TaqMan荧光探针（共3篇）
TaqMan荧光探针 篇1
非洲猪瘟( African swine fever,ASF) 是由非洲猪瘟病毒( African swine fever virus,ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触性传染病。ASF自1910 年在肯尼亚首次被发现以来,一直存在于撒哈拉以南的非洲国家,从20 世纪60,70 年代开始蔓延至欧洲南美地区和北美地区,直至2007 年格鲁吉亚爆发非洲猪瘟,此后亚美尼亚、阿塞拜疆和俄罗斯都出现了大面积流行[1,2]。目前,ASF已对我国养猪业的持续稳定发展构成潜在的巨大威胁。流行病学研究表明,ASFV通过感染蜱、野生猪( 如庞猪、非洲野猪、南非野猪和大野猪) 和家猪实现其在饲养环境和野生环境之间的循环传播[3,4],带毒蜱和野猪是家猪的重要传播媒介。此外,给猪饲喂被污染的饲料和携带病毒的肉、脏器等制品以及引入带毒种猪和进口相关的猪产品( 猪肉制品、精液) ,也是ASF进入无疫情国家的重要原因[1,2]。因此,对边境接壤地区蜱和野猪开展ASFV的流行病学调查,以及对来自风险国家进口的活猪及猪产品进行ASFV的检测,是无疫情国家防止ASF传入的重要措施。近年来,国内外针对ASFV已建立了病毒分离鉴定、病毒抗原和病毒核酸的多种检测方法,包括红细胞吸附( HAD) 试验、荧光抗体( IF)试验、酶联免疫吸附( ELISA) 试验和聚合酶链式反应( PCR) 等[5,6,7,8,9],特别是实时荧光PCR方法克服了传统PCR方法易污染和扩增后需电泳检测等缺点,不仅适用于急性感染早期动物组织样本中的ASFV检测,而且更适用于对急性感染恢复期、低毒力或中等毒力感染家猪以及持续性感染的野猪和软蜱组织样本中ASFV核酸的检测。ASFV是一种有囊膜的单分子线状双链DNA病毒,其基因组长为170 ~ 193 kb,含有151 ~ 165 个ORF[10],其中的CP530R基因是非洲猪瘟病毒在感染细胞内高效表达的基因之一,该基因编码合成的PP62 前体蛋白经p S273R色氨酸蛋白酶处理后裂解为成熟的p35 蛋白和p15 蛋白,参与ASFV的衣壳组装和成熟过程[11]。本研究根据ASFV CP530R基因的保守序列设计合成了特异性引物与Taq Man - MGB探针,建立了一种检测ASFV核酸的实时荧光PCR方法,具有快速、敏感和特异的特点,为我国ASFV防控工作提供一种快速而准确的技术手段。
1 材料
ASFV基因组DNA,从意大利撒丁岛动物疫病参考实验室获得; 伪狂犬病毒( PRV) 、猪细小病毒( PPV) 和猪圆环病毒2 型( PCV - 2) 的基因组DNA,以及经典猪瘟病毒( CSFV) 和猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV) 、猪流行性腹泻病毒( PEDV) 和猪流感病毒( SIV) 的c DNA,由天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心反刍动物检疫国家重点实验室保存。组织基因组提取试剂盒,购自天根生化科技有限公司; 克隆载体PCR2. 1,购自INVITROGEN公司;Ta KaRa TaqTM聚合酶、Premix Ex TaqTM( Probe q PCR) ,购自大连宝生物工程( 大连) 有限公司; 低温高速离心机( Eppendorf,5417R) 、荧光PCR仪( Rochi公司,Light Cycler480 ) ,由天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心反刍动物检疫国家重点实验室提供。
2 方法
2. 1 引物与探针的设计与合成
对从Gen Bank数据库( http: / /www. ncbi. nlm.nih. gov / ) 下载的ASFV CP530R基因序列进行同源性分析比较,选出高度保守且特异的区域,用Beacon Designer 7. 0 软件设计1 对特异引物和Taq Man -MGB探针,由上海英骏生物技术有限公司合成,5' 端用FAM标记,3'端用MGB标记,引物和探针序列见表1,预期扩增片段长度为73 bp。
2. 2 质粒标准对照的制备
根据ASFV CP530R基因序列设计、合成了4 条引物用于方法建立及评价的质粒标准对照,引物序列见表2。在50 μL的PCR扩增体系中,依次加入10 × Buffer( 含Mg Cl2) 5 μL,d NTPs( 2. 5 mmol /L)4 μL,Ta KaRa Taq聚合酶( 5. 0 U / μL ) 0. 2 μL,CP530R F1 ( 1 pmol / μL) 、CP530R R1 ( 1 pmol / μL) 、CP530R F2( 25 pmol / μL) 和CP530R R2( 25 pmol / μL)各1 μL,用dd H2O补足50 μL。PCR扩增反应参数为: 94 ℃ 预变性5 min; 94 ℃ 变性30 s,60 ℃ 退火30 s,72 ℃ 延伸20 s,共35 个循环; 72 ℃ 延伸10 min。将扩增产物回收后与PCR2. 1 克隆载体连接,转化至E. coli DH5α 感受态细胞,挑取阳性克隆质粒进行测序鉴定。将正确插入CP530R基因扩增靶序列的阳性克隆质粒命名为PCR2. 1 - ASFV -CP530R,用核酸蛋白分析仪测定其浓度,然后按下列公式换算成拷贝数浓度为6. 1 × 1010copies / μL: 拷贝数浓度( copies/μL) = ( OD260值 × 50 × 稀释倍数 ×10- 8/ ( 324. 5 × 碱基数) × ( 6. 02 × 1023) 。
2. 3 实时荧光PCR反应的优化
用灭菌水将引物探针分别稀释为2 ~ 10 pmol/μL和1. 5 ~ 3. 5 pmol/μL,以6. 1 × 106copies / μL的PCR2. 1 - ASFV - CP530R为扩增模板,采用Premix Ex TaqTM( Probe q PCR) 试剂及推荐的25 μL反应体系及扩增条件,在荧光PCR仪上对不同浓度组合的引物和标记探针进行实时荧光PCR方阵筛选试验,以确定最适引物和探针使用浓度组合。在最适引物和标记探针的浓度下,对退火延伸温度在56 ~ 61 ℃范围内进行实时荧光PCR筛选试验,以确定荧光PCR最适扩增条件。
2. 4 标准曲线的绘制
用灭菌去离子水稀释质粒标准对照为6. 1 ×102~ 6. 1 × 109copies / μL,对不同稀释度的质粒标准对照模板在最适反应条件下进行PCR扩增。反应结束后以Ct值为横坐标、质粒标准对照DNA起始拷贝数浓度的对数为纵坐标绘制质粒标准对照曲线。
2. 5 敏感性试验、重复性试验和特异性试验
将质粒标准对照做10 倍系列稀释,每个浓度取1 μL作为模板,按优化的反应条件进行实时荧光PCR试验,确定该方法检测质粒标准对照的最低拷贝数; 选取5 个浓度( 6. 1 × 103~ 6. 1 ×107copies / μL) 的质粒标准对照为模板,按优化的反应条件分别进行2 个平行样品的4 次重复实时荧光PCR试验,以确定该方法的可重复性; 以ASFV、PRV、PPV和PCV - 2 的DNA以及CSFV、PRRSV、PEDV和SIV的c DNA为模板,按优化的反应条件进行实时荧光PCR试验,同时设阴性对照,以确定该方法的特异性。
2. 6 实际样本的检测
对2012—2014 年保存的126 头份进口猪的血清样品和38 份进口猪肉样品,用组织基因组DNA提取试剂盒按操作说明书提取DNA,然后采用本试验建立的实时PCR方法进行ASFV核酸检测,以评价该方法的适用性。
3 结果与分析
3. 1 引物及探针的保守性分析结果
用DNAMAN软件对设计的引物及探针序列与Gen Bank数据库公布的全部14 条ASFV CP530R基因序列进行了比对,结果见图1。
图1 ASFV CP530R基因扩增靶序列的比对及引物和探针的位置Fig.1 Alignments of the amplified target sequences of ASFV CP530R genes and the locations of primers and probes
由图1 可见,上游引物仅有2 个序列( AY261363. 1. SEQ和AY261366. 1. SEQ) 的中间位置出现1 个C /T碱基的替换,下游引物中仅有1 个序列( AY261364. 1. SEQ) 的中间位置出现1 个C /T碱基的替换,而探针序列完全保守,表明本研究设计的针对ASFV CP530R基因的引物和探针序列具有很高的保守性。
3. 2 实时荧光PCR反应的优化结果
试验以6. 1 × 107copies / μL的质粒标准对照为扩增模板,通过对不同使用浓度组合的引物和标记探针进行实时荧光PCR方阵筛选试验以及对退火延伸温度的筛选试验,确定的实时最适荧光PCR扩增条件为: 在25 μL反应体系中,依次加入2 × Premix Ex TaqTM( Probe q PCR ) 12. 5 μL,CP530R - F( 7. 5 pmol/μL) 、CP530R - R ( 7. 5 pmol/μL ) 和CP530R - P( 2. 5 pmol / μL) 各1 μL,6. 1 × 107/ μL的PCR2. 1 - ASFV - CP530R质粒模板1 μL,用纯水补足25 μL。反应参数为95 ℃ 2 min; 95 ℃ 10 s,56 ℃10 s,60 ℃ 30 s,共40 个循环。在每次循环60 ℃ 退火结束前采集FAM通道荧光信号,在该优化的实时荧光PCR条件下,可获得良好的典型扩增曲线,见图2。
图2质粒标准对照(6.1×107copies·μL-1)的实时荧光PCR动力学曲线Fig.2 The Real-time fluorescence PCR kinetic curve of the plasmid standard control(6.1×107copies·μL-1)
3. 3 标准曲线
以6. 1 × 101~ 6. 1 × 109copies / μL的质粒标准对照为扩增模板,按优化后的反应条件进行实时荧光RT - PCR反应,扩增曲线见图3A; 以起始模板浓度的对数为x轴,Ct值为y轴绘制成的标准曲线见图3B。Ct值与质粒标准对照拷贝数之间的线性关系表达式为y = - 3. 449x + 38. 10,相关系数( R2) 为0. 999,呈现良好的线性关系。
3. 4 敏感性试验结果
按优化后的反应条件对不同稀释度( 6. 1 × 101~6. 1 × 109copies / μL) 的质粒标准对照DNA进行实时荧光PCR反应,结果表明,该方法最低可检出61 个拷贝数的质粒标准对照DNA分子。
3. 5 重复性试验结果
选取5 个浓度( 6. 1 × 103~ 6. 1 × 107copies / μL)的质粒标准对照DNA为模板,按优化的荧光定量PCR反应条件进行双样品4 次重复试验,每个稀释度样本检测的Ct值及其计算出的平均值( x ± sd) 及变异系数( CV) 见表3。
由表3 可见,这5 个浓度质粒标准对照4 次重复试验的Ct值变异系数均小于2. 0% ,表明本试验所建立的实时荧光PCR检测体系稳定,具有良好的重复性。
图3质粒标准对照(6.1×101~6.1×109copies·μL-1)的实时荧光PCR扩增曲线(A)和标准曲线(B)Fig.3 The Real-time fluorescence PCR amplification curves and standard curves of the plasmid standard control(6.1×101~6.1×109copies·μL-1)
图4 ASFV的荧光定量PCR检测的特异性试验结果Fig.4 The results of specficity test of real-time PCR fluorescence assay for ASFV
3.6特异性试验结果
见图4。
由图4 可知,仅ASFV的DNA出现典型的扩增曲线,而PRV、PPV和PCV - 2 的DNA以及CSFV、PRRSV、PEDV和SIV的c DNA均无扩增曲线出现,表明该方法检测ASFV核酸有良好的特异性。
3.7临床样本检测结果
见表4。
份
由表4 可知,126 头份进口猪的血清样品和38份进口猪肉样品的ASFV核酸检测结果均为阴性,表明该方法可用于猪血清样本和猪肉样本中ASFV核酸的检测。
4 讨论
ASF是一种对养猪业危害巨大的病毒性疫病,已引起世界各主要养猪国家及地区的高度重视。由于本病缺乏用于防制的有效疫苗,在ASF流行的国家及地区,对疑似发病猪进行ASF快速而准确的诊断,是及时采取措施控制本病、减少经济损失的重要前提。在无ASF疫情国家及地区,对可能携带ASFV的野猪和软蜱的流行病学监测以及对来自风险国家及地区的活猪和猪制品ASFV的检测,是防控ASFV传入的重要措施。因此,建立快速、敏感和特异的ASFV检测方法可为ASFV的防控工作提供有力的技术手段。
国内外已建立的多种检测ASFV方法中,HAD试验对高效价的ASFV可在24 h内得到准确的检测结果,但对于一个阴性结果的判定至少需要6 d的时间,对某些低毒力ASFV的检测结果HAD试验往往呈阴性[12,13],不适合快速检测的要求。IF和ELISA试验检测ASFV抗原,虽具备快速、准确的特点,但对于亚急性感染和慢性感染猪的低ASFV载量样本缺乏足够的敏感性,易出现假阴性结果[9]。此外,目前世界动物卫生组织( OIE) 规定涉及ASFV活毒的HAD、IF和ELISA等试验操作应在生物安全三级实验室条件下进行,实时荧光PCR方法对灭活样品仅需在生物安全二级实验室条件下即可进行,特别适用于急性感染早期动物组织样本、急性感染恢复期、低毒力或中等毒力感染家猪以及持续性感染的野猪和软蜱组织样本中ASFV核酸的检测。由于ASFV是一种基因组长为170 ~ 193 kb、含有151 ~ 165 个ORF的单分子线状双链DNA病毒,近年来国内外基于VP72、9GL、TopoisomeraseⅡ、P54 和K205R基因建立了多种PCR和实时荧光PCR方法[5,6,7,8]。CP530R基因是ASFV在感染细胞内晚期高效表达的一种编码合成PP62 前体的基因,该PP62 前体蛋白参与ASFV的衣壳组装和成熟过程[11]。本试验基于CP204L基因序列设计合成了1 对特异性强且序列高度保守的引物与探针,通过优化反应条件建立了一种检测ASFV核酸的实时荧光PCR方法,结果表明,该方法仅与ASFV的DNA发生特异性扩增反应,不与PRV、PPV、PCV - 2、CSFV、PRRSV、PEDV和SIV等发生交叉反应,具有良好的特异性。用该方法定量检测ASFV CP530R基因的质粒标准对照,在6. 1 × 102~6. 1 × 109copies / μL范围内Ct值与起始模板拷贝数之间呈现良好的线性关系,最低可检测到61 个拷贝的质粒标准对照。本研究采用该方法对164 份样本进行ASFV检测,从样品DNA提取到报告检测结果的整个试验过程可在3 h内完成,具有特异、敏感、快速和高通量的特点,为我国预防ASFV的传入和流行病学监测提供了一种实用而准确的检测方法。
本试验基于ASFV CP530R基因设计合成4 条引物进行PCR扩增,然后将扩增产物与克隆载体PCR2. 1 连接构建了插入预期ASFV CP530R基因序列的质粒标准对照,这种制备ASFV CP530R基因阳性对照的方法,既不涉及非洲猪瘟病毒及其基因组核酸的使用,也不需要人工合成ASFV CP530R基因DNA片段,具有简便、安全和经济的优势,完全适用于本试验中引物及探针序列的筛选、荧光PCR反应的优化、扩增标准曲线的建立及最低检出限的确定。此外,本试验采用Taq Man - MGB探针,可有效降低PCR反应荧光本底信号的强度,又能缩短探针的长度进而提高了探针对ASFV毒株序列的保守性。
TaqMan荧光探针 篇2
关键词：滩羊,肌肉抑制素(MSTN)基因,TaqMan探针,单核苷酸多态性(SNP),生长性状,关联
单核苷酸多态性( single nucleotide polymorphism,SNP) 指不同个体基因组序列同一位置上的单个核苷酸的差别,包括单碱基的转换、颠换以及单碱基的插入或缺失等[1]。Taq Man探针实时荧光PCR技术是一种通过检测PCR过程中及结束后产生的荧光信号来区分等位基因类型的SNP检测技术[2]。为了建立一种基于Taq Man探针技术的快速、准确且经济的实时荧光PCR法用于检测滩羊肌肉抑制素( MSTN) 基因SNP分型,试验选择MSTN基因的多态位点设计1对Taq Man探针加入到PCR反应系统中,对MSTN基因SNP进行分型,同时对MSTN基因的不同基因型与生长性状进行关联研究。
1 材料
选择宁夏滩羊为试验动物,均来自宁夏盐池县国家滩羊繁育中心,所选134 只滩羔羊出生日期、饲养管理水平及个体营养状况基本一致,每只羊颈静脉采血3 ~ 5 m L,ACD抗凝,- 20 ℃ 冻存,备用。跟踪称量羔羊出生重、断奶体重、三月龄体重和六月龄体重。
2 方法
2. 1 绵羊全血DNA的提取
使用全血基因组DNA提取试剂盒提取。
2. 2 引物及探针序列的设计
MSTN基因( rs417816017) 位点引物及探针[3]由ABI公司设计,序列如下: rs417816017 - F 5' -AGAACAGCGAGCAGAAGGAAA - 3',rs417816017 -R 5' - TGTCTCCACAAGCATGCATTACA - 3'; 探针序列1( VIC) 5' - CAGCCCCTTTTTTTCCACAT - 3' ( Y型为T/T纯合型) ,探针序列2 ( FAM) 5' - AGCCCCTTTTTTCCCACAT - 3'( X型为C / C纯合型) 。
2. 3 试验步骤
2.3.1样本浓度与纯度检测
采用DNA提取试剂盒从采集的绵羊冷冻全血中提取基因组DNA,通过分光光度计与1. 5% 琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取效果。
2.3.2 PCR反应体系
通过梯度法筛选出最佳PCR体系为: 2 × Taq Man Master Mix 10 μL,探针引物1 μL,c DNA模板2 μL,无菌去离子水7 μL。完成上述步骤后,把加好样品的孔板放于IQ5 荧光定量PCR仪进行反应。
2.3.3 PCR反应条件
通过梯度法筛选出最佳反应程序为50 ℃ 2 min; 95 ℃ 10 min; 95 ℃ 15 s,60 ℃ 60 s,共40 个循环。
2.3.4正式试验
待以上条件均检测完成后,即进行批量试验。
2. 4 数据的统计与分析
2.4.1滩羊MSTN基因与生长性状的数学模型
用χ2检验不同基因型在群体的分布平衡状况,所用模型为: y = μ + snp + e + s。式中: y为生长性状指标( 出生重、断奶体重、三月龄体重和六月龄体重) ; μ 为群体平均值; snp为基因型效应; e为随机残差效应; s为性别效应。
2.4.2统计软件
利用SAS( 8. 02 ) 统计软件GLM程序对MSTN基因型与生长性状( 出生重、断奶体重、三月龄体重、六月龄体重) 进行了关联分析。
3 结果与分析
3. 1 滩羊MSTN基因Taq Man探针分型结果
MSTN基因( rs417816017 ) 在滩羊群体中具有两种基因型,分别为XY、YY[4,5]。MSTN基因的基因频率与基因型频率见表1,基因型比例见图1。
3.2滩羊MSTN基因(rs417816017)扩增曲线
见图2、图3。
3. 3滩羊MSTN基因的SNP分型与生长性状的关联
MSTN基因的不同基因型与出生重、断奶体重、三月龄体重和六月龄体重等4 个生长性状最小二乘均值及其标准误见表2。
kg
注: 同列数据肩标字母不同表示差异极显著( P < 0. 01) 。
由表2 可知: XY基因型个体的生长性状值均极显著高于基因型YY个体( P < 0. 01) 。两种基因型间彼此的差异都达到了极显著水平( P < 0. 01) ,其中以XY型的增重最大。
3.4性别与不同基因型个体的方差
见表3。
kg
注: 同列数据肩标字母相同表示差异不显著( P > 0. 05) 。
由表3 可知,雄性与雌性的生长性状值在出生重、断奶重、三月龄体重和六月龄体重等4 个生长性状间均差异不显著( P > 0. 05) 。
4 讨论
4. 1 MSTN各基因型对滩羊生长性状的影响
试验利用Taq Man探针技术分析了滩羊MSTN基因SNP分型及其对生长性状的影响,结果表明,在滩羊群体中MSTN基因共检测到两个等位基因X、Y,且MSTN基因位点对生长性状的影响达到极显著水平( P < 0. 01) 。有人认为,MSTN基因对生长性状有显著的影响( P < 0. 05)[6,7],这在本研究中得到了证实。基因型XY为优势基因型,不同基因型对生长性状的影响大小为: XY型> YY型。
4. 2 性别对滩羊生长性状的影响
公畜一般生长发育较快,异化作用较强,生长速度快于母畜。本试验中将性别作为影响生长性状的因素之一[8],通过方差分析得出滩羊性别对其生长性状( 出生重、断奶体重、三月龄体重、六月龄体重)影响差异不显著( P > 0. 05) 。
5 结论
试验利用Taq Man探针方法开展了滩羊MSTN基因SNP分型检测,发现MSTN基因rs417816017 位点在滩羊群体中具有两种基因型: YY、XY。对滩羊MSTN基因与生长性状( 出生重、断奶体重、三月龄体重和六月龄体重) 的关联研究结果表明,XY型个体具有生长优势。本研究结果为深入开展滩羊育种提供了备选基因。
参考文献
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TaqMan荧光探针 篇3
1实验部分
1.1试剂
氯化镉 CdCl2·2.5H2O(分子量228.35)经重结晶纯化,重庆东方试剂厂生产;硫化钠 Na2S·9H2O (分子量240.18),汕头市西陇化工厂有限公司生产;巯基乙酸(分子量92.12),成都市科龙化工试剂厂;氢氧化钠(分子量40.00),重庆川东化工(集团)有限公司化学试剂厂;实验用水均为二次蒸馏水。
1.2仪器
HITACHI F-4500型荧光分光光度计;磁力搅拌器(85-2C),巩义市英峪予华仪器厂;YQY-07氧气减压器,重庆市万州气体厂;电子天平(型号:FA1104N),上海精密科学仪器有限公司;移液枪,BIOHIT百德实验室仪器(苏州)有限公司。
1.3储备液的配制
(1)氯化镉储备液的制备
称取氯化镉0.2283g,用水溶解后,移入500mL的容量瓶,用水稀释至标线,摇匀。
(2)硫化钠制备
称取0.1610g的硫化钠,用水溶解后,移入500mL的容量瓶,用水稀释至标线,摇匀。
(3)氢氧化钠的制备
称取氢氧化钠1.0000g,用水溶解后,移入50mL的容量瓶,用水稀释至标线,摇匀。
(4)巯基乙酸储备液的制备
在巯基乙酸溶液中,用移液枪移取100μL再加入10mL的蒸馏水中,摇匀。
(5)氯化镉标准使用液的制备
吸取50mL氯化镉储备液于100mL的容量瓶中,再吸取770μL的巯基乙酸储备液并加入100mL的容量瓶中。
1.4硫化镉量子点的合成[5]
(1)从氯化镉标准使用液中用移液管吸取50mL放入小烧杯中,用氢氧化钠配置液调节其pH值为10,摇匀,取25mL放入试剂管中。重复以上的实验,配置溶液pH分别为11、12分别装入试剂管中。
(2)将pH值10、11、12的溶液分别放入三口瓶中,控制反应温度分别为10℃、20℃、50℃,再放在磁力搅拌器通入半个小时的N2,并同时进行搅拌。在通气期间,从硫化钠制备液中吸取25mL放入小烧杯中,再分别吸取两次,同上。半个小时之后,向pH为10、11、12的溶液中分别滴入25mL的硫化钠,滴毕。在无氧条件下搅拌过夜,溶液由无色变为黄绿色,
2.5量子点材料的光谱测定
取合成的量子点材料1.0mL溶液,将其稀释10倍后进行荧光测量。激发波长335nm,发射波长范围420～600nm,狭缝均为10nm。
3结果与讨论
3.1反应温度对合成材料光学性质的影响
从图1,图2和图3可以看出在控制酸度反应条件一致的条件,温度对于合成材料具有影响。不管是在pH=10还是11或是12条件下,高温对于合成材料的光学性质是不利的。在pH 10和11的条件下,室温(20℃)合成的材料的发光性能不如10℃,但是在低酸度条件,即pH=12的条件下,室温和低温合成材料的性能差异不大。同时,我们还看到,不过是在什么酸度条件下,高温都会使的最大发射峰的位置发生红移,说明提高温度能够使得纳米材料的聚集程度变大[6,7]。
3.2反应酸度对合成材料光学性质的影响
从图4,图5和图6可以看出在控制温度反应条件一致的条件,酸度对于合成材料具有不同影响。在同一温度条件下,最大发射峰波动不大,同一温度pH=10,11,12条件下不会影响纳米粒子的大小。在低温条件下,酸度对材料的合成基本没有影响。在20℃条件下时,酸度越低对于合成材料的光学性质越有利,而在50℃条件下,对于酸度的变化不规律,pH为12时发光性质最好。
4结论
本文用巯基乙酸修饰合成了硫化镉量子点材料,考察了温度和酸度对于合成材料的光学影响。研究结果表明pH 10和低温条件有利于合成高发光性质的材料,对于加强量子点材料的合成机理研究具有积极意义。同时可能通过对条件影响的研究,进一步构建纳米材料在生物学和化学的应用范围。
摘要：荧光量子点作为一种新型的生物标记物,CdS纳米团簇可以发射较强的对人眼较敏感的黄色荧光,可以作为荧光探针。溶液在无氧条件下,通入氮气,以巯基乙酸为稳定剂,水溶液通过调节pH,再经过12小时的搅拌,合成由巯基乙酸修饰的CdS纳米团簇。通过在不同的pH和温度下合成,得到其最适合的pH为10,随着温度的降低其荧光强度增强。
关键词：量子点,CdS,温度,荧光探针,pH
参考文献
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