紫外可见分光光度计（精选10篇）
紫外可见分光光度计 篇1
一、目的
为保证紫外可见分光光度计在使用的有效期间内处于可靠的标准状态, 确保检测结果的质量, 因此对仪器设备实施期间核查。
二、核查要求
(一) 仪器基本情况。
本紫外可见分光光度计型号为759MC, 级别为Ⅱ级, 故可接受标准为Ⅱ级仪器标准。核查频率每1年一次, 时间为距上次外检6个月时。
(二) 波长范围。
本台仪器的波长范围为200～1, 000nm, 按照检定规程所述, 将仪器的波长范围划分为三段, 分别为A段 (200～340nm) , B段 (340～900nm) , C段 (900～2, 600nm) 。根据实际情况仅对A、B段进行验证。
(三) 温湿度要求。
温度 10～35℃, 相对湿度小于等于85%。
(四) 波长最大允许误差及波长重复性。
以空气为空白, 调整好仪器的零点和满度, 将氧化钬溶液 (或氧化钬滤光片, 在检定有效期内) 放入10mm比色皿中, 在波长范围为200～800nm内进行扫描, 连续扫描3次, 记录扫描谱图。选择下列标准吸收峰波长进行验证:241.16, 361.24, 451.28, 536.53, 640.42nm。用下列公式计算:波长示值误差:undefined;undefined次测量的平均值;λS——波长标准值;波长重复性:δλ=λmax-λmin;λmax, λmin——分别为3次测量波长的最大值与最小值。可接受标准:取A段、B段内最大差值为波长示值误差和波长重复性。波长最大允许误差:A段±0.5nm;B段±1.0nm;波长重复性:A段≤0.2nm;B段≤0.5nm。
(五) 比色皿的配套性。
用石英和玻璃比色皿装蒸馏水分别于220nm, 440nm下, 将一个比色皿放入仪器中, 调节透射比为100%, 测量其它比色皿的透射比值, 其差值即为比色皿的配套性。可接受标准:≤0.5%。
(六) 线性和测量准确性。
分别取紫外分光光度法和可见光分光光度法测量中国环保部标准样品研究所的标准样品, 验证分光光度计的线性和准确性。可接受标准:线性相关系数r≥0.999, 结果在标准样品的标准值范围内 (准确性) 。
三、核查内容
(一) 对实验室环境温度进行核查。
经核查实验室温度为21.0℃, 湿度为46%, 该环境条件符合要求。
(二) 对分光光度计波长最大允许误差及波长重复性进行核查。
一是配制氧化钬溶液:称取已经干燥过的氧化钬 (基准试剂) 4g (准确至±0.1g) 于100毫升容量瓶中, 用10%高氯酸溶液定容, 待溶解摇匀后, 避光密封保存。二是将氧化钬溶液放入10mm比色皿中, 在波长范围为200～800nm内进行扫描, 连续扫描3次, 扫描结果如表1。三是将上述结果与五个标准吸收波长进行比较, 经计算得出五个标准吸收峰波长下的波长示值误差依次为:0.04nm, -0.04nm, 0.12nm, 0.27nm, 0.38nm, 标准吸收峰波长下的波长重复性测量结果依次为:0nm, 0.1nm, 0.2nm, 0nm, 0.2nm, 均符合标准要求。
(三) 对比色皿的配套性进行核查。
将石英和玻璃比色皿装蒸馏水分别于220nm, 440nm下, 放入仪器中。经测定, 一对10mm石英比色皿在220nm下测定的透射比值分别为100.0%, 99.7%, 透射比差值为0.3%, 小于0.5%, 符合标准;一对10mm玻璃比色皿在440nm下测定的透射比值分别为100.0%, 99.8%, 透射比差值为0.2%, 小于0.5%, 也符合标准要求。
(四) 对线性和测量准确性进行核查。
1.紫外光分光光度法测量标准样品。
在220nm和275nm处测定环保部标准样品研究所提供的总氮标准样品, 经测定, 编号为203226的总氮标准样品的测定值为0.832mg/L, 其标准浓度范围为0.788±0.066mg/L, 标准曲线相关系数r=0.9997, 符合标准要求。
2.可见光分光光度法测量标准样品。
在540nm处测定环保部标准样品研究所提供的二氧化氮标准样品, 经测定, 编号为206136的二氧化氮标准样品的测定值为0.397mg/L, 其标准浓度范围为0.404±0.018mg/L, 标准曲线相关系数r=0.9998, 符合标准要求。
四、核查结论
通过对759MC型紫外可见分光光度计进行期间核查, 证明其各项核查指标均符合相关的仪器期间核查的可接受标准, 因此该分光光度计处于可靠的工作状态, 能够确保监测工作的准确性。
紫外可见分光光度计 篇2
紫外分光光度法测定污水COD初探
将河南省三门峡市某印染厂污水处理分厂的 SBR 二级出水用滤纸过滤除去少许悬浮物后,研究其紫外吸光度(A)与 COD 的关系,最终确定在二者之间存在着较好的线性关系.
作 者：刘明娣 作者单位：三门峡职业技术学院,河南,三门峡,47 刊 名：濮阳职业技术学院学报 英文刊名：JOURNAL OF PUYANG VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE 年，卷(期)： 21(3) 分类号：X52 关键词：紫外吸光度 COD 二级出水紫外可见分光光度计 篇3
摘 要：通过对国标《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》（GB/T 5009.33—2010）第二法进行研究和优化，建立了惠州梅菜中亚硝酸盐的检测方法。研究表明：亚硝酸盐含量x（μg）与吸光度A在538 nm处具有良好的线性关系，在亚硝酸盐的量为0～10 μg·（50 mL）-1水溶液中，服从Beer定律， y = 46.708x-0.024，相关系数为0.999 9。蛋白质沉淀剂的使用量对惠州梅菜中亚硝酸盐含量测定有一定影响，添加量为2～3.5 mL时，回收率在98.8%～103%之间，回收效率较理想。沉淀剂添加量为2.5 mL时，进行方法加标回收试验，平均加标回收率在98.8%～98.9%之间，RSD在1.03%～4.70%之间。
关键词：惠州梅菜；亚硝酸盐；分光光度法
中图分类号：S636.9 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.12.004
梅菜是惠州市八大特色产品之一，在惠州已有近400年的种植历史，历史上作为宫廷食品而被称为“惠州贡菜”。目前惠州市有近30个乡镇种植梅菜，总产量大于75 000 t，年产值已达2亿元。梅菜更成为惠州多个乡镇如矮陂镇的“一镇一业”的特色品种。惠州梅菜是一种著名的广东传统腌制蔬菜食品，蔬菜易富集硝酸盐，在腌制过程中，由于有害微生物及硝酸还原酶的作用，硝酸盐会转化为亚硝酸盐，人摄入后，亚硝酸能和人胃中的含氮化合物（仲胺、叔胺、酰胺及氨基酸）结合成具致癌性的亚硝基化合物[1]。
目前，食品中亚硝酸盐的检测方法主要有分光光度法[2-5]、荧光光度法[6]、动力学光度法[7]、离子色谱法[8]、高效液相色谱法[9]等。在这几种方法中，分光光度法因仪器设备简单、价廉、操作简单，而被许多试验采用。通常以GB/T 5009.33—2010《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》第二法作为参考进行测定，利用亚硝酸盐重氮化后与盐酸萘乙二胺生成紫红色偶氮染料，颜色的深浅与亚硝酸含量成正比（符合朗伯比尔定律），可用分光光度计直接进行比色测定。本试验对分光光度法测定惠州梅菜中亚硝酸盐的含量进行了优化研究。
1 材料和方法
1.1 原材料
测定用梅菜样品购自惠州本地市场。
1.2 试验试剂
200 μg·mL-1亚硝酸钠标准溶液，5 μg·mL-1亚硝酸钠标准使用溶液，106 g·L-1亚铁氰化钾溶液，220 g·L-1乙酸锌溶液，50 g·L-1饱和硼酸溶液，4 g·L-1对氨基苯磺酸溶液，2 g·L-1盐酸萘乙二胺溶液。
1.3 仪器设备
紫外/可见分光光度计，上海美谱达仪器有限公司；TE412-L电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。
1.4 试验方法
1.4.1 样品预处理 用组织捣碎机把梅菜制成匀浆备用。
1.4.2 提取净化 称取5 g（精确到0.01 g）制成匀浆的试样，置于50 mL烧杯中，加入12.5 mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，用约250 mL的70 ℃水将试样吸入500 mL的容量瓶中，放置10 min提取，然后振荡上述溶液，加入一定量的亚铁氰化钾溶液、摇匀，再加入相同量的乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质，加水至刻度后摇匀、放置30 min，用滤纸过滤，弃去初滤液30 mL，滤液备用。
1.4.3 亚硝酸盐的测定 吸取40.0 mL上述滤液于50 mL带塞比色管中，另吸取0.00，0.08，0.16， 0.24，0.32，0.64，1.0，1.5，2.0 mL亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0，0.4，0.8，1.2，1.6，3.2，5.0，7.5， 10.0 μg亚硝酸钠），分别置于50 mL带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液混匀，静置3～5 min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至50 mL刻度线，混匀，静置15 min。用1 cm比色杯，以零管调节零点，于波长538 nm处测吸光度，绘制标准曲线比较、定量。同时做试剂空白。
2 结果与分析
2.1 亚硝酸钠标准曲线
亚硝酸钠标准溶液所测得的吸光度如表1。根据标准亚硝酸钠含量及吸光度绘制标准曲线，从图1可以看出，亚硝酸钠含量与吸光度的线性关系很好，相关系数达到了0.999 9，直线方程为y = 46.708x-0.024，其中x为亚硝酸盐的量（μg），y为吸光度A。
2.2 样品测定条件的选择
GB 5009.33—2010方法中加入蛋白质沉淀剂为：5 mL亚铁氰化钾溶液和5 mL乙酸锌溶液。本试验对蛋白质沉淀剂的加入量进行优化，分别以蛋白质沉淀剂的量为0，1，2，2.5，3.5，5 mL进行平行及加标回收试验，测定的亚硝酸盐含量如表2。
由表2可见，加入不同量的蛋白质沉淀剂，所测得的亚硝酸盐的含量不同，样品中测得值都小于检出限1 mg·kg-1，添加回收率结果也不同，添加量为2～3.5 mL时，回收率在98.8%～103%之间，回收效率比较理想。沉淀剂的量增加到5 mL时，回收率反而下降。
2.3 方法加标回收试验
按照1.4.2介绍的试验方法，蛋白质沉淀剂的量为2.5 mL，为进一步验证方法的可靠性，进行加标回收试验，选取3个浓度，分别为1.0、10.0、20.0 mg·kg-1，按相同的方法和条件平行测定10次。由表3可知，3个浓度点的加标平均回收率在98.8%～98.9%之间，RSD在1.03%～4.70%之间，这说明方法具有较好的重现性和准确性。
2.4 惠州梅菜中亚硝酸盐含量测定
按照1.4.2介绍的试验方法，蛋白质沉淀剂的量为2.5 mL，对惠州梅菜样品进行平行测定3次，取得算术平均值。以我国国标食品中污染物限量中规定腌制蔬菜中亚硝酸盐的含量（以NaNO2）不得超过20 mg·kg-1 [10]计，由表4可知，本实验室所收集的10份惠州梅菜样品均未超标，可以放心食用。
3 结 论
本试验通过对国标《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》（GB/T 5009.33—2010）第二法进行优化发现，加入不同量的蛋白质沉淀剂对梅菜中亚硝酸盐的检测结果有一定影响，蛋白质沉淀剂添加量为2.5 mL时，回收率在98.8%～98.9%之间，RSD在1.03%～4.70%之间，方法的加标回收试验效果较好。本试验确立了惠州梅菜中亚硝酸盐含量的检测方法，该方法操作简单、快速、精密度好，样品处理简单易行，可在惠州地区对梅菜中亚硝酸盐含量测定中推广应用。
参考文献：
[1] 彭卫芳，凌志明，王学涛，等.亚硝酸盐测定方法的研究进展[J].中国卫生检验杂志，2007，17（8）：1535-1536.
[2] 郝桂霞，杨晓斌.潮州酱腌菜中硝酸盐及亚硝酸盐含量的测定[J].现代食品科技，2007，23（7）：86-88.
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[4] 刘广福，王硕，孙蕊，等. 分光光度法同时测定肉制品中的硝酸盐和亚硝酸盐[J]. 安徽农业科学，2013，41（20）：8 706-8 707，8 781.
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[6] 黄克靖，孙俊永，吴莹莹.荧光光度法结合固相萃取测定亚硝酸盐[J].信阳师范学院学报：自然科学版，2012 ，25（1）：99-102.
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[8] 王硕，刘广福，孙蕊，等.离子色谱法测定肉制品中的硝酸盐和亚硝酸盐[J].食品科技，2014，19（2）：302-305.
[9] 张秋菊，崔世勇，姜丽华，等.反相高效液相色谱法同时测定酱腌菜中亚硝酸盐和硝酸盐[J].中国卫生检验杂志， 2008，18（7）：1304-1305，1323.
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[11] 中华人民共和国卫生部.GB/T 5009.33—2010 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定[S].北京：中国标准出版社，2010.
3 结 论
本试验通过对国标《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》（GB/T 5009.33—2010）第二法进行优化发现，加入不同量的蛋白质沉淀剂对梅菜中亚硝酸盐的检测结果有一定影响，蛋白质沉淀剂添加量为2.5 mL时，回收率在98.8%～98.9%之间，RSD在1.03%～4.70%之间，方法的加标回收试验效果较好。本试验确立了惠州梅菜中亚硝酸盐含量的检测方法，该方法操作简单、快速、精密度好，样品处理简单易行，可在惠州地区对梅菜中亚硝酸盐含量测定中推广应用。
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本试验通过对国标《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》（GB/T 5009.33—2010）第二法进行优化发现，加入不同量的蛋白质沉淀剂对梅菜中亚硝酸盐的检测结果有一定影响，蛋白质沉淀剂添加量为2.5 mL时，回收率在98.8%～98.9%之间，RSD在1.03%～4.70%之间，方法的加标回收试验效果较好。本试验确立了惠州梅菜中亚硝酸盐含量的检测方法，该方法操作简单、快速、精密度好，样品处理简单易行，可在惠州地区对梅菜中亚硝酸盐含量测定中推广应用。
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紫外可见分光光度计 篇4
随着检验技术的不断进步, 分光光度法得到了广泛的应用。分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的分析检测技术。灵敏, 精确, 快速和简便, 在复杂组分析系统中, 不需要分离, 即能检测出其中所含的极少量物质。
用紫外光源通过分光光度技术对物质进行测定, 因为许多化合物的分子结构中存在共轭双键, 在200—400nm的紫外光区具有吸收光的特性, 所以无需进行显色反应便能直接测定。UV-754型分光光度计是上海第三分析仪器厂生产的紫外可见分光光度计, 光谱波长范围为200—850nm, 具有微机处理控制、屏幕数字显示、打印输出等功能。可见动调“0”和“100”, 精确度和稳定性都较高, 可对在紫外可见光谱区域内具有吸收效应的各种物质作定性和定量分析, 应用广泛。现介绍754型分光光度计电路故障检修经验。
1 分光光度计工作原理
由光源灯发出连续辐射光线, 经滤光片和球面反射镜至单色器的入射狭缝聚焦成像, 光束通过入射狭缝经平面反射镜到准直镜产生平行光, 射至光栅上色散后又以准至镜聚焦在出射狭缝上形成一连续光谱, 由出射狭缝选择射出一定波长的单色光, 经聚光镜聚光后, 通过试样室中的测试溶液部分吸收后, 光经光门再照射到光电管上, 调整仪器, 使透光度为100%, 再移动试样架拉手, 使同一单色光通过测试溶液后照射到光电管上。如果被测样品有光吸收现象, 光量减弱, 由光电转换元件将变化的光信号转变为电信号, 经线性运算放大器和对数运算放大器处理, 将光能的变化程度通过数字显示器显示出来, 可根据需要直接在数字显示器上读取透光度 (T) , 吸光度 (A) 或浓度 (C) 。
2 常见故障现象
打开电源开关, 卤素钨灯亮, 显示器显示“754”, 仪器自检完毕后, 显示“000.0”, 而不是“100.0”。
3 检修过程
3.1 光路若光路不通, 光电倍增管不受光, 仪器自动处于调“0”状态, 则显示器显示“000.0”。
首先查单色光器出光状况:波长选择在550nm, 打开样品室盖, 垂直光路放入一白纸片。观察白纸上有一明亮的橙黄色光斑。移开白纸, 单色光透过比色皿座架空档, 落在光门档板正中。单色器出光正常, 说明单色器内光路正常。
再查光门开启状况:打开样品室盖, 用手下压光门顶杆, 听到“嗒”一声, 看到光门完全打开, 单色光射入光电管暗盒。松手, 光门档板下落, 遮住光路。
经查, 光路正常, 光电倍增管正常受光, 非光路系统故障。
3.2 电路光路正常, 仪器处于自动调“100”状态, 而显示器显示“000.0”, 应考虑放大电路放大光电信号通路有阻断, 使送至显示器的信号为0。
光电倍增管受光后, 通过高值电阻转换成微弱电信号, 送前置放大部分放大, 再送参样放大部分, 分别放大后, 由I/O口送微处理机以控制微电流放大器增益, 使输出稳定, 并送显示器显示, 直流稳压电源路为前置和参样放大电路提供±12V电源电压。
754型分光光度计电路部分采用方便拆装及维修的插板结构。拧下仪器左后方二只固定显示器的螺钉, 取下显示器, 可看到一排四块电路板, 竖直插在插在插槽中。它们分别是: (1) 参样信号放大板 (SSF8.530.142) , 用二只螺钉固定在仪器底板上。 (2) 氘灯电源板 (SSF8.530.172) 、 (3) 卤素灯、继电器、打印机电源板 (SSF8.530.171) 、 (4) 正负12V电源板 (SSF8.530.173) 。而前置放大板 (5) 在光电管暗盒内, 由一对10脚双向插头与参样信号板相连接。
根据电路工作原理及具体故障现象, 首先可排除 (2) (3) 两板损坏的可能。 (1) (4) (5) 三块板任一块损坏, 即参样放大电路、直流稳压电源电路、前置放大电路任一电路出现故障, 都有可能出现显示“000.0”的故障现象。而±12V电源是前置和参样放大部分正常工作的前提, 所以应首先检查±12V电压供给情况。然后再查前置和参样放大部分。
在开机状态下, 测参样板上±12V电压输入。测得分别为12V和5V。为排除负载损坏影响-12V电源电压的可能。拨掉负载插头, 测参样板上-12V电压输入值 (此时为±12V稳压电源输出空载电压) , 电压为5V不变。可判定-12V电压供给不正常。问题在 (4) 电源板 (SSF8.530.173) 。
经查, 发现DV232击穿。因手头暂无同型号稳压管, 先用一支12V稳压二极管代替。将修复的电源板插入插槽, 恢复其它拔插件。开机, 仪器自检后, 显示“100.0”, 故障排除。
4 故障分析
由于直流稳压电源的基准稳压二极管击穿, 使电源输出电压不正常, 从而供给前置和参样信号放大电路电源不对, 使前置放大电路、参样放大电路不工作。虽然光电倍增管受光, 感应电流送入前置放大电路, 但因前置放大电路不工作, 其输出为0, 同样, 参样放大电路输出为0, 使显示器显示为“000.0”。
仪器自检后显示“000.0”, 而光路无故障, 首先要考虑直流电源是否正常。也有其它电路故障引起自检后显示“000.0”的现象, 如放大电路故障、显示接收电路故障等。最简单的方法是拔下可疑电路板, 换一块同型号的电路板, 可迅速判断故障范围。因754型分光光度计电路板采用拔插结构, 非专业维修人员也可采用换板的办法解决问题。但要特别注意的是拔插电路板时, 首先要关闭仪器电源, 在断电状态下进行, 以防止在拔插过程中不小心使邻近插脚短路, 造成人为的故障。
5 结论
为了保证仪器的正常工作, 使用时按以下几点进行:
5.1 预热是保证实验结果准确可靠。
5.2 在波长320nm以下的实验范围一定要选用石英比色皿, 绝不可以玻璃比色皿替代。
5.3 色皿需保持清洁, 拿放时要符合要求。
5.4 对不同型号和类型的仪器要严格按照使用说明操作。
5.5 V—754型紫外—可见光光度计还可开展“以校正线进行浓度演算”和“用已知斜率K值与B值进行浓度测定”等多种测试方法。
5.6 不同蛋白质所含酪氨酸的数量有所差异, 此法对不同蛋白质样品的测定结果有所影响。
参考文献
[1]葛庆平.化学检验.范小平中国计量出版社.2004年.
[2]紫外分光光度计量检定规程.国家质检总局发布.
[3]马波.分析化学 (仪器分册) .中国化工出版社.
紫外可见分光光度计 篇5
关键词：向日葵列当；苯乙醇总苷；紫外分光光度法
中图分类号： O657.32文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0282-03
收稿日期：2013-11-28
基金项目：吉林省吉林市科技计划（编号：201162512）。
作者简介：曲正义（1984—），男，硕士，助理研究员，从事药效质量评价研究。E-mail：qzy209@163.com
通信作者：王英平。E-mail：lyingpingw@126.com。向日葵列当（Orobanche cumana Wallr.）别称毒根草、兔子拐棍，为列当科（Orobanchaceae）列当属（Orobanche）一年生寄生草本植物，在我国分布范围很广，主要分布于黑龙江省、吉林省、北京市、甘肃省、辽宁省、内蒙古自治區、河北省、山西省、陕西省、青海省、新疆维吾尔自治区等地区[1-2]。在我国部分地区，列当属多种植物全草入药，具有强筋壮骨、补肾助阳、抗疲劳、改善脑组织循环、增强免疫力等作用，其主要活性成分为苯乙醇苷类[3-5]。赵梦霞等对列当属植物向日葵列当进行了研究，分离得到4个苯乙醇苷类化合物，分别为crenatoside、isocrenatoside、类叶升麻苷、3-O-methyl-crenatoside。其中crenatoside含量较高，crenatoside具有清除自由基、抗氧化、抗菌、抗衰老等作用[6-7]。目前，国内外对向日葵列当的研究主要以防治、根除为主，对其化学成分及药理活性研究较少，未建立有效的药材质量控制标准[8-10]。为了更好地开发利用向日葵列当资源，缓解素有沙漠“人参”之称的同科植物肉苁蓉资源日益紧缺的局面，笔者采用紫外分光光度法测定向日葵列当中苯乙醇总苷的含量，旨在为进一步开发利用向日葵列当资源提供依据。
1材料与方法
1.1材料、试剂与仪器
1.1.1材料向日葵列当于2013年9月采于吉林省松原市长岭县，经由中国农业科学院特产研究所姚春林研究员鉴定为向日葵列当的全草。样品经50 ℃烘干粉碎后过40目筛，密封冷藏保存备用。
1.1.2试剂蒸馏水，甲醇、无水乙醇均为分析纯，crenatoside对照品由笔者所在实验室分离纯化并鉴定其结构[6]，纯度>98%。
1.1.3仪器TU-1810型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），HH-6型数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司），N-1001型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司），CPA2250D电子天平（德国Sartorius集团），DHG-9145A 电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒仪器科学有限公司）。
1.2方法
1.2.1对照品溶液的制备crenatoside标准储备液：精密称取5.50 mg标准品，置于10 mL容量瓶中，加甲醇使其溶解，稀释至刻度，摇匀，得crenatoside浓度为0.55 mg/mL的对照品贮备试液备用。
1.2.2供试品溶液的制备
1.2.2.1超声波提取法精密称取向日葵列当干样50.0 g，粉碎并过 40 目筛，置于圆底烧瓶中，以80%乙醇为提取溶剂，溶剂用量为600 mL，超声提取3次，每次50 min，过滤，合并回收浓缩滤液，定容于100 mL容量瓶中。精密吸取1 mL供试品溶液定容至10 mL容量瓶中备用，平行提取3次。
1.2.2.2渗滤提取法精密称取向日葵列当干样50.0 g，粉碎并过 40 目筛，以 80%乙醇为渗漉溶剂（用量为药材干质量的 12 倍），以 1.0 mL/min的流量渗漉24 h，过滤，合并回收浓缩滤液，定容于100 mL供试品溶液容量瓶中。精密吸取1 mL供试品溶液定容至10 mL容量瓶中备用，平行提取3次。
1.2.2.3热回流提取法精密称取向日葵列当干样50.0 g，粉碎并过40目筛，置于圆底烧瓶中，加80%乙醇600 mL，加热回流提取3次，每次1 h，过滤，合并回收浓缩滤液，定容于100 mL容量瓶中。精密吸取1 mL供试品溶液定容至10 mL容量瓶中备用，平行提取3次。根据含量结果，选择提取苯乙醇苷含量高的方法进行供试品溶液制备。
1.2.3最大吸收波长精密吸取对照品、样品溶液各0.4 mL置于20 mL磨口带塞试管中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，在230～400 nm处进行紫外扫描，对照品、样品溶液均在333 nm处有最大吸收，因此确定最大吸收波长为333 nm（图1）。
1.2.4标准曲线绘制精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于20 mL磨口带塞试管中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，在最大吸收波长下，以甲醇为空白，测定吸光度，以吸光度为横坐标，以crenatoside浓度为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=28.709x+0.995 3（r=0.999 0），表明在5.5～27.5 μg/mL范围内crenatoside浓度与吸光度有良好的线性关系（图2）。
1.2.5精密度试验精密吸取对照品溶液0.4 mL置于20 mL 磨口带塞试管中，共6份，按“1.2.4”节方法测定吸光度，连续测定6次。
1.2.6稳定性试验精密吸取样品溶液0.4 mL置于20 mL磨口带塞试管中，按“1.2.4”节方法测定吸光度，每隔2 h 测定1次，共测6次。
nlc202309041402
1.2.7重復性试验精确称取药材粉末5份，每份50.0 g，按照“1.2.2”方法，平行制备样品溶液，各吸取0.4 mL样品溶液置于5个20 mL具塞试管中，按“1.2.4”节方法测定吸光度。
1.2.8加样回收试验精确吸取5 份已知含量样品溶液04 mL，定容于5个20 mL具塞试管中，分别加入0.55 mg/mL crenatoside对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，按“1.2.4”节方法显色测定吸光度，计算回收率和相对标准偏差RSD值。
1.2.9 样品的测定 精密吸取3份“1.2.2”节中样品溶液各0.4 mL，分别定容于3个20 mL磨口带塞试管中，按“1.2.4”节方法显色测定吸光度，重复测定3次，取其平均值，向日葵列当中苯乙醇总苷含量计算公式如下：
苯乙醇总苷含量=稀释倍数×C×20×10-6×100×100%/m。（1）
式中：C为样品溶液中苯乙醇总苷的含量；m为向日葵列当样品的干质量。
2结果与分析
2.1不同提取方法的苯乙醇总苷含量
由表1可知，热回流提取苯乙醇总苷含量明显高于超声波提取法、渗滤提取法，因此本研究采用热回流提取法。与热回流相比，超声波提取法、渗滤提取法具有提取时间短、无需加热等优点，但向日葵列当中苯乙醇总苷提取率不高，这可能与苯乙醇苷类化合物的种类与结构有关。
3结论
本研究比较了超声波提取法、渗滤提取法、热回流提取法等不同提取方法对向日葵列当中苯乙醇总苷进行提取，结果表明，以热回流方法为佳，80%乙醇回流法提取效果最好，在5.5～27.5 μg/mL范围内线性关系良好，回收率为100.4%，RSD值为2.48%（n=5），向日葵列当中苯乙醇总苷平均含量为1.97%。
参考文献：
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紫外可见分光光度计 篇6
关键词：紫外线可见光,分光光度计,环保监测
在环保监测领域，很多细微的污染不能用肉眼辨识，并且使用传统的监测方式不仅费时又费力，监测的效果也不是非常理想，为了使突发性环境污染事故发生率降低就要做好监测应急工作，依据监测数据资料及时判断出一定范围内的污染物种类，对危害程度与危害造成的影响编写成报告，定期上报给上级部门。对水中污染物使用紫外可见光分光度计能够更准确的定位污染物，已经被列入到监测学科的研究中，同时也得到了生产管理部门的认可。
1 环保监测与紫外线可见光分光度计概述
环保监测也被称为环保检测，监测的重点在于监督与检查，主要针对是化工场的污染物或者污水中的污染物，对国家规定的主要污染物含量进行筛检并测量污染物的排放量。紫外可见分光光度计是一种新技术，功能多样并且监测的准确度较大，使用单色器技术将波长范围扩充至180mm～1200mm，是水质检测的通用仪器，还在市政与工业生产领域广泛应用，能够作为地表水、冷却水以及锅炉补给水。对废水监测过程中，可以对一个水系监测分析还能综合评价污染条件，包含水相、固相、水生生物等指标。在日常监测在红，紫外可见分光光度技术的应用较为普遍。鉴于水质常规监测中复杂可变因素较多，存在监测浓度与干扰物浓度的差异，由此，需要选择好监测方法与技术[1]。
2 环境污染监测重要意义
加强环境污染的监测越来越侧重水体监测，因为水体与人们的生产生活联系最为紧密，生活生产中排放出的废物或者污水都会不可避免的与人发生接触，使水体中的细菌、化学、物理污染物进入到人体或者其他生物体中，促使发生性状的改变。而随着工业进步与发展，污水的排放量不断增大，水污染越来越严重，严重制约了工业发展步伐。而地表水污染则对周围人群身体健康造成威胁。及时掌握污染物的含量与危害程度是减少污染的主要条件，还是将水污染程度减轻的重要保证。一直以来，我国在水环境质量监测上都使用传统方法，能够控制BOD、COD等指标，但在微量有机物污染控制上有所不足[2]。由此，结合我国环境污染实际情况使用紫外可见光分光光度计对微量有机物监测有一定意义。
3 紫外可见光分光度计在环保监测中的应用
3.1 加强紫外可见分光光度计对废水的监测
要想确保水系监测与分析更加及时、专业、客观就要对水相、固相、生成相等客观评价与综合分析，水相是溶液本身状态，固相则是指悬浮物，生物相是指水生生物。在对水质进行常规监测过程中，紫外可见光分光度占有非常重要的地位。因为废水中含有的复杂性因素较多，需要使用紫外可见分光光度计对其监测，确保污水中的污染物被及时监测出来。
3.2 紫外可见分光光度计对大气中物资的监测方法
在大气原有的组成成分中，氮气、氧气、一氧化碳、二氧化氮等物质都是非常重要的组合，要想确保大气氮氧含量保持平衡并能更准确的检测就要使用化学方法对氮氧化物进行处理，使其转变为一氧化氮与二氧化氮，具体方法可以使用三氧化铬。其次就是使用溶液对其进行转变，充分吸收转变后的二氧化氮，并生成亚硝酸物质。其中，亚硝酸与氨基苯磺能够产生氧化反应，反应完以后能够偶合盐酸荼乙二胺，最终形成红色的偶氮染料。测定可以在波长450mm的广度范围内进行，最后按照偶氮染料的颜色深浅监测大气中的氮氧化合物[3]。
3.3 检测原理与检测方法
3.3.1 检测原理
依据相关检测方法与检测要求，先将选择的样品捣碎，取碱性提取液样品与水溶性、非水溶性Cr6+化合物。在浸出液为酸性条件下，将其与二苯碳酸充分反映生成了紫色化合物。使用去离子法定容，在波长500mm位置使用紫外可见光分光度法进行定量。
3.3.2 检测方法
将0.2g～6.0g的粉碎样品放置在锥形瓶中，添加0.6mL的缓冲溶液充分震荡0.3h以后，对浸取液进行过滤，过滤到120mL的容器瓶中，向容量瓶中滴加HNO3，充分稀释，取浸取液的pH值为6.5±0.2。再向其中滴加3.0mL的显色剂，摇晃均匀，添加H2SO4，如果溶液pH值显示1±0.2以后使用去离子水定容，将最后得到的样品放置在510mm出留着测定。
3.3.3 数学建模
测定空白溶液或者已知浓度的标准物质时，可以先测定响应值，使用仪器测定未知溶液值，使用线性方程对样品浓度值进行计算，公式如下：
依据上述公式能够得出样品校正后的浓度Cr6+，样本的定容体积V以及样品质量M，最后对不确定分量来源进行分析，评定不确定度分量。测量结果的不确定度来源于不同的方面，分别是外标法校准引入的不确定度、样品质量不确定度、取液定容产生的不确定性、样品提取回收利用率产生的不确定度[4]。
4 结语
本文结合环境监测重要意义对紫外可见光分光度计在环保监测中的应用方法、原理等进行了分析，可见，采取合理、科学的监测技术能够使监测效率与准确性提高。
参考文献
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[3]苌轲.环保监测中紫外可见光分光光度计的应用探析[J].河南科技,2014(7):195-196.
紫外可见分光光度计 篇7
1 仪器与试药
1.1 仪器
UV-2201紫外可见分光光度计 (日本岛津公司) ;AX205分析天平 (METTLER TOLEDO公司) ;DK-S26型电热恒温水浴锅 (上海精宏实验设备有限公司) ;R206旋转蒸发器 (上海申生科技有限公司) 。
1.2 试药
普乐安片 (浙江康恩贝制药股份有限公司) ;β-谷甾醇对照品 (上海中药标准化研究中心, 供含量测定用, 批号:16-2001) , 高氯酸、香草醛、冰醋酸、氯仿等试剂均为分析纯 (国药集团化学试剂有限公司) 。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精密称取β-谷甾醇对照品10.13mg于10mL量瓶中, 加三氯甲烷适量使溶解, 并稀释至刻度, 摇匀, 精密移取1.0mL于10mL量瓶中, 用三氯甲烷稀释至刻度, 摇匀, 即得, 浓度为0.1013mg/mL。
2.2 供试品溶液的制备
取普乐安片若干, 用润湿的洁净纱布小心擦去表面薄膜衣层, 70℃减压干燥2 h, 置研钵中研磨成粉, 过80目筛, 称取本品0.5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入50 m L氯仿, 密塞称定重量, 超声处理60 min, 放冷, 再称定重量, 用氯仿补足失重, 摇匀, 滤过。精密移取续滤液10 m L于烧瓶中, 减压蒸干, 加入20 m L 10%氢氧化钠-乙醇溶液, 95℃水浴回流2 h, 放冷, 加入40 m L蒸馏水, 振摇, 混匀, 转移至分液漏斗中, 用正己烷萃取3次, 每次20 m L, 合并正己烷萃取液, 用蒸馏水洗涤正己烷液2次, 每次40 m L, 弃去水层, 正己烷层减压回收至适当体积后, 转移至50 m L量瓶中, 用适量正己烷洗涤烧瓶, 洗涤液并入量瓶中, 用正己烷稀释至刻度, 摇匀, 即得。
2.3 测定条件的选择
2.3.1 测定波长的选择
精密移取0.5mLβ-谷甾醇对照品溶液、1.0 m L供试品溶液于10mL具塞玻璃管中, 85℃水浴挥尽溶剂, 加入0.6mL5%香草醛-冰醋酸溶液, 0.8mL高氯酸, 混匀, 密塞, 70℃水浴保温30min, 取出, 流水迅速冷却至室温, 精密加入冰醋酸4.6mL, 摇匀, 随行试剂作空白, 在190~900nm进行波长扫描, 对照品和供试品溶液均在在542nm有最大吸收峰, 故选择542nm为总甾醇含量测定的检测波长。
2.3.2 显色条件的选择
2.3.2. 1 显色反应正交设计采用四因素三水平L9 (34) 正交试验优选显色条件, 正交因素水平表设计见表1。
精密移取0.5mLβ-谷甾醇对照品溶液于10m L具塞玻璃试管中, 85℃水浴挥尽溶剂, 加入不同用量5%香草醛-冰醋酸溶液, 0.8mL高氯酸, 混匀, 密塞, 70℃水浴保温30min, 取出, 流水迅速冷却至室温, 精密加入不同用量冰醋酸, 使溶液体积为6.0mL, 摇匀, 随行试剂作空白, 在542nm处测定吸光度值, 结果见表2。
由表2可见, 直观分析显示各因素对显色反应吸光度的作用主次为A>C>B, 最佳显色条件为A3B3C3;方差分析结果表明A因素有统计学意义, 而B、C因素无统计学意义;由于显色温度对吸光度无显著影响, 考虑供试品稳定性, 显色温度70℃为佳。
2.3.2. 2 高氯酸用量的选择
参考文献报道, 高氯酸用量对显色反应有较大影响, 故在已选定的显色条件下, 以β-谷甾醇对照品制备供试品溶液, 单独考察不同高氯酸用量对显色反应的影响。结果显示, 随着高氯酸用量增加, 吸光度增加, 当用量为1.2 m L时, 吸光度出现下降;用量为0.4 m L时, λmax为545 nm, 用量为1.0 m L时, λmax为541 nm, 可见不同高氯酸用量可引起最大吸收波长及吸光度的变化, 考虑对照品和供试品最大吸收波长的一致性以及供试品的稳定性, 高氯酸用量以0.8 m L为宜。
综上所述, 总甾醇最佳显色条件为:精密移取适量对照品溶液、供试品溶液于10 m L具塞玻璃试管中, 85℃水浴挥尽溶剂, 加入0.6 m L 5%香草醛-冰醋酸溶液, 0.8 m L高氯酸, 混匀, 密塞, 70℃水浴保温30 min, 取出, 流水迅速冷却至室温, 精密加入冰醋酸4.6 m L, 摇匀, 随行试剂作空白, 于542 nm测定吸光度。
2.3.2. 3 显色稳定性试验
精密移取0.5mLβ-谷甾醇对照品溶液、1.0 mL供试品溶液于10mL具塞玻璃试管中, 自“85℃水浴挥尽溶剂”起, 按确定的显色条件进行显色, 分别于显色结束10、15、20、25、30 min测定对照品和供试品吸光度变化, 结果表明对照品和供试品在30 min内显色稳定。
2.4 总甾醇标准曲线的制备
精密移取0.1013mg/mL的β-谷甾醇对照品溶液0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mL于10mL具塞玻璃试管中, 自“85℃水浴挥尽溶剂”起, 按确定的显色条件进行显色和测定, 以对照品质量和吸收值进行回归计算, 得回归方程Y=-0.062 08+11.033 7 X, r=0.9988, 表明β-谷甾醇在0.03039~0.081 04mg线性关系良好。
2.5 供试品溶液稳定性试验
按供试品溶液的制备方法, 自“称取本品0.5 g”起制备供试品溶液, 分别于制备后0、2、4、6、8 h各精密移取1.0mL于10mL具塞玻璃试管中, 自“85℃水浴挥尽溶剂”起, 按确定的显色条件进行显色和测定, 测得不同时间供试品溶液中β-谷甾醇含量见表4, RSD=2.33%, 说明供试品溶液在8h内稳定。
2.6 精密度试验
2.6.1 重复性
取普乐安片适量 (批号:090220) , 按上述含量测定方法制备6份供试品溶液, 测得总甾醇的含量分别为2.70%、2.66%、2.64%、2.79%、2.61%、2.70%, 平均含量为2.68%, RSD=2.36%, 表明其重复性良好。
2.6.2 中间精密度
取普乐安片适量 (批号:090220) , 按上述含量测定方法, 于数天内测定总甾醇含量, 分别为2.64%、2.68%、2.71%、2.71%、2.57%、2.55%, 平均含量2.64%, RSD=2.64%, 中间精密度良好。
2.7 加样回收率试验
取普乐安片适量 (批号:090220) , 按供试品溶液的制备方法, 称取6份, 每份0.25g, 精密称定, 精密加入β-谷甾醇对照品溶液 (含β-谷甾醇6.626mg) , 自“精密加入50mL氯仿”起, 按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液, 按确定的显色条件进行显色和测定, 计算加样回收率, 结果见表5, 表明本法回收率符合要求。
2.8 普乐安片中总甾醇含量测定
取5批不同批号的普乐安片, 按上述含量测定方法测定总甾醇含量, 结果分别为2.44%、2.43%、2.49%、2.46%、2.48%。
3 讨论
3.1 样品溶液的皂化处理
样品溶液如果不进行皂化处理直接按显色条件进行显色, 其最大吸收峰在537 nm, 与对照品最大吸收峰542 nm相差较大, 不符合《中国药典》2005年版附录ⅤA[6]紫外-可见分光光度法对供试品溶液吸收峰波长的规定。样品经皂化处理后, 吸收峰波长与对照品最大吸收峰波长一致, 符合规定, 故样品需进行皂化处理。
3.2 显色方法的选择
根据文献报道, 选择了Liebermann反应、改良Liebermann-Burchard试剂进行显色反应, 但样品、对照品均存在吸光度变化快, 无明显的显色稳定时间, 故不适合作为本样品甾醇显色方法, 香草醛-高氯酸反应灵敏度高, 显色稳定, 适合作为甾醇含量测定的显色反应。
参考文献
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紫外可见分光光度计 篇8
分子结构中含有芳香环或共轭双键等共轭体系的有机药物, 在紫外光区 (200～400nm) 有特征吸收, 可用紫外分光光度法进行药物分析;一些外观有颜色或加入某试剂能呈色的药物在可见光区 (400～760nm) 有特征吸收, 可用可见分光光度法进行药物分析, 紫外-可见分光光度法在《中国药典》中主要应用于药物的鉴别、杂质检查、含量测定、含量均匀度和溶出度的检查等方面。
1 紫外-可见分光光度法应用于药物鉴别
1. 鉴别的主要依据
紫外-可见分光光度是通过测定药物在紫外可见光区的吸收光谱特征对药物进行鉴别。可根据药物的吸收光谱特征, 如吸收光谱的形状、最大吸收波长、吸收峰数目、各吸收峰的位置、强度和相应的吸收系数等进行鉴别, 最大吸收波长和吸收系数是鉴别药物的常用参数。
1.2 常用的鉴别方法
1.2.1 比较吸收系数 (E%11cm) 的一致性
不同的药物, 其E%11cm值有明显差异。因此, E%11cm作为化合物的特征常数, 常用于药物鉴别。如《中国药典》中贝诺酯的鉴别:贝诺酯加无水乙醇制成每1mL约含7.5µg的溶液, 在240nm处有最大吸收, 相应的吸收系数 (E%11cm) 应为730～760。
1.2.2 比较吸光度比值的一致性
有些药物的吸收光谱中吸收峰较多, 各峰对应的吸光度的比值是一定的, 可作为鉴别的标准。如《中国药典》中硝西泮的鉴别:硝西泮加无水乙醇制成每1mL约含8µg的溶液, 在220nm、260nm与310nm波长处有最大吸收, 规定260nm与310nm波长处的吸光度的比值应为1.45～1.65。
1.2.3 比较吸收光谱特性的一致性
利用药物具有紫外吸收的特性或利用药物经化学处理后, 测定其反应产物的吸收特性进行鉴别。如《中国药典》现行版中氟胞嘧啶的鉴别:取氟胞嘧啶适量, 加盐酸溶液 (9→100) 制成每1mL中约含10µg的溶液, 在286nm的波长处有最大吸收, 吸光度约为0.71。
用紫外-可见分光光度法鉴别药物时, 对仪器的准确度要求很高, 必须按要求严格校正合格后方可使用, 样品的纯度必须达到要求才能测定。
2 紫外-可见分光光度法应用于药物杂质检查
2.1 一般杂质检查
《中国药典》少数一般杂质的限量采用了紫外-可见分光光度法进行检查。如药物溶液的颜色, “溶液颜色”的检查是控制药物在生产过程或贮存过程中产生的有色杂质。紫外-可见分光光度法是通过测定溶液的吸光度检查药物中有色杂质的限量。如维生素C易受外界条件影响而变色, 规定取本品3.0g, 加水15mL, 振摇使溶解, 溶液经4号垂熔玻璃漏斗滤过, 滤液于420nm波长处测定吸光度, 不得过0.03。
另外, 对药物的一般杂质如重金属、铁盐等的检查, 中国药典采用目视比色法。目视比色法是在可见光区用眼睛辨别、比较供试品溶液与对照品溶液的颜色深浅, 以检查该项杂质是否超过限量。
2.2 特殊杂质检查
《中国药典》中常用的各类分光光度法对药物特殊杂质检查, 以紫外-可见分光光度法应用较多。
紫外-可见分光光度法检查药物中特殊杂质限量, 通常是采用检查杂质吸光度的方法, 选择在药品无吸收而杂质有吸收的波长处测定吸光度, 规定测得的吸光度不得超过某一限值, 通过控制杂质吸光度的大小, 控制杂质的限量。如肾上腺素中检查肾上腺酮, 肾上腺酮在310nm处有吸收, 而肾上腺素在此波长处无吸收, 《中国药典》中规定, 取本品加盐酸 (9→200) 制成每1m L中含2.0mg的溶液, 在310nm波长处测定, 吸光度不得过0.05, 即控制酮体的限量为0.06%。再如, 盐酸苯海索中检查哌啶苯丙酮、葡萄糖氯化钠注射液中检查5-羟甲基糠醛等特殊杂质《中国药典》中皆是采用紫外-可见分光光度法进行杂质检查。
有的杂质的紫外吸收光谱与药物的紫外吸收光谱在某波长处有重叠, 可以改变药物在某两个波长处的吸光度比值, 通过控制供试品溶液的吸光度比值来控制杂质的限量, 如《中国药典》中碘解磷定注射液中分解产物的检查, 就是这种情况。
3 紫外分光光度法应用于药物含量测定
紫外-可见分光光度法由于灵敏度较高, 不仅可用于常量组分的含量测定, 也可用于测定微量组分、超微量组分以及多组分混合物同时测定等, 在药物分析中主要用于原料药含量测定、制剂含量测定、含量均匀度和溶出度的检查等。
3.1 含量测定的主要依据
朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法含量测定的依据。朗伯-比尔定律是指单色光辐射穿过被测物质溶液时, 在一定的浓度范围内被该物质吸收的量 (A) 与该物质的浓度 (C) 和液层的厚度 (L) 成正比, 其关系如下式:
3.2 常用含量测定的方法
测定时, 除另有规定外, 应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照, 采用lcm的石英吸收池 (紫外光区) 或玻璃吸收池 (可见光区) , 以吸光度最大的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸光度读数, 以在0.3～0.7的误差较小。
3.2.1 吸收系数法
吸收系数法是利用待测物质的吸收系数与测得的一定浓度时的吸光度比较计算含量的方法, 又称绝对法。该法是目前应用最多、最普遍的方法。用本法测定时, 吸收系数通常应>100, 并注意仪器的校正和检定。
可按下式计算供试品中被测溶液的浓度:
3.2.2 对照品比较法
对照品比较法是采用在相同条件下分别配制供试品溶液和对照品溶液, 对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的 (100±10) %, 所用溶剂也应完全一致, 在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后, 按下式计算供试品中被测溶液的浓度:
式中, CX为供试品溶液的浓度;XA为供试品溶液的吸光度;CR为对照品溶液的浓度;RA为对照品溶液的吸光度。
3.2.3 标准曲线法
标准曲线法是紫外-可见分光光度法中最经典的方法。测定时, 先取与被测物质含有相同组分的标准品, 配成一系列浓度不同的标准溶液, 在相同条件下, 分别测定其吸光度。然后以浓度C为横坐标, 以相应的吸光度A为纵坐标, 绘制A-C曲线。在相同条件下, 测出供试品溶液的吸光度, 从标准曲线上便可查出与此吸光度值对应的供试品溶液的浓度。
由于标准曲线法对仪器的要求不高, 因此是紫外-可见分光光度法中简便易行的方法。
3.2.4 比色法
测定能吸收可见光的有色物质、无色但经显色反应可以生成有色的物质都可以采用本法在适宜的条件下进行测定。比色法通常称为光电比色法, 现代的比色分析采用分光光度计进行测定, 故又称可见分光光度法。
除另有规定外, 比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替, 对照品或供试品溶液, 然后依次加入等量的相应试剂, 并用同样方法处理。在规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度后, 按对照品比较法计算供试品浓度。如《中国药典》中利血平注射液、硫酸阿托品片等一些药物和制剂的含量采用比色法测定。
3.3 紫外-可见分光光度法对原料药的含量测定
《中国药典》中原料药的含量用百分含量表示。
对照品对照法:式中, CR为对照品溶液的浓度 (g/mL) ;AX为供试品溶液的吸光度;AR为对照品溶液的吸光度;m为称取的供试品重量 (g) ;D为供试品的稀释倍数;V为供试品初次配制的体积 (mL) 。如奥沙西泮等原料药的含量测定《中国药典》中采用此法。
吸收系数法:式中, E%11cm为供试品的百分吸收系数;其他符号意义同前。如对乙酰氨基酚等原料药的含量测定《中国药典》中采用此法。
3.4 紫外-可见分光光度法对制剂的含量测定
制剂的含量则用标示量的百分含量表示。
3.4.1 片剂的含量测定
由于片剂含量低, 且含辅料, 若采用原料药的方法测定含量则有干扰, 当片剂中主药在紫外-可见光区有特征吸收光谱, 则可采用灵敏度更高的紫外-可见分光光度法测定含量。如盐酸氟奋乃静为有机碱性药物, 《中国药典》中原料药采用非水溶液滴定法, 而片剂含辅料硬脂酸镁对非水溶液滴定法有干扰, 则采用紫外-可见分光光度法测定含量。
对照品比较法:
式中, S为标示量 (g/片) , 其他符号意义同前。如《中国药典》中甲氧苄啶片的含量测定采用此法。
吸收系数法:
式中符号意义同前。如《中国药典》中甲硝唑片的含量测定采用此法。
3.4.2 注射剂的含量测定
若注射剂中主药在紫外-可见光区有特征吸收, 当注射剂中无附加成分或附加成分不干扰, 则主药的含量测定可直接采用紫外-可见分光光度法测定含量;当附加成分有干扰, 则可采用消除干扰, 或利用主药与附加成分紫外吸收光谱的差异, 再进行紫外-可见分光光度法测定主药含量。
如《中国药典》中马来酸氯苯那敏注射液的含量测定采用吸收系数法。
4 含量均匀度和溶出度的检查
溶出度系指药物从片剂或胶囊剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。溶出度是固体制剂质量控制的一个重要指标。含量均匀度系指小剂量或单剂量的固体制剂、半固体制剂和非均相液体制剂的含量符合标示量的程度[2]。
当药物可用紫外-可见分光光度法测定含量的, 含量均匀度和溶出度的检查可采用紫外-可见分光光度法。如《中国药典》中吡哌酸片溶出度的测定和马来酸氯苯那敏片含量均匀度检查采用的就是紫外-可见分光光度法。
紫外-可见分光光度法含量均匀度检查的计算与含量测定计算相同, 只是结果判断方法不相同。
紫外-可见分光光度法不仅是化学药物的原料药和制剂分析常用的分析方法, 同时也用于中药、生物制品以及体内药物的质量分析。
参考文献
[1]孙莹, 吕洁.药物分析[M].北京:人民卫生出版社, 2009.
紫外可见分光光度计 篇9
本研究用波长190~800 nm的紫外-可见光扫描磁处理后的变质混浊柴油,研究光谱变化规律,为磁场处理混浊变质柴油的应用提供借鉴。
1 实验部分
1.1 实验试剂
新鲜0#柴油(淡茶绿色),茂名市官渡加油站提供。
混浊变质柴油制备:将5 L新鲜0#柴油放入10L广口透明玻璃容器内,底部放入约2 L垫底自来水,盖上玻璃盖后,上下剧烈振荡混合油水10次。然后将广口瓶放在阳光能够直射的南向玻璃窗旁,瓶盖斜放瓶口,留出瓶与大气相通的通道。每隔15 d剧烈振荡混合油水10次,90 d后形成黄棕色混浊变质柴油。
1.2 主要实验仪器和设备
UV—5800型紫外-可见分光光度计,上海元析仪器有限公司生产;THS—10精密型超级恒温槽,宁波天恒仪器厂生产;磁化反应装置,自行设计建造;光程50 mm的玻璃比色缸;胶头滴管,移液管,烧杯等。
1.3 实验方法
1.3.1 紫外-可见分光光谱分析方法
打开电源,启动应用程序,系统自检10 min。设定光谱扫描波长为190~800 nm,光通道裂缝宽度1nm,光谱行进步长1 nm。用光程10 mm的石英比色皿承装蒸馏水进行系统校零,然后对柴油样品进行紫外-可见分光光谱扫描,记录并整理数据。
1.3.2 磁处理方法
量取已恒温的150 m L柴油样品于磁化反应器的玻璃水浴夹套杯内,装上玻璃搅拌桨。设定好外循环水浴恒温器和搅拌器的温度和转速,接通电源,稳定5 min。开启磁化反应器,调整电流至对应的磁场强度,磁化反应到设定时间,装置如图1所示。
2 结果与讨论
2.1 磁场强度对混浊变质柴油吸收光谱的影响
在搅拌速度500 r/min、温度30℃和时间30min固定条件下,经20~100 m T磁场强度处理的混浊变质柴油与处理前的混浊变质柴油和新鲜柴油的紫外-可见光谱如图2所示。
由图2可知,在测量波长190~800 nm内,柴油样品在波长200~400 nm近紫外光区呈现明显的吸收峰。单环芳烃苯在波长254 nm有特征吸收峰,稠环芳烃其母体吸收谱带大于苯,在较大波长处有吸收峰[9]。由于新鲜柴油中依然存在着少量含双键与孤电子对的发色团如极性化合物,除可以进行π—π*跃迁,有较强的吸收,还可以进行n→σ*跃迁,n→σ*跃迁在可见光区有不太强的吸收,因而在450 nm附近出现了一个较低吸光度的吸收峰。混浊变质柴油与新鲜柴油相比,紫外-可见光谱发生了变化,190~800 nm范围内吸光值均有增强,这是因为柴油长时间放置在空气中,其中的轻组分挥发,加之柴油发生混浊变质生成含有极性基团的氧的胶质和不溶物等,相溶性变差,透光度下降,导致柴油吸光度增强,进而影响450 nm处出现的低吸光值的吸收峰被较强的吸光值所掩盖。混浊变质柴油经氧化后存在等不饱和生色团,以及助色团如—OR,—OH等,当这些非键电子与生色基团相连时,可以发生p—π共轭,使π—π*跃迁,吸收带红移。柴油中部分苯环体系和柴油中杂环化合物被助色团取代后波长增值,因此相应吸收带红移,大约在380 nm处出现红移的吸收峰[9]。混浊变质柴油颜色也因这些助色基团的存在发生助色效应,以及杂环化合物等不安定性组分氧化后形成深颜色不溶物,因此变质柴油颜色加深了[10]。有外加磁场存在的情况下,随着磁场强度的增加,影响柴油氧化安定性的芳环化合物和杂环化合物的吸光度逐渐降低。因为在外界磁场作用下,柴油分子磁矩与外磁场方向相反的电流得到增强,而磁矩与外磁场相同的分子电流受到削弱,产生与外磁场相反的附加磁场。磁化后的带有附加磁矩的柴油分子被迫按照一定的排列方式取向,改变了原来的位置,降低了柴油分子的团簇量而容易做有序流动,使得其在紫外-可见吸收光谱中的吸光值随着磁场强度增大而相应减小。本实验条件下,60 m T处理的变质混浊柴油的吸光度较未处理的有较为明显的降低,但是磁场强度超过60 m T、80 m T和100m T处理的吸光值继续降低效果变得不明显,原因是80 m T已接近该实验条件下的磁饱和,再继续增加磁场强度降低吸光值的效果变得不显著。经磁处理的变质混浊柴油在190~800 nm波长内的吸光度值仍明显高于新鲜柴油的数值。
2.2 磁化时间对混浊变质柴油吸收光谱的影响
在磁场强度60 m T、搅拌速度500 r/min、温度30℃条件下,经0~60 min磁处理后,混浊变质柴油与新鲜未经磁化处理的柴油的紫外-可见光谱见图3。
由图3可知,随着磁化时间由0逐渐增加至60min,影响柴油氧化安定性的芳环化合物和杂环化合物的吸光值逐渐降低。与2.1所述机理一样,柴油分子在磁场作用下获得外加磁矩,被迫按照一定的排列方式取向,改变了原来的位置,降低了柴油分子的团簇量,使整个柴油的光通过率变高。经15 min相对较短时间的磁化处理,混浊变质柴油的吸光值没有明显降低。由于柴油分子按照一定的排列方式取向做有序流动需要一定的时间,随着磁化时间的延长,经30 min磁化处理后吸光值有一定的降低。处理时间达到45 min和60 min后,混浊变质柴油的吸光值降低程度相对于处理时间低于30 min的明显。但是,由于混浊变质柴油逐渐接近于在相应实验条件下的磁饱和,经45 min和60 min磁化处理的柴油吸光值降低差距缩小。经过60 min的磁处理,变质混浊柴油的吸光度仍明显高于新鲜柴油的数值。
2.3磁化搅拌转速对混浊变质柴油吸收光谱的影响
在磁场强度60 m T、时间45 min、温度30℃的条件下,经0~1 000 r/min搅拌转速处理后,混浊变质柴油与新鲜未经处理的柴油的紫外-可见光谱,如图4所示。
由图4可知,随着磁化搅拌转速由0增至600r/min,影响柴油氧化安定性的芳环化合物和杂环化合物的吸光值略有降低。当搅拌转速达800 r/min,磁处理后的混浊变质柴油的吸光值明显下降,在1 000 r/min下处理的混浊变质柴油的吸光值较800r/min时的值略低一些。其原因是,磁场有迫使柴油分子重新按照一定的排列方式取向,降低柴油分子团簇量的效果,搅拌作用进一步强化了已经形成团簇的柴油分子间的剥离作用,搅拌速度越快,柴油分子运动加快,剥离效果越明显。但是,搅拌转速升至800 r/min以上,搅拌与磁场协同降低柴油分子的团簇量的效果接近极限,继续增加搅拌转速,作用效果减弱,混浊变质柴油的吸光值降低不显著。与2.1节和2.2节相同,虽然经过搅拌磁处理,混浊变质柴油的吸光值有较为明显的下降,但是吸光度仍明显高于新鲜柴油的数值。
2.4 磁化温度对混浊变质柴油紫外-可见光谱影响
在磁场强度60 m T、时间45 min、搅拌转速800r/min条件下,经30~60℃处理的混浊变质柴油与新鲜未经处理柴油的紫外-可见光谱,如图5所示。
由图5可知,随着磁化温度由30℃增至50℃,影响柴油氧化安定性的芳环化合物和杂环化合物的吸光值存在明显的随温度增加而降低的趋势。但是,经60℃处理的混浊变质柴油的吸光值略高于50℃下处理得到的数值。其原因是,随着温度升高,柴油分子热运动加剧,降低了分子间相对运动的摩擦力,即降低了柴油的表观黏度。另外,温度升高,柴油体积膨胀,低温时的柴油分子间团簇形式易被拆散,再在磁场迫使柴油分子重新按照一定的排列方式取向的协同作用下,柴油分子的团簇量大大降低。但是,磁化温度继续升高到60℃,分子整体热运动速度加快到一定数值,磁场还没来得及发挥最大作用,分子已被转移至相反方向,磁矩作用相反并且与热运动共同作用抵消了部分前期磁场作用效果,表现出吸光值降低效果较50℃处理的值偏高。说明,磁处理混浊变质柴油有温度和磁场的匹配关系。
2.5 磁化处理混浊变质柴油条件的优化与作用效果的时间稳定性
综合上述实验结果,优化磁化处理混浊变质柴油条件。考虑到实际应用中磁场有效且低能耗的要求,选择磁场强度60 m T、磁化搅拌速度800 r/min、温度50℃、时间45 min的综合处理条件。在此优化条件下处理混浊变质柴油,将磁化处理前后的紫外-可见光谱与新鲜柴油的进行对比,结果如图6所示。对磁化处理的新鲜柴油、未经磁化处理和经化处理的混浊变质柴油样品按照不同时间进行拍照,考察磁场作用效果的稳定性,结果如图7所示。
图6显示,经磁化处理的混浊变质柴油中,影响柴油氧化安定性的芳环化合物和杂环化合物的200~400 nm范围内的吸光值较处理前明显降低;图7照片显示,刚经过磁化处理的混浊变质柴油明显变澄清。但是吸光值在整个测试波长范围内(190~800nm)仍明显高于新鲜柴油的数值。
图7显示,经磁化处理后变澄清的变质柴油在室内敞口放置4 d,仍呈澄清状态,放置时间达到6d,变质柴油重新变混浊,而磁化处理后放置6 d的新鲜柴油仍呈澄清状态。其原因是,混浊变质柴油中的已经团聚的不安定组份的氧化生成物虽然经磁化处理解聚而增溶到柴油体系中,但是生成的氧化物极性较饱和碳氢组份的强,经长时间的放置,带有极性的氧化物逐渐聚拢在一起,重新在体系中析出,而使柴油回复混浊状态。磁致澄清的柴油是否阻塞火花塞?抗爆性能和燃烧性能是否良好?变质严重的柴油回炼前先经磁处理是否有意义?再添加稳定剂后柴油的安定性如何等工作还需大量研究工作。
3 结论
(1)在200~400 nm范围内,混浊变质柴油的吸光值随着磁场强度增大(20→100 m T)、磁化转速提高(400→1 000 r/min)、磁化温度升高(30→50℃)、磁化时间延长(15→60 min)而降低;在190~800 nm范围内,磁化处理的变质混浊柴油的吸光值仍明显高于新鲜柴油。
(2)优化的磁处理条件是:温度60℃、磁场强度60 m T、搅拌速度800 r/min、磁化时间45 min,在此条件下处理的混浊变质柴油在200~400 nm范围内的吸光值较处理前明显下降,变质柴油由混浊变澄清。在190~800 nm范围内,经磁处理的混浊变质柴油的吸光值仍明显高于新鲜柴油。
(3)变质柴油在优化磁处理后放置6 d后重新回复混浊状态,磁化处理的新鲜柴油和未经磁化的混浊变质柴油的色度经6 d放置后无明显变化。混浊变质柴油磁致澄清后能否继续当作发动机燃料用,磁处理对变质柴油的回炼、调和、储存是否有积极作用还需进一步研究工作。
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紫外可见分光光度计 篇10
1 仪器与试药
1.1 仪器
紫外-可见分光光度计 (北京普析UV-T6) 。
1.2 试药
齐墩果酸 (中国食品药品检定研究院, 批号:201206) ;肝速康片 (本校实验室自制) ;香草醛 (分析级) 、冰醋酸 (分析级) 、氯仿 (分析级) , 水为重蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 标准曲线制备
于105℃下对齐墩果酸对照品进行充分干燥, 精密称定10.1mg, 用少量甲醇溶液溶解后转移至10mL容量瓶中, 再用甲醇稀释至刻度, 摇匀使其完全溶解, 配制成浓度为1.01mg/mL的对照品溶液备用。
分别精密量取浓度为1.01mg/mL的齐墩果酸对照品溶液0、80、160、240、320、400μL, 置于干燥洁净的试管中, 放置室温下完全挥尽溶剂后, 于每支试管中加入高氯酸溶液3.2mL、5%香草醛-冰醋酸溶液, 置于70℃水浴上加热15min, 自然放冷后, 加入冰醋酸20mL, 摇匀。参照《中国药典》 (2010) 附录中的分光光度法试验要求, 于548nm波长处测定不同浓度对照品溶液的吸光度, 并进行空白试验。以齐墩果酸的不同浓度为横坐标, 吸收度A为纵坐标, 绘制其标准曲线。得到标准曲线方程为y=0.045 1x+0.013 6, 相关系数为r=0.999 7, 表明齐墩果酸在3.36~16.8μg·mL-1浓度范围内与吸收值呈良好的线性关系。
2.2 含量测定方法[3]
取3批肝速康片, 每批20片, 研成细粉后, 精密称取相当于10mg齐墩果酸的细粉约0.13g, 加入20mL氯仿充分溶解后超声15min, 室温放置冷却后, 用滤纸滤过, 收集残渣, 再用10mL氯仿洗涤3次。将滤液与洗涤液混合均匀后置于水浴上蒸干, 加入5mL甲醇溶液, 于水浴上加热并充分溶解, 室温放冷后转移至10mL容量瓶中, 再加入甲醇溶液至刻度, 混匀。精密吸取上述溶液60μL, 按照对照品溶液配制方法, 自“置于干燥洁净的试管”起同法测定其吸收度, 记录实验结果, 计算齐墩果酸含量。结果见表1。
2.3 精密度试验
取肝速康片粉末约0.13g, 精密称定, 按照“2.2”项下方法制备供试品溶液, 在相同条件下连续测定5次, 记录实验结果。计算得到RSD为0.36%, 表明该方法精密度良好。结果见表2。
2.4 重复性试验
取肝速康片细粉6份, 精密称定, 按照“2.2”项下方法制备供试品溶液, 在相同条件下采用紫外-分光光度法测定吸收度, 并计算齐墩果酸含量, 结果表明肝速康片中齐墩果酸平均含量为18.214mg/片, RSD为0.48%, 表明该方法重复性良好。结果见表3。
2.5 回收率试验
根据加样回收率测定法的要求, 精密称定同批样品6份, 测定其中齐墩果酸含量, 依次精密加入齐墩果酸对照品适量, 采用紫外-分光光度法测定齐墩果酸含量, 计算加样回收率[4]。经测定, 齐墩果酸的平均回收率为98.04%, RSD为1.37%, 结果表明该方法回收率符合含量测定方法要求。结果见表4。
2.6 稳定性试验
取供试品溶液适量, 分别于放置0、1、3、6、12、24h后各测定1次, 吸光度依次为0.495、0.492、0.492、0.494、0.491、0.493, RSD为0.29%。结果表明该供试品溶液的吸光性能在24h内保持稳定。
3 讨论
《中国药典》中肝速康胶囊质量标准项下采用的是回流提取法, 本研究在预实验处理供试品时, 比较了超声提取法和回流提取法的提取效率, 结果表明, 二者提取效果相当。由于超声提取法简便易行, 且有机试剂用量少, 故以其为提取方法。
本研究采用紫外-可见分光光度法测定肝速康片中齐墩果酸的含量, 精密度、重复性、稳定性、回收率均符合药典中含量测定的相关要求, 为肝速康片的质量控制提供了科学依据。
参考文献
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