精子功能检测

精子功能检测（精选3篇）

精子功能检测 篇1

特发性男性不育症是指患者常规精液分析以及精子形态与正常男性无异, 造成不育的致病原因不明确, 此类不育症患者一般定性为特发性不育症[1]。先采取伊红染色法、凝集素免疫荧光染色法、精子染色实质扩散实验检测法以及荧光探针标记检测法对两组男性观察对象的精子状态以及功能进行检测, 试分析特发性男性不育症患者的精子功能指标与正常男性精子功能指标的差异, 现将研究结果做如下分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

现以32例特发性不育症患者作为观察组, 以同期32例已育健康男性作为对照组。观察组患者年龄为25~38岁, 平均年龄为 (29.4±3.1) 岁, 患者不育时间为2~7年, 平均时间为 (4.2±1.3) 年。实验之前经过夫妻双方检查, 排除女方不孕的原因, 且男方常规身体检查未见异常。在实验开始前的3~5 d, 使其禁欲, 实验当时采用手淫的方式获得精液样本。观察组对象年龄为26~41岁, 平均年龄为 (32.4±1.6) 岁。两组观察对象的第二性征比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。

1.2 方法

1.2.1 精液常规检查以及精子形态学分析利用自动精子分析仪完成精液常规检查, 并利用改良巴氏染色检测法进行精子形态分析。

1.2.2 精子胞膜功能检测取一滴伊红液与一滴精液进行充分混合, 随后使用盖玻片将其覆盖, 静置30 s之后, 使用高倍光学显微镜进行观察, 胞膜完整的精子呈初始色, 不完整精子则呈现红色, 每位观察对象取300个精子进行观察, 计算各个观察对象的活体精子百分比。

1.2.3 精子顶体完整性检测将精液在37℃恒温环境下培育之后采用离心方式去上清液。利用荧光显微镜观察300个精子, 判断标准以PNA+/Hoechst-为顶体完整的活体精子[2]。最后计算出顶体完整精子占总数的百分比。

1.2.4 精子DNA碎片检测使用生理盐水将精液样本浓度调至5×106~10×106ml, 随后加入液态易熔胶使其与样本充分融和, 并在37℃恒温状态下温育处理。将包被载玻片置于4℃环境预冷, 随后迅速加入融和好的精子悬液盖上盖玻片使其凝固。随后去除盖玻片, 利用0.08 mol/L的HCL处理之后, 将其置于浓度为0.4 mol/L的二流苏糖醇溶液中, 采用乙醇脱水处理之后进行染色处理, 最后使用高倍光学显微镜对500个精子进行观察, 以精子头部的单侧光晕的厚度如果小于精子头部直径最大位置的1/3, 或者未见光晕即为具有DNA碎片精子。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计分析, 计数资料采用x2检验, 计量资料以“±s”表示, 采用t检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组精液的常规分析结果比较

观察组与对照组的常规精液分析结果显示, 在精液浓度、精子活率以及正常精子形态三项对比中, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。

观察组精子浓度 (6 7.4 3±2 8.5 6) ;精子活率 (58.12±6.54) ;正常精子形态 (19.31±5.12)

对照组精子浓度 (6 4.3 1±2 8.7 9) ;精子活率 (57.63±7.28) ;正常精子形态 (18.29±6.37)

观察组与对照组的常规精液分析结果显示, 在精液浓度、精子活率以及正常精子形态三项对比中, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。

3 讨论

由本次研究结果可知, 特发性男性不育症患者的精液常规分析结果与正常男性的常规精液分析无显著差异, 不能作为诊断依据。两组对象的顶体完整性比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。

造成男性不育的病理机制十分复杂, 当前对于精子受精能力的评价标准尚不完善, 由研究结果可知, 精子顶体的完整性检测能够为特发性男性不育症的诊断提供重要依据, 为了保证诊断结果的准确性, 还应结合相关检测方法进行综合诊断。

摘要：目的 采用精子功能检测方法探讨特发性男性不育的致病原因。方法 以2016年1月2016年6月接受治疗的32例特发性男性不育患者作为研究对象, 并将其定为观察组, 同时随机选择32例生育正常的健康男性作为对照组。分别采集两组成员的精液样本, 并对其进行常规分析, 比较两组精子的各项功能指标。结果观察组患者的精子顶体的完整概率明显低于对照组患者的完整概率, 精子胞膜完整性概率、DNA碎片率以及MMP正常比之间差异无统计学意义 (P>0.05) 。两组精液的常规分析差异较小, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。结论 在对特发性男性不育症进行检测时, 可以根据精子顶体完整性的检测结果完成对于该病症的诊断。

关键词：特发性男性不育症,精子功能检测,精子顶体完整性

参考文献

[1]马国燕, 卢静, 景丽, 等.精子功能检测在男性不育诊治中的应用[J].中国计划生育学杂志, 2015, 23 (1) :61-63.

[2]谷翊群.常用精子功能检测与男性不育[C].//中国性学会性医学专业委员会第七次全国性医学学术会议论文集, 2011:76.

[3]薛林涛, 黄莉, 何冰, 等.不育男性精子功能参数与年龄及精液常规参数的相关性[J].中国妇幼保健, 2014, 29 (28) :4589-4592.

精子功能检测 篇2

1 材料与方法

1.1 对象

不育患者来自我院男科门诊,年龄在25～30岁。连续2次精液分析并经离心沉淀均未发现精子者为无精子症,精子密度<5×106/mL者为严重少精子症,其中无精子症30例,严重少精子症54例,均通过临床检查排除生殖道梗阻、精索静脉曲张等其他泌尿生殖系统疾患,所有患者均抽取外周血进行细胞遗传学及Y染色体检查。

1.2 方法

1.2.1 染色体核型分析

取外周血淋巴细胞培养,常规制备染色体标本,最后吉姆萨常规染色,显微镜检查,每例计数30个分裂相,G显带分析3～5个核型,结果分析按照人类细胞遗传学国际命名体制进行。

1.2.2 AZF因子检测

1.2.2. 1 DNA的提取

常规蛋白酶K消化,酚-氯仿抽提法从外周静脉血中提取人基因组D N A。

1.2.2. 2 PCR引物设计

共8对引物,包括AZFa区的sY84和sY86、AZFb区的sY127和sY134、AZFc区的sY254和sY255,覆盖了从AZFa～AZFc的主要已知突变热点,以SRY(sY14)为内对照。

1.2.2. 3 PCR的扩增

PCR反应体积50μL,含1.5mmol/L MgCl2,10 mmol/L Tris2HCL,pH8.0,50 mmol/L KCl,200μmol/L dNTP,taqDNA聚合酶1U。PCR反应参数为94℃预变性4 min后,94℃30s,58℃45s,72℃45s,共完成35个循环,72℃延伸3min,最后置4℃保温。产物检测用1.0%琼脂糖凝胶电泳,60V恒压电泳30min,溴乙锭染色后在紫外线灯下观察结果。

2 结果

2.1 细胞遗传学结果

84例无精子症和严重少精子症患者中共检出遗传缺陷19例,占22.6%(19/84),其中最常见的异常核型是克氏综合征(47,XXY),总发生率为7.1%(6/84),占所有异常的31.6%(6/19)。另外还发现其他少见异常核型,结果见表1。

2.2 AZF检测结果

84例无精子症和严重少精子症患者中共检出AZF微缺失9例,总缺失率为10.7%。无精子症患者中检出4例,缺失率13.3%(4/30),严重少精子症患者中检出5例,缺失率9.3%(5/54)。9例AZF微缺失中sY86缺失(AZFa片段中)1例,占1.2%;sY127缺失(AZFb片段中)1例,占1.2%;sY254缺失(AZFc片段中)2例;sY255缺失(AZFc片段中)1例,AZFc区缺失率共占3.6%,高于AZFa区和AZFb区缺失率。AZFb、AZFc区双重缺失3例,占3.6%;AZFa、b、c 3个区域同时缺失1例,占1.2%。

3 讨论

近年来,越来越多的证据表明,男性不育尤其是无精子症和严重少精子症的发生与遗传因素有关。在本实验中,无精子症与严重少精子症患者中染色体异常的发生率达22.6%,其中克氏综合征(核型4 7,X X Y)最为常见,与国外报道相似,提示在细胞遗传学水平上,可以认为染色体结构与数目异常是男性不育的重要病因。

Y染色体是人类所有染色体中最小的一条,仅30Mb长,约占人类基因组的1%。早在1976年Tiepoio等提出拉在Y染色体长臂远端Yq11存在着控制精子发生的基因。由于这些基因失去者大多数表现为临床上的无精子症,因此将这些基因统称为AZF[2]。随后,Vogt等将AZF定位于Y染色体长臂远端第五、六区并将其划分为AZFa、AZFb、AZFc 3个区域。Kent-First等[3]认为在AZFb和AZFc之间还存在着1个AZFd区域,但目前尚未找到该区域的基因。

近年来大量研究表明,Y染色体对性发育和精子发生是必需的,在对原发性无精子症和严重少精子症患者的病因分析中均发现存在着Y染色体的微缺失[4],提示Y染色体微缺失可能是男性生精障碍的一个重要遗传学因素,某些基因片断的丢失甚至可造成男性不育。其中如果AZFa缺失,可导致青春期精子发生阻滞,表现为病理上的“唯支持细胞综合征”和临床上的小睾丸症;如果AZFb缺失则表现为减数分裂前的生精上皮细胞正常而减数分裂后的细胞缺乏,提示在青春期减数分裂前或减数分裂期间精子发生的中断;AZFc的缺失其睾丸组织学表现为多样化,可以有与唯支持细胞综合征相似的表型,也可以有精子发生停滞于不同阶段生精上皮细胞的表型,因此会有无精子症和严重少精子症的不同临床表现。

从本次实验结果中,提示:(1)无精子症患者缺失率13.3%高于少精子症患者9.3%,无精子症患者Yq11微缺失的频率大于少精子症患者。(2)不育患者最常见的Yq11微缺失是AZFc缺失,约占Y染色体微缺失的60%,因此AZFc区的基因缺失可作为原发性无精子症和严重少精子症患者的主要筛查基因。(3)有2个细胞遗传学检查Y染色体有Yq12缺失及邻近部位Yq11.23缺失的病例没有检测到AZF的缺失,由于Yq12是异染区,即DNA高度重复的区域,这进一步证明了AZF位于Y染色体Yq11区域内。因此,细胞遗传学检查不能反映Y染色体上AZF微缺失的情况,Y染色体有缺失,不一定就有AZF的缺失;染色体核型正常,也不排除有AZF的缺失。(4)6例克氏综合征患者均没有检测到AZF的缺失,因此,克氏综合征患者的无精子与Y染色体的微缺失无关。

绝大多数Y染色体AZF基因缺失的男性除精子发生异常外,身体的其他方面均表现正常。由于人类只有1条Y染色体,所以Y染色体AZF基因的微缺失可传递给男性后代,但AZF基因缺失的男性因不能正常生育须通过辅助生育技术如睾丸穿刺取精子行精子卵胞质内注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)而受孕,可能使AZF基因缺失人为的遗传给男性后代,Cram等[5]利用荧光原位杂交技术已在ICSI新生儿诊断出精子AZFc缺失。因此,对生精障碍患者行ICSI治疗前有必要筛选AZF基因缺失,避免遗传缺陷的垂直传播[6]并为患者的诊断及遗传咨询提供重要依据[7]。

目前AZF的研究还是在开始阶段,由于AZF本身是一个多基因大家族,其对生精的调控机制尚不很清楚,但是AZF的研究已使男性不育症的诊断向前迈进了一大步,它使一部分临床上原因不明的无精子症和少精子症患者明确病因,减少无谓的治疗,同时也有利于ICSI的开展,使ICSI获得更高的成功率与安全性。因此,对原发性无精子症和严重少精子症患者进行AZF基因缺失的检测具有十分重要的意义。

摘要：目的评估无精子症和严重少精子症患者中核型异常及Y染色体微缺失发生的频率,并探讨无精子因子(AZF)检测的临床意义。方法运用染色体G显带及多重聚合酶链反应技术(PCR)对84例无精子症(30例)和严重少精子症(54例)的不育患者进行外周血染色体检查及Y染色体基因检测。结果84例无精子症和严重少精子症患者中核型异常者19例,占22.6%,异常核型中最常见的核型是克氏综合征(47,XXY),总发生率为7.1%,占所有异常的31.6%。AZF区域微缺失9例,总缺失率为10.7%。其中30例无精子症患者AZF缺失率13.3%(4/30),高于54例严重少精子症患者AZF缺失率9.3%(5/54)。AZFc区微缺失率3.6%高于AZFa区(1.2%)和AZFb区(1.2%)。结论AZFc基因缺失是导致男性无精子及少精子的重要原因之一,细胞遗传学检查与AZF微缺失无相关性,不能反应Y染色体上AZF缺失情况。

关键词：Y染色体,核型异常,AZF微缺失

参考文献

[1]Vogt PH,Edelmann A,Kirsch S,et al.Human Y chromosomeazoospermia factors(AZF)mapped to differ-ent subregions in Yq11[J].Hum Mol Genet,1996,5(7):933-943.

[2]Tiepolo L,Zuffardi O.Localization of factors controlling spermatogenesis in the nonfluorescent portin of the human Y chromosome long arm[J].Hum Genet,1976,34(2):119-124.

[3]Kent-First M,Muallem A,Shultz J,et al.Defining regions of the Y-chromosome responsible for male infertility and identification of a fourth AZF region(AZFd)by Y-chromosome microdeletion detection[J].Mol Reprod Dev,1999,53(1):27-41.

[4]Dohle GR,Halley DJ,Van Hemel JO,el al.Genetic risk factors in infertile men with severe oligozoospermia and azoospermia[J].Hum Reprod,2002,17(1):13-16.

[5]Cram DS,Ma K,Bhasin S,et al.Y chromosome analysis of infertile men and their sons conceived through intracy-toplasmic sperm injection:vertical transmission of deletions and rarity of de novo deletions[J].Fertil Steril,2000,74(5):909-915.

[6]De Vries JW,Repping S,Oates R,et al.Absence of deleted in azoospermia(DAZ)genes in spermatozoa of infer-tile men with somatic DAZ deletions[J].Fertil Steril,2001,75(3):476-479.

精子功能检测 篇3

1资料与方法

1.1一般资料

整群选择该院2013 年9 月—2015 年2 月间30 例梗阻性无精子症患者和50 例非梗阻性无精子症患者, 同时选择同时段20 例健康患者作为对照组。 梗阻性无精子症患者平均年龄为 (35.2±13.4) 岁;非梗阻性无精子症患者平均年龄为 (34.8±14.1) 岁;健康组人群平均年龄为 (35.1±14.6) 岁, 3 组比较差异无统计学意义 (P>0.05) 。 所有无精子症患者均符合WHO组织男性不育的诊断标准, 患者均进行精液分析、血清性激素鉴定、遗传学检查, 并通过超声、输精管道诊断以及睾丸穿刺活检等方式确诊为梗阻性和非梗阻性无精子症。 健康组人员均为已生育、来院体检人员, 精液分析精子浓度超过15*106/ML, 睾丸发育良好, 各种检查均正常, 无泌尿系统疾病。 所有人员均知情且同意参与调查。

1.2 一般方法

采用具有超声弹性成像技术的多普勒超声诊断仪进行检查 (意大利百胜mylab90) , 频率为6.0~18.0MHz。 患者仰卧位, 将阴茎上提, 显露阴囊, 先进行常规超声检测, 测量患者睾丸体积, 而后进行超声弹性成像检查, 对感兴趣区域进行覆盖, 尽量覆盖所有睾丸区域。 若睾丸较大, 无法全部覆盖, 则要将睾丸中央部位放置在弹性成像区域中央进行检查。 在检查的过程中要使探头与睾丸完全垂直, 尽量不要使睾丸发生移动, 检测震动频率为1~2 次/s, 获取患者睾丸图像。 同时要对睾丸周围的阴囊感兴趣区域进行检查, 计算两者比值[3]。

根据所有人员睾丸测量的体积, 将3 组人员分为5个亚组, 1 组人员睾丸体积<7.0 m L, 2 组人员睾丸体积在7.1~10.0 m L, 3 组人员睾丸体积为10.1~13.0 m L, 4组人员睾丸体积在13.1~16.0 m L, 5 组人员睾丸体积在16.1 m L以上。

1.3 图像判断

1 分:睾丸形变体积较大, 图像呈现灰绿相间, 存在少量红色马赛克影像;2 分:睾丸中心发生形变, 图像中心呈绿色改变, 其余部位均为红色, 有少量灰色显影;3分:睾丸部分体积发生形变, 中间有少量绿色改变, 周围为红色改变, 其余部位均为灰色;4 分:睾丸未变形, 图像为灰红相间, 中心有少量绿色改变;5 分:睾丸未变形, 有少量灰色显影, 其余均为红色[4,5]。

1.4 统计方法

采用SPSS18.0 软件对数据进行处理, 计数资料采用%表示, 资料采用 χ2检验;计量资料采用 (±s) 表示, 采用t值检验, P<0.05 差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组人员睾丸弹性评分比较

非梗阻无精子症患者评分为3 级、4 级者居多, 分别为21 例, 16 例; 梗阻性无精子症患者评分为2 级、3级者居多, 分别为18 例, 7 例;健康人员评分为2 级者居多, 人数为12 例。

2.2 3 组人员平均睾丸体积比较

非梗阻无精子症患者睾丸平均体积明显小于梗阻性无精子症、 健康人员, 比较差异有统计学意义 (P<0.05) ; 梗阻性无精子症患者睾丸体积与健康人员比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 见表2。

2.3 睾丸体积与弹性评分关系

1 组、2 组人员弹性评分为3~5 分者人数居多, 明显高于3 组、4 组、5 组人员, 比较差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表3。

3 讨论

超声弹性成像在临床中主要应用于乳腺、 甲状腺以及前列腺的诊断中, 在睾丸诊断中的应用率较低[6,7]。有研究发现, 实时弹性成像技术在睾丸的分析中能够发现睾丸的病理变化, 不同的灰度、编码显示的区域、硬度也不同, 因此认为睾丸的体积可能与生精能力有着密切的关系[9,10]。

睾丸生物组织弹性同生物学特性有着密切的关系, 弹性系数小、受压后移位变化大的评分越低, 弹性系数大、受压后移位变化小的, 评分越高[11]。 而睾丸弹性成像评价能够对患者病理情况进行判断, 不同的病理分级对实时超声弹性成像评分也有着影响[12]。 随着分级的增加, 曲精小管直径逐渐降低, 管壁厚度逐渐增加, 使得实时超声弹性成像评分越来越高。 在该院调查结果中显示:1 组、2 组人员弹性评分为3~5 分者人数居多, 明显高于3 组、4 组、5 组人员, 比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。非梗阻性患者与梗阻性患者睾丸弹性评分存在明显差异, 该院的调查结果与其他研究报道基本相同[13]。 对该院的情况进行总结分析后我们认为, 梗阻性患者病理类型多位精子发生率低、生精受阻、受压后精曲小管形变, 患者实时超声弹性成像评分高。 而非梗阻型患者与健康人员则无生精受阻、 受压后精曲小管形变, 因此实时超声弹性成像评分高。 在调查中我们也发现: 非梗阻无精子症患者睾丸平均体积明显小于梗阻性无精子症、健康人员, 比较差异有统计学意义 (P<0.05) ; 梗阻性无精子症患者睾丸体积与健康人员比较差异无统计学意义 (P>0.05) 。 且患者睾丸体积越小, 实时超声弹性成像评分高, 进一步说明了睾丸体积与睾丸生精能力有着密切的关系。

总的来说, 实时超声弹性成像能够对无精子症患者睾丸的生精能力进行评价, 具有一定的临床价值。 且其在临床中无需耗费很长时间, 是一种有效的诊断方式, 值得在临床中推广使用。

摘要：目的 对实时超声弹性成像 (RTE) 在无精子症睾丸生精功能中的应用价值进行调查。方法 整群选择该院2013年9月—2015年2月间收治的30例梗阻性无精子症患者和50例非梗阻性无精子症患者, 同时选择同时段20例健康患者作为对照组, 所有人员均进行实时超声弹性成像检查。结果 非梗阻无精子症患者评分为3级、4级者居多, 分别为21例, 16例;梗阻性无精子症患者评分为2级、3级者居多, 分别为18例, 7例;健康人员评分为2级者居多, 人数为12例。非梗阻无精子症患者睾丸平均体积明显小于梗阻性无精子症、健康人员, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;梗阻性无精子症患者睾丸体积与健康人员比较差异无统计学意义 (P>0.05) 。1组、2组人员弹性评分为35分者人数居多, 明显高于3组、4组、5组人员, 比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。结论 实时超声弹性成像能够对睾丸的体积进行判断, 对睾丸的生精能力有一定的判断价值。