放射免疫法测定（精选7篇）
放射免疫法测定 篇1
随着计算机水平的发展以及医学检验技术水平的不断提高, 医学检验已经从原本的手工操作发展为信息化、自动化以及标准化操作[1]。医学检验的手段以及方法有很多, 怎样选取合适的技术做相应的检测, 是检验者必须要解决的问题。本文主要对比观察全自动化发光免疫分析与放射免疫法测定血清促甲状腺激素含量, 评价与分析两种检测方法, 具体分析如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料:
选取从2012年7月至2013年7月收治的52例门诊患者, 其中有41例女性患者, 11例男性患者, 患者的年龄在18~64岁, 平均为 (37.23±7.45) 岁。
1.2 方法:
采用天津生物技术公司提供放射免疫法试剂, 使用Gambytcr 10探头γ计数器测量仪;采用德国公司提供全自动化发光免疫分析法的系统仪器, Advia centaur XP测量仪[2]。取2 m L的静脉空腹血清, 以4000 r/min的速度进行4 min的离心, 将血清分离, 然后将其放置到零下25℃环境中保存, 两种测定促甲状腺激素方法需要在20 d之内完成, 评价与分析其健全性、相关性、准确性以及精确性等, 检测要根据说明书的操作要求严格进行。二者的方法学采用健全性、相关性、准确性以及精确度等指标进行评价。批内变异系数为5%, 批间变异系数为10%, 回收概率在90%~110%, 在等倍稀释不同浓度的血清以后, 采取相同方式对两组检测方式平行线进行分析。
1.3 统计学分析:
数据的统计与分析采用SPSS15.0软件, 相关性的分析采用Pearson, P<0.05, 其差异有统计学意义。
2 结果
放射免疫法与全自动化发光免疫分析法测定与稀释以后的标准曲线以及反应曲线基本能保持平行, 二者的健全性比较好。采取放射免疫法与全自动化发光免疫分析对52例患者的血清进行促甲状腺激素含量的测定, 二者之间呈现为正相关性, P<0.01, 其差异有统计学意义。在已知的低、中、高浓度中分别加入待测的血清, 采取相同的方式进行测定。两种测定方法回收概率见表1。
采取放射免疫法与全自动化发光免疫分析法对促甲状腺激素质量做重复测定, 对血清进行控制, 并将批内变异系数与批间变异系数计算出来。两种检测方式精确度要同临床检验质量标准相符合。两种方法的批内变异系数与批间变异系数对比见表2。
3 讨论
通常情况下垂体前叶能分泌出促甲状腺激素, 这种激素属于糖蛋白类激素, 能对甲状腺代谢起到一定的促进作用, 其相对分子的质量主要是28000, 要想准确的对甲状腺疾病进行诊断, 需要检测患者血清之中的促甲状腺激素水平, 这是对甲状腺功能进行判定的重要指标[3]。身体血清中的游离甲状腺素以及游离三碘甲状腺原氨酸会对促甲状腺激素产生一定的反馈抑制, 属于负反馈调节系统, 比较典型。在本组研究中, 主要采取全自动化发光免疫分析法, 固相载体主要为链霉亲和素, 发光底物为Lumi-phos503。在受到碱性磷酸酶的影响以后, 磷酸酯基会产生水解, 将一个磷酸基脱去, 获取其中一个比较稳定的AMPD中间体, 在这个中间体的分子之内, 电子会发生转移裂解, 转变为一分子的间气苯甲酸甲酯阴离子以及一份子的金刚烷酮, 在转变为基态时, 会产生光子大约为470 nm, 并且呈现为维持发光反应[4,5]。放射免疫法为体外标记, 是传统的免疫分析方法, 这种检测方法比较成熟、所需费用较低、有着广泛的试剂、不需要太高的实验条件, 适用于基层医院。目前, 是进行新物质研究的重要方法, 并且补充了全自动化发光免疫分析法的一些不足, 尤其是开发以后没有检测的一些项目或者是没有开发的检测项目。全自动化发光免疫分析法属于级联放大体系的ALP-αMPPD系统, 灵敏并且稳定, 同时持续的发光图谱比较稳定, 能使多次计数所求得的平均值的得到满足, 这能在一定程度上保证计算结果的正确性[6]。本组研究结果显示, 在健全性、准确性以及精密度方面, 全自动化发光免疫分析法明显优于放射免疫法。此外, 全自动化发光免疫分析法的操作程序智能化, 具有较高的全自动化程度, 操作灵活, 能使工作效率得到显著提高, 适用于标本检测量比较大的医疗机构或者是规模较大的医院。通过本文研究分析可以看出, 两种检测方法的结果具有较好的相关性, 精密度以及准确性都比较高, 对于临床需求都能满足, 要根据实际情况, 选取相应的检测方法, 在很长一段时间之内两种检测方法都是以体外标记为主, 能够互相补充。
摘要：目的 全自动化发光免疫分析与放射免疫法测定血清促甲状腺激素的对比观察。方法 选取从2012年7月至2013年7月收治的52例门诊患者, 取静脉空腹血清, 分离血清, 测定促甲状腺激素, 要根据说明书的操作要求严格进行, 对比两种方法的批内变异系数、批间变异系数以及回收率。结果 采取放射免疫法与全自动化发光免疫分析对52例患者的血清进行促甲状腺激素含量的测定, 二者之间呈现为正相关性 (P<0.01) 。放射免疫法与全自动化发光免疫分析法测定与稀释以后的标准曲线以及反应曲线基本能保持平行, 二者的健全性比较好。结论 两种检测方法的结果具有较好的相关性, 精密度以及准确性都比较高, 对于临床需求都能满足, 要根据实际情况, 选取相应的检测方法, 在很长一段时间之内两种检测方法都是以体外标记为主, 同时能够互相补充。
关键词：全自动化发光免疫分析,放射免疫法,血清促甲状腺激素
参考文献
[1]赵静峰, 罗天敏, 王攀.全自动微粒子化学发光免疫分析法与放射免疫分析法测定血清促甲状腺激素的对比分析[J].实用心脑肺血管病杂志, 2013, 23 (9) :1100-1102.
[2]王攀, 李雪, 喻荣华, 等.全自动化发光免疫分析与放射免疫法测定血清促甲状腺激素的对比分析[J].实用医技杂志, 2013, 9 (10) :1133-1135.
[3]李红丽.不同甲状腺功能状态下游离三碘甲状腺原氨酸与游离甲状腺素和超灵敏促甲状腺素检测的意义研究[J].临床合理用药杂志, 2013, 25 (12) :1156-1158.
[4]周黎, 陈捷, 吴坚敏.血清甘胆酸、促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体和总胆汁酸检测在妊娠期肝内胆汁淤积症的临床意义及优生意义[J].中国优生与遗传杂志, 2013, 16 (2) :1153-1155.
[5]李丽波, 刘一兵, 官国英, 等.人促甲状腺激素酶促化学发光免疫分析方法的建立[J].原子能科学技术, 2013, 12 (10) :1111-1113.
[6]马红霞, 周运恒, 杨蔺, 等.ELISA法和电化学发光免疫法检测血清HBs Ag结果比较分析[J].检验医学, 2010, 23 (6) :170-172.
放射免疫法测定 篇2
1 资料与方法
1.1 临床资料
选取2009年1月至2010年3月入湘潭县人民医院糖尿病专科治疗的50例2型糖尿病患者组成病例组, 其中男性患者31例, 女性患者19例, 年龄39～72岁, 平均年龄 (52.5±4.9) 岁, 空腹血糖在10～16mmol/L;选取2010年1月至2010年3月入湘潭县人民医院体检的健康人30例组成对照组, 男性患者18例, 女性患者12例, 年龄33～68岁, 平均年龄 (51.2±5.4) 岁, 本组30例均为无肝、肾疾病、糖尿病病史的体检健康者。
1.2 方法
测定方法:全部受检者都未进行胰岛素治疗, 在进行放射免疫分析检测前1d的晚上禁食, 检测当天清晨空腹采取静脉血, 并于当天停止服用所有药物。然后, 食用1个重量为100g的馒头 (与75g葡萄糖相当) , 分别在餐后1h、2h、3h抽血一次, 运用放射免疫分析检测胰岛素及C-肽含量。此外, 试验仪器选择情况为:选用中国科技大中佳公司生产的全自动GC1200型为γ放射免疫计数器, 选用北京北方生物制品研究所提供的放射免疫分析测定试剂盒, 全部操作均严格依照仪器使用说明书规定进行。
统计学方法:以 (χ—±s) 表示实验统计数据, 统计分析采用SPSS14.0软件进行处理, 以χ2检验进行两组数据的对比研究, 以P<0.05表示有统计学差异。
2 结果
相对于对照组, 病例组患者空腹胰岛素及C-肽较高 (P<0.05) 。对照组患者在餐后1h后出现峰值, 2型糖尿病患者餐后2h后出现峰值, 持续到餐后3h后仍不能达到正常水平。试验过程中, 关于胰岛素释放情况的具体数据如表1所示, 关于C-肽释放情况的具体数据如表2所示。
3 讨论
3.1 胰岛素放射免疫分析概述
Yalow于1960年最早将放射免疫分析用于测定患者血浆中的胰岛素含量。1963年, 我国开始将放射免疫分析应用于患者胰岛素含量的测定[2]。近年来, 伴随放射免疫分析测定患者胰岛素含量的普及运用, 其在糖尿病患者的诊断、分型、指导选择合适治疗方式等方面发挥了重要作用。胰岛素放射免疫分析的基本原理是利用顺序饱和分析法, 使得胰岛素抗体与未标记的胰岛素进行充分性反应, 产生抗原抗体复合物 (Ag-Ab) 。对于剩下的没有结合的胰岛素抗体, 进一步与标记的胰岛素进行充分性结合, 产生抗原抗体复合物。最后, 以第二抗体组织分离结合与游离的标记胰岛素, 对沉淀部分的CPM数加以测定, 进而计算得出血浆中胰岛素的实际含量。
3.2 C-肽放射免疫分析概述
胰岛素原 (Proinsulin) 是单链多肽的, 并且其中存在一条由31个氨基酸残基构成的联接肽, 联接胰岛素的A、B链, 这就是我们所研究的C-肽 (C-Peptide, C-P) 。胰岛素原在羧肽酶、蛋白酶的作用下能生成一个分子的C-肽和一个分子的胰岛素, 所以可以将胰岛素原看作胰岛素、C-肽的前身物质。当前, 临床上还没证实C-肽具有生物活性, 但是已证实胰岛素、C-肽是按照等克分子比例关系由胰岛β细胞释放至外周的血液循环[3]。胰岛素抗体和C-肽之间不存在交叉免疫反应, 临床上应用治疗的胰岛素药物同样不含C-肽, 但鉴于C-肽具有抗原性, 所以其能够用免疫学方法来检测。C-肽放射免疫检测在国外建立于20世纪60年代末, 国内近些年来也正在广泛应用于临床。运用放射免疫分析方法测定血浆中的C-肽含量具有重要的临床价值, 不仅能够真实反映那些接受外源性胰岛素治疗的糖尿病患者胰岛β细胞的分泌功能实际情况, 而且能够为糖尿病患者临床分型、选择治疗方案提供了重要依据。
3.3 放射免疫分析测定胰岛素及C-肽的临床价值
测定胰岛素和C-肽含量是糖尿病患者在检查过程需要了解的主要指标, 通过分析该指标的测定结果能够判断患者胰岛素合成及分泌功能[4]。本研究对病例组50例2型糖尿病患者组织了餐后试验, 并在试验过程中运用放射性免疫分析的方法对胰岛素和C-肽进行测定, 统计结果显示病例组患者的空腹胰岛素、C-肽水平相当于对照组稍高, 而餐后血糖则明显高于对照组, 证明患者空腹情况下的胰岛素分泌基本正常, 但是体内胰岛素对抗激素或者胰岛素抵抗会增加。已有文献报道证实, 2型糖尿病患者在空腹时皮质醇和血清生长激素会增加, 致使患者空腹时血糖上升。虽然患者餐后胰岛素含量较餐前会增加, 但是相当于健康人还是较低。因此, 建议临床医生在葡萄糖耐量试验中, 联合胰岛素和C-肽放射免疫分析结果, 能够确定地实现糖尿病分型的目的, 对2型糖尿病患者的进一步治疗及预后提供可靠依据。
综上所述, 放射免疫分析测定胰岛素及C-肽具有较高的2型糖尿病临床诊断价值, 可以为糖尿病的准确分型、进一步治疗及改善预后情况提供客观依据。
参考文献
[1]谢玮, 赵枰, 陶国华.化学发光免疫分析测定胰岛素及C-肽在2型糖尿病诊断的临床应用[J].标记免疫分析与临床, 2009, 16 (5) :283-284.
[2]黄沛隆.血清C-肽和胰岛素测定对2型糖尿病的诊断价值[J].中国基层医药, 2006, 13 (4) :667-667.
[3]邢淑清, 刘红, 李瑞新.血清C-肽测定在2型糖尿病诊断中的临床意义[J].中国临床实用医学, 2009, 3 (12) :73-74.
放射免疫法测定 篇3
腹泻性贝毒素(Diarrhetic Shellfish Poisons,DSP)是一种脂溶性毒素，被人食用后产生以腹泻为特征的中毒效应[2]。目前已发现的腹泻性贝类毒素大致可分为3类：软海绵酸(Okadaic acid,OA)及其衍生物鳍藻毒素(DTX)、大环内脂扇贝毒素(PTX)和磺化毒素(YTX)及其衍生物。毒素的检测分析方法主要有生物分析法、细胞毒性分析、免疫分析和化学分离法[3]。免疫分析包括放射免疫分析(RIA)和酶联免疫分析(ELISA)，具有选择性高、灵敏度好、专一性强的特点。
试验选择酶联免疫分析方法，通过比较2010—2012年海洲湾海域赤潮监控区、增养殖区、趋势性监测区牡蛎腹泻性毒素检测结果，探讨酶联免疫法在贝毒检测中的实际效果，以及贝毒与有毒赤潮的相关性应用。
1 材料与方法
1.1 材料
样品采集于2010、2011、2012年海洲湾海域赤潮监控区、增养殖区、趋势性监测区的新鲜牡蛎。经洗净、沥干、去壳后，取可食部分用高速匀浆机制成均质物，备用。
腹泻性贝毒标准品为伊普瑞斯科技有限公司E-OA-C100型。冈田软海绵酸检测试剂盒为荷兰EURO-PROXIMA公司产品，试剂盒为96微孔板，标准溶液浓度分别为0,0.2,0.5,1.0,2.0,5.0,10.0ng/mL。实验用水为超纯水。甲醇为美国天地公司色谱纯(100%)。
检测酶标仪为美国伯乐公司Bio-rad680型。
1.2 方法
称取1.0 g检测样品均质物，加入1.0 mL超纯水，涡旋混合1 min，加甲醇2.0 mL，涡旋混合1min,2000 r/min离心10 min。收集上清液，0.45μm滤膜过滤。滤液用样品稀释缓冲液50倍稀释，充分混匀后吸取50μL为样品检测液[4]。
1.3 酶联免疫分析检测
微孔板从上到下依次设置为A～H,A为空白，B～H为标准溶液系列浓度。A孔加零标准溶液100μL,B～H孔依次加标准溶液50μL，浓度分别为0,0.2,0.5,1.0,2.0,5.0,10.0 ng/mL，分别加入酶结合物溶液25μL和抗体溶液25μL。其余各孔分别为经过前处理的牡蛎检测样品。所有标准溶液和检测样品均同时设平行组2个。
薄膜封板，摇板1 min，室温20～25℃，暗处温育30 min。弃去孔中的液体，用洗涤缓冲液冲洗板孔，吸水纸上拍干，重复3次。各孔分别加底物溶液100μL，室温20～25℃，暗处温育15 min。再加入终止液100μL。以空气为空白，酶标仪450 nm处读取吸光值。
1.4 标准曲线及样品浓度的计算
将标准品和样品的吸光值减去空白值，结果除以零标准吸光值，再乘以100。以得到的系列比值为Y轴，X轴上的浓度对数构建标准曲线，在0.2～10.0 ng/mL范围成线性。
利用试剂盒公司提供的数据分析软件绘制出标准曲线，并乘以稀释倍数计算出各个样品的腹泻性毒素浓度。
1.5 加标回收
检测样品中分别添加浓度为1.0,3.0和5.0μg/kg腹泻性贝毒标样。按照样品的前处理方法同时进行前处理，测定腹泻性贝毒的含量，计算回收率。每隔10 d，进行3个批次样品的处理和测定，并计算回收率。
2 结果
2.1 标准曲线
标准曲线直线方程y=a+bln(x)，其中a=64.7,b=-20.28。相关系数R2=0.9914(图1)。
2.2 养殖牡蛎腹泻性毒素的检测结果
2010年赤潮监控区、增养殖区和趋势性监测区牡蛎腹泻性毒素含量分别为20.9～74.5μg/kg,21.3～34.8μg/kg和30.1～39.8μg/kg，以趋势性监测区为最高。3个不同监测区的检出率分别为83.3%，83.3%和80.0%，9月份检出率高于8月份(表1)。
2011年赤潮监控区、增养殖区和趋势性监测区的牡蛎腹泻性毒素含量分别为25.3～50.6μg/kg,20.6～52.5μg/kg和30.1～39.8μg/kg，以赤潮监控区为最高。3个不同检测区的检出率分别为100.0%，50.0%和50.0%，8月份的检出率高于5月份(表2)。
2012年赤潮监控区牡蛎腹泻性毒素含量为15.8～35.6μg/kg，检出率为66.7%。增养殖区牡蛎腹泻性毒素含量未检出(表3)。
2.3 加标回收率比较
腹泻性贝毒以1.0,3.0和5.0μg/kg在检测样品添加后，平均回收率分别达到88.0%，86.7%和88.6%。批内变异系数分别为1.60%～2.46%，1.81%～2.66%和1.44%～4.60%。批间变异系数分别为3.38%，3.08%和3.98%。
注:(1)2012年趋势性监测区未进行检测。(2)“未检出”为测定含量低于10μg/kg。
3 讨论
赤潮是一种海洋灾害，已引起沿海国家的高度重视，严格控制污水和污染物的入海量是比较有效的防治措施。赤潮对生物资源的影响已成为联合国有关组织所关注的全球性问题之一。在防范赤潮工作方面，建立了赤潮防治和监测系统，对有迹象出现赤潮的海区，进行连续的跟踪监测，及时掌握引发赤潮环境因素的动向，为预报赤潮的发生提供信息，对发生赤潮的海区采取必要的防范措施。
2010—2012年，在海洲湾海域赤潮监控区、增养殖区和趋势性监测区共检测42个养殖牡蛎样品的腹泻性毒素。腹泻性毒素含量由2010年的20.9～74.5μg/kg，逐渐降低到2011年至20.3～52.5μg/kg和2012年的15.8～35.6μg/kg。连续3年养殖牡蛎检测样品中腹泻性毒素平均检出率分别为82.4%、66.7%和57.1%。从养殖牡蛎检测样品中腹泻性毒素含量和检测率逐渐降低的情况分析，加强海洋环境保护，控制沿海废水废物的入海量，特别要控制氮、磷和其他有机物的排放量，对控制赤潮的发生起到了一定的效果。
应用酶联免疫法检测养殖牡蛎腹泻性贝毒，不仅方法简单，而且分析时间较短。同时进行加标回收率的比较，平均回收率达到88.0%，86.7%和88.6%。批内变异系数达到1.60%～2.46%，1.81%～2.66%和1.44%～4.60%。批间变异系数为3.38%，3.08%和3.98%。酶联免疫法可以应用于监测腹泻性贝毒。
参考文献
[1]丁君.赤潮毒素中腹泻性贝毒和麻痹性贝毒的研究进展[J].大连水产学院学报,2001,16(3):212-218
[2]华泽爱.赤潮毒素的成分及其危害[J].海洋与海岸带开发.1992,9(2):53-59
[3]杨维东,彭嘉春,刘洁生,等.腹泻性贝毒研究现状[J].海洋科学,2005,5:66-72
放射免疫法测定 篇4
胶体金免疫层析技术(Gold immunochromatographic assay,GICA)是近年来发展迅速的一项免疫标记技术,它以抗原抗体特异性结合为基础、大孔径微孔滤膜为载体、胶体金为固相标记物来定性检测样本中的待测物质[6]。因其快速、便捷,因此继氯霉素残留微生物检测法[7,8]、理化分析法(高效液相色谱法[9]、气相色谱法[10]、液相色谱-串联质谱法[11]等)和酶联免疫吸附法[12,13]后,GICA分析法逐渐被广泛应用于氯霉素检测中。本文对胶体金试纸条检测动物组织中氯霉素的残留进行了研究,为氯霉素残留监控提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
猪肉、鸡肉、鱼、虾(市售);氯霉素快速检测试纸(北京勤邦生物技术有限公司),其中包括冻干有氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂、试纸条和样品复溶液;氯霉素标准品(美国Sigma公司),纯度≥99%;乙酸乙酯、乙腈、正己烷(北京化学试剂公司),分析纯。
8010S匀浆机(上海斯伯明仪器设备有限公司);2000SBL电子天平(美国Setra公司);QL-901漩涡混合器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司);Anke GL-20G-Ⅱ高速离心机(上海安亭科学仪器有限公司);DSY-Ⅲ氮吹仪(北京金科精华苑科技有限公司);微量移液器(美国Thermo公司);Acquity液相色谱串联质谱仪配有电喷雾离子源(美国Waters公司)。
1.2 方法
1.2.1 样品前处理
取已去脂肪的组织样品10 000 r/min均质1 min;称取(5±0.05)g均质样品至50 m L聚苯乙烯离心管中,加入8 m L乙酸乙酯,漩涡混合器涡动2 min,室温(20～25℃)4 000 r/min离心5 min;移取全部上层有机相至10 m L干净的玻璃试管中,于50～60℃水浴氮气流下吹干;加入1mL正己烷,用漩涡混合器涡动1 min,再加1 m L样品复溶液,用漩涡混合器涡动30 s,室温(20～25℃)4 000 r/min离心5 min;除去上层有机相,取下层无机相用于分析。
1.2.2 检测步骤
将原包装预先平衡至室温,打开后取出所需数目的微孔试剂和试纸条,并做好标记;用微量移液器移取200 L待检组织提取液于微孔中,缓慢抽吸且充分与微孔中试剂混匀,室温(20～25℃)孵育5min;将标记好的试纸条插入微孔中-印有“MAX”线端朝下,使之充分浸入溶液中;室温(20～25℃)孵育10 min后,取出试纸条,根据检测线和质控线是否出现红色条带即可判定结果。检测结果示意图及其说明见图1。
注:(1)阴性(-):T线显色强于C线或与C线无明显差异;(2)阳性(+):T线显色明显弱于C线显色;(3)无效:未出现C线。
2 结果与分析
2.1 样本检测限试验
采用1.2.1所述的样品前处理方法时,在空白样品中分别添加氯霉素标准品至终浓度为0、0.1、0.2、0.3、0.6 g/kg。取三批试纸条进行检测,每批测定5个重复,结果见表1,部分试验结果见图2。
由表1可知,氯霉素快速检测试纸条测定猪肉、鸡肉、鱼、虾样品中氯霉素含量的检测限为0.3 g/kg。
注:从左到右氯霉素添加浓度依次为0、0.1、0.2、0.3、0.6 g/kg。
2.2 假阳性率、假阴性率试验
取阴性猪肉、鸡肉、鱼、虾样品及其对应的阳性样品(氯霉素添加浓度为0.3 g/kg)各20份,按1.2.1所述的方法将样品前处理后用三批试纸条分别进行检测。结果发现,阴性样本的检测结果均为阴性,阳性样本的检测结果均为阳性,可见试纸条的阴阳性符合率达到100%,假阳性率、假阴性率都为0。
2.3 特异性试验
将链霉素、青霉素、四环素、恩诺沙星、磺胺二甲基嘧啶5种抗生素溶于pH7.2、0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液,配成浓度为500 g/L的溶液,按1.2.2所述步骤用试纸条进行检测。结果发现,5种抗生素的C线和T线均显色,显示阴性结果,表明本试纸条对其他抗生素无交叉反应,具有较好的特异性。
2.4 与仪器方法的比较
用试纸条方法和国标方法《GB/T 22338-2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》(液相色谱-串联质谱法对氯霉素的检出限为0.1 g/kg)[14],分别对空白猪肉、鸡肉、鱼、虾样本及添加不同浓度组氯霉素药物(浓度分别为0、0.05、0.5、1.0)的加标样本进行测定,每组两个平行,结果见表2。
由表2可知,氯霉素添加浓度为0、0.05 g/kg时,试纸条检测结果均为阴性(-),LC-MS/MS法检测结果未检出,即低于仪器方法检测限;添加浓度为0.5、1.0 g/kg时,试纸条和LC-MS/MS法检测结果均为阳性,可见两种方法的测定结果基本一致,符合度达到100%,该试纸条可用于动物组织中氯霉素残留的快速筛选。
3 结论
本研究采用胶体金法对动物组织中的氯霉素残留进行检测,试纸条对猪肉、鸡肉、鱼、虾样本的最低检测限为0.3 g/kg,检测阴、阳性样本时,假阳性率和假阴性率皆为0;对其他抗生素无交叉反应,特异性较好;在测定氯霉素含量为0、0.05、0.5、1.0 g/kg的加标样本时,检测结果与液相色谱-串联质谱法一致,符合度达到100%。
本研究所使用的胶体金试纸条将胶体金标记的抗体直接冻干在微孔试剂中,在检测过程中,能够使金标抗体与待检样品液充分接触,充分反应,从而减少误差,增加整个体系的反应灵敏度,易于对样品中的药物残留情况进行分析。尽管结构的改进提高了试纸条的灵敏度,但由于通过颜色判断结果比较主观,可能出现假阳性问题,因此对于阳性样本,还需要用LC-MS/MS等仪器方法进行确证。
摘要：应用胶体金免疫层析法对动物组织中的氯霉素残留进行检测,研究该方法的灵敏度、假阳性率、假阴性率及特异性。结果表明,用胶体金免疫层析法测定猪肉、鸡肉、鱼、虾中的氯霉素,检测限均为0.3g/kg,假阳性率和假阴性率皆为0%;方法的特异性较好,对其他抗生素无交叉反应;检测加标样本的结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。可见,该方法简便、快速、准确、稳定,可作为动物组织中氯霉素残留现场快速检测的一种有效手段。
放射免疫法测定 篇5
1资料与方法
1.1一般资料:随机选取2014年9月至2014年12月2120例于我院自愿接受婚检的人员,包括男性1060例,女性1060例;年龄20~46岁,平均(27.8±1.2)岁。采集所有患者的空腹静脉血3~4 m L,严格进行无菌操作,在适宜温度下保存血液样本,以备检测研究。
1.2检测方法与判断标准:分别采用酶联免疫法与金标法对患者的血液样本进行检测。
酶联免疫法:采用上海科华生物工程有限公司生产的酶联免疫试剂与PW-960酶标洗板机与TECAN酶标仪等相关仪器,采用酶标仪判断检测结果,检测标准是波长(450 nm的检测波长,630 nm的参考波长)A值,如果A值<1,表示检测的血样呈阴性,若A值≥1,表示检测的血样呈阳性。
金标法:使用艾博生物医药有限公司生产的金标法试剂,将80 μL的血清加入其中,放置15~20 min,通过肉眼观察判断结果。假如只有1条红线出现在试纸上,则判定血样检测的结果为阴性,若有2条红线出现于试纸上,就判定血样检测的结果为阳性,认真记录出现红线的时间。
如果患者的血样经过酶联免疫法和金标法初次检验后均呈阳性, 需要进行二次确认实验,若血样经再次检测后仍然呈阳性,需要将其运送至疾病控制中心,检测其免疫印迹。本研究采用的均为合格试剂和仪器,而且使用时间在有效期内,全部仪器均在校准精度后使用, 按照相应的操作规程执行各仪器,以防检测结果因实验仪器的精度而受到影响。
1.3统计学方法:本次研究采用统计学软件SPSS13.0对得到的数据进行分析与处理,采用百分比的方式表示计数资料,并用χ2检验其组间比较。如果P<0.05,说明差异显著,具有统计学意义。
2结果
经过检测发现,酶联免疫法与金标法对患者血样进行二次复检后得到的阳性率分别为0.141%和0.188%,经过免疫印记检测,最终共2例血液样本被确诊为阳性,假阳性率分别为0.047%和0.097%,两种方法检测得到的阳性率及假阳性率差异显著,P<0.05,具有统计学意义。见表1。
3讨论
近几年,艾滋病的发病率逐渐上升,已经逐渐成为威胁人类健康的主要疾病之一。由于该病尚无有效的治疗方法,所以必须重视预防,加强检测,尽早发现并控制疾病[2]。
本次研究结果显示,酶联免疫法与金标法对患者血样进行二次确诊检测后得到的阳性率分别为0.141%和0.188%,经过免疫印记检测, 最终共2例血液样本被确诊为阳性,所以两种方法检测得到的阳性率差异显著,P<0.05,具有统计学意义。说明酶联免疫法的假阳性率低,准确性高。但是在实际检测过程中,该方法对检测仪器的精密度要求较高,而且其灵敏度会受到操作人员、操作过程、仪器使用环境等多方面因素的影响。与此同时,仪器操作人员应当接受过相关的培训,具备一定的技术水平与专业知识,严格按照说明执行操作可行性较低。 而金标法作为快速诊断技术,最近几年逐渐得到了普及应用,在检测抗-HIV时,无需使用任何仪器,仅采用一种试剂即可,而且该方法经过不断改进与完善,目前已经体现出多种优点。在检测血液中HIV抗体时,酶联免疫法与金标法的实验步骤、实验过程、原理、操作均不尽相同,前者的假阳性率低,结果比较准确,但是后者具有操作简单、反应迅速、花费时间短、灵敏度高等优势。特别是在患者病情紧急的情况下,采用金标法能够在短时间内检测患者是否有患艾滋病的可能性,避免传播疾病,也不会使治疗时机被延误,有助于医师全面了解病情[1]。
综上所述,在测定抗-HIV时,虽然金标法的假阳性率高于酶联免疫法,但是其操作简单,灵敏度高,安全性及可行性均较高,所有在临床检测中应根据具体情况选取适合的检测方法,或联合使用两种方法,提高准确率。
参考文献
[1]王辉,陈荣美.金标法与酶联免疫法在抗-HIV测定中的应用比较[J].中国社区医师,2014,19(30):126-128.
放射免疫法测定 篇6
黄曲霉素, 是一种毒性极强的剧毒物质, 它的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用, 严重时可导致肝癌甚至死亡。经常在玉米, 花生, 棉花种子, 一些干果中常能检测到。它们在紫外线照射下能产生荧光, 根据荧光颜色不同, 将其分为B族和G族两大类及其衍生物。会污染粮油食品、动植物食品等;如花生、玉米、大米、小麦、豆类、坚果类, 其中以花生和玉米污染最严重。月饼作为我国端午节的传统食品, 深受光大群众的深爱, 在生产过程中所用的原料均容易被污染。因此, 本文采用免疫亲和柱高效液相色谱法对月饼中的黄曲霉素B1、B2、G1、G2四种进行了检测。
材料与方法
材料与试剂
甲醇为色谱级。迪马公司。
实验用水:符合一级水标准。
黄曲霉素 (混标) Trilogy Analytical Laboratory 5.0μg/ml
包括:黄曲霉素B1 2.0μg/ml、黄曲霉素G1 2.0μg/ml、黄曲霉素B2 0.5μg/ml、黄曲霉素G2 0.5μg/ml。各单标均为Trilogy Analytical Laboratory
标准储备液:吸取上述混标溶液1ml, 加甲醇稀释成200ng/ml的溶液备用, 4℃冰箱避光保存, 临用前稀释成不同浓度的溶液。
衍生溶液:0.05%碘溶液, 称取0.5g碘, 加甲醇100ml溶解, 用水稀释至1000ml, 过0.45μm滤膜备用。
免疫亲和柱:黄曲霉素混合柱 (3ml) , 北京中检维康。
仪器与设备
LC-20A高效液相色谱仪带荧光检测器及柱后衍生装置岛津公司;
BP211D电子天平奥豪斯仪器 (上海) 有限责任公司
方法
标准溶液及供试品溶液的制备
月饼样品溶液制备
准确称取样品25.0g, 加甲醇:水 (70:30) 溶液125ml, 氯化钠5.0g, 8000r/min均质2min, 过滤, 取滤液15.0ml, 加水30.0ml, 摇匀。用玻璃纤维滤纸过滤2次至溶液澄清。量取15.0ml溶液注入免疫亲和柱上, 控制流速为1滴/秒, 全部液体通过亲和柱后, 在通过3ml空气, 取10ml水以1滴/秒的速度通过亲和柱, 再通过3ml空气, 用1.0ml甲醇洗脱, 收集洗脱液上机检测。
标准曲线的制备
移取适量混合标准储备液 (200ng/ml) , 用甲醇稀释成0、0.48、1.04、5.2、10、200ng/ml的标准溶液。
HPLC色谱条件
色谱柱:迪马钻石C18 250*4.65μm;流动相:甲醇:水 (45:55) ;流速:1.0ml/min
激发波长:360nm;发射波长:450nm;衍生条件:衍生温度:70℃, 衍生溶液流速:0.3ml/min。
结果与分析
标准工作曲线的建立
吸取不同浓度系列的混合标准工作液。按照方法仪器条件, 注入气质联用仪, 以峰面积比较进行定量, 作绘制成标准曲线。黄曲霉素B1、B2、B3、B4标准曲线分别为Y=64477.59X+1340.27;Y=6 5 5 5 2.7 2 X+5 8 3.3 9;Y=3 0 0 6 0.1 5 X+9 1 9.1 0;Y=38182.27X+391.81 R=1。相关系数均为1.0。
表明黄曲霉素B2、G2在0.048~20ng/ml范围内;黄曲霉素B1、G1在0.192~80ng/ml范围内呈良好线性关系。
精密度实验
取浓度为1ng/ml的混合标准溶液注入色谱仪器, 连续进样5次, 记录色谱图。黄曲霉素B1、B2、G1、G2峰面积RSD分别为4.3%、3.7%、3.8%、3.4%、
方法检出限
取空白月饼样品25.0g, 加入200ng/ml混合标准溶液0.125ml, 照样品溶液制备, 上机检测, 黄曲霉素B1、B2、G1、G2三组分色谱峰响应与基线噪音比值大于3:1, 即黄曲霉素B1、G1检出限为0.4μg/kg, 黄曲霉素B2、G2检出限为0.1μg/kg。
加标回收率实验
用标准加入回收实验验证方法的准确度, 用平行实验的精密度验证方法的重复性。
取空白月饼样品25.0g, 分别加入200ng/ml混合标准溶液0.125ml、0.25ml、1.6ml照样品溶液制备, 测定结果。黄曲霉素B1回收率为68.66~96.87%, RSD%为0.37~1.89%;黄曲霉素B2回收率为70.69~97.89%, RSD%为0.09~2.45%;黄曲霉素G1回收率为80.05~96.80%, RSD%为6.27~6.73%;黄曲霉素G2回收率为78.07~98.26%, RSD%为0.26~5.22%。
结论
放射免疫法测定 篇7
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2013年1月~2014年1月本院收治的孕妇140例作为研究对象, 孕妇的年龄范围为24~36岁, 平均年龄为 (28.45±1.50) 岁。将140例孕妇按照随机数字表法分为胶体金试纸法组与化学发光免疫学组, 其中胶体金试纸法组孕妇70例, 平均年龄为 (29.60±1.80) 岁;化学发光免疫法组孕妇70例, 平均年龄为 (27.60±2.10) 岁。所选取的患者均取得她们的知情同意, 血脂体检合格, 排除肝肾功能不全的孕妇, 两组孕妇一般资料比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 方法
胶体金试纸法组:将胶体金试纸插入血清中, 使血清的表面位于胶体金试纸MAX的下缘处, 将胶体金试纸在血清中停留10 s后取出放平, 等待5 min后对结果进行观察。结果的判定: (1) 弱阳性:检测线位置的红色反应线与比对照线位置的红色反应线浅; (2) 阳性:检测线位置的红色反应线和对照线位置的红色反应线颜色一致; (3) 强阳性:检测线位置的红色反应线比对照线位置的红黑色反应线颜色深; (4) 阴性:在对照线位置有红色反应线; (5) 无效:无红色反应线出现。
化学发光免疫法组:采用德国拜耳ADVIA Centaur XP全自动发光免疫分析仪和配套试剂, 线性范围为0~1000 IU/L, 正常值为0~10 IU/L, 利用高敏感性的吖啶酯为化学发光标志物, 固相载体为极细的磁性颗粒 (PMP) , 在抗原和抗体发生反应后加入酸和碱, 立即发光, 根据光量子数和对应曲线对待测抗原和抗体的浓度。化学发光免疫法的正常参考范围为<5 IU/L, 阳性≥5 IU/L, 阴性<5 IU/L。
1.3 观察指标
对两组测试方法的检测结果的阴性率和阳性率进行比较。
1.4 统计学方法
统计分析时采用SPSS17.0软件分析, 用χ2检验计数资料, 以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
对两种方法的检测结果进行比较, 化学发光免疫法组中检测阳性人数66例, 胶体金试纸法组阳性人数48例, 化学发光免疫学组阳性率 (94.29%) 明显好于胶体金试纸法组 (68.57%) , 两组比较差异具有统计学意义 (P<0.05) , 见表1。
3 讨论
本研究表明, 化学发光免疫学组阳性率 (94.29%) 明显好于胶体金试纸法组 (68.57%) , 两组比较差异具有统计学意义 (P<0.05) 。人绒毛促性腺激素 (HCG) 是一种糖蛋白激素, 主要是由胎盘合体滋养细胞分泌, 只要妊娠后绒毛生成, 即可在血液循环中检测的人绒毛膜促性腺激素 (HCG) , 对人绒毛促性腺激素 (HCG) 进行早期的准确检测有助于对早期妊娠诊断、流产、异位妊娠和妊娠滋养细胞疾病的诊断, 通过准确的诊断可以及时进行治疗, 避免造成严重的结果, 人绒毛膜促性腺激素 (HCG) 还可以作为孕期的监护观察指标[3]。目前临床上对检测人绒毛膜促性腺激素的常用的方法是胶体金试纸法和化学发光免疫法, 两种方法都有自身的优缺点[4]。胶体金试纸法的操作简单、快速, 且检测价格便宜, 但是检测结果的特异性不高, 只适用于广泛的检测[5]。化学发光免疫法的检测操作虽然不简单, 但是灵敏度高、特异性强, 检测结果的准确率也高[6]。如果根据胶体金试纸法的测定结果再结合临床估计化学发光免疫法对血清稀释倍数的测定, 能够准确的对人绒毛膜促性腺激素 (HCG) 进行准确的检查, 也可用于对绒毛膜癌、恶性葡萄胎的辅助诊断和治疗后随访的观察指标, 更加有利于疾病的诊断和治疗[7,8]。
综上所述, 测定人绒毛膜促性腺激素 (HCG) 采用胶体金试纸法测试方便检测, 易操作, 成本低廉, 只适用于广泛的检测, 但是化学发光免疫学检测法更能准确检测, 且灵敏度高, 能够准确保证检测结果的准确性, 值得在检测中推广应用。
摘要：目的 对胶体金试纸法与化学发光免疫法测定人绒毛膜促性腺激素 (HCG) 的结果进行研究分析。方法 选取2013年1月2014年1月本院收治的孕妇140例作为研究对象, 将孕妇分为胶体金试纸法组与化学发光免疫法组, 每组70例孕妇, 采用不同的方法测定人绒毛膜促性腺激素, 对研究结果进行对比分析。结果 化学发光免疫学组阳性率 (94.29%) 明显好于胶体金试纸法组 (68.57%) , 两组比较差异具有统计学意义 (P<0.05) 。结论 测定人绒毛膜促性腺激素 (HCG) 采用胶体金试纸法测试方便, 易操作, 但是化学发光免疫学检测法更能准确检测, 且灵敏度高, 值得在检测中推广应用。
关键词：胶体金试纸法,化学发光免疫法,人绒毛膜促性腺激素
参考文献
[1]王志贤, 马玲.胶体金试纸法与化学发光免疫法测定HCG的比较.中国实用医刊, 2013, 40 (14) :30-31.
[2]迪力拜尔·阿木提江, 胡达拜尔迪·艾则孜.胶体金试纸法测定结果估算化学发光免疫法血清HCG的初偿.中国中医药咨询, 2010, 2 (29) :27-28.
[3]方春元, 张建祥.胶体金试纸定性检测与血β-HCG定量检测的相关性.实验与检验医学, 2011, 29 (1) :79.
[4]蔡爱玲, 周明莉, 王雪峰, 等.胶体金法和化学发光免疫法联合检测血HCG分析.中国误诊学杂志, 2012, 12 (4) :799.
[5]农建宏.人绒毛膜促性腺激素检测及临床应用研究进展.齐齐哈尔医学院学报, 2010, 31 (23) :3879-3890.
[6]罗裕旋, 何小媚, 胡纪文.化学发光免疫分析法检测血β-HCG中钩带效应分析.标记免疫分析与临床, 2010, 17 (1) :49-50.
[7]王红梅.检测人绒毛膜促性腺激素水平的结果分析与评价.山西医药杂志, 2011, 40 (8) :838-839.