维生素C测定（共12篇）
维生素C测定 篇1
据记载: “神农尝百草之滋味,水源之甘苦,令民知所避就,当此之时,日遇七十二毒,得茶而解”。现代医学研究还表明:绿茶具有抗衰老、抗菌、降血脂、瘦身减脂、防龋齿、清口臭、防癌、美白八大功能及防紫外线作用、改善消化不良情况等[1]。且有研究表明绿茶中维生素C(Vc)含量相当丰富,对绿茶所具有的多种功能起到重要作用[2]。
维生素C又名抗坏血酸,能防止坏血病,可增加人体免疫力,具有抗衰老作用;也常作为营养强化剂、抗氧化剂等用于生产实践中[2]。结晶抗坏血酸在空气中稳定,但它在水溶液中易被空气和其他氧化剂氧化,生成脱氢抗坏血酸;在碱性条件下易分解,见光加速分解;在弱酸条件中较稳定。目前Vc含量的测定一般有碘量法、荧光法和2,4-二硝基苯肼法等[3,4,5]。这些方法虽各有特点,但操作过程复杂、所用试剂不稳定,费用高,速度慢。紫外分光光度法是Vc快速测定的方法,简便、准确,不受其它还原性物质等成分干扰。
本文为探明海南省白沙县本地所产绿茶中Vc含量的高低,采用紫外分光光度法直接测定Vc的含量,结果表明白沙县所产绿茶中Vc含量很高。
1 材料与方法
1.1 材料
752紫外可见分光光度计,上海现科仪器有限公司;AE100电子分析天平,梅特勒-托利多仪器上海有限公司;CS501G超级恒温水浴箱,上海市实验仪器厂有限公司。
海口市售的“白沙”牌绿茶,生产厂家为海南农垦白沙茶叶股份有限公司,生产日期为2011年8月21日。
100 μg/mL Vc标准溶液:精确称取抗坏血酸10 mg,加2 mL 10% HCl溶解,并以新煮沸并冷却的双蒸水定容至100 mL棕色容量瓶中,现用现配。抗坏血酸(上海国药集团化学试剂有限公司,纯度99.97%),盐酸为分析纯。实验用水为双蒸水。
1.2 方法
1.2.1 标准曲线的绘制
吸量管分别吸取100 μg/mL Vc标准溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 、6.0、7.0 mL于50 mL容量瓶中,用1%HCl盐酸溶液定容[3,4,5,6,7],摇匀,以0.0 mL Vc溶液为空白作参比,在242 nm波长下,用1 cm石英比色皿测定吸光度。将数据进行回归处理。结果表明,Vc在浓度2~14 μg/mL范围内呈线性关系,见图1所示。回归方程为:
A=0.0585C+0.0041,r=0.9999
1.2.2 样品中Vc的测定
称取1 g绿茶置于研钵中,加入适量1%盐酸溶液,磨成匀浆,移入50 mL容量瓶中,用1%盐酸溶液稀释至刻度,混匀,抽滤,滤液中加入0.2 g活性炭,振摇2~3 min,再次抽滤,滤液以1%盐酸定容至50 mL。吸取上述样品滤液0.5 mL于50 mL容量瓶中加入1%HCl稀释定容至刻度,摇匀,待测定。
2 结果与讨论
2.1 吸收曲线的绘制
准确吸取3.0 mL的Vc标准溶液于50 mL容量瓶中,以1%HCl盐酸溶液定容,摇匀,然后以试剂为空白置1 cm石英比色皿中,在210~320 nm的波长范围内多次进行光谱的连续测定吸光度,得到吸收曲线,确定最大吸收波长在242 nm处,见图2所示。
2.2 温度的选择[6,7,8,9,10]
用吸量管加3.0 mL Vc标准溶液于50 mL容量瓶中,加入1%HCl稀释至刻度,摇匀。用1 cm比色皿,以双蒸水为参比溶液,依次在20、40、60、70、80、90、100 ℃中放置10 min,经冷却后测定在242 nm波长下吸光度,结果表明,70 ℃时分解速度较快,说明温度较高时Vc极易被氧化而失去活性,故应在较低温度下测定Vc含量。见图3所示。
2.3 反应时间的选择[6,7,8,9,10]
用吸量管加3.0 mL Vc标准溶液于50 mL容量瓶中,再加入1%HCl稀释至刻度摇匀。用1 cm比色皿,以双蒸水为参比溶液,在242 nm波长下,在每间隔10 min下依次测定4 h内的吸光度。结果表明,1 h内吸光度没有大的变化。
2.4 样品测定结果
在分光光度计上,以0.0 mL Vc标液为空白进行参比,在242 nm处用1 cm石英比色皿,测定样品吸光度A,方法参照文献[5,8]。结果见表1。
2.5 精密度与加标回收率的测定[8,9,10]
按照实验方法平行处理得到5份绿茶样品溶液,平行测定吸光度值,计算精密度;及分别加入一定量Vc标准溶液,平行测定,计算加标回收率。结果表明,RSD为0.05 %,加标回收率在96.3%~107.5%内,则该方法精密度好,回收率较高,结果见表2。
2.6 讨论
采用紫外分光光度法直接测定了海南白沙绿茶中维生素C的含量,其方法简便、快速、准确。不需基准物质和标定,所用试剂价格低廉、易得,是一种快捷、准确的维生素C检测方法。实验测定的海南省白沙本地所产绿茶中Vc平均含量高达31.67 mg/g,在绿茶的不同亚属种类中,该地所产绿茶Vc含量也是很高的。这为人们合理利用白沙绿茶提供了可靠的理论依据;且人们完全可以通过饮用绿茶来补充Vc,其含量高低,与被测产品的产地、品种、生长环境等因素有关,如海南白沙地区适宜的气候与白沙陨石坑地区独特的土壤条件,使所产绿茶品质优良,营养成分高,特别是Vc含量很高,应扩大开发利用力度。
参考文献
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[2]罗孟君,熊海蓉,黄忠良,等.绿茶有效成分研究进展[J].河南化工,2011,28(1):26-28.
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[4]郑玉聪,谢狄霖,张维镇.茶叶中维生C的荧光测定法[J].福建分析测试,2005,14(4):2307-2308.
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[9]陈玉锋,庄志萍.紫外分光光度法测定橙汁中维生素C的含量[J].安徽农业科学,2011,39(1):236-240.
[10]武汉大学.分析化学实验[M].第4版.北京:高等教育出版社,2006:228-231.
维生素C测定 篇2
维生素c能去除黑色素吗?如何补充维生素c
肌肤真皮层中含有大量的胶原质，它赋予皮肤力量，并维持皮肤的结构。而维生素C就可发挥其抗氧化和抗老化的作用，使胶原质保持灵活性，并加强胶原蛋白的增生，起到防皱去皱的效果。
如何补充维生素c
1、第一层：鲜枣、猕猴桃、柚子等。
在以上这类食物中，每100克中就有超过100毫克的维生素C在里面。而且，值得注意的是，猕猴桃是维生素C之王。
2、第二层：青椒、番茄、草莓、黄瓜、柑橘和菜花等。
这些食物，每100克里面就有超过50毫克的维生素C，是补充维生素C非常有用的食物。
3、第三层：小白菜、菠菜、苋菜、弯头、萝卜等。
4、新兰花。
维生素C含量最多的蔬菜是西兰花，其含量是西红柿维生素C含量的6倍以上。为了保持西兰花当中的维生素C含量，在烹调的时候要注意不要用翻炒的方式，最好用凉拌或者涮锅的方式来煮食。
5、维生素C是水溶性维生素，每个3到4小时就要重复补充来维持体内的维生素C含量。另外，在早午餐之后补充维生素C，其效果也会更好。
6、维生素C不宜长期过量第服用，建议每天摄取100毫克即可起到增强抵抗力和保养皮肤的作用。
健康小贴士：
1、蔬菜晒太久、切开太久、加热太久都流失。
许多蔬菜、水果一旦切开或切碎暴露在空气中，维生素C就被氧化破坏。就算不切开，让太阳直照、浸水等，也会让果蔬的维生素C大幅度减少。在烹制中，加热时间越长，维生素C的损失就越严重。
2、香烟“吸”走维生素C。
烟雾中的焦油等有害成分会大量耗损维生素C，每抽一根烟就会消耗体内25毫克的维生素C。如果是被动吸烟，维生素C的损耗量更大。所以有抽烟习惯或是二手烟被动吸入者平时应多吃西红柿等维生素C含量丰富的食物。
维生素C测定 篇3
摘要：采用2，4—二硝基苯肼比色法、碘量法、荧光法测定临县酸枣、临县牙枣、柳林木枣、交城骏枣、太谷壶瓶枣这5种枣果中维生素C的含量，结果表明：3种方法中无论采用哪种方法测定这5种枣，始终都是临县酸枣中维生素C含量最高，其余依次为太谷壶瓶枣、柳林木枣、临县牙枣和交城骏枣；用不同方法测定同种枣中维生素C含量时，临县牙枣用碘量法测得最高且为79.2 mg/kg，而测定其他枣时，均为2，4-二硝基苯肼比色法测定枣中维生素c含量最高，其次是碘量法，最后为荧光法。
关键词：红枣；维生素C；测定
文章编号：1005-345X（2016）04-0005-02 中图分类号：S665.1 文献标识码：A
红枣中含有人体所需的七大营养物质，如糖、氨基酸、脂肪、维生素和钙、磷、铁以及生理活性物质环磷酸腺苷等，而维生素为其中一大类且所含维生素C最多。近年来，测定红枣中维生素C含量的方法多样且测定品种繁多，本课题采用2，4-硝基苯肼比色法、荧光法、碘量法这3种方法来测定临县酸枣、临县牙枣、柳林木枣、交城骏枣、太谷壶瓶枣这5种枣果中维生素C的含量并进行方法适用性的比较分析，以便更好的用于实际操作。
1材料与方法
1.1试验材料
试材为临县酸枣、临县牙枣、柳林木枣、交城骏枣和太谷壶瓶枣，均产自山西省当地农家。
1.2试剂及仪器
供试药剂有2，4-二硝基苯肼、硫酸、草酸、硫脲、盐酸、活性炭、抗坏血酸、碘化钾、可溶性淀粉、无水碳酸钠、偏磷酸、冰乙酸、乙酸、乙酸钠、硼酸、邻苯二胺、百里酚蓝、氢氧化钠、碘、硫代硫酸钠，均为分析纯。
试验仪器包括：循环水式多用真空泵SHZ—D（Ⅲ），由郑州科丰仪器设备有限公司生产；数显恒温水浴锅HH—6，由国华电器有限公司生产；可见分光光度计VIS-723N，由北京瑞利分析仪器有限公司生产；电热鼓风干燥箱DHG-9145A，由上海凯朗仪器设备厂生产；电子天平BSA224S，由赛多利斯科学仪器（北京）有限公司生产；海尔冰箱BCD-252KS A，由青岛海尔股份有限公司生产；960荧光分光光度计INESA，由上海仪电分析仪器有限公司生产。
1.3试验方法
采用碘量法、2，4-二硝基苯肼比色法、荧光法。
2结果与分析
2.1同一测定法对不同品种枣果中维生素C含量的测定结果
2.1.1碘量法测定 由图1可知，采用碘量法测得枣果中维生素C的含量由高到低依次为：临县酸枣、太谷壶瓶枣、柳林木枣、临县牙枣、交城骏枣。临县酸枣维生素c含量最高为184.9mg/kg，交城骏枣维生素C含量最低为60.75 mg/kg。碘量法测定比较直接、方便，适用于及时滴定及课堂教学，但测定时液体与空气接触时间较长，维生素C被氧化，变色不是很明显，结果准确性相对较差。
2.1.2
2，4一二硝基苯肼比色法测定 由图2可知，2，4-二硝基苯肼比色法测定枣果中维生素c含量的结果为：临县酸枣>太谷壶瓶枣>柳林木枣>交城骏枣>临县牙枣。临县酸枣维生素C含量最高为192.1 mg/kg，临县牙枣最少为72.67 mg/kg。2，4-二硝基苯肼比色法方法比较简单、迅速、准确率高，不需要借助特殊仪器，并适用于各种食品及基础部门检测，但每次滴定时需处理试剂且较费时。
2.1.3荧光法测定 由图3可知，使用荧光法测得枣果中维生素C的含量由大到小依次为：临县酸枣、太谷壶瓶枣、柳林木枣、临县牙枣、交城骏枣。荧光法分析灵敏度高，选择性强且使用简便，但在使用之前，切记要预热。
2.2不同方法对同一品种枣果中维生素C含量的测定
由图4可知，不同方法测得同一品种枣果中维生素C含量不尽相同。临县酸枣测得维生素C含量由高到低的方法依次为：2，4-二硝基苯肼比色法、碘量法、荧光法，最高维生素C含量为192.1 mg/kg；临县牙枣碘量法、2，4-二硝基苯肼比色法、荧光法，最高维生素C含量为79.2 mg/kg；柳林木枣依次为：2，4-二硝基苯肼比色法、碘量法、荧光法，最高维生素C含量为146.4 mg/kg；交城骏枣依次为：2，4-二硝基苯肼比色法、碘量法、荧光法，最高维生素C的含量为77.02 mg/kg；太谷壶瓶枣依次为：2，4-二硝基苯肼比色法、碘量法、荧光法，最高维生素C含量为191.35 mg/kg。
3结论与讨论
采用碘量法、2，4-二硝基苯肼比色法、荧光法3种方法对5个枣品种中维生素C含量的测定，比较得出各品种中维生素C含量排序为：临县酸枣>太谷壶瓶枣>柳林木枣>临县牙枣>交城骏枣。而不同方法测定同一品种枣果中维生素C含量由高到低的方法依次为：2，4-二硝基苯肼比色法、碘量法、荧光法。
维生素C测定 篇4
1 资料与方法
1.1 材料
收集健康体检者血清标本, 所有入选者的尿液检查维生素C均为阴性。维生素C (丹东医创药业有限责任公司, 20120410) , 0.9%氯化钠注射液 (山东鲁抗辰欣药业有限公司, 1212055301) , 尿酸测定试剂 (由四个厂家提供, 命名为A、B、C、D) , 校准品和质控品 (英国朗道实验诊断有限公司, 503UE) , 全自动生化分析仪 (日本东芝公司, TBA-40FR) 。
1.2 方法
1.2.1 仪器校准
用校准品校准生化分析仪, 用质控品对全自动生化分析仪进行质量控制, 然后进行后续的实验, 测定参数完全参照试剂说明书进行。
1.2.2 实验方法
取收集的血清4 ml, 加入维生素C注射液使其浓度为200μmol/L, 快速混匀。然后从上述血清中吸取2 ml, 加入等体积的血清, 得到含100μmol/L维生素C的血清, 同法稀释得到50μmol/L的血清, 然后在生化分析仪上测定尿酸的浓度。
1.3 数据分析
数据模拟室内质量控制进行分析, 采用Moncia改良质控图, 以血清原液次检测平均值为模拟靶值 (T) , 分别以T±0.8CCV×T和T±1.5CCV×T作为本次实验警告值, 即为临床可接受值和临床最大允许值[6]。不同厂家在维生素C干扰下测定值比较采用t检验。
2 结果
2.1 维生素C对尿酸干扰测定
靶值为8.82 md/dl, 临床可接受值 (8.42~9.52) md/dl和最大允许值 (7.94~10.01) md/dl。结果显示, 当维生素C浓度为50μmol/L和100μmol/L, 尿酸的测定基本不受干扰, 检测值在临床可接受范围内。当维生素C浓度为200μmol/L, 检测值全部超出警告范围。详见表1和图1。
2.2 不同品牌尿酸试剂比较
当维生素C浓度为50、100μmol/L时, 尿酸的检测不受干扰, 几个品牌的试剂检测值均在可接受范围内。统计结果显示, 不同品牌之间检测值比较, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。详见表2。
3 讨论
维生素C是一种天然抗氧化剂, 对细胞膜和亚细胞器具有保护作用, 可以增加机体免疫功能[7]。维生素C结构里含有不饱和键, 极易被氧化, 因而它可还原尿酸测定过程中生成的中间产物过氧化氢及最终产物苯醌亚, 从而干扰尿酸测定, 导致血清尿酸假性降低。抗坏血酸氧化酶可特异地催化维生素氧化, 因而能对抗维生素C的干扰。但抗坏血酸氧化酶价格昂贵, 稳定性较差, 因而造成不同试剂或批次间差异较大[8,9]。
本研究结果显示, 当维生素C浓度为50μmol/L和100μmol/L, 尿酸的测定基本不受干扰, 检测值在临床可接受范围内。当维生素C浓度为200μmol/L, 检测值全部超出警告范围。说明在维生素C超过200μmol/L时, 抗坏血酸氧化酶不能完全消除维生素C的干扰。临床上采用尿酸酶过氧化物酶法检测时, 当尿酸浓度低于120μmol/L (2 mg/dl) 认为有低尿酸血症。而维生素C浓度增大时, 试剂检测值低于此值。因此, 当患者尿酸检测值低于限值时, 不能妄下诊断。应检查或询问患者是否服用维生素C, 以免造成误诊。另外由于维生素C不稳定, 极易被氧化破坏, 因此在临床检测过程中检测值不稳定可能是由于血清样本中维生素C变化所致。同时当维生素C浓度为50、100μmol/L时, 几个品牌的试剂检测值均在可接受范围内。统计结果显示, 不同品牌之间检测值比较差异均有统计学意义 (P<0.05) , 说明不同品牌对维生素C干扰消除能力不同, 因此选择合适的试剂盒进行检测也是至关重要的。
综上所述, 维生素C可干扰尿酸的测定, 造成检测结果偏低。而维生素C在临床上应用比较广泛, 为避免可能出现误导, 因此在实际应用中应充分考虑维生素C带来的干扰。
参考文献
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[8]Smirnoff N.Vitamin C:the metabolism and functions of ascorbic acid in plants[J].Adv Bot Res, 2011, 59 (2) :107-177.
维生素C美白秘诀 篇5
蔬菜：
荠菜：100克荠菜含180毫克维生素C
包心荠菜：100克包心荠菜含94毫克维生素C
青辣椒：100克青辣椒含78毫克维生素
菠菜：100克菠菜含60毫克维生素
花椰菜：100克花椰菜含59毫克维生素
水果：
番石榴：100克番石榴含180毫克维生素
猕猴桃：100克猕猴桃含75毫克维生素
木瓜：100克木瓜含52毫克维生素
荔枝：100克荔枝含49毫克维生素
鲜橙：100克鲜橙含46毫克维生素
维生素C的吸收
吃入的维生素C通常在小肠上方(十二指肠和空肠上部)被吸收，而仅有少量被胃吸收，同时口中的黏膜也吸收少许。
从小肠上方被吸收的维生素C，经由门静脉、肝静脉输送至血液中，并转移至身体各部分的组织。
当人吃入维生素C之后，脑下垂体、肾脏的维生素C浓度最高，其次是眼球、脑、肝脏、脾脏等部位。当体内维生素C总储存量小于300毫克时，就有发生坏血病的危险，人体最大的储存量为毫克。
小肠的吸收率视维生素C的摄取量不同而有差异。当摄取量在30-60mg时，吸收率可达100%;摄取量为90mg时，吸收率降为80%左右，摄入量为1500mg时降为49%，摄取量为3000mg时降为36%，摄取量12000mg时降为16%。
吸收率除了受到摄取量影响外，也会受到发烧、压力、长期注射抗菌素生素或皮质激素等影响而降低。也因饭后和空腹而有所不同，因个人摄取的差异也有不同。
根据吸收率的大小，维生素C较有效的摄取，以一日三次、餐后马上摄取为佳，而且这样也可预防因高剂量的维生素C所带来的副作用。
胃肠道吸收，主要在空肠。蛋白结合率低。以腺体组织、白细胞、肝、眼球晶体中含量较高。人体摄入维生素C每日推荐需要量时，体内约贮存1500mg，如每日摄入200mg维生素C时，体内贮量约2500mg。
维生素C的代谢
维生素C在体内的代谢过程及转换方式，仍无定论，但可以确定维生素C最后的代谢物是由尿液排出。如果尿中的维生素C的浓度过高时，可让尿液中酸碱度降低，防止细菌孳生，所以有避免尿道感染的作用。
草酸是维生素C的其中一个代谢产物，它的排出量因人而异，平均一天有16-64MG的草酸由尿中排出。一般人担心 过多的草酸会造成结石，其实身体中草酸的含量，除一部分由维生素C代谢而来外，其余大部分是直接从食物中摄取，或是由氨基酸类食物代谢所产生。
由实验得知，即便是摄取高量的维生素C，尿中草酸量并不会因此而增加，因此无须担心维生素C带来结石的问题。
维生素C经由肾脏排泄，所以肾脏具有调节维生素C排泄率的功能。当组织中维生素C达饱和量时，排泄量会增多;当组织含量不足时，排泄量则减少。肝内代谢，极少量以原形或代谢产物经肾排泄。当血浆浓度大于14μg/ml时，尿内排出量增多。可经血液透析清除。
注意事项
维生素C测定 篇6
维生素C有什么美容作用？
祛除色斑
维生素C能帮助肌肤抵御紫外线侵害，避免色斑产生，同时亦可抑制代谢废物转化成有色物质，从而减少黑色素的形成。而夏天能预防日晒后肌肤受损，促进新陈代谢，让已形成的黑色素排出，淡化斑点。
褪去暗淡
维生素C不仅能改善因血液循环变慢而出现的肌肤暗沉，更能够帮助肌肤锁水，避免因缺水引发的蜕皮与紧绷。同时，亦可加强肌肤抵御外界侵害的能力，避免肌肤疲倦、暗淡。
抵抗松弛
在城市环境与工作压力下，肌肤极易变得更为脆弱。持续使用含有维生素C成分的美容品，可促进胶原蛋白增生，令肌肤更富有弹性。
影响维生素C功效的因素是什么？
维生素C的性质极为敏感，一遇到阳光、空气或水就易发生氧化，从而失去作用。要维护维生素C的功效，最好的方法就是在最短的有效期间内使用，以确保品质稳定始终如一。一般更建议将维生素C以衍生物的形式添加在护肤品里，不容易发生变质或失效。
维生素C怎样提炼至保养品中？
维生素现在多以水、粉、胶囊等多种形式保存在保养品中，这样的形式能够使其安定地存于护肤品中，直到涂上肌肤时，还能保持良好的效能。有些美容品的维生素C粉，需要混合精华液一起用，或将粉末变成乳液（外观是粉末，抹上肌肤就变成乳液）等多种形式。粉末状是维生素C最常见的保存形式。
蔡文琪
sisley全国培训经理
曾在著名时尚杂志、电视、报纸媒体、行业美容交流会多次分享和畅谈美丽心得与保养趋势，在国内有着近十年外资一线品牌的培训与教育工作经验。
“左旋维生素C的被吸收能力要远远大于任何其他形式的维生素C。因而特别向大家推荐sisley美白亮彩精华液，特别含有5%浓度的左旋纯维生素C，令肌肤恢复白皙均匀有光泽的状态。”
Q1吃维生素C能美白吗？
A理论上可以，但实际却有一定难度。人体对于人工合成的维生素C并没有很高的吸收度，且长期服用化合维生素C会让身体产生耐药性。建议大家多吃维生素C含量高的水果蔬菜。
Q2用VC片做面膜对皮肤好吗？有什么副作用吗？
理论上，VC粉末加水做面膜，有提亮肤色的作用。而从化妆品配方的常识来说，维生素C药片的分子较大，一般护肤品配方里的分子都要足够小才可以被肌肤吸收。这种方法也没有经过肌肤耐受性和敏感性测试，不建议这样使用。
Q3哪些食物含有维生素C?
A除众所周知的猕猴桃、柠檬、橙子、橘子、草莓外，再向大家推荐蔬菜界的VC之王——西兰花与红薯。前者的VC含量是西红柿的6倍之多，而红薯每百克含维生素C30毫克，远超过苹果、葡萄、桃、梨等水果。
Q4维生素C适合白天擦还是夜晚擦？
A在众多美白成分里，只有果酸、A酸不建议白天使用。维生素C衍生物不具有光敏性，同时由于具有抗氧化功效，可以增加肌肤的抗紫外线效果，所以更适合白天使用。
维生素C可以这样运用于美容品中
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6LA ROCHE-POSAY活力维生素C眼霜
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维生素C测定 篇7
维生素C包含L-抗坏血酸、L-脱氢抗坏血酸、二酮基古洛糖酸等三种形式,三种形式在一定的条件下可以相互转换[2]。测定维生素C含量的方法很多,通常采用2,6-二氯靛酚滴定法、2,4-二硝基苯肼法、荧光法、极谱法、高效液相色谱法等[3]。样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸,与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎,根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比,进行比色测定得到样品中维生素C总量,2,4-二硝基苯肼法测定维生素C总量较其他方法更准确[4]。
由于维生素C性质不稳定,暴露在光线下极易被破坏,然而通常情况下大多数测定维生素C含量的实验是在没有避光的情况下进行的,使得测定得到的结果偏小。本实验采用2,4-二硝基苯肼法作为维生素C含量的测定方法,对避光和透光情况下柑橘的维生素C总量进行测定,分析了两种情况下维生素C含量之间的关系。
1 实验部分
1.1 实验仪器
可见分光光度计(7200型),龙尼柯(上海)仪器有限公司;捣碎机(DS-1),江苏省金坛市金南仪器制造有限公司;恒温水浴箱(HWS-28型),上海齐新科学仪器有限公司;电子天平(BS224S型),北京赛多利斯科学仪器有限公司
1.2 实验试剂
4.5 mol/L硫酸:量取250 mL浓硫酸,慢慢加入到700 mL蒸馏水中,冷却后用水稀释至1000 mL;85%硫酸:小心加入900 mL浓硫酸于100 mL水中;2,4-二硝基苯肼溶液:在电子天平上称取2 g 2,4-二硝基苯肼,将其溶解在100 mL 4.5 mol/L硫酸溶液后过滤,并存储于冰箱内备用,每次使用前必须过滤;不同浓度的草酸溶液:溶解20 g草酸于700 mL蒸馏水中后稀释至1000 mL,制备得到20 g/L的草酸溶液;稀释500 mL 20 g/L草酸溶液至1000 mL,制备得到10 g/L的草酸溶液;不同浓度的硫脲:溶解硫脲5 g 于500 mL 10 g/L的草酸溶液中,制备得到10 g/L的硫脲溶液;溶解10 g硫脲于500 mL 10 g/L的草酸溶液中,制备得到20 g/L硫脲溶液;抗坏血酸标准溶液:称取100 mg纯抗坏血酸溶解于100 mL 10 g/L草酸溶液中,此溶液每毫克相对于1 mg抗坏血酸;活性炭:将100 g活性炭加到750 mL 1 mol/L的盐酸溶液中,在水浴上煮沸回流1～2 h,过滤,水洗数次直至滤液无Fe3+(用20 g/L的亚铁氰化钾与盐酸(1+99)等量混合液检查),然后置于105 ℃的烘箱中烘干备用。
1.3 试样
柑橘样品11月中旬采自泉州一橘园,选进全红,大小均匀的柑橘。
1.4 标准曲线绘制
在电子天平上称取2 g处理过的活性炭置于50 mL抗坏血酸溶液中,振摇1 min左右后过滤,取10 mL滤液放入500 mL容量瓶中,加入5.0 g硫脲,用10 g/L草酸溶液稀释至刻度,得到此溶液中抗坏血酸的浓度为20 μg/mL。吸取上述溶液5 mL、10 mL、15 mL、20 mL、25 mL、30 mL、40 mL、50 mL置于100 mL的容量瓶中,用10 g/L的硫脲溶液稀释至刻度。每个容量瓶中对应的抗坏血酸浓度分别为1 μg/mL、2 μg/mL、3 μg/mL、4 μg/mL、5 μg/mL、6 μg/mL、8 μg/mL、10 μg/mL。
上述标准系列中每一浓度的溶液均取3份,每份4 mL,分别置于三支试管中,其中一支作为空白,在其余试管中各加入1.0 mL 2,4-二硝基苯肼,将所有试管放入37 ℃±0.5 ℃的恒温水浴箱中保温3 h。保温3 h之后取出,除空白试管外,将所有试管放入冰水中。空白试管冷却至室温后向其加入1.0 mL 2,4-二硝基苯肼溶液,常温下放置10～15 min后放入冰水内。向每一支试管里面加入5 mL 85%的浓硫酸,滴加时间至少要需要1 min,同时边滴边摇试管。
将试管自冰水中取出,在室温下放置30 min后进行比色。选用1 cm比色皿,以空白液调零点,于最大波长处测定吸光值。
1.5 样品的处理
1.5.1 鲜样的制备
在避光的情况下迅速将柑橘去皮、去籽并将其置于捣碎机中打成匀浆,称取两份100 g鲜样于不同的烧杯中。一份在完全透光的情况下,向鲜样中加入100 g 20 g/L草酸溶液,用玻璃棒搅拌均匀,在电子天平上称取20 g匀浆倒入100 mL的容量瓶,用10 g/L草酸溶液稀释至刻度,摇匀备用。另一份在暗室中按照上述方法制样。
1.5.2 样品还原型抗坏血酸的氧化处理
分别在透光和避光的情况下,量取25 mL上述溶液,加入2 g活性炭,振摇1 min后过滤,弃去最初几毫升滤液。量取10 mL此氧化提取液,加入10 mL 20 g/L硫脲溶液,混匀。
1.5.3 样液的比色测定
于三支试管中各加入4 mL氧化处理后的稀释液,分别在透光和避光情况下按绘制标准曲线方法进行操作测定。
1.5.4 维生素C总量的计算
式中:X——样品中总抗坏血酸的含量,mg·(100g)-1
c——由标准曲线上查得到的“样品氧化液”中总抗坏血酸的浓度,μg/mL;
V——试样用草酸溶液定容的体积,mL
F——样品氧化处理过程中稀释的倍数
M——样品的质量,g
2 结果与讨论
2.1 最大吸收峰的选择
维生素C在草酸溶液中的测定波长一般在495～540 nm范围内,按标准曲线配置方法配置一标准抗坏血酸溶液,以空白试管样液调零,置于1 cm比色皿中,扫描波长为485～535 nm,由图1可以看出,草酸溶液中维生素C在520 nm处有最大吸收峰,故选用520 nm作为测定维生素C的最佳波长。
2.2 标准曲线的绘制
每一组标准系列维生素C溶液以该组空白液调零点,在520 nm 波长处测定各标准溶液的吸光值。表1中列出了维生素C溶液标准浓度与对应吸光度数据。
由表1可以看出,1号试管和2号试管每次平行测定两次溶液的吸光度,以确保每次测定维生素C的稳定性。将四组测得的数据进行处理,得到柑橘汁中维生素C含量与吸光度关系的标准曲线,如图2所示。
以吸光度值A作为纵坐标,维生素C溶液浓度作为横坐标绘制标准曲线。对维生素C在1～10 μg/mL浓度范围内,以520 nm 作为测定波长符合朗伯·比尔定律,计算得到线性回归方程:A=0.0298c-0.0105,相关系数r=0.9944,表明维生素C的浓度与吸光度呈良好的线性关系。
2.3 两种情况下样品的测定
按照1.5中的方法对样品进行处理,在避光和透光的情况下运用本方法对样品中维生素C的吸光度进行测定,以空白试管液做参比,两种不同条件下测定结果见表2。
由表2可知,所测柑橘中维生素C含量在正常的范围内[5],柑橘中维生素C含量差异受产品的产地、品种、生长环境以及测定操作误差等因素有关[6]。泉州产柑橘在避光和透光两种情况下测定维生素C的平均含量分别为25.43 mg/100g、23.18 mg/100g,两者之间的比例关系为:X避光=1.097X透光。
3 结 论
维生素C具有较强还原性,容易受到光的照射而被破坏[7],通常情况下测定各类食品的维生素C都要求在避光的条件中进行,但在实际操作过程中很难做到,光的作用引起的误差应该引起足够的重视。本文通过对柑橘中维生素C在避光和透光情况下,保证其他测定条件一致时按照2,4-二硝基苯肼法对其含量进行测定,测得柑橘中维生素C的总量分别为25.43 mg/100g、23.18 mg/100g,得到避光和透光时维生素C含量之间的关系式:X避光=1.097X透光。这样就保证了在测定维生素C时可以在不避光的情况下进行测定,省去了避光情况下测定维生素C含量的繁琐,通过该关系式进行校正得到准确度更好的维生素C的含量。
摘要：研究了柑橘在避光和透光时维生素C含量之间的关系,为柑橘营养成分分析提供参考数据。利用2,4-二硝基苯肼法分别测定了柑橘在避光和透光时维生素C的含量。结果表明,柑橘中维生素C在波长为520 nm处吸光度最大,不同浓度的维生素C得到标准曲线方程是A=0.0298c-0.0105,相关系数r=0.9944;避光和透光时柑橘中含维生素C含量分别为25.43 mg/100g、23.18 mg/100g;两者之间的比例关系为X避光=1.097X透光。
关键词：柑橘,维生素C,2,4-二硝基苯肼法,透光,避光
参考文献
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[6]吴春艳.水果中维生素C含量的测定及比较[J].武汉理工大学学报,2007,29(3):90-91.
维生素C测定 篇8
关键词：水果,维生素C (Vc) ,反相高效液相色谱 (RP-HPLC)
维生素C, 又称抗坏血酸 (AH 2) ) 。医学研究发现它不但具有生理活性, 而且在人体内能阻止亚硝胺的形成, 具有一定的防癌作用[1]。但人体自身不能合成维生素C, 必须由食物中摄取, 所以分析测定水果和蔬菜中维生素C含量, 将对鉴别水果和蔬菜的营养价值具有重要意义。目前水果和蔬菜中维生素C测定的方法除了药典规定的碘量法[2], 还有比色法[3]、紫外分光光度法[4]、荧光法[5]等, 但这些方法所需试剂多且操作繁琐, 测定结果准确性也存在一定问题[6]。近年来发展了用高效液相色谱法测定维生素C含量的方法, 具有高效、快速、稳定、可靠等特点, 但文献报道的所用流动相体系均较复杂, 一般都采用了缓冲盐或者低浓度酸[7—10]。本文应用反相高效液相色谱法, 采用乙腈-水 (40∶60v/v) 作流动相, 直接测定了时令常见水果中的维生素C含量, 取得了理想的效果。
1实验部分
1.1主要仪器与试剂
Agilent 1200液相色谱仪, 配有VWD检测器;UV-2450紫外分光光度计;Milli-Q纯水超纯水系统;HS-120D超声波清洗机;AP-01过滤器;FA 2004A电子天平
甲醇、乙腈 (色谱纯) , TEDIA公司;抗坏血酸 (分析纯) , 无锡展望化工试剂有限公司;磷酸 (分析纯) , 无锡飞达化工厂;超纯水 (由Milli-Q纯水超纯水系统制备) 。
1.2色谱分离条件
色谱柱:EclipseXDB-C18 (5μm 4.6×250mm) , 流动相:乙腈-水 (40∶60v/v) , 流速:1.0mL/min, 波长:275nm;进样量:10μL:。
1.3溶液配制
1.3.1标准贮备液的配制
精密称取抗坏血酸0.25g, 置250mL容量瓶中, 加0.1%磷酸溶液溶解并稀释至刻度, 摇匀。得1000μg/mL的标准贮备液。
1.3.2标准溶液的配制
分别精密量取1mL、2mL、4mL、8mL、16mL、32mL、64mL的标准贮备液至100mL量瓶中, 用0.1%磷酸溶液稀释至刻度, 得10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL、640μg/mL的系列标准溶液。
1.3.3供试品溶液的配制 (样品前处理)
将买来的新鲜水果洗净, 晾干后分别置于匀浆机中匀浆, 用布氏漏斗过滤, 再精确称取10g滤液至50mL容量瓶中, 用0.1%磷酸稀释至刻度, 进样前用0.45μm针头式过滤器过滤。
1.4测定方法和结果计算
根据色谱分离条件, 将仪器调节到进样分析状态, 用平头针头精确量取10μL进样分析, 保存色谱图记录峰面积, 并根据质量浓度-峰面积作标准曲线用外标法进行计算。
2结果与讨论
2.1溶剂的选择
维生素C具有较强还原性, 且易受空气、热、光、碱性物质、金属离子等因素影响, 但在酸性溶液中稳定[11], 为防止分析过程中维生素C的破坏, 实验采用0.1%磷酸溶液作溶剂配制各种溶液。
2.2检测波长的确定
取抗坏血酸适量, 加0.1%磷酸溶液配成约160μg/mL的溶液, 用0.1%磷酸溶液作参比溶液, 在200～400nm波长扫描, 结果发现在275nm波长处有最大吸收。故本文以275nm为检测波长。
2.3流动相和流速的确定
取抗坏血酸适量, 用0.1%磷酸溶液配成约160μg/mL的溶液, 实验过程中尝试了甲醇、甲醇-水乙腈、乙腈-水等不同体系及配比的流动相, 并对流速从 (0.5～1.5) mL/min之间进行反复实验, 结果表明, 当流动相为乙腈-水 (40∶60v/v) , 流速为1.0mL/min时, 不但能得到了良好的峰形、适当的保留时间和较高的理论塔板数, 同时能对果汁中其它物质得到较好的分离;而且避免了流动相体系中加入缓冲盐和低浓度的酸, 既保护了色谱柱, 又使得实验操作更简便, 维生素C的定性分析图见图1。
2.4标准曲线和线性范围
精确吸取上述不同质量浓度的系列标准溶液10μL, 按色谱分离条件进样分析, 保存色谱图记录峰面积。并以质量浓度X (μg/mL) 为横坐标, 峰面积Y (mAU·s) 为纵坐标作图, 得标准工作曲线的回归方程为Y=2.516 01+3.556 17X, 相关系数R 2为0.999 96。结果表明:维生素C在 (10～640) μg/mL之间呈现良好的线性关系, 见图2。
2.5样品测定
2.5.1样品定性分析
精密吸取各供试品溶液10μL, 按色谱分离条件进样分析, 保存色谱图记录峰面积, 并根据在同一实验条件下纯物质保留时间定性, 得出各水果样品中维生素C的相对应的归属峰。猕猴桃的色谱分离图见图3。
2.5.2 样品定量测定
精密吸取各供试品溶液10 μL, 按色谱分离条件进样分析, 保存色谱图并记录色谱图中的维生素C对应的峰面积, 然后根据外标法对各时令水果中的维生素C含量进行定量计算, 各时令水果的维生素C分析结果见表1。
2.6 精密度实验
取草莓供试品溶液, 按上述的色谱条件连续进样6次, 保存色谱图并记录色谱图中的维生素C对应的峰面积。结果峰面积相对标准偏差RSD为0.941 6%, 表明本法精密度较高, 重现性较好。实验结果见表2。
2.7 稳定性实验
准确称取20.0 mg的抗坏血酸分别置于两洁净的50 mL烧杯中, 其中一份用超纯水溶解, 稀释定容至50 mL容量瓶中, 另一份用0.1%磷酸溶解、稀释定容至50 mL容量瓶中。每隔2小时对两溶液按色谱分离条件进样分析, 保存色谱图并记录色谱图中的维生素C的峰面积, 然后计算并比较两溶液中维生素C含量的变化情况。结果表明:用0.1%磷酸溶解的维生素C在4 h内较稳定, 而用超纯水溶解的溶液稳定性则相对较差, 因此更进一步说明了维生素C在酸性条件下相对比较稳定;但随着时间的推移, 维生素C含量也将逐渐减少, 这同时表明新鲜水果要尽快食用, 以免营养成分流失。实验结果见表3。
2.8 回收率实验
回收率实验选在圣女果中进行。分别精确移取圣女果的供试品溶液5 mL于5个50 mL洁净容量瓶中, 再分别直接准确加入2、4、6、8、10 mL质量浓度为320 μg /mL的维生素C标准溶液, 然后用0.1%磷酸稀释到刻度, 按色谱分离条件测定, 保存色谱图并记录色谱图中的维生素C对应的峰面积, 然后根据外标法定量计算, 同时计算回收率, 实验结果见表4。
3 结论
本文利用反相液相色谱法直接测定了水果中维生素C含量, 其操作简单, 分离时间短, 分离效果较好, 测定结果准确度和重现性也较好, 且不受样品中其它组分的干扰, 特别是流动相体系中不需用到缓冲盐和低浓度的酸, 既能保护色谱柱, 又能使实验操作更简便。该法同样可以适用用于其他水果或果汁饮料等食品中的维生素C含量的快速测定。
参考文献
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维生素C测定 篇9
1 实验材料与方法
1.1 仪器与试剂
实验仪器:紫外可见分光光度计T6 (北京普析通用仪器有限责任公司) ;XS205电子精密天平 (梅特勒—托力多仪器上海有限公司) 。
实验试剂:5%的草酸溶液;维生素C标准贮备液:100mg/mL, 准确称取0.100gVc样品至100mL。棕色容量瓶中, 用5%的草酸溶液溶解并稀释定容;维生素C标准使用液10μg/mL (临用时现配) ;实验所用试剂均为分析纯;实验所用水为2次蒸馏水。
1.2 供试样品
果蔬汁饮品购自当地食品超市。
1.3 实验方法
吸取适量体积的样品原液至50mL棕色容量瓶中, 用5%的草酸溶液溶解并稀释定容, 然后用0.45nm滤膜 (水型) 进行过滤, 以5%的草酸溶液作为空白, 在265nm处测定其吸光度值。
2 实验测量条件的选择
2.1 测量波长的选择
取10μg/mL的Vc标准使用液, 用紫外分光光度法进行全波长扫描在265nm处有最大的吸收波长, 故选择此波长为最终测定波长 (图1) 。
2.2 酸度对吸收波长的影响
不同的pH值Vc的最大吸收波长会有所变化。吸取10μg/mL的Vc标准使用液用一定浓度的NaOH溶液调节pH为1~12进行测定, 测定结果当pH=6.0时吸光度值最大。pH值过高或过低都会使其Vc含量下降, 所以最佳的测量值取pH=6.0。
3 结果与讨论
3.1 样品测定结果比较 (表1)
用本方法测定了果蔬汁饮品中Vc的含量, 同样样品用2, 6-二氯腚酚滴定法进行测定, 2种方法的测定结果比较一致, 并且与样品包装所标注的含量接近。
3.2 回收率试验
采用标准Vc加入法进行回收试验, 在测定完样品中的Vc含量后, 再往样品中加入一定量已知浓度的Vc标准液, 同样品一起测定, 计算回收率, 5次测定的结果回收率在97.26%~101.56%之间。
4 结语
选择用5%的草酸溶液作为稀释液是因为草酸能够很好的抑制铁和铜对抗坏血酸的氧化和催化作用, 从而使抗坏血酸比较的稳定。维生素C的测定方法很多, 本文建立采用紫外分光光度法对果蔬汁饮品中维生素C的含量进行测定, 其方法简单灵敏、快速准确、分析时间短、有很好的精密度, 有利于更好的提高工作效率。
参考文献
[1]吴春艳.水果中维生素C含量的测定及比较[J].武汉理工大学学报, 2007, 29 (3) :90～91.
[2]杨新斌.维生素C含量的测定[J].四川化工与腐蚀控制, 2001, 4 (12) :17.
维生素C测定 篇10
关键词：维生素C,婴幼儿食品和乳品,荧光光度法,荧光强度
1 婴幼儿食品中维生素C测定方法
维生素C (又名:抗坏血酸) 是一种水溶性维生素, 能维护机体生长发育、活动和正常代谢。然而, 人体自身无法合成维生素C, 只能从食品或药品中摄取。新鲜的蔬菜和水果中富含天然的还原型维生素C, 可以被人体吸收代谢。维生素C主要作用是提高免疫力、治疗坏血病和贫血、清除体内自由基、预防癌症和保护肝脏。中国营养学会建议的膳食参考摄入量 (RNI) :婴儿 (0~6月龄) 维生素C的推荐摄入量为40mg/d, 较大婴儿 (6~12月龄) 和幼儿 (12~36龄) 维生素C的推荐摄入量为50mg/d, 成人及孕早期妇女维生素C的推荐摄入量为100mg/d;中、晚期孕妇及哺乳期妇女维生素C的推荐摄入量为130mg/d。
1.1 婴幼儿食品中维生素C指标
目前, 现行的食品安全国家标准对维生素C指标有所规定:婴儿配方食品的维生素C指标为2.5~17.0mg/100kJ, 较大婴儿和幼儿配方食品的维生素C指标为≥1.8mg/100kJ, 婴幼儿谷类辅助食品的维生素C指标≥1.4mg/100kJ。成人奶粉, 譬如:孕 (产) 妇奶粉和中老年奶粉的维生素C指标一般根据企业标准要求规定。婴儿配方食品、较大婴儿和幼儿配方食品以及婴幼儿谷类辅助食品都是婴幼儿每日必须摄取的食物, 因此, 测定婴幼儿食品中维生素C的含量是食品营养分析的重要内容。同时, 也是评价婴幼儿食品生产、加工和贮藏过程的主要指标。
1.2 测定食品中维生素C的主要方法
目前, 食品安全国家标准中测定食品中维生素C (抗坏血酸) 的方法主要有:荧光法、分光光度法、滴定法和乙醚萃取法。其中, 《GB 5413.18-2010婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定》适用于婴幼儿食品和乳品中还原型维生素C和氧化型维生素C总量的测定。《GB/T5009.86-2003蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 (荧光法和2, 4-二硝基苯肼法) 》适用于总抗坏血酸的测定。《GB/T 5009.159-2003食品中还原型抗坏血酸的测定》适用于各类食品中还原型抗坏血酸的测定, 不适用于脱氢型抗坏血酸的测定。《GB 14754-2010食品添加剂维生素C (抗坏血酸) 》适用于D-葡萄糖或山梨醇为起始原料经发酵后化学合成制得的食用添加剂维生素C。《GB/T 12143-2008饮料通用分析方法》中果蔬汁饮料中L-抗坏血酸的测定方法 (乙醚萃取法) 适用于果汁和蔬菜汁类饮料中L-抗坏血酸的测定, 但不适用于脱氢型抗坏血酸的测定。
综上所述, 食品中维生素C (抗坏血酸) 的测定方法很多, 较其他方法而言, 荧光法具有灵敏度高, 线性关系好, 精密度高, 不受其他荧光杂质的干扰等优点。因而, 荧光法广泛应用于婴幼儿食品和乳品以及蔬菜、水果及其制品中维生素C的测定。
1.3 荧光光度法反应原理
试样中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后, 与领苯二胺 (OPDA) 反应生成有荧光的喹唔啉 (quinoxaline) , 其荧光强度与抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比, 以此测定食品中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
2 试验部分
2.1 试剂与材料
本方法所有试剂除了活性炭 (化学纯) 以外, 其他试剂均为分析纯, 所用水为GB/T 6682规定的二级水去离子水。
(1) 高峰式淀粉酶:酶活力1.5U/mg。
(2) 偏磷酸-乙酸溶液A:3.00×10-2g/mL (36%乙酸:8.0×10-2/mL) 。
(3) 偏磷酸-乙酸溶液B:6.00×10-2g/mL (36%乙酸:16.0×10-2/mL) 。
(4) 酸性活性炭;称取200目粉状活性炭 (化学纯) 200.00g, 加入1L体积分数为10%的盐酸溶液, 加热至沸腾, 真空抽滤, 取下结块于一个大烧杯中, 用去离子水清洗至滤液中无铁离子为止, 在120℃烘箱中干燥约10h后使用。
(5) 乙酸钠溶液:301.51g/L。
(6) 硼酸-乙酸钠溶液:3.00g/mL, 临用现配。
(7) 邻苯二胺溶液:400.0mg/L, 临用现配。
(8) 维生素C标准溶液 (100μg/mL) :准确称取0.0500g维生素C标准品, 用偏磷酸—乙酸溶液A溶解并定容至50mL, 再准确吸取10.0mL该溶液用偏磷酸—乙酸溶液A稀释并定容至100mL, 临用现配。
2.2 仪器与设备
电子天平, 感量为0.01g;电子天平, 感量为0.1mg;电热鼓风干燥箱, 120±1℃;FD240烘箱, 45±1℃;F-2500荧光光度计。
2.3 分析步骤
2.3.1 试样处理
称取约5g (精确至0.0001g) 混合均匀的固体试样或约20g (精确至0.0001g) 液体试样于150mL三角瓶中, 加入0.10g淀粉酶, 于固体试样中加入50mL 45℃去离子水, 于液体试样中加入30mL 45℃去离子水, 待试样充分溶解并混合均匀后, 排除瓶中空气, 盖上瓶塞, 于45±1℃烘箱内静置30min, 取出冷却至室温后, 用偏磷酸—乙酸溶液B转至100mL容量瓶中定容。
2.3.2 待测液的制备
将上述试样以及维生素C标准溶液 (100μg/mL) 快速转至放有2.00g酸性活性炭的250mL三角瓶中, 盖上瓶塞, 剧烈振摇, 过滤 (弃去约5.0mL最初滤液) , 即为试样及标准溶液的滤液。
准确吸取5.0mL试样及标准溶液的滤液分别置于25和50mL放有5.0mL硼酸—乙酸钠溶液的容量瓶中, 静置30min后, 用去离子水定容。以此作为试样及标准溶液的空白溶液。
在30min内, 准确吸取5.0mL试样及标准溶液的滤液分别置于25和50mL放有5.0mL乙酸钠溶液的容量瓶中, 用去离子水定容至刻度。以此作为试样及标准溶液。
试样待测液:分别吸取2.0mL试样的空白溶液和试样置于10.0mL试管中, 于每支试管中准确加入5.0mL邻苯二胺溶液, 摇匀, 在避光条件下静置60min后待测。
标准系列待测液:准确吸取上述标准溶液的空白溶液2.0mL于10.0mL试管中。同时准确吸取上述标准溶液0.5、1.0、1.5和2.0mL, 分别置于10.0mL试管中, 再用去离子水补至2.0mL。于每支试管中准确加入5.0mL邻苯二胺溶液, 摇匀, 在避光条件下静置60min后待测。
2.3.3 测定
测定条件:分别取出标准系列待测液和试样待测液, 立刻转至荧光分光光度计的石英皿中, 于激发波长350nm, 发射波长430nm条件下测定其荧光值。
标准曲线的绘制:以标准系列荧光值分别减去标准溶液的空白荧光值为纵坐标, 对应的维生素C质量浓度为横坐标, 绘制标准曲线。
试样待测液的测定:将试样溶液荧光值减去试样空白溶液荧光值后, 在标准曲线上查得对应的维生素C质量浓度。
2.3.4 分析结果的表述
试样中维生素C的含量按公式 (1) 计算:
3 结果与分析讨论
3.1 荧光物质的激发和发射光谱
使用F-2500荧光分光光度计, 设置激发和发射光谱的狭缝为10.0nm。
分别对维生素C标准品与邻苯二胺反应后生成的荧光物质的激发和发射光谱进行扫描, 所得谱图如图1所示。维生素C标准品的激发光谱在350nm处荧光强度最大, 发射光谱在430nm处荧光强度最大。故选择激发波长350nm, 发射波长430nm条件下测定样品的荧光值。
3.2 影响荧光强度的因素
婴幼儿食品和乳品中维生素C (抗坏血酸) 的添加量普遍较低, 为了提高分析结果的准确度, 现以婴儿配方粉为试样, 分析研究试验过程中可能会影响荧光强度的3个因素:酸性活性炭用量、加入硼酸-乙酸钠溶液后静置时间和加入邻苯二胺后反应时间的影响。
3.2.1 酸性活性炭用量的影响
酸性活性炭不仅起氧化剂的作用, 同时也是良好的吸附剂。因此, 酸性活性炭的用量多少直接影响维生素C (抗坏血酸) 含量的测定结果。当活性炭用量过小时, 样品中的维生素C无法完全被氧化成脱氢抗坏血酸, 降低了荧光物质的产量, 从而降低了荧光强度;当活性炭用量过大时, 会对维生素C产生吸附作用, 从而降低了荧光强度, 最终使测定结果偏低。由表1可知:当酸性活性炭用量为2.00g时, 试样中的维生素C完全被氧化成脱氢抗坏血酸, 并且吸附作用的影响不明显。
3.2.2 加入硼酸—乙酸钠溶液后静置时间对荧光强度的影响
婴幼儿食品和乳品中常有丙酮酸与维生素C共存, 丙酮酸可与邻苯二胺 (OPDA) 缩合生成另一类似荧光物质, 两种荧光物质的共轭体系基本相同而形成光谱重叠。为了消除丙酮酸以及其他物质与邻苯二胺反应后生成荧光物质的干扰, 现加入掩蔽剂硼酸-乙酸钠溶液, 以此作为空白试验。硼酸与脱氢抗坏血酸形成的复合物不与邻苯二胺反应, 以此排除试样中荧光杂质产生的干扰。
《GB 5413.18-2010婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定》中规定在硼酸-乙酸钠溶液中加入样品后, 必须静置30min后, 用去离子水定容, 待测。
由表2可知:硼酸-乙酸钠溶液中加入样品后, 当静置时间30min时, 空白溶液的荧光强度才能降至最低。当静置时间不足30min时, 空白溶液的荧光强度会偏高, 最终使测定结果偏低。
3.2.3 加入邻苯二胺后反应时间对荧光强度的影响
《GB 5413.18-2010婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定》中规定在硼酸-乙酸钠溶液中加入样品后的30min之内, 将试样加入乙酸钠溶液中, 混合均匀后, 用水稀释至刻度。分别吸取标样和试样于10.0mL试管中, 分别加入5.0mL邻苯二胺溶液, 摇匀, 避光条件下放置60min。由于乙酸钠在邻苯二胺中存在的时间越长, 其荧光强度越低, 从而降低了测定结果。由表3可知:试样在加入邻苯二胺溶液后, 避光反应60min后, 其荧光强度达到最大。
图2~图6分别为连续5d测定的Vc标准曲线, Vc标准溶液的浓度在5.0~20.0μg/7mL范围内, 浓度与荧光强度呈现良好的线性关系, 相关系数为0.9982~0.9998。
3.3 重复性和回收率
3.3.1 重复性
重复性的计算方法:在同一试验室内, 由同一试验人员用相同的试验条件做至少6次平行试验, 测得的数据用统计的方法计算精密度, 一般用相对标准偏差表示。
在相同的检测条件下, 由同一试验人员对同一种婴儿配方粉中维生素C的测定做6次平行试验, 数据见表4。
3.3.2 回收率
在试样中分别按照三水平加入一定已知浓度的标准样品, 混合均匀后, 按照相同的检验方法进行测量, 比较加入标准样品后的含量和理论含量, 两者的比值即为标样回收率。按此方法测得婴儿配方粉中维生素C的测定回收率见表5。
4 结论
本试验方法的标准曲线呈现良好的线性关系, 相关系数为0.9982~0.9998。试样的复现性好, 6次重复性试验的相对标准偏差为1.49%。因此, 本方法的精密度符合分析要求, 适用于婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定。
参考文献
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[5]GB/T12143-2008饮料通用分析方法[S].
维生素C的保健作用 篇11
防治坏血病和纠正贫血
维生素c缺乏引起的坏血病，早期症状是倦怠、疲乏、牙龈疼痛出血、伤口愈合不良、关节肌肉短暂性疼痛，易骨折。严重时，发生皮下、肌肉、关节出血及紫斑或血肿，甚至引起黏膜和内脏出血，出现尿血、便血；妇女月经过多及贫血；儿童可引起骨骼发育障碍，影响正常生长发育，身材矮小。其发病原因是：维生素c缺乏时，羟化酶活性下降，胶原蛋白结构异常，细胞间隙增大，结缔组织韧性降低，血管壁通透性和脆性增加。而维生素c可促进组织中胶原蛋白形成，维持结缔组织及细胞间质的完整性，促进伤口愈合，防止微血管脆弱出血。因此，维生素c可防治坏血病。
维生素c能利用它的还原性，在肠道内将难以吸收的三价铁还原成易吸收的二价铁，并可将运铁蛋白中的三价铁还原为二价铁，从而释放出来再与铁蛋白结合，提高机体对铁的转运和利用，所以能纠正贫血。维生素c还能促进高铁血红蛋白还原成血红蛋白，有助于消除紫绀。
抗动脉粥样硬化，预防冠心病
冠心病是冠状动脉粥样硬化心脏病的简称，绝大多数是由冠状动脉粥样硬化引起的。早期改变是动脉内膜脂质沉着，继之引起结缔组织增生，造成动脉粥样硬化。维生素c预防作用表现在下述三个方面：其一，能促进胆固醇的羟化作用转化为胆汁酸，故可防止胆固醇在动脉血管内壁沉积而造成动脉粥样硬化；其二，维生素c能溶解沉积的粥样斑块，修补损伤组织，防止血管内皮损伤，去掉脂类在动脉管内壁沉积的条件和防止沉积增大；其三，维生素c能抑制胆固醇合成的关键酶，降低内源性胆固醇合成的速率，故能降低血浆胆固醇。研究发现，增加膳食中维生素c与E的摄入，能大大降低冠心病死亡相对危险性。
解毒，增强机体免疫力
人体内各种非营养物质，如物质代谢产生的多余激素及神经递质、有毒的氨及胆红素、食物添加剂、药物、毒物等，在肝中经生物转化反应，易随尿或胆汁排出体外。维生素c可提高此类转化反应中酶的活性，促进其转化，起解毒作用。维生素c还能使氧化型谷胱甘肽转化为还原型谷胱甘肽，后者可与金属离子结合而排出体外，避免重金属离子铅、砷、汞等与巯基结合使酶失活而造成中毒。维生素c还能减轻细胞脂肪性病，促进肝细胞再生及糖原合成，增强肝脏的解毒能力。维生素c还能增强机体免疫力，因为高浓度维生素c能使胱氨酸还原成有利于免疫球蛋白合成的半胱氨酸；同时维生素c被氧化成脱氢维生素c后，又能使新合成的免疫球蛋白肽键上的巯基氧化成二硫键而促进免疫球蛋白的生成。所以，维生素c可用于感冒等流行病的防治。
防治癌症
维生素c具抗氧化作用，能阻断致癌物亚硝胺的生成，促进透明质酸酶抑制物的合成，阻止癌细胞扩散，降低外来致癌物在体内的活性。维生素c还能防止恶性肿瘤生成蔓延，这是由于它参与胶质蛋白的合成，使细胞间质加固的缘故。大量研究显示，患胃癌、唾液腺癌、鼻咽癌、食道癌、结肠癌和子宫颈癌等危险性与维生素c的低摄入量有关。
其它作用
1、维生素c可预防白内障和晶状体模糊症。白内障的形成是由于晶状体组织氧化，而维生素c可抑制这种氧化作用。研究发现，服用维生素c100毫克／天，可降低白内障发生率50％，并阻止白内障和晶状体模糊症的恶化。
2、维生素c的抗衰老作用。维生素A、E及维生素c的共同作用，可促进皮下组织代谢，改善皮肤供血水平，有助于防止皮肤过早出现皱褶。
3、此外，维生素c有预防胆结石及恢复阴道正常菌群、抑制病原性细菌增殖、防止阴道感染作用。维生素c还可预防高血压和中风的发生，使缺血性脑卒中发生的危险性降低。
总之，维生素c对人体非常重要，不可缺乏。它广泛存在于新鲜蔬菜和水果中，叶菜类蔬菜比根茎类蔬菜多，酸味水果比无酸昧水果多。其中含量较多的蔬菜有番茄、青椒、油菜、卷心菜、菜花等；水果有柑橘、鲜枣、草莓、芒果、柠檬、西瓜等。某些野菜、野果中维生素c含量也很高。如苋菜、苜蓿、刺梨、沙棘、猕猴桃、酸枣等。干种子虽不含维生素c，但一发芽便可合成，所以豆芽等也是维生素c的重要来源。含维生素c的新鲜食物储存过久，维生素c会被破坏。因为植物组织中含有抗坏血酸氧化酶，能将维生素c氧化成无活性的二酮古洛糖酸。
人体内由于缺乏必需的古洛糖酸内酯氧化酶，不能使葡萄糖转化成维生素c，因此必须从饮食获得。维生素c在小肠内吸收，亦在体内有少量贮存。人吃无维生素c膳食后，在一定时期内不致出现缺乏症状，但长期供应不足，可引起缺乏症。
那么，多大剂量较为适宜呢?专家建议，每天200毫克左右即够。病床研究表明，当摄入量在200毫克时，其利用率为100％，摄入量再高，利用率下降。至于呼吸系疾病、感冒患者及其它传染病人可适当增加。
维生素C测定 篇12
1 材料与仪器
1.1 实验材料
维生素C对照品(批号100425-200702,中国药品生物制品检定所),色谱甲醇(HuaiAn Guoda Chemical Reagent Co.,Ltd.),其他试剂均为分析纯,样品为市售。
1.2 实验仪器
AE240型电子分析天平(METTLER);戴安高效液相色谱系统(美国戴安科技有限公司),包括P680四元泵、170U紫外可见检测器、ASI-100自动进样器、TCC-100柱温箱、Chromeleon色谱工作站;KT-300Y型超声波药品处理机(济宁中冠超声波有限责任公司)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
2.1.1 色谱条件
色谱柱为Thermo HyPURITY C18 (250×4.6mm,5μm);流动相为0.03 mo1·L-1磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调节pH3.0)-甲醇(95:5);检测波长为243 nm;流速为0.7mL.min-1;柱温为30℃;进样量为10μL。
2.1.2 系统适用性试验
理论板数按维生素C主峰计为8673,维生素C峰与其他杂质峰的分离度均大于2.0,结果见图1、2。
2.2 溶液制备方法
2.2.1 对照品溶液的制备
取维生素C对照品适量,精密称定,加流动相制成每1mL含50μg的溶液,即得。
2.2.2 供试品溶液的制备
取本品10片,除去包衣,精密称定,研细,混匀,充分研磨,取适量(约相当于维生素C5mg),精密称定,置100mL容量瓶中,加流动相约75mL,超声处理10分钟使充分溶解,加流动相至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.3 线性范围考察
精密称取维生素C对照品10mg,置100mL量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液。精密吸取上述溶液1.0、2.0、4.0、8.0mL分别置10mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,得稀释液。取上述储备液及各稀释液各10μL,分别注入液相色谱仪,用峰面积(A)对浓度(C)进行回归分析,得回归方程:A=1287.1+5817.3C,r=9998,表明维生素C在10～100μg.(m L)-1范围内,线性关系良好。
2.4 方法专属性考察
按照本品的处方、生产工艺及供试品溶液制备方法制备缺少维生素C的阴性对照溶液。将维生素C对照品溶液、供试品溶液和维生素C阴性对照溶液各10μL,分别注入液相色谱仪中,进行测定,结果见图1～3。在与对照品相同保留时间处没有见出色谱峰,阴性组分无干扰,方法专属性好,选择性高。
2.5 精密度试验
取供试品溶液,在测定条件下进样10μL,连续测定5次,峰面积的RSD为0.42%,结果表明精密度良好,符合分析要求。
2.6穗定性试验
吸取供试品溶液,在测定条件下,分别在0 h、1 h、2h、4h、8h、12h、24h测定1次。2小时内RSD=1.6%,4小时内RSD=4.0%,8小时内RSD=6.5%,表明2小时内供试品溶液稳定性较好,应在2小时内完成实验,结果与文献报道相似[6,10]。
2.7 重复性试验
精密称取同批样品5份,分别按供试品测定项下方法操作,结果RSD为1.4%。表明本品测定方法重复性良好。
2.8 加样回收试验
精密称取已知维生素C含量的新复方大青叶片粉(相对含量为97.9%)5份,各0.20g,置100mL容量瓶中,加入维生素C对照品适量,按样品测定项下步骤进行分析,其平均回收率为98.9%,RSD为1.3%(n=6)。
3 讨论
本文参考国内外大量有关维生素C含量测定方法的文献资料和多次试验,建立了本实验方法,实验结果显示,HPLC测定样品中维生素C,专属性良好,简便、快捷、准确,可用于本品中维生素C含量的质量评价。
维生素C溶液在碱环境中易分解,选用酸性的磷酸盐缓冲液(pH3.0)作为流动相,而且维生素C对氧和光均不稳定,实验过程中应快速操作并避光。试验表明供试品溶液在2小时内稳定性较好,4小时内测定的RSD为4.0%,8小时内RSD为6.5%,因此维生素C的含量测定应在2小时之内完成。
维生素C作为新复方大青叶片中的重要成分与其疗效有着密切关系,对其含量进行控制具有重要的意义,但维生素C供试液稳定性问题有待于进一步研究。
摘要：目的:建立测定新复方大青叶片中维生素C含量的HPLC方法。方法:采用Thermo C18色谱柱,0.03 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调节pH3.0)-甲醇(95:5)为流动相,流速为0.7ml·min-1,检测波长为243nm。结果:用该方法测定维生素C的线性范围在10～100μg·ml-1(r=0.9998),平均回收率分别为98.9％(RSD=1.3％,n=6)。结论:该测定方法专属性好、准确、灵敏,可用作该品种的定量质控标准。
关键词：新复方大青叶片,维生素C,HPLC
参考文献
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