荧光抗体（精选4篇）
荧光抗体 篇1
狼疮性肾炎在临床中是一种常见的恶性内脏损伤性疾病, 对患者的生命安全造成严重的威胁。所以, 对狼疮性肾炎患者进行及时诊断对治疗而言, 具有重要意义, 就目前而言, 采用免疫荧光病理检验方法对其进行诊断, 具有显著的诊断效果[1]。此研究对我院2013年7月至2015年3月收治的112例狼疮性肾炎患者的临床资料进行分析, 报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料:选取我院2013年7月至2015年3月收治的112例狼疮性肾炎患者, 男性患者为86例, 女性患者为36例, 年龄均在18~63岁, 平均年龄为 (39.6±8.3) 岁。所有患者均符合狼疮性肾炎的诊断标准。在临床诊断中将其分为六种类型, 4例患者为Ⅰ型 (轻微系膜病变) , 25例患者为Ⅱ型 (系膜增生型) , 17例患者为Ⅲ型 (局灶型) , 45例患者为Ⅳ型 (弥漫型) , 16例患者为Ⅴ型 (膜型) , 5例患者为Ⅵ型 (重度硬化型) 。
1.2 方法:通过B超穿刺探头进行引导, 选择患者右肾下侧位置, 并将其设置为穿刺点, 通过皮自检活动枪对其实行穿刺, 选择2~4 mm左右的肾组织, 随后将其放置在生理盐水冰瓶里, 立即送往检查。肾组织应采用OTC进行处理, 并将其制作成为冰冻病理切片, 其切片厚度大致为4 μm, 采用丙酮对其进行固定处理, 时间为10 min, 并通过PBS进行清洗, 清洗次数为3次。除此之外, 还需要在病理切片上滴入C1q、C3、Ig G、Ig M、Ig A荧光体, 放置在温度为37 ℃的环境中进行培育, 培育时间为30 min, 完成上述流程后再次利用PBS对其进行清洗, 通过甘油密封病理切片, 并予以储存, 储存地点为4 ℃的冰箱中。
1.3 判定标准[2]:通过显微镜对C1q、C3、Ig G、Ig M、Ig A荧光体的沉积现象进行观察。按照视野范围中所存在的荧光强度采用半定量进行分析。当上述荧光体在同一个肾小球中存在沉积现象, 且沉积强度大于 (+) 时, 将其称为“满堂亮”。
1.4 统计学处理:选择Stata软件对研究中的数据进行分析, 其数据结果以%来进行表示, 数据间以P<0.05为差异, 表示具有统计学意义。
2 结果
2.1对比不同分型狼疮性肾炎的检验阳性率:患者经检测后发现, 其C1q、C3、Ig G、Ig M、Ig A常见于Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型以及Ⅴ型中, 病理间抗体阳性率经对比, 以P<0.05为差异, 表示具有统计学意义, 见表1。
2.2不同分型狼疮性肾炎患者病理切片中“满堂亮”的分布状况:患者经检验后, 其Ⅰ型患者病理切片中的Ig G均为阴性, 同时Ⅵ型患者的病理切片也呈现为阴性, 所以, 上述两种类型患者的病理切片均为出现“满堂亮”现象。而Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型以及Ⅴ型患者经检查后, 其阳性率为44.1%、48.7%、76.4%以及67.8%, 经比较, 以P<0.05表示, 具有统计学意义。
3 讨论
狼疮性肾炎是一种自身免疫复合物性肾炎, 具有较为复杂的病理变化, 此病产的原因是由于免疫复合物的生成, 其免疫细胞因子出现异常现象, 其临床症状则表现为肾功能不全以及血尿等症状[3]。根据ISN标准能够将其分为6种类型, 即为Ⅰ型 (轻微系膜病变) , Ⅱ型 (系膜增生型) , Ⅲ型 (局灶型) , Ⅳ型 (弥漫型) , Ⅴ型 (膜型) , Ⅵ型 (重度硬化型) 。
狼疮性肾炎在临床中病情发展较为缓慢, 常和发作进行相互交替, 因此病理类型也会出现转化现象, 通常情况下, 因自然发展的狼疮性肾炎会由Ⅰ型 (轻微系膜病变) , Ⅱ型 (系膜增生型) 向Ⅲ型 (局灶型) , Ⅳ型 (弥漫型) 进行转变。从而使得狼疮性肾炎患者的活动进行缓解, 病理类型会从重型向轻型进行发展, Ⅳ型 (弥漫型) 会随着病情发展转化成Ⅱ型 (系膜增生型) , 因此对患者进行肾活检时, 其结果仅仅只代表疾病过程中的某一部分。
狼疮性肾炎患者自身具有相应的抗体, 会逐渐形成大小存在差异的免疫复合物, 并在肾小球皮下位置、上皮下方位置以及系膜位置处产生沉积现象, 虽然主要物质为C3以及Ig G, 其Ig G、Ig M、Ig A会一同出现, 因此形成“满堂亮”现象[4]。此现象是狼疮性肾炎的主要表现特征。而“满堂亮”所具有的活动性在狼疮性肾炎患者中较为显著, 然而对于病情较轻的狼疮性肾炎以及出现较为硬化的狼疮性肾炎患者来说, 免疫复合物具有较弱的沉积强度。
在临床中对狼疮性肾炎进行诊断的过程中, 是通过肾脏病理、临床表现症状以及实验室检查进行诊断的, 所以, 免疫荧光病理检验对狼疮性肾炎进行诊断具有重要的临床意义, 提升“满堂亮”阳性的百分率对此病而言, 作用较大[5]。免疫荧光病理检验的主要基本原理则是将抗原抗体所存在的异性进行相互结合, 此方法具有较高的敏感性以及特异性, 同时对患者的定位较为准确, 能够对其采用半定量进行探究。然而所处的温度、时间以及对抗体形成的效价则会其染色效果产生影响。为此, 想要提升免疫荧光病理的技术水平, 应在检查工作中做到以下几点:想要将患者肾活检标本所存在的抗原性进行保存, 应及时将组织放置在生理盐水纱布中, 而生理盐水纱布应处在湿润的状态中, 随后将其放置在4 ℃的环境中, 及时送往检查。抗体应遵循现配现用的原则, 按照说明书对其进行试验, 从而找出良好的工作浓度。
在对抗体进行滴加之前, 需要通过免疫组织笔在组织周边进行划圈, 这样做则可以使抗体完全覆盖在组织切片中, 并未和周边组织中的抗体出现相互影响的现象。而盒中还应存在适量的蒸馏水, 以免在进行染色过程中切片出现干燥现象, 如果染色后没有显著的效果可以选择4 ℃过夜的手段, 从而使肾活检的质量提升。在玻片背面采用记号笔将组织切片的范围减小, 这样做有助于荧光镜及时找出肾组织, 以此来缓解荧光衰减现象。
在此研究中, C1q、C3、Ig G、Ig M、Ig A常见于Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型以及Ⅴ型中, 而“满堂亮”现象出现在Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型以及Ⅴ型患者中, 患者经检查后, 其阳性率为44.1%、48.7%、76.4%以及67.8%, 病理间经比较, 以P<0.05为差异, 表示具有统计学意义。
综上所述, 对狼疮性肾炎患者而言, 采用免疫荧光病理检验中荧光抗体的敏感性进行诊断, 具有良好的效果。经过大量研究表明, 敏感性能够有效提升狼疮性肾炎的诊断效果, 有助于后续治疗方案的确定, 值得在临床中推广应用。
参考文献
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荧光抗体 篇2
1 抗核抗体简介
从传统定义上看, ANA是一组专门针对细胞核内脱氧核糖核酸 (DNA) 、核糖核酸 (RNA) 、蛋白质、脂类、酶类及这些物质分子复合物的抗体, 其无器官特异性和种属特异性, 大多数属于Ig G类抗体。随着分子生物学、细胞生物学和免疫学等学科的不断发展及免疫荧光技术的日益改进, 目前对ANA的研究已不再仅仅局限于细胞核成分, 其靶抗原的分布已由传统的细胞核拓展到整个细胞, 除细胞核外, 还包括细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。
随着对ANA研究的不断深入, 目前已发现具有明确不同临床意义的ANA 20余种, 形成了初具体系的抗核抗体谱 (antinuclear antibodies, ANAs) , 这些抗体对风湿免疫性疾病如系统性红斑狼疮 (SLE) 、类风湿性关节炎 (RA) 、强直性脊柱炎、多发性硬化症 (MS) 、干燥综合征 (SS) 、皮肌炎及混合性结缔组织病 (MCTD) 等的诊断、鉴别诊断及衡量疗效, 判断预后都具有重要的临床价值[3,4,5]。值得注意的是, 某些非结缔组织病如慢性活动性肝炎、重症肌无力和慢性淋巴性甲状腺炎等也可见ANA阳性, 正常老年人也可出现低滴度的ANA。
2 间接免疫荧光法
IIF是公认进行ANA筛查的首选方法, 多以Hep-2细胞和灵长类动物肝脏如猴肝冰冻切片为抗原底物片。Hep-2细胞即人喉癌上皮细胞, 其核抗原丰富、特异性强、含量高, 核大、细胞结构清晰, 易于判读荧光染色核型结果, 该基质片较鼠肝 (肾) 冰冻切片检测ANA, 阳性率可提高10%~20%[6]。
2.1 荧光染色模型IIF检测ANA, 主要有以下6种常见荧光染色模型 (以Hep-2细胞为基质) :
(1) 核均质型 (homegeneous pattern, H) , 间期细胞核呈均匀的荧光, 分裂期细胞浓缩染色体亦呈均匀的荧光, 荧光更强, 该型的靶抗原主要有ds DNA、ss DNA、核小体和组蛋白。 (2) 核颗粒型 (spekled pattern, S) , 又称核斑点型或核斑块型, 间期细胞核呈颗粒样荧光, 分裂期细胞浓缩染色体阴性, 染色体周围区域为颗粒样荧光, 可细分为核粗颗粒型和核细颗粒型, 其靶抗原主要有n RNP、Sm、SS-A和SS-B。 (3) 核仁型 (nucleolar pattern, N) , 间期细胞核仁阳性, 分裂期细胞染色体阴性, 主要包括抗PM-Scl抗体、抗RNA多聚酶Ⅰ抗体、抗原纤维蛋白抗体和抗Scl-70抗体。 (4) 核膜型 (membranous pattern, M) , 间期细胞核呈均匀的荧光, 核周增强, 此型与抗板层素 (Lamins) 抗体相关。 (5) 着丝点型 (centromere pattern) , 间期细胞大小、数目 (40~60个) 相同的点状荧光均匀的分布于整个细胞核中, 分裂中期细胞的中间位置出现带状的浓缩点状荧光, 此模型对局限型进行性系统性硬化症具有很高的特异性和敏感性。 (6) 胞浆型 (cytoplasmic pattern, C) , 即细胞浆荧光染色阳性, 主要包括抗线粒体抗体 (胞浆粗颗粒型) 、抗核糖体P蛋白抗体 (胞浆细颗粒型, 有时可见核仁阳性) 、抗Jo-1抗体、抗高尔基抗体、抗溶酶体抗体、抗肌动蛋白抗体和抗波形蛋白抗体等。实际工作中, 同一份标本同时检出2种或2种以上荧光染色模型的混合型也比较常见, 此外, 还有一些较少见的荧光染色模型, 如中心粒型、中间体型和纺锤体型等。
2.2 抗体滴度。
应用IIF检测结果应报告抗体滴度, 以便于临床对病情程度进行判断, 其对观察疗效、判断预后也具有重要作用。有时一份血清内含有多种自身抗体, 高滴度的核均质型ANA往往会掩盖其他核型, 此时需用不同稀释度的血清进行检测, 有助于区分所含有的各种荧光染色模型。
3 报告模式
一个合乎规范、能体现所有检测信息的报告单至少应该包括以下要素:检测项目、检测结果 (包括滴度) 、参考范围和检测方法等。笔者推荐的报告模式见表1。
此外, 应用IIF检测ANA, 由于不同的抗体可能会出现相同的荧光染色模型, 也就是说抗体和荧光染色模型并不是一对一的关系, 因此仅根据荧光染色模型特点来推断抗体的特异性往往是比较片面的 (抗着丝点抗体、抗高尔基体抗体及抗中心体抗体等特殊荧光染色模型除外) , 而免疫印迹法则可以准确地鉴定部分靶抗原。因此在ANA的检测中, 强烈建议IIF和IBT联合应用, 以相互补充, 相互佐证, 避免误诊漏诊[7]。
参考文献
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[2]邢艳, 唐中, 袁国华.抗核抗体的研究进展[J].国外医学·内科学分册, 2006, 33 (5) :218-221.
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[4]李本忠, 光辉, 陈家东.抗核抗体谱在自身免疫性疾病中的临床应用[J].分子诊断与治疗杂志, 2010, 2 (4) :260-262.
[5]陈永峰, 王晓华.抗核抗体在结缔组织病中的临床意义[J].皮肤性病诊疗学杂志, 2014, 21 (4) :269-271.
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荧光抗体 篇3
1资料与方法
1.1一般资料:选择2014年1~12月在本院的同时申请检测ANA和ANAs的门诊和住院患者6121例。其中男1020例,年龄18~75岁,女5101例,年龄14~86岁。
1.2 IIF检测ANA:采用德国欧蒙公司提供的ANA(马赛克)IIF试剂盒,商品号:FA1510-1005-1,每个反应区含2种抗原复合基质:HEP-2细胞和猴肝组织。以抗体滴度≥1∶100为阳性。
1.3 LIA检测ANAs:ANAs检测采用LIA法,检测试剂盒由深圳市亚辉龙生物科技有限公司提供,其试剂条含有17个测定项目:抗ds DNA、抗核小体抗体、抗组蛋白抗体(抗histones)、抗Sm D1、抗增殖性细胞核抗原抗体(抗PCNA)、抗核糖体P蛋白抗体(抗P0)、抗SSA/Ro52kd、抗SSA/Ro60kd、抗SSB/La、抗着丝点蛋白B抗体(Cenp B)、抗硬皮病70抗体(抗Scl-70)、抗U1-sn RNP、抗线粒体M2型抗体(抗AMA-M2)、抗J0-1、抗多发性肌炎/硬皮病抗体(抗PM-Sc1)、抗Mi-2、抗Ku。将血清1∶100稀释,严格按试剂说明书操作,肉眼判断反应结果。
1.4统计学分析:统计学分析采用SPSS19.0统计软件,率的比较采用χ2检验,以P<0.05为差别有统计学意义。
2结果
2.1对2014年6121例标本同时用IIF检测ANA和LIA检测17种自身抗体,发现有IIF检测ANA阳性1200例,占19.6%,阴性4921例,占80.4%,LIA检测ANAs阳性1659例,占21.1%,阴性4462例,占70.9%。其中IIF-ANA-/LIA-ANAs+的有1107例,不一致率为22.5%。IIF-ANA+/LIA-ANAs-的有124例,不一致率为10.3%。见表1。
2.2在1107份IIF-ANA-/LIA-ANAs+标本中,中阳性率最高的前五种自身抗体是SSA/Ro60kd、SSA/Ro52kd、抗Sm D1、抗SSB抗体、抗histones,阳性率为分别为29.62%、18.32%、10.20%、9.58%、8.61%,总占76.33%,其余的占23.67%。见表2。
3讨论
抗核抗体是以细胞成分为靶抗原的器官非特异性自身抗体的总称,以Hep-2细胞为抗原基质的间接免疫荧光法(IIF)被认为是ANA检测的“金标准”[2]。而随着靶抗原的纯化技术不断提高,不断涌现自动化程度较高、易于标准化的检测方法,其中LIA是近年来研究较多的一种检测方法。但在实际检测过程中,我们会发现IIF检测ANA与LIA检测ANAs的结果不一致,笔者通过对二者不同结果进行分析,试图阐述该类标本检测自身特异性抗体的临床意义。
在对2014年6121例标本同时用IIF检测ANA和LIA检测17种自身抗体中发现,IF-ANA-/LIA-ANAs+的有1107例,不一致率为22.5%。其中阳性率最高的前五种自身抗体是SSA/Ro60kd、SSA/Ro52kd、抗Sm D1、抗SSB抗体、抗histones,阳性率为分别为29.62%、18.32%、10.20%、9.58%、8.61%,总占76.33%,其余的占23.67%,结果与周仁芳等人的报道的以SSA为主要抗体一致[3]。分析原因可能是HEP-2细胞SSA的表达丰度低以及固定过程中抗核抗原出现弥散丢失。有文献报道,如选择转染Ro60c DNA的HEp-2000细胞基质可提高检测的灵敏度[4],另外其他抗体也有不同程度的漏检,笔者认为可能是:(1)IIF中HEp-2细胞为人源的细胞,部分表达的靶抗原含量低,且不均一,不同固定方法对特定抗原可能会丢失,故容易漏检,而LIA所包被的是来源于牛的胸腺和脾脏纯化抗原,含量高且固定,当标本抗体浓度低时,也可被检测(灵敏度高)。(2)方法学上IIF一般手工操作,且操作繁琐,滴度判断需系列稀释,荧光染色不稳定,荧光类型需肉眼判断,少见的特殊类型还需经验丰富专业技术人员鉴定等;而IIF可自动化,判读方便,重复性较好。
而IIF-ANA+/LIA-ANAs-的有124例,不一致率只为10.3%,表明以Hep-2细胞作为抗原基质的IIF法能检测出绝大多数自身抗体,是目前筛选ANA的理想实验。
综上所述,IIF-ANA与LIA-ANAs的检测有其互补性,二者不相互替代。IIF-ANA具有覆盖ANA抗体面广,同时即是筛查试验又是ANA检测金标准的特点,而LIA-ANAs有较高的检测敏感性和疾病特异性,故两种方法学间存在检测敏感性和特异性的差异。如果单用任何一种方法检测都有可能造成ANA阳性结果的漏检、漏报或AID的漏诊。因此,临床应用时,尤其对AID的早期诊断、鉴别和治疗,需联合进行IIF-ANA筛查和LIA-ANAs检测,减少漏诊或误诊。
参考文献
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荧光抗体 篇4
T淋巴细胞亚群计数、NK细胞计数对于对评定运动员细胞免疫机能有一定作用,一般采用流式细胞仪进行检测。用流式细胞仪进行检测时,根据细胞上的特异抗原CD分子(如CD3阳性即总T细胞、CD3/CD4双阳性即辅助性T细胞、CD3/CD8双阳性即抑制性T细胞、CD3阴性且CD16/CD56双阳性即NK细胞)不同,而需采用特异性荧光标记抗体。目前,有一种新推出的Biolegend的CD3-P E Cy5/C D4-P E/CD 8-F ITC鸡尾酒抗体和CD 3-F IT C(CD16+CD56)-PE鸡尾酒抗体,和传统抗体相比虽标记顺序略有差异但使用荧光相同且更经济。但在流式细胞仪上是否适用这种新抗体检测T细胞亚群和NK细胞,并未见有报道。
本研究的目的是在流式细胞仪上用此新抗体检测运动员T细胞亚群和NK细胞并和传统抗体进行比较,确定2种抗体的分析检测结果是否具有差异和可比性,从而明确在流式细胞仪上是否适用这种新抗体检测T细胞亚群和NK细胞。
2 对象与方法
2.1 研究对象
运动员男21人,年龄(17±1.20)岁,身高(176±4.28)cm,体重(71±5.10)kg,专项训练年限(3±1.19)年。女29人,年龄(18±2.40)岁,身高(166.5±2.69)cm,体重(61.4±4.98)kg,专项训练年限(2.4±1.25)年。
2.2 测试方法
2.2.1 仪器
贝克曼EPICS XL型流式细胞仪,白杨BFX5-320低速离心机,VORTEX涡旋混合器。
2.2.2 试剂
(1)荧光抗体:Coulter的抗人的CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PE Cy5三标抗体,同型对照鼠抗人IgG 1-FITC IgG 1-PE/IgG 1-PE Cy5抗体;Coulter的抗人的CD3-FITC/(CD16+CD56)-PE双标抗体,同型对照鼠抗人IgG 1-FITC/IgG1-PE抗体;Biolegend的抗人CD3-PE Cy5/CD4-PE/CD8-FITC Cocktail抗体,同型对照IgG 1-PE Cy5/IgG 1-PE/IgG 1-FITC抗体;Biolegend的抗人CD3-FITC/(CD16+CD56)-PE Cocktail抗体,同型对照IgG 1-FITC/IgG 2a-PE抗体;(2)其他试剂:Flow Check质控品,OptiLyse C溶血剂,15%EDTAK2溶液,1×PBS缓冲液,抗凝剂取5ul置于1.5mL离心管中。
2.2.3 血样采集
分3～4次,采集50例(男21例,女29例)运动员静脉血1mL;混匀。白细胞计数控制在5～10×109/L,全血采集后6小时内制备。
2.2.4 样本编号
(1)流式细胞仪上2种抗体检测T细胞亚群:每份血样制备4份,阴性对照管编号C1～N,用Coulter抗体标记的记做C_C1～N,用Biolegend抗体标记的记做B_C1～N。阳性测试管编号T1～N,用Coulter抗体标记的记做C_T1～N,用Biolegend抗体标记的记做B_T1～N。(2)流式细胞仪上2种抗体检测NK细胞每份血样制备4份,阴性对照管编号D1～N,用Coulter抗体标记的记做C_D1～N,用Biolegend抗体标记的记做B_D1～N。阳性测试管编号N1～N,用Coulter抗体标记的记做C_N1～N,用Biolegend抗体标记的记做B_N1～N。
2.2.5 测试方法
(1)100uL全血加入20uL阴性对照或荧光抗体混匀,25℃避光存放20min;(2)加入500uL溶血剂,25℃混匀避光存放10min;(3)加入500uL1×PBS缓冲液,25℃混匀避存放10min;(4)1500rpm,离心5min;(5)弃上清液,加入1mL1×PBS缓冲液;(6)上机分析。分析方案,FITC-FL1通道/PE-FL2通道/PE Cy5-FL4通道,进行T细胞亚群计数。FITC-FL1通道/PE-FL2通道,进行NK细胞计数。阴性对照要求FL1/FL2/FL4通道计数<2%。(7)分析指标:T细胞亚群(T3、T4、T8百分比、T4/T8比值)、NK细胞(T3、NK百分比)。
2.3 统计方法
用SPSS统计软件进行配对t检验。
3 结果
3.1 流式细胞仪上2种荧光抗体检测T细胞亚群的比较结果(表1)
表1显示,流式细胞仪上2种荧光抗体检测T细胞亚群,T3、T4、T8百分比、T4/T8比值等指标无显著性差异。
3.2 流式细胞仪上2种荧光抗体检测NK细胞比较结果(表2)
表2显示,流式细胞仪上2种荧光抗体检测NK细胞,T3、NK百分比等指标无显著性差异。
4 讨论
血液中T淋巴细胞亚群和NK细胞的检测是观察机体细胞免疫水平的重要方法。体育科研中也常检测外周血中T细胞亚群(CD3/4/8)和NK细胞(CD3/16/56)检测,并结合其他指标对于分析运动员的细胞免疫状况,进行运动员机能评定可以提供相当佐证。我中心运动病理实验室的贝克曼EPICS XL流式细胞仪进行T细胞亚群和NK细胞检测时,原使用Coulter抗体。如抗人的CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PE Cy5三标抗体及其同型对照用于检测T细胞亚群,抗人的CD3-FITC/(CD16+CD56)-PE双标抗体及其同型对照用于检测NK细胞。但在使用上述抗体时,我们发现并和同行交流后提出如下问题:
(1)原抗体实际使用过程中预处理时间较长,步骤繁琐,平均一个样本的预处理时间需要30min左右,如再加上阴性对照和上机分析的时间就非常耗时耗力,这常是制约大通道、快速检测样本的瓶颈。因此,寻找其他便捷、可替代的抗体标记方法和样本预处理方法,缩短检测时间就是我们必须考虑的任务之一。
(2)原抗体的成本较高。如这2种抗体的包装规格仅都是50Test/每瓶,不计其他耗才的情况下,每一个样本上述2种指标的检测成本都十分惊人。同样在临床上,这种检测也是相对昂贵的收费项目,但通过相对大的测试样本数仍可较好维持此项检测。但对于体育科研而言,检测样本无法与临床相比,因此社会效益就是我们必须考虑的任务之二。
(3)有报道的自制试剂或国产试剂由于多为单标抗体,不仅没有简化标本预处理步骤,反而增加了荧光抗体的互相干扰而检测结果差强人意。
最近一种新推出的Biolegend的CD3-PE Cy5/CD4-PE/CD8-FITC鸡尾酒抗体和CD3-FITC/(CD16+CD56)-PE鸡尾酒抗体和原抗体比较虽抗原标记荧光顺序略有差异但有如下特点,可一定程度上解决上述矛盾。
(1)标记荧光与原抗体完全一致保证了在流式细胞仪上使用的通用性和替换可能,而且是三标或双表抗体这一良好特性保证了预处理的简易性。
(2)新抗体具有更佳的性价比,而且临床实验室也已开始大量使用。
(3)在流式细胞仪上用这2种抗体检测T细胞亚群和NK细胞并进行比较,还未见报道。(1)临床上由于前述测试样本相对较大,基本不存在成本压力问题;(2)基础科研上多用单标抗体进行肿瘤标记物检测,开展正常人(如运动员机能评定)T细胞亚群和NK细胞的三标或双标荧光抗体法检测并不多见。因此,本研究不仅具有非常大的实际测试和工作必要性,而且有一定社会效益。
本研究的实验结果显示,流式细胞仪上2种荧光抗体检测T细胞亚群、NK细胞,T3、T4、T8、NK百分比、T4/T8比值等指标无显著性差异(P>0.05),结果具有高度可比性。Biolegend新抗体高度适用于流式细胞仪上检测运动员T细胞亚群、NK细胞,而且长期使用更经济,建议作为首选标记抗体。
摘要：目的 通过用2种不同免疫荧光抗体标记运动员T细胞亚群和NK细胞,在流式细胞仪上测定并进行结果比较。方法 采集50例运动员静脉血,分别用Coulter原抗体和Biolegend新抗体标记T细胞亚群和NK细胞,在流式细胞仪上检测T细胞(T3)、辅助性T细胞(T4)、抑制性T细胞(T8)、NK细胞(百分比)等指标,比较测试结果的差异。结果 用2种荧光抗体检测运动员上述指标无统计学差异(P>0.05),结果具有高度可比性。结论 Biolegend新抗体高度适用于流式细胞仪上检测运动员T细胞亚群、NK细胞检测,而且长期使用更经济,建议作为首选标记抗体。
关键词：免疫荧光,抗体,T细胞,NK细胞,流式细胞术
参考文献
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