因子还原（精选3篇）
因子还原 篇1
化工、制药、印染、制革、造纸、食品加工和采矿等工业废水中含有高浓度硫酸盐,该废水具有较高的潜在危害性,在自然界中性质稳定,依靠自然净化作用难以去除。硫酸盐还原菌(SRB)广泛存在于土壤、海水、河水、地下管道、油气井等处,利用SRB的代谢作用处理高浓度硫酸盐废水是当前水污染控制研究的热点。当含硫酸盐废水流经厌氧反应器时,SRB以有机污染物作为电子供体,将硫酸根作为电子受体还原为两价硫,从而达到去除硫酸盐的目的。本实验从某发电厂循环冷却塔塔底粘泥中分离、提纯硫酸盐还原菌,研究了生态因子对其活性及代谢功能的影响,探讨了通过生态因子促进SRB生长、提高硫酸盐还原率的可行性。
1 实验材料和方法
1.1 实验菌株
实验菌株取自某发电厂循环冷却塔塔底粘泥,采用厌氧菌滚管分离法对硫酸盐还原菌分离纯化。
1.2 培养基及培养条件
1.2.1 固体培养基
固体培养基用于SRB菌种的分离纯化。其组成为:乳酸钠4.0 m L/L;酵母浸汁1.0 m L/L;维生素C0.1 g/L;Mg SO4·7H2O 0.2 g/L;K2HPO40.01 g/L;Na C10.0 g/L;(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O 0.2 g/L;琼脂15.0 g/L。
将固体培养基缓慢加热溶解,用HCl、Na OH调节p H值至7.3,在121 k Pa高压蒸汽灭菌锅中消毒20 min,稍冷加入经紫外线消毒的硫酸亚铁铵。
1.2.2 API-RP38培养基
API-RP38培养基用于SRB菌种的活化培养,其组成为:乳酸钠4.0 m L/L;酵母浸汁1.0 m L/L;维生素C 0.1 g/L;Mg SO4·7H2O 0.2 g/L;K2HPO40.01 g/L;Na Cl10.0 g/L;(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O 0.2 g/L。
培养基用HCl、Na OH(0.05 mol/L)调节p H值至7.0~7.2,在121 k Pa高压蒸汽灭菌锅中消毒20 min,冷却后加入经紫外消毒的硫酸亚铁铵。
1.2.3 Postgate C培养基
Postgate C培养基组成为:K2HPO40.5 g/L;NH4C1.0 g/L;Na2SO42.26 g/L;Ca Cl20.1 g/L;Mg SO4·7H2O2.0 g/L;Na Cl20 g/L;维生素C 0.1g/L;乳酸钠5.0m L/L;酵母浸汁1.0 m L/L。
培养基用HCl、Na OH(0.05 mol/L)调节p H值至7.3,在121 k Pa高压蒸汽灭菌锅中消毒20 min,在37±1℃下恒温培养。
1.3 菌种的富集、分离与纯化
取5 g塔底粘泥加入45 m L无菌水浸出,充分振荡、静置,取上层清液即粘泥浸出液,接入API-RP38培养基中进行厌氧培养。API-RP38培养基中含有Fe2+,与SRB的代谢产物S2-生成黑色的Fe S,待培养基变黑后采用稀释涂布—叠皿夹层培养法对菌种进行分离、纯化,将其置于4℃以下冰箱中保存。
1.4 SRB菌量的测定
SRB菌量的测定采用血球计数板—显微镜直接计数法测定。
1.5 SO42-分析检测方法
可溶性SO42-的定量分析采用Ba SO4重量法。
1.6 p H值对硫酸盐还原菌生长的影响
用HCl和Na OH调节培养基p H值分别为4、5、6、7、8、9、10,编号,高压灭菌后加入等量的SRB菌种放入37±1℃下生化培养箱中恒温培养14 d,期间每天测定各培养基中SRB菌量。
1.7 SRB生长过程中p H值随时间的变化规律
调节Postgate C培养基p H值分别为7.3,加入等量SRB菌种放入37±1℃生化培养箱中恒温培养20 d,第0~10 d,第12,14,16,18,20 d分别测定培养基p H值。
1.8 COD∶SO42-对硫酸盐还原菌生长的影响
1.8.1 硫酸盐致变COD∶SO42-值对SRB硫酸盐还原率的影响
硫酸盐致变COD∶SO42-值即以COD为定值,改变硫酸盐浓度而导致的不同COD∶SO42-值。用乳酸钠将Postgate C培养基中COD固定为1 000 mg/L,调节培养基中SO42含量,使COD∶SO42-分别为1∶1、2∶1、3∶1、4∶1,编号后加入等量的SRB菌种,放入生化培养箱中37±1℃恒温培养10 d,测定各培养基中初始时刻及第10 d的SO42-含量。
1.8.2 COD致变COD∶SO42-值对SRB硫酸盐还原率的影响
COD致变COD∶SO42-值即以SO42浓度为定值,改变COD浓度而导致的不同COD∶SO42-值。将Postgate C培养基中SO42固定为300期mg/L,调节培养基中乳酸钠含量,使COD∶SO42-分别为2∶1、3∶1、4∶1、5∶1,编号后加入等量的SRB菌种,放入生化培养箱中37±1℃恒温培养10 d,测定各培养基中初始时刻及第10 d SO42-含量。
1.9 温度对硫酸盐还原菌生长的影响
将Postgate C培养基编号后加入等量的SRB菌种,放入生化培养箱中,在20℃、30℃、35℃、40℃、50℃、60℃、70℃恒温培养5 d,分别测定各培养基中SRB菌量。
2 结果分析
2.1 p H值对硫酸盐还原菌生长的影响
在SRB代谢过程中,p H值高低主要影响硫酸盐还原酶系的构象、性质、生物学活性与稳定性,引起细胞膜电荷的变化,从而影响SRB对底物的吸收[1]。
不同p H值的培养基中SRB生长曲线见图1所示。
由图1可知,在相同培养时间内,SRB在p H值为7时生长最好,3 d时菌量峰值达到3.548×108个/m L。当p H值>7时,随着p H值升高,培养基中SRB数量逐渐减少,3 d时菌量达到1.798×108个/m L。当p H值<7时,随着p H值降低,培养基中SRB数量逐渐减少,生长受到抑制。
式中:G——平均世代时间;
Nt1——对数生长期中t1时刻的菌量;
Nt2——对数生长期中t2时刻的菌量。
可计算出SRB在各培养基中生长繁殖的平均世代时间,结果见图2所示。
SRB在对数生长期,菌体内成分均匀,酶系活跃,代谢旺盛,平均世代时间G可以表征菌体生长代谢活性的强弱,G值越小,菌体代谢活性越强。由图2可知,在p H值为7时,SRB的G值最低,为3.28 h,菌体代谢活性最强。当p H值>7时,随着p H值升高,G值逐渐增大,菌体代谢活性逐渐减弱。当p H值<7时,随着p H值降低,培养基中SRB的G值增大,菌体代谢活性逐渐减弱。
在p H值为7.0的条件下生长情况最佳,在p H值为7.0~8.0的范围内生长情况良好,p H值过低时大部分SRB难以生长和进行硫酸盐还原。
2.2 SRB生长过程中p H值随时间的变化规律
SRB生长过程中p H值随时间的变化见图3所示。
图3表明,Postgate C培养基中接种SRB后,前5 d中p H值由7.3急速降至6.3,此后下降趋于平缓,第20 d后p H值递减为6.2。可见在对数生长期,SRB生长代谢旺盛,菌量呈指数级增长,代谢产生大量脂肪酸和硫化物,使培养基p H值急剧下降。
2.3 COD∶SO42-对硫酸盐还原菌生长的影响
硫酸盐致变COD∶SO42-值、COD致变COD∶SO42-值对SRB硫酸盐还原率的影响见图4所示。由图4可知,随着COD∶SO42-值增大,有利于SRB的生长代谢,硫酸盐还原率均逐渐升高。当COD∶SO42-为4∶1时,硫酸盐还原反应进行得比较彻底。
2.4 温度对硫酸盐还原菌生长的影响
温度主要通过影响SRB细胞膜的流动性和生物大分子的活性来影响其生命活动。一方面,随着温度的升高,细胞内酶反应速度加快,生长、代谢加快;另一方面,随着温度的进一步升高,细胞中大分子物质如蛋白质、核酸及其它生物活性物质发生不可逆改变,参与生化反应的功能下降,高温也可使细胞膜中脂类溶化,膜中产生小孔,细胞内含物泄露,导致细菌死亡[2]。图5表明,SRB在35℃时生长最好,生长速度快,代谢活力旺盛,最适生长温度为30~40℃。当温度超过该范围时,SRB生长均不同程度受到了抑制。
3 讨论
(1)SRB所能耐受的p H值范围较窄,其生长适宜p H值范围为7~8,当p H值为7时生长最优。SRB生长过程中p H值随时间递减;
(2)随着COD∶SO42-值增加,各培养基中SO42-还原率逐渐增大。当COD∶SO42-为4∶1时,SRB硫酸盐还原转化能力和COD去除能力较高。
(3)SRB适应中温生长,适宜生长温度为30~40℃,在35℃时生长情况最好,温度过高或过低均会影响其生长。
参考文献
[1]刘安波.硫酸盐还原作用对升流式厌氧污泥床工艺性能影响的研究[D].北京:清华大学,1993.
[2]山丹.大庆油田注水系统硫酸盐还原菌的分布规律及生态因子研究[D].哈尔滨:哈尔滨工业大学,2005.
硫酸盐还原菌的生长因子的探讨 篇2
微生物法处理含硫酸盐酸性矿山废水的实质是利用自然界中的硫循环反应原理,利用硫酸盐还原菌(Sulphate Reducing Bacteria,SRB)将SO42-还原为H2S并进一步通过生物氧化作用将H2S氧化为单质S的过程。其中因微生物法具有费用低、适用性强、无二次污染,可回收副产品单质硫等优点,已成为酸性矿山废水处理技术的热门课题。
SRB通常指的是能通过异化作用进行硫酸盐还原的一类细菌。近年来人们已经较成功掌握了15个种属,其中用于废水处理的有9个属,主要的2个属为Desulfovibrio和Desulfotomaculum,二者均为革兰氏阴性菌。SRB的一个重要生理特征是生长力强[2]。它广泛存在于水田、湖、沼、河川底泥、石油矿床等自然界中。
本文主要讨论硫酸盐还原菌的影响因素。
1 SRB的基本特性
SRB是在无氧状态下,用乳酸或丙酮酸等有机物作为电子供体,用硫酸盐作为末端电子接受体而繁殖的一群偏性兼气性细菌[3]。
SRB的一个重要生理特征是生长力强。它广泛存在于水田、湖、沼、河川底泥、石油矿床、反刍动物的第一胃等地方。SRB不仅具有广泛的基质谱,生长速度快,还含有不受氧毒害的酶系,因此可以在各种各样的环境中生存,保证了SRB有较强的生存能力。
SRB的另一生理特性是硫酸盐的存在能促进其生长,但不是其生存和生长的必要条件。在缺乏硫酸盐的环境下,SRB通过进行无SO42-参与的代谢方式生存和生长;当环境中出现了足量的硫酸盐后,SRB则以SO42-为电子受体氧化有机物,通过对有机物的异化作用,获得生存所需的能量,维持生命活动[4]。
2 SRB的生长因子
2.1 碳源
SRB属于异养微生物,即其生长代谢转化硫酸盐需要一定的碳源,这些碳源既是增加生物量所需,又作为供电子体对硫酸盐进行还原异化。
近年来许多研究结果表明,在有硫酸盐存在的条件下,不同的污泥来源、不同的驯化条件得到的生态系统中,利用各种碳源基质的SRB的分布必然有较大差别,从而表现为污泥对于各种碳源具有不同的硝化能力,进而影响到它们对硫酸盐的还原速率。SRB的不同菌属生长所利用的碳源是不同的[5],最普遍的是利用C3,C4,脂肪酸,如乳酸盐、丙酮酸、苹果酸。近20余年来,由于选用不同碳源的培养基,SRB利用的有机碳源和电子供体的种类不断扩大,发现SRB还能利用乙酸、丙酸、丁酸和长链脂肪酸及苯甲酸等。SRB在利用多种多样的化合物作为电子供体时表现出了很强的能力和多样性,迄今发现可支持其生长的基质已超过100种。另外,SRB除了能利用单一有机碳化物作为碳源和能源(化能有机生长)外,还可利用不同的物质分别作为碳源和能源。四川大学的万海清等人[6],以改良的LTH液体培养基为基础,分别用甲醇、乙醇、乙酸、丙酸、乳酸、葡萄糖、正己酸和苯酚作为单一碳源,试验SRB利用碳源的情况。在35℃,pH=6.5的条件下培养,根据培养液中产生H2S的快慢、多少、出现黑色FeS的量,可判定SRB还原转化硫酸盐的效率与对碳源的利用情况。其结果是:SRB能以甲醇、乙醇、乳酸、葡萄糖等有机物作为良好碳源,SRB对它们的消耗速率大小为:乳酸>乙醇>甲醇>葡萄糖;SRB不能利用乙酸、丙酸、正己酸、苯酚。
2.2 氮源
铵盐是大多数SRB生长所需的氮源。据一些报道,某些SRB还能够固氮。一些菌种能够利用氨基酸中的氮作为氮源,少数菌种能通过异化还原硝酸盐和亚硝酸盐提供氮。1992年,BooPahty分离出一株脱硫弧菌(Desulfovlbroi)能够利用硝酸盐,亚硝酸盐和2,4,6-三硝基苯(TNT)作为氮源和电子受体[7]。
2.3 温度
温度是影响厌氧SO42-还原的主要环境参数,直接决定SRB的代谢活性和生长速度。如前所述,SRB可分为中温菌和嗜热菌两类。至今所分离到的SRB菌属大多是中温性的,其最适温度一般在30℃左右。SRB在28℃~38℃时生长最好,其临界高温值是45℃。
在废水处理中,SRB对温度的依赖性是多样的、非随机性的。据研究,纯培养的SRB最佳生长温度是30℃左右,但在含硫酸盐废水和各菌群混合共生的复杂体系中,SRB的硫酸盐还原速度不仅仅取决于环境的温度是否为最佳温度,还要受竞争的影响,一般在35℃时,其硫酸盐还原速率最大。
2.4 pH
pH是影响SRB活力的主要因素之一,合适的pH环境对微生物的生长及代谢是必须的。[H+]的高低直接影响硫酸盐还原酶系的构象、性质及生物学活性。主要体现在:
1)pH值引起细胞电荷的变化,从而影响SRB对底物的吸收;2)影响SRB代谢过程中各种酶的活性与稳定性;改变生态环境中底物的可给性以及毒物(如影响H2S的存在状态)的毒性;3)透过细胞膜的有机酸在SRB细胞内重新电离,改变胞内的pH值,影响许多生化反应的进行及ATP的合成。
相对于产酸菌来说,SRB所能忍耐的pH范围较窄。SRB一般不在pH<6.0的条件下生长,SRB生长最适pH值一般在中性范围内。许多研究表明,纯培养的SRB的最佳工作pH值是6.7左右,而混合培养时,由于菌群间复杂的共生关系,其耐受的pH可以有所降低。当pH值在6.8~7.2之间时,硫酸盐还原效果最好,反应器中的pH值范围为6.0~8.0时,反应器中的硫酸盐还原是可行的[8]。不同的研究者得出的结论也有差异,存在这些差异的原因有细菌本身在一定的环境条件下发生驯化适应作用,反应器中的营养和生长因子比较适宜,细菌之间有互营共生作用,细菌互相粘连而以絮状体形式存在等。
2.5 氧化还原电位
不同微生物对环境中的氧化还原电位的要求差异很大,早期人们认为SRB属于严格厌氧菌,但近期的研究表明SRB在微氧的环境中也能生存,在前面论述过。但总的来说任何SRB均不以O2作为电子受体生长。为保证硫酸盐有效的还原,SRB生长的氧化还原电位(Eh)必须低于-100 mV。氧气(空气)以及氧化态化合物对SRB有着十分强烈的抑制作用[9]。
由SRB能够耐受少量氧气存在(氧气过量使SRB不能生长)的性能可知,SRB菌体内可能存在去除有害活性氧的机制。O2获得电子变成的超氧阴离子自由基就是活性氧的一种形式,它在厌氧菌细胞中可破坏各种生物高分子和细胞膜,也可形成其他活性氧化物,故对生物体十分有害。然而,在兼性耐氧菌胞体内存在解毒除害的超氧化物歧化酶(SOD)与过氧化氢酶等,它们在液体环境下,能将超氧阴离子转变成H2O2后再变为H2O和O2,四川大学的万海清等[6]通过菌团能使H2O2明显释放出O2的实验,证明所用SRB菌体内确实含有H2O2酶。
2.6 可见光(或紫外光)
SRB对光很敏感。在通常的发散日光下,SRB会受到完全的抑制,故SRB有机体必须在黑暗中培养。
3 结语
SRB是一类多样性群体,在厌氧处理反应器中,碳源、氮源、温度、pH、氧化还原电位、可见光等各种生态因子相互影响、相互制约,共同作用于SRB。研究和探讨这些因子,令其在合理的范围内取值,对硫酸盐废水处理有重要的意义。
摘要：对厌氧处理硫酸盐废水过程中硫酸盐还原菌的生态学进行了综述,详细介绍了硫酸盐还原菌的生理特性、所利用的碳源、氮源的种类,以及影响SRB对废水中硫酸根还原作用的多种因子,如pH值、温度、氧化还原电位等各种因素,并阐明硫酸盐还原菌是一类多样性群体,对硫酸盐废水处理有重要的意义。
关键词：硫酸盐还原菌,基本特性,影响因子
参考文献
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[3]俞敦义,彭芳明,刘小武,等.环境对硫酸盐还原菌生长的影响[J].材料保护,1996,29(2):1-2.
[4]付玉斌.硫酸盐还原菌诱发腐蚀的研究特点[J].材料开发与应用,1999,14(5):45-47.
[5]李亚新,苏冰琴.硫酸盐还原菌和酸性矿山废水的生物处理[J].环境污染治理技术与设备,2000,1(5):1-11.
[6]万海清,苏仕军.硫酸盐还原菌的生长影响因子及脱硫性能的研究[J].高校化学工程学报,2004,18(2):124-126.
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[8]Renze T,Van Houten,Letting G.A Novel Reactor Design forBiological Sulphate Removal.Proc.8,International Conf..onAnaerobic Design,1997:25-29.
因子还原 篇3
1 材料与方法
1.1 药品
参比品 (批号C201105002) :四川恒星生物制药有限公司于2011年5月第2批生产的CH225注射液;对照品 (批号C201107006) :四川恒星生物制药有限公司于2011年7月第6批生产的CH225注射液;爱比妥 (Erbitux) :通用名西妥昔单抗 (cetuximab) , 默克公司生产。
1.2 主要试剂和仪器
SDS-PAGE电泳装置和扫描仪为Bio-Rad公司产品;水为超纯水, 其余试剂均为分析纯。
1.3 缓冲液的配制
还原型SDS-PAGE供试品缓冲液 (2×) :0.12 mol/L Tris-HCl, 20%甘油, 0.1%溴酚蓝, 4%SDS, 200 mmol/L DTT;非还原型SDS-PAGE供试品缓冲液 (2×) :0.12 mol/L Tris-HCl, 20%甘油, 0.1%溴酚蓝, 4%SDS;天然供试品缓冲液 (2×) :0.12 mol/L Tris-HCl, 20%甘油, 0.1%溴酚蓝;加碘乙酰胺的非还原SDS-PAGE供试品缓冲液 (2×) :向上述非还原SDS-PAGE供试品缓冲液中加入新鲜配制的1 mol/L碘乙酰胺母液, 至终浓度为200 mmol/L。
1.4 实验过程
1.4.1 70℃与100℃水浴非还原SDS-PAGE分析
C201105002 (参比品) 、稀释至2 mg/m L与2×非还原SDS-PAGE供试品缓冲液等体积混合, 70℃分别水浴1、3、5 min后, 立即转入冰浴。另取相同样品加入与2×非还原SDS-PAGE供试品缓冲液等体积混合, 100℃分别水浴1、3、5 min, 立即转入冰浴。再取相同样品加入2×非还原SDS-PAGE供试品缓冲液等体积混合, 不经水浴。分离胶浓度8.0%, 10μL/孔上样, 100 V电压开始电泳, 待指示剂前沿进入分离胶后, 电压改为150 V。电泳结束后, 凝胶用考马斯亮蓝R250染色[5]。
1.4.2 普通非还原SDS-PAGE与天然SDS-PAGE分析
C201105002 (参比品) 和Erbitux样品均稀释至2 mg/m L与2×非还原SDS-PAGE供试品缓冲液等体积混合, 分别70℃水浴3 min、100℃水浴1 min后, 立即转入冰浴。分离胶浓度8.0%, 10μL/孔上样, 100 V开始电泳, 待指示剂前沿进入分离胶后, 电压改为150 V。另取相同样品加入天然供试品缓冲液后不进行加热变性处理, 直接进行SDS-PAGE电泳。再取相同样品加入2×非还原SDS-PAGE供试品缓冲液等体积混合, 不经水浴进行电泳。电泳结束后, 凝胶用考马斯亮蓝R250染色[5]。
1.4.3 添加碘乙酰胺的非还原SDS-PAGE分析
C201105002 (参比品) 、C201107006和Erbitux样品均稀释至2 mg/m L, 分别加入2×非还原SDS-PAGE供试品缓冲液或加碘乙酰胺的2×非还原SDS-PAGE供试品缓冲液, 混匀后, 70℃水浴3 min。分离胶浓度8.0%, 上样量10μL, 采用室温条件下150 V恒压电泳。电泳结束后, SDS-PAGE凝胶用考马斯亮蓝R250染色[1]。
2 结果
2.1 70℃与100℃不同时间水浴非还原SDS-PAGE分析
70℃分别处理1、2、3 min的样品电泳结果的相对分子量小的次带依次减少, 70℃3 min相对分子量小的次带已基本不可见;100℃1、2、3 min时相对分子量小的次带有增加趋势, 100℃1 min时相对分子质量小的次带已基本消失;未经水浴的条带出现多个杂的相对分子低的次带。表明对样品进行70℃3min或者100℃1 min的水浴处理对减少相对分子小的次带有较好的效果, 见图1。
注:1.70℃1 min;2.70℃2 min;3.70℃3 min;4.100℃1 min;5.100℃2 min;6.100℃3 min;7.样品未经水浴
2.2 普通非还原SDS-PAGE与天然SDS-PAGE分析
未经水浴的样品中相对分子量大和相对分子量小的杂条带比较明显;对样品进行过预处理的电泳结果条带单一;而对样品未经预处理的天然SDS-PAGE电泳结果出现弥散状条带, 见图2。
注:1.样品未经水浴;2.爱比妥普通非还原70℃3 min;3.爱比妥普通非还原100℃1 min;4.爱比妥天然SDS-PAGE;5.参比品普通非还原70℃3 min;6.参比品普通非还原100℃1 min;7.参比品天然SDS-PAGE
2.3 添加碘乙酰胺的非还原SDS-PAGE分析
爱比妥、C201107006、参比品在添加碘乙酰胺的情况下都比其没有添加碘乙酰胺的相对分子量小的次带要少得多;添加碘乙酰胺的样品和未添加碘乙酰胺但经过100℃1 min水浴的样品的相对分子量小的次带都明显减少;在70℃3min煮样后再添加碘乙酰胺对减少相对分子量小的次带基本没有效果, 见图3。
注:1.参比品100℃1 min;2.爱比妥未加碘乙酰胺;3.爱比妥加碘乙酰胺;4.对照品未加碘乙酰胺;5.对照品加碘乙酰胺;6.参比品未加碘乙酰胺;7.参比品加碘乙酰胺;8.参比品煮样后加入碘乙酰胺
3 讨论
由以上实验, 可推测, 电泳中低分子量条带可能由这些原因导致:在基因表达过程中, 抗体分子内存在自由巯基, 这些自由疏基因为无法形成完整的二硫键, 轻链和重链之间只能由非共价键的作用力连接[6,7];在电泳时样品的加热变性处理或未经处理的过程中 (如图2) , 轻链和重链之间的非共价键断裂, 因此而导致产生了一些游离的抗体分子亚基, 从而出现了低相对分子质量条带[8];另外, 在电泳时样品的加热变性处理的条件下, 抗体分子的自由巯基还可能会引发二硫键重排, 导致部分链间二硫键断裂, 增加低相对分子质量条带出现的几率[9,10]。
高分子量聚体带产生的可能原因是, 在加热变性处理的过程中, 抗体分子间的自由巯基通过缩合形成分子间二硫键, 从而将单体的抗体分子连接成分子聚体, 出现聚体带[7,8,9]。碘乙酰胺可以保证蛋白质样品完全变性并保持还原状态, 可以对蛋白质分子中的自由巯基进行封闭, 以阻止二硫键重排的反应以及自由巯基重新形成二硫键, 从而抑制电泳次带的产生[8,11,12]。封闭自由巯基后的非还原SDS-PAGE结果显示, 如图3中所示, 高相对分子量的聚体带基本消失, 低相对分子量带显著减少, 证明非还原SDS-PAGE结果中出现的次带是在电泳样品变性处理过程中因有自由巯基的存在而产生的。
综上实验结果, 鉴于100℃煮样1 min情况下, 加不加碘乙酰胺对次带形成影响不大, 因此以后CH225项目质量检测的SDS-PAGE实验采用100℃煮样1 min, 不加碘乙酰胺的预处理方案。
摘要：目的:分析CH225在非还原电泳时抗体条带主条带以外在高分子量和低分子量产生杂条带的原因。方法:在不同的供试品缓冲液和不同电泳条件下进行SDS-PAGE电泳比较。结果:上样前100℃煮样1 min与加碘乙酰胺结果相同。结论:高分子量和低分子量杂条带可以用电泳上样前100℃煮样1 min消除即可。