞及肿瘤细胞中则迁移到细胞核中。Apoptin在细胞内的分布对其凋亡功能产生重要影响, 没有核内分布的凋亡活性将大大降低[3]。
2 Survivin
Suvivin基因是新近克隆的IAP (inhibitor of apoptosis protein) 家族的成员, 定位于17 q 25, 全长15 kb, 含4个外显子和3个内含子。编码的蛋白质由124个氨基酸组成, 分子量为16.5 k D。Survivin因其选择性表达于肿瘤组织, 而在正常分化成熟的组织中无表达, 被认为是肿瘤治疗的理想靶点, 已有不少学者致力于研究针对Survivin的反义c DNA、寡核苷酸及Survivin基因突变的潜在作用[4]。
Survivin作为新的抗凋亡基因, 同时具有促进增殖的作用, 在肿瘤的发生、发展中起重要作用[5]。最近Norihiro Hayashi等将表达靶向Survivin的反义核苷酸的腺病毒感染人前列腺癌细胞DU145发现, Survivin的表达在感染后48 h明显下降, 并且呈剂量依赖性。直到感染后120 h与对照组相比癌细胞生长近于停滞状态, 细胞凋亡率及药敏性均增加[6]。Guo S等将靶向Survivin的核酶装配到p RNA载体上形成p RNA/核酶嵌合体, p RNA是从噬菌体phi29的马达RNA改造而成的具有携带外源效应分子的纳米RNA载体分子, 这种核酶嵌合体具有在体内外不容易降解、容易进入细胞内以及在胞内作用时间更长等优点, 将这种核酶嵌合体转染入人多种肿瘤细胞株, 发现癌细胞死亡率明显增高[7]。最近, Tu SP等发现将另一种Survivin突变体Cys84Ala即把其+84Cys突变为Ala通过腺相关病毒感染结肠癌细胞发现也可以诱导癌细胞凋亡, 抑制动物模型中肿瘤生长[8]。
3 端粒酶
端粒 (telomera, TLM) 是真核细胞染色体末端特殊的DNA-蛋白质结构, 端粒DNA富含G链, 在人类其为 (TTAGGG) n重复序列。这一结构在染色体复制顺利进行、防止染色体末端融合和维护染色体结构的稳定中起重要作用[9]。现有的研究表明端粒酶活性在正常体细胞中一般不表达, 而在恶性肿瘤组织中表达率则高达85%~95%[10]。
Wang[11]等用原癌基因c-myc转染人正常的二倍体细胞, 成功地诱导了h TERT基因的表达增加。因此证明, 在h TERT基因启动子区域内包含有c-myc癌蛋白的结合位点。c-myc癌蛋白可以诱导h TERT基因转灵活性, 从而激活端粒酶。抑癌基因PTEN位于人染色体10 q 23.3上。导入野生型PTEN抑癌基因的神经胶质瘤细胞比对照组细胞端粒酶活性下降10倍, 凋亡增加17倍。下调凋亡相关基因bcl-2的表达, 可以引起端粒酶活性的抑制, 但诱导该基因过度表达则导致端粒酶活性明显增高。
Sharma等[12]研究了二甲基亚砜 (DMSO) 对伯基特淋巴瘤中端粒酶活性抑制作用, 同样有研究发现维甲酸 (RA) 对细胞诱导分化同时抑制端粒酶活性和下调h TERT表达[13]。端粒酶作为肿瘤治疗的靶位点, 有明显的优势:几乎在所有肿瘤组织中均有活性表达而大部分正常组织中没有。端粒酶是迄今为止所发现的最为广谱的肿瘤标志物。
4 间充质干细胞
间充质干细胞 (mesenchymal stem cells, MSCs) 是来源于中胚层的具有多向分化潜能的干细胞, 主要存在于全身结缔组织器官间质和骨髓组织中[14]。Andreeff等[15]在治疗脑胶质瘤过程中, 将转染了治疗基因的MSC经颈动脉注射, 后发现其选择性地到达胶质瘤, 并在胶质瘤周围增殖而不会迁移到正常的脑组织中。实验表明, MSC很有可能成为能够精确命中肿瘤的生物导弹, 从而为肿瘤的基因治疗开辟新的道路[16]。
Nakamizo等[17]在实验中发现, 向颈动脉注射荧光标记的纤维细胞后并未发现有类似于MSC在肿瘤内增殖的情况发生, 此外MSC分化的纤维母细胞参与了肿瘤组织的构建并且在肿瘤表面形成纤维囊状结构, MSC这种伴随肿瘤生长而增殖的过程应该需要肿瘤微环境大量细胞因子的支持, 参与作用的细胞因子以及具体作用的过程仍不清楚。但MSC参与肿瘤组织的构建已被证实, 在肿瘤生长的各个阶段发挥着作用, 对MSC增殖的研究有助于我们对肿瘤生长的理解, 为肿瘤基因治疗探寻新的思路和办法。
5 微管不稳定蛋白Stathmin
Stathmin是一种新发现的微管不稳定蛋白, 在细胞周期的不同阶段通过磷酸化和去磷酸化作用对细胞微管系统动力平衡的调节发挥十分重要的作用。多种恶性肿瘤中Stathmin都有高水平表达, 通过抑制其表达可以干扰恶性细胞的分裂。研究表明, Stathmin提供了一个肿瘤基因治疗的分子新靶点[18]。