不法分子（精选12篇）
不法分子 篇1
有作者反映, 不法分子以伪造的《实用老年医学》稿件录用通知书、编辑部公章, 通过电子邮箱sylnyx@163.com向作者骗取版面费。本刊编辑部已就此事向当地公安机关报案。本刊编辑部声明:
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不法分子 篇2
求职应聘须“擦亮眼”谨防不法分子诈骗钱财
。由于防范意识欠缺等原因，许多农民工和待业者在求职应聘时，常常被不法分子诈骗钱财。对此，呼和浩特市红山区劳动和保障 特别提醒外出农民工和求职者，在求职应聘时注意防骗。
据红山区劳动和保障 负责人介绍，目前不法分子针对农民工和求职者的招工诈骗活动主要表现以下几种：一、通过非法职介诈骗钱财。不法分子开设非法职介机构，以帮助农民工和求职者找工作为由，收取所谓的“介绍费”。而一旦受害者交钱，不法分子便会“金蝉脱壳”不见踪影。二、有的不法分子还和非法职介“联手”，开办“皮包公司”诈骗钱财。作案时，非法职介在收取“介绍费”后，又将农民工和求职者介绍给同伙的“皮包公司”。而这些公司在接收农民工和求职者后，便会收取“服装费”“培训费”等等费用，并在随后的“试用期”里，以受害者不胜任工作等种种借口，将受害者辞退骗走钱财。
针对常见的诈骗手法， 提醒求职应聘的广大农民工和求职者注意以下几点：一、找工作应到正规有资质的职业介绍机构，要首先察看该中介是否具有工商营业执照和职业介绍许可证，是否有当地劳动监察部门的监督电话，
不法分子 篇3
据业内人士介绍,利用银行自动取款机实施诈骗的作案手段主要有以下三种:
一、假冒银行名义,利用所谓的“通知”、“公告”诈骗。据调查,凡是发生过诈骗案件的自动取款机,均发现有犯罪嫌疑人假冒银行名义张贴的虚假取款告示,如有的虚假告示称:“尊敬的客户:因本行电脑自助终端系统维护改造,故本取款机原服务功能键程序比较混乱,如需取款的客户请输入密码后直接按转账键,然后输入本行的账号××××××,确认后再输入取款金额,经核对无误后,按输入键方可取款。如有误请重输(注:若直接按取款键,本机可能会造成吞卡现象)。给您造成不便,敬请谅解!”其实这一假告示中所谓的“本行账号××××××”是不法分子预先在营业网点开设的储蓄卡号,一旦持卡人取款时,按此告示操作程序,就可直接将持卡人取款的金额转入犯罪嫌疑人的账户内。得逞后,犯罪嫌疑人会立即到自动取款机或银行网点取款。
二、暗中做手脚,破坏取款机正常运转实施诈骗。不法分子在自动取款机插卡口内设置障碍,并在旁边张贴一张所谓的“通知”,表示若出现吞卡等现象,请速与银行某电话联系,当取款人的卡被“吞”后,按“通知”上公布的电话打过去,不法分子就冒充银行工作人员指挥取款人如何操作,并想方设法骗得取款人的银行卡卡号和密码等相关信息,然后轻而易举地将卡内的存款骗走。经公安部门对这类诈骗案件的调查发现,不法分子在自动取款机的出钞口上插入塑料片,使得钞票不能正常吐出,导致取款人银行卡上资金被下账而实际未能拿到现金。待取款人离开,不法分子便伺机从取款机中取走现金。
三、转移持卡人视线,偷梁换柱实施诈骗。持卡人在自动取款机前取款时,不法分子在旁边偷看,在持卡人退出信用卡前,不法分子骗持卡人说钱掉在地上,将持卡人的注意力转移,然后迅速将持卡人的卡取下,将事先准备好的假储蓄卡插到插卡口上。持卡人误认为插卡口的卡仍是自己的卡,便拿起假卡离开,不法分子则使用持卡人的卡盗取持卡人的现金。
警方提醒信用卡持卡人,利用自动取款机的诈骗案件时有发生,不要相信张贴在自动取款机旁的没有银行印章的所谓“通知”或“温馨提示”,遇事要冷静分析,如果遇到类似的事件,就要在第一时间报警,以减少损失。
不法分子 篇4
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不法分子 篇5
入党积极分子代表发言稿一
尊敬的党组织：
最后，再一次对各位老师表示衷心的感谢，并祝桦艺幼儿园越办越好!祝愿我们亲爱的孩子们健康成长，快乐相伴，希望你们越飞越高!希望你们的明天更精彩!
首先，能作为入党积极分子的代表参加今天的大会，我感到十分荣幸，也非常激动。同时，也请允许我代表全体入党积极分子，对各级党委给予的关心与帮助，表示衷心的感谢!
今天，组织上让我们参加这次大
会，是给了我们一次学习的机会，同时也激发了我们入党的热情。我们也清楚地看到，无数优秀党员特别是我们身边的党员，他们虽然都是我们平常工作和学习中平凡的一员，但他们都在平凡的工作岗位上兢兢业业，甘愿奉献着自己的青春和热血，发挥着先锋模范带头作用，表现出了共产党员的优秀品格，更使我们感到了党组织强大的凝聚力，加入党组织是我们梦寐以求的愿望。
作为迫切要求入党的青年，在以后学习、工作中，我们一定以“三个代表”重要思想为指导，以身边的党员同志为榜样，按照新《党章》的要求，以共产党员的标准严格规范自己的言行，认真实践“八荣、八耻”，从自我做起，以科学发展观的角度去发现问题、解决问题，为创建现代化文明包钢贡献自己的一份力量。请党组织继续考验我们，我们一定会以良好的精神状态，以出色的工作成绩，来接受党组织的检验。
最后，我代表全体入党积极分子再
次对党组织的教育和培养表示衷心的感谢。
入党积极分子代表发言稿二
尊敬的各位领导、老师，亲爱的党员同学们：
大家好!在今天这个特殊的日子里，能够代表入党积极分子站在这里表白心声，我感到无比的自豪。
自1921年建党至今，伟大的中国共产党已经走过了93年光荣的发展历程。这几十年来，中国共产党从小到大，从弱到强，从幼稚到成熟，不断的发展壮大，从建党初的50多名党员，逐步发展到今天这个拥有六千六百多万党员的执政党。
党的辉煌历史，是为民族解放和人民幸福前赴后继、英勇奋斗的历史;是马克思主义和普遍原理同中国的革命和建设的具体实践相结合的历史;是坚持真理、纠正错误、战胜一切困难，不断发展的历史。无论是在血雨腥风的战争年代，或是在艰苦创新的建设年代，更或
是在努力创新的改革开放年代，无论是抗洪抢险还是抗震救灾，冲锋在先、甘于奉献的都是共产党员。他们一次又一次用他们的实际行动实践着全心全意为人民服务的伟大宗旨。
无数的事实充分的证明：我们党不愧为伟大、光荣、正确的党，不愧为社会主义事业的核心力量，不愧为中国先进生产力发展要求，中国先进文化前进方向，中国最广大人民根本利益的忠实代表。
今天，我和新加入中国共产党的同志们一样，心情是十分激动的，通过参加新党员的入党誓词仪式，我们也接受了一次人生的洗礼。我们在党组织和同志们的帮助下，成为了入党积极分子，确定了人生的坐标。但我们还要继续在党组织和同志们的帮助下，通过实践和不断加强党性修养，从思想上进一步向党组织靠拢，为党和人民的事业去奉献自己、燃烧自己，做一个高尚的人，一个脱离了低级趣味的人。从此刻起，我
们也要同新党员一样，像他们学习，更加严格要求自己，时刻牢记党“全心全意为人民服务”的宗旨，听从党的教诲，服从党的决议，遵守党的章程，为党的事业贡献出自己的青春和热血。积极分子发言稿当然，作为一名入党积极分子，我们也深知与老一辈党员以及新入党的同志有巨大差距，我们要虚心向他们请教，以他们为榜样，升华自己的政治理想。
在此，我代表所有的入党积极分子向党组织表示，在以后的工作、学习中，做到以下四点：
对入党来说，最重要的是端正入党动机。首先，正确的动机，是正确行动的精神力量。只有树立了正确的入党动机，才能有持久不衰的动力，刻苦学习马克思主义理论，更加自觉地贯彻执行党的基本路线，把对共产主义事业的忠诚同执行党的基本路线统一起来，在改革开放和现代化建设中积极作出贡献;才能够在日常工作和生活的各个方面，更
不法分子 篇6
公共知识分子，有着特殊的定义和作用。而“公共知识分子思潮”的出现，则是对公共知识分子在现代社会作用的反思。公共知识分子在现代社会有着重要作用，当然他们的言论也会带来一些负面的影响，应当对他们的作用有新的认识与理解。
一、公共知识分子的概念
提起知识分子，人们一般都会有这样的印象，“坐在书斋里，不问世事”。但是，事实远非如此。知识分子(intelligentsia)一词，最早来源于波兰文，后又传到俄国、法国。十九世纪俄国民粹派最先使用它。民粹派是一群接受了西方教育的人，他们痛感本国落后的社会制度，产生了一种对现行秩序强烈的背叛意识。“这样一批与主流社会有着疏离感、具有强烈的精神、特别是道德批判意识的群体，当时就被称为知识分子。”作为欧陆启蒙思想家在苦难俄罗斯的忠实后裔，他们的知识，是用来对公众说话的，他们所期望的，不是“书斋里的革命”，而是公共生活的激烈变化。这表明知识分子从诞生初始即处于一种独立的、批判性的、反抗的、离经叛道式的存在状态。
1894年，法国发生了著名的德雷福斯事件。以左拉、雨果为首的一批具有正义感与社会良知的文人表达了对德雷福斯事件的义愤，他们在报刊上刊登抗议书，要求重审德雷福斯案件，他们也因此被他们的敌对分子蔑称为“知识分子”，尽管该词实际上一开始是贬义的，但是它同时也指那些受过教育、具有批判意识和社会良知的一群人。这份抗议书被称为“知识分子的宣言”，被认为是现代知识分子作为一种对社会公共事务发挥重要重用的社会力量登上历史舞台的标志。这样一批文人、作家经常坐在咖啡馆里就社会和政治等公共问题高谈阔论，形成了哈贝马斯(Juergrn Habermas)所谓的“公共领域”。而“公共领域”的主体正是这样一批知识分子。“他们是完全独立的，除了自己的良知之外，没有任何的阶级背景。”从词源学角度来看，“现代意义的知识分子也就是指那些以独立的身份、借助知识和精神的力量，对社会表现出强烈的公共关怀，体现出一种公共良知、有社会参与意识的一群文化人。”可以看出，知识分子从来源上多少是带有“公共性”的。
二、“公共知识分子思潮”的兴起
对“知识分子”的研究，在西方也一直是“显学”。而“公共知识分子”问题，从概念到基本观点，都源于西方知识分子理论。其最早的提出是在拉塞尔·雅各比(Russell Jacoby)1987年出版的《最后的知识分子》一书中。随后，利奥塔、布尔迪厄、萨义德等人对公共知识分子问题进行了进一步研究与阐释。这也就是后来所称的西方公共知识分子思潮。他们对公共知识分子的概念认识或有差异，但从基本上来看，主张知识分子应在专业的背景与优势之下，积极担当社会责任、代言社会正义，在公共意识领域坚守守护者与看守人的职责，是他们对公共知识分子共同的认识。然而，在雅各比看来，二十世纪20年代出身的一代知识分子，却成为最后的公共知识分子。
雅各比等人认为，随着大学教育的普及，社会进入了学院化、专业化时代，与此直接相关的是，技术专家和大学教授成了知识分子的主题，自由身份的作家、艺术家退居后台，技术专家和大学教授们仅为专业读者写作，知识分子公共性的存在成了问题，随之，“公共知识分子”就消亡了。雅各比等人在这里提出的公共知识分子“消亡论”，实际上是表达了他们对知识分子的“公共特性”能否在现代社会保存下来的一种担忧。他们其实还是希望知识分子能继续保持他们的独立性、批判性，以及对这个世界敏锐的认识。雅各比等人也正是发挥了知识分子独特的视角和批判性，给广大知识分子敲响了警钟。同样的话，波斯纳(Richard A.Posner)可能说得更为直接。
波斯纳在《公共知识分子：衰落之研究》中，几乎批判了书中列举的546位著名知识分子，以至于远在中国的朱苏力教授作为公共知识分子在阅读此书时也不禁“提心吊胆。生怕有什么被波斯纳给捅破了”。波斯纳说道，“公共知识分子作品正在变得越来越缺乏特色、兴趣索然、以及无关紧要。”公共知识分子们“对社会争议高谈阔论”，对社会现状的不满超过了改革的努力，其评论质量低下，倾向于“武断性、判定性，有时显得谦逊，但大多表现为尖刻讥讽。他们是喜好论辩之人，倾向于提出极端的主张……通常以一种自我意识、有时甚至是被激怒的知识分子的优越性之腔调而挥毫泼墨。对于事实，公共知识分子常常有些粗枝大叶，在预测方面又显得有些草率莽撞。”在波斯纳看来，公共知识分子主要是以需求和供给为特征的市场中的一个职业。公共知识分子向大众贩卖的是知识，在这个市场中，由于公众缺乏必要的知识，使得知识分子的言论缺少必要的监督，这样一来，不少知识分子常常为了证明自己的学说正确而歪曲了事实。
这一方面是由于现代大学的发展，越来越多的知识分子获得了舒服的有保障的学术职位，被吸引到学术队伍中去，学术公共知识分子开始支配公共知识分子的供给，他们不再像过去的独立公共知识分子一样，全力投入公共知识分子事业。而只是在有保障的、舒适的学术职业之外“客串”公共知识分子觖乏足够的动力和风险刺激，并且他们的专业化也使他们恰恰越来越不适合切实地讨论社会政治问题。
另一方面同样是由于专业化的发展，普通教育的社会公众碎裂成了不同部门的专门家，摧毁了公共知识文化，故而使得公共知识分子作品的读者没有鉴别力。由于联结专业知识分子与普通教育的社会公众的普适文化的消失，与公共知识分子市场上学术供应商的粗糙化相对应的是公共知识分子市场上的大众顾客的粗糙化。公共知识分子作品的质量日渐衰落，比知识分子自身解答公共能力问题萎缩更根本的原因也许是公众并不关心他们说些什么，因而对于公共知识分子意见的准确性和谨慎性几乎没有施加什么市场压力。
实际上，无论是雅各比还是波斯纳，他们理想中的公共知识分子，首先是面向公众发言；其次是要为了公众而思考，即从公共立场和公共利益、而非从私人立场和个人利益出发；再次是所涉及的通常是公共社会中的公共事务或重大问题。然而，正如许纪霖先生所指出：的在现代社会，公共知识分子要做到上面的要求是需要很大的勇气的，也是很困难的。这是由于：一方面，商业社会给公共知识分子带来了冲击，使他们要保持独立性与理性的思考越来越困难；另一方面，现代科学革命加深了公众对科学的“迷信”，从而使得公共知识分子的地位下降。公共知识分子思潮正是在这样的背景下兴起的，它的出现代表了西方知识分子对自身的反省与忧思，同时也明确表达了公共知识分子对于现代社会发展的重要意义。
三、对公共知识分子与“公共知识分子思潮”的思考
在今天，公共知识分子也面临着危机。市场化、商品化使得公共知识分子出现“世俗化”的趋势，这就有为“媚俗”而丧失知识分子所独有的批判性的危险。另一方面，社会文化科学的进步，使公众对公共知识分子产生怀疑，进而使得知识
分子有丧失其“公共领域”的危险，“大众为一种自发的经济兴趣所左右，追求着官能的满足，拒绝了知识分子的‘谆谆教诲，下课的钟声已经敲响，知识分子的‘导师身份已经自行消解。”人们发现，在当代，科技知识分子往往比人文知识分子更有权威、对公众生活更有指导意义，他们可以针对公众提出的具体问题，给出唯一的、正确的答案，且这一答案可以明确地得到验证并以实用的方式返还给公众。而相反，人文知识分子在当代公众的心里则留下了这样的印象：就一些没有标准答案的问题进行无休止的口水战，而这些争论在他们看来往往多是没有意义的——起码这些问题解决不解决对公众的生活短期内不会带来多大的影响与改变，更多的被人们看作是人文知识分子的一种炒作，为了争论而争论，进而促使公众怀疑这些知识分子的真理和正义的代言者、社会良心等身份的合理性。
改革开放以来，中国的公共知识分子是随着中国改革的发展不断前行的。也正因为如此，尽管面临重重问题，公共知识分子还是会随着改革的深入，继续他们对社会的敏锐观察和批判。这也正是“公共知识分子”思潮在今天的中国引起了--大讨论的原因。公共知识分子作为知识分子群中一个相对来说将公共情怀突出地加以发挥的群体，其身份特征表现在方方面面，但若从生活在现实中的知识人的角度来看，考察的方向无非有：一是治学，二是人世。这两方面在界定公共知识分子时都是不可或缺的。毕竟，纯粹为学术而学术的知识分子只能算得上是严格意义上的学者，甚至可以说，是学究。即便这个学术本身是以公共生活为直接对象的，但站在旁观者立场、将问题经过若干次的间接阉割，再经过学斋式的理论润色之后，还期望自己能成为公共声音的代言者也许有点不切实际。反过来，忙碌在公共生活领域的各色知识分子，我们冠之以宣传家、行为领袖等等称呼也许会更为贴切。行动的激情盖过思想的快乐，不是理性的行为，而是冲动的呐喊、鼓动甚至身体力行，其初衷虽可嘉，但最终的结果是社会的谴责和知识分子的伤心失志。对公共知识分子的谴责之声最终还是源于对他们或过度沉迷社会生活、全力介入政治乃至丢弃了治学这一第一天职；或成了强势阶层的传声筒；或流于追逐名利之徒等等行为的不满。
公共知识分子的公共关注应当是一种自然的情怀，其最终目的并不是建议具体的生活道路，若能保持这样一种品格——热心投入社会生活而不丧失其非功利性精神的远见卓识，至少在精神上就已经具备了公共知识分子的身份特质。由此看来，若能将二者结合，即便是能力有限不能做到两全其美，但从性质上来说，起码是具备了真正的公共知识分子的身份特征。
而社会也应当对公共知识分子保持宽容的态度，公共知识分子对于社会问题的批判，只要于社会稳定无碍，还是应该虚心听之，毕竟知识分子是有着忧国忧民的情怀的。那种上纲上线的批判“公共知识分子”思潮的做法，实际上并不可取。应该承认公共知识分子在当下中国有着重要意义。同时也应当警惕那种不负责任的言论给中国社会带来的负面影响，这才是对待“公共知识分子”思潮的应然态度。
参考文献：
[1]许纪霖著，中国知识分子十论[M]，上海：复旦大学出版社，2003。
[2]许纪霖主编，知识分子论丛[M]，江苏人民出版社，2003。
[3]田立年，市场、政治、波斯纳之箭——评波斯纳，公共知识分子：衰落之研究[J]，社会学研究，2005(4)。
[4]波斯纳著，公共知识分子：衰落之研究[M]，徐昕译，北京：中国政法大学出版社，2002。
不法分子 篇7
1 分子伴侣与蛋白复性
1.1 分子伴侣的定义和类型
1978年, Laskey 发现组蛋白和DNA在体外生理离子强度条件下重组时必须要有一种细胞核内的酸性蛋白-核质酸 (nucleoplasmin) 存在时, 两者才能组装成核质体, 否则就发生沉淀, 据此Laskey称这种物质为“分子伴侣”。随后分子伴侣的概念几经修正, 现在分子伴侣是指能够结合和稳定另外一种蛋白质的不稳定构象并能通过有控制的结合和释放促进新生多肽的折叠、多聚体的装配或降解及细胞器蛋白的跨膜运输等的一类蛋白。经研究表明分子伴侣是一组在胞内活动中起重要作用的多种蛋白质和酶的总称。分子伴侣可分为3类。第1类是普通意义上的分子伴侣, 目前已鉴定的主要是在进化上非常保守的热休克蛋白 (heat shock protein, HSP) 的3个家族:Hsp60 (GroEL) 家族;Hsp70 (Dnak) 家族, 包括Hsp70, HSC70, p75, BIP以及GRP78;Hsp90 (HrpC) 家族, 包括Hsp90和Grp94/Grp96。第2类是具有酶活力的分子伴侣, 又称折叠酶。至今已经发现的有2个折叠酶: (1) 蛋白质二硫键异构酶 (phosphodiesterase, PDE) , 可以防止二硫键的错配和分子间聚合; (2) 肽基脯氨酰顺式异构酶 (protein disulfide isomerase, PDI) , 它可以催化以脯氨酸异构反应为限速步骤的蛋白质的复性, 提高复性速率。现已证明这2种酶既是酶又是分子伴侣[2]。第3类是分子内伴侣 (intramolecular chaperone, IMC) , 研究表明许多合前导肽 (Pro) 肽的前体形成合成的蛋白质折叠与成熟必须要有Pro肽的存在才能完成, 这类前导肽就称为体内分子伴侣[3]。由于体内分子伴侣不易与复性蛋白分离, 所以实际应用时体外分子伴侣较为方便。常用的分子伴侣有GroES/GroEL, DnaK/DnaL, TrxA/TrxC。
1.2 分子伴侣在蛋白质复性中的作用
除了共价的肽键和二硫键外, 还需要大量复杂的次级键共同作用来维持蛋白质分子三维结构, 因而蛋白质在复性过程中既肽链折叠过程中可能暂时形成最终活性蛋白中不存在或不该有的结构, 它常是一些疏水表面, 它们之间很可能发生本不该有的错误的相互作用而形成无功能的蛋白, 甚至造成变性蛋白的聚集和沉淀。蛋白质的复性过程是一个正确途径和错误途径相互竞争的过程, 为了提高蛋白质复性的效率, 应该有帮助正确途径的竞争机制, 而分子伴侣就能使蛋白质获得正确的构型, 这种过程是通过与变性蛋白质在复性中暴露的反应表面结合, 从而阻止这些反应表面与其他区域作用产生不正确的构型来完成的。分子伴侣是一类与蛋白质的不稳定构象相结合并使之稳定。它在蛋白质复性过程中主要起2个作用: (1) 帮助变性蛋白质完成正确的折叠; (2) 在ATP的存在下负责对正在复性或复性好的蛋白质进行监控, 防止蛋白质错误折叠。
1.3 分子伴侣GroE在蛋白复性中的应用
GroE是最常用的分子伴侣, 也是近年来研究的热点, 来源于大肠杆菌的Chaperonin家族。GroE有2种分子量不同但氨基酸顺序相关的蛋白, 大的称GroEL, 由14个分子量约57kD相同亚基形成双层饼状, 具有三磷酸腺苷 (ATP) 酶的活性, 在辅助肽链的折叠过程中需要ATP的存在, 水解ATP释放底物蛋白和能量;小的称GroES, 由7个分子量约10kD相同亚基形成单层饼状, GroES具有促进GroEL折叠肽连的作用。现在GroE在辅助蛋白质体外复性的作用已被许多研究所证实:Buchner等在极易凝胶沉淀的柠檬酸合成酶的复性过程中添加GroE辅助复性, 使复性率达到28%, 而无GroE存在时复性率低于3%;郑平华等[4]在重组人γ-干扰素复性过程中加入GroEL、GroES, 使得重组人γ-干扰素复性率由6.4%提高到50%以上, 比活从6.6×104U/mg增加到1.0×107U/mg, 这些结果充分显示了分子伴侣在蛋白质复性中的应用前景, 但由于分子伴侣不能重复利用, 这样用分子伴侣辅助蛋白复性的费用十分昂贵。现在这个问题已得到解决, 董晓燕等[5]利用甲酰基纤维素凝胶固定化GroE, 研究了其对变性溶菌酶的复性作用, 结果显示在37℃、pH6～8条件下, 溶菌酶的复性率在85%以上, 而且固定化GroE可反复利用5次, 每次的复性率无明显变化, 保持在82%～88%, 解决了分子伴侣的重复利用问题, 表明固定化GroE有可能在实际生物下游工程中得到利用。
2 小分子伴侣与蛋白复性
近几年来利用固定化小分子伴侣来辅助蛋白复性的研究越来越多。“小分子伴侣”是指GroEL顶端区域氨基酸残基191-345的片段, 其N端融合了由17个氨基酸组成的组氨酸标签, 由Zahn等于1996年首次构建, 该片段可以在大肠杆菌中表达, 其发酵产量可达到556.3mg/L[6]。其作用原理是它们保留了GroEL顶部区域的多肽结合部位, 能够和底物蛋白质以1∶1形成瞬间的结合物, 使变性蛋白质相应的成单分形式, 从而防止多肽链的错误折叠, 抑制聚集体的形成保证在隔离的条件下进行复性。小分子蛋白辅助蛋白复性的优点在于分子量较小易于表达, 且不需要ATP的辅助作用, 更多适用于固定化。Altamirano等[7]将它和PDE (蛋白质二硫键异构酶) 、PPI (肽基脯氨酰顺式异构酶) 2种酶联用使利用其他方法很难复性的蝎毒Cn5的复性率达到98%。亲环蛋白A (Cyclophilin A) 和吲哚3-甘油磷酸合成酶 (IGPS) 在GroEL (191-345) 的辅助下复性率分别达到87%和92%[8], 而且小分子伴侣能有效的促进硫氰酸酶以及芽孢杆菌RNA酶的复性。Myrianm等人成功将小分子伴侣固定在琼脂糖上, 对几种难以复性的蛋白实现了高效复性, 并利用固定化小分子伴侣在色谱拄上对包涵体中的不溶蛋白以及贮存中失活的蛋白实现了高效复性。关怡新等[9]在重组人γ-干扰素 (rhIFN-γ) 体外复性中, 初始蛋白质浓度为100mg/L, 加入GroEL 191-345, 复性后蛋白回收率提高了2.2倍, 活性提高了近3倍。将GroEL 191-345固定在NHS-activated Sepharose Fast Flow 凝胶后, 不但能重复利用, 而且进一步提高了rhIFN-γ复性效率, 在初始蛋白质浓度为400mg/L时, 蛋白回收率达到46.29%, 比活为1.95×107U/mg。
3 人工分子伴侣与蛋白复性
人工分子伴侣主要模拟天然分子伴侣GroES/GroEL的功能, 小分子去污剂能与变性蛋白结合形成复合物, 掩蔽其暴露的疏水基, 从而阻止蛋白质的凝聚, 去污剂的作用类似于GroEL, 当加入β-环糊精后使去污剂从蛋白质上剥离, 蛋白质就逐渐复性, β-环糊精的作用类似于ATP和GroES。
近年来用小分子去污剂和β-环糊精 (β-CD) 合成人工分子伴侣来辅助蛋白质复性也得到了广泛的研究应用, 而且相比分子伴侣高昂的费用, 人工分子伴侣具有成本低廉、性质稳定等优点。王颖等[10]利用人工分子伴侣十六烷基三甲基溴化铵 (CTAB) 和β-CD与凝胶过滤色谱耦合来进行溶菌酶复性, 结果表明在连续复性操作条件下可使进料浓度为1mg/ml的变性酶获得89%的复性率, 相比于单纯凝胶过滤色谱的复性率48%提高了80%。张晓栓等[11]在重组内抑素复性中加入 SDS和β-CD, 比例为1∶4, 在pH 8.0, Tris-Hcl 100mm条件下, 复性回收率达到89%。王新华等[12]利用人工分子伴侣十六烷基三甲基溴化铵 (CTAB) 和β-CD系统辅助复性鸡IL-18重组蛋白 (rCHIL-18) , 复性率为42.54%, 而盐酸胍-去离子水透析法复性率为10.67%, 盐酸胍-谷胱甘肽复性率为14.83%, 所以人工分子伴侣能够很好的提高rCHIL-18的复性率。
4 讨 论
与传统的稀释、透析复性等方法相比, 尽管添加分子伴侣、小分子伴侣以及合成人工分子伴侣能够显著提高蛋白复性率, 为其在蛋白复性的应用方面奠定了一定的基础, 但它们仍然是处于发展阶段, 要开发出生产规模的复性系统还需进一步研究。而且在蛋白质药物实际的生产过程中, 究竟采用何种复性工艺, 不仅要考虑技术的可行性, 还要从蛋白质药物的申报工艺验证要求、下游工艺、制剂处方、生产工艺的稳定性、技术经济性等方面进行综合考虑。
不法分子 篇8
近年来,随着计算机技术的飞速发展,利用计算机进行分子模拟已成为现代科学研究中一种很重要的方法,从分子水平上进行产品开发过程设计已成为一种潮流[1,2,3,4,5,6]。分子模拟法可以模拟现代物理实验方法无法考察的物理现象和物理过程,从而发展新的理论;研究化学反应的路径、过渡态、反应机理等十分关键的问题,代替以往的化学合成、结构分析、物理检测等实验[7]。最近分子模拟技术在形状记忆高分子材料中也得到了广泛应用。
形状记忆高分子材料 (SMP)是指具有初始形状的聚合物制品经形变固定后,通过加热等外部刺激手段的处理又可使其恢复初始形状的聚合物。形状记忆聚合物是一种新型的功能材料,自1981年发现热致形状记忆高分子交联聚乙烯以来,形状记忆功能高分子材料得到了很大发展,其作为功能材料的一个分支受到广泛关注。形状记忆高分子材料品种繁多,不同的划分标准可得到不同的分类。根据形状回复原理,形状记忆高分子材料可分为4类:(1)热致形状记忆高分子材料[8],是在室温以上变形,即能在室温固定形变且可长期存放,当再升温至某一特定响应温度时,制件能很快回复初始形状的聚合物。(2)电致形状记忆高分子材料[9],是热致型形状记忆功能高分子材料与具有导电性能物质如导电炭黑、金属粉末及导电高分子等的复合材料。该复合材料通过电流产生的热量使体系温度升高,致使形状回复。所以既具有导电性能,又具有良好的形状记忆功能。(3)光致形状记忆高分子材料[10],是将某些特定的光致变色基团(PCG)引入高分子主链和侧链中,当受到紫外光照射时,PCG发生异构化反应使分子链的状态发生显著变化的材料。(4)化学感应型形状记忆高分子材料[11,12,13,14],是利用材料周围介质性质的变化来激发材料的变形和形状回复。常见的化学反应方式有平衡离子置换、pH值变化、螯合反应、氧化还原反应和相转变反应等,这类物质包括部分皂化的聚丙烯酰胺、聚乙烯醇和聚丙烯酸混合物薄膜等。
1 模拟理论
借用橡胶的弹性理论,可以对聚合物材料的形状记忆特性及影响材料形状记忆特性的因素进行分析。因为聚合物材料的弹性模量可以理解为材料的弹性系数,所以形状记忆材料的热收缩性可以用材料的弹性模量来特性化。
记忆特性∝模量E=3Vkα2gT
式中:T为绝对温度( Tm以上);g为纠缠因子;k为玻兹曼常数;α为线性扭曲因子=定向时的平均链长/非定向时的平均链长;V为单位体积的链数目;V=ρN/[Mc(1- 2Mc/Mn)](ρ为密度;N为阿佛加德罗常数;Mn为链的数均分子量;Mc为交联链之间的分子量)。由此可以看出,交联度越大,缠结点越多,Mc变小,V越大,则E越大,形状记忆性越好。从上面的公式还可以看到分子量Mn以及密度ρ的影响,ρ、Mn越大,E越大,形状记忆性能越好。α也可理解为定向度形成交联后,定向度增加,α可大于1,E也就越大,形变回复力也越大[15]。
2 力学分析原理
统计弹性力学的基本原理表明[16,17], 广义虎克定律表示为:
σi=Cijεj
其中Cij为弹性系数矩阵:
undefined
由于应变能的存在,undefined是对称的,因此描述任意材料的应力-应变行为最多只需要21个系数。各向同性材料的应力-应变行为可以用两个独立的参数描述,对应的弹性系数矩阵可以表示为:
undefined
其中λ和μ称为拉梅系数。各向同性材料的模量可以用拉梅系数表示如下:
拉伸模量:undefined
柏松比:undefined
体模量:undefined
剪切模量:G=μ
弹性系数Cij反映材料在各处的不同弹性效应。拉伸模量、体模量和剪切模量均可以用来衡量材料的刚性强弱,即在外力作用下抵抗变形的能力。体模量还可以体现材料的断裂强度,其数值越大表明材料断裂时所需的能量越大,即断裂强度越大。体模量与剪切模量的比值(K/G),可用来衡量体系的韧性,是指材料在冲击荷重或振动荷载下能承受较大形变而不致被破坏的性能。这是材料由于塑性变形而吸收能量的性质,其值越高则体系的韧性越好。泊松比是材料力学和弹性力学中的名词,定义为材料受拉伸或压缩力时,材料会发生变形,而其横向变形量与纵向变形量的比值,是一无量纲的物理量,塑料的泊松比是0.2～0.4。柯西压(C11-C44)通常可用来衡量体系的延展性,即材料发生形变而不产生裂缝的能力。一般来讲,一个具有较好延展性的物质,其(C12-C44)为正值,反之则为负值[18]。通过上述力学分析可以用拉伸模量E来评价形状记忆高分子材料的优劣。
3 模型构建与模拟方法
3.1 模型构建
利用Materials Studio 4.0软件中Materials Visualizer模块构建含适当链节数的高聚物或共混聚合物模型,用Amorphous Cell模块构造封装模型,结合Compass力场对其进行能量优化、几何优化、分子动力学优化,由NPT分子动力学模拟所得到的共混体系的平均偏摩尔体积对温度作图,可获得玻璃化转变温度Tg,与实验中DSC测得的Tg比较,来评价该模型的合理性。大量的研究表明,分子动力学模拟能获得无定形聚合物的玻璃化转变温度[19,20,21,22,23]。
李红霞等[24]用分子动力学模拟了丁羟胶玻璃化温度,研究结果表明,比体积与温度的关系曲线斜率在Tg处会发生转折;模拟计算得到的Tg为208.00K,采用差示扫描量热(DSC)法实测得到的Tg为194.86K,两种结果在误差允许范围内基本一致,表明MD法可以用来预测丁羟胶的Tg。
3.2 模拟方法
采用COMPASS力场,在NPT系综下进行MD模拟,选取合适的温度和压强,分别选用Andersen控温方法及Parrinello控压方法,体系所带电荷调整为默认值,选取合适的步长和总模拟步长,其余参数采用MS4.0软件包的默认值。力学性能通过Discover模块中的静力模型分析获得,从而获得体系的力学性质参数。根据这些力学参数来评价形状记忆高分子材料的性能。
朱伟等[25]选择钝感炸药TATB(1,3,5-三氨基-2,4,6三硝基苯)为基,以氟橡胶(F2311)为粘结剂,构成复合双组分PBX。用分子动力学和先进的COMPASS[26,27,28,29]力场模拟了PBX的力学性能(弹性系数、模量和泊松比),发现在TATB中添加少量氟橡胶即能有改善炸药的力学性能。
本课题组将进行形状记忆高分子材料性能的研究,拟采用MS4.0软件,利用Amorphous Cell模块构建模型,采用分子动力学方法评价形状记忆高分子材料的性能,进而解释和说明本课题组通过大量实验所得到的具有良好形状记忆功能材料的结果[30],并探索为形状记忆高分子材料的研究提供理论依据突破的可能性。
4 研究现状
4.1 实验和理论研究现状
形状记忆聚合物主要是通过控制温度来实现其形状记忆和回复特性的,因此,其热力学性质是决定材料功能实现和性能优劣的关键因素,在实验中根据形状记忆聚合物及其复合材料使用中的受力变形特点,目前一般采取单向拉伸、压缩和弯曲加载,包括准静态和疲劳加载,主要性能评价依据是其形状回复率。合理的理论模型可以在一定范围内预测形状记忆聚合物在不同条件下应力和应变响应特性,也是对不同热力学条件下材料的储能和回复性质优化的基础。
王诗任[31]认为高分子的形状记忆行为实质上就是橡胶熵弹性的恢复过程,并根据高分子物理的理论对形状记忆行为进一步建立了更优化的数学模型。Bhattacharyya A.等[32]分别在形变固定、应力固定、应力变化速率恒定、形变变化速率恒定以及形变周期性变化等5种情况时,以一个四元流变模型对TSMP的等温力学响应作了理论的探讨,特别把摩擦力因素考虑在内,研究了材料的形状记忆变形与材料性质的温度依赖性对聚氨酯形状记忆力学响应的影响。最近Tobushi H.等[33]又在原先SMP的线性热机械本构模型基础上作了改进,提出了一个非线性模型。Call等[34]利用悬臂梁和三点弯曲等方法研究了纳米SiC的加入对具有形状记忆功能的环氧强度、模量、形状恢复率等的影响。Poilane等[35]采用纳米压痕、鼓膜等技术对形状记忆薄膜材料的杨氏模量、硬度和粘弹特性进行了对比研究。 Rao等[36]在对形状记忆聚合物结晶过程的研究中曾提出一四单元模型,此模型的提出能更好地评价形状记忆材料的形状记忆性能。Hayashi S.等[37]对不同成本的各种原材料进行配方设计,研究了形状记忆聚合物的相关性能,如湿气渗透性、热膨胀性能、光学性能等。
形状记忆聚合物作为一类新型功能材料,近年来受到高度重视。但目前对其热力学研究还存在许多不足,主要表现为相关热力学实验和理论研究的缺乏。通过分子模拟,并结合实验研究就有可能找到解决此类问题的途径。
4.2 分子模拟现状
有关用分子模拟来研究形状记忆高分子材料性能的文献报道还很少,还处于研究的初级阶段,然而随着模拟软件的不断开发,分子模拟还有更广阔的研究领域。Vashishta 等[38]对Al 纳米粒子表面氧化层厚度的生长进行了分子动力学模拟。结果表明, 由于 OAl4 团簇的聚集形成了一个中性的渗透四面体网络, 该网络阻止了氧原子向内扩散以及铝原子向外扩散, 从而在Al 纳米粒子表面稳定地形成了4nm 厚的非晶氧化物。Huang 等[39]模拟了金属 Al 在不同温度下的成模过程, 说明原子不同能量、不同扩散力对成模几何形状有非常大的影响。Julie Diani等[40]用分子动力学方法研究了聚异戊二烯的形状记忆循环,结果表明应力的存储和释放是通过熵变化来实现的。史良伟等[41]研究了端羟基聚丁二烯与2,6-甲苯二异氰酸酯固化网络弹性力学性质,采用分子动力学动态模拟与静态拉伸方法对HTPB (nC=9)-TDI固化网络进行弹性力学性质的模拟计算。比较了半混和全混模式对拉伸模量计算的影响, 表明半混模式得到的固化网络能得到合理的模拟结果,初步表明最大熵模型在研究HTPB固化问题上静态或动态模拟结果都具有唯象可行性。Hakima Abou-Rachid等[42]应用分子动力学研究了塑化剂与聚合物的相容性,研究表明HTPB-DOA相容性很好,而HTPB-DEGDN的相容性就很差,与实验得到的结果相符。Sewell等[43]模拟计算了HMX的弹性系数和模量,Sasaki等[44]使用Morse势函数分别对双晶态和纳米晶态铝的拉伸变形和剪切变形进行了模拟,并且分析了温度和晶界距离对其断裂过程的影响。
综上所述,现有的分子动力学计算机模拟研究多集中于金属纳米、含能材料力学性质、聚合物的相容性等,以及模拟过程中势函数的选取对于模拟结果的影响。对于模拟形状记忆高分子材料的力学性质来评价其性能,还没有比较深入系统的研究。本课题组从形状记忆材料的力学性质着手,通过分子动力学模拟得到高分子材料的弹性模量,并结合实验[30]结果,进而得到性能更优异的形状记忆材料。
5 结语
不法分子 篇9
1 MD模拟方法
1.1 模型的确立
碳纳米管的模型大体可以分为两类。第一类是刚性模型。第二类是柔性模型,如简谐弹簧势能和余弦势能函数来描述碳纳米管中碳碳原子间的各种作用,该模型的最大优点是可以精确的描述碳纳米管本身的性质。
水分子的势能模型种类有很多。如基于量子力学从头计算的MCYL模型[12],半经验型的ST2[13],SPC[14],TIP3P[15],和TIP4P[15]等。其中SPC (Simple Point Charge)模型形式简单,用来进行常温下的内能和径向分布函数等计算较为准备,故被广泛应用,本本文采用水-水分子间作用,其位能形式如下:
式中前半部分为静电作用,后半部分为短程Lennard-Jones(LJ)作用。ε为Lennard-Jones能量参数,σ为Lennard-Jones半径。u(ri,rj)为水分子间的相互作用势能,qi代表第i个原子或离子上所带有的电荷,rij为原子或离子i与j间的距离。SPC势能模型参数见表1。
1.2 MD模拟细节
本文模拟了矢量参数n,m分别为8,9,10的单臂碳纳米管,其直径根据下式计算:
其中a是C-C键长,为0.142 nm。具体参数见表2。
本文的模拟选取在NVT等温等压系踪中进行,采用Nose-Hoover控温法,控制温度保持在300 K,控制压强在1 atm。模拟过程中采用(8,8)(9,9)和(10,10)碳纳米管模型直径分别为1.085 nm,1.22 nm和1.356 nm,管长为73.79 nm,模型中分别放有36个,40个和50个甲醇分子。模拟总步数7.0×105,其中前2.0×105步为平衡步数,后4.0×105步用于统计各种性质,每隔100步保存一次轨迹文件,所采取的步长为0.5 fs。
2 结果与讨论
2.1 径向分布函数
径向分布函数g(r)是反映分子微观结构特征的物理量,可提供关于分子结构性质的信息,它的物理意义是指距离中心粒子r处出现另一粒子的概率密度相对于随机分布密度。通过对O-O和O-H径向分布函数的研究,便于了解不同状态下水分子的微观结构。我们通过分子动力学模拟得到不同管径下的水分子中的O-O, H-H 和O-H径向分布函数(见图1)。
从图1可以看出O-O和O-H径向分布函数分别在0.151 nm和0.299 nm处出现峰值。由此得出,随着碳纳米管管径的增大,径向分布函数的波峰位置影响较不明显,但是随着管径的增大,波峰峰值逐渐增加。其中能够代表甲醇分子微观结构特殊性的是氢键的径向分布函数,即若两水分子O-O间的距离小于0.35 nm、O-H之间的夹角小于30°,则认为两水分子间形成氢键。图1c所示水分子之间形成氢键的线性分布,随着管径的增大,波峰峰值逐渐增大,说明随着管径的增大,水分子之间的O-H聚集密度增大,氢键作用得到加强,而波谷随着管径的增大逐渐下降,且位置左移,峰宽逐渐变窄,说明体系结构由松散、无序逐渐变得紧密,有规律。
水分子放入(8,8)型碳纳米管,模拟结束时这些水分子形成了一条由氢键相连的S形纵列。(10,10)型碳纳米管内的水分子相对于(8,8)型碳纳米管内水分子,由于管内空间增大而导致受限效应减弱,分子的取向已完全成随机分布。延碳纳米管管轴方向观察水分子在管内的分布状态,水分子在靠近管壁的内层由氢键相连成环状.而在管轴附近和远离管壁的管间位置,基本上没有水分子。
2.2 水分子在碳纳米管中的自扩散系数的计算
图2显示了水分子在(8,8)(9,9)和(10,10)碳纳米管中扩散的MSD随时间的变化关系曲线。自扩散系数可通过两种等价的方法计算,即对速度自相关函数求积分Green-Kubo法和对均方位移求斜率的Einstein法[16]。现利用爱因斯坦关系式求得
式中:KB——玻尔兹曼常数
m——粒子质量
ri(t)、ri(0)、vi(0)、vi(t)——分子i在t时刻和0时刻的位移矢量和速度矢量
利用Einstein方法根据MSD和时间(图2)的导数求解水分子的扩散系数。
水分子在碳纳米管中扩散时,碳纳米管的孔径小于水分子之间的平均自由程,则水分子对碳纳米管壁的碰撞,较之水分子间的碰撞要频繁的多,这种扩散称之为Knudsen扩散[17]。Knudsen扩散的通量方程为:
式中:JA——组分A的扩散通量
CA——组分A的浓度
r——扩散距离
DK——Knudsen扩散系数
由气体分子运动论导出Knudsen扩散系数的计算公式:
式中:r——孔半径,cm
T——热力学温度,K
R——气体常数
M——扩散组分的分子量
表3显示的是利用MD方法得出的水分子的自扩散系数,现可利用Knudsen扩散系数的计算公式算出在不同管径的碳纳米管中水分子的自扩散系数(如表4)。
表3给出了不同管径下水分子的自扩散系数,从表3可以看出随着碳纳米管管径的增大,水分子的自扩散系数变大,表明管径越小水分子在碳纳米管中的扩散越不明显,扩散能力几乎丧失。同时由于受限的作用水分子在管内形成了有序的结构,并和管壁之间存在强烈的相互作用,这些都阻碍了水分子在管内的扩散。表4则是利用Knudsen扩散计算公式算出不同管径中水分子的扩散系数。Knudsen扩散区域中的扩散系数与碳纳米管的孔径大小成比例,这是由于随碳纳米管孔径的增大,水分子与管壁的碰撞频率减小,从而使得进入碳纳米管孔道的水分子数目增多,扩散系数增大。由此得水分子在不同管径的碳纳米管中的扩散属于Knudsen扩散。
摘要：利用分子动力学模拟研究了常温常压下受限于(8,8)(9,9)和(10,10)单壁碳纳米管中的水分子,对受限水分子平衡体系的状态和径向分布函数等静态性质进行了分析。结果显示,在不同管径的碳纳米管内部,水分子的微观结构都有高度的有序性。通过做水分子在碳纳米管内的均方位移与时间关系图,利用Einstein法算出不同管径中水分子的扩散系数,然后利用Knudsen扩散公式计算出的水分子的扩散系数,对种方法的计算结果进行比较。
不法分子 篇10
1 仪器与试药
岛津LC-20A液相色谱仪及色谱工作站(LCsolution),紫外检测器(SPD-20A),示差检测器(RID-10A);METTLER TOLEDO AB204-S电子天平;低分子肝素分子量测定标准品(EDQM,Mn=3 800);依诺肝素钠标准品(USP,Mw=4 432)。
2 色谱条件及样品配制
色谱柱为TSK G2000SWxl(300mm×7.8mm);以2.84%的无水硫酸钠溶液(用稀硫酸调节p H值至5.0)为流动相;流速为0.5m L/min;柱温为30℃;采用紫外检测器和示差折光检测器以先后次序串联连接色谱柱的出口,检测波长为234nm。
标准品溶液:精密称取低分子量肝素分子量测定用标准品(Mn:3 800)适量,用流动相配制成每1m L含10mg样品的溶液。
供试品溶液:加流动相稀释成每1m L含10mg样品的溶液。
3 影响分子量及其分布测定准确性的因素
3.1 柱效
为保证测定结果的准确性,一般要求柱效≥20 000N。TSK G2000SWxl色谱柱做样时间不宜过长,否则会造成柱效严重下降。对于低柱效的柱子,可以采用0.5M Na2SO4(p H2.7)→H2O→20%ACN→H2O交替冲洗进行再生处理,柱效可部分恢复。
3.2 泵流速
在低分子肝素分子量及其分布的测定过程中,通常采用恒浓度的缓冲盐溶液对样品进行洗脱处理。由于缓冲盐的浓度较大,故对泵柱塞杆磨损较大,长期使用易造成泵流速不稳,导致样品洗脱时间发生变化,从而引起测定结果出现偏差。故除了对泵头进行在线清洗外,还应经常采用计量工具对泵进行校准,保证泵流速的精度。
3.3 延滞时间
延滞时间是指同一组分流经UV和RI两检测器的时间差。采用EP法测定分子量与分布时,必须准确测定这个时间差,目前常采用丙酮、葡萄糖醛酸、叠氮钠来测定。但笔者认为,这不能反应样品本身在系统中的流体力学特性,而应该采用样品的自身峰来计算延滞时间。日本药典中规定,采用标准品图谱中扣除溶剂峰外倒数第4个峰在UV和RI中的保留时间来计算延滞时间,这种方法考虑到了分子流体力学,计算结果科学合理。
3.4 标准曲线取点数量与取点方式
GPC法测定分子量及其分布经过延滞时间校正后,需要建立保留时间与分子量之间的对应关系才能用于未知样品的分子量测定。
EP药典中建议使用三次方程拟合校正曲线,拟合度更好,相关系数r>0.99。但EP药典并未规定标准曲线的取点数量和取点方式。当然,在标准曲线的建立过程中,取点越多越能接近真实值,但涉及到的计算过程繁琐。在简便计算的基础上通常采用较少数量的点去建立标准曲线,一般情况下选取20个左右的点建立标准曲线较为适宜。
不同的取点方式会对计算结果造成一定偏差,笔者比较了三种标准曲线的取点方式,参见图1。系列1为从峰起始到结束选取1 000多个点;系列2为选取峰顶点位置的20个点;系列3为选取峰顶和峰谷位置的20个点,分别得到如下线性回归方程。
系列1:Log M=-38.969T3+2 326.237T2-47 242.927T+327 774.628,R2=0.999;
系列2:Log M=-28.296T3+1 755.460T2-37 099.780T+267 913.406,R2=0.998;
系列3:Log M=-44.037T3+2 602T2-52 163T+356 599,R2=0.999。
用上述三条标准曲线分别计算依诺肝素钠标准品的分子量及其分布,测定结果见表1。
(n=2)
由上表数据可知,同一样品,由系列2计算<2 000的级分比例明显偏差较大,而>8 000的级分比例相差很小;而采用系列3计算的结果与系列1计算的结果接近。从图1可以看出,系列3的取点数量只有20个,但其取点方式真实反映了数据图谱的实际情况,所以测定结果接近真实值,此种取点方式科学合理,且便于计算。
4 讨论
在分子量的测定过程中,EP法采用宽标标准品计算低分子肝素分子量及其分布。每次测定均需人为建立保留时间与分子量之间的对应关系,导致不同实验室和不同实验人员测定分子量均会产生一定的偏差,所以规范低分子肝素分子量测定方法势在必行。目前,分子量测定用标准品均为进口,国内暂无,建议有关部门尽快开展国内低分子肝素分子量测定标准品的研发工作,以便拓宽检品范围,节约检验费用。
综上所述,本研究探讨的影响因素具有实际意义,进一步规范了分子量测定方法,能够提高低分子肝素分子量及其分布的测定准确性。
参考文献
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[5]国家食品药品监督管理局.低分子肝素钙国家药品标准WS1-(X-147)-2005Z[S].2005.
不法分子 篇11
【关键词】纳米通道；电化学单分子；酶分子
Abstract：Objective： To study the application value of the detection of the enzyme molecules by the electrochemical single molecule analysis of the nano channel. Methods： Analyze the affinity interaction between thrombin and thrombin reagent by using hemolysin and lecithin free assembly to biological nanopores through the characteristics of hemolysin aperture to control single stranded DNA and double stranded DNA. Results： The current signal was terminated because the double stranded structure which made up with cervical loop structure could not pass through the hemolysin nanopore. In addition， under high voltage， the structure of the neck ring was destroyed， and the DNA of the neck ring was ssDNA. Conclusion： There is no relationship between the DNA solution chain time and the double chain sequence of the structure of the neck ring， and the applied voltage is closely related.
Keywords：nano channel； electrochemical single molecule
【中图分类号】R-1 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2015）06-0213-02
凝血酶在临床医学领域当中具有一定的地位，其可以作用在血液当中的纤维蛋白原，促使其转变成为纤维蛋白，加速血液凝固，进而起到止血的作用。在临床当中主要应用于外伤、口腔、妇产科、消化道以及泌尿的止血[1]。本文筆者通过利用溶血素以及卵磷脂的自由组装形成生物纳米孔到，通过溶血素孔径的特性来控制单链DNA以及双链DNA通过孔径的时候不同电流下降，对凝血酶与是凝血酶试题的亲和作用给予分析研究，现报告如下。
1资料与方法
1.1试剂与仪器
1.1.1主要试剂
其中包括有SA（溶血素）、APLI（卵磷脂）、盐酸、NEase（限制性核酸内切酶）、Tris、正葵烷以及KCl。试验当中所使用的水全部为二次去离子水，实验所使用的试剂全部为分析纯。试验当中使用到的DNA片段全部参考相关文献进行设计。
1.1.2主要仪器
仪器：Axonpatch200B，DigiData1440A，离心机，冰箱BCD-162AG，202-1AB型电热恒温干燥箱，BS124S电子天平、KQ-600DB型数控超声波清洗器、SZ-93自动双重纯水蒸馏器、CJJ78-1型磁力加热搅拌器、磁力架、数值式水浴温度控制仪、可调式移液器、PHS-3DpH计以及气浴恒温振荡器。
1.2试验方法
1.2.1DNA储备液和缓冲溶液
（1）全部DNA储备液都要采取二次水稀释为10-4M；（2）缓冲溶液Tris-HCl（10mM，pH7.8，1.0MKCl）：①：称取0.1213g Tris和7.455gKCI加入到80毫升烧杯当中加水溶解，采取稀释HCI调节pH一直到7.8；②：将以上溶液移到100毫升容量瓶当中加入水稀释一直到刻度线，即得0.01M Tris-HCl缓冲溶液。
1.2.2试验样品制备
（1）采取10 L10-4MSl注入样品管当中，采取Tris-HCl缓冲溶液稀释到10-6M，这个样品为G1；（2）采取10 L10-4MSl与10 L10-4MS2放在同一个样品管当中在37摄氏度之下孕育2小时，之后采取Tris-HCl缓冲溶液稀释到10-6M，这个样品为G2；（3）采取10 L10-4MSl与10 L10-4MS2放在同一个样品管当中在37摄氏度之下孕育2小时，之后向当中加入10 L5.0×10-4M的凝血酶在37摄氏度之下反应40分钟，之后计入970 L Tris-HCl缓冲溶液，这个样品为G3。
1.2.3卵磷脂处理
配制30mg·mL-1卵磷脂溶液：向盛有200毫克卵磷脂的瓶当中加入2毫升正葵烷，得到100mgmL-1卵磷脂溶液，选取60 l100mg·mL-1卵磷脂溶液，加入正葵烷稀释一直到200 l，即会得到30mg·mL-1卵磷脂溶液[2]。
1.2.4制备磷脂双分子层膜
（1）调整好相关仪器，采取1000 L的移液枪在检测槽的cis和trans端分别注入1毫升的Tris-HCl缓冲溶液，这个时候设置电压100mV开启检测，电流应该为无穷大显示过溢状态；（2）使用一个洁净的毛笔沾取一定量的30mg·mL-1卵磷脂涂抹在内部凹面上的小孔表面；（3）在电压100mV下运行工作软件，这个时候孔道处于封闭状态电流应该为0，这个时候打开膜电容界面观察膜电容的变化，当其上升和稳定的时候，即为磷脂双分子层膜成膜成功，这个时候可以停止运行软件，并且切换到电流-时间界面。如果这个环节下封闭状态电流没有为0或膜电容持续不稳定，则一定要把检测槽清洗干净重新开始[3]。
1.2.5在磷脂双分子层膜上形成纳米孔道
采取移液枪选取溶血素10 L 注入到cis端孔的表面，静止30分钟以后，打开工作软件，这个时候还必须要处于封闭电流状态，得到纳米孔道成形以后电流基线会出现一个短暂的突跃，这个时候即为成功形成纳米孔道，如果在这个过程当中电流基线在持续上线波动，则需要再一次制备磷脂双分子层膜。
2结果
因为颈环结构属于双链结构无法穿过溶血素纳米孔道卡在溶血素孔道当中，造成电流信号终止。另外，在高电压下颈环结构被破坏，颈环结构的DNA伸展为ssDNA。颈环结构卡在溶血素孔道当中，在高电压下颈环结构伸展，电流信号得以恢复。由于在140mV下颈环结构的伸展速度和DNA穿过溶血素纳米孔道的时候速度要比在120mV下速度快。G2结构是3`为适体S2与S1的杂交部分，5`端为颈环结构，这个时候的G2不管是3`端还是5`端在80mv电压之下全部无法顺利通过溶血素纳米通道，所以整个过程没有电流下降表现。
3讨论
DNA穿孔纳米孔道的时候，电流脉冲大部分集中在60pA左右。根据相关报道表明[4]，在低电压下颈环结构无法顺利通过溶血素纳米孔道，然而在高电压下颈环结构被伸展开，可以顺利通过纳米孔道。本文结果显示，G3在G2的基础之上加入凝血酶的结果，加入凝血酶以后，凝血酶适体S2被脱离出来，这个时候的G3样品通过纳米孔道的时候样品就是颈环结构的S1。另外，结果显示，在比较高的电压之下通过的碱基数要比低电压要多，并且比较高电压下颈环结构的伸展时间要比低电压的时间短。
总之，颈环结构可以在高电压下被伸展开，可以顺利通过纳米通道。颈环结构DNA解链时间和双链序列没有关系，和施加电压有密切关系。凝血酶作用以后的dsDNA可以顺利通过溶血素纳米孔道能够看见凝血酶，与凝血酶适体有非常高的亲和力，可以将凝血酶适体从dsDNA当中脱离开。
参考文献：
[1]丁克儉，张海燕，胡红刚，等.生物大分子纳米孔分析技术研究进展[J].分析化学，2010，38（2）：46.
[2]毓娟，揭雪飞，董新法，等.Ce02在催化氧化反应中的应用[J].电源技术，2012，26（1）：43-46.
[3]张梅，魏志锋，杜雪岩，等.CeO2包覆盖对TiO2传感器材料的氧敏性能的影响[J].稀有金属，2011，25（1）：71-74.
不法分子 篇12
全球领先的特种化学品制造商科莱恩,作为重要的分子筛粉和催化剂供应商之一,出席了2016年6月19~24日在巴西里约热内卢举办的第十八届国际分子筛会议。以“分子筛创造可持续世界”为主题的本次会议为期6天,旨在探索利用分子筛减少环境污染物的新方法。Silke Sauerbeck博士代表科莱恩研发团队就能够吸附汽车排放物中挥发性有机化合物(VOC)的分子筛创新技术发表了新的研究成果。
目前,关于汽车排放物的立法主要集中在排气系统,为了满足法规的要求,各种分子筛解决方案已经应运而生。然而,根据即将出台的新规定,还需要减少来自轮胎、内饰材料和燃油蒸气等来源排放出的所有其它VOC,并且要确保能够在车辆运行的所有气候条件下消除此类VOC的排放。因此,无论是在-40~80℃的温度条件下,还是在潮湿的气候环境中,排放物的吸附水平都应保持稳定。
使用分子筛吸附VOC的技术由来已久,但一般仅限于尾气处理,在控制汽车的其它排放物方面,分子筛的应用才刚刚兴起。科莱恩的多学科团队进行了广泛的研究,试图开发能够在不同的气候条件下永久吸附汽车排放物中VOC的分子筛产品。研究表明,科莱恩的Beta型(BEA)、Pentasil型(MFI)和Mordenite型(MOR)结构的分子筛在这一应用领域十分有效。