Trkb的表达（精选4篇）
Trkb的表达 篇1
结肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,而且发病率正逐渐升高。结肠癌患者的预后主要与肿瘤细胞的增殖和侵袭能力密切相关。Tropomysin-related kinase B(TrkB)是Trk家族成员之一,是一种受体酪氨酸激酶,对于神经系统的正常发育非常重要[1]。最近研究表明,TrkB能够抑制肿瘤细胞失巢凋亡和转移[2]。TrkB在多种人类原发肿瘤中表达上调,包括神经母细胞瘤[3]和肝细胞癌[4],特别是转移的胃癌[5]和胰腺癌[6]。TrkB还与肿瘤患者预后[7]或血管新生[8]密切相关。因此,TrkB的过表达可能在恶性肿瘤进展中发挥重要作用。研究显示,TrkB介导的信号通路促进细胞存活[9],TrkB活化后激活下游信号分子如PI3K/Akt,调节肿瘤细胞凋亡以及转移进程。尽管已经在结肠癌中发现TrkB基因点突变,但TrkB是否参与结肠癌的发生发展仍不明确。
本研究的目的是探讨TrkB在结肠癌中的表达及其与肿瘤细胞生物学特征的关系。我们发现TrkB在结肠癌中高表达,采用特异性si RNA抑制TrkB的表达能够促进Lo Vo细胞凋亡,抑制Lo Vo细胞的增殖和侵袭能力。这些结果表明,TrkB可能是结肠癌进展的关键因素。
1 材料和实验方法
1.1 材料
30例新鲜结肠癌和相应癌旁组织标本来自中国医科大学附属一院普外科,所有患者术前均未接受过放化疗。对冰冻组织切片常规HE染色,由2名副高级病理医师准确留取肿瘤和相应癌旁组织。人结肠癌细胞系Lo Vo由我校实验技术中心保存。DMEM培养基购自美国Gibco公司,胎牛血清购自天津灏洋公司,脂质体Lipofectamine2000购自美国Invitrogen公司,TrkB-和随机乱序si RNA为南京凯基生物公司设计并合成,兔多克隆抗人TrkB和β-actin一抗购自美国Santa Cruz公司,山羊抗兔IgG二抗购自北京中杉生物公司,ECL发光液购自南京凯基生物公司,Annexin V-FITC Kit和Matrigel基质胶购自美国BD Biosciences公司,Transwell小室为美国Costar公司产品。
1.2 细胞培养和转染
Lo Vo细胞使用含有10%胎牛血清的DMEM培养基,37℃、5%二氧化碳条件培养。采用脂质体Lipofectamine2000转染法,将TrkB-和随机乱序si RNA分别瞬时转染Lo Vo细胞(80%～90%融合),转染过程按试剂说明书进行。细胞实验至少重复3次。
1.3 We s te rn blot
冰冻(包括肿瘤和癌旁)组织或培养细胞用冰冷的PBS漂洗2次,置于冰上匀浆,裂解液成份包括20 m M Tris-HCl、1mM EDTA、50 m M Na Cl、50 m MNa F、1mM Na3VO4、1%Triton X-100和1 m MPMSF。4℃下,22 000 g离心30 min,取上清,考马斯亮蓝法测定蛋白浓度。80μg总蛋白采用6%SDS-PAGE电泳分离,并转移至PVDF膜。5%脱脂奶粉室温封闭2 h后,兔多克隆抗人TrkB和β-actin(1∶200)一抗4℃孵育过夜,然后山羊抗兔IgG二抗(1∶2 000)37℃孵育2 h,ECL发光成像。采用Image J软件测定每个蛋白条带的光密度值,计算同一个标本TrkB和β-actin光密度之间的比值作为TrkB的相对表达量。
1.4 MTT法测定细胞增殖
将细胞消化并平行接种至5个96孔板(1×103/孔),转染细胞至24 h。每天取出1个板,向含有细胞的孔加入20μL MTT(5 mg/m L),4 h后弃上清,再加入150μL DMSO,充分溶解后上酶标仪测定每个孔的吸光度值。连续检测5 d,以时间为x轴,平均吸光度值为y轴汇制细胞生长曲线。结果为3个复孔的平均值。
1.5 Anne xin V-FITC双染法测定细胞凋亡
细胞转染24 h后,用冰冷的PBS漂洗2次,重悬于1×binding buffer(1×106/m L)。取100μL细胞悬液(1×105细胞)与5μL Annexin V-FITC和5μL PI充分混匀,室温避光孵育15 min。再加入400μL 1×binding buffer,上流式细胞仪测定凋亡细胞百分比。实验重复3次。
1.6 Tra ns we ll小室检测细胞侵袭能力
转染24h后消化细胞(1×104)并接种在含有8μm孔径膜的Transwell上室,膜预包被有Matrigel基质胶,下室含有15%FBS的DMEM培养基,继续培养24 h。用棉签小心擦去膜上表面未发生迁移的细胞,而膜下表面细胞用4%多聚甲醛固定,苏木素染色。随机选取5个高倍镜下视野计数侵袭细胞数,结果为3个复孔的平均值。
1.7 统计学分析
采用SPSS 13.0软件处理数据。非参数检测用于比较结肠癌和癌旁组织之间TrkB表达水平的差异,单向方差分析用于比较不同处理组细胞之间的差异。结果用均值±标准差(x±s)表示,P<0.05时认为有统计学意义。
2 结果
2.1 We s te rn blot
在30例结肠癌组织和相应癌旁组织中检测TrkB的表达,结果发现与癌旁组织比较,26例肿瘤组织中TrkB过表达(P=0.000)。TrkB在4例结肠癌组织和相应癌旁组织中的表达水平如图1A所示,比较肿瘤和癌旁组织中TrkB的相对表达量,如图1B所示。
A:4例结肠癌(T)和相应癌旁(N)组织中TrkB的表达,可见TrkB在癌组织中的表达水平高于癌旁组织。B:统计结果显示,TrkB在结肠癌组织(T)中的表达水平显著高于癌旁组织(N)
A:转染特异性si RNA有效抑制Trk B的表达;B:细胞生长曲线显示TrkB-si RNA转染细胞增殖受到抑制
2.2 TrkB-s i RNA抑制结肠癌细胞LoVo增殖
使用TrkB表达水平较高的Lo Vo细胞,探讨特异性si RNA阻断TrkB表达,对转染细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。转染si RNA显著抑制TrkB的表达,如图2A所示。转染第5 d,TrkB-si RNA组、随机乱序组和对照组的平均吸光度值分别为(1.41±0.09)、(1.58±0.02)和(1.55±0.06)(P=0.035)。从增殖曲线可以看出,TrkB-si RNA对细胞增殖的抑制作用均强于随机乱序组和对照组(图2B)。
A:转染特异性si RNA有效抑制TrkB的表达;B:Trk B-si RNA转染细胞凋亡率增加
A:转染特异性si RNA有效抑制TrkB的表达;B:TrkB-si RNA转染显著减少侵袭细胞数
2.3 TrkB-s i RNA促进LoVo细胞凋亡
研究证实TrkB具有抑制多种肿瘤细胞凋亡的作用[10]。转染si RNA显著抑制TrkB的表达,如图3A所示。转染后,TrkB-si RNA组、随机乱序组和对照组的平均凋亡率分别为(26.5±1.9)%、(8.1±0.5)%和(5.4±1.2)%(P=0.000,图3B)。
2.4 TrkB-s i RNA抑制LoVo细胞的侵袭能力
研究表明TrkB过表达常出现于更具有侵袭性的恶性肿瘤[11]。转染si RNA显著抑制TrkB的表达,如图4A所示。转染后,TrkB-si RNA组、随机乱序组和对照组的平均侵袭细胞数分别为(16.2±3.9)、(26.4±3.2)和(25.9±3.3)(P=0.020,图4B)。
3 讨论
TrkB是一种酪氨酸激酶,介导多种细胞信号通路。TrkB在多种肿瘤中表达上调,包括神经母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌等。因此,以TrkB为靶点干扰其表达可能成为一种有效的抗肿瘤治疗策略。
本研究采用Western blot方法检测了TrkB在30例结肠癌和相应癌旁组织的表达水平,发现TrkB在结肠癌组织中过表达,具有显著的统计学意义。TrkB高表达于肿瘤组织提示其与结肠癌细胞的增殖和存活密切相关。本研究结果提示:TrkB对于结肠癌的发生发展具有重要作用,但还需要进行深入的分子机制的研究。
有研究表明,Trk酪氨酸激酶抑制剂能够诱导细胞死亡[12],在这里笔者探讨了TrkB-si RNA转染对于结肠癌细胞Lo Vo增殖、凋亡和侵袭的影响。转染TrkB-si RNA后,Lo Vo细胞中TrkB的表达水平显著降低,而且细胞增殖受到抑制。这表明TrkB具有促进细胞增殖的作用,可能是细胞生长所必需的。研究显示,TrkB能够抑制肿瘤细胞的失巢凋亡,而本组发现转染TrkB-si RNA的Lo Vo细胞凋亡率显著增加,表明TrkB可能有助于Lo Vo细胞的存活。肿瘤细胞的侵袭能力对于肿瘤转移来说至关重要,本组发现转染TrkB-si RNA显著抑制Lo Vo细胞的侵袭能力,表明TrkB能促进结肠癌的侵袭和转移。
总之,本研究的结果表明TrkB过表达于结肠癌组织,可能在诱导肿瘤形成方面发挥作用。笔者也发现用特异性si RNA干扰TrkB表达可以抑制结肠癌细胞Lo Vo增殖和侵袭,促进细胞凋亡。因此,TrkB可能为结肠癌的治疗提供新思路,而TrkB下游信号转导途径还有待于进一步研究。
参考文献
[1]KLEIN R,PARADA LF,COULIER F,et al.TrkB,a novel tyrosineprotein kinase receptor expressed during mouse neural development[J].EMBO J,1989,8(12):3701-3709.
[2]GEIGER TR,PEEPER DS.Critical role for TrkB kinase function inanoikis suppression,tumorigenesis,and metastasis[J].Cancer Res,2007,67(13):6221-6229.
[3]MATSUMOTO K,WADA RK,YAMASHIRO JM,et al.Expression ofbrain-derived neurotrophic factor and pl4STrkB affects survival,differentiation,and invasiveness of human neuroblastoma cells[J].Cancer Res,1995,55(8):1798-1806.
[4]YANG ZF,HO DW,LAM CT,et al.Identi?cation of brain-derivedneurotrophic factor as a novel functional protein in hepatocellularcarcinoma[J].Cancer Res,2005,65(1):219-225.
[5]ZHANG Y,FUJIWARA Y,DOKI Y,et al.Overexpression of tyrosinekinase B protein as a predictor for distant metastases and prognosis ingastric carcinoma[J].Oncology,2008,75(1-2):17-26.
[6]SCLABAS GM,FUJIOKA S,SCHMIDT C,et al.Overexpression oftropomysin-related kinase B in metastatic human pancreatic cancercells[J].Clin Cancer Res,2005,11(2 Pt 1):440-449.
[7]HAN L,ZHANG Z,QIN W,et al.Neurotrophic receptor TrkB:Is it apredictor of poor prognosis for carcinoma patients[J].Med Hypotheses,2007,68(2):407-409.
[8]AU CW,SIU MK,LIAO X,et al.Tyrosine kinase B receptor and BDNFexpression in ovarian cancers-Effect on cell migration,angiogenesisand clinical outcome[J].Cancer Lett,2009,281(2):151-161.
[9]PEARSE RN,SWENDEMAN SL,LI Y,et al.A neurotrophin axis inmyeloma:TrkB and BDNF promote tumor-cell survival[J].Blood,2005,105(11):4429-4436.
[10]YU X,LIU L,CAI B,et al.Suppression of anoikis by the neurotrophicreceptor TrkB in human ovarian cancer[J].Cancer Sci,2008,99(3):543-552.
[11]MIKNYOCZKI SJ,LANG D,HUANG L,et al.Neurotrophins and Trkreceptors in human pancreatic ductal adenocarcinoma:expressionpatterns and effects on in vitro invasive behavior[J].Int J Cancer,1999,81(3):417-427.
[12]DIONNE CA,CAMORATTO AM,JANI JP,et al.Cellcycle-independent death of prostate adenocarcinoma is induced bythe trk tyrosine kinase inhibitor CEP-751(KT6587)[J].Clin CancerRes,1998,4(8):1887-1898.
Trkb的表达 篇2
语言表达能力对幼儿的发展是至关重要的,总结起来,主要表现在如下几个方面：
一 对知识的获得
幼儿对知识的获得主要借助于口头语言，因为幼儿的知识很贫乏，需要通过多看、多听、多接触许多具体事物来增加知识，扩大眼界。在这个过程中，是离不开语言的。孩子在认识这样或那样东西的时候，都需要用语言来标志它的名称、形状和特征等。例如，“这是苹果，它是红颜色的，圆圆的……”，“这是香蕉，它是黄颜色的，长长的……”。幼儿认识具体事物以后，还要借助语言来把印象巩固下来。幼儿除接触事物获得直接知识以外，还要靠听讲故事等办法获得间接知识，在这个过程中，语言就起着主要的作用。幼儿在日常生活中，思考问题、提出问题，也都要借助语言。他们经常用语言来追问：“这是什么?”“那什么?”“为什么是这样的?”“为什么是那样的?”等等。一般说，语言发展比较好的孩子，往往求知欲旺盛，知识面也广，智能发展得比较好。
二 语言表达能力也是学习文字的基础。
许多小学老师反映，语言发展得好的孩子，进入小学以后，在识字、造句、写文章等各方面都进步得比较快
三 对个性的影响
语言对孩子的个性也有很大的影响。语言发展得比较好的小儿，往往思想活跃，性格开朗，喜欢同别人交往，活动能力比较强。相反，语言发展比较差的，则往往沉默寡言，比较胆小，活动能力比较差。
3-4岁是幼儿语言发展的关键期,如何培养幼儿语言表达能力是我们幼儿园教育工作者的一项艰巨的任务．以下是本人在工作中的一些感悟，在这里和大家交流一下：
一 创设自由,宽松的语言交往环境
刚刚入园的幼儿，由于环境的变化，对周围的人和事都感到陌生,此时的孩子情绪不稳定、缺乏安全感，导致有些幼儿变得“沉默寡言”这时教师应善于发现，将他们安臵在自己的身边，亲近他们、抚爱他们，创设一个宽松的谈话氛围，用和蔼的态度、亲切的话语跟他们交谈,使幼儿在感情上得到满足，陌生感、胆怯情绪就会逐渐消失，对老师、同伴发生兴趣，同时也产生了说话的愿望。教师要抓住时机，激发他们的说话的兴趣，使幼儿有话愿意说，有事愿意讲。
二 支持、鼓励吸引幼儿与教师,同伴,或其他人交往
幼儿年龄小,心理素质比较脆弱,当孩子和我们交流时,我们不能随意打断孩子的话语，更不能表露出不耐烦的精神。要知道孩子对老师的反应十分敏感,为了表达自己对孩子谈话内 2
容的关注，我们应该经常在孩子说话时使用“噢” “是吗” “后来呢”等词语，鼓励孩子继续说下去，有时还进一步询问有细节，这会让孩子觉得你确实是在关注他，这样，他才会更乐意地向你倾诉,孩子才会对自己更有信心,才会将自己成功的交往经验迁移到别处,才会形成良性循环.在日常活动中,我们经常会发现有许多老师喜欢强调举手发言,我认为,这对小班幼儿而言是不太合适的,小班幼儿控制能力较差,他们想到就会急于表达出来,而且他们注意力时间短,有意记忆还没有发展起来,让他们举手发言,等轮到他时说不定已经忘了要说什么了,长此以往不利于幼儿语言表达能力的培养,也不符合新教育理念以幼儿为主体的精神。
三 利用各种活动培养孩子的语言表达能力
1．利用文学作品培养幼儿良好的早期阅读习惯也是一种重要的教育方式。孩子在温馨、宽松、自由的语言环境中，其语言的各方面能力及兴趣才能得到更好的发展。文学作品中的角色表演是幼儿比较喜欢的一种游戏,能使幼儿的语言表达能力得到锻炼。
2．开展各种语言游戏
在游戏中坚持要求鼓励幼儿学说完整话。幼儿在回答问题、表述自己的意愿的时候，我总是耐心地引导他们，“请你用一句完整的话来讲述，好吗？”对于口语表达能力较差的幼儿，他 3
们总是断断续续地讲，有时根本就不能表达清楚，于是，我就利用一些游戏来耐心引导他们说完整话，如：在角色游戏《娃娃开门》和《爱心医院》中利用具体地问题引导幼儿的思维，“小狗怎么开门?”“小狗……”，“请问你哪里不舒服？”“我肚子痛……”等等。就这样，幼儿在说完整话的基础上，不断得到锻炼，语言表达能力也相应得到提高了。
3．将语言教育渗透于其他各领域教育活动之中.幼儿语言的发展与其情感、经验、思维、社会交往能力等其他方面的发展密切相关，因此，发展幼儿园语言的重要途径是通过互相渗透的各领域的教育，在丰富多彩的活动中扩幼儿的经验，为幼儿语言的发展提供条件。在实践中，特别是语言教育与音乐教育的互相渗透更充分说明了这一点，在歌曲教学中，歌曲是音乐与语言最完美的结合，孩子在优美的旋律伴奏下，唱着充满韵律感的歌词，是一非常美妙的享受，可从中感受到音乐与文学艺术的美。如小班教材下册中的歌曲《春天》，这首歌的歌词生动形象，幼儿透过歌词就能看到一幅非常优美的春天的图画，在欣赏完歌曲后让幼儿描述歌中描写的春天，还可以引导幼儿说出自己看到的春天另外的景色，通过说唱结合，培养了幼儿有节奏地说的能力。
四 面向全体,重视个别
幼儿个体之间的语言表达能力发展不均衡,且各具特色, 4
有的幼儿能较好的用口语表达自己的需求，有的幼儿在进行口语表达时却存在发音不清晰、语序颠倒、代词使用混乱、发单音节多于发多音节、用词不规范、语句不完整等现象。因此,我们在重视让幼儿通过集体活动发展语言表达能力的同时,还应与单独或少数幼儿谈话,及时发现幼儿口语中的错误并给予纠正,比较具体的掌握每个幼儿的口语发展水平，增加指导幼儿练习说话的机会，发展其语言表达能力。
五 指导家长做好家庭中的幼儿语言教育,形成教育合力
家庭是幼儿生命的摇篮，是孩子们最温暖、最安全、最自由、最快乐的港湾，家庭成员的讲话水平及语言表达能力直接影响幼儿语言的发展。
Trkb的表达 篇3
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 研究对象
收集1999～2010 年厦门医学高等专科学校附属医院口腔颌面外科手术切除或活检的标本67 例, 分为OSCC组和正常口腔黏膜组。OSCC组57 例, 其中中低分化者27 例, 高分化者30 例;浸润至黏膜下层者26 例, 肌层者31 例;无淋巴结转移组36 例, 有淋巴结转移者21 例;临床分期I、II期者37 例, III、IV期者20 例。正常口腔黏膜10 例, 取自无烟酒嗜好的外伤或拔牙患者。全部患者术前未经任何针对肿瘤的治疗, 所有标本均经病理证实。以上标本均经40 g/L中性甲醛液固定, 常规石蜡包埋, 连续切片, 切片厚度4 μm, 共4 张, 分别进行编号, 1、 2、 3号分别用于TrkB、BDNF、Survivin的免疫组化染色, 4 号片用于免疫组化阴性对照。
1.1.2 主要试剂
兔抗人TrkB多克隆抗体、兔抗人BDNF多克隆抗体 (武汉博士德生物工程公司) ;羊抗人Survivin多克隆抗体 (Santa Cruz公司) ;免疫组化单染通用二步法试剂盒、DAB显色剂 (北京中杉金桥生物技术有限公司) 。
1.2 方法
1.2.1 免疫组织化学染色
采用两步法 (SP染色法) , 实验步骤参照试剂盒说明书进行操作, 严格控制时间及温度, 每组标本均设阴性对照。具体操作步骤如下:① 切片脱蜡水化, 蒸馏水冲洗2 次;② 3%双氧水室温下孵育, 蒸馏水冲洗;③ 微波抗原修复;④ PBS洗涤后滴加适当稀释浓度一抗, 37 ℃恒温水浴箱中孵育2 h;⑤ PBS洗涤, 加入二抗试剂1, 37 ℃恒温水浴箱中孵育20 min;⑥ PBS洗涤, 加入二抗试剂2, 孵育25 min;⑦PBS洗涤, 滴加DAB显色液, 显色5～10 min;⑧自来水、蒸馏水洗, 苏木精复染, 自来水洗涤, 盐酸酒精分化, 氨水蓝化, 蒸馏水洗涤, 无水酒精脱水, 二甲苯透明, 烘干, 中性树胶封片;⑨ 观察结果。
1.2.2 结果判定
以细胞质、细胞膜或细胞核出现棕黄色颗粒判断为阳性细胞。在光镜下我们结合免疫组化染色强度和阳性细胞2 个参数综合判定TrkB、BDNF和Survivin的阳性染色。在400 倍高倍镜下随机选择5 个上皮或癌变视野, 按IOD值的四分位数染色强度记为0、 1、 2、 3 分;按照阳性细胞百分比记分: 小于10%为0分, 11%～30%为1 分, 31%～50%为2 分, 51%～100%为3 分。两者积分之和大于或等于3 分判断为免疫组化阳性染色。
1.2.3 统计学处理 SPSS
13.0 for windows统计软件包进行统计分析, 采用χ2检验和相关分析。
2 结 果
2.1 口腔组织中TrkB、BDNF和Survivin的表达
TrkB、BDNF阳性染色呈棕黄色, 阳性部位主要在肿瘤细胞胞质和细胞膜 (图 1～4) ;Survivin阳性染色也呈棕黄色 (图 5～6) , 阳性部位主要在肿瘤细胞胞质, 有时也可见于细胞核。
2.2 TrkB、BDNF和Survivin在OSCC、口腔正常黏膜中表达的比较
TrkB、BDNF和Survivin在正常口腔黏膜中未见阳性表达, 在OSCC组织中的表达均显著高于正常口腔黏膜组织 (均P<0.05) (表 1) 。
2.3 OSCC中TrkB、BDNF和Survivin的表达与临床病理学参数间的关系
(表 2)
有淋巴结转移和肌层浸润组的患者TrkB、BDNF和Survivin表达的阳性率显著高于无淋巴结转移和黏膜下层浸润组 (均P<0.05) 。
2.4 TrkB/BDNF与Survivin在OSCC中的关系
TrkB阳性的OSCC组织中 (42 例) Survivin阳性率为92.86% (39 例) , TrkB阴性的OSCC组织中 (15 例) Survivin阳 性 率 为40.00% (6 例) , 前 者显著高于后者 (P<0.05) , 说明TrkB和Survivin的表达具有相关性;BDNF阳性的OSCC组织中 (46 例) Survivin阳性率为86.96% (40 例) , BDNF阴性的OSCC组织中 (11 例) Survivin阳性率为 (45.45%) (5 例) , 前者显著高于后者 (P<0.05) , 说明BDNF和Survivin的表达具有相关性。TrkB和Survivin的表达呈正相关 (r=0.432, P=0.001<0.01) 。BDNF和Survivin的表达呈正相关 (r=0.396, P=0.002<0.01) 。TrkB和BDNF的表达显著相关 (r=0.779, P=0.000<0.01) 。
3 讨 论
BDNF是神经营养因子家族中的一员, 具有防止神经元死亡的功能。但是BDNF及其受体失巢凋亡抑制因子TrkB与胰腺癌、肺癌、甲状腺髓样癌等多种实体肿瘤有着密切的联系, 在上述肿瘤的生长、浸润和转移中起到了重要作用[1,2,3]。而关于BDNF和TrkB在口腔鳞癌侵袭和转移中的功能尚未见报道。
研究发现多种肿瘤组织如胃癌、肝细胞癌、前列腺癌等多种实体肿瘤中BDNF和TrkB的表达明显高于相同来源的正常组织, 与上述肿瘤的浸润和转移有着密切的联系[4,5,6]。Bronzetti等[6]研究了来自16 例前列腺癌、20 例良性前列腺增生和4例新鲜男尸正常前列腺组织的样本, 发现BDNF和TrkB高表达于前列腺癌。本研究也发现BDNF和TrkB在OSCC中的表达高于正常组织, 说明BDNF和TrkB可能与OSCC的发生发展关系较为密切。
本研究中, 淋巴结转移组较无淋巴结转移组BDNF和TrkB的阳性率明显增高, 在肌层浸润组阳性表达较多, BDNF和TrkB的表达显著相关, 提示在OSCC中, BDNF/TrkB可能能够促进其局部浸润和淋巴结转移, 这与历年来人们对多种恶性肿瘤的研究是一致的[7,8]。在胰腺癌中, TrkB的表达与周围神经的浸润和阳性腹膜后区域显著相关;虽然TrkB的表达与无病生存率、总体生存率或无复发率没有显著相关性, 但是与肝转移显著相关, TrkB阳性者肝转移发生的时间显著早于TrkB阴性者。
TrkB与其配体BDNF结合, 激活胞内的酪氨酸激酶信号通路——PI3K/AKT (phosphoinositide3- kinase/protein kinase B, 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B) 信号通路。PI3K/AKT信号通路通过调控线粒体凋亡途径及bcl- 2家族成员的表达而在失巢凋亡调节中发挥核心作用[9], 从而赋予OSCC细胞失巢凋亡抑制能力。“失巢凋亡”是一种形式的细胞程序死亡, 是由与细胞外基质和其他细胞脱离接触而诱发的, 对“失巢凋亡”的抵抗作用在OSCC的扩散和转移中可能扮演着重要的角色。此外, BDNF还在肿瘤血管新生中发挥着作用, 研究表明它一方面能够通过PI3K/AKT、MEK1/ERK信号通路直接促进体外血管新生[10], 另一方面还能刺激肿瘤血管的血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor) 的表达, 间接促进肿瘤血管新生[11], 这也在OSCC的浸润和转移中发挥了作用。此外, BDNF还能够通过热休克蛋白Hsp90选择性地诱导肿瘤细胞增殖[5], 在肿瘤细胞的增殖和生存中发挥着重要作用。
Survivin是凋亡抑制蛋白 (inhibitor of apoptosis, IAP) 家族中的成员, 由于其特异性表达于肿瘤细胞而在人体正常终末组织不表达备受关注。本研究中, Survivin的阳性表达与BDNF/TrkB的表达一样, 随肿瘤浸润深度和淋巴结的转移而变化, 提示Survivin在OSCC的发展过程中发挥着作用, 这一点与以往的研究一致[12,13]。BDNF与TrkB的胞外区结合, PI3K/AKT信号通路被激活, 导致线粒体通路介导的凋亡作用被抑制, 细胞色素C的释放减少, 凋亡终末效应器Caspase- 3和Caspase- 7的活性降低[14]。而大量研究结果表明Survivin可能是通过抑制Caspase- 3和Caspase- 7这个细胞凋亡的核心环节的活性而阻断细胞的凋亡过程[15]。本研究发现, Survivin的表达与BDNF/TrkB呈正相关, 提示在OSCC中Survivin对BDNF/TrkB的表达有调节作用。因此, Survivin可能在BDNF/TrkB介导的失巢凋亡过程中发挥着促进作用, 但具体的机制尚不清楚。
Trkb的表达 篇4
白藜芦醇合酶(RS)是Res生物合成的`关键酶之一,它催化1分子4-香豆酰辅酶A和3分子丙二酰辅酶A反应合成Res.以花生中克隆的RS基因为基础,成功构建了RS基因的以Ubi为启动子的单子叶植物表达栽体pBIL-RS,为以后的基因工程遗传转化果蔗和其他单子叶植物改良其品质提供条件.同时构建了酵母表达载体pVT102U-RS,为下一步研究真核表达蛋白的生物活性提供条件,并为利用酵母生产Res提供了可能.
作 者：方珊茹 阙友雄 林剑伟 陈如凯 Fang Shanru Que Youxiong Lin Jianwei Chen Rukai 作者单位：方珊茹,Fang Shanru(福建省农业科学研究院水稻研究所,福州,350019)
阙友雄,林剑伟,陈如凯,Que Youxiong,Lin Jianwei,Chen Rukai(福建农林大学农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室,福州,350002)