血清碱性磷酸酶

血清碱性磷酸酶（共8篇）

血清碱性磷酸酶 篇1

血清碱性磷酸酶活性程度是恶性肿瘤、胆管疾病 (如胆道梗阻等) 、肝内占位性病变和佝偻病的重要反应指标, 也是许多代谢性骨病的临床诊断指标。血清钙具有降低神经、肌肉的兴奋性, 维持心肌节律及细胞膜通透性的作用。血清无机磷参加糖、脂类及氨基酸的代谢, 并构成运转能量的物质。碱性磷酸酶可以产生无机磷, 有利于钙、磷转运, 促进骨骼生长。有关大通牦牛血清钙、磷含量方面的报道较多, 但有关血清碱性磷酸酶含量的报道较少。因此, 笔者选择35头大通牦牛进行了血清碱性磷酸酶及血清钙、磷含量的测定, 旨在为大通牦牛的饲养管理、遗传研究、疾病诊断和繁殖育种等提供可靠的文献参数。

1 材料

1.1 试验动物

青海省大通种牛场的大通牦牛35头 (年龄1.5~2岁) , 其中公牦牛18头、母牦牛17头。试验牦牛皆临床健康, 营养状况良好, 生活在海拔3 900 m左右的高寒草甸和山地草甸。

1.2 血样采集

清晨空腹出牧前, 从大通牦牛的颈静脉采集非抗凝血样5 m L, 立即送实验室分离血清, 当日测定。

2 方法

2.1 测定项目与方法

血清碱性磷酸酶 (ALP) 用磷酸苯二钠法测定;血清钙 (SCa) 用EDTA-Na2滴定法测定;血清无机磷 (SP) 用磷钼蓝比色法测定。

2.2 数据处理

测定结果按公牦牛、母牦牛和全群这3组分别进行统计, 所得资料皆以“平均数 (±标准差 (s) ”表示, 并进行t检验。

3 结果

被检大通牦牛的血清碱性磷酸酶及血清钙、磷含量的测定结果见表1。

4 分析

4.1

从表1数据可见, 生活在高原的公牦牛与母牦牛的血液指标非常相似, 表明被检大通牦牛的血清碱性磷酸酶及血清钙、磷含量指标在性别上无显著差异 (P>0.05) , 均处于正常值范围内。因此, 无论是公牦牛还是母牦牛均可以采用总体指标作为判定大通牦牛健康与否的标准。

4.2

由表1可见, 全群的血清碱性磷酸酶含量 (45.15±3.41IU·L-1) 与孙玉芳报道的 (46.28±4.56IU·L-1) 结果基本一致, 差异不显著 (P>0.05) 。血清碱性磷酸酶是成骨细胞活动的指标, 该酶活性高可防止骨骼矿物质的丢失, 增加骨密度, 防止骨质疏松症。

4.3

血清钙、无机磷的测定结果与王勇、宁鹏等报道的结果相一致, 差异不显著 (P>0.05) 。而与黄国发等报道的结果差异极显著 (P<0.01) , 这可能与采血方式不同有关。本次试验中, 血清钙、磷比为1.4∶1, 在文献记载的正常比例 (1~2∶1) 范围内, 处于正常水平。钙、磷保持适当的比例, 最有利于身体健康, 也有利于组织吸收, 从而保证动物机体的代谢水平和生产性能维持正常。

摘要：本试验对青海省大通种牛场的35头健康大通牦牛的血清碱性磷酸酶和血清钙、磷含量进行了测定, 结果为:血清碱性磷酸酶的含量在45.15±3.41IU·L-1, 血清钙含量在2.49±0.53mmol·L-1, 血清无机磷含量在1.98±0.21 mmol·L-1, 均处于正常值范围内;公牦牛、母牦牛之间无显著性差异 (P>0.05) 。

关键词：大通牦牛,血清碱性磷酸酶,血清钙,血清磷

参考文献

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血清碱性磷酸酶 篇2

1 材料与方法

1.1 血样的采集

分别从辽宁省2家辽宁绒山羊饲养场随机采集41只成年绒山羊的颈静脉血,其中A场20只、B场21只。

1.2 血清的制备

采集颈静脉血10 mL,摆斜面,而后3 500 r/min离心15 min,分离血清,分装于灭菌且无酶的2.5 mL离心管中,封口后置冰盒内送至实验室,4 ℃保存,待测。

1.3 试剂盒及仪器来源

钙测定试剂盒、磷测定试剂盒、碱性磷酸酶试剂盒,购自中生北控生物科技股份有限公司;OGT-100半自动生化仪,购自北京尚精光电技术有限公司。

1.4 测定项目

血清钙、磷含量及碱性磷酸酶活性的测定均按相应试剂盒操作说明进行。其中钙的测定采用邻甲酚酞络合酮比色法,磷的测定采用紫外终点法,碱性磷酸酶活性的测定采用动力法。

1.5 数据统计

试验数据采用SPSS13.0 软件进行方差分析和多重比较。

2 结果与分析

A、B辽宁绒山羊饲养场羊只血清钙、磷含量和碱性磷酸酶活性的测定结果见表1。

注:血清钙、磷含量和碱性磷酸酶活性的正常范围[3-4]均以山羊的正常范围作为参考。同列数据肩标大写字母不同表示差异极显著(P<0.01),字母相同表示差异不显著(P>0.05)。

A场血清钙含量为2.91 mmol/L,极显著高于正常值(P<0.01);血清磷含量为0.56 mmol/L,极显著低于正常值(P<0.01);碱性磷酸酶活性为62 U/L,低于正常范围(P>0.05)。B场血清钙含量为1.53 mmol/L,极显著低于正常值(P<0.01);血清磷含量为2.97 mmol/L,极显著高于正常值(P<0.01);碱性磷酸酶活性正常,但是个体间差异较大,最低为30.75 U /L, 最高为1 426.10 U/L。A场辽宁绒山羊血清钙磷比明显偏高,而B场钙磷比明显偏低。A、B场之间钙、磷水平均差异极显著(P<0.01),碱性磷酸酶活性差异不显著(P>0.05)。

3 讨论

良好的饲养水平和充足的营养可提高母羊的繁殖力和绒毛质量[5]。如果羊只长期食入低钙、低磷且钙、磷比例失衡的日粮,其生长发育将受阻,并且易患佝偻病、骨软病等[2]。血清钙、磷水平可在很大程度上反映日粮钙、磷水平及其比例。在本试验中,A场羊只血清钙含量显著偏高,血清磷含量却显著偏低,这可能是由于过量的钙与磷结合形成磷酸钙而直接排出体外,降低了磷的吸收。同时,A场羊只血清中钙磷比显著偏高,B场显著偏低。提示辽宁绒山羊饲养场羊只日粮中钙磷比例失调。调查发现,A、B两个绒山羊饲养场为保证羊绒、羊毛的细度,基本饲喂玉米、干草等单一的饲料,羊只摄取钙、磷不足,可能降低采食量,直接导致体重减轻、饲料转化效率下降[6];因此,建议各绒山羊饲养场在平时的饲养管理中加强对钙、磷平衡的重视。

动物组织中的碱性磷酸酶活性与钙、磷的吸收和骨组织的沉积、脂肪酸的转运等有关,其活性在血清中是相对稳定的。但当骨代谢出现异常时,碱性磷酸酶活性即发生变化,因此,血清碱性磷酸酶活性被看做是骨代谢重要的生化标志物[7]。在本试验中,A场羊只血清碱性磷酸酶活性偏低,而据调查引起碱性磷酸酶活性偏低的原因有贫血、低镁血症[3]等,结合对A场饲养管理的调查,笔者认为造成该场羊只碱性磷酸酶活性偏低的原因是营养不良引起的贫血所致。B场羊只血清碱性磷酸酶活性平均值在正常范围内,但是个体间差异很大,最低为30.75 U /L, 最高为1 426.10 U/L;且瘦弱的羊只血清碱性磷酸酶活性较高,体质相对较好的羊血清碱性磷酸酶活性较低。有的羊只还同时出现了血清磷水平降低、碱性磷酸酶活性升高的现象。血清碱性磷酸酶活性升高常表示动物可能患骨软化症、佝偻病等疫病。

4 小结

A、B辽宁绒山羊饲养场的羊只血清钙、磷含量及碱性磷酸酶活性普遍偏低,结合试验中的调查分析,不难确定羊只存在患骨病的危险;因此,建议加强日粮中钙、磷含量监测,合理调配舍饲辽宁绒山羊日粮中钙、磷配比,改善营养状况,预防骨质疏松的发生。

参考文献

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碱性磷酸酶高的原因有哪些 篇3

2、病理性原因 当人体患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起血清中的碱性磷酸酶偏高。

3、骨骼有病时，例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。

血清碱性磷酸酶 篇4

1 对象和方法

1.1 对象

选取2012年3月至2016年2月本院收治的踝关节骨折患者82例,全部患者术前经X线检查确诊,以随机数字表法分为观察组和对照组,每组41例。观察组男16例,女25例,年龄32~73岁,平均(43.87±6.14)岁,骨折时间(4.72±1.35)小时,按致伤原因可分为交通伤13例,坠落伤19例,重击伤7例,其他2例;按骨折类型可分为A型9例,B型19例,C型13例。对照组男17例,女24例,年龄34~75岁,平均(43.65±6.09)岁,骨折时间(4.62±1.28)小时,按致伤原因可分为交通伤15例,坠落伤17例,重击伤6例,其他3例;按骨折类型可分为A型8例,B型18例,C型15例。两组男女比例、年龄、骨折时间、致伤原因、骨折类型对比差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。全部患者接受切开复位内固定术治疗,知情同意,符合伦理相关要求。

1.2 排除标准

(1)合并血管损伤或其他器官损伤;(2)心、肝、肺、肾严重疾病患者;(3)过敏体质者;(4)粉碎性骨折。

1.3 治疗方法

全部患者给予切开复位内固定治疗,取仰卧位,常规大腿根部止血。于外踝外侧切开,运用Alice钳复位骨折断端,复位成功后腓骨远端钢板贴于腓骨外侧固定。然后于外踝内侧切开,注重大隐静脉,充分清理骨折损伤软组织,直视下复位关节面,选取合适内固定固定骨折端,运用吸收线修补三角韧带,C型臂透视检测踝关节应力位、穴位是否良好,确保固定稳定。全部患者术后给予1~3天静脉滴注抗生素预防感染。指导患者术后3天开始进行功能恢复锻炼。定期入院复查。对照组给予口服非甾体类抗炎药物,连续治疗4周。

观察组:术后1天开始给予补肾活血方,方中组成:熟地黄18 g、山茱萸9 g、杜仲6 g、枸杞子6 g、当归9 g、补骨脂18 g、菟丝子15 g、肉苁蓉9 g、红花6 g、没药6 g。水煎剂,每天1剂,去渣取汁300 m L,分早晚两次温服。连续治疗4周。

两组于治疗2个月后统计疗效。

1.4 观察指标

分别于治疗前与治疗后,采集患者清晨空腹静脉血5m L,检测血清Ca2+、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)水平,采用酶联免疫吸附法检测血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平变化;记录骨折愈合时间;采用骨折愈合(radius union scoring system,RUSS)评分系统评定骨折线恢复情况;采用腕关节功能(patient-rated wrist evaluation,PRWE)评分法评定踝关节功能恢复情况。

1.5 统计学处理

运用SPSS 19.0统计分析,计数资料行χ2检验,计量资料采用(±s)表示,两两比较行t检验,P值<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组炎性指标变化

两组治疗前CRP、IL-6、TNF-α水平对比差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗后CRP、IL-6、TNF-α显著降低(P<0.05);观察组治疗后CRP、IL-6、TNF-α显著低于对照组治疗后,差异有统计学意义(t=8.162、4.028、5.002,P<0.05)。见表1。

注:与同组治疗前比较,aP<0.05;与对照组治疗后比较,bP<0.05。

2.2 两组Ca2+、ALP变化

两组治疗前Ca2+、ALP对比差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗后Ca2+、ALP显著升高(P<0.05);观察组治疗后Ca2+、ALP显著高于对照组治疗后,差异有统计学意义(t=4.201、3.274,P<0.05)。见表2。

注:与同组治疗前比较,aP<0.05;与对照组治疗后比较,bP<0.05。

2.3 两组恢复情况比较

观察组骨折愈合时间、PRWE评分显著低于对照组,RUSS评分显著高于对照组,差异有统计学意义(t=3.291、3.018、4.167,P<0.05)。见表3。

注:与观察组比较,aP<0.05。

3 讨论

非甾体药物是骨折术后常用的抗炎药物,能有效减轻骨折炎症反应,预防感染。但临床实践发现,非甾体药物可能延缓骨折愈合,不利于功能恢复[3]。本研究结果显示,两组治疗后两组CRP、IL-6、TNF-α水平均明显下降,而观察组治疗后CRP、IL-6、TNF-α显著低于对照组(P<0.05)。结果表明,补肾活血方能进一步减轻骨折炎性反应,可能的机制为补肾活血方能显著调节患者的免疫功能,提高体液免疫功能,促使炎性因子降低[4]。刘毅峰等[5]研究表明,补肾活血汤还能改善骨折局部微循环,提高血流动力学水平,有助于吸收炎性因子及降低炎症渗出。

中医理论认为,骨折后常出现局部气血不畅,脉络瘀阻,血瘀则肿,气滞则痛,关节活动受限[6]。肾主骨,骨折愈合与肾精活血关系密切。中医治疗的原则为补肾健骨,活血化瘀。补肾活血方中熟地黄、山茱萸用作君药,主要发挥补肾壮骨之效;肉苁蓉、杜仲、补骨脂、菟丝子、枸杞子用作臣药,枸杞子能补肾益精、益肝明目;补骨脂能补肾助阳;杜仲能补肝益肾、强筋骨;肉苁蓉能补肾壮阳、润肠通便;红花能活血化瘀、通经止痛;当归能补血活血、调经止痛;全方合用共奏壮阳补肾、强筋健骨、活血化瘀、通经止痛的功效[7,8]。现代药理研究表明,熟地黄有效成分能调节机体免疫功能,抗氧化;山茱萸能增强免疫力及耐氧力;菟丝子能促进转化生长因子β1表达,有效促进骨折愈合[9];补骨脂、杜仲、肉苁蓉能促使骨髓间充质干细胞成骨分化;肉苁蓉还能提高骨形态发生蛋白表达;杜仲能促进骨折处矿物沉积,提高骨密度,有助于骨折愈合;红花能抗血栓、抗凝血;当归能止痛镇痛[10]。在中医整体观念及辨证论治的指导下,补肾活血方抓住骨折后病机,从根本上改善了患者临床症状。

ALP是由早期成骨细胞分泌的,可用于评价成骨细胞分化程度、骨转化、骨代谢的敏感指标[11]。ALP参与细胞外基质矿化,作用于有机磷酸酶,激活钙化过程。骨组织中钙、磷离子常保持动态平衡。骨折后骨折端钙盐沉积,血钙浓度显著下降,ALP水平也低于正常水平。周剑鹏等[12]研究发现,骨折患者早期血清Ca2+、ALP水平会明显下降,采用中药活血通络方治疗3个月后,Ca2+、ALP水平上升。本研究结果显示,两组治疗后ALP、Ca2+水平均显著提高,且观察组ALP、Ca2+升高程度显著优于对照组。ALP是由成骨细胞早期分泌,其水平显著升高提示为成骨细胞活性增强。结果提示补肾活血方能有效促进骨折愈合,增强骨密度。本院研究结果还发现,观察组治疗后关节功能评分、愈合时间均显著优于对照组。补肾活血方能多方面加快骨折愈合,减轻炎症反应,改善微循环,促进新骨再生。

血清碱性磷酸酶 篇5

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析本院2011年1月—2013年10月收治的黄疸患者614例, 患者住院期间均明确病因诊断, 分为肝细胞性黄疸组及梗阻性黄疸组。其中肝细胞性黄疸302例, 其中男175例, 女127例;年龄25~85岁, 平均56.4岁。梗阻性黄疸312例, 其中男166例, 女146例;年龄34~79岁, 平均63.5岁。312例梗阻性黄疸分为良性梗阻性黄疸组及恶性梗阻性黄疸组, 良性梗阻性黄疸170例, 其中男90例, 女80例;恶性梗阻性黄疸142例, 其中男76例, 女66例。同时随机选择该时期健康查体患者100例, 其中男55例, 女45例;年龄25~86岁, 平均66岁。

1.2 方法

黄疸患者均在治疗前清晨空腹采静脉血进行肝功能检查, 梗阻性黄疸患者均在术前清晨空腹采静脉血进行CA19-9检查。记录所有患者GGT、ALP、ADA、CA19-9值, 各项结果经过严格质控。判定结果阳性标准为:GGT>52U/L, ALP>150U/L, ADA>18U/L, CA19-9>35U/ml。1.3统计学方法采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析。计量资料以 (±s) 表示, 进行F检验;计数资料以率表示, 进行χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组GGT、ALP、ADA比较

黄疸患者GGT、ALP值均较对照组增高, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。梗阻性黄疸组的GGT、ALP值均较肝细胞性黄疸组高, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。肝细胞性黄疸组的ADA水平高于对照组与梗阻性黄疸组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。梗阻性黄疸组的ADA值与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05, 见表1) 。

注:与对照组比较, *P<0.05, ▲P>0.05;与肝细胞性黄疸组比较, △P<0.05

2.2 3组GGT、ALP、CA19-9比较

恶性梗阻性黄疸组的GGT、ALP值高于良性梗阻性黄疸组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。良性梗阻性黄疸组及恶性梗阻性黄疸组的CA19-9值高于对照组, 且恶性梗阻性黄疸组高于良性梗阻性黄疸组, 差异有统计学意义 (P<0.05, 见表2) 。

注:与对照组比较, *P<0.05;与良性梗阻性黄疸组比较, △P<0.05

2.3 各指标在各组中阳性数及阳性率比较

肝细胞性黄疸组的ALP、ADA阳性率与梗阻性黄疸组比较, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;良性梗阻性黄疸组的CA19-9阳性率与恶性梗阻性黄疸组比较, 差异有统计学意义 (P<0.05, 见表3) 。

注:与肝细胞性黄疸组比较, *P<0.05;与良性梗阻性黄疸组比较, △P<0.05;“-”表示无数据

3 讨论

黄疸作为肝胆系统疾病常见的临床表现, 病因诊断至关重要, 直接关系到患者治疗方案及预后, 特别是恶性梗阻性黄疸, 发现时多为肿瘤晚期, 如不及时接受治疗, 患者生存期短, 预后差。因此尽早确定黄疸病因及鉴别梗阻性黄疸的良恶性对早期治疗、改善预后有重要的临床意义。

GGT在肝内主要存在于肝细胞浆和肝内胆管上皮中, 此酶在肝细胞受损时仅轻中度升高, 但当梗阻性黄疸时, 此酶因排泄障碍而逆流入血而显著升高, 甚至达正常的10倍以上。ALP从胆管系统排泄, 肝细胞性黄疸时, 肝细胞过度制造ALP, 经淋巴道和肝窦进入血液可引起轻中度升高, 而梗阻性黄疸时, 由于胆汁排泄障碍, 反流入血而引起ALP明显升高。本研究结果也证实了以上两点, 与国内外文献报道一致。本研究同时显示恶性梗阻性黄疸GGT、ALP水平均明显高于良性梗阻性黄疸, 其机制可能为除以上所述胆管梗阻引起两酶活性升高外, 癌细胞也合成GGT、ALP[1], 这为良恶性梗阻性黄疸的鉴别诊断提供了重要指标。

血清ADA主要来源于肝细胞质, 任何原因造成的肝细胞损伤会引起肝细胞膜的通透性增强, 致使血清中的ADA活性升高, 故该酶可作为反映肝实质损伤的指标[2,3]。本研究显示其在梗阻性黄疸中阳性率非常低, 但在肝细胞性黄疸中阳性率较高, 表明其可以作为黄疸患者类型鉴别的敏感指标, 与文献报道一致[4]。

CA19-9是一种黏蛋白型的糖类蛋白肿瘤标志物, 是消化道肿瘤, 特别是胆胰系统恶性肿瘤特异性最高的肿瘤标志物, 在恶性梗阻性黄疸患者中明显升高, 如胰头癌、胆管癌、壶腹周围癌等, 本研究显示在恶性梗阻性黄疸组中CA19-9值较良性组显著增高, 但在良性梗阻性黄疸组中也有较高的阳性率 (48%) , 因此还需结合其他辅助检查方可鉴别梗阻性黄疸的良恶性[5]。

本研究结果显示, 不论是GGT、ALP、ADA, 还是CA19-9, 在各组病例间均存在交叉, 资料显示某些良性黄疸患者CA19-9水平也可超过1000U/ml[6], 因此不能单纯依某个指标来鉴别黄疸类型, 联合检测各指标才有临床应用价值。本次研究提示:GGT、ALP显著升高, 而ADA无明显升高的考虑梗阻性黄疸;GGT、ALP轻中度升高, 而ADA显著升高的考虑肝细胞性黄疸;GGT、ALP、CA19-9均显著升高者考虑恶性梗阻性黄疸。当然, 找到特异性更高的检测指标来鉴别黄疸类型仍是今后科研工作的方向。

摘要：目的 探讨血清谷氨酰转肽酶 (GGT) 、碱性磷酸酶 (ALP) 、腺苷脱氨酶 (ADA) 、糖类抗原CA19-9升高程度在黄疸类型鉴别中的价值。方法 选取本院2011年1月—2013年10月收治的黄疸患者614例, 根据黄疸类型将614位患者分为肝细胞性黄疸组和梗阻性黄疸组, 后者又分为良性梗阻性黄疸和恶性梗阻性黄疸两组, 分析GGT、ALP、ADA、CA19-9水平在各组间分布差异。结果 GGT、ALP值在梗阻性黄疸组中较肝细胞性黄疸组高, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;ADA值在肝细胞性黄疸组较对照组与梗阻性黄疸组增高, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;GGT、ALP、CA19-9值在恶性梗阻性黄疸组中较良性梗阻性黄疸组高, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。结论 GGT、ALP显著升高, 而ADA无明显升高的黄疸考虑梗阻性黄疸;GGT、ALP轻中度升高, 而ADA显著升高的黄疸考虑肝细胞性性黄疸;GGT、ALP、CA19-9均显著升高者考虑恶性梗阻性黄疸。

关键词：谷氨酰转肽酶,碱性磷酸酶,腺苷脱氨酶,糖类抗原CA19-9,黄疸

参考文献

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骨碱性磷酸酶与血钙检测结果分析 篇6

关键词：骨源性碱性磷酸酶,血钙,临床检测分析

现在随着人们生活水平的不断提高, 人们越来越注意营养保健, 特别是对于发育期的儿童, 由于受到社会各种营养品的不断充斥, 进补营养品在目前社会日益泛滥, 特别是对于儿童的补钙, 儿童是否补钙以及如何补钙、到底需不需要补钙是日益矛盾的课题[1], 鉴于此, 本院检验科对436例儿童进行骨碱性磷酸酶测定, 以及血钙判定, 现就其临床检测结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本室采集2013年4月~2014年2月来本院进行入托前健康体检的儿童的血清, 进行骨碱性磷酸酶和血钙检测, 共436人, 年龄2.5~6岁, 平均年龄 (4.6±1.5) 岁, 其中男孩229人、女孩207人。

1.2 标本采集

取被检者早晨的空腹静脉血3ml, 首先用标准微量吸管吸取40μl加入专用微量元素稀释液中, 待血液凝固完全后离心分离血清, 标本不能有溶血、黄疸、脂血, 以免影响结果的准确性。

1.3 试剂和仪器

北京普析通用MB5血液五元素分析仪, 试剂:专用微量元素血液稀释液;南京神州英诺华D360全自动生化分析仪, 试剂:上海长征体外诊断试剂。

1.4 结果测定

操作严格按照试剂盒说明书进行, 分析测定过程杜绝钙离子污染。

2 结果

BALP及血钙的检测结果 (血清钙的正常参考值为1.6~2.3mmol/L, 骨碱性磷酸酶的正常参考值为:42~128 U/L) 见表1。

3 讨论

3.1 缺钙的原因

儿童处于生长发育的高峰期, 生长速度较快, 对于营养物质需要量大, 但是儿童的消化器官发育不完善, 不能将进食的食物全部吸收, 再加上生活中对于儿童的喂养不当, 孩子偏食、挑食以及缺乏钙、维生素D的补充, 就很容易造成儿童缺钙。常见症状, 有夜惊、多汗、吵夜、厌食、出牙迟、发稀、站立迟、语言迟等。

3.2 骨碱性磷酸酶与血钙的检测

骨碱性磷酸酶在维生素D不足时, 会明显升高, 因为, 维生素D的缺乏, 造成成骨细胞的活跃, 并且研究表明[2], 儿童年龄越小, 生长发育越快, 骨碱性磷酸酶的阳性率就越高, 所以, 骨碱性磷酸酶检测对于早期诊断维生素D缺乏造成的佝偻病意义较大;由于维生素D缺乏性佝偻病初期往往血钙趋于正常, 检测带来了困难, 但对于佝偻病激期与维生素D缺乏搐溺症具有诊断意义[3]。

总之, 通过本组研究病例发现, 骨碱性磷酸酶与血钙存在一定的关系, 血钙较低的患儿, 其骨碱性磷酸酶一般较高。同时还发现, 骨碱性磷酸酶与血钙在对于佝偻病的预防上各有长短, 骨碱性磷酸酶能够对于维生素D缺乏造成的佝偻病有敏感性, 然而血钙的检测只能说明儿童的钙来源或者吸收不好, 不能用于患儿佝偻病的临床诊断, 但是对于患儿因为佝偻病造成手足抽搐意义较大。

参考文献

[1]Magnusson P, Hager A, Larsson L.Serum osteocalcin and boneand liver alkaline phosphatase isoforms in healty children and adolescents.PediatrRes, 1995, 38 (6) :955-961.

[2]Magnusson P, sharp CA, Farley JR.Different distribution of humanbone alkaline phosphatase isoforms in serum and bone tissue ex-tracts.Clin Chim Acta, 2002, 325 (1-2) :59-70.

血清碱性磷酸酶 篇7

1 材料与方法

1.1 试验材料

6羽试验用成年番鸭购自本镇某养殖户, 大小相似匀称、健康活泼、发育正常。

1.2 试剂与仪器

试剂:金属离子无机盐, 0.5 mol/L醋酸镁溶液, 0.1 mol/L醋酸钠溶液, 0.01 mol/L醋酸镁-0.01 mol/L醋酸钠溶液, Tris-HCLp H8.8缓冲液, 正丁醇、丙酮、95%乙醇, 0.1 mol/L碳酸盐缓冲液 (p H10.0) , 20 mmol/L磷酸苯二钠, 0.5 mol/L氢氧化钠溶液, 0.3%4-氨基安替比林 (AAP) 溶液, 0.25%铁氰化钾, 酚标准液 (1 mg/m L) , 有机溶剂都是国产分析纯试剂。

仪器:匀浆器, 离心机, 722分光光度计, 恒温水浴箱, 漩涡混合器, 试管, 移液管, 量筒, 滴定管, 移液枪等。

1.3 试验方法

1.3.1 取材

将6羽番鸭统一放血处死, 打开其腹腔, 取出每羽番鸭的肝脏并分别称重, 作好标记, 最后放进冰箱冷冻层冷藏备用。

1.3.2 碱性磷酸酶的分离纯化

1) 称取新鲜鸭肝2 g左右, 剪碎后置于匀浆器, 加入2 m L0.01 mol/L醋酸镁-0.01 mol/L醋酸钠溶液, 充分磨成匀浆, 转移至离心管, 用4.0 m L上述溶液分2次冲洗匀浆管, 并倒入离心管, 混匀。此为A液。另取一支试管, 编号为A, 取0.1 m LA液, 加入0.9 m L Tris缓冲液 (p H8.8) 混匀, 供测酶活性用。

2) 向A液中加2.0 m L正丁醇, 用玻璃棒充分搅拌2 min左右。室温内放置20 min后过滤, 于滤液中加入等体积冷丙酮, 立即混匀后离心5 min (2 000 r/min) , 弃上清液, 向沉淀中加入0.5 mol/L醋酸镁溶液, 用玻璃棒充分搅拌使其溶解, 同时记录体积, 此为B液。吸取0.1 m LB液, 置于编号为B的试管中, 加入0.9 m L Tris缓冲液 (p H8.8) 混匀, 供测酶活性用。

3) 向B液中加入95%冷乙醇, 使乙醇终浓度达到30%, 混匀后立即离心5 min (2 000 r/min) , 量取上清液体积, 倒入另一离心管中, 弃去沉淀。向上清液中加入95%冷乙醇, 使乙醇终浓度达60%, 混匀后立即离心5 min (2 000 r/min) , 弃上清液, 向沉淀中加入4.0 m L 0.5 mol/L醋酸镁溶液, 充分搅拌, 使之溶解, 同时记录体积, 此为C液[4]。吸取C液0.2 m L置于编号为C的试管中, 加入1.8 m L Tris缓冲液 (p H8.8) , 供测酶活性用。

在酶的制备过程中, 每经一步处理, 都需要测定酶的活力和比活力。唯有比活力提高较大, 提纯步骤才有效。

1.3.3 碱性磷酸酶活性测定

碱性磷酸酶特异性低, 在碱性环境中能水解很多磷酸单酯化合物。因此, 可用于测定的底物很多。国内广泛应用以磷酸苯酯二钠 (简称磷酸苯二钠) 为底物的金氏比色法[5]。磷酸苯二钠经碱性磷酸酶分解生成磷酸和酚, 后者在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用, 经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物, 从而根据红色深浅可计算出酶的活性。

0.1 m L酶液, 加入0.1 mol/L碳酸盐缓冲液1.0 m L, 37℃水浴5 min, 然后加入预温37℃的20 mmol/L磷酸苯二钠溶液1.0 m L, 混匀后于37℃水浴15 min, 再加入0.5 mol/L氢氧化钠溶液1.0 m L, 0.25%铁氰化钾溶液2.0 m L, 充分摇匀, 于波长510 nm处比色测定, 读取其光吸收值。查标准曲线, 求得酶活性。

m L

注:每100 m L组织匀浆液在37℃与底物作用15 min, 产生1 mg酚为1个金氏单位。

1.3.4 蛋白质含量的测定

蛋白浓度的测定采用Folin-酚法 (Lowry法) [6]。以已知标准蛋白的光密度值为纵坐标, 标准蛋白浓度为横坐标制作浓度-光密度标准曲线, 利用该标准曲线法求得待测蛋白质含量。标准蛋白溶液 (250 ug/m L) 以牛血清蛋白制得。

立即混匀, 室温下放置30 min, 以0号组为空白对照组, 于波长650 nm处比色测定, 记录数据。

1.3.5 酶促反应的动力学性质研究[7]

1.3.5. 1 酶促反应Km值的测定

以磷酸苯二钠为底物, 在37℃、p H10的条件下, 分别测定碱性磷酸酶在不同底物浓度下的反应速度, 按LineweaverBurk作图法求出Km值。

1.3.5. 2 温度对AKP活性测定

在p H10的缓冲溶液中, 改变体系温度, 测定酶活性, 研究温度对AKP活性的影响。

1.3.5. 3 p H对AKP活性测定

在37℃下, 改变体系p H, 测定酶活性, 研究p H对AKP酶活性的影响。

1.4 数据处理

采用Excel对数据进行处理。

2 结果与分析

2.1 标准曲线绘制

用金氏比色法测定标准酚溶液的OD值, 绘制酶活性标准曲线, 如图1。

采用Folin-酚法, 绘制出蛋白质标准曲线, 如图2。

2.2 碱性磷酸酶的分离纯化

从表1中可看出, 经正丁醇、丙酮和乙醇的逐级处理后, 碱性磷酸酶比活力增加, AKP比活性以C液最高, 为476.8 U/mg, 然后依次为B液287.6 U/mg, A液151.4 U/mg。纯化倍数提高, C液的纯度为A液的3.1倍。

2.3 酶促反应的动力学研究

2.3.1 米氏常数的测定

以磷酸苯二钠为底物, 按照测定酶活性的条件和方法, 分别测定不同底物浓度时的反应速度, 用Lineweaver-Burk作图法 (图3) , 求得番鸭肝脏AKP的Km值为5.28 mmol/L。

2.3.2 p H对肝脏碱性磷酸酶活性影响

从图4可以看出在p H较小时AKP的活性很低, 随p H的升高酶活性变大。当p H为9.7时活性最大, 但随着p H的继续升高, AKP的活性不断下降, 本试验AKP的最适温度在9.7。

2.3.3 温度对肝脏碱性磷酸酶活性影响

从图5可以看出, 肝脏碱性磷酸酶最适温度为50℃, 在40~50℃的范围内该酶都有较高的活性, 55℃时酶活性迅速下降, 而当温度达到60℃时酶活性只有最高值的28.2%。

3 讨论

1) 生物体内的酶是新陈代谢的重要催化剂, 其活力大小可直接反映机体的代谢状况, 影响机体的生长发育、生理状况和适应性[8]。AKP在机体代谢过程中起着非常重要的作用, 能催化水解磷酸单酯、磷酸核苷以及6-磷酸糖等化合物, 从而使机体代谢旺盛, 生长加快[9]。

2) AKP是生物体内的一组膜结合蛋白, 是一种能水解多种类型磷脂的非特异性酶。其参与机体物质转运、离子分泌、机体防御和软骨钙化, 是动物赖以生长、生存的重要酶类之一[10]。目前学者普遍认为, AKP与物质转运过程与磷酸的可利用性有关。AKP在骨骼的形成、糖代谢以及脂肪的吸收和合成中有着重要作用。不同的动物由于遗传和环境条件不同, 其AKP的性质不同, 因此对不同动物的AKP的生物学特性进行研究不仅可以丰富酶学知识, 而且在生产实践中具有指导意义。

3) 试验结果表明, 不同物种的AKP生物学性质有差异。番鸭肝脏AKP的最适p H为9.7。而据报道, 草鱼APK的最适p H为10.41[11], 瘦肉型猪APK的最适p H为9.5[12], 白蜡虫APK的最适p H为8.51[13]。番鸭肝脏APK的最适温度50℃, 不同物种间APK的最适温度差异不大, 基本在40~50℃。

血清碱性磷酸酶 篇8

碱性磷酸酶(ALP)广泛分布于人体各脏器官中,主要存在于肝脏、骨骼成骨细胞、胎盘、肾脏、肠壁等。其中以肝脏为最多,其次为肾脏、骨骼、肠和胎盘等组织。血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞,少量来自肝。ALP也是目前免疫诊断试剂产品最常用的标记酶之一,临床上测定ALP主要用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊断,尤其是黄疸的鉴别诊断。对于不明原因的高ALP血清水平,可测定同工酶以协助明确其器官来源。ALP测定试剂盒则用于体外定量检测人血清或血浆中碱性磷酸酶的活性,在临床上作辅助诊断用。

1. 试验过程

1.1 碱性磷酸酶试剂盒说明

试剂盒里试剂为双试剂,即分别由R1(缓冲液,主要成分为2-氨基-2-甲基-1-丙醇)、R2(底物,主要成分为对硝基苯磷酸盐)组成。

1.2 试验原理

对硝基磷酸盐在PH10.4且有镁离子存在的环境下,可以被ALP水解成p-NP,p-NP在405nm处有特异性吸收,且由p-NP引起的吸光度上升的速率与ALP的活力成正比。

1.3 操作说明

(1)试验依据:采用企业注册标准《碱性磷酸酶试剂盒》中对“试剂空白吸光度”的试验方法,同时结合产品说明书进行试验。

试剂空白吸光度:将R1试剂与R2试剂以5:1混合配制成应用试剂,用蒸馏水调整分光光度仪的零点后,测定试剂在波长405nm、1cm比色池、37℃条件下稳定30s后的吸光度,测定3次,取其平均值作为应用试剂的空白吸光度,吸光度值应≤0.6。

(2)试验试剂:严格按照产品说明书中对ALP的检验方法要求,即R1:R2:质控血=25:5:1配制成试验试剂。

(3)试验仪器:半自动生化分析仪(Secomam Basic)、全自动生化分析仪(迈瑞BS-800)、紫外分光光度仪(TU-1901)。

(4)试验步骤。

(a)用半/全自动生化分析仪和紫外分光光度仪分别连续3次检测应用试剂空白吸光度(检测波长为405nm、412nm、415nm);

(b)用紫外分光光度仪对应用试剂进行扫描(以蒸馏水调整分光光度仪零点);

(c)用紫外分光光度仪对试验试剂进行扫描,检出特征吸收峰(以应用试剂调整分光光度仪零点)。

2. 试验结果

(1)用不同仪器检测得出试剂空白吸光度的值(见表1)。

(2)以蒸馏水调零,得出应用试剂的光谱图(见图1)。

(3)以应用试剂调零,得出试验试剂光谱图,检出特征吸收峰(见图2)。

图2.

3. 对试验结果的分析

3.1企业的产品注册标准中要求试剂空白吸光度应≤0.6,从表1中数据得出:第一,在测定波长为405nm时,用半自动生化分析仪和紫外分光光度仪所测得吸光度均大于0.6,不符合标准要求,且两台仪器所测得的值有一定差异,差值近0.1。

3.2 从图1可看出,以蒸馏水调零后,应用试剂的吸光度在400nm～450nm波长范围呈下降趋势,其下降趋势与表1中用不同仪器分别在412nm、415nm这两个波长所测得的具体数据相吻合。

3.3从图2得出,试验试剂的特征吸收峰为415nm,与试验原理中所提及到的“p-NP在405nm处有特异性吸收”不相吻合。

4.结束语

ALP试剂盒的试验原理为ALP将硝基磷酸盐水解成对硝基酚(p-NP),即是以最终反应生成物p-NP吸光度的变化率来检测出ALP的活力。根据相关文献报道:不同的酸碱度对p-NP的呈色反应有影响,酸性时P-NP最大吸收峰为295~340nm;碱性时P-NP最大吸收峰为375~420nm。该厂家生产的试剂盒的试验原理中特别注解试验环境“在PH10.4”(即为碱性环境),特征吸收峰为405nm,与试验所得特征吸收峰为415nm虽都在文献报道的吸收峰范围内,但两个吸收峰相差10nm。查阅目前市场上几大厂家生产的碱性磷酸酶试剂盒(试验原理相同)的说明书,说明书上皆标注在405nm处有特征吸收峰,这与紫外分光光度仪的特性不相吻合(注:从紫外分光光度仪的特性来讲,任一物质通过仪器扫描所得的特征吸收峰和理论吸收峰之差都应在±2nm内)。

在此,笔者对该厂家企业注册标准中对空白吸光度的要求(≤0.6)理解是:第一,注册标准没有根据空白吸光度的具体试验数据结果来制定,标准的可行性不强;第二,按照试验的平行操作原理,如空白吸光度是在415nm处检测,做准确性这一项目时,所得准确性的结果也应是在415nm处测得,这与标准中要求的检测波长405nm不相吻合,即标准的制定缺乏可操作性;第三,目前不论是全自动生化分析仪还是半自动生化分析仪,其检测波长都为固有化,即只有相应的几个波长可供选择,如半自动生化分析仪(Secomam Basic)的检测波长只有8个,全自动生化分析仪(迈瑞BS-800)的检测波长只有12个。企业在制定产品注册标准及试验方法时只能选择与真实特征吸收峰相隔最近的波长为检测波长,或许由此原因,让企业在拟定产品注册标准时会考虑到相关问题,从而使得产品的注册标准有一定的缺陷。但不论是何原因,产品的注册标准应与产品的出厂检验结果相一致,即应通过具体的试验来验证标准的可行性和可操作性,且企业也应通过出厂检验的结果来严格把握好产品的质量关。

摘要：从检测一厂家生产的碱性磷酸酶(ALP)试剂盒的试剂空白吸光度所得的值,分析企业标准中所涉及的检测波长是否合理。

关键词：试剂空白吸光度,特征吸收峰,波长

参考文献

[1]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验手册[M].3版.南京.东南大学出版社2006452-456

[2]中华人民共和国卫生部.WS/T124-1999临床化学体外诊断试剂盒质量检验总则[S].1999。

[3]李研,张孝山,李瑞兰,潘彤.酸碱度对对硝基酚呈色反应研究及应用[J].天津医药[2003](05)