衰老小鼠

2024-06-01

衰老小鼠(精选6篇)

衰老小鼠 篇1

猕猴桃的蛋白质和各类微量元素含量较高, 尤以维生素C的含量最高, 被誉为水果之王, 已成为食品、医药的宝贵资源, 具有很高利用价值[1,2,3]。但有关猕猴桃抗衰老的研究甚少, 本实验以猕猴桃果汁为原料, 观察猕猴桃对D-半乳糖致衰老小鼠脑组织和血清中超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase, SOD) 活力、丙二醛 (malondialdehyde, MDA) 和抑制羟自由基能力的影响, 从抗氧化角度和清除自由基的角度综合探讨猕猴桃抗衰老作用, 为猕猴桃功能开发、利用及作用机制的探讨提供实验参考资料。

1 材料与方法

1.1 药品

猕猴桃果实采自桂西地区的乐业县, 选择成熟、新鲜的果实100 g用清水洗净, 沥干。每次加入400 ml双蒸水, 用匀浆机打碎, 纱布三次过滤, 取滤液, 5000 r/min, 离心20 min后, 取上清液减压蒸馏, 浓缩为100 ml, 冰箱保存。

1.2 实验动物

健康昆明系小白鼠24只, 12周龄, 体重20~25 g, 由右江民族医学院动物实验中心提供 (实验动物生产许可证:SCXK桂2012-0003;实验动物使用许可证:SYXK桂2011-0010) 。

1.3 方法

1.3.1 动物分组与给药

小鼠每日皮下注射D-半乳糖100 mg/kg, 1次/d, 连续注射D-半乳糖60 d, 建立衰老模型小鼠。将建模成功的16只小鼠分为:衰老模型组和猕猴桃组, 每组8只。第61天起, 猕猴桃组小鼠注射D-半乳糖的同时, 1 h后用猕猴桃液按12 g/kg给小鼠灌胃, 1次/d, 连续灌胃21 d;衰老模型组小鼠只注射D-半乳糖;取另外8只小鼠正常饲养, 作为空白对照组。

1.3.2 测试样品的制备

各组小鼠于末次给药禁食12 h后, 从眼眶取血, 待血液凝固后离心10 min取血清留待测定。在冰盒上开颅, 取出脑组织, 用生理盐水漂洗两次, 用滤纸吸干, 准确称取组织质量, 加生理盐水制成10%的组织匀浆液, 1500 r/min离心10 min后分别取其上清液待测定。

1.3.3 样品SOD活力、MDA含量和抑制羟自由基能力的测定

用UV-1700紫外可见分光光度计, 分别比色测定血清和脑组织液各管吸光度值, 然后根据试剂盒说明书的计算公式算出样品中SOD活力和MDA含量及抑制羟自由基能力。

1.4 统计学处理

采用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析, 计量资料用 (±s) 表示, 采用单因素方差分析, 并做LSD法两两组间比较, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组小鼠血清SOD、MDA和抑制羟自由基能力比较

各组间血清中SOD活力、MDA含量和抑制羟自由基能力比较差异均有统计学意义 (F=24.79、7.93、8.35, P<0.01) 。衰老模型组血清中的SOD活力、MDA含量和抑制羟自由基能力与空白对照组比较差异均有统计学意义 (P<0.01或P<0.05) 。与衰老模型组比较, 猕猴桃组血清中的SOD活力和抑制羟自由基能力均明显升高, 差异均有统计学意义 (P<0.01或P<0.05) , 而MDA含量明显降低, 差异有统计学意义 (P<0.01) , 见表1。

与空白对照组比较, *P<0.05, **P<0.01;与衰老模型组比较, △P<0.05, △△P<0.01

2.2 各组小鼠脑组织中SOD、MDA和抑制羟自由基能力比较

各组间脑组织中SOD活力、MDA含量和抑制羟自由基能力比较差异均有统计学意义 (F=9.22、10.28、14.60, P<0.01) 。衰老模型组脑组织中的SOD活力、MDA含量和抑制羟自由基能力与空白对照组比较差异均有统计学意义 (P<0.01) 。与衰老模型组比较, 猕猴桃组脑组织中的SOD活力和抑制羟自由基能力均明显升高, 差异均有统计学意义 (P<0.01或P<0.05) , 而MDA含量明显降低, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表2。

与空白对照组比较, **P<0.01;与衰老模型组比较, △P<0.05, △△P<0.01

3 讨论

衰老是一种自然的生物现象, 主要表现为生物体全身各组织、器官的退行性变化, 是诸多病理、生理过程综合作用的结果。本实验连续60 d给小鼠皮下连续注射D-半乳糖造亚急性小鼠衰老模型, 由实验结果可知, 模型组小鼠血、脑的SOD活力、MDA含量和抑制羟自由基能力与空白对照组比较差异均有统计学意义 (P<0.01或P<0.05) ;小鼠行动迟缓, 形体瘦弱, 毛色松散无光泽, 自发性活动减少, 说明衰老模型成功建立[4,5,6]。D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型因其衰老变化明显, 模型稳定, 在抗衰老研究中广泛应用。MDA是一种脂质过氧化产物, 能引起细胞代谢及功能障碍, 因而引起细胞损伤, 进而加速机体衰老, 体内MDA含量可间接反映体内自由基对机体的损伤程度。SOD能清除体内自由基, 减少其对机体的损伤, SOD活力高低可间接反映机体清除自由基、保护细胞免受自由基损伤的能力[7,8]。而羟自由基被公认是生物系统中最具活性的氧自由基, 抑制羟自由基能力可以间接反应组织自由基含量, 抑制羟自由基能力越高, 则表明组织中羟自由基的含量越低[9]。

本研究发现, 用猕猴桃给衰老模型小鼠连续灌胃21 d后, 能提高血清和脑组织中SOD活力、抑制羟自由基能力, 降低MDA含量, 表明猕猴桃可提高抗氧化酶活力, 降低羟自由基, 抑制机体脂质过氧化, 具有延缓衰老的作用。至于猕猴桃果汁中哪些成分能起到氧自由基清除剂的作用, 还有待于进一步研究。

参考文献

[1]揣冰洁, 朱洪权, 张甲生.猕猴桃果中化学成分研究与应用[J].农业与技术, 1999, 19 (3) :35-37.

[2]刘祝祥, 尹红, 肖琳莉.猕猴桃根多糖抗疲劳、抗氧化与单糖组分鉴定[J].食品科学, 2013, 34 (13) :239-242.

[3]关君霞, 甄丹丹, 丘琴, 等.美味猕猴桃化学成分及药理作用研究近况[J].中国民族民间医药, 2012, 21 (14) :48-49.

[4]洪亮, 方胜.三种不同方法建立小鼠衰老模型的比较[J].中国老年学杂志, 2010, 30 (18) :2607-2608.

[5]关萍, 郭搏, 王惠, 等.D-半乳糖促小鼠衰老模型的衰老程度与自然生长鼠龄的比较[J].动物医学进展, 2013, 34 (1) :71-74.

[6]袁带秀, 袁志忠, 李中正.杜仲粕对D-半乳糖致衰老小鼠的抗衰老作用研究[J].时珍国医国药, 2012, 23 (12) :2968-2970.

[7]ZoriL, Colak E, Canadanovi V, et al.Oxidation stress role in agerelated cataractogenesis[J].Med Pregl, 2010, 63 (7-8) :522-526.

[8]赵保路.自由基、营养、天然抗氧化剂与衰老[J].生物物理学报, 2010, 26 (1) :26-36.

[9]张丽, 陈冠华, 方柔, 等.毛细管电泳法测定过氧化氢酶与天然抗氧化剂协同清除羟自由基作用[J].分析化学, 2013, 41 (10) :1571-1576.

衰老小鼠 篇2

关键词:花生壳提取液,抗衰老,模型

自由基产生增多及其诱导的氧化反应损伤是引起生物衰老的重要原因。提高自由基的清除能力对抗衰老具有很重要的意义。现代研究表明, 花生壳中除含有大量的碳水化合物和粗纤维外, 还含有多酚类、黄酮类物质以及β2谷甾醇等甾体化合物。花生壳中以木犀草素为代表的黄酮类成分除能降血压、降血脂、扩张冠状动脉等作用外, 还具有抗氧化、镇咳、平喘、增强免疫和抗肿瘤等药理活性[1,2], 但其对衰老的作用却未见报道。故本研究通过复制亚急性衰老小鼠模型, 探讨花生壳提取液的抗衰老活性, 为花生壳的开发利用提供一定的思路。

1材料与方法

1.1 药物与试剂

花生壳购自云南省大理州宾川县。在大理学院药学院有机实验室提纯为浸膏后配制为25mg/ml浓度的溶液 (黄酮含量为0.34mg/ml) 。超氧化物歧化酶 (SOD) 试剂盒, 丙二醛 (MDA) 试剂盒, 考马斯亮蓝试剂盒均购自南京建成科技有限公司, D-半乳糖购自国药集团化学试剂有限公司, 其他试剂均为国产分析纯。

1.2 实验动物及分组

3~4月龄的昆明小鼠30只, 分笼饲养于大理学院实验动物中心动物房。青年对照组进行正常饲养;模型组给予每天1次皮下注射5%D-半乳糖 (0.25ml/10g) 及生理盐水0.5ml灌胃;花生壳提取液组每天定时行皮下注射5%D-半乳糖 (0.25ml/10g) 及花生壳提取液0.15ml/10g灌胃。8周后断头取血、分离血清, 制备肝组织、脑组织匀浆, 测定SOD和MDA含量;蛋白质含量采用考马斯亮蓝法测定, 具体操作均按测试盒所附方法、步骤进行;计算脾脏指数和胸腺指数, 指数计算采用如下公式:小鼠胸腺指数=胸腺重量 (mg) /体重 (g) ;小鼠脾脏指数=脾脏重量 (mg) /体重 (g) 。

1.3 主要仪器

SHB-ⅢT循环水式多用真空泵 (郑州长城科工贸有限公司生产) ;RE-52-05旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂生产) ;JY88-Ⅱ超声波细胞粉碎机 (宁波新芝科器研究所生产) ;18R冷冻高速离心机TGL-18R (珠海黑马医学仪器有限公司生产) ;电子分析天平CVA214C (奥豪斯仪器上海有限公司生产) ;电子制冰机 Barline BF320 (斯科茨曼制冰系统上海有限公司生产) 。

1.4 统计学处理

实验数据均用平均值±标准差 (x¯±s) 表示, 数据分析采用SPSS13.0统计软件包。P<0.05表示有统计学意义。

2结果

2.1 对免疫器官体质量指数的影响

观察胸腺、脾脏的脏器指数, 脏器指数即脏器与体质量之比=内脏质量 (mg) /体质量 (g) 。经统计分析后可知, 花生壳提取液组的胸腺、脾脏指数比青年组的低, 但是明显高于衰老模型组, 有统计学意义 (P<0.01) , 见表1。

注:与青年对照组比较, △P<0.01;与衰老模型组比较, *P<0.01。

2.2 血清、肝组织和脑组织MDA含量的变化

由表2可见, 衰老模型组血清、肝组织及脑组织MDA 含量均显著高于青年对照组 (P<0.01) , 与模型组相比, 花生壳提取液干预组小鼠的血清、肝组织及脑组织MDA含量则显著降低, 差异显著, 有统计学意义 (P<0.01) 。

注: 与青年对照组比较, △P<0.01;与衰老模型组比较, *P<0.01。

2.3 血清、肝组织和脑组织SOD活力的变化

由表3可见, 衰老模型组的血清、肝组织及脑组织SOD活性均显著降低, 低于青年对照组 (P<0.01) , 而花生壳提取液干预组小鼠的血清SOD活性、肝组织及脑组织SOD活性则较衰老模型组升高 (P<0.01) 。

3讨论

生物衰老是一个多因素、复杂的、综合的生理变化过程。关于衰老的产生机制主要存在以下学说:自由基损伤学说[2]、遗传突变学说[3]、端粒丢失学说[4]、线粒体丢失学说[5]、衰老的网络学说[6]等。目前被普遍认可的是自由基损伤和端粒丢失学说。作为人体正常代谢产物的自由基在正常情况下处于不断的产生与消除的动态平衡中, 一旦数量过多会引起生物大分子如脂质、蛋白质、核酸的损伤。因此减少自由基的产生和清除自由基在抗衰老方面具有重要意义。而研究表明花生壳中以木犀草素为代表的黄酮类成分除能降血压、降血脂、扩张冠状动脉等作用外, 还具有抗氧化、增强免疫、抗肿瘤等药理活性。本实验以D-半乳糖注射法建立亚急性衰老小鼠模型, 用花生壳提取液灌胃干预, 研究结果显示, 皮下注射D-半乳糖的模型组小鼠血清、肝组织及脑组织SOD活性降低、MDA含量明显上升, 表明氧化损伤程度加重;与衰老模型组相比, 经过花生壳提取液灌胃干预的花生壳提取液组小鼠SOD活性升高、MDA含量明显降低, 表明花生壳提取液可能消除了机体一定量的氧自由基和抗脂质氧化的作用, 故干预后机体氧化损伤程度减轻, 发挥了较好的抗衰老作用。

注:与青年对照组比较, △P<0.01;与衰老模型组比较, *P<0.01。

随着机体年龄的增长, 免疫功能也在不断下降。胸腺指数和脾脏指数在一定程度上可间接反映机体衰老的状况[7]。实验结果显示, 衰老模型组小鼠的胸腺指数和脾脏指数均明显低于青年对照组, 两者具有显著的差异, 而经花生壳提取液连续灌胃后的小鼠, 其胸腺指数和脾脏指数较衰老模型组增大, 二者差异也较明显, 有统计学意义 (P<0.01) , 说明花生壳提取液在一定程度上可延缓机体的衰老进程。

综上所述, 花生壳提取液具有良好的抗氧化和抗衰老作用, 其原因可能是花生壳提取液具有的良好的抗氧化作用有效清除了自由基, 减轻了脂质过氧化反应所致的。

参考文献

[1]周萍, 蒋惠娣.大鼠肠道对花生壳提取物主要成分的吸收研究 (J) .大理学院学报, 2007, 6 (6) :4-7.

[2]柳爱怜, 何建莲.花生壳中生物抗氧剂及其抗自由基活性研究 (J) .郑州工程学院学报, 2000, 21 (4) :59-60.

[3]Imam SZ, Karahalil B, Hogue BA, et al.Mitochondrial and nu-clear DNA-repair capacity of various brain regions in mouse isaltered in an age-dependent manner (J) .Neurobiol Aging, 2006, 27 (8) :1129-1136.

[4]Zhang P, Dilley C, Mattson MP.DNA damage responses inneural cells:focus on the telomere (J) .Neuroscience, 2007, 145 (4) :1439-1448.

[5]Shawi M, Autexier C.Telomerase, senescence and ageing (J) .Mech Aging Devel, 2008, 129 (1-2) :3-10.

[6]Li L, Pischetsrieder M, St Leger RJ, et al.Associated links a-mong mtDNA glycation, oxidative stress and colony sectoriza-tion in Metar2 hizium anisopliae (J) .Fung Genet Biol, 2008, 45 (9) :1300-1306.

衰老小鼠 篇3

动物:昆明种小白鼠48只, 6月龄, 雌雄各半, 且雌性无妊娠, 由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。试剂:D-半乳糖, 南京建成生物工程研究所提供。药品:九转黄精丸 (黄精、当归) , 黑龙江中医药大学佳木斯学院附属医院药局提供;六味地黄丸, 同上。仪器;ALC-210.4电子分析天平 (德国塞多利斯) ;转轮式切片机 (日本奥林巴斯) ;DL-6000B型低速冷冻离心机 (上海安亭科学仪器厂) ;ZSZ-20紫外灯 (锦州市光学医疗器械厂) 。

2实验方法

2.1 药液制备

取生药加水煎煮两次, 每次药渣均榨挤, 取汁, 四层纱布过滤, 合并两次药液, 浓缩至所需浓度。

2.2 动物分组、造模及给药

取昆明小鼠48只, 随机分为:①空白对照组12只, 每日皮下注射生理盐水, 同时灌服等容量生理盐水;②模型对照组12只, 每日皮下注射D-半乳糖50mg/kg体重, 同时灌服生理盐水;③九转黄精丸治疗组12只, 每日皮下注射D-半乳糖50mg/kg体重, 同时灌服九转黄精丸7g/kg体重;④六味地黄丸对照组12只, 每日皮下注射D-半乳糖50mg/kg体重, 同时灌服六味地黄丸。

2.3 组织形态学观察方法

30天时灌胃两个小时后, 断颈处死小鼠, 即时取背部正中皮肤, 用脱毛剂 (硫化钠) 脱去鼠毛, 取0.5cm×0.5cm大小皮肤迅速放入10%中性甲醛液中固定, 切片, 观察小鼠皮肤组织形态学变化。

3实验结果

空白对照组:表皮完整, 染色均匀、腺体丰富, 无炎细胞浸润;表皮中的角质层、颗粒层、棘细胞层均无色素沉积;真皮层中的血管无充血, 腺体、毛囊间质无水肿及增生。表皮薄但层次清晰, 结构完好, 真皮胶原纤维丰富, 交错排列。模型对照组:表皮染色加深;表皮层中角质层增厚, 棘细胞层、基底细胞层色素沉积较多;而真皮层中血管充血明显, 间质胶原纤维增生, 淋巴细胞浸润, 皮下结缔组织发生坏死, 腺体萎缩。表皮结构不完整, 真皮胶原纤维数量减少, 排列稀疏。中药对照组:表皮完整, 染色较深, 腺体轻度萎缩;表皮层中的角质层略增厚, 棘细胞层和基底细胞层仍有黑素沉积;真皮层中血管充血减轻, 间质胶原纤维轻度增生, 淋巴细胞少量浸润。表皮薄但结构完整, 真皮胶原纤维较密集, 交错排列。中药治疗组:表皮染色略深, 腺体丰富, 层次清晰;表皮层中的角质层增厚, 棘细胞层和基底细胞层有少量黑素;真皮层血管无充血, 间质纤维增生, 有少量淋巴细胞浸润。表皮薄但结构完整, 真皮胶原纤维较密集交错排列。

4结论

衰老小鼠 篇4

1 材料与方法

1.1 中药复方

将当归40 g、川芎40 g、桃仁20 g、红花20 g、益母草60 g、炮姜20 g、甘草15 g (以上中药购自青海大学农牧学院动物医院) 、红糖 (市购) 100 g、黄酒 (市购) 50 mL、牦牛胎盘 (采自青海省海西州天峻县) 20 g水煎, 过滤出的药液在电炉上浓缩至500 mL。

1.2 试验动物分组及处理

6~8周龄昆明种小鼠60只, 雌雄各半, 由青海地方病研究所实验动物中心提供。常规饲养3 d, 观察无异常后备用。将小鼠随机分为D-半乳糖药物组、D-半乳糖对照组和对照组, 每组20只。D-半乳糖药物组和D-半乳糖对照组小鼠背部皮下注射D-半乳糖0.15 mL/d, 对照组注射生理盐水0.2 mL/d;D-半乳糖药物组口腔灌服中药复方0.2 mL/d, D-半乳糖对照组和对照组灌服生理盐水0.2 mL/d;15 d后脱颈椎处死所有小鼠, 取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏备用。

1.3 试剂

D-半乳糖 (批号为080711) , 购自上海蓝季科技发展有限公司;SOD试剂盒 (批号为091231) 、MDA试剂盒 (批号为091231) , 均购自南京建成生物工程研究所。

1.4 组织匀浆的制备

取小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏各0.3 g制成10%组织匀浆, 备用。

1.5 SOD活性和MDA含量的测定

按照试剂盒说明分别测定衰老小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中SOD活性和MDA含量。

1.6 统计学分析

应用SPSS统计软件对试验数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 中药复方对衰老小鼠体重的影响

给药前分别称取各组小鼠体重, 15 d后再分别称取各组小鼠体重, 结果15 d后D-半乳糖药物组和对照组与D-半乳糖对照组相比差异显著 (P<0.05) , 给药前后各组小鼠体重变化结果见表1。

注:同列数据肩标字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

2.2 中药复方对衰老小鼠部分组织中SOD活性的影响 (结果见表2)

注:同列数据肩标小写字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 大写字母不同表示差异极显著 (P<0.01) , 字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表2可知, 与D-半乳糖对照组比较, 除了肾脏外, 中药复方都能提高衰老小鼠其他组织中SOD的活性 (P<0.05或P<0.01) 。

2.3 中药复方对衰老小鼠部分组织中MDA含量的影响 (结果见表3)

注:同列数据肩标小写字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 大写字母不同表示差异极显著 (P<0.01) , 字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表3可知, 与D-半乳糖对照组比较, 除了肾脏外, 中药复方都能降低衰老小鼠其他组织中MDA含量 (P<0.05或P<0.01) 。

3 讨论

以D-半乳糖制备亚急性衰老模型的方法是目前国际上公认的建模方法[8], 该模型使机体细胞内半乳糖浓度增高, 在醛糖还原酶催化下还原成半乳糖醇。这种物质不能被细胞进一步代谢而堆积在体内影响正常渗透压, 导致细胞代谢紊乱, 破坏机体抗氧化防御系统使自由基积聚, 导致衰老[9,10]。在衰老机制研究中, 超氧自由基学说已受到广泛的关注, 在动物衰老的过程中, 体内超氧自由基含量不断增多、机体自身的抗氧化系统活性降低是机体衰老的主要原因之一[11,12]。

衰老小鼠 篇5

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明种老龄小白鼠30只, 鼠龄15月, 体重30~40g, 雌雄各半, 随机分为3组, 每组10只。红景天组, 按5~8g/kg灌胃;维生素E (简称VE组) , 按50mg/kg灌胃;老年对照组, 按20mL/kg蒸馏水灌胃。药物对照组 (鼠龄3个月) 10只, 雌雄各半, 按20mL/kg灌胃蒸馏水。以上4组, 每天灌胃1次, 4周后断头处死动物, 采血按文献[3]。

1.2 药物

红景天水煎剂按常法煎制[4], 浓缩至含生药量0.5g/mL, 供灌胃用药。维生素E注射剂 (Vitamin E Injection) 系上海通用药业产品, 批号H31021260 规格1mL:50mg。

1.3 试剂

1, 1, 3, 3-四氧乙基丙烷 (TEP) 为瑞士Fluka公司产品, 批号61035391, 其余试剂均为国产分析纯。

1.4 方法

红细胞超氧化物歧化酶 (SOD) 活性测定采用丁氏法[5], 全血谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 活性测定采用按夏氏法[6], 丙二醛 (MDA) 含量按大石诚子氏法测定。

1.5 统计学处理

实验数据用方差分析处理, 实验数据以平均值±标准差undefined表示。

2 结果

见表1。

*P<0.05与老年对照组比较;**P<0.01与青年对照组比较;##P<0.01与VE组比较。

红景天水煎剂对老年小鼠红细胞中SOD活力、全血GSH-Px活性、红细胞中MDA和血浆中MDA含量的影响结果表明, 红景天水煎剂组与老年对照组比较, 红细胞中SOD活性有增强作用, 与VE组和青年对照组比较, 无显着差异。红景天水煎剂组与老年对照组和VE组比较, 全血GSH-Px活力均有明显增强作用, 与青年对照组比较, 无显着性差异。红景天组与老年对照组比较红细胞中MDA含量明显降低, 对血浆中MDA含量也有降低作用, 与VE组和青年对照组比较, 无显着性差异。

3 讨论

本实验结果证明, 红景天水煎剂能显着提高老龄小白鼠红细胞中SOD的活力和全血GSH-Px活性, 明显降低红细胞中脂质过氧化物 (MDA) 含量, 同时降低血浆中MDA含量。红景天水煎剂是通过提高老化相关酶RBC-SOD活性和GSH-Px活力, 降低分解代谢产物MDA含量, 清除体内自由基, 避免过氧化脂质对细胞结构和功能的破坏, 增强红细胞和血浆的抗氧化性, 保护红细胞, 对延缓细胞膜老化, 保护细胞膜的结构和功能提供有效途径。

参考文献

[1]江苏新医学院编.中药大辞典 (上册) [M].上海:上海人民出版社, 1977, 391

[2]周王兰, 徐瑞兴.中药抗氧化性能的研究[J].中国中药杂志, 1992, 17 (6) :368-369

[3]徐叔云, 卞如濂, 陈修主编.药理实验方法学[M].第2版, 北京:人民卫生出版社, 1994, 165

[4]杨中林, 付启风, 李晓毛.炮制甘草对免疫功能的影响[J].中药材, 1991, 14 (2) :29

[5]丁克祥, 钟水先, 姚树人, 等.微量指血超氧化物歧化酶快速测定法的研究[J].老年学杂志, 1987, 7 (2) :42

衰老小鼠 篇6

本试验以牦牛胎盘为原料, 提取胎盘肽, 研究其对衰老小鼠部分组织中超氧化物歧化酶 (SOD) 活性和丙二醛 (MDA) 含量的影响, 探讨其抗衰老的作用机制。

1 材料与方法

1.1 胎盘来源

自然分娩排出的牦牛胎盘, 采自青海省大通种牛场。

1.2 牦牛胎盘肽的制备

将冷冻的胎盘常温解冻, 洗净血液后用生理盐水冲洗胎盘, 取牦牛胎盘的子叶去除血管和筋膜, 将其剪碎 (1.0~1.5 cm3) , 于-20℃冻融3次;用高速组织捣碎匀浆机以12 000 r/min离心3 min, 共离心10次;再用高速冷冻离心机以8 000 r/min离心20 min;取上清液用0.45μm的滤器进行微滤, 以除去不溶物质。

1.3 药品

D-半乳糖 (批号为080711) , 上海蓝季科技发展有限公司生产。

1.4 试验动物分组及处理

将30只健康小鼠 (由青海省实验动物中心提供) 适应性饲养3 d, 称量体重为18~22 g, 随机分为药物组、阳性对照组和阴性对照组, 每组10只。药物组小鼠每日腹腔注射胎盘肽0.2 m L及颈背部皮下注射D-半乳糖0.2 m L, 阳性对照组小鼠每日颈背部皮下注射D-半乳糖0.2 m L, 阴性对照组小鼠每日腹腔注射生理盐水0.2 m L, 注射均按照无菌操作进行, 持续15 d后处死小鼠, 取心肌、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏备用。

1.5 主要试剂

SOD试剂盒 (批号为130410) 、MDA试剂盒 (批号为130409) 、蛋白定量测试盒 (批号为130403) , 均由南京建成生物工程研究所提供。

1.6 组织匀浆的制备

取小鼠的心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏各0.3 g, 制成10%组织匀浆, 备用。

1.7 SOD活性和MDA含量的测定

按照相应试剂盒说明书分别测定衰老小鼠心肌、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中SOD活性和MDA含量。

1.8 统计学分析

采用SPSS统计学软件对试验数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 牦牛胎盘肽对衰老小鼠体重的影响

给药前称取各组小鼠体重, 15 d后再称取各组小鼠体重, 给药前后各组小鼠体重的变化情况见表1。

g

注:同列数据肩标字母相同表示差异不显著 (P>0.05) , 字母不同表示差异显著 (P<0.05) 。

由表1可知, 给药后各组小鼠体重均增加, 且差异显著 (P<0.05) 。

2.2 牦牛胎盘肽对衰老小鼠部分组织中SOD活性的影响 (结果见表2)

U·mg-1

注:同列数据肩标字母相同表示差异不显著 (P>0.05) , 字母不同表示差异显著 (P<0.05) 。

由表2可知, 药物组与阳性对照组相比, 衰老小鼠心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏SOD活性均显著增强 (P<0.05) 。

2.3 牦牛胎盘肽对衰老小鼠部分组织中MDA含量的影响 (结果见表3)

由表3可知, 药物组与阳性对照相比, 衰老小鼠心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏MDA含量均减少, 其中心肌、肝脏、脾脏、肾脏差异显著 (P<0.05) 。

nmol·mg-1

注:同列数据肩标字母相同表示差异不显著 (P>0.05) , 字母不同表示差异显著 (P<0.05) 。

3 讨论

衰老是生物体在生命周期中随着年龄的增长而发生的全身组织、器官功能减退和稳态下降的过程。随着衰老的发生, 动物表现为生产能力下降, 抵抗力下降, 血液中一些酶的活性降低[5]。研究表明, 随着年龄的增长, 机体内SOD的活性降低, 清除超氧自由基的能力逐渐下降。动物体内超氧自由基与脂类过氧化物又发生一系列的反应, 最终产物是MDA, 动物体内MDA含量不断增加, 又会加速机体的衰老。D-半乳糖衰老模型是目前较常用的一种人工催老模型, 具有衰老变化明显、模型稳定的特点。D-半乳糖造成衰老的原因是, 机体产生大量超氧自由基, 降低机体抗氧化能力, 脂质水平增加从而引起亚急性衰老[6]。在衰老机制研究中, 超氧自由基学说已受到广泛关注, 在动物衰老过程中, 体内超氧自由基含量不断增多、机体自身的抗氧化系统活性降低是机体衰老的主要原因之一[7,8]。

本研究发现, 药物组与阳性对照组相比, 衰老小鼠心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏SOD活性均增强 (P<0.05) ;而衰老小鼠心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏MDA含量均减少, 其中心肌、肝脏、脾脏、肾脏差异显著 (P<0.05) 。表明牦牛胎盘肽能够提高衰老小鼠部分组织中SOD活性, 而SOD活性升高能够减轻组织细胞过氧化损伤, 降低脂类过氧化物的形成和分解过多的过氧化物, MDA含量降低, 从而具有一定的抗衰老作用。

参考文献

[1]刘月新, 李勋楚, 段茂芳, 等.一种新的免疫调节剂——胎盘因子的制备与研究[J].中国免疫学杂志, 1985, 1 (5) :51-54.

[2]丰慧根.胎盘免疫调节肽对免疫抑制状态小鼠的免疫调节作用[J].新乡医学院学报, 1995, 12 (2) :134-137.

[3]丰慧根, 任太芳, 韩金红, 等.胎盘免疫调节肽联合化疗药物抗肿瘤作用的研究[J].中国生化药物杂志, 1999, 20 (3) :129-131.

[4]王善辉, 葛利江.山羊胎盘肽对幼犬免疫功能和抗氧化功能的影响[J].西南农业学报, 2007, 20 (1) :123-127.

[5]HARMAN D.Free radical T heory of aging:free radicals in biology (Vol.15) [M].New York:Academic Press, 1982.

[6]崔旭, 李文彬, 张炳烈, 等.D-半乳糖对神经元和成纤维细胞拟老化作用的实验研究[J].中国应用生理学杂志, 1997, 13 (2) :131-133.

[7]李文楚, 章羽, 陈芳艳.超氧化物歧化酶研究及应用概况[J].广东蚕业, 2008, 24 (1) :45-49.

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