饲料检测

饲料检测（共10篇）

饲料检测 篇1

“瘦肉精”是一种白色或类似白色的结晶体粉末, 无臭、味苦, 化学性质稳定, 一般烧煮加热方法不能将其破坏, 只有加热到172℃时才能够被分解。人吃了含有“瘦肉精”的肉制品后, 不仅会影响到正常的生长发育, 而且对心脏造成很大损害。急性中毒常表现为头晕、呕吐、腹痛、腹泄、肌肉震颤、心跳过速、呼吸困难和神经紊乱等症状, 严重的会危及生命。下面将介绍几种饲料中盐酸克仑特罗 (CLB) 的检测方法。

1 酶联免疫吸附法 (ELISA)

原理是抗原抗体反应。单克隆抗体既能与CLB结合, 又能与酶标记物相结合。当样品中含有盐酸克仑特罗时, 它会与酶标记物竞争性地结合单抗上的结合位点, 经过洗涤后没有与单抗结合的酶标记物则被洗去。待加入基质和发色剂后, 结合的酶标记物把无色的发色剂转化为蓝色的产物, 颜色的深浅和样品中盐酸克仑特罗的浓度有关。加入终止后, 蓝色变为黄色, 最后用酶标仪进行测定。

盐酸克仑特罗的提取, 即把粉碎后的饲料加入盐酸溶液和双蒸水均质, 再经旋流、振荡、离心后, 转移出上清液用氢氧化钠调p H值到7~9。离心, 取上清液分析测试。分别按标准稀释溶液, 摆放样品。加入标准品到指定微孔中, 再加入酶标记物, 用酶标板密封胶纸盖住酶标板, 涡旋混匀, 在室温下孵育1小时。倾倒出孔中的液体, 用缓冲剂清洗酶标板3次。加入酶标底物到微孔中, 室温暗处孵育。反应孔中加入终止液, 剧烈振荡5秒钟。用酶标仪测定其吸光度值。

2 高效液相色谱法 (HPLC) 和气相色谱-质谱法 (GC-MS)

该方法的主要原理是用加有甲醇的稀酸溶液将饲料中的盐酸克仑特罗盐酸盐溶出, 溶液被碱化, 经液相萃取和固相萃取净化后, 在高效液相色谱仪上分离测定, 或经衍生后于气相色谱-质谱仪上分离、检测。称取配合饲料5g (预混料和浓缩料则称取2g) 精确至0.0001g于100m L三角瓶中, 加入提取液 (浓度为0.5%偏磷酸:甲醇=80∶20) 50m L, 超声提取15分钟, 每隔5分钟振摇1次, 取上层液于离心机内上4000rpm离心10分钟。准确吸取上清液10.00m L于150m L分液漏斗中, 同时滴加2mol/L氢氧化钠溶液, 调p H至11~12。溶液分别用30m L、25m L乙醚萃取2次, 使醚层过无水硫酸钠干燥, 用少许乙醚淋洗分液漏斗和无水硫酸钠, 并用乙醚定容至50m L。再准确吸取25.00m L于50m L烧杯中, 低于50℃加热块或沙浴上蒸干, 残渣溶于2.00m L 0.02mol/L盐酸溶液, 取1.00m L置于预先已分别用1m L甲醇和1m L去离子水处理过的SPE小柱内, 控制其过柱速度不超过1m L/min, 再分别用1m LSPE淋洗液-1 (含2%氨水的5%甲醇水溶液) 和2- (含2%氨水的30%甲醇水溶液) 进行充分淋洗, 最后再用甲醇溶液进行洗脱, 洗脱液置于70+5℃加热块或沙浴上, 最后用氮气吹干。向吹干的样品中准确加入1.00~2.00m L 0.02mol/L盐酸, 振摇、超声, 过0.45um的滤膜, 取上清液于高效液相色谱仪进行测定。气相色谱-质谱法则于吹干的样品中加入衍生剂BSTFA 50μL, 涡旋混合后, 置70+5℃烘箱中衍生反应30分钟。用氮气吹干, 加入甲苯100μL混匀于气质联用仪进行测定。

3 液相色谱—串联质谱法

原理是饲料经盐酸-甲醇混合溶液提取、醋酸铅沉淀蛋白后用固相萃取小柱净化, 洗脱液蒸干后用甲酸溶解, 供液相色谱-串联质谱仪进行检测, 采用外标法进行定量。称取2g试样于50m L离心管中, 准确加入19m L盐酸甲醇提取液和饱和醋酸铅溶液, 充分振荡20分钟、离心10分钟。固相萃取小柱用甲醇和水活化。取上清液5m L进行过柱, 再用水和甲醇淋洗, 空气抽干2分钟, 用氨水甲醇溶液洗脱, 收集洗脱液旋转蒸发至干, 再用甲酸水溶液溶解, 过滤膜后上机测定。

“瘦肉精”是国家明令禁止在饲料和饲养过程中使用的兽药, 为此要从源头抓起, 加大饲料和养殖产品质量安全监督检测力度, 加强市场的监督抽查和监管力度。各相关部门按照职责分工, 协调配合, 形成合力, 强化对生猪养殖、收购、贩运、屠宰、集贸市场销售及餐饮消费等关键环节的监督管理, 共同做好“瘦肉精”监管工作。同时进一步加强舆论宣传, 通过各种媒介宣传“瘦肉精”对人体的危害。

饲料检测 篇2

饲料中的水分测定

1．原理：

试样在105℃±2℃烘箱内，在常压下烘干，直至恒重，逸失的重量为总水分。2．测定步骤：

洁净的称样皿，在105℃±2℃烘箱中烘1h，取出，在干燥器中冷却30min，称准至0.0002g，再烘干30 min，同样冷却，称重，直至两次的重量之差小于0.0005g为恒重。

用已恒重的称样皿称取2份平行试样，每份2-5g（含水量0.1g以上，样品厚度4mm一下）。准确至0.0002g，不盖称样皿盖，在105℃±2℃烘箱中烘3h（以温度达到105℃开始计时），取出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30min，称重。

在同样烘干1h ,冷却，称重，直至两次称重的重量差小于0.002g.烘干前的质量－烘干后的质量

水分= ———————————————— ×100

烘干前的质量

粗蛋白的测定

1.原理：

凯氏定氮法测定试样中的含氮量，即在催化剂的作用下用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵，加入强碱进行蒸馏，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出含氮量，将结果乘以换算系数6.25，算出粗蛋白的含量。2.测定步骤： ⑴.消煮：称取样品0.5g，准确放入凯氏烧瓶中，加入6.4g催化剂，15ml硫酸，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360-410℃），直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h.⑵.定容：消煮后冷却，加20ml水至凯氏烧瓶中，摇匀，待消煮试样完全冷却后转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水冲洗数次，并一起转入到容量瓶中，至刻度，摇匀，做为试样分解液。

⑶.蒸馏: ⑷.准备：将蒸馏装置准备妥当以后，先用蒸馏水洗涤，移取分解液10ml，氢氧化钠（40%）10ml，加入少量水，塞好入口玻璃塞，且在入口处加水密封，防止露气，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，在将装有20ml硼酸和2滴甲基红指示剂的锥形瓶放在冷凝管的末端。

⑸.滴定：将蒸馏后的吸收液立即用盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

（体积—空白）×浓度×0.014×6.25 粗蛋白= —————————————————— ×100 试样质量

0.014 – 与1.00ml盐酸标准溶液【c(Hcl)=1.000/ mol·L】相当的以

-1克表示的氮的质量

6.25—氮换算成蛋白质的平均系数 3.试剂配制：

1.混合催化剂：4g硫酸铜+60g无水硫酸钠 2.氢氧化钠：40g氢氧化钠+100ml水 3.硼酸： 1g硼酸+50ml水

4.混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存3个月 5.盐酸标准溶液配制： c(Hcl)/ mol·L

-盐酸（ml）

0.5 45 0.1 9 ________________________________________________________ 4.盐酸标定方法：

取在270—300℃温度下干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.015g，精密称重，加水50ml使溶解，加甲基红溴甲酚绿混合指示剂2滴，用盐酸滴定至溶液由绿色转变为灰红色，在煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液变为灰红色。

空白测定: 称蔗糖0.5g，代替试样，进行空白滴定，消耗0.1 mol·L盐酸标准溶

-1液的体积不得超过0.2ml，消耗0.02 mol·L盐酸标准溶

-1体积不得超过0.3ml.无水硫酸钠的质量

浓度= —————————————(体积-空白)×0.05299 5.蒸馏步骤检测：

精确称取硫酸铵0.2g，代替试样进行消化蒸馏，测得硫酸铵含量21.19%±0.2%，可知消煮过程和试剂配制是否正常。

饲料中纯蛋白测定

1.原理：

硫酸铜在碱性溶液中，可将蛋白质沉淀，且不溶于热水，过滤和洗涤后，可将纯蛋白质含氮物分离，再用凯氏定氮法测定沉淀中的蛋白质含量。2.试剂：

（1）硫酸铜溶液：10g硫酸铜溶于100ml水中。（2）氢氧化钠溶液：将2.5g氢氧化钠溶于100ml水中。（3）氯化钡溶液：1g氯化钡溶于100ml水中。（4）2 mol·L盐酸溶液。-13.测定步骤：

准确称取1g左右试样，置于200ml烧杯中，加50ml水，加热至沸，加入20ml硫酸铜溶液，20ml氢氧化钠溶液，用玻璃棒充分搅拌，放置1h以上，用倾斜过滤（定性滤纸），然后用60-80℃热水洗衣涤沉淀5-6次，用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤液，直至不生成白色硫酸钡沉淀为止。将沉淀和滤纸放在65℃烘箱干燥2h，然后全部转移到凯氏烧瓶中。消化后进行定氮测定。4.结果计算同粗蛋白测定一样。

快速测盐分（饲料级）

1.盐分含量测定原理：

溶液澄清，在酸性条件下，加入过量硝酸银溶液使样品溶液中的氯化物形成氯化银沉淀，除去沉淀后，用硫氰酸铵回滴过量硝酸银，根据消耗硫酸氰铵的量，计算出氯化物的含量。2.试剂配制：

Ango3：称取硝酸银3.4g，用少量水溶解，定容至1L，储于棕色瓶中

3.标定：

称取在550℃下恒温1h的基准氯化钠0.02g，加50ml水，加5%铬酸钾指示剂1ml，用待标定的硝酸银标准溶液滴定至砖红色为终点。

20×0.02 C = ——————

体积

4.测定步骤：

称取样品2g左右，加200ml蒸馏水搅拌，静止20min，吸取上清液20ml放入锥形瓶，加50ml蒸馏水，加1ml铬酸钾（10%），用Ango3滴定成桔红色。

浓度×体积×200×0.05845 CL = ————————————— ×100

样品质量×20

测食盐中CL的含量

称0.02g样品，放入锥形瓶中，加50ml蒸馏水，加1ml铬酸钾（10%），用Ango3滴定成桔红色。

浓度×体积×0.05845 CL = ————————————— ×100

样品质量

粗灰分、钙、磷连续测定（饲料级）

1.原理：

试样在550℃灼烧后所得残渣，用质量百分率表示。残渣只要是氧化物、盐类等矿物质，也包括混入饲料中的沙石、土等，故称粗灰分。2.步骤：

将干净的坩埚方入高温炉，在550±20℃下灼烧30min。取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器冷却30min，称其重量，在已恒重的坩埚中称取2-5g试料，准确至0.0002g。在电炉上小心碳化至无烟，在放入高温炉，于550±20℃下灼烧3h。取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器中冷却30min，称取重量。

灰化后的质量

粗灰分= ————————————×100% 灰化前的质量

钙：

在盛有灰分的坩埚中加入10ml（1：3）盐酸,加3滴硝酸，小心煮沸，随即滤入100ml的容量瓶中，用蒸馏水洗涤坩埚和漏斗上的滤纸，定容至100ml，摇匀，取10ml分解液放入锥形瓶，加入50ml水，1%煮沸冷却后的淀粉溶液10ml,乙二胺1ml，三乙醇胺2 ml，孔雀石绿1滴，20%氢氧化钠10 ml，盐酸羟胺少许，钙指示剂少许，然后用EDTA滴定至蓝色。EDTA体积×浓度

Ca= —————————— ×100 样品质量 试剂配制：

盐酸：1：3——1ml盐酸溶于3ml蒸馏水中

氢氧化钠：20% ——20g的氢氧化钠溶于100ml的蒸馏水中 三乙醇胺： 1：1——1ml三乙醇胺溶于1ml蒸馏水中 乙二胺： 1：1——1ml乙二胺溶于1ml蒸馏水中

孔雀石绿：0.001g孔雀石绿溶于1ml蒸馏水中，既0.1g孔雀石绿溶于100g蒸馏水中

钙黄指示剂：0.1g钙黄绿素，0.13g甲基百里香酚蓝，5g氯化钾研细混匀，储于磨砂口瓶中备用。（钙红指示剂：1g钙—羟酸指示剂与99g氯化钠）

EDTA：0.02 mol·L称取8g乙二胺四乙酸二钠，放入烧杯中，加200ml

-1蒸馏水，加热溶解，冷却后转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀稀释至刻度。标定：钙标准溶液0.001g mol·L

-1准确称取在105—110℃下烘干3h，干燥至恒重的基准碳酸钙2.497g，溶于40ml（1：3）盐酸中（沿烧杯壁慢慢加入），加热除去Co2,冷却，转移到1000ml容量瓶中，稀释到刻度，标定方法同测定方法同样。

0.01×20（分解液吸取值）EDTA浓度= —————————————— EDTA的体积

磷：

取上述分解液1ml，放入50ml的容量瓶中，加10ml钒钼酸铵显色剂，定容至50ml，摇匀，放至20分钟。用10毫米比色池，在420nm波长下，用分光光度计测定试样分解液的吸光度

波长所对应得含磷量

磷含量= —————————————— 质量×100×分解液移取量 试剂配制：

钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g，先加入量水，使其差不多溶解，加硝酸250ml，另取钼酸铵25g加蒸馏水400ml溶解，冷却后将此溶液倒入上述溶液中，加水定容至1000ml。避光保存，入生成沉淀则不能使用。

磷标准溶液：将磷酸二氢钾在105℃烘箱中干燥1小时，在干燥器中冷却后称取0.2195g，定量转入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用水稀释至刻度，摇匀，即50微克/毫升的磷标准溶液。

标准曲线绘制：

准确吸取0ml.1ml.2ml.5ml.10ml.15ml于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色剂10ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静止10分钟以上，以0溶液为参比，用10毫米比色池，在420nm波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线图。

饲料中粗脂肪的测定

1.原理：

用装有乙醚的索氏脂肪提取器，提取试样中的脂肪，称脂肪包的重量，提取的脂肪中除脂肪外还有有机酸，磷脂，脂溶性维生素，叶绿素等，因而测定结果称为粗脂肪或乙醚提取物。2.测定步骤：

称试样1－5g（准确至0.0002g），于滤纸筒中，或用滤纸包好，放入105℃烘箱中，烘干120min，滤纸筒应高于提取器虹吸管的高度，滤纸包长度应以可全部浸泡于乙醚中为准，将滤纸筒或包放入抽提管，在抽提瓶中加无水乙醚60-100ml，在60-75℃的水浴上加热，使乙醚回流，控制乙醚回流次数约每小时10次，共回流约50次（油脂高的约70次）或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点。（约3个小时）取出试样，仍用原提取器回收乙醚，直至抽提瓶全部回收完，取下抽提瓶，将回收的乙醚倒入乙醚瓶中保存。

取出滤纸包，仍放回原称样皿，开盖在105℃±2℃烘箱中烘干2h，（刚放烘箱时将烘箱门打开，使滤纸包中的乙醚挥发完以后在合上门，否者会有危险），取出，放入干燥器中冷却，称重，在烘干30min，冷却称重，直至两次误差小于0.001g为止。

烘干后试样的重量－提取脂肪后试样的重量

粗脂肪= —————————————————————×100 烘干前试样的重量

大豆脲酶活性的测定（滴定法）

1.选用范围：

本法适用于大豆制品品及其副产品中脲酶活性的测定，可确认大豆的温热处理程度和抗胰蛋白酶等抗营养因子的水平。2.定义：

尿素酶活性指：在30±0.5℃和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。3.原理：

将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min，尿酶催化尿素水解产生氨的反应。用过里盐酸中和产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。4.试剂：

① 尿素缓冲溶液：准确称取3.4g经110℃烘干的磷酸二氢钾和4.45g磷酸氢二钠，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，再将30g尿素溶解在此缓冲液中，可保持一个月。

② 0.1 mol·L-1盐酸溶液：用量筒量取8.4ml浓盐酸（GB 622），注入1000ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。

③ 0.1mol·L-1氢氧化钠（GB 629）标准溶液 ：按GB 601的规定配制。（5ml NaOH饱和溶液定容至1L）

5.测定步骤：

准确称取已粉碎的试样约0.2g（精确至0.0001g），置于刻管中（如活性很高，只称0.05g）。加入10ml尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于（30±0.5℃）恒温水浴中，准确计时保持30min。取下后立即加入10ml 0.1mol·L-1盐酸溶液,并迅速冷却至20℃，将试管中内容物无损地移入50ml烧杯中，用5ml蒸馏水冲洗试管2次，立即用0.1mol·L-1的氢氧化钠标准溶液滴定至pH 4.7,记录氢氧化钠标准溶液的消耗量。同时做空白试验。

尿素—苯酚磺试剂法（脲酶活性）

1.原理：

在尿素—苯酚磺指示剂存在的条件下，以尿素转变成氨的多少及显色度检测大豆饼中的脲酶的活性。

2.试剂与溶液：

⑴ 0.2mol·L氢氧化钠溶液：量取澄清的饱和氢氧化钠溶液11.2ml，置-1于1000ml容量瓶中，用新沸过的冷水稀释至刻度，混匀即可。

⑵ 0.1 mol·L硫酸溶液：量取5.6ml浓硫酸，注入已加了少量蒸馏水的-11000ml容量瓶中，冷却稀释至刻度。

⑶ 尿素—苯酚磺指示剂：取1.2g苯酚红溶于30ml 0.2 mol·L氢氧化钠

-1溶液中，用蒸馏水稀释至300ml，加入90g尿素，溶解后再用水稀释至2000ml，加70ml 0.1 mol·L硫酸溶液，稀释至3000ml。配好的溶液应呈琥珀色，-1若溶液转变呈桔红色时，用再适量滴加0.1 mol·L硫酸溶液，调成琥珀色。

-1试剂最好现配现用。

3.测定步骤：

取粉碎的大豆粕少许，在表面皿上均匀的铺成薄层，用吸管吸取尿素—苯酚磺指示剂，浸湿表面皿上平铺的大豆粕，放置5min，观察显色结果。

4.结果判定：

⑴无任何红点出现时，再放置25min，若仍无红点出现时，说明被检大豆粕没有脲酶活性，是过熟的大豆粕。

⑵有少数红点，或表面有25%-50%红点出现，表示含有微量脲酶，大豆粕可以使用。

⑶若大豆粕表面75%-100%被红点覆盖，说明脲酶活性很强，粕过生，不能直接使用。

挥发性盐基氮（VBN）测定方法

1、原理：

利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来，用硼酸吸收，再用标准酸滴定，计算出含氮量。

2、试剂： 1、0.lmol／L盐酸标准溶液（无水碳酸钠标定）：吸取分析纯盐酸8.3mL，用蒸馏水定容至1000mL。2、0.01mol/L盐酸标准溶液：用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。3、2%硼酸溶液：分析纯硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。

4、混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期三个月以内。5、1%氧化镁溶液：化学纯氧化镁1.0g溶于100mL蒸馏水振接成混悬液。

3、测定：

1、称取1～5g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中，加蒸馏水100mL，振荡摇匀30min后静置，上清液为样液。

2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。

3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，否则补加硫酸。

4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中，再加入10mL 1%的氧化镁溶液，用少量蒸馏水冲洗进样入口，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏10min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。

5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时进行试剂空白测定。

4、测定结果计算：

（盐酸体积－空白）×浓度×14

挥发性盐基氮的含量＝——————————————————×100

（质量×分解液体液）÷分解液总体积

2、重复性：

每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。允许相对偏差为5%

油脂酸价测定

取干燥的锥形瓶（带手套取）。称重记录，加入测样2-3g，称重记录，取烧杯加入50ml醇醚，5滴酚酞指示剂，Naoh滴定空白体积变成粉紫色，把滴定的醇醚倒入盛有测样的锥形瓶中，摇匀，再滴5滴酚酞指示剂，用Naoh滴定成粉红色，半分钟之内不变色。

计算公式：

浓度×（体积—空白）×56.11 酸价= ————————————————

样品质量 试剂配制：Naoh标准溶液0.05mol/L 配制方法1：取2g氢氧化钠放入1000ml容量瓶中，用新沸过的冷水定容至1000ml，摇匀。

方法2：取饱和溶液2.8ml，用新沸过的冷水定容至1000ml 标定：

取在105-110℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.2g，精密称重，加新沸过的冷水50ml，摇匀，使其溶解，加酚酞指示剂2滴，用本液滴定至粉红色。

邻苯二甲酸氢钾质量

浓度 =-----------------------Naoh体积×0.2042 中性醇醚：2：1（2ml乙醇+1ml乙醚）1%酚酞乙醇指示剂：1g酚酞+100ml乙醇

油脂TBA值的测定方法

1.原理：

油脂受到光、热、空气中氧等的作用，发生酸败。分解出醛、酮之类的化合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在532nm波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。2.操作步骤：

1、标准曲线的绘制

准确吸取上述标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于纳氏比色管中，加水至总体积为5ml，加入5ml TBA溶液，然后按样品测定步骤进行，测得吸光度并绘制标准曲线。

2、样品制备与检测

准确称取均匀的豆油15g，置于100ml具塞三角瓶内，准确加入25ml三氯乙酸混合液，振摇半小时（保持油脂融溶状态），用四层滤纸过滤，除去油脂。

准确移取上述滤液10ml置于25ml比色管内，准确加入TBA溶液10ml，混匀，加塞，置于90℃水浴内保温40min，取出，冷却1h，移入小试管内，离心5min，上清液倾入25ml纳氏比色管中，加入5ml氯仿，摇匀，静置，分层，吸出上清液于532nm波长处，用1-5cm比色皿比色（同时作空白试验）。3.试剂配制： 1、0.02mol/L TBA水溶液：称取TBA 0.288g加热溶于水中，并稀释至100ml；

2、三氯乙酸混合液：称取三氯乙酸7.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀释至100ml；

3、氯仿（分析纯）；

4、丙二醛标准溶液：称取0.315g 1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000ml，此溶液每ml相当于丙二醛100μg，置于冰箱内保存。准确吸取10ml，稀释至100ml，此溶液每ml相当于丙二醛10μg，备用。

丙二醛浓度×混合液体积×(滤液体积＋TBA水溶液体积)丙二醛 = ————————————————————————— 油脂质量×TBA水溶液体积

油脂过氧化值测定方法

1.原理: 油脂氧化过程中产生过氧化物，与碘化钾作用，生成游离碘，以硫代硫酸钠溶液滴定，计算过氧化值。

2.试剂和溶液:

1、饱和碘化钾溶液：称取14g碘化钾，加10ml水溶解，必要时微热使其溶解，冷却后贮于棕色瓶中；

2、三氯甲烷–冰乙酸混合液：量取40ml三氯甲烷，加60ml冰乙酸，混匀； 3、1%淀粉试剂：将淀粉0.5g用少许冷水调成糊状，倒入50ml沸水中调匀，煮沸，临时用现配； 4、0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液；（26g硫代硫酸钠/16无水硫代硫酸钠溶于1000ml水中）0.1 mol·L

-1配制：称取2.6g硫代硫酸钠/1.6无水硫代硫酸钠于1000ml容量瓶中，用适量新沸（煮沸10分钟）过的水溶解并稀释至1000ml，摇匀，放置2周以后备用。

硫代硫酸钠标定方法：

取适量基准重铬酸钾在120℃烘箱中烘至恒重(3h)，然后称取0.15g，精确至0.0001g，置于碘量瓶中，溶于25ml煮沸并冷却的蒸馏水中，加2g碘化钾及20%硫酸溶液20ml，摇匀，于暗处放置10min。加150ml水，用配制好的硫代硫酸钠溶液滴定。近终点时（即呈黄绿色或淡黄色时），加3ml淀粉指示剂（5gL-1），继续滴定至溶液蓝色消失为终点，同时做空白。

重铬酸钾的质量

硫代硫酸钠浓度= ————————————————（体积—空白）×0.04903 0.04903—与1ml硫代硫酸钠标准溶液以克表示的重铬酸钾的质量 4.测定方法: 称取2~3g油样（称准至0.0002g）于碘量瓶中（对于固态样品应先用索氏提取器将样品中油脂提取出来），加30ml三氯甲烷–冰乙酸混合液，使样品完全溶解。加入1ml饱和碘化钾溶液，紧密塞好瓶盖，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置3min，取出加100ml水，摇匀，立即以淀粉试液为指示剂，用0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至蓝色消失为终点。同时做空白试验。

0.1269×浓度（体积－空白）

过氧化值（%）= ×100 质量

0.1269——换算系数；

油脂皂化值的测定方法

1.原理：

油脂与氢氧化钾乙醇溶液共热时，发生皂化反应，剩余的碱可用标准酸液进行滴定，从而可计算出中和油脂所需的氢氧化钾毫克数。2.试剂和溶液 1、0.5mol/L的盐酸标准溶液； 2、1%酚酞指示剂； 3、0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液：称取30g化学纯氢氧化钾，溶于95%乙醇中使成1L，摇匀，静置24h，倾出上层清液，贮于装有苏打石灰球管的玻璃瓶中。3.操作步骤

称取适量样品（纯油样2g；固态样品10g并用索氏提取法提取出样品中的粗脂肪，蒸干乙醚溶剂），准确至0.0002g，准确加入0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液25ml，在沸水浴上加热回流30min，不时摇动。取下冷凝管，冷却后加入数滴酚酞指示剂，用0.5mol/L的盐酸标准溶液滴定至红色消失。同时做空白试验。

56.1×浓度×(空白－体积)皂化值(mg KOH/g)=------------------------------质量 备注

饲料检测 篇3

关键词：氯霉素检测，鱼配合饲料，检测方法研究，液相色谱串联质谱法

氯霉素属广谱抗生素，它通过与核糖体的50S亚单位结合，而抑制细菌蛋白质的合成。对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较好的抑制作用，对立克次体、衣原体也有抑制作用。因其效高价廉，曾在水产、畜牧业中广为应用。但氯霉素有较强的毒副作用和毒性，长期应用可导致再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。如果氯霉素在食用动物中残留，可通过食物链传给人类，对人类的健康造成危害。目前检测饲料中氯霉素的方法有气相色谱-质谱法[1-3]、液相色谱-质谱法[4-6]和酶联免疫法[7-8]。本实验参考GB/T 20756-2006等方法[5-6，9-10]研究出一种前处理步骤相对简单的液相-质谱法用于检测鱼配合饲料，降低了不确定度，并且缩短了检测时间，提高了检测效率。

1材料与方法

1.1主要试剂

氯霉素标准品均购自Dr.Ehrenstorfer Gmb公司，纯度≥98.5% Lot No.90424，氘代氯霉素（chloramphenicol-D5）购自Dr.Ehrenstorfer GmbH Lot No.30417AC 100 μg/mL。乙酸乙酯，Fisher ，色谱纯；正己烷，沃凯，色谱纯；实验用水为Mili-Q制得的电导率18.2Ω的超纯水。

1.2主要仪器

IKA分析研磨机；湘仪离心机TDAA-WS；0.22 μm微孔滤膜；EYELA旋转蒸发仪；日立高速冷冻离心机 HITACHI CF16RXⅡ；HPLC system：Agilent 1200 series，Agilent 6410 LC/MS/MS Agilent6410a 串联四级杆质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）；ZORBAX SB-C18，150 mm×2.1 mm（i.d.），5 μm Agilent。

1.3试验部分

1.3.1标准溶液配制[9]准确称取10.00 g氯霉素，用乙腈溶解并定容至100 mL容量瓶，得到100 μg/mL氯霉素标准储备液；准确吸取 1 mL氯霉素标准储备液乙腈定容至100 mL，得到1 μg/mL氯霉素标准中间液；准确吸取1 mL氯霉素标准中间液，纯水定容50 mL，得到20 ng/mL氯霉素标准工作液。

准确吸取100 μg/mL氘代氯霉素内标标准储备液 100 μL乙腈定容至10 mL，得到1 μg/mL氘代氯霉素内标标准中间液 ；准确吸取1 mL氘代氯霉素内标标准中间液纯水定容50 mL，得到20 ng/mL氘代氯霉素标准工作液。

1.3.2样品前处理鱼配合饲料样品用IKA分析研磨机磨成细粉，准确称取5.00 g±0.001 g于50 mL具塞离心管中，加入20 ng/mL氘代氯霉素250 μL，加入15 mL乙酸乙酯，混匀，振摇15 min，4 000r/min离心8 min，取出上清，再用15 mL乙酸乙酯重新提取一次，合并上清，45 ℃旋转蒸发至干，5 mL水溶解，10 mL正己烷除脂两次，静止分层，取下层水相12 000 r/min 4 ℃冷冻离心后过0.22 μm水相有机相串联滤膜，得到样品用于液相串联质谱仪器测定。

1.3.3液质联用仪分析条件[10]

1.3.3.1色谱条件 色谱柱ZORBAX SB-C18，150 mm×2.1 mm（i.d.），5 μm Agilent，进样量为20 μL；柱温30 ℃；流动相为A去离子水、B乙腈；梯度洗脱条件见表1。

1.3.3.2质谱条件采用电喷雾离子源（ESI），负离子扫描，Capillary：4 000 V，多反应监测（MRM）方式检测，干燥气N2，干燥气温度350 ℃，雾化气压力35psi，优化质谱条件见表2，氯霉素及氘代氯霉素的MRM色谱图和其定性定量离子质谱图见图1、图2。

1.4线性范围、检出限和定量限

配制9个不同质量浓度的标准溶液，溶液中氯霉素为0.0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL，氘代氯霉素的质量浓度为1.0 ng/mL，测定峰面积，以质量浓度为横坐标，峰面积的比值（氯霉素峰面积/氘代氯霉素-D5面积）为纵坐标，绘制标准曲线。在空白配合饲料中添加氯霉素标准品以信噪比（S/N）≥3时的含量定为方法的检出限（LOD）；以信噪比（S/N）≥10时的含量定为方法的检量限（LOQ）。

1.5回收率的测定

选取阴性鱼配合饲料样品，添加氯霉素标准品和内标，氯霉素标准品添加水平为0.1 μg/kg、0.3 μg/kg、1.0 μg/kg、5.0 μg/kg，氘代氯霉素 1.0 μg/kg，每个添加水平9次平行。

2试验结果

2.1线性范围、检出限和定量限

针对不同的添加浓度选择相应的浓度拟合成两条曲线，进行数据分析。针对添加浓度为0.1 μg/kg、0.3 μg/kg、1.0 μg/kg，选择CAP浓度为0.0 ng/mL、0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL拟合成一条标准曲线，曲线方程y=0.841 966x+0.011 336，R2=0.999 807 50。针对添加浓度为5.0 μg/kg，选择CAP浓度为0.0 ng/mL、0.1 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL拟合成一条标准曲线，曲线方程y=0.902 543 x-0.007 240 3，R2=0.999 840 61。数据显示CAP在0.1～20.0 ng/mL范围内线性关系良好，R2>0.999。根据添加量为0.5 ng/mL的9个样品152定量离子的最低信噪比和计算公式3C/（S/N），计算理论方法检出限（LOD）为0.002 μg/kg，理论方法定量限为（LOQ）为0.006 μg/kg。

2.2回收率和精密度

针对不同添加量，其回收率和RSD见表3。

所有数据都满足GB/T 27404-2008[11]以及GB/T 21108-2007[4]对回收率和精密度的所有要求。

2.3实际样品的检测

利用该方法对12个鱼配合饲料样品进行检测，均为未检出。

3讨论

3.1前处理方法的优化

GB/T 21108-2007方法中包括提取—液-液分配净化—浓缩—溶解—SPE柱净化—浓缩—溶解，步骤繁琐，导致回收率偏低，不确定度增加，且效率降低。而本实验方法只包括提取—浓缩—溶解—除脂四个简单步骤，整个过程几乎无损耗，大大提高了回收率，降低了不确定度，并且缩短了检测时间，提高了检测效率。

3.2杂质峰的去除及除脂方法优化

本实验还尝试将乙酸乙酯提取后的上清液直接进行液相串联质谱检测，检测结果有杂峰干扰，于是浓缩后加入10 mL正己烷除脂，结果证明杂峰已去除，但是样品本身还残留有鱼饲料的黄色，正己烷再次除脂一次，样品已经变成清亮白色，液相串联质谱检测得到单一目的峰，峰形尖锐，无杂峰或拖尾现象。见图1。

3.3方法检出限和定量限

虽然根据计算得到方法检出限（LOD）为0.002 μg/kg，相比于GB/T 201108-2007方法的最低检测浓度5 μg/kg缩小了2 500倍，但它只是理论值，若将0.002 μg/kg添加到饲料中，采用这种方法检测在回收率和精密度方面是否符合要求将有待于进一步的实验进行验证。但是本实验的最低添加量0.1 μg/kg在回收率和精密度方面都符合国家标准要求，并且相比于GB/T 201108-2007方法的最低检测浓度缩小了50倍。

4结语

本文研究了一种相对于GB/T 21108-2007前处理步骤简单的方法测定鱼配合饲料，采用内标法定量，省略了液-液分配净化—浓缩—溶解—SPE柱净化步骤，相应地降低了不确定度，同时提高了检测效率。

参考文献：

[1] DB 34/T 1361—2011，饲料中氯霉素的测定—气象色谱质谱法[S]. 安徽省质量技术监督局，2011

[2] 刘红云，蔡海莹.饲料中氯霉素气相色谱-质谱检测方法的研究[J].兽药与饲料添加剂，2008，13（6）：25-27

[3] 王丙涛.气质联用检测饲料中氯霉素的方法研究[J].现代畜牧兽医.2007（5）：62-64

[4] GB/T 21108-2007，饲料中氯霉素的测定 高效液相色谱串联质谱法[S].北京：中国标准出版社，2007

[5] 吕飞，周宇，余优军，等.LC-MS/MS测定饲料中的氯霉素残留量两种不同前处理方法的比较[J].粮食与饲料工业，2012（8）：61-64

[6] 魏云计，冯民.高效液相色谱-质谱法测定配合饲料中氯霉素残留量的研究[J].饲料博览，2013（4）：5-8

[7] 贾涛.酶联免疫法检测饲料中氯霉素的探讨[J].饲料研究，2009（9）：39-40

[8] 贾涛.酶联免疫法检测饲料中氯霉素的方法研究[J].饲料与畜牧，2013（8）：43-46

[9] GB/T 20756-2006，可食性动物肌肉、肝脏、和水产品中氯霉素、甲风砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法[S]. 北京：中国标准出版社，2007

[10] 薄尔琳，郑怀东，刘学光.同位素稀释液相色谱-串联质谱法快速测定海参中氯霉素[J].中国渔业质量与标准，2013，3（4）：36-41

[11] GB/T 27404-2008，实验室质量控制规范 食品理化检测[S]. 北京：中国标准出版社，2008

水貂新鲜饲料的常规检测与分析 篇4

1 材料

1.1 样品

山东某饲料公司生产的冬毛期水貂新鲜饲料, 随机取样。

1.2 日粮组成

海杂鱼、动物副产品、磷酸氢钙、复合维生素、复合微量元素、食盐、蛋氨酸、益生素、膨化玉米等, 由山东某饲料公司提供。

2 方法

水分测定, 采用GB/T 6435—06;粗蛋白测定, 采用GB 6432—94;粗脂肪测定, 采用GB/T 6433—06;粗纤维测定, 采用GB/T 6434—06;总磷测定, 采用GB 6437—02;钙测定, 采用GB 6436—02;粗灰分测定, 采用GB/T 6438—07;食盐测定, 采用GB/T 6439—07;沙门菌测定, 采用GB 13091—02;大肠菌群测定, 采用GB 18869—02;细菌总数测定, 采用GB/T 13093—06。

3 结果 (见表1)

注:﹡标准摘自水貂配合饲料行业标准 (SB/T 10077—92) 和食品、饲料卫生标准, 其中百分含量皆按占干物质含量进行计算。

由表1可知:冬毛期水貂所用饲料的样品中各成分的检测结果及参照标准, 其中粗脂肪含量 (18.04%) 低于参照标准 (≥19.7%) , 其他各项检测指标均符合参照标准。

4 分析与讨论

4.1 检测的结果

表1中除粗脂肪含量偏低外, 其他指标均达到了参照标准。粗脂肪含量偏低说明饲料组成中脂肪原料的添加量不足。一定要确保冬毛期水貂日粮中脂肪的供应量, 因为冬毛期是水貂毛皮快速生长的时期, 水貂对脂肪的需求量相对较高, 饲料中的脂肪起到沉淀体脂肪的作用, 脂肪中的脂肪酸对增强毛绒灵活性和光泽度也有很大的作用[2]。因此, 建议该公司应增加饲料中脂肪的含量。

4.2 新鲜饲料营养、质量与水貂生产的关系

水貂对动物性饲料消化能力强, 它的消化腺能分泌大量的蛋白酶和脂肪酶, 且用新鲜而健康的动物肉饲喂水貂, 消化率可达87%～92%。而且与干饲料相比较, 新鲜饲料在日粮的可消化性上更适合水貂的消化特点及生活习性。表1中各项检测指标均应符合参照标准, 这样才能满足水貂正常的日粮需要。

目前, 我国尚未制订关于水貂新鲜饲料的营养标准, 所以水分含量皆根据饲养经验进行配制。新鲜饲料中水分含量不宜过高, 否则会影响水貂的进食量。蛋白质和脂肪是水貂新鲜饲料中的主要营养物质, 缺乏将会影响水貂生长发育、繁殖甚至导致发病。蛋白质的营养作用直接影响种貂维持期、母貂繁殖期哺乳功能、仔貂及幼貂的生长速度以及貂皮质量。极低的蛋白浓度可能阻止毛囊的再生, 而毛囊的再生直接影响冬季毛皮绒毛密度。必须要注意水貂的新鲜饲料中脂肪的新鲜程度, 氧化酸败的脂肪对水貂危害极大[3]。大量利用脂肪氧化严重的饲料会引起水貂黄脂肪症, 毛皮质量明显降低。水貂对纤维素的消化能力很差, 日粮干物质中若含有1%的纤维素, 对胃肠道的蠕动、食物的消化和幼貂的生长都有良好的促进作用。可是纤维素增加到3%时, 就会引起水貂消化不良。钙、磷是水貂生长发育过程中非常重要的矿物质元素, 其含量在饲料中不宜过低。饲料中食盐添加过多会影响水貂生长, 严重会导致死亡[4]。在腐败变质或被污染的饲料中含有沙门菌, 沙门菌进入水貂体内后, 在肠道中大量繁殖, 引起急性感染[4]。细菌总数和大肠菌群超标的新鲜饲料也不能给水貂食用, 否则会造成水貂患细菌性疾病。总之, 只有新鲜、卫生、营养均衡的饲料才能确保水貂的生产效率。

4.3 新鲜饲料的质量检验与水貂养殖效益的关系

人工养殖水貂时其效益除了与选用优良品种有关外, 监控饲料的营养和质量也极为重要。饲料的营养和质量直接影响水貂产品 (毛皮) 的质量, 从而影响皮张质量, 决定养殖者的经济效益。曾有报道, 我国生产的毛皮动物皮张在尺码上与国外的相比一般都小2～3个等级, 皮形也不是很好。由于饲料配制的不科学, 每年我国毛皮动物养殖户的损失大约在2亿元人民币[5]。以海杂鱼和动物副产品为主的新鲜饲料的品质及营养成分存在很多不稳定因素, 在饲料生产中, 对动物性饲料要进行严格的卫生检查, 被污染、腐败变质的饲料及毒鱼不能用于饲喂水貂, 对不熟悉的鱼类品种, 应当进行安全饲喂试验后再饲喂。对饲料的存放和储存时间也应当加强管理。

摘要：为了对水貂新鲜饲料的质量检测提供简便实用的方法, 随机抽取山东某饲料公司生产的冬毛期水貂新鲜饲料进行检测, 并采用现行的国家标准检测方法对饲料中的营养成分含量和微生物成分含量进行检测分析。结果表明:饲料中粗脂肪含量低于参照标准, 其他检测项目均符合标准要求。

关键词：水貂,新鲜饲料,营养成分,微生物成分

参考文献

[1]张志明.从中国与丹麦、美国水貂养殖现状比较看中国水貂产业化发展方向[J].毛皮信息, 2005 (20) :20-23.

[2]张海华, 刘佰阳, 王凯英.狐、貉、貂冬毛期的饲养管理要点[J].特种经济动植物, 2007 (10) :2-3.

[3]黄永凯.动物性蛋白质在貂狐饲料中的合理选择和使用[J].农村养殖技术, 2005 (3) :29.

[4]马玉胜.水貂几种常见的中毒症状及防治措施[J].今日畜牧兽医, 2008 (7) :57.

饲料检测 篇5

兽药饲料（动物产品）质量检验检测中心

目标管理责任书

为完成县委、县政府、上级业务部门和局党组交给我单位的各项任务，顺利推动我单位的各项工作的开展，使全县兽药饲料质量检验监测有新突破，保障全县人民群众的身体健康，从源头上把住了畜产品质量安全关。我单位特制订以下目标管理。

正阳县兽药饲料质量检验监测中心2012年工作目标是：

一、业务工作（70分）

1、饲料生产企业监管工作（20分）

按要求做好饲料生产企业监管工作，每季度不少于1次。完成上级业务部门下达的抽检任务，对饲料生产企业做好以下监管工作：

1.审查企业的合格证、安全卫生合格证、生产许可证号或进口登记许可证。

2.检查企业是否有无“三无”产品、有无国家明令停用、禁用和淘汰的以及未经审定公布的添加物。

3.查看企业厂区环境、库房清洁程度和码放是否整齐、标识是否清晰、化验室是否设有仪器室、操作室、留样室（区），检测仪器是否有有效的计量检定证书等规定。

4.要求企业原料和成品检验记录、原料来源/使用登记记录、生产记录、销售记录、仪器使用记录、留样观察记录、防止交叉污染的程序和记录、产品销售记录等必须记录完整；原料和产品有标签以及标签和包装必须符合规定等。

5.要求检化验人员、中央控制室操作工及其他特有工种（维修工、电工、司炉工等）须持证上岗。

2、饲料经营企业管理工作（10分）

加强对全县饲料经营企业经营条件审查，规范全县饲料经营行为和秩序，普遍建立台帐，对饲料经营企业进行监管每月不少于1次，集中打假每年不少于2次，完成上级业务部门下达的抽检任务。全县配合饲料合格率达到95%以上，动物源性饲料合格率达到90%以上。对饲料经营企业管理工作如下：

1．检查饲料经营企业是否符合《饲料和饲料添加剂管理条例》对饲料经营企业的基本规定，即是否有与经营饲料、饲料添加剂相适应的仓储设施；是否具备饲料、饲料添加剂使用、贮存、分装等知识的技术人员；是否有必要的产品质量管理制度等。

2.登记经营门（店）所销售的主要饲料和饲料添加剂产品，生产企业、证号、生产日期等情况。

3.查看经营门（店）经营产品的购进记录和产品的销售记录，销售的产品标签和包装是否规范，产品是否超过保质期等情况。

3、“瘦肉精”等违禁药品监管工作（20分）

按照分级管理的原则加大对养殖环节的监管力度。全年检测尿样不少于5000头份，行政村、规模场覆盖率达到100%，“瘦肉精”阳性检出率控制在1%以下，确保不发生重大畜产品质量安全事件。具体对“瘦肉精”等违禁药品监管工作措施如下：

1．重点加强对辖区规模养殖场的监管，督促养殖场做好兽药、饲料等投入品使用记录，并作出不使用“瘦肉精”等违禁药品饲喂生猪的书面承诺。

2．建立生猪信息制度，规范生猪耳标管理工作，做到一猪一标，可追溯、可查证；

3．加强对辖区内生猪饲养过程中的“瘦肉精”日常抽查监管，重点对规模养殖场开展随机抽样检测；

4．认真查找监管薄弱环节，堵塞漏洞，严密防范； 5．建立最严格的产地准出和准入制度，实行“瘦肉精”检验和检疫同步。

6．加强对辖区内饲料、饲料添加剂及兽药生产经营企业的监管，定期组织开展拉网式的全面检查，严厉查处和打击违法生产、销售含“瘦肉精”的饲料、饲料添加剂及兽药的行为。7．对 “瘦肉精” 检测阳性的生猪，要及时进行扑杀、深埋等无害化处理，并将情况通报县畜牧执法大队。畜牧执法大队接到报告后，要立即追溯生猪源头，发现阳性生猪产地为本地的，要立即进行调查处理，构成刑事犯罪的，要及时移交公安部门立案查处；发现阳性生猪产地跨县的，要负责及时通报产地的动物卫生监督部门，并逐级上报至省动物防疫监督所。

8．通过宣传车宣传“瘦肉精”的相关法律法规和危害并宣传到生猪养殖场（户）、饲料兽药经营户、生猪调运经纪人，举办形式多样的专题培训，多渠道、多角度、多层次宣传动物产品安全的重要性和必要性，提高群众的守法意识，引导群众积极揭发、检举制售和使用瘦肉精的违法行为，形成全社会参与和群防群控的良好氛围。

4、蛋白饲料原料监管工作（10分）

严堵三聚氰胺通过蛋白饲料原料流入饲料生产经营环节，消除饲料产品质量安全隐患，提高饲料质量安全。

5、信息上报工作（10分）

每月上报一篇工作信息；每季度被省或市畜牧工作简报采用的稿件1篇；全年被市以上新闻单位或畜牧行业内部刊物采用稿件不少于4篇。

二、党的建设、平安建设、计划生育工作。（10分）

1、党的建设。充分发挥党支部的战斗堡垒作用和党员的先锋模范作用，增强班子的凝聚力和创造力，为单位各项工作开展，提供有力的组织保证；认真落实党风廉政建设责任制，做到勤政廉政，确保单位无违纪事件发生，树立畜牧行业良好的形象。（4分）

2、平安建设。增强干部职工的平安创建意识、安全生产意识，全面加强社会治安防范体系建设力争全年无安全事故、治安案件、刑事案件、上访事件发生，杜绝因工作失误引发各种不稳定因素。（3分）

3、计划生育。单位已婚龄妇女管理率达到98%以上，康检对象参检率达到98%以上，已婚育龄妇女避孕、节育措施落实率在96%以上，政策外生育率为0。（3分）

三、帮助指导中心站工作。（10）

按照局里分工，切实负起责任，帮助中心站完成各项任务。

四、其它工作。（10分）

授书单位：正阳县畜牧局 负责人：

受书单位：正阳县兽药饲料

质量检验监测中心 负责人：

饲料检测 篇6

关键词：黄曲霉毒素,饲料,危害,检测方法

黄曲霉毒素是一种毒性非常强的物质, 它能够破坏人及动物的肝脏组织, 严重时可导致肝癌甚至死亡。黄曲霉毒素主要是由黄曲霉、寄生曲霉产生的次生代谢产物, 是目前发现的毒性、致癌性较强的天然有毒物。随着人们生活水平的提高, 黄曲霉毒素的危害也逐渐引起老百姓的关注。专家、学者对黄曲霉毒素的研究也越来越深入, 本文从黄曲霉毒素的来源、化学性质、对畜禽的危害以及检测方法四方面进行了阐述。

1 黄曲霉毒素的主要来源

黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉等霉菌产生的代谢产物。如果粮食未能及时晒干或存储不当, 则较易被黄曲霉污染, 产生黄曲霉毒素。黄曲霉毒素最易污染玉米、花生等制品, 其次是小麦、高粱, 豆粕较不易被黄曲霉污染。

2 黄曲霉毒素的化学结构及理化性质

黄曲霉毒素, 英文缩写AFT, 分子式为C17H12O6, 是一类毒性非常强的二氢呋喃香豆素衍生物, 能够溶于很多种有机溶剂, 但不溶于正己烷、石油醚、乙醚, 微溶于水。黄曲霉毒素化学结构稳定, 加热至268~269℃时, 才会发生分子结构的变化。

目前, 黄曲霉毒素已经发现并确定的有20余种, 饲料遭受黄曲霉毒素污染后, 检测可见黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2四种。其中两种黄曲霉毒素B1、B2被饲喂家禽和家畜后, 经过生理代谢转化, 转变成的黄曲霉毒素M1和M2主要从尿液和乳汁中排出, 也有部分残留在畜、禽肉中。在受黄曲霉毒素污染的饲料中, 以黄曲霉毒素B1的毒性最大, 同时其含量也最多, 故将黄曲霉毒素B1作为饲料质量监管中黄曲霉毒素项目的主要监测指标。

3 黄曲霉毒素对畜、禽的危害

饲喂畜、禽含有黄曲霉毒素的饲料后, 常见畜、禽的采食量减少但体重增加, 其对动物的危害程度与饲喂畜、禽的品种、日龄、接触黄曲霉毒素的剂量、时间长短密切相关。黄曲酶毒素能够在畜、禽体内蓄积, 长期摄入会产生严重的影响。有学者给1d肉鸡饲喂黄曲霉毒素含量为0.75mg/kg的日粮, 28d后发现其体重增加但采食量明显下降。同时, 肉鸡饲喂黄曲霉毒素含量为1mg/kg的日粮, 7d后, 肉鸡生长未发现显著变化, 21d后, 肉鸡体重增加但采食量明显下降。猪对黄曲霉毒素非常敏感。当饲喂黄曲霉毒素含量为20~200mg/t的饲料时, 猪的采食量明显下降, 生产性能降低。当饲喂黄曲霉毒素含量为1000~5000mg/t, 会发生黄曲霉毒素严重中毒, 产生包括呼吸在内的严重影响, 有研究显示, 当饲料中黄曲霉毒素含量为2.0mg/kg时, 猪体重减少到29.7kg, 而对照组为33.7kg。黄曲霉毒素可以透过胎盘屏障转移到胎儿, 引起胎儿畸形, 导致产仔数减少、死胎等。个别母畜饲喂黄曲霉毒素饲料会引起急性中毒发生流产。就反刍动物方面, 饲喂奶牛的饲料中黄曲霉毒素的含量要非常低, 这是因为黄曲霉毒素不仅会降低奶牛的生产性能和体质, 还会经过奶牛的生理代谢, 使牛奶中产生代谢产物黄曲霉毒素M1, 威胁人体健康。肉牛采食黄曲霉毒素污染严重的饲料, 会使其生长速度下降, 同时使成年牛得肝脏受损。

4 黄曲酶毒素的检测

检测黄曲霉毒素的方法有很多种, 有薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫法等。

4.1 薄层色谱法

薄层色谱法常用于半定量测定黄曲霉毒素实验。由于黄曲霉毒素具有荧光性, 将样品经过提取、浓缩后, 采用单向或双向展开法, 使其在薄层板上分离, 设置波长365nm的紫外光照射, 会产生蓝紫色荧光, 据此定量。薄层色谱法操作简单易行、仪器试剂来源方便, 但是由于样品中可能含有其他荧光物质的干扰会造成测定误差。

4.2 高效液相色谱法

高效液相色谱法可以分离分析各种黄曲霉毒素, 该此方法具有灵敏度高、分离能力强、特异性好、测定结果准确可靠等优点。目前己广泛地用于黄曲霉毒素的测定。高效液相色谱法虽然具有快速、灵敏度高、准确、自动化等优点, 但仪器价格较贵、操作繁琐, 难以在基层推广。

4.3 酶联免疫法

酶联免疫法是检测黄曲霉毒素最常用的方法, 它具有检测灵敏、操作简单、耗时较短、测定结果较为准确的优点, 常用于半定量实验。通常黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒采用固相直接竞争性酶联免疫原理。即微孔中包被对黄曲霉毒素具有高亲和力的抗体, 黄曲霉毒素酶标物与标准品或样品中的黄曲霉毒素竞争结合微孔中包被的抗体。孵育一定的时间后, 倾倒微空中的液体, 并进行洗涤。加入底物, 溶液变为蓝色, 加入酸性终止液, 溶液变为黄色。使用酶标仪在450nm下检测OD值。根据试剂盒中标准品的OD值、样品OD值来计算含量。

5 小结

随着人们对食品安全的认识逐渐提高, 食品中黄曲霉毒素的危害已广泛被大家接受, 而饲料是否含有黄曲霉毒素在一定程度上直接影响了食品的安全。饲料一旦遭到黄曲霉毒素的污染, 不仅影响饲料本身的营养价值, 还影响畜、禽的生产性能, 同时黄曲霉毒素还会在畜、禽体内残留, 导致畜、禽中毒, 人们误食此类肉食将严重影响身体健康。因此, 在饲料安全生产中, 黄曲霉毒素所带来的危害及检测方法应引起我们兽医工作者严密的关注。

参考文献

[1]于炎湖主编.饲料毒物学附毒物分析.农业出版社, 1992.

[2]冯建蕾.黄曲霉毒素的危害和防制.中国畜牧兽医, 2005 (12) .

[3]卿全中.黄曲酶毒素对家禽生产性能和健康的影响.中国饲料, 2000 (3) :35~37.

动物饲料微生物污染快速检测方法 篇7

关键词：动物饲料,微生物污染,快速检测方法

动物饲料在畜牧生产中不可或缺,安全性良好的动物饲料是促进畜牧生产良性发展的因素之一。动物食用被污染的饲料易造成生产能力降低甚至引发疾病,严重者会通过食物链危害人群健康。有害微生物污染是动物饲料安全的主要监控指标,建立快速有效的检测方法是监控工作的第一步。动物饲料由几十种基本原料复合而成,因此有害微生物种类多且常有交叉污染现象。鉴于此一些比传统检测手段更加快速灵敏的方法逐步成为近年来的研究焦点。

1 PCR检测技术

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种应用较为广泛,发展较为成熟的分子生物学技术。PCR技术可特异、灵敏的检测出极微量DNA片段,其操作快速简单,对样本纯度要求不高。多重PCR技术是在常规PCR方法基础上在一个体系内加入一对以上引物,在保留常规PCR快速、灵敏优势的基础上可一次检测2种以上有害微生物。随着分子生物学技术的发展科研工作者尝试将PCR技术与多种技术联用以达到更好的实际工作效果。一项研究中利用实时荧光定量PCR以检测幽门螺旋杆菌,结果检测时间短、线性关系好且无交叉反应,有效的提高了饲料中微生物的检测效果。由于饲料成分较为复杂且PCR技术检测敏感度高,在实际工作中常发生能检测到DNA片段但无活性微生物存在的现象,使得PCR技术的应用受到限制。

2 基因芯片检测技术

基因芯片技术是近几年发展迅速,已成为目前检测技术研究热点之一。该法在基片表面固定一系列特定引物,对样品进行扩增、杂交,分析杂交结果即可达到检测目的。基因芯片技术与其它技术相结合应用范围更广,检测效果更好。随着生物信息学技术的发展,基因芯片技术的用途越来越广。利用生物信息学技术分析并找出饲料中常见有害微生物的特异基因序列,设计探针和引物即可快速灵敏的检测多种有害微生物的存在。该技术灵敏度高、耗时短,随着技术的发展检测费用的降低,相信其应用会越来越广。

3 ELISA检测技术

酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法是一种将抗原-抗体特异性反应与酶高效催化反应相结合的检测方法,是酶免疫测定法中应用最广的一种方法,具有操作简单、灵敏度高、批量检测等优势。检测时首先将抗原或抗体吸附于固相载体表面,后加入待测抗体或抗原,再加入酶标记的抗原或抗体,最后通过底物显色生成有色物质,根据吸光值对样品进行定性及定量分析。识别微生物的特异性抗体的制备是ELISA技术的关键。实际工作中,ELISA方法在沙门氏菌的快速筛查中应用最多,此外也用于饲料中其它有毒有害物残留的检测。

4 蛋白质芯片检测技术

蛋白质芯片检测技术又称蛋白质微阵列技术,其基本结构与基因芯片技术类似。首先将酶、抗原、抗体等特异性蛋白被大量固定在经预处理的硅片或玻璃片上制成蛋白质芯片,后将样品加入固相载体,使其与芯片上蛋白质反应,最后经激光扫描获取图像并使用专门的软件对图像进行定性定量分析以得出结果。研究表明蛋白质芯片检测技术交叉反应较少因此重复性高,检测灵敏度高且整个检测用时较短,是有效的微生物检测方法。检测费用高是限制该技术实际应用的主要因素。

5 总结

快速检测方法能够在短时间内得到微生物污染的检测情况,是大批量饲料中微生物污染筛查的理想工具。然而,饲料中成分较为复杂,有微生物也有基因片段或蛋白质残留,因此与传统方法相比未经过诸如富集等预处理步骤的快速检测方法其检测结果只能作为参考,传统检测方法得出的结果更加可信。随着生物技术的发展,快速检测技术检测结果会越来越可靠,最终成为饲料中有害微生物的检测最终发展方向。

参考文献

[1]韩杰,等.家禽饲料中重金属和微生物污染的危害及防治[J].养禽与禽病防治,2010(1):32-34.

[2]石建玲,等.基于Taq Man探针的幽门螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].中国实验诊断学,2013,17(6):986-989.

[3]陈胜军,等.基因芯片技术在微生物检测中的应用研究进展[J].中国畜牧兽医文摘,2013,29(5):40-42.

饲料检测 篇8

1 材料与方法

样品经提取液提取, 上机测定 (用反相色谱分离) , 外标法定量。

1.1 仪器和设备

Waters UPLC超高效液相色谱仪 (二极管阵列检测器、C18-5.0μm, 250 mm×4.6 mm反相色谱柱) ;KQ-300E型超声提取仪;中佳离心机:10 000 rpm;50 m L塑料离心管;微孔滤膜:0.22μm;超纯水制备机;电子天平;超声波清洗器。

1.2 试剂与溶液

1.2.1 试剂

乙腈:色谱纯 (Fisher, Marshalltown, USA) ;甲醇:色谱纯 (Fisher, Marshalltown, USA) ;超纯水 (自制) ;磷酸二氢钾:分析纯 (科密欧, 天津, 中国) 。

1.2.2 溶液

磷酸二氢钾溶液:称取磷酸二氢钾2.72 g, 用超纯水溶解定容至1 000 m L。

1.3 标准物质与标准溶液的配制

1.3.1 标准物质

邻氯青霉素, 青霉素G, 羟氨苄青霉素, 苯唑青霉素, 氨苄青霉素。

1.3.2 标准溶液

1.3.2. 1 标准储备液的配制

分别称取邻氯青霉素、青霉素G、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素各适量 (精确到0.000 1 g) , 用甲醇溶解并定容到100 m L。

此标准储备溶液每亳升含土霉素100μg, 四环素100μg, 金霉素100μg, 强力霉素50μg, -18℃以下保存。

1.3.2. 2 标准工作液的配制

临用前各取上述标准储备溶液1 m L, 用流动相定容至100 m L容量瓶, 配制混合标准工作液, 再用流动相逐级稀释, 配制成邻氯青霉素、青霉素G、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素混合标准溶液, 浓度分别为5、10、50、100、200 mg/kg。

1.4 样品前处理方法

1.4.1 试样制备

从原始样品中取部分代表性样品, 粉碎, 混匀后按四分法缩分出不少于500 g试样, 装入洁净容器内, 密封, 并标明标记。

1.4.2 试样保存

将试样于-18℃以下冷冻保存。

需要注意的是, 在抽样和制样操作过程中, 必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

1.4.3 提取

称取5 g±0.05 g样品置入50 m L聚乙烯离心管中, 加入提取液, 超声提取, 5 000 rpm离心5 min, 过膜上机检测。

1.5 仪器参数与测定条件

1.5.1 色谱测定条件

色谱柱:C18-5.0μm, 250 mm×4.6 mm;

流动相:磷酸二氢钾溶液、乙腈的比例为92:8;

流动相流速1 m L/min;

进样量:10μL;

柱温:室温。

1.5.2 仪器测定

分别向液相色谱仪注入等体积标准工作液和样液, 在室温下, 以1 m L/min的流速洗脱, 外标法定量。

1.6 计算公式

按式 (1) 计算式样中邻氯青霉素、青霉素G、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素的含量。

式中,

X———试样中5种青霉素的含量, μg/kg;

A———样液中5种青霉素的峰面积;

AS———标准工作液中5种青霉素的峰面积;

C———标准工作液中5种青霉素的质量浓度, mg/L;

V———样液最终定容体积, m L;

m———最终样液代表的试样质量, g。

2 结果与分析

本实验分别根据信噪比S/N=3和S/N=10计算并通过实际进样测得邻氯青霉素、青霉素G、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素的检出限 (LODs) 和定量限 (LOQs) , 并在确定的实验条件下, 将配制的混合标准溶液稀释成浓度为5、10、50、100、200 mg/kg的系列标准溶液, 进样测定并绘制标准曲线, 结果表明, 在5~200 mg/kg的浓度范围内, 邻氯青霉素、青霉素G、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素与其峰面积呈现出良好的线性关系 (R2>0.99) , 各青霉素的检出限、定量限、回收率等均满足标准要求。

2.1 检出限、测定低限

本实验的检出限为0.5 mg/kg, 测定低限为5 mg/kg。

2.2 回收率

本实验方法的回收试验是在饲料样品基质中添加3个浓度水平的青霉素类混合标准溶液, 按照1.4的方法进行样品前处理后上机检测, 每个添加浓度水平进行6次重复实验, 最终测得5种青霉素类的平均回收率范围是80%~110%。

当浓度范围在5~50 mg/kg时, 回收率范围见表1

2.3 精密度

浓度范围在50~100μg/kg时, 精密度范围见表2。

3 结论

液相色谱法检测饲料中青霉素类残留量 (邻氯青霉素, 青霉素G, 羟氨苄青霉素, 苯唑青霉素, 氨苄青霉素) 线性良好, 添加浓度范围在5~50 mg/kg时, 回收率范围为80%~110%,

浓度范围在50~100μg/kg时, 精密度范围在1.45%~16.03%。该方法检测饲料中青霉素类残留量准确可靠。

摘要：建立同时检测饲料中邻氯青霉素、青霉素G、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素的高效液相色谱法。实验方法参照有关文献的样品前处理方法及测定方法, 进行周密验证后, 将某些关键步骤进行细化。结果表明:邻氯青霉素、青霉素G、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素的最低检出浓度均为5 mg/kg, 方法回收率在60.4%103.6%之间, 精密度范围在1.45%12.60%之间。该方法优化了检测参数, 并且准确可靠。

关键词：高效液相色谱法,饲料,青霉素类抗生素

参考文献

[1]李德良.高效液相色谱法测定鸡肉中几种兽药残留量[J].理化检验 (化学分册) , 2007 (10) .

[2]王绪卿, 吴永宁.色谱在食品安全分析中的应用[M].北京:化学工业出版社, 2005.

[3]刘珍, 黄沛成, 于世林, 等.化验员读本[M].北京:化学工业出版社, 2010 (6) .

[4]GB/T 23385—2009饲料中氨苄青霉素的测定高效液相色谱法[S].

饲料检测 篇9

1 饲料中激素类物质对人类的危害

激素在人类生长、发育过程中发挥了重要的调节作用。1980 年,美国科学家尝试把激素类物质应用于养殖业,促进畜禽生长,提高饲料转化率。但随着技术的发展,人们意识到这种做法会使激素在体内不能彻底分解,对人类的健康构成潜在威胁。人们食用含有大量激素的动物源性食品后,常常会出现心跳过快、心慌、手颤、头晕、头痛等现象,健康人群摄入激素类药物含量超过200 μg就会出现中毒症状。据统计,性激素和非甾体类促生长激素这两类使用最广泛的激素对人类身体健康危害最大。有关研究证实了残留在畜禽组织中的激素类药物能够破坏人体正常的激素水平,从而导致女性生育能力下降及更年期紊乱,体内积累了大量外源性激素时,容易诱发女性卵巢癌、乳腺癌等,儿童长期食用含有激素类药物的产品,可导致儿童性早熟、男童女性化。因此,从源头上治理激素类药物的非法添加问题,成为食品安全研究的重要课题,并受到了我国政府和监管部门的高度重视。

2 我国非法使用激素类药物现状

近年来,国内外报道了大量由于饲料安全问题引发的食品安全及环境污染事件。如20 世纪90 年代被广泛应用于畜牧养殖业的 β - 受体兴奋剂,但由于此类化合物在动物体内代谢缓慢,人类食用后会产生强烈的过敏反应。我国政府于1997 年发布了《关于严禁非法使用兽药的通知》中明令禁止盐酸克伦特罗、沙丁胺醇作为添加剂用于动物喂养。近年来,我国研究人员做了大量关于饲料及动物源性食品中激素类药物的调查及试验研究。林晓华等[1]连续3 年收集了广州市各大型菜市场及超市和农贸市场的畜禽肉和肝脏等样品,测定动物组织及肝脏中的激素、抗生素残留。检测结果显示: 共检测了238 份畜禽肉,合格196 份,合格率为82. 35% ,其中畜禽肉和肝脏的合格率分别为79. 49 % 和86. 16 % 。尹江伟等[2]建立液相色谱- 质谱法测定食品和饲料中醋酸甲孕酮的检测方法。

饲料质量安全关系着人类动物源食品的安全。农业部陆续发布了如235 号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》和1519 号公告《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》等政府文件,公布了在动物饮用水、畜禽和水产动物养殖过程中和饲料中禁止使用的药物及物质名单和动物性食品中兽药最高允许残留限量值。明确规定了禁止在食用动物饲养及饮用水中使用如己烷雌酚、己烯雌酚等激素类药物以促进动物快速生长发育或其他相关用途。

3 激素类物质的分析方法研究进展

目前国内外有关激素残留的检测方法主要包括免疫分析法、高效液相色谱法、气相色谱- 质谱联用法和高效液相色谱- 质谱联用法等。

3. 1 免疫分析法( Immunoassay)

免疫分析法是通过抗原抗体特异性反应让抗体与酶复合物结合,然后通过显色进行测定。本方法操作简便、灵敏度高、特异性强、成本低。免疫分析方法主要有免疫酶技术( ELISA) 、发光免疫测定( CLIA)和放射免疫分析( RIA) 等。

目前,免疫分析法主要用于检测、筛选食品及畜产品中激素残留,缺点是易出现假阳性结果,因此只能测定几种激素类药物。梁娟[3]采用单克隆抗体和酶联免疫吸附等技术检测饲料中的己烯雌酚残留量,利用合成的己烯雌酚人工抗原,筛选并制备出抗己烯雌酚单克隆抗体,建立了检测己烯雌酚残留的酶联免疫检测方法( DES - ELISA) ,其最低检出限可达0. 5 μg / L,与高效液相色谱法比较,两种方法无显著差异。王丽英[4]建立己烷雌酚抗体( HES) 及ELISA方法,该方法的检测限达到0. 05 ng /m L,能够满足对饲料中己烷雌酚残留的检测需要。

3. 2 高效液相色谱法( HPLC)

高效液相色谱法由于不受试样的挥发性和热稳定性限制,应用范围广,适用于分析热稳定性差、沸点高的有机物,具有分离效率高,选择性好,检测灵敏度高等特点。目前已被广泛应用于动物源食品和饲料中的激素残留的检测。

余晓等[5]采用反相高效液相色谱法同时测定动物饲料中的4 种雌激素( 雌酮、雌三醇、炔雌醇、己烯雌酚) ,样品经提取和固相萃取柱净化后,进行高效液相色谱法测定。结果表明,4 种雌激素的检出限为0. 010 ~ 0. 030 mg / kg,该法操作简便、灵敏度高、可操作性强。文红等[6]采用固相萃取- 高效液相色谱法测定肉中4 种激素类药物残留情况,样品经甲醇提取后混匀,过滤膜后上机测定。结果表明,几种激素类药物的最低检出限分别为: 己烯雌酚、己二烯雌酚、己烷雌酚的检出限为1. 0 μg /g; 17 - α 雌二醇、17 - β雌二醇的检出限为2. 0 μg /g,几种药物的回收率在60% ~ 90% 之间,标准偏差( RSD) 在5% ~ 20% 之间,说明该方法的重复性及精密度均符合检测要求。

3. 3 气相色谱- 质谱联用法( GC - MS)

气相色谱- 质谱联用法( GC - MS) 是将气相色谱与质谱法联用,主要用于分离与鉴定复杂化合物,两者取长补短,既弥补了气相色谱法只凭保留时间难以对复杂化合物中未知组分做出可靠定性鉴定的缺点,又利用了鉴别能力很强且灵敏度极高的质谱仪作为检测器,具有高分辨能力、高灵敏度和分析过程简便快速的特点。

在SN/T1744—2006 中采用气相色谱- 质谱法检测饲料中己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚残留量。样品经乙醚提取浓缩后用三氯甲烷去除蛋白质,用固相萃取柱( C18) 净化后,氮吹浓缩后再用衍生化试剂进行衍生化,用气相色谱- 负离子化学电离质谱法( GC - NCI - MS) 测定,采用外标法定量计算,其中己烷雌酚的最低检出限3 μg /kg,己烯雌酚和双烯雌酚的最低检出限为5 μg /kg。邓晓丽等[7]建立了气相色谱- 质谱联用法( GC - MS) 检测奶粉中6 种雌激素类药物残留的方法,结果表明: 各组分分离效果好,回收率为60% ~ 90% ,RSD低于15. 0% ,检出限为0. 5 ng / g,可对奶粉中6 种雌激素类药物残留进行准确的定性定量分析。

3. 4 液相色谱- 质谱联用技术( LC - MS)

液相色谱- 质谱联用技术( LC - MS) 是将液相色谱的分离系统与质谱的检测系统联接起来,由于气相色谱- 质谱法受沸点的限制,对于那些大分子、热稳定性差、难挥发的物质,可以使用LC - MS进行测定,具有选择性强、分辨率高、灵敏度高等特点。目前,LC - MS在国内外得到了广泛的应用。

梁润[8]建立了固相萃取- 高效液相色谱法测定饲料中17β - 雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的分析方法,该方法检出限为0. 2 mg /kg。高文惠等[9]建立超高效液相色谱- 串联质谱技术建立肌肉组织中糖皮质类激素残留的检测方法,结果表明: 在0. 5 ~ 5 ng / m L浓度范围内,具有良好的线性关系,检出限小于2. 0 μg /kg; 在空白试样中的糖皮质类药物的添加浓度为2. 0 μg /kg和5. 0 μg /kg时,平均回收率在80% 以上,RSD为5% 以下,说明本方法的回收率和精密度良好。祝伟霞等[10]建立了液相色谱- 串联四极杆质谱( Q - TOFMS) 同时测定婴幼儿配方奶粉中39 种雌激素残留的快速确证方法; 方法回收率为60% ~ 120% ,RSD为5% ~ 20% ,结果表明: 该方法操作简便、检测数据准确,可用于测定婴幼儿配方奶粉中多种化学合成类与内源性雌激素残留的定性及定量测定。

4 问题及展望

随着经济的不断发展,我国畜禽饲养量上升,使用含有激素类药物的饲料饲养畜禽,势必会对人类的身体健康造成伤害。因此,建立高效、快速、准确的检测方法对饲料中激素类药物的非法添加量加以监督和控制已成为当前亟需解决的问题。当前,大多文献报道的激素残留检测主要针对动物源食品,关于饲料方面的报道还较少。另外,在饲料激素检测方面,对己烯雌酚、己烷雌酚的检测报道较多,而对于雌二醇、雌三醇等的报道甚少。国家标准只规定了饲料中的己烯雌酚的液相色谱法,但基于饲料质量安全影响人类食品安全的现实需要,对饲料进行多种激素类药物的检测是非常必要的。因此,哈尔滨市兽药饲料监察所研究人员申报的哈尔滨市科技攻关项目《饲料中多种雌激素类药物检测方法的技术研究 》( 2014AB3BN041) 选择饲料中6 种雌激素( 己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚、雌酮、雌二醇、雌三醇) 作为研究对象,一方面使用酶联免疫分析法进行饲料中雌激素类药物的筛选工作; 另一方面以气相色谱- 质谱法为检测手段,建立饲料中多种雌激素的确证检测方法。此项研究的目的在于建立饲料中多种雌激素的快速检测技术和定量确证检测技术,为国内首次在该领域进行的系统工作。此研究不仅符合食品安全监管工作快速便捷的发展理念,还满足监管工作中及时确证、准确定量的要求,而且一次检测可以同时完成多种雌激素的测定,降低检测成本,应用及推广意义巨大,为我国制订饲料安全检测标准方法和开展食品安全监控工作提供科学依据和技术支撑,对推进我国相关技术发展,增强创新技术、创新能力具有重要意义。为加快完善畜产品质量安全监管体系,提升安全保障能力,确保食品安全,强化畜产品质量安全机制作出贡献。

摘要：黑龙江是我国畜牧大省,年产饲料百余万吨。但是饲料中的激素非法添加问题影响了饲料的生产及使用。文章阐述了激素类药物对动物体及人体的危害、在饲料中的非法添加现状及我国对饲料中雌激素药物限量的要求,综述了检测饲料中激素类药物常用检测方法的研究进展,以期为进一步的研究提供理论基础。

关键词：饲料,激素类药物,检测方法,非法添加,检测标准

参考文献

[1]林晓华,李迎月,何洁义,等.广州部分畜禽肉的激素及抗生素残留状况分析[J].中国公共卫生管理,2010,01(193):93-95.

[2]尹江伟,刘江河,刘祖强,等.高效液相色谱-串联质谱法测定食品和饲料中醋酸甲孕酮[J].中国卫生检验杂志,2009,11(19):2470-2472.

[3]梁娟.己烯雌酚单克隆抗体的研制及其ELISA检测方法的建立与应用[D].扬州:扬州大学,2010.

[4]王丽英.己烷雌酚抗体的制备与ELISA方法的建立[D].无锡:江南大学,2007.

[5]余晓,翟海云,林海丹,等.高效液相色谱法同时测定动物饲料中的4种雌激素[J].湖北农业科学,2013,52(12):2907-2908.

[6]文红,李涛,王红.HPLC测定鱼肉中4种激素残留量及不确定度评估研究[J].中国卫生检验杂志,2007,17(6):1111-1114.

[7]邓晓丽,范军,黄涛宏,等.气相色谱质谱联用法检测奶粉中四种雌激素[J].中国食品2011(4):56-57.

[8]梁润.饲料中三种雌激素的测定方法研究[D].成都:成都理工大学,2012.

[9]高文惠,李挥,张敬轩.快速高分离液相色谱-串联质谱法对肌肉组织中糖皮质激素残留的检测[J].食品科学,2010,31(20):382-385.

饲料检测 篇10

过去, 人们对隐藏于饲料原料和产品中的塑化剂束手无策, 饲料原料和产品中塑化剂检测技术的问世结束了这一局面。据悉, 这一检测技术是由中国农科院饲料研究所饲料安全加工与检测技术研究团队利用液质联用技术研发成功的。它可以检测出饲料中的DMP、DEP、BBP、DBP、DHeP和DEHP 6种塑化剂, 可应用于豆粕、鱼粉、血粉、血浆蛋白粉、肉骨粉、啤酒酵母等常见工业饲料原料以及鸡、鸭、猪、鱼、虾等饲料产品中塑化剂的检测。

据介绍, 塑化剂是工业上被广泛使用的高分子材料助剂, 可以增强塑料的柔韧性。今年, 我国台湾出现食品污染情况, 起因是在食品中加入了有害健康的塑化剂 (DEHP) 。截至6月8日, 台湾被检测出含塑化剂食品已达961项。6月1日我国卫生部紧急发布公告, 将邻苯二甲酸酯 (也叫酞酸酯) 类物质, 列入食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单。塑化剂检测新技术的研发成功, 及时填补了我国饲料行业塑化剂检测技术的空白, 为我国饲料及相关产品安全增添了一项新保障。 (摘自农民日报)