血管黏附分子-1

血管黏附分子-1（精选7篇）

血管黏附分子-1 篇1

糖尿病血管病变最基本的病理改变就是动脉硬化,是糖尿病的慢性并发症之一,包括大血管病变和微血管病变,是糖尿病患者致残、致死的最主要原因。 血管内皮功能的损伤是动脉硬化的早期表现。 动脉硬化是一种炎症疾病。 糖尿病患者呈低度炎症状态,包括超敏C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α 及一些细胞因子的过度表达。 研究表明,细胞间黏附分子-1(ICAM-1) 及血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)的过度表达参与动脉粥样硬化形成的发生和发展[1]。 本研究主要观察三黄片对糖尿病大鼠血管内皮的影响。

1材料与方法

1.1材料与仪器

6周龄, 雄性清洁级SD大鼠40只, 平均体重(220±20)g, 购于河北医科大学实验动物中心( 合格证号:1405034)。 链脲佐菌素(STZ)、柠檬酸钠:美国Sigma公司; 内皮素-1 (ET-1) 及一氧化氮(NO) 试剂盒:武汉博士德生物工程有限公司;兔抗鼠多克隆ICAM-1(货号:PB0054)及VCAM-1抗体(货号:BA3840): 武汉博士德公司;血糖仪(罗康全活力型):德国罗氏公司;日立7600-010全自动生化分析仪:日本日立公司;多功能真彩色细胞图像分析管理:美国Media Cybernetics公司。

1.2方法

1.2.1动物模型建立适应性饲养1周,随机抽取30只按文献[2,3]方法略作改进, 一次性腹腔注射STZ 60 mg/kg,72 h后尾静脉取血,测血糖≥ 16.7 mmol/L, 血糖平稳1周后,确定为糖尿病大鼠。 剩余10只大鼠设为正常组,腹腔注射等量的柠檬酸钠缓冲液。

1.2.2分组与给药糖尿病大鼠随机抽分为模型对照组10只及三黄片组(哈药集团三精制药有限公司) 10只,其余弃去不用。 实验期间大鼠自由进食水,喂食标准饲料,每天更换垫料。 三黄片组给予生药10 g/kg体重灌胃,三黄片每天临时配制,其余两组每日给予同等剂量生理盐水灌胃。

1.2.3采血与血管免疫组化持续给药8周后,隔夜禁食12 h,不禁水。 以3%戊巴比妥(80 mg/kg)腹腔注射麻醉,腹主动脉采血测定血脂、NO及ET-1。同时留取胸主动脉,制备病理切片,SP免疫组化染色,应用图像分析软件分析大鼠胸主动脉组织中ICAM-1及VCAM-1阳性表达。

1.3统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析和处理,计量资料以均数±标准差(±s)表示,自身前后对照比较采用配对t检验, 多组间比较采用方差分析组间多重比较采用Dunnett′s t检验,以P < 0.05为差异有统计学意义。

2结果

模型对照组1只死于继发性腹部感染(可能为腹部注射STZ导致),三黄片组死亡1只,死因不详。

2.1三组给药前后血糖水平比较

三组给药前后血糖水平分别比较,差异无统计学意义(P > 0.05﹚;模型对照组及三黄片组给药前、给药后的血糖水平高于正常组(P < 0.05﹚,但模型对照组与三黄片组比较差异无统计学意义(P > 0.05﹚。 见表1

注:与正常组比较,*P < 0.05

2.2三组血脂水平比较

三组总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇组间比较差异无统计学意义(P > 0.05﹚ 模型对照组及三黄片组三酰甘油高于正常组(P < 0.05),但模型对照组与三黄片组比较差异无统计学意义(P > 0.05﹚。 见表2。

注:与正常组比较,*P < 0.05

2.3三组ET-1及NO水平比较

模型对照组及三黄片组ET-1水平较正常组升高(P < 0.05),三黄片组ET-1水平较模型对照组下降(P < 0.05);模型对照组及三黄片组NO水平较正常组降低(P < 0.05),三黄片组NO水平较模型对照组升高(P < 0.05)。 见表3。

注:与正常组比较,*P < 0.05; 与模型对照组比较,▲P < 0.05;ET-1:内皮素-1;NO:一氧化氮

2.4三组ICAM-1及VCAM-1比较

模型对照组及三黄片组ICAM-1及VCAM-1阳性表达明显高于正常组(P < 0.01),三黄片组ICAM-1及VCAM-1阳性表达明显低于模型对照组(P < 0.01)。 见表4。 正常组可见少量ICAM-1(棕黄色颗粒样)表达(图1A),模型对照组及三黄片组可见大量的ICAM-1表达(图1B、1C);正常组可见少量VCAM-1 (棕黄色颗粒样)表达(图2A),模型对照组及三黄片组可见大量的VCAM-1表达(图2B、2C)。

注:与正常组比较,*P < 0.01;与模型对照组比较,▲P < 0.01;ICAM-1:细胞间黏附分子-1;VCAM-1:血管细胞间黏附分子-1

A:正常组(微弱表达);B:模型对照组(强表达);C:三黄片组(中等表达)

A:正常组(微弱表达);B:模型对照组(强表达);C:三黄片组(中等表达)

3讨论

糖尿病合并血管病变早期特征即动脉粥样硬化糖尿病动脉硬化是糖尿病大多数慢性并发症的共同病理基础,血管内皮细胞功能的受损是动脉硬化的启动因素。 高血糖导致氧化应激的增加及一些炎性因子的过度激活,使血管内皮功能紊乱,导致ET-1分泌增加及NO分泌减少,进而引起血流动力学紊乱,血流动力学失衡又会加重血管内皮损伤,其损伤是糖尿病动脉硬化的共同病理表现及重要原因[4,5]。 慢性炎症是动脉粥样硬化形成与进展的重要的独立危险因素[6]多种炎性因子如C反应蛋白、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α 等介导的炎性反应与2型糖尿病血管并发症的关系密切,在糖尿病血管病变的发病机制中发挥重要作用。 大量证据显示,炎症导致细胞黏附分子异常、白细胞附壁等,最终引发内皮细胞功能异常,甚至凋亡。 ICAM-1及VCAM-1属于免疫球蛋白超家族成员,主要表达于血管内皮细胞、淋巴细胞、单核细胞等。 VCAM-1可引起表面效应细胞活化,免疫反应被启动,介导淋巴细胞等与血管内皮细胞黏附,损伤血管内皮,导致血管功能障碍[7]。 研究表明,动脉硬化的发生和发展与VCAM-1等黏附因子的过度表达相关[8]郑永强等[9]研究表明,抑制ICAM-1及VCAM-1的表达,可以防治糖尿病性动脉粥样硬化。

三黄片的主要成分为大黄、黄芩、盐酸小檗碱,有较多研究表明, 其组分具有抑制炎性因子表达的作用。 研究表明,大黄具有降低大鼠ET-1及升高NO的作用, 能够保护糖尿病大鼠内皮依赖的血管舒张功能,且能抑制ICAM-1及VCAM-1的表达,具有抗动脉硬化作用[10]。 小檗碱能降低肾脏血管内皮生长因子的表达,并能改善糖尿病肾病大鼠发病过程中的生化指标和肾脏病理损伤[11];小檗碱可减少白细胞介素-6及肿瘤坏死因子-α 的分泌, 减轻内脂素诱导的人脐静脉内皮细胞损伤[12];陶婷婷等[13]研究表明,在高胰岛素条件下, 人脐静脉内皮细胞分泌前列环素2(PGI2) 减少、ET-1增多;0.50、5.00 g/m L的小檗碱可提高人脐静脉内皮细胞对PGI2的分泌水平,减少ET-1的分泌,呈反向调节作用;朱凌波等[14]研究表明,小檗碱可显著降低高脂饮食兔血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇水平,显著降低血清氧化低密度脂蛋白、脂蛋白相关磷脂酶A2、 单核细胞趋化蛋白-1、 基质金属蛋白酶-9水平, 升高血清基质金属蛋白酶抑制物-1水平, 可显著改善动脉硬化病变程度及稳定斑块,其机制可能与小檗碱能显著降低血清各项炎症标志物水平等作用有关。 李淼等[15]发现,三黄方及方中大黄、黄芩、黄柏在浓度范围100~1.5625 mg/L对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞无显著毒性,三黄方通过抑制细胞因子NO、白细胞介素-1β、前列腺素E2、 肿瘤坏死因子-1α 释放发挥其抗炎作用。

卢聪等[16]研究表明,大黄素抑制血管平滑肌细胞增殖。 大黄酸能改善过氧化氢(H2O2)诱导损伤的血管内皮细胞形态,促进其增殖,抑制其凋亡,提升NO、一氧化氮合酶(NOS)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力,对血管内皮细胞有一定的保护作用[17]; 大黄酸能抑制白细胞介素-6诱导的血管平滑肌的促增殖作用和表型转换, 可能与调节基质金属蛋白酶-3/基质金属蛋白酶抑制剂1比值及增殖细胞核抗原的表达[18]。 景浩然等[19]研究表明,大黄酚可以在不影响小胶质细胞的细胞活性情况下,显著抑制内毒素(LPS)诱导的小胶质细胞炎性因子NO、肿瘤坏死因子-α 的表达。 李岩等[20]研究表明,黄芩苷能减少炎性因子肿瘤坏死因子-α 的过度表达, 其作用机制可能与黄芩苷抑制LPS引起的巨噬细胞CD36表达有关,从抗炎角度初步探讨了黄芩苷抗动脉粥样硬化的作用机制。 黄芩苷还可能部分通过上调NOS活性,增加NO含量, 从而实现抑制血管平滑肌细胞增殖的作用[21]。

本研究结果显示,复方清热类中药三黄片对糖尿病大鼠血糖及血脂无影响。 三黄片具有明显抑制ET-1升高、抑制NO降低的作用,但不能到达正常水平,推断其对血管内皮具有保护作用。 糖尿病大鼠胸主动脉ICAM-1及VCAM-1表达上调,表明其在糖尿病血管病变的发生、发展中起作用,而三黄片可以明显抑制血管ICAM-1及VCAM-1的表达。 本研究发现,三黄片具有改善血管内皮功能,同时抑制糖尿病大鼠早期ICAM-1及VCAM-1的过度表达,具有防治糖尿病血管病变的作用。

综上所述,三黄片对糖尿病大鼠血糖、血脂没有影响,其对糖尿病血管的保护作用不是通过降低血糖实现,可能是通过多环节、多靶点实现。

血管黏附分子-1 篇2

1 资料与方法

1.1 一般资料

2006年1月至2010年12月我院收治初诊AL患者共67例 (简称AL初诊组) , 男性37例, 女性30例, 年龄10～68岁, 平均 (37±8) 岁。其中急性髓系白血病 (A M L) 3 9例 (5 8.2%) , 急性淋巴细胞白血病 (ALL) 28例 (41.8%) 。同时收集13例达到完全缓解的患者 (简称完全缓解组) , 男8例, 女5例, 年龄15～46岁, 平均 (31±5) 岁。所有病例均符合张之南主编的《血液病的诊断与疗效标准》有关标准。另选取健康体检者30例作为正常对照组, 男性16例, 女性14例, 年龄18～50岁, 平均 (33±6) 岁, 排除肝、肾、肺及其他恶性疾病。三组病例在性别、年龄等方面接近。

1.2 方法

AL初诊组和正常对照组患者均空腹采血3ml, 以2000r/min立即离心20min, 取上层血清, 于-20℃冰箱冷冻保存;完全缓解组患者再次采血分离血清待用。V C A M-1试剂盒由美国R&D公司提供, V E G F试剂盒由深圳晶美生物技术有限公司提供, 均采用ELISA法检测, 严格遵守试剂盒操作说明书。

2 结果

2.1 三组血清V C A M-1、V E G F表达水平变化 (表1)

由表1可见, A L初诊组血清V C A M-1、V E G F表达水平最高, 与正常对照组比较, 差异有统计学意义 (t=9.53、15.44, P<0.01) ;与完全缓解组比较, 差异亦有统计学意义 (t=6.15、9.48, P<0.01) 。完全缓解组和正常对照组血清V C A M-1、V E G F表达水平接近, 差异无统计学意义 (t=0.48、1.47, P>0.05) 。

2 . 2 血清 V C A M - 1 、V E G F 表达水平相关分析

初诊A L 患者血清 V C A M - 1 、V E G F 水平进行相关分析，结果呈明显的正相关(r=0.59，P < 0.01)。

3 讨论

V C A M-1在正常骨髓细胞的表达是构成细胞与细胞、细胞与基质相互识别和黏附的主要基础, 参与造血细胞的迁移、定位、增殖、分化等。在A L患者中V C A M-1广泛存在于一些白血病细胞内, 加强白血病细胞的存活、增殖能力, 其表达水平增高更有利于白血病细胞转移而导致疾病进展[1,2]。本文结果显示, V C A M-1在初诊A L患者中的表达水平明显高于完全缓解组和正常对照组, 而后两者之间V C A M-1表达水平接近。说明A L患者白血病细胞主动表达V C A M-1, 可能是初诊A L患者V C A M-1升高的原因, 而化疗药物可以有效影响白血病细胞V C A M-1的分泌, 减少肿瘤细胞浸润及新生血管形成。

V E G F在淋巴瘤、骨髓瘤、白血病等血液恶性肿瘤中的作用和临床意义, 近年来引起了人们的重视。V E G F在急性白血病中的高表达与骨髓微血管密度 (M V D) 密切相关, 白血病细胞表达、释放V E G F, 通过与V E G F受体结合促进血管内皮细胞增殖和新生血管形成, 为白血病细胞的生长提供了必要条件[3]。本文结果显示, 初诊AL患者血清V E G F的表达水平明显高于完全缓解组和正常对照组, 说明增高的VEGF主要由白血病细胞分泌, 并通过促进血管生成等机制参与白血病的发病。急性白血病完全缓解后患者血清VEGF水平下降, 提示对于化疗有效的患者, 化疗药物通过杀伤白血病细胞, 减少促血管形成的细胞因子分泌, 降低了肿瘤介导的新生血管形成, 间接具有抗血管新生的作用。本研究还对初诊AL患者血清VCAM-1、VEGF表达水平进行了相关分析, 结果呈明显的正相关。

综上所述, 检测急性白血病患者血清VCAM-1、VEGF表达水平的变化, 对于了解病情发展、观察预后具有重要的临床价值。

参考文献

[1]Graf M, Reif S, Hecht K, et al.High expression of costimulatory molecules correlates with low relapse-free survival probability in acute myeloid leukemia (AML) [J].Ann Hematol, 2005, 8 (45) :287-297.

[2]Sipkins DA, Wei X, Wu JW, et al.In vivo imaging of specialized bone marrow endothelial microdomains for tumour engraftment[J].Nature, 2005, 435 (7044) :969-973.

血管黏附分子-1 篇3

1 材料与方法

1.1 材料

健康SD大鼠60只,雌雄兼用,体重200～280g,购自郑州大学实验动物中心。

1.2 试剂

兔抗大鼠IL-5多克隆抗体、兔抗大鼠IL-13多克隆抗体,兔抗大鼠VCAM-1多克隆抗体、DAB染色试剂盒和浓缩型免疫组化试剂盒均购自武汉博士德公司

1.3 模型建立

致敏方法参照文献[1]中的试验方法。将60只大鼠随机分为3组:A组:卵清蛋白(OVA)致敏组;B组:TP处理组;和C组(SC)空白对照组。OVA致敏组:基础致敏:OVA20mg和Al(OH)3粉剂30mg加生理盐水至1ml,混匀,腹腔内注射,隔日1次,共7次。激发:5%OVA/生理盐水液20～50μl双侧鼻腔滴入,隔日1次,共7次。TP处理组:TP 0.5mg/kg吐温80助溶后,均分为6次,于每次OVA鼻腔激发前30min,腹腔注射和鼻腔滴入,其他处理同OVA致敏组。SC组:使用生理盐水代替OVA,其他处理同OVA致敏组。鼻腔激发后观察模型动物症状,2h后再观察1次,记录评分。

1.4 检测方法

取3组动物鼻黏膜石蜡标本,制备成四五微米厚连续切片,采用石蜡切片HE染色和免疫组织化学SABC法,切片常规脱蜡,梯度乙醇脱水,其后分别用兔抗大鼠IL-5多克隆抗体、兔抗大鼠IL-13多克隆抗体、兔抗大鼠VCAM-1多克隆抗体为一抗,严格按照SABC法试剂盒的要求进行。阳性对照选已知阳性高表达的AR鼻黏膜组织,以磷酸盐缓冲液(PBS)替代一抗做阴性对照。

1.5 结果判定

1.5.1 炎性细胞计数方法

IL-5,IL-13,VCAM-1阳性表达均为胞浆棕色颗粒,400×显微镜下任选5个高倍视野,求出每高倍视野下的均数,结果以均数±标准差作为其阳性细胞数。

1.5.2 阳性血管表达计数方法

以血管平滑肌和血管内皮染色呈棕黄色为阳性血管,200×光学显微镜下任选5个低倍视野,求出每低倍视野下的均数,结果以均数±标准差作为IL-13和VCAM-1的阳性血管表达数。

1.6 统计方法

实验数据采用统计软件包SPSS 11.0,统计学分析采用单因素方差分析(ANOVA)并继以最小显著差(LSD)t检验;相关分析采用直线相关法,以P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 鼻黏膜HE镜下观察

OVA致敏组:鼻黏膜肿胀增厚,腺腔及小血管腔扩张,杯状细胞增多。在黏膜及黏膜下层,小血管及腺体周围可见大量灶状浸润的炎性细胞。TP处理组:鼻黏膜轻度肿胀增厚,腺腔及小血管未见明显扩张。在黏膜及黏膜下层,小血管及腺体周围炎性细胞浸润较轻。SC组:鼻黏膜未见异常改变。

2.2 各组IL-5,IL-13,VCAM-1阳性表达结果见表1、表2。

注:与OV组同指标比较,*P<0.01。

3 讨论

TP是从卫矛科雷公藤属植物根部分离出的二萜类化合物,是雷公藤活性成分中最具代表性的成分之一。经过临床使用和实验研究证明具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤等作用。已广泛用于哮喘、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、肾病等疾病的治疗。在探索TP用于AR的治疗方面,国内已有学者使用雷公藤甲素干预AR动物模型并取得很好的效果。

TP具有广泛的抗炎和免疫抑制作用,可有效减轻变应性鼻炎中炎性细胞的浸润。本试验HE染色发现致敏组大鼠鼻黏膜肿胀增厚,腺腔及小血管腔扩张,杯状细胞增多。在黏膜及黏膜下层,小血管及腺体周围可见大量灶状浸润的炎性细胞。TP处理组鼻黏膜肿胀较轻,腺腔及小血管未见明显扩张,在黏膜及黏膜下层,小血管及腺体周围炎性细胞浸润较轻。

变应性鼻炎是由易感个体接触致敏变应原后导致的包含IgE介导的炎症介质的释放和多种免疫活性细胞、细胞因子参与的鼻黏膜慢性炎症性疾病[2,3],其中效应细胞和细胞因子在变应性鼻炎发病过程中起到核心作用。T淋巴细胞的分化及其产生的细胞因子直接影响着变应性鼻炎的发展进程。近年来“Thl和Th2失衡学说”与变应性鼻炎的关系越来越受到重视[4,5]。该学说认为变应性鼻炎是一系列细胞间相互作用的结果,当变应性鼻炎患者接触到变应原后,在抗原提呈细胞和主要组织相容(抗原)复合物(MHC-Ⅱ)的协助下,传递给刚从胸腺组织生成并释放的原始T淋巴(ThO)细胞,与其表面上的抗原特异性T细胞受体结合,导致ThO细胞激活后朝Th2方向分化而释放出IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-13、GM-CSF等细胞因子,进一步促进Th2激活而抑制Thl应答。使Th细胞的分化产生偏移,即由Thl反应偏向Th2反应,成为Th2>Thl反应。这些Th2细胞合成和释放的多种Th2细胞因子如IL-4,IL-5,IL-13等诱导B细胞释放IgE并刺激肥大细胞合成、分泌IgE的能力增强[6],IgE与肥大细胞、巨噬细胞和上皮细胞表面的受体FcεRI结合使该细胞处于致敏状态,当变应原再次进入鼻黏膜后,变应原与细胞表面的临近2个IgE桥联,使其释放多种炎性递质、细胞因子和神经肽类,这些物质作用于鼻黏膜的血管,引起血管扩张、血浆渗出增加、鼻黏膜水肿;作用于胆碱能神经,使腺体分泌旺盛;作用于感觉神经使黏膜敏感性增高,喷嚏发作,产生相应临床症状[7]。在变应性鼻炎的发病机制中,Th2细胞起着重要的作用,由此产生了“变态反应中的Th2假说”,这个假说已得到实验研究和基础研究的支持[8]。本实验结果说明了TP能显著抑制Th2类细胞因子IL-5、IL-13以及粘附因子VCAM-1在AR大鼠模型中的表达,从而抑制变应性鼻炎的发生及发展进程。

雷公藤类药物在AR治疗上很有前景,但雷公藤类药物的毒性很强,能引起全身各系统的不良反应。在消化系统的不良反应主要表现为恶心、纳差、腹胀、腹泻、腹痛及呕吐,镜检为特异性胃肠炎。泌尿系统损害常发生在过量中毒时。心血管系统表现为小剂量雷公藤即可引起灶性心肌肿胀,横纹消失;大剂量可引起心肌溶解灶数量增加,病变范围广泛。对于这样的中药,减毒研究势在必行,事实证明多种治疗手段的结合、中药复方配伍研究、活性单体的筛选、改变剂型或改变给药途径及结合现代生物学技术对于降低雷公藤制剂的毒性具有广阔的前景。总之,雷公藤用于AR临床治疗前景广阔,但仍有很多工作需要科学工作者去完成。

参考文献

[1]安云芳.变应性鼻炎P物质受体的研究.中华耳鼻咽喉科杂志,1998,33(3):139-141.

[2]周兵,李华斌.变应性鼻炎治疗进展.武警医学,2003,14(6):323-325.

[3]顾之燕,顾瑞金.变应性鼻炎及其相关基础知识的再认识.中华耳鼻喉科杂志,2003,17(2):124-127.

[4]Romagnani S.The role of lymphocytes in allergic disease.J Allergy ClinImmunol,2000,105:399-408.

[5]徐志鸿,杨成章.Th1/Th2失衡与变应性鼻炎.临床耳鼻咽喉科杂志,2004,18(8):510-512.

[6]张罗,周兵,韩德民.变应性鼻炎研究进展(-):发病机制.耳鼻咽喉头颈外科,2003,10(5):316-320.

[7]孔维佳,王斌全.耳鼻咽喉科学.北京:人民卫生出版社,2002:62-63.

血管黏附分子-1 篇4

1 VEGF与骨肉瘤

1.1 VEGF的来源,结构及功能

1989年,Ferrara等从牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中分离提取出来血管内皮细胞生长因子.VEGF属于糖基化分泌性多肽因子,分子量在35-40Kb之间,早期也称作血管通透因子VPF,是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子,能够在体内诱导血管新生。VEGF具有高度的保守性,是由二条分子量各为24kDa的单链以二硫键组成同源二聚体糖蛋白。在人类,VEGF基因定位于第六对染色体P21.3,全长14Kb,其基因组由8个外显子和7个内含子构成[3]。VEGF与血管内皮细胞受体结合,使细胞内钙离子浓度升高以及激活细胞内基因使细胞表达水解酶、蛋白酶和相应的组织因子等,从而使血管内皮细胞增殖、分化,形成新的血管。此外,VEGF还可以通过增加血管增加细胞外基质促进血管生成。

1.2 VEGF与骨肉瘤的关系

从骨肉瘤的临床表现中浅静脉怒张可以看出骨肉瘤的血运丰富,而VEGF是血管形成的重要因素,因此,VEGF是骨肉瘤形成的重要因素。2000年,Kaya等利用免疫组化的方法发现,27例原发恶性骨肿瘤中有17例阳性,阳性率为62.9%,明显高于VEGF染色阴性的标本组织切片。说明了VEGF与骨肉瘤存在密切联系。而且还发现,VEGF与骨肉瘤的肺转移明显相关。2002年Sulzbacher等对57例骨肉瘤利用免疫组化法染色,结论是骨肉瘤组织中,骨桥蛋白的表达与VEGF相关,而且,VEGF高表达的患者预后不良。2003年,Tsunemi等应用动物的骨肉瘤模型研究骨肉瘤原发灶切除后肺转移的发生情况,结论是原发骨肉瘤切除后,机体系统性血管生成活性增加,促使骨肉瘤发生肺转移,而应用抗血管生成剂可以阻止骨肉瘤术后肺转移的进程。2009年,Bajpai J等通过对经过新型辅助化疗后的31个患者(平均年龄17岁,男女比例25:6)手术切除后的骨肉瘤标本进行免疫组化分析。经过三个疗程的化疗后,手术切除肿瘤,通过Huvos分级对肿瘤组织进行分级,免疫组化对肿瘤标本进行分析。得出结论,肿瘤组织的分级越高,VEGF表达越明显。由此,可以通过分析VEGF的表达,来决定对肿瘤组织实行的何种手术治疗方案。

1.3 VEGF与骨肉瘤的临床治疗

随着对VEGF诱导骨肉瘤生长、侵来达到治疗骨肉瘤的目的。早在1995年,Asano等在BALB/c裸鼠身上接种HT-1080细胞,并通过静脉注射MV303(能够与VEGF的受体结合),每只小鼠的注射剂量为100μg,发现MV303成功免疫VEGF/VPF后,有效的抑制原位肿瘤以及转移的肿瘤的生长,而且没有明显的副作用.2001年,Gordon等向晚期肿瘤患者静脉输注rhuMAb VEGF,发现肿瘤组织得到有效的抑制。

2 CD15与骨肉瘤

2.1 CD15的结构及功能

CD15抗原又叫粒细胞相关抗原,或Lewis抗原,由半乳糖、岩藻糖和Y&乙酰葡萄糖胺组成,是一种表达在肿瘤组织细胞表面糖酯和糖蛋白上的含有寡聚糖的一组碳水化合物抗原,是癌细胞表面异常表达的九碳糖。为选择素所识别的比较确定的一个配基,是细胞黏附分子E-选择素的配体,主要表达在粒细胞和某些肿瘤细胞表面,与E-选择素特异性结合以帮助癌细胞穿过内皮细胞的基底膜,与恶性肿瘤的恶化和转移呈现正相关。CD15表达随癌细胞分化程度下降,淋巴结转移和临床分期增高而明显增高.

2.2 CD15与骨肉瘤的关系

CD15是一种细胞粘附分子(CAM),是细胞表面的一种糖蛋白,与许多恶性肿瘤的形成和转移有密切的关系,并被认为是肿瘤预后不良的一种标志。CD15与食管癌,肝癌,大肠癌等有密切的关系。CD15的表达与骨肉瘤的发生与转移的关系尚不清楚,CD15与VEGF是否共同促进了骨肉瘤的形成也不清楚。因此,通过各种途径对CD15、VEGF与骨肉瘤的相关性进行研究,具有很大的临床意义。

2.3 CD15与骨肉瘤的临床诊断与治疗

研究表明,检测甲状腺癌组织中CD15抗原表达,有助于筛选具有转移潜能的肿瘤,可作为一项辅助指标用于甲状腺癌更准确地估测预后,指导治疗。检测膀胱癌的CS15的抗原的表达,有助于帅选转移性的肿瘤,可作为一项辅助指标用于膀胱癌更准确的估测预后,指导治疗。我们可以推断,检测CD15在骨肉瘤中的表达也可以作为估测预后的指标,用于临床指导,但这需要进一步证实。

3 VEGF与CD15可能存在的相互关系及在骨肉瘤中的临床治疗应用前景

VEGF与骨肉瘤的发生密切相关,但与骨肉瘤的转移尚有争论,而CD15与肿瘤的转移有密切关系。而高度恶性的骨肉瘤,特别是已经发生转移的骨肉瘤患者中是否存在VEGF和CD15的高表达,尚待进一步证实。有可能通过针对VEGF与CD15的研究,研发出新的临床药物,以提高高度恶性的骨肉瘤患者的生存率,并对患者的预后作出有效的评估。

参考文献

[1]Cheng SY,Huang H,Nagane M,et al.Suppression of glioblastoma angiogenicity and tumorigenicity by inhibition of endogenous expression of vascular endothelial growth factor.Proc Natl Acad Sci USA,1996,93:8502-8507.

[2]Liu F,Qi HL,Chen HL.Regulation of differentiation and proliferation-inducers on lewis antigens,alpha-fucosyltransferase and metastatic potential in hepatocarcinoma cells[J].Br J Cancer.2001,84(11):1556-1563.

血管黏附分子-1 篇5

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

2 F Fogarty导管(美国Baxter health corporation);倒置显微镜(日本Olymp-US);手动轮转切片机(德国Lecia RM 2235 Lecia);医学图像照相系统(日本Olympus BX51);医学图像分析系统(日本Olympus DP2-BSW);手术器材:剪刀、血管夹、止血钳、手术缝针及缝线、注射器等;小型台式离心机(美国Sigma,1-13);紫外分光光度计(日本UV-3R000);实时荧光定量PCR扩增仪(美国ABI PRISM R7500Fast Real-Time PCR System Applied Biosystems);转染试剂FuGene 6(瑞士Roche公司);Egr-1兔抗大鼠多克隆抗体(武汉博士德生物工程公司);ICAM-1兔抗大鼠多克隆抗体(武汉博士德生物工程公司);decoy ODNs(大连宝生物工程有限公司);总RT-PCR提取试剂盒(大连宝生物工程有限公司);RT-PCR逆转录试剂盒(大连宝生物工程有限公司);RT-PCR引物(大连宝生物工程有限公司);健康雄性Wistar大白鼠,体质量350～400 g,由北京维通利华实验动物中心提供,合格证号:SCXK(京)2006-0009。

1.2 方法

1.2.1 大鼠颈动脉损伤模型的复制

健康雄性Wistar大鼠96只,体质量350～400 g。10%水合氯醛(300 mg/kg)麻醉后,颈正中切开,暴露左颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉,用血管夹暂时阻断左颈总动脉和颈内动脉,用2 F导管从颈外动脉插入向前推进至主动脉弓,推入生理盐水充盈气囊,沿颈总动脉全长回撤,然后抽瘪气囊。这个过程重复3次,且每次回撤时导管旋转90°。造成左颈总动脉内膜损伤。术后结扎颈外动脉,恢复血流,缝合颈部创口。局部使用青霉素以预防感染,喂食标准饲料,自由饮水。

1.2.2 分组及处理

96只雄性Wistar大鼠随机分为4组,每组24只。假手术组(Sham-group):只进行颈动脉结扎,不插入导管,即不造成动脉内膜损伤。单纯损伤组(injury-only-group):球囊拉伤左颈总动脉。诱骗寡核苷酸组(SCR-group):球囊拉伤左颈总动脉后局部注入200μL含有500μg SCR ODN、30μL转染试剂FuGene 6的1 mmol Mg Cl2液。诱骗寡核苷酸组(decoy ODNs-group):球囊拉伤左颈总动脉后,应用微量注射器局部释放200μL含有500μg FITC标记的decoy ODNs、30μL转染试剂FuGene 6的1 mmol Mg Cl2溶液,使其在局部作用20 min。

1.2.3 Egr-1诱骗及诱骗对照寡脱氧核苷酸(decoy ODNs和decoy ODNs SCR)的设计合成

Egr-1的诱骗寡脱氧核苷酸(decoy ODNs)基因序列:上游5'-TCGCCCTCGCCCCCGCTAAGGG-3',下游:3'-A GCGGGGGCGGGGGCGAT-TCCC-5'。Egr-1的诱骗对照寡脱氧核苷酸(decoy ODNs SCR)基因序列:同诱骗序列类似的错配双链寡脱氧核苷酸,上游5'-A GCCGCACCGGCCTGCCT-CGTC-3',下游3'-TCGGC GTGGCCGGACGGAGCAG-5'。经聚丙烯酰胺凝胶电泳法纯化并冻干保存,在其3'-和5'-端进行硫代修饰,部分寡核苷酸的5'-端用FITC标记,以便于在荧光显微镜下观察转染后基因的分布情况。

1.2.4 在体decoy ODNs转染

室温下分别将500μg decoy ODNs与30μL转染试剂FuGene 6充分混合成复合物后溶于170μL的1 mmol Mg Cl2液中,在制作血管球囊损伤模型的同时,从颈外动脉将混合液局部注入至损伤的血管节段内。在荧光显微镜下观察转染情况。于转染24 h后处死大鼠2只,立即取治疗的局部血管放入液氮罐中,经制成冷冻切片(片厚5μm)后,避光于荧光显微镜下观察。1.2.5取材与血管标本制作手术后不同时间点,用10%水合氯醛腹腔注射麻醉动物后,无菌条件下游离左颈总动脉,血管夹暂时阻断左颈总动脉近心、远心端血流,迅速取下血管,用肝素盐水冲洗血管,部分血管用10%中性甲醛固定用于病理学检查,另一部分迅速放入液氮中冷冻,-70℃保存,用于总RNA的提取和组织蛋白的检测。

1.2.6 血管标本的病理学检查

各组血管用石蜡包埋后,从每段血管的横截面随机切下3张切片(片厚5μm),HE染色,光镜显微镜下观察血管内膜增生情况,并应用计算机图像分析软件进行图象分析,每个标本间隔取3张切片,用计算机图像分析软件测量,计算出内膜面积、中膜面积、管腔面积和内膜与中膜(I/M)的面积比。图像分析由操作熟练但不知情者操作。

1.2.7 Real time RT-PCR法检测血管壁组织的Egr-1和ICAM-1 m RNA表达

采用Trizol一步法提取血管组织总RNA,取各组总RNA 3μL逆转录合成c DNA,逆转录反应根据逆转录试剂盒要求的标准进行,反应总体积为20μL,反应条件为37℃15 min,85℃5 s,4℃7 min。以2μg c DNA为模板进行PCR扩增,总反应体系为20μL,2μL的c DNA,10μL的SYBRRPremix Ex TaqTM,0.4μL的引物和7.2μL的超纯水。主要的循环参数如下:1个循环的预变性(95℃30 s),40个循环的退火(95℃5 s)和延伸(60℃34 s)。Egr-1上游引物:5'-CC-CAAACTGGAGGAGATGA-3',下游引物:5'-GAGGC AGAGGAAGACGATG-3'。ICAM-1上游引物:5'-AC CAGACCCTGGAGATGGAGA-3',下游引物:5'-ACC GTGGGCTTCACACTTC-A-3';β-actin上游引物:5'-CGTGCGTGACATTAAAGAG-3',下游引物:5'-TTG CCGATAGTGATGACCT-3'。β-actin作为每个样品的内参。每个目的基因的CT平均值减去对应模板的内参照基因的CT平均值,得到△CT,根据公式:△CT(样本)=目的组基因CT-对照基因内参CT;△CT(对照)=对照组基因CT-对照基因内参CT;△△CT=△CT(样本)-△CT(对照);样本目的基因的相对表达量=2-△△CT[11],实验重复3次。

1.2.8 Western blotting法检测血管壁组织的Egr-1和ICAM-1的蛋白表达

提取各组动脉总蛋白,将含有50μg总蛋白的样品用SDSPAGE分离,并转移到PVDF膜上。脱脂奶粉封闭过夜,用TBS液清洗2遍,然后加入1︰400稀释的一抗(Egr-1和ICAM-1)中室温下孵育2 h。辣根过氧化物酶标记一抗,化学发光试剂增强反应,凝胶成像分析系统测定条带的平均积分光密度值,记录结果。以β-actin蛋白表达为内参照,目的蛋白和β-actin条带平均积分光密度比值表示目的蛋白的相对含量。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析,所有的检测数据以均数±标准差(x±s)表示,用单因素方差分析进行数据分析,组间比较采用LSD法,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 在体转染效果观察

转染24 h后,收集血管标本,然后在470～490nm的荧光显微镜下观察,以确定转染效率。转染Egr-1 decoy ODNs基因24 h后,可见血管内膜和中膜有大量绿色荧光分布,证明转染成功(见图1)。

2.2 血管病理形态学检测结果

假手术组,血管内膜由一层完整的内皮细胞覆盖,无内膜增生,管腔无狭窄;大鼠颈总动脉拉伤后3 d,可见内皮剥脱,无新生内膜增生,管腔无狭窄,说明球囊拉伤动脉模型成功;SCR组和单纯损伤组7 d时可见内膜增生,管腔狭窄,14 d和21 d时内膜增生更明显,内膜及中膜层有大量的增生细胞,排列紊乱,内弹力板模糊,管腔明显狭窄。Decoy ODNs组与同一时间点SCR组和单纯损伤组相比,内膜增生受到抑制,差异有统计学意义(P<0.01,见附表和图2)。

2.3 血管壁Egr-1和ICAM-1 mRNA表达结果

假手术组大鼠动脉Egr-1和ICAM-1 m RNA的表达微弱,血管球囊损伤后Egr-1和ICAM-1 m RNA的表达增加,Egr-1的表达高峰在21 d,单纯损伤组和SCR组表达分别是假手术组的(18.05±1.22)倍和(18.38±1.57)倍,ICAM-1 m RNA的高峰在7 d,在单纯损伤组和SCR组的表达分别是假手术组的(6.52±0.46)倍和(6.20±0.59)倍,经decoy ODNs治疗后,在各个时间点Egr-1和ICAM-1 m RNA的表达明显减少,与单纯损伤组和SCR组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。见图3。

2.4 Western blotting检测血管壁Egr-1和ICAM-1蛋白表达结果

假手术组无Egr-1和ICAM-1表达,血管球囊损伤后Egr-1和ICAM-1的表达同其m RNA的表达类似。Egr-1的表达随着时间的延长,表达逐渐增强,在21 d,免疫印迹带达到最强;而ICAM-1免疫印迹带的最强度为7 d,decoy ODNs治疗组蛋白表达较SCR组和单纯损伤组相比显著减弱(见图4)。

注:LA为管腔面积,I为新生内膜面积,M为中膜面积,I/M为内膜面积与中膜面积比值。覮与同一时间点的单纯损伤组和SCR组比较,P<0.01

I为新生内膜,M为中膜,IEL为内弹力板。血管损伤后21 d,单纯损伤组和SCR组内膜增厚明显,管腔重度狭窄(A和B),经decoy ODNs治疗后内膜增生减轻,管腔增加(C)

覮decoy ODNs组在各个时间点与单纯损伤组和SCR组相比,P<0.001

A:Sham组;B:单纯损伤组;C:SCR组;D:decoy ODNs组

3 讨论

PCI是目前公认的治疗冠状动脉狭窄的有效方法,然而PCI术后的再狭窄严重影响其远期疗效。PCI术中不可避免地造成内皮的损伤和剥脱,而内皮损伤是再狭窄发生的始动因素,在由损伤刺激所激活的多种转录因子(如:Egr-1)、生长因子、细胞因子等共同作用下,血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型发生转化向内膜下迁移、增殖,并进一步分泌大量的ECM,从而形成新生内膜,导致管腔狭窄[12,13]。阻断这些因子的表达,以抑制VSMC的迁移和增殖,减轻内膜的增生,能够达到防治再狭窄的目的。

Egr-1是一种含锌指状结构的TF,为即刻早期基因家族中的一员,通过与基因启动子中富含GC的序列相互作用调节基因的转录。以Egr-1作为防治血管再狭窄的靶基因基于如下考虑:(1)Egr-1在正常动脉中表达很低,但是在急性机械性损伤或其他血管应激后被激活。(2)Egr-1控制着许多与血管损伤后促进内膜增生相关的多种基因的表达[14]。(3)除了损伤外,Egr-1还被许多外部刺激(如细胞因子等)激活,这可能是导致动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄的发病机制。(4)在人类动脉粥样硬化病变处发现了Egr-1和大量Egr-1支配的基因。因此干预Egr-1转录因子基因表达,以抑制VSMC增殖,减轻内膜增生,可能为再狭窄防治策略的制定提供新的思路和选择。

TF诱骗策略是一种针对TF的在核转录水平的基因沉默治疗方法。Decoy ODNs是一种顺式作用元件,它与转录因子DNA结合位点的序列相同或相似,在与转录因子的内源顺式DNA序列元件竞争时,诱骗转录因子与它结合,下调转录因子所调控的基因表达[15]。首先报道的应用诱骗技术调控基因表达的实验是将E2F decoy ODNs转导入球囊损伤的大鼠颈动脉,结果显著抑制了球囊损伤后2周内的新生内膜形成[16]。随后有人利用NF-κB decoy ODNs也显著减轻了球囊损伤后鼠颈动脉新生内膜的生成[17]。国内韩伟等[18]研究表明Egr-1 decoy ODNs抑制10%FBS诱导的体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖,此作用与其抑制PCNA、cyclin D1、CDK4表达,阻止细胞周期由G0/G1期向S期转换,抑制S期细胞合成有关。

近年来大量的研究表明,动脉壁的炎症反应在再狭窄发展过程中起着重要的作用[19,20]。各种病理因素致内皮功能紊乱或直接损伤内皮后,单核/巨噬细胞以及内皮细胞、平滑肌细胞均可分泌多种黏附分子如E-selectin、细胞黏附分子、血管细胞黏附分子和单核细胞趋化蛋白因子等炎症因子。在这些因素中,细胞黏附分子-1(ICAM-1)在炎症过程中起着重要作用。ICAM-1是黏附分子中免疫球蛋白超家族的一名成员,是一个高糖基化的细胞表面蛋白,在内皮细胞、血管平滑肌细胞和循环白细胞中表达,通过同LFA-1(CD18/CD11a)或者Mac-1(CD18/CD11b)结合介导单核细胞、淋巴细胞和中性粒细胞与内皮细胞黏附,促进炎症的发生和发展。已知应用中和ICAM-1的抗体可以抑制大鼠颈动脉球囊损伤后的内膜增生[21]。SHIMIZU等[22]研究发现,猪前降支血管成形术后在损伤动脉处新生内膜中ICAM-1表达明显增多,炎症明显,与再狭窄相关,这种现象在支架植入术组比单纯球囊扩张组更为明显。因此,抑制ICAM-1的表达已经成为针对性抑制再狭窄的一项策略。笔者的研究结果表明,在正常的、未损伤的血管中没有ICAM-1的表达,血管损伤后I-CAM-1的表达上调,7 d后达高峰,笔者合成了针对Egr-1mRNA的decoy ODNs,局部转染到球囊损伤后的大鼠颈总动脉,探讨其抑制内膜增生的作用机制。为了提高转染效率,使decoy ODNs在细胞内与靶基因的m RNA结合发挥作用,本研究采用了转染试剂FuGene,为增加它在细胞核内的稳定性,防止核酸酶的降解,又对其两端进行了硫代修饰。结果decoy ODNs治疗明显降低了ICAM-1的表达,并显著减轻了新生内膜的增生。表明decoy ODNs是一种新型的RNA水平上的强效基因灭活因子,通过抑制Egr-1的表达,在某种程度上也抑制了ICAM-1的转录和表达,从而抑制动脉损伤后新生内膜的增生。

血管黏附分子-1 篇6

1 ICAM-1的结构与表达

ICAM-1 (又称CD-54) , 是免疫球蛋白超家族的成员, 其配体是整合素家族β2组的淋巴细胞功能相关抗原-1 (lymphocyte function-related antigen-1, LFA-1) 和巨噬细胞分化抗原-1 (macrophage differentiation antigen-1, MAC-1) ;LFA-1与ICAM-1近N端的Ig样结构1区结合, MAC-1与Ig样结构3区结合。LFA-1是ICAM-1的主要受体, MAC-1与ICAM-1的亲和力较低, 且在激活的白细胞上只有小部分Mac-1 (约10%) 可介导ICAM-1黏附。LFA-1表达在中性粒细胞和除红细胞以外的所有造血细胞, 而MAC-1表达局限于单核细胞、巨噬细胞和粒细胞上。

ICAM-1广泛分布在体内的各种组织细胞的表面, 其中以血管内皮细胞表面的表达最强, 外周血白细胞, 间质中的巨噬细胞等表面亦有表达。正常情况下血管内皮细胞中的ICAM-1表达很低, 在内皮细胞缺血、再灌注损伤等情况下, 大量炎性递质、细胞因子等能诱导ICAM-1蛋白及mRNA的表达, 参与T细胞反应、促进单核细胞与内皮细胞的黏附。ICAM-1可从血管内皮细胞表面脱落, 成为可溶性ICAM-1 (sICAM-1) [2], sICAM-1的水平可反映细胞表面表达ICAM-1的程度[3], 而sICAM-1与ICAM-1都要与LFA等结合才能发挥作用[4]。

2 ICAM-1与AS的关系

在AS初始形成过程中, 血管内皮受到损伤后, ICAM-1表达增加, 调节白细胞的黏附及穿越内皮的游移 (以单核细胞为主) , 单核细胞到血管内皮下, 摄取氧化修饰的低密度脂蛋白 (oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL) , 变为激活的巨噬细胞, 最终成为充满脂质的泡沫细胞。ICAM-1在活性内皮细胞上的表达是循环白细胞聚集浸润引起一定部位组织损伤和炎症反应的关键, 许多试验已证实正常动脉内皮细胞和内膜平滑肌细胞表达ICAM-1极少或不表达, 而在动脉粥样硬化中血管的内皮细胞、巨噬细胞和平滑肌细胞上均出现大量而持久的ICAM-1表达[5]。

高脂血症也可促进ICAM-1表达增加, 血脂升高能促进超氧阴离子产生, 使低密度脂蛋白氧化修饰, ox-LDL可以上调内皮细胞ICAM-1的表达, 诱导单核细胞向血管内皮的浸润, 在小鼠高胆固醇血症4周后, ICAM-1的表达明显上调, 而且主要表达在“有损伤倾向”的区域, 特别是血管内皮细胞和细胞边缘, 这种上调总是与单核细胞的黏附和迁徙同时出现, 表明ICAM-1对单核细胞聚集于内皮细胞具有一定作用[6]。Iiyama 等[7]用免疫组化和Northernblot方法分析了高胆固醇饮食对LDL R-/-和apoE-/-小鼠及新西兰白兔的主动脉黏附分子表达的影响, 结果显示高胆固醇兔和小鼠的主动脉ICAM-1表达明显上调。ox-LDL既能上调ICAM-1的表达, 促进单核细胞的黏附和浸润, 单核细胞又吞噬ox-LDL变成活化的巨噬细胞, 形成一个恶性循环, 最终形成AS。

在AS斑块形成后, ICAM-1表达阳性的内皮细胞常与内皮下浸润的T淋巴细胞和巨噬细胞相邻, 在AS斑块处不仅内皮细胞ICAM-1的表达明显上升, 而且在AS发生过程中血管平滑肌细胞 (vascular smooth muscle cell, VSMC) 也有ICAM-1的表达, 在主动脉和冠状动脉用抗ICAM-1和抗细胞特异抗体处理后, 可观察到正常情况下不表达ICAM-1的VSMC在AS损伤后均有ICAM-1的表达[8]。冯青俐等[9]研究发现急性冠脉综合征组血清ICAM-1水平显著高于稳定型心绞痛组和对照组, 提示ICAM-1水平变化与动脉粥样硬化的严重程度有关。ICAM-1可以介导淋巴细胞聚集在损害部位, 共同促进AS的慢性炎症过程。激活的白细胞黏附到血管内皮能够通过一系列机制促进内皮损伤, 血管功能障碍, 使ICAM-1表达进一步增加, 进而又吸引大量的白细胞, 形成自我增殖的恶性循环。

ICAM-1不仅有助于斑块的形成, 而且同斑块的稳定性有关[10]。ICAM-1介导白细胞的黏附增加促进斑块的不稳定性, 削弱了斑块处的纤维帽, 加快了斑块破裂、血栓的形成, 可引起更为严重的后果[11,12]。

3 中医药防治AS

在对AS形成机制的不断深入研究的过程中, 对AS的防治也成为临床的一大热点。抗黏附治疗已成为防治动脉粥样硬化的方法之一, 大量动物实验表明, 以单抗、反义核酸或其他拮抗剂阻断内皮黏附分子的表达功能, 都取得了一定的进展[13]。中医学在这方面也取得了很大的进步, 中医学中素无“动脉硬化”“粥样斑块”病名, 根据AS的临床表现, 以瘀、痰两种证候多见, 多涉及“胸痹”“中风”“真心痛”“眩晕”“头痛”“健忘”“痴呆”“脱疽”等病证范畴。

针对AS的治疗多采用活血化瘀、祛痰除湿的方法, 但在不同的阶段侧重点不同。于俊生等[14]提出在动脉粥样硬化的早期阶段, 以高脂血症为主者, 多辨证为“痰中夹瘀”, 治疗以化痰为主, 辅以活血化瘀, 当动脉粥样硬化斑块形成后, 表现为管腔狭窄、血液流变学异常改变时, 则多以瘀为主, 在治疗上强调活血化瘀, 辅以化痰。

丁奇峰等[15]通过对模型大鼠的研究得出高脂饮食能使ICAM-1mRNA的表达明显增加, 而姜黄素各剂量组可以不同程度地下调血管壁内黏附分子ICAM-1mRNA的表达, 而且姜黄素高剂量组的作用效果明显优于低剂量组, 能起到更好的抑制ICAM-1的表达, 抑制单核细胞黏附和浸润, 从而预防动脉粥样硬化的发生。张梅等[16]研究表明丹参注射液有降低大鼠血清三酰甘油和总胆固醇的作用, 同时可抑制ICAM-1的表达。韩跃刚等[17]在研究血栓心脉宁对高脂血症患者表达黏附分子时发现, 血栓心脉宁可降低ICAM-1的水平, 使内皮细胞活化减轻, 延缓动脉粥样硬化进展。张路等[18]构建试验性家兔主动脉粥样硬化模型, 采用免疫细胞化学方法, 观察纯中药制剂通心络对ICAM-1在粥样斑块中表达的影响, 表明正常家兔主动脉未见明确ICAM-1表达, 粥样斑块内则呈现强表达, 通心络可一定程度降低ICAM-1在家兔主动脉粥样斑块中的表达。金惠民等[19]采用体外细胞培养技术, 制造低氧和LDL内皮损伤模型, 结果显示缺氧或者LDL内皮损伤的状态下, ICAM-1表达显著增加, 而救心胶囊可以明显抑制内皮ICAM-1的表达, 对内皮细胞具有保护作用。王宗仁等[20]通过构建大鼠动脉粥样硬化模型, 采用半定量反转录聚合酶链反应检测外周血单核细胞中ICAM-1的表达, 结果显示高脂饮食能使血管壁内ICAM-1的表达明显增加, 而芪丹通脉片各剂量组可以不同程度地下调血管壁内ICAM-1的表达, 而且芪丹通脉片高剂量组的作用效果明显优于低剂量组, 能起到更好的抑制ICAM-1表达, 抑制单核细胞的浸润和免疫黏附从而预防动脉粥样硬化的发生。殷惠军等[21]研究证实蒺藜总皂苷能明显降低家兔ICAM-1浓度, 从而起到拮抗AS的发生发展。

4 展 望

血管黏附分子-1 篇7

1 对象与方法

1.1 研究对象

2型糖尿病组231例(男120例,女111例),均为河南大学第一附属医院2005至2007年住院及门诊患者,符合1999年WHO糖尿病诊断标准。以散瞳眼底镜检查及眼底荧光血管造影为诊断DR的金标准,将并发DR的列为病例组(按DR国际临床标准分型,诊断符合《眼科临床指南》),未并发DR的列为对照组。两组人群均无急慢性肾炎、下尿路感染,近期未用肾毒性药物,无全身感染、肿瘤、心力衰竭、酮症酸中毒、高渗综合症,无严重屈光介质浑浊。两组均正规内科治疗控制血糖水平。患者均知情同意及伦理委员会批准。

1.2 方法

研究对象禁食10~12h次日清晨测量身高、体质量,并计算体质量指数[BMI=体质量(kg)/身高(m)2],测量坐位血压3次取均值。空腹静脉采血,AU-400生化检测仪测定空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。ET-1测定采用RIA法(试剂盒由北京北方生物技术研究所提供,批内变异系数<5%,批间变异系数<10%),操作方法严格按说明书进行。sICAM-1测定采用ELISA方法,试剂盒由美国Endogen公司提供,仪器采用奥地利SLT3型全自动酶标分析仪。

1.3 统计学分析

所有数据均应用SYSS10.0软件处理。正态分布的资料以χ—±s表示,多组间比较应用方差分析。各指标间关系采用直线回归分析,多因素分析采用多元逐步回归法。

2 结果

2.1 ICAM-1和ET-1水平

轻、中、重度非增殖性DR(NPDR),增殖性DR(PDR)病例组ICAM-1和ET-1组间差异有统计学意义。

2.2 Pearson相关分析

注:与对照组比较*P<0.05,**P<0.01有统计学意义

临床分型与血浆ET呈正相关(r=0.613,P<0.01),病程正相关(r=0.429,P<0.01)。

2.3 各指标多元逐步分析结果

将s ICAM-1作为因变量,以性别、年龄、ET-1、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FBG、BMI、收缩压、NPDR、PDR作为自变量,用多元逐步回归筛选变量,结果显示,s ICAM-1与ET-1、NPDR、PDR、TG、HDL-C显著相关,而与其他因素无相关关系,表明其他对s ICAM-1无显著影响。校正这些因素的影响后,s ICAM-1与ET-1、NPDR、PDR仍然相关(r=0.521、r=0.625、r=0.591),见表1。

3 讨论

ICAM-1属于免疫球蛋白家族成员,多种细胞能表达ICAM-1,以血管内皮细胞表达最强。表达于细胞表面的ICAM-1脱落后进入血液成为sICAM-1。sICAM-1的量与细胞表面ICAM-1的分子数量呈正比,测定sICAM-1的浓度可间接反应内皮细胞和抗原递呈细胞表面ICAM-1的表达量。ICAM-1在活性内皮细胞上的表达是循环白细胞聚集、浸润引起局部组织损伤和炎症反应的关键[4]。本研究显示,轻,中、重度非增殖性DR(NPDR),增殖性DR(PDR)病例组ICAM-1组间差异显著。多元回归分析显示,血清sICAM-1与NPDR、PDR显著相关,提示sICAM-1可能参与DR发生、发展的病理生理过程,与病变的程度相关,因此可作为病情变化的检测指标。

ET-1是由血管内皮细胞合成和分泌的小分子血管活性肽,具有多种生物活性[5]。在微循环障碍、组织缺氧等条件下,血管内皮细胞受损,导致内皮素释放增加,定量测定血浆中ET-1含量,是反映体内血管内皮细胞损伤的特异性分子标志物。ET-1可反映内皮功能失调,而内皮细胞受损被认为是导致糖尿病微血管病变和大血管病变的机制[6]。国外研究证实,糖尿病状态下,眼组织中内皮素的合成和分泌增加,增加的内皮素不仅参与调节血管阻力、眼内组织细胞生长增殖及基质分泌,而且与DR的严重程度呈正相关[7,8]。本研究显示,ET-1水平与DR病程及病变严重程度正相关,与报道基本相符。

炎性反应可通过多种途径导致视网膜损伤,引起和促进DR。因此,根据本研究结果,推测ICAM-1和ET-1水平升高可能是导致DR的危险因素。

综上所述,提示检测ICAM-1和ET-1水平可能有助于预测DR的病变程度,因此对2型糖尿病患者检测sICAM-1与ET-1水平,及早干预,以早期预防和延缓微血管并发症的出现。但是由于本文观察例数较少及病例选择的局限性,尚需大样本、多角度进一步研究。

摘要：目的探讨血浆内皮素1(ET-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)水平与2型糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法散瞳眼底镜检查及眼底荧光造影检查作为分组金标准,在2型糖尿病患者群中测定93例存在视网膜病变患者分为轻度非增殖性DR(NPDR),中重度NPDR和增殖性DR(PDR)组及138例尚未出现视网膜病变患者(对照组)ET-1和ICAM-1水平。结果ET-1和ICAM-1水平在不同临床分型组间差异有统计学意义;ET-1与病程正相关;多元逐步回归分析显示sICAM-1与ET-1、NPDR、PDR相关。结论检测ICAM-1和ET-1水平可能有助于预测DR的病变程度。

关键词：2型糖尿病视网膜病变,细胞间黏附分子1,内皮素1

参考文献

[1]许樟荣,王玉珍,王先从,等.糖尿病慢性并发症与糖尿病治疗关系的调查[J].中华医学杂志,1997,77(2):119-122.

[2]Haidari M,Javadib E,Sadeghi B,et al.Evaluation of C-reactive protein,a sensitive marker of inflammation,as a risk factor for stable coronary artery disease[J].Clin Biochem,2001,34(4):309-315.

[3]朱鸿,施彩虹.血浆内皮素在糖尿病视网膜病变的相关诊断技术展望[J].国际眼科杂志,2005,5(6):1016-1019.

[4]张平,陈亚红,王仕忠,等.血清粘附分子、一氧化氮、低密度脂蛋白胆固醇在冠心病中的作用[J].检验医学,2007,22(4)397-401.

[5]林善.注意对内皮素研究的全面认识[J].中华医学杂志,2002,82(1):3-4.

[6]Ballestshofer BM,Rittig K,Enderle MD,et al.Endothelial dysfunction is detectable in young normotensive first degree relatives of subjects with type2diabetes in association with insulin resistance[J].Circulati on,2000,101(15):1780-1784.

[7]Haefliger IO,Meyer P,Flammer J,et al.The vascular endothelium as a regulator of the ocular circulation:a new concept in ophthalmology-[J].Surv Ophthalmol,1994,39(2):123-132.