受精作用

受精作用（精选12篇）

受精作用 篇1

随着不孕症患者的增多,以体外受精-胚胎移植(IVF-ET)为代表的辅助生殖技术已被广泛应用。目前,体外授精的优质胚胎率约为65%,妊娠率为30%~45%,分娩率为30%[1],其疗效远未达到理想的期望值。尤其是对于IVF-ET反复失败的不孕症患者,其身心均承受着巨大的压力。IVF-ET成功的关键在于采取最佳的超促排卵方案以获得数量适中的优质卵子,受精后一定数量的优质胚胎,与胚胎同步的内膜及足够的黄体支持。中医药辅助治疗有独特优势[2]。本研究以补肾活血调周法配合促性腺激素应用于反复失败的IVF-ET患者, 探讨中西药物协同作用的机理,体现中医药整体调节优势。

1 临床资料

1.1 病例选择

2011-07~2012-06在本院就诊反复IVF-ET失败且欲再行IVF治疗的患者60例,年龄35~42岁,单盲随机分为中药+控制性超排组(观察组)和控制性超排组(对照组),每组各30例,组间病史、病程、内分泌指标、治疗前临床症状评分等均无明显差异,有可比性。本研究经本院伦理委员会批准,所有参加者均签署知情同意书。

1.2 诊断及纳入标准

参照《妇产科学》[3]、《中医妇科学》[4]、《中药新药临床研究指导原则》[5],拟定标准如下:(1)符合西医(排卵障碍)不孕症诊断标准;(2)两次及两次以上IVF-ET失败的患者;(3)男方精液常规正常。

1.3 排除标准

排除遗传、内分泌、感染、生殖器官畸形者;近3个月内接受激素类药物治疗者;未按规定服药无法判定疗效或资料不全影响疗效判定者。

2 方法

2.1 治疗方法

补肾活血调周法:经期用桃红四物汤,加用怀牛膝、泽兰、制香附、炒枳壳、鸡血藤、制首乌等活血调经;经后期用逍遥散加用郁金、淮小麦、鸡血藤、制首乌等促进卵泡发育;经间期用左归丸加用皂角刺等滋养精血,以触发排卵;经前期用五子衍宗汤佐以二仙汤、紫石英、路路通、鹿角霜、巴戟天等以支持黄体。上方由本院中药房统一制备包装,每日1剂。

控制性卵巢刺激方案(COS):于IVF-ET治疗前一月经周期的黄体期(月经21天左右)使用曲普瑞林(商品名:达菲林,德国辉灵公司AG药厂,批号:E02505)降调节治疗,降调节后14天,FSH≦5IU/L,LH≦3IU/L,E2≦30pg/ml;达到垂体降调节后启用卵泡刺激素(FSH,商品名:丽申宝,珠海丽珠集团丽宝生物化学制药公司,批号:100402)促排卵治疗,根据患者卵巢的不同反应程度,给予适量的外源促性腺激素。超促排卵期间密切观察卵泡大小,同时测血清雌激素水平,用药至双侧卵巢有3个优势卵泡(≥17mm)且1个优势卵泡(直径在≥18mm)时,当晚肌肉注射人绒毛膜促性腺激素(HCG,珠海丽珠集团丽宝生物化学制药公司,批号:120302),36小时后在阴道B超引导下穿刺取卵。于取卵后第3天移植胚胎。

在准备月,观察组用补肾活血调周法,连续服用3个月经周期并行COS方案,于第三周期的黄体期实施COS方案。对照组除COS外,不予其他药物。

2.2 观测指标及测定

2.2.1 治疗前后临床症状积分

经色淡黯或经质稀:6分;腰骶痠痛:6分;精神抑郁、善太息:6分;月经或先或后:3分;经量多少不一:3分;经前烦躁易怒:3分;头晕耳鸣:3分;性欲减退:3分;阴中干涩或阴毛、腋毛稀疏脱落:3分。

2.2.2 基础内分泌指标

于服药2个月后放免法检测血清雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH);ELISA法测定抑制素B (INH-B)、抗苗勒激素(AMH)(试剂盒均为美国RB公司生产。)。

2.2.3 疗效指标

分别计算病人促性腺激素的用量(支)以及使用天数,计算病人卵细胞数(穿刺取卵后得到的卵细胞数)、优质卵率[5]、受精率、受精卵分裂率(卵裂率)、优质胚胎率[6]、妊娠率。

2.3 统计学分析

采用SPSS 13.0 for Windows软件包进行统计处理。计量资料以均数±标准差表示,采用t检验;计数资料采用χ2检验。

3 结果

3.1 两组患者临床症状积分比较 见表1。

*P<0.05

3.2 两组患者基础内分泌水平比较 见表2。

*P<0.05

3.3 两组患者促性腺激素用量比较 见表3。

*P<0.05

3.4 两组患者超排卵反应结果比较

观察组在优质卵率、受精率、卵裂率和优质胚胎率等方面均明显优于对照组,结果见表4。

*P<0.05

3.5 两组患者妊娠率比较

观察组30例中妊娠14人,46.7%;对照组30例中10人妊娠,35.3%;两组妊娠率比较无明显差异,观察组有偏高趋势。

4 讨论

中医认为“肾气盛,天癸至”,卵细胞是生殖之源,它禀赋于母体肾气,母体肾气充盛,则卵细胞发育成熟。在试管婴儿应用的超排卵方案中,要求多个卵细胞共同发育,而临床实践中常遇到虽可获得较多卵细胞,但优质卵率、优质胚胎率不高[6,7],从而临床妊娠率不容乐观的现实。本研究所入选患者均为IVF-ET反复失败的不孕症患者,患者行IVF-ET治疗而实施超排卵方案时,临床要求多个卵细胞同时发育并达到成熟,易造成人体肾精、肝血的相对不足,导致卵巢储备能力的进一步降低。加之患者就诊期间紧张心理情绪,超排卵用药影响机体的内环境等,致使肝气疏泄失调,气机不利,冲任失畅,造成生卵、育卵、排卵障碍。由此可见肾气不足、气虚血瘀是本病的基本病机,据此确立补肾活血调周法之治疗方法。补肾益天癸,则卵子生发有源而源泉不竭,是治疗本病的根本大法。活血调周一方面养肝血滋肾阴,则卵子滋养有源;一方面畅达肝气,冲任二脉气血流畅,以利卵子的健康生长。

本研究参照月经周期的生理改变而创立的中药补肾活血调周法,将辨证与辨病有机结合在一起,经后期滋肾益阴、养血调冲为主,兼顾肾气以促进卵细胞发育;经间期在滋养精血的基础上辅以助阳调气活血之品,于静中求动,以触发排卵;经前期温补肾阳,维持正常生理功能,使黄体发育良好,功能健全;行经期因势利导,活血调经以推动气血运行,使胞宫排经得以通畅。四期治疗各有侧重,但总以补肾活血为核心,为IVF-ET创造有利的生殖内环境。

本研究结果表明,补肾活血调周法可与外源性性激素发挥协同作用,减少外源性性激素的用量,提高获卵数、提高卵细胞质量,进而提高优质卵率、受精率、优质胚胎率、妊娠率。提示中药可发挥整体调节之优势,与外源性性激素协同作用,互补长短,相辅相成,调整机体潜在的自稳调节系统。临床用来监测卵巢储备功能的指标主要包括早卵泡期E2、FSH、INH-B、基础卵巢体积、窦状卵泡计数等。血液中INH-B浓度在早卵泡期随FSH水平的升高而下降,提示INH-B可直接反映卵巢储备能力,研究表明INH-B可以作为卵巢储备和生殖结局的独立的预测指标[8]。AMH对于卵泡发育具有重要的调节作用,是目前发现的唯一抑制始基卵泡的生长因子[9]。研究发现月经第三天基础的血清AMH值可以较以上指标更加准确、早期预测卵巢储备的变化。

本研究显示观察组用药前后血清抑制素B、抗苗勒激素水平明显增高,证实此法可改善卵巢储备功能。

参考文献

[1]Branco AC,Acheur-Frydman N,Kadoch J,et al.In vitro fertilization and embrgo transfer in seminatural cycles for patients with ovarian aging.Fertil Steril,2010,84(4):875.

[2]尤昭玲,周芳.中药“六期七步曲”应用于IVF-ET之路径浅探.中国中医药科技,2011,18(1):48.

[3]乐杰.妇产科学.5版,北京:人民卫生出版社,2002:416.

[4]马宝璋.中医妇科学.6版,上海:上海科学技术出版社,1998:206.

[5]中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则.2002:157.

[6]陈丹青,石一复.促排卵周期卵泡发育与胰岛素样生长因子1及其受体mRNA关系的研究.中华内分泌代谢杂志,2002,18(1):36.

[7]Nuttinck F,Charpigny G,Mermillod P,et al.Expression of components of the insulin-like growth factor system and gonadotropin receptors in bovine cumulusoocyte complexes during oocyte maturation.Domest Anim Endocrinol,2008,27(2):179.

[8]Lulxnsky J,Lanes B,Roussev R,et al.Ovarian antibodies,FSH and inhibin B:independent markers associnted with unexplained infertility.Hum Reprod,2000,15(5):1046.

[9]Piltonen T,Morin-Papunen L,koivunen R,et al.Serum anti-Mullerian hormone levels remain high untill late reproduetive age and decrease during metformin therapy in women with polyeystic ovary syndrome.Hum Reprod,2005,20(7):1820.

受精作用 篇2

本节内容是高中生物学中的一个难点和重点，并和前面学习的有丝分裂、遗传规律有很大的联系，尤其对于遗传规律当中的计算至关重要，因此，这个地方也是理解遗传规律的关键所在。所以在讲解过程中要分析透析，尽量让学生听起来浅显易懂。

本节课在进入减数分裂内容讲解之前，利用了试管婴儿导入，这在激发学生的学习兴趣上起到了较好的作用。让学生将生物学知识和现实生活联系起来，同时也让学生知道我们所学习的知识不是纸上谈兵，而是对人类的生活和发展有很大的推动作用的，从而认识到生物学的重要性。

由于减数分裂和受精作用是微观、动态、连续变化的过程，给准确认知带来困难，因此成为教学的难点。为了突破教学难点，本节课一改以往只是通过介绍减数分裂的过程来理解减数分裂过程中染色体的行为变化的教学方法，而是采用比较教学法，减数分裂是有丝分裂的特殊形式，在前面的学习中，学生就已经掌握了细胞、染色体、有丝分裂、有性生殖等相关知识，这为本节的学习奠定了基础，通过比较有丝分裂、减数第一次分裂、减数第二次分裂的不同变化，归纳出减数分裂的特点。这样避免出现两个知识点的混淆，学生在学习过程中克服了知识抽象带来的理解上的困难，收到了良好的效果。

受精作用在初中生物学中，学生已经学过，但是由于时间太长了，学生已经忘得差不多了。本节课在进入课本知识点的学习之前的导入过程创设了1个情境：两个小布什的图像，看上去好像和本节课所要学习的知识点关系不大，其实对引发学生的学习兴趣和将生物学与现实相联系，都能起到一个很好的作用。教师在这部分教学过程中需要通过资料信息来引导学生思考回忆起所学内容，并且在解释配子中染色体组合的多样性和受精卵多样性的时候，应多举实例，加深学生的印象。

最后，要对有性生殖的过程进行总结，加深学生对有丝分裂、减数分裂和受精作用之间关系的理解。

本节课的重点是让学生领会减数分裂过程中染色体的变化情况。但是，在教学中我发现有以下问题：

1、学生对于染色体、染色单体、同源染色体的概念分辨不清。对于分裂过程中染色体的形态特征不能很好地辨认。

2、学生观察减数分裂动画演示后，不能很好地摆放染色体位置。对于在什么阶段摆放染色体，什么阶段染色体变为含有两条姐妹染色单体不理解。

什么是人工受精 篇3

人工授精是通过非性交方式将精液注入女性生殖道内，使不育夫妇受孕，以达到受孕目的的一种技术。是为男性原因造成不育的夫妇,能生养孩子的一种补救方法。

人工授精在不孕症的治疗方法中，是一种简单、经剂而非手术性的治疗方式。但由于人工授精尤其是供精者人工授精涉及到法律、道德、伦理等社会问题及遗传病、传染病发生等一系列问题,因此必须严格掌握,切莫滥用。

人工授精根据所选用精液来源不同，分为丈夫精液人工授精（AIH）和供精者精液人工授精（AID）。

二、人工授精的适应症

1、丈夫精液人工授精（AIH）的适应症

①男性因性功能障碍、生殖器畸形及心理因素等导致性交不能而不育。如阳痿、早泄、不射精、逆行性射精、尿道下裂、阴茎屈曲畸形、严重的阴茎海绵体硬结症等。

②男性因少精、弱精、液化异常等而不育。

③女性因宫颈粘液分泌异常、生殖道畸形及心理因素导致性交不能等而不育。如精子-宫颈粘液间不相容、阴道炎、子宫颈炎或宫颈糜烂、宫颈分泌物异常(偏酸或有抗精子抗体)、阴道畸形、阴道口狭窄或痉挛、子宫颈管或颈口狭窄、子宫位置异常等。

④免疫性不育，如存在抗精子抗体等。

⑤原因不明的不育。

不过，夫精人工授精，妻子的输卵管要通畅，丈夫要拥有足够的精子。如果丈夫患了癌症，需要接受化学治疗或者放射治疗，他的精子可以预先冷冻储备起来，以备不时之用。

2、供精人工授精（AID）的适应症

①无精症、死精症、严重少精症、弱精症和畸精症。

②输精管绝育术后期望生育而复通术失败者等。

③男方患有不宜生育的严重遗传性疾病、严重躯体疾病、精神心理障碍。

④夫妻间特殊的血型或免疫不相容因素所导致的不孕。

⑤严重母婴血型不合而久治无效，不能得到存活新生儿。如Rh血型或ABO血型不合等。

⑥原因不明的不孕。

3、禁忌症

有下列任意一种情况存在，都不适用于人工授精。

①女方因输卵管因素造成精子和卵子结合障碍,如双侧输卵管阻塞或切除等。

②男方和（或）女方患有生殖泌尿系统急性感染或性传播疾病。

③女方患有不宜生育的严重遗传性疾病、严重躯体疾病、精神心理障碍等。

④女方接触致畸量的射线、毒物、药品并处于作用期。

⑤女方有酗酒、吸毒等不良嗜好。

三、人工授精术怎样进行？

宫腔内人工授精（IUI）是目前较为常用的人工授精方法，通常在月经周期第5天（见红开始计算）进行。通过定期B扫描和血激素水平监测，追踪卵子的成熟度，待卵泡成熟后，注射促排卵药物诱导排卵。同时通过精液洗涤去除精液中的粘液、杂质以及死精等，将活力良好的精子集中浓缩于0.5毫升的人工培养液中，用一根细导管直接送入子宫腔内，以便精子与即将排出的卵子结合，达到受精怀孕的目的。这些经过精心细选的“精锐”部队就会奋奋力向前去完成自己的使命。在植入体内的过程所需的时间很短，病人并不会有不适感。

受精时机的选择是人工授精成功与否的关键因素之一。医生根据月经史、基础体温、宫颈评分、尿LH测定、B 超监测、血激素水平等指标来综合判断排卵时间，适时人工授精。

四、为什么要行促卵泡成熟后的人工授精术？

在自然情况下，女性每一月经周期一般只有一个卵子发育成熟后排出卵巢，被输卵管伞端捕获后送入壶腹部与精子相见受精。为提高怀孕机会，在进行人工授精之前，须根据患者具体情况，先服用或注射排卵药，刺激卵巢产生教多的卵子。并利用B超扫描，配合血激素检查查，追踪卵子的成熟度。待卵泡成熟后，注射hCG，促使卵子在36 ~ 40小时后排出。在这样严密的监控下，准确的掌握排卵时间，再利用人工授精的方法，适时的将精子送入体内，这样就增加了输卵管伞端捕获卵子的机会，相应提高了妊娠率。

五、接受人工授精能增加受孕率吗？

有些病人会质疑，既然服用(或注射)了排卵药，只要在排卵前进行性交，也可达到受精怀孕的目的。为何还要用人工方法将精子放入子宫腔内呢？根据国外的研究报告显示，注射排卵药配合人工授精疗法，其怀孕率要比只注射排卵药或只接受人工授精疗法之怀孕率高出许多。特别是针对子宫颈因素的不孕患者，服用排卵药并监控卵子的发育与成熟，准确的在排卵前接受人工授精术，20% 的病人都可成功的怀孕，且累计成功率达到70%左右。

需要指出的是在行人工授精前，必须建立辅助生殖技术病历、签署《知情同意书》，并进行必要的术前检查。相信通过我们共同的努力，能帮助更多的朋友圆梦，早日实现您心中的梦想。

受精作用 篇4

关键词：体外受精,皮质颗粒,多精受精

皮质颗粒(cortical granule,CG)的皮质反应和透明带反应是保证正常受精和阻止多精受精的两个重要生理功能[1]。国内外关于动物CG与多精受精的相关性有较多的研究,而人体外受精(in vitro fertilization,IVF)中CG是否在保证正常受精及阻止多精受精方面发挥了重要作用还未见详细报道。本研究旨在研究小鼠及人IVF中CG与多精受精的相关性,以期在IVF程序中,尽可能选择适合患者的超排卵方案、合适的受精时机和恰当的IVF培养液等,使卵母细胞的胞核和胞质同步成熟,以减少多精受精,提高IVF的成功率。

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.1.1 动物

8~12周龄的健康昆明雌性小白鼠,体重20~25 g;14~16周龄健康昆明雄性小白鼠(用于获取精子),普通级,均购自河南省实验动物中心。1.2.2卵母细胞及分组2004年2月~2004年12月在郑州大学第一附属医院生殖医学中心自愿要求实施IVF的52对受精率≤70%的不孕症夫妇;女性年龄24~42岁,平均(31.3±3.2)岁;不育年限(5.6±3.1)年(1~13年);共获卵546个,本研究收集受精17~20 h的3PN卵17个、受精72 h仍为2PN的发育阻滞卵4个。所有用于本研究的废弃卵母细胞均经患者知情同意和生殖医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 小鼠体内未成熟卵的获取

雌性小白鼠腹腔注射人绝经后促性腺激素(human menopausal gonadotropin,hMG)10 IU,48 h后颈椎脱臼法处死小鼠,立即无菌开腹取出卵巢,放入盛有10%SPS1023液的平皿中,在解剖镜下,用1 m L注射器的针尖刺破卵巢表面的卵泡,释放卵丘复合体(oocyte-cumulus cell complex,OCC),选择GV期卵。一部分GV期卵用3%戊二醛固定,一部分GV期卵继续在体外成熟培养(in vitro maturation,IVM)液中培养12、24、36、48和60 h后再根据实验固定于3%戊二醛中,经异硫氰荧光素联接的花生四烯酸(fluorescein isothiocyanate-peanut agglutinin,FITC-PNA)标记后分别观察CG的分布和迁移情况。

1.2.2 小鼠精子的收集和获能

雄鼠用颈椎脱臼法处死,立即取出附睾尾,用1 m L注射器的针头挤压附睾尾,排出精子团,放入1006液(SAGE公司,美国)中,在培养箱中培养1~2 h,使精子获能。

1.2.3 小鼠常规体外受精

调整获取的小鼠活精子浓度,将体外成熟的小鼠卵母细胞移入受精皿。

1.2.4 控制性超排卵、体外受精-胚胎移植(in vi-tor fertilization-embryo transfer,IVF-ET)

使用达必佳长方案控制性超排卵,当有1个卵泡直径达到18 mm以上时,当晚肌注人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)10 000 IU,36 h后在阴道B超引导下穿刺取卵。术后4~6 h与已处理好的精液按一定浓度行常规IVF,16~18 h后观察受精情况,并继续培养至48~72 h,移植2~3个胚胎入宫腔。取卵后每日补充黄体酮80 mg。胚胎移植后14 d验尿和血中的h CG,孕6~8周时B超见宫腔内孕囊和胎心搏动为临床妊娠,具体操作按本中心常规进行[2]。

1.2.5 荧光标记卵母细胞

卵母细胞在磷酸缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)中洗3次,放入3%戊二醛中固定1 h,然后用PBS洗3次,放入含0.1%Triton-100的PBS中渗透10 min,用PBS洗3次,将卵母细胞放到含10 mg/L的FITC-PNA的PBS中,置于暗处孵育40 min,随后用PBS洗4次,充分洗掉表面的FITC-PNA,盖上盖玻片,甘油树酯封片,置暗处待观察。

1.2.6 荧光观察

将封好的玻片放到Leica荧光镜下,用激发波长为488 nm的荧光观察CG的分布情况。

1.2.7 卵母细胞CG分布的分级标准

Ⅰ级:CG位于卵母细胞核外胞质中,可见核外胞质均匀的荧光;Ⅱ级:CG开始向细胞膜方向迁移,卵母细胞质膜内侧有较强的光圈,皮质中较少,荧光较弱;Ⅲ级:绝大多数CG已排布在质膜下,形成单层的光环,说明CG已完成迁移,或者已释放。

1.3 统计学方法

采用SPSS11.0软件包进行统计分析,率的比较采用χ2检验和趋势χ2检验。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 小鼠不同受精状态的卵母细胞内CG的分布情况

将同一批小鼠的GV卵在体外培养成熟后行IVF,选取不同受精状态的卵母细胞,荧光标记后观察CG情况(见表1)。2PN的卵母细胞中92.2%的CG分布为Ⅲ级;1PN的卵母细胞中57.1%的CG分布为Ⅲ级;而3PN的卵母细胞中仅8.6%的CG分布为Ⅲ级。可见3PN卵母细胞中CG释放不完全,因而不能阻止多精受精。

注:覮2PN和3PN组间比较,χ2=33.59,P<0.01

2.2 小鼠卵母细胞的体外培养时间对CG分布及受精情况的影响

小鼠GV期卵母细胞在体外培养24 h达到MⅡ期再延长培养时间至48和60 h,分别用荧光标记CG及进行体外受精(见表2和表3)。结果显示:体外培养24 h时,93.3%的卵母细胞CG标记为Ⅲ级,随着培养时间分别延长到48和60 h,CGⅢ级所占比例分别降至73.3%和20.0%;同时体外受精的3PN率随着培养时间的延长而上升;差异均具有显著性(P<0.01)。

注:覮趋势χ2=17.64,P<0.01

注:覮2PN趋势:χ2=24.78,P<0.01;3PN趋势:χ2=14.78,P<0.01

2.3 人卵母细胞不同受精状态CG标记状态

本研究共收集到3PN卵母细胞17个,2PN发育阻滞卵母细胞4个。分别固定后荧光标记CG(见表4)。结果显示:2PN发育阻滞卵母细胞中的CG100.0%为Ⅲ级;3PN卵母细胞中仅有17.6%的CG为Ⅲ级,82.4%的CG分布为Ⅰ+Ⅱ级。

注:覮χ2=26.48,P<0.01

2.4 人多精受精与回收卵母细胞数目及受精率的关系

将52例患者按回收的卵母细胞受精后有无多精受精分为2组:第一组有≥3PN的卵母细胞为多精受精组,第二组无≥3PN的卵母细胞为非多精受精组,比较两组回收的卵母细胞数目和受精率(见表5)。结果示:两组的受精率差异无显著性;而多精受精组回收卵母细胞的数目明显偏高,差异有显著性,P<0.05。

注:覮t=2.65,P<0.05

3 讨论

所谓多精受精是指受精时有两个或两个以上的精子穿入卵母细胞。研究者普遍认为多精受精是导致早期胚胎死亡、流产和胎儿遗传性疾病的主要原因。大多数动物的卵母细胞在其生长发育过程中可获得阻止多精受精的能力[3]。自然状态下多精受精的发生率为1%~3%,IVF过程中多精受精的发生率明显增加,可达到2%~10%[4]。

CG的皮质反应和透明带反应是阻止多精受精的两个重要生理功能,受精后CG发生皮质反应,内容物胞吐于卵周间隙中,由于胞质收缩,卵周间隙加大。CARNEIRO等[5]认为:这是因为CG内容物胞吐后形成了所谓的CG被膜;这些排出的物质,是一些卵过氧化物酶类,它们可以通过透明带上的小孔到达透明带表面,损坏精子受体,达到阻止多精入卵的目的。GHETLER等[6]用电子共聚焦荧光显微镜观察荧光素标记的牛的未成熟和成熟卵母细胞中CG的分布情况,发现所有未成熟的卵母细胞在胞质中的CG呈丛状分布,给其电子脉冲,CG亦不能正常释放;行IVF,多精受精率高达94%;在体外培养22 h后,81%的未成熟卵母细胞排出第一极体(polar body 1,PB1),达到MⅡ阶段,此时有33%的卵母细胞CG正常释放,且成熟卵母细胞体外受精的多精受精率仅为15%;因此他们认为CG的排放在阻止多精受精方面起了重要的作用。FENG等[7]也认为卵母细胞的成熟度,特别是CG的形成和皮质反应,在多精受精的发生中起着非常重要的作用;他们的实验数据表明:不成熟的卵母细胞中,多精受精率高达32%~42%,而成熟卵母细胞中发生率仅为6%。

本研究分别观察了小鼠和人不同受精状态时CG的分布情况,均发现2PN卵母细胞中的CG呈Ⅲ级分布的比例远远高于3PN的卵母细胞。说明胞质成熟的卵母细胞中的CG能很好地释放,从而阻止多精受精;相反若CG释放不完全,使皮质反应不良,则不能阻止多精受精。SCHALHOFF等[8]对1例行IVF有多精受精史患者的卵母细胞进行超微结构分析,发现同其他IVF患者正常受精的卵母细胞相比,其CG数量相对较少,因此指出:皮质内足够的CG对正常受精必不可少,如若不足,可导致多精受精。此观点与本研究结果一致。同时本研究还观察了人多精受精与回收卵母细胞数量的关系,发现多精受精常发生在取卵数目较多的患者中。分析原因认为:在募集较多的卵母细胞中,可能存在质量差的卵母细胞,此类卵母细胞易出现细胞成熟度不够尤其是胞质成熟度差的情况,故此类卵母细胞易发生多精受精现象。

GHETLER等[6]认为:卵母细胞在排卵后,如不及时受精即趋向老化,而老化的卵母细胞的CG内容物也可以自然外倾或整个CG外排,或向内移到核周区;这样的卵母细胞即使受精也是多精受精,因为它不能进行正常的皮质反应,也阻止不了多精受精。未成熟或过熟的卵母细胞都可以降低受精率[9]。卵母细胞老化衰老时,首先是CG可能发生肿胀和破裂,一部分CG向细胞质内部移动,另外一部分通过胞吐作用而排入卵周间隙中,数量大大减少[10]。本研究将小鼠卵母细胞在体外培养达到MⅡ期后,再延长培养时间至48 h和60 h,使卵母细胞趋向老化,用荧光标记CG及进行体外IVF,发现卵母细胞老化后,CGⅢ级所占比例显著下降,而3PN率则明显上升。可见过熟的卵母细胞随着CG数量的减少,其受精率明显下降,且阻止多精受精的功能亦随之降低。

与体内受精的结果相比,IVF的结果尚有很大的潜力可以挖掘,尤其是在减少多精受精方面,很有希望在方法学上发现新的突破口。完全成熟且透明带正常的卵母细胞在恰当的条件下与一定浓度的精子相互作用才能完成正常受精,无论在体内还是体外,卵母细胞生长发育不完全,或胞质成熟不完全,或受到不恰当的激素刺激后造成卵母细胞本身的异常,均可导致多精受精。IVF液的组成成分不当,或其他环境条件不合适,也是造成多精受精的重要因素。因此,在IVF程序中,应尽可能选择适合患者的超排卵方案、合适的受精时机和恰当的IVF培养液等,使卵母细胞胞核和胞质同步成熟,以减少多精受精,提高IVF的成功率。

参考文献

[1]DE LESEGNO CV,REYNAUD K,PECHOUX C,et al.Ultrastructureof canine oocytes during in vivo maturation[J].Mol Reprod Dev,2008,75(1):115-125.

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[9]SWAIN JE,POOL TB,et al.ART failure:oocyte contributions to un-successful fertilization[J].Hum Reprod Update,2008,14(5):431-446.

受精作用 篇5

一、选择题(每小题5分，共60分)1.(2012·江苏高考)观察到的某生物(2n＝6)减数第二次分裂后期细胞如右图所示。下列解释合理的是()A．减数第一次分裂中有一对染色体没有相互分离 B．减数第二次分裂中有一对染色单体没有相互分离 C．减数第一次分裂前有一条染色体多复制一次 D．减数第二次分裂前有一条染色体多复制一次 2.1.(2011·江苏高考)右图为基因型 AABb 的某

动物进行细胞分裂的示意图．相关判断错

误的是()A．此细胞为次级精母细胞或次级卵母细胞 B．此细胞中基因a是由基因A经突变产生的 C．此细胞可能形成两种精子或一种卵细胞 D．此动物体细胞内最多含有四个染色体组

3．下面是对高等动物通过减数分裂形成的♀、♂配子以及受精作用的描述，其中正确的是(A．每个卵细胞继承了初级卵母细胞1/4的细胞质

B．同源染色体进入卵细胞的机会并不相等，因为一次减数分裂只形成一个卵细胞 C．整个精子进入卵细胞，完成受精作用 D．进入卵细胞并与之融合的是精子的头部

4．某同学学完“减数分裂”一节后，写下了下面四句话，请你帮他判断一下哪句话是正确的(A．我细胞内的染色体中来自爸爸的比来自妈妈的多

B．我和弟弟的父母是相同的，所以我们细胞内的染色体也是完全一样的 C．我细胞内的每一对同源染色体都是父母共同提供的 D．我弟弟细胞内的每一对同源染色体大小都是相同的

5．进行有性生殖的高等动物的三个生理过程如图所示，则1、2、3分别为()

A．有丝分裂、减数分裂、受精作用 B．有丝分裂、受精作用、减数分裂 C．受精作用、减数分裂、个体发育 D．减数分裂、受精作用、个体发育

6.嘉兴一中期中下图中，可表示次级卵母细胞分裂过程某一阶段示意图是()

7.忻州一中期中下列有关受精作用的叙述错误的是()A．合子中全部的遗传物质一半来自父方，一半来自母方 B．受精时，精子和卵细胞的染色体会合在一起 C．合子中的染色体一半来自父方、一半来自母方

D．合子中的染色体数目与本物种体细胞的染色体数目相同

8.湖南期中下列关于DNA分子和染色体数目的叙述，正确的是()A．有丝分裂间期细胞中染色体数目因DNA复制而加倍

B．有丝分裂后期细胞中DNA分子数目因染色体着丝点分裂而加倍))1

C．减数第一次分裂后细胞中染色体数目因同源染色体分离而减半 D．减数第二次分裂过程中细胞中染色体与DNA分子数目始终不变

湖北期中下图为人体生殖器官中某细胞的核DNA含量变化曲线图，下列说法错误的是9.()

A．①④属于间期

B．姐妹染色单体分离发生在②和⑥时期内 C．⑤时期细胞内没有同源染色体

D．a过程为有丝分裂，b过程为减数分裂

湖北四校联考某同学总结了四点有关减数分裂、染色体、DNA的知识点，(只考虑核10.内DNA)其中不正确的是()A．次级精母细胞中的DNA分子正好和正常体细胞的DNA分子数目相同

B．减数第二次分裂后期，细胞中染色体的数目等于正常体细胞中的染色体数目 C．初级精母细胞中染色体的数目正好和DNA分子数目相同 D．同一生物体减数分裂产生的精子，基因组成可能不同

11．与精子的形成相比，卵细胞的形成过程中不会出现的是()A．卵原细胞先进行减数分裂，再通过变形形成成熟卵细胞 B．染色体复制一次，细胞连续分裂两次

C．初级卵母细胞和次级卵母细胞都进行不均等的细胞质分裂

D．减数分裂结束后，卵细胞的染色体数目只有体细胞染色体数目的一半

大庆模拟如图为有关细胞分裂的概念图，下列说法正确的是()12.A．①过程中无纺锤体和染色体出现，只发生在哺乳动物的红细胞中 B．②过程中，染色体与核DNA分子在数目上具有平行关系 C．②过程有利于维持亲子代细胞遗传物质的稳定性

D．③过程中具有2个细胞周期，精原细胞以②或③的方式增殖 13.如图是某生物的细胞分裂示意图，下列叙述正确的是()

A.若图Ⅰ中的2和6表示两条Y染色体，则此图一定表示次级精母细胞 B.图Ⅱ中①上某位点有基因B，则②上相应位点的基因可能是b C.图Ⅱ细胞中染色体、染色单体、DNA数量分别为2、0、4 D.该生物体细胞中染色体数最多有16条

14.如图是同一种动物体内有关细胞分裂的一组图像，下列说法中正确的是

A.①②③④都具有同源染色体 B.动物睾丸或卵巢中不可能同时出现以上细胞 C.④的子细胞是精细胞或极体 D.上述细胞中有8条染色单体的是①②③ 15.对下面5个图的有关说法，错误的是()

A.图1和图3所示的细胞处于图5中的cd段；图1细胞可能会发生染色体交叉互换 B.图2细胞中含有0条染色单体，染色体数与DNA分子数之比为1∶1 C.图3产生的子细胞称为次级卵母细胞，图4细胞是图3细胞最终形成的子细胞 D.图5中bc段发生于细胞分裂的间期，de段形成的原因是着丝点分裂

16.图示细胞分裂和受精作用过程中，核DNA含量和染色体数目的变化，据图不能得出的是()

A.a阶段为有丝分裂，b阶段为减数分裂 B.L→M所示过程与细胞膜的流动性有关 C.GH段和OP段，细胞中含有的染色体数是相等的 D.MN段发生了核DNA含量的加倍

17.下图一表示某动物精原细胞中的一对同源染色体。在减数分裂过程中，该对同源染色体发生了交叉互换，结果形成了①～④所示的四个精细胞。这四个精细胞中，来自同一个次级精母细胞的是()

A.①与② B.①与③ C.②与③ D.②与④

18.果蝇的体细胞中有4对染色体，在精子的形成过程中，会出现两次染色体排列在细胞中央和两次染色体移向细胞两极。下列有关叙述不正确的是

A．第一次与第二次染色体排列在细胞中央时细胞内的染色体数目分别是8条和4条 B．第一次与第二次染色体排列在细胞中央时细胞内染色体形态分别是5种和4种 C．第一次与第二次染色体移向细胞其中一极的染色体数目分别是8条和4条 D．第一次与第二次染色体移向细胞其中一极的染色体形态分别是4种和4种

19.如图是马蛔虫（2n=4）精巢细胞正常分裂过程中，不同时期细胞内染色体、染色单体和核DNA

含量的关系图，下列分析错误的是（）

A、a、b、c分别表示染色体、核DNA和染色单体 B、Ⅱ时期的细胞叫次级精母细胞

C、Ⅰ中有4个染色体组，Ⅱ中有2个染色体组 D、由Ⅱ变为I可表示细胞内发生着丝点分裂的过程 20.人的体细胞中有23对同源染色体，下列表达不正确的是

A．男性的一个体细胞中至少有一条染色体来自祖父 B．其中一半染色体来自父方，另一半来自母方

C．常染色体必是来自祖父、外祖父、祖母、外祖母各占1/4 D．女性的一个体细胞中至少有一条染色体来自祖母

二、非选择题(共40分)南安一中期中(12分)下列图1和图2分别表示某动物(2n＝4)体内细胞正常分裂过程21.中不同时期细胞内染色体、染色单体和DNA含量的关系及细胞分裂图像，请分析回答：

(1)图1中a、b、c柱表示染色单体的是________，图1中所对应的细胞中一定不存在同源染色体的是________。

(2)图1中Ⅱ的数量关系对应于图2中的________，由Ⅱ变为Ⅲ，相当于图2中________→________的过程。由Ⅰ变成Ⅱ的过程中，细胞核内发生的分子水平的变化是______________。

(3)图2中甲细胞正在进行______________分裂，含有____________条染色单体；该动物体细胞含有__________________条染色体。

(4)图2中具有同源染色体的细胞有__________________，染色体数：染色单体数︰核DNA数＝1︰2︰2的细胞是 ________________________。

(5)图2中乙细胞产生的子细胞名称为 ________________________________。

22．(14分)下图甲、乙、丙表示某二倍体生物细胞有丝分裂和减数分裂过程中DNA含量的变化。请回答相关问题：

(1)图中ab段上升的原因相同，均是________________。

(2)图甲中bc段处于有丝分裂的______________期，此时染色体与染色单体的数目之比为______________ ；在减数分裂中，处于图甲bc段的细胞中 ____________(填“可以”或“不可以”)含有同源染色体。

(3)图甲、丙中，cd段下降的原因分别是________________________________、____________________________________。

(4)细胞在de段时，一定含有同源染色体的是____________；可能含有4个染色体组的是____________。(填“甲”、“乙”、“丙”)

衢州联考(14分)下图所示为某雄性动物生殖细胞形成时细胞核内DNA含量变化的曲23.线图和细胞内染色体的变化图。设该动物体细胞核中DNA含量为2N，请回答：

(1)A是__________________细胞，A图所示细胞代表的动物体内有________对同源染色体，C是____________________细胞；C图所示的细胞中有________个DNA分子。与B、C细胞相对应的曲线段依次是______________、________________。(以横轴上的数字表示)。(2)曲线段a—b时期DNA含量变化是由于______________________________________________。曲线段b—c时期DNA含量变化是由于______________________________________。

(3)分裂过程中同源染色体若有交叉互换，发生在曲线中的哪一曲线段__________________。(以横轴上的数字表示)6—8的过程中DNA分子数目变化是____________________的结果。

24.某种哺乳动物基因型为AaBb，如图分别是两个该种动物的两个细胞结构示意图，请据图回答：

(1)图中细胞结构与乳酸菌的最主要的区别是________。

(2)左上图细胞是该动物__________器官中的一个细胞，细胞名称是_________，该细胞中有________个染色体组。

(3左上图细胞发生了变异，该变异来源于__________。(4)左上图细胞的分裂最终产生的子细胞基因型为：_____。(5)右上图细胞的名称是_____________________________ 25.甲图表示某高等雌性动物在细胞分裂时的图形，乙图表示某种生物的细胞内染色体及DNA相对量变化的曲线图。根据此曲线和图回答下列问题：

(1)甲图中的A、B分别处于什么分裂什么时期？ A：_________，B：_________。

(2)乙图中8处发生的生理过程叫________________。

(3)乙图细胞内含有染色单体的区间是________________和8～11，不含同源染色体的区间是_________________。

(4)若该生物体细胞中染色体为20条，则一个细胞在4～5时期染色体数目为_______条。(5)同源染色体的分离发生在_______(4或12)。(6)时期6与11的共同点是_____________。

(7)甲图中B细胞对应乙图中的区间是___________，形成的子细胞是__________________。

答案

1A2A3D4C5D6B7A8C9C10C,11A12C13B,14-18均C,19D20C 21【答案】(1)b Ⅲ、Ⅳ

(2)乙 乙 丙 DNA分子的复制和有关蛋白质的合成(3)有丝 0 4(4)甲、乙 乙、丙

(5)次级卵母细胞和(第一)极体

22【答案】(1)DNA分子复制(2)前、中 1:2 可以(3)着丝点分裂 同源染色体分离，细胞一分为二(4)乙 甲

23【答案】(1)次级精母 两 初级精母 8 5－6 3－4(2)DNA分子复制 同源染色体分离，细胞一分为二(3)3－4 受精作用

24答1）略2）睾丸 初级精母细胞 2 3）基因突变极体

人类受精卵也有“脉搏” 篇6

据介绍，当前的人工授精技术成功率不高，往往要先准备多个卵子进行人工授精，然后挑出一些看来比较健康的受精卵植入子宫中，期待其中会有能成功发育的。这有两方面风险，一是挑出的这些受精卵仍然可能都失败，另一方面也可能运气太好，植入的多个受精卵都成功发育而产生多胞胎，给产妇带来较大风险。

因此，判断受精卵的健康状态对人工授精来说非常重要。前不久曾有研究人员发现，实验鼠受精卵内部的细胞质存在一种类似脉搏的跳动，并且这种跳动的特征与受精卵健康程度相关，比如跳动速度越快的受精卵健康水平越高。

本次研究则首次从这个角度对人类受精卵进行了观察。英国加的夫大学的研究人员发现，人类受精卵中也会出现类似脉搏的跳动，并且其跳动特征也可以与受精卵的发育变化情况相关联。

黄牛受精的机理探讨 篇7

1. 受精必知因素

(1) 卵细胞受精的时间卵细胞由滤泡排出后, 其本身不能运动, 而是依靠输卵管的蠕动和纤毛上皮细胞的纤毛运动把卵细胞向子宫方向运输, 所以在输卵管中移动很慢, 需要20～24 h, 而受精能力的时间只有10～20 h, 如果超过或提前输精, 都不可能受精。

(2) 卵细胞受精的部位卵细胞从卵巢中排出后, 沿着输卵管一直向子宫方向移动, 但受精作用只能在输卵管的上1/3以上进行 (包括输卵管壶腹部) 。为什么其他部位就不可能受精呢?因为当卵子沿输卵管向下移动时, 卵子要不断背负输卵管内的蛋白质, 越向下移动, 背负的蛋白质层就越厚, 该层妨碍着精子酵素对卵细胞放射冠的融解, 并且阻止精子进入卵子内。而卵子在排出后4～8 h才能移至输卵管上1/3以上的部位, 人工授精可克服这一不利因素, 因为牛如果是直接交配、精液只能射入阴道, 而进入阴道的精子要经受距离、p H值等不利因素的影响, 致使到达子宫与输卵管的精子量显著减少。而人工授精是直接将精液输送到子宫内, 其距离是本交的距离的数十分之一。

(3) 精子运动的速度精子在生殖道内运动的速度约每分钟2～5 mm, 依此速度计算, 授精后的精子4～14 h就能够达到输卵管上1/3的部位。正常情况下, 精子维持受精能力的时间是30 (34～48) h。所以精子的运动速度与输精时间是受精的必需因素。

(4) 发情后的排卵时间一般情况下, 牛发情的持续时间为1～3 d, 排卵时间为发情后的10～20 h。有关专家指出, 黄牛无论年龄大小, 排卵时间一般都在晚上9-10点钟, 所以有朝发情暮配种, 暮发情朝输精的经验之说。

2. 受精生理过程

受精过程是精子与卵子结合的一种较为复杂的生理过程, 在结合中两性生殖细胞经过相互同化, 形成了一个新的生命细胞———合子。其受精的生理机质主要分3个阶段进行。

(1) 精子溶解放射冠这是在大量精子的参与下精子溶解卵子放射冠细胞的阶段。由于卵细胞的外周被放射冠所包围, 妨碍精子接近卵细胞, 这时接近卵细胞的精子能够释放一种蛋白分解酶, 将放射冠细胞溶解, 并把卵细胞从放射冠中释放出来, 这样精子才能穿进卵细胞。

(2) 精子进入卵细胞大量的精子经过竞争和释放蛋白酶之后, 已耗尽无几, 幸存活着的精子可在卵细胞透明膜的任何一个部位穿进卵细胞, 同一时间进入卵细胞的精子可达几十个, 但二次竞争的结果, 只能有一个或两个精子继续穿过卵黄膜进入卵细胞体内, 其余精子可加强合子的分裂和作为合子的营养物质。

(3) 合子的形成发育是精子与卵子互相同化的生理过程。在这一过程中, 精子进入卵细胞后, 首先是尾部脱落, 头部同化卵细胞的原生质, 而使体积迅速增加到与卵细胞同样大小, 此后卵子的核与精子逐渐接近, 并互相同化融合, 最后形成新的细胞———合子。合子经过多次分裂成桑椹胚, 最后形成囊胚。这一系列的生理过程都是在输卵管内进行的。所形成的囊胚要在输卵管内发育2 d左右才由输卵管进入子宫角, 然后在子宫内漂浮17 d (胚泡长达10～15 cm) 在胎泡中部的腹侧形成绒毛群伸进子宫黏膜, 嵌植于子宫壁上 (着床) 。

3. 受精优化选择

在受精过程中, 两性生殖细胞间进行着较为复杂的选择过程。亲缘关系较远的两性生殖细胞有优先选择性, 同品种不同个体的精子在受精时也表现出明显的竞争与选择性。精子间的差异越大, 合子的生命力就越强, 只有生命力较强的合子才能发育成生活力较强的新个体。这为黄牛商品生产, 杂交改良, 牛肉出口, 提供了极大的优势空间。黄牛的受精机理基本如此, 但自然环境、饲养条件、不同个体因素, 对受精的生理机质亦有一定的影响。

4. 小结与思考

受精作用 篇8

1 材料与方法

1.1 动物

健康家兔28只, 其中公兔5只、母兔23只, 体重2～3.5 kg, 年龄0.5～1岁, 购自扬州运河种兔场。家兔均为笼养, 每天饲喂颗粒饲料[饲料组成:豆粕15%、玉米20%、草粉 (花生藤粉) 36%、麸皮25%、石粉1%、食盐0.5%、磷酸氢钙2%、酵母0.5%]2次, 共约200 g, 定期补充适量青绿饲料, 自由饮水。

1.2 激素

注射用垂体促卵泡素 (FSH, 批号050630) 和注射用人绒毛膜促性腺激素 (hCG, 批号20050905) , 均购自宁波第二激素厂。

1.3 培养液

1.3.1 基础培养液

TCM-199液, 先用5% NaHCO3调pH值至7.2～7.4, 再用直径为 0.22 μm的滤膜过滤灭菌。

1.3.2 受精卵培养液

受精卵培养液Ⅰ:TCM-199+10%FBS;受精卵培养液Ⅱ:TCM-199+10%FBS+0.5 mmol/L L-谷氨酰胺;受精卵培养液Ⅲ:TCM-199+10%FBS+ 1 mmol/L L-谷氨酰胺;受精卵培养液Ⅳ:TCM-199+10%FBS+ 2 mmol/L L-谷氨酰胺;受精卵培养液Ⅴ:TCM-199+1 mg/mL BSA;受精卵培养液Ⅵ:TCM-199+2 mg/mL BSA;受精卵培养液Ⅶ:TCM-199+5 mg/mL BSA。

1.3.3 冲卵液

冲卵液为含3 mg/mL BSA的改良杜氏磷酸缓冲液 (mPBS ) 。

1.3.4 获能液

DM液:按照Brackett的配制方法配制, 先用5%NaHCO3调pH值至7.6～7.8, 然后再用直径为0.22 μm的滤膜过滤灭菌, 使用前加3 mg/mL BSA, 并在38.2 ℃、5%CO2培养箱中平衡0.5 h。DM-肝素液:取5 mL DM液, 加入500 μg肝素钠即成。His液:取10 mL DM液, 加入34 mg NaCl即成, 使用前在38.2 ℃、5%CO2培养箱中平衡0.5 h。

1.4 精子的体外获能

采用DM-His法获能。用人工采精的方法获取家兔精液, 将200 μL活力在0.8以上的精液置于1.5 mL离心管中, 慢慢加入800 μL DM-肝素液, 以1 500 r/min离心5 min, 弃掉上清液;再加入1 mL His液使精子沉淀物悬浮, 封口后置于38 ℃水浴锅中孵育15 min;再以1 500 r/min离心5 min, 弃掉上清液;最后用1 mL DM-肝素液再次悬浮精子, 并以1 000 r/min离心5 min;吸取800 μL上清液, 剩下的200 μL DM精子悬浮液在38 ℃水浴锅中轻轻摇晃3 min后封口;以45°角倾斜放在38.2 ℃、5%CO2培养箱中培养4 h, 将活力在0.4以上、密度为7×107个/mL的精液用于体外受精。

1.5 超数排卵和卵子的收集

按参考文献[1]中的FSH-hCG法对母兔进行超排处理。注射hCG 14～15 h后手术取出卵巢和输卵管, 每侧输卵管用5～6 mL mPBS由输卵管伞端向子宫端冲洗;用平皿收集卵母细胞, 回收的卵子用TCM-199液清洗3次, 备用。

1.6 体外受精

在直径为3 cm的塑料培养皿上, 用微量移液管制备培养小液滴 (50 μL/滴) 4～5滴;用灭菌石腊油覆盖、加盖, 置于38.2 ℃、5%CO2培养箱中平衡1～2 h;将正常卵子放到小液滴里, 每滴内放10个卵子;然后加入7.5 μL体外获能精子, 加盖后置于38.2 ℃、5%CO2培养箱中培养。

1.7 受精卵的体外培养

受精培养6 h后检出卵子, 用TCM-199液清洗3次后移到新制的培养小液滴中;加盖, 置于38.2 ℃、5%CO2培养箱中培养;每隔12 h在体视显微镜下观察并统计卵子卵裂情况及受精卵发育情况;体外培养96 h后统计各发育阶段胚胎发育率, 以出现正常卵裂或卵黄周隙出现2个极体为受精标准。

1.8 统计分析

采用t检验对试验数据进行统计分析。

2 结果

2.1 L-谷氨酰胺对卵母细胞体外受精及受精卵体外发育的影响 (见表1)

由表1可知:在受精卵培养液Ⅱ中, 8～16细胞百分率、桑椹胚百分率及卵裂率均显著高于受精卵培养液Ⅰ和Ⅳ (P<0.05) ;而4～8细胞百分率显著低于受精卵培养液Ⅰ (P<0.05) 。

注:括号中数为百分率;同列数据肩标字母不同表示差异显著 (P<0.05) 。

2.2 BSA对卵母细胞体外受精及受精卵体外发育的影响 (见表2)

注:括号中数为百分率;同行数据肩标字母不同表示差异显著 (P<0.05) 。

由表2可知, 卵母细胞在受精卵培养液Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ中进行体外受精时均未发生卵裂现象, 由此可见BSA不能代替血清。

3 讨论

3.1 L-谷氨酰胺对卵母细胞体外受精及受精卵体外发育的影响

目前, L-谷氨酰胺在小鼠和牛早期胚胎体外培养中应用较多, 而在兔卵母细胞体外受精中的应用尚未见相关报道。试验在培养液TCM-199+10%FBS中添加0.5 mmol/L的L-谷氨酰胺, 试验效果显著高于不添加组, 但随着L-谷氨酰胺添加量的增加效果降低。效果显著可能是由于L-谷氨酰胺在胚胎早期发育中具有提供代谢中氨基氮来源的作用;也可能是在代谢中较其他氨基酸更具有运输方面的竞争性。而添加量的增加抑制体外受精效果可能是其中某种物质在该过程中起着阻碍作用。有关L-谷氨酰胺在胚胎发育中的具体作用机制还有待于进一步探索。

3.2 BSA对卵母细胞体外受精及受精卵体外发育的影响

BSA是培养液中常用的一种蛋白源物质, 能结合培养液中一些胚胎毒性物质, 对胚胎有保护作用, 在血清存在情况下BSA能促进胚胎发育, 增加胚胎中细胞数量。试验用BSA替代血清, 没有发现卵裂现象, 说明单独使用BSA并不能完全取代血清, 血清中一些能促进卵泡分化和生长的因子可能是BSA中不具有的。但也有试验证明无血清培养可以代替有血清培养。目前无血清培养体系还不完善, 需进一步完善。

参考文献

异常受精胚胎临床利用价值探讨 篇9

1 材料与方法

1.1 研究对象

选择2013年4月至2015年6月在白求恩国际和平医院生殖中心接受IVF-ET治疗的患者,排除完全不受精、未成熟卵母细胞体外成熟培养(in-vitro maturation,IVM)和冻卵周期,共955个周期的资料进行回顾性分析。其中600个IVF周期,平均年龄30.7±4.68岁,355个ICSI周期,平均年龄29.71±5.02岁,共获成熟卵(metaphaseⅡoocyte,MII)13565枚,除去新鲜移植、第3天(Day-3,D3)冷冻、多原核受精胚胎,共5314枚卵裂胚进行囊胚培养。

1.2 治疗方案

根据患者的卵巢功能、年龄、不孕类型以及男方的精液情况等因素选择合适的促排卵方案和受精方式。当促排卵出现3个及以上主导卵泡直径≥18 mm时,肌内注射绒促性素10000 U,36~38小时后超声引导下取卵。取卵当日,男方手淫取精,按照世界卫生组织(World Health Organization,WHO)5版精液处理手册推荐方法处理精液。

1.3 观察及评分

IVF周期:加精4~6小时后拆卵,显微镜下观察第二极体排出情况,当可见第二极体的受精卵数/MII卵≥30%时,认为受精正常,否则补注射。ICSI周期:取卵2~5小时后,对重度少弱精子症或睾丸活检患者行ICSI治疗。受精后16~20小时,显微镜下观察原核情况并记录。

D3天显微镜下对卵裂胚进行形态学评分:Ⅰ级:碎片<10%,卵裂球均匀,无空泡;Ⅱ级:碎片10%~25%,卵裂球均匀或略不均匀;Ⅲ级:碎片25%~50%,卵裂球不均匀,和(或)有空泡;Ⅳ级:碎片>50%,卵裂球不均匀或有空泡。D5天进行囊胚评分,参照Gardner等[1]提出的囊胚评分方法,本中心将≥3BC的囊胚定为可利用囊胚。

1.4 胚胎移植

新鲜周期:当女方的激素、内膜适于移植时,选择D3天卵裂胚评分高的2 PN胚胎移植,若患者无2 PN胚胎,向患者交代风险并签署知情同意书后选择0 PN胚胎移植。女方年龄大于35岁或者有移植失败史的可以移植3个胚胎,首次移植或者女方年龄小于35岁移植2个胚胎。移植后14天抽血测人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,HCG),35天后超声检查见孕囊诊断为临床妊娠。

解冻周期:玻璃化冷冻的卵裂胚或囊胚于排卵后第3天或第4天采用快速解冻法解冻,移植标准同新鲜周期。

1.5 计算公式

囊胚形成率(%)=形成囊胚数/进行囊胚培养胚胎数×100%;可利用囊胚形成率(%)=可利用囊胚/进行囊胚培养胚胎数×100%;临床妊娠率(%)=临床妊娠数/移植周期数×100%;植入率(%)=胎囊数/移植周期数×100%。

1.6 统计学方法

采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析,率的比较采用χ2检验,多组间比较采用单因素方差分析,P<0.05时差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IVF与ICSI受精情况的比较

ICSI组2 PN受精率(88.20%)显著高于IVF组(72.04%),ICSI组的0 PN、1 PN、n PN受精率均显著低于IVF组,P<0.01。见表1。

2.2 不同原核胚胎D5天囊胚情况比较

0 PN组的囊胚形成率最高(50.23%),2 PN组次之(43.65%),1 PN组最低(26.83%),差异有统计学意义(P<0.01)。0 PN组的可利用囊胚形成率显著高于1 PN组和2 PN组(P<0.01),但1 PN组的可利用囊胚形成率与2 PN组差异无统计学意义(P>0.05),见表2。

①与2 PN组比较,P<0.01;②与0 PN组比较,P<0.01;③与2 PN组比较,P>0.05

2.3 移植0 PN或2 PN胚胎临床妊娠率、植入率的比较

新鲜卵裂胚移植0 PN卵裂胚的临床妊娠率为33.3%,显著低于2 PN组55.38%,P<0.01;0 PN植入率为18.2%,低于2 PN组36.96%,差异有统计学意义(P<0.01)。冻融卵裂胚移植周期中,0 PN的临床妊娠率和植入率显著低于2 PN组(P<0.01)。但是,冻融囊胚移植周期中,0 PN的临床妊娠率为57.14%,与2 PN组57.97%相比,差异无统计学意义(P>0.05),植入率差异亦无统计学意义(38.46%vs45.38%,P>0.05),见表3。

3 讨论

3.1 异常受精发生的原因

精卵结合激活卵母细胞排出第二极体[2],雌雄原核形成并在微管和微丝的作用下向中央靠拢直至两原核融合形成二倍体受精卵。原核在受精后3~20小时可被观察到,大部分在受精后16~20小时出现。观察到2 PN认为是正常受精,是移植或冷冻胚胎的首选,0 PN、1 PN和多原核均被认为异常受精。多原核受精卵形成可能与多精受精、第二极体不能正常排出等因素有关,过熟或未成熟卵子易发生多精受精。本研究IVF中多原核受精率(9.89%)显著高于ICSI组(4.26%),与徐芬等[3]的研究结果一致。这可能与促排卵过程中卵泡多次募集导致卵泡发育不同步,使获取卵母细胞有些过熟或不熟,在IVF受精的这一时间段里有些不熟的卵子发育成熟导致多精受精。而ICSI时我们会选取成熟的卵母细胞注射单个精子,未成熟卵或刚刚成熟的卵母细胞不予注射,这样就避免了由于精卵共培养期间过熟或者培养过程成熟的卵多精受精。国内外关于1 PN胚胎产生机制主要有以下观点:孤雌激活、雌雄原核形成不同步[4]、雌雄原核融合[5]和成熟前原核核膜崩解[6]。有研究显示IVF中1 PN胚胎约50%含有Y染色体,而ICSI周期1 PN胚胎约10%含有Y染色体[7],相似的研究[8]显示IVF来源的1 PN胚胎二倍体率显著高于ICSI来源。0 PN胚胎的产生可能与以下因素相关:受精延迟或错过观察时间[4]、受精缺陷[9]和第二极体未排出,从而参与核遗传物质的形成[10]。

本中心IVF周期0 PN受精率为12.48%,1 PN受精率为5.59%,多原核受精率为9.89%,ICSI周期各组异常受精率5.59%、4.14%和4.26%,ICSI周期异常受精比例显著低于IVF周期。非2 PN胚胎的形成与受精方式密切相关[11],因此,当患者高龄、获卵数较少时,可考虑ICSI受精方式,以降低异常受精胚胎比例。

3.2 合理选择胚胎

多原核受精胚胎不用于移植和冷冻已被绝大多数中心认可。当获卵数较少,没有或者2 PN受精胚胎质量较差时,0 PN和1 PN胚胎的合理利用就显得尤为重要。有学者研究发现0 PN胚胎二倍体率可达57%[12]。从0 PN和1 PN胚胎产生机制看,二者均有可能是正常的二倍体胚胎,都有一定的利用价值,但是ICSI周期的1 PN胚胎由于染色体异常比例较高不建议使用。

囊胚形成率和可利用囊胚形成率能较准确反映胚胎发育潜能。囊胚培养可以通过自然选择淘汰一部分染色体异常的胚胎。本课题研究发现0 PN的囊胚形成率显著高于1 PN胚胎(50.23%vs 26.83%),0 PN可利用囊胚形成率为23.96%,显著高于1 PN的9.76%,这表明0 PN胚胎发育潜能优于1 PN胚胎,在没有2 PN胚胎可供选择的时候,优先选择0 PN胚胎。我们研究还发现,0 PN胚胎囊胚形成率高于2 PN胚胎,这可能因为D3天优质2 PN卵裂胚用于移植和冷冻,非优质2 PN胚胎用于囊胚培养有关。

本研究中D3天新鲜周期卵裂胚移植0 PN胚胎共6例,其中2例获得临床妊娠,解冻0 PN卵裂胚移植17例,6例获得临床妊娠。因此在没有2 PN胚胎或者2 PN胚胎质量很差时可选择0 PN胚胎,这与李明等[13]的观点一致。有学者对98例新鲜0 PN卵裂胚移植周期回顾性分析发现临床妊娠率为35.71%,认为在2 PN极少或无2 PN的新鲜周期中,0 PN胚胎可作为备选移植胚胎[14]。本研究还发现0 PN和2 PN形成囊胚解冻周期的临床妊娠率(57.14%vs57.97%)和种植率(38.46%vs 45.38%)差异无统计学意义,这表明经过囊胚培养这一自然选择过程,0PN形成的囊胚具有2 PN囊胚相当的利用价值。当患者有2 PN胚胎移植和冷冻时,非2 PN胚胎囊胚培养是合理利用胚胎的有效手段。

家畜体外受精技术与研究方法 篇10

最初的体外受精技术是手术法采取药物超排的成熟卵子,在人为创造动物体内环境下,完成卵子与精子的受精过程后,培养1～3日,再采用手术法移植到受体子宫内[2]。这种方法在采取卵子方面费用(药物等)很高,且需要花费很多人工。其后,利用内窥镜等方法替代了手术法采取卵子,使体外受精技术在一定程度上得到了改进,但其最大的问题在于家畜对药物超排的反应存在着较大的个体差异,并且其差异具有不可预测性,所以,这种方法在实际畜牧生产中还达不到应用的程度。

现代家畜体外受精技术的特点是以利用屠宰场废弃的卵巢采取未成熟卵。多数哺乳动物卵子的形成在出生前后就完成了,将卵泡中的卵子取出,给以恰当的条件,其细胞核能够进行减数分裂,并发育到可以受精的状态。这种现象与卵泡内发生复杂的激素控制引起成熟不同,因此这种体外培养的成熟叫做“自然成熟”。卵巢中有很多潜在的卵泡,如果将其中的卵子取出进行成熟培养和体外受精,再培养到可以移植阶段的胚胎,则生产胚胎的方式变得极为简捷、生产成本也大为降低[3]。

在体外成熟的卵子具有发育成为幼畜的能力早已得到了证明。其方法为:将体外成熟培养的卵子移植到事先进行了人工受精的家畜的卵管中,使其在卵管内受精并完成了胚胎的初期发育。但是,所谓的体外成熟卵子只是完成了细胞核的成熟,关于细胞质的成熟还存在问题,特别是使用其进行体外受精的情况下,还有完全受精状态参差不齐,发育率低等问题。

在体外受精技术体系当中,成熟培养和体外受精卵子发育的问题非常关键,这涉及两个问题,即成熟培养条件和精子受精能获得条件。20世纪80年代人们采用钙离子载体(ca-ionophoer)处理的前培养法诱导精子获能效果较好,得到较高的受精率和卵裂率(钙离子载体的操作需要在暗室中进行)。现在精子处理方法主要以BO液(Brackett and Oliphant)为基础,使用肝素与黄嘌呤结合诱导精子获能,已经形成了成熟的实用技术[4]。由此不仅解决了关于受精卵方面实验研究所用受精卵的来源问题,还预示着胚胎移植所用胚胎可以低成本地生产、尤其是能够实现专用家畜大量繁育。

体外受精的主要技术操作主要体现在5个方面:卵巢的收取和运输;未受精卵的采取与选择;体外成熟培养;精子的受精能获得处理;培养受精卵达到可以移植阶段的囊胚期。

1 卵巢的采取和运输

卵巢在集中处理母畜的屠宰场收集。屠宰场与实验室之间总是有一段距离,因此,运送卵巢时的生理盐水温度保持在比较接近体温的程度,但实际上也不必特别严格,相差4℃对卵子发育不会产生显著影响,一般控制在33～38℃。为了防止卵巢被污染,浸泡卵巢的生理盐水中应加入青链霉素100～200 g/mL。一般来讲,卵巢离开母体至实验室采取卵子进入培养液中的时间与卵子发育状况关系密切,时间间隔越短发育效果越好。一般卵巢离开母体2～4 h内需要运送到实验室。

2 卵子的采取与选择

2.1 采取卵子

卵巢的表面有许多小卵泡,但并非在每个卵泡中都能够得到卵子。采卵前使用温水清洗卵巢,从卵巢内采取卵子比较常用的方法是注射器抽取和切碎过滤,也有用手术刀切开卵泡用小勺舀出卵泡液的。使用注射器采取卵子的方式不仅卫生,操作起来也特别方便,注射器采取一般使用18号针头。抽取操作看似简单,初次抽取只能获得极少的卵子,需要有一个熟练的过程才能将大部分卵子抽取出来,一般平均每个卵巢能够获得20个左右可用卵,多的可以抽取到40个左右。把小卵泡内的卵子全部抽取出来是高难的技术,另外,如何利用卵巢内发育不同阶段不同的卵子是今后的研究课题。

2.2 卵子的选择

将卵泡液注入培养皿,在立体显微镜下检出带有卵丘的所有卵子,放如培养液中逐个清洗3～5遍后开始成熟培养。采取的卵子有附着卵丘细胞的,也有的只有透明带没有卵丘细胞。卵丘细胞关系到卵子是否具有发育及受精能力,卵丘细胞附着程度、状况也各不相同。根据卵丘细胞附着厚度和紧密程度,可以将卵子分为A、B、C三种类型。卵丘细胞层较厚、附着紧密的为A型卵子;卵丘细胞附着紧密、但是细胞层较薄或者有一部分卵丘细胞已经脱落,称为B型卵子;卵丘细胞较少的称为C型卵子。在实际操作过程当中,可以根据实验所需卵子数量,在立体显微镜下选择卵子。

2.3 体外成熟培养

卵子属于生殖细胞,其发育成熟的过程即为细胞核染色体减数分裂的过程。从卵巢中获得的卵子属于未成熟卵,需要给予一定的条件进行培养使其自然成熟,达到动物排卵前后的状态,才能接受精子完成受精。体内卵子的成熟必须有性腺激素的刺激才能完成,因此体外成熟培养也需要添加FSH雌激素。事实上附着于卵子周围的卵丘细胞也能够释放一定数量的雌激素,所以在不添加FSH的情况下也可能发育成熟。但是,体外受精最关心的是卵子能否进行受精发育成为囊胚,从这方面看,不添加激素的情况下,卵子即使能够发育成熟,受精后也比较难发育到囊胚阶段,其差异非常显著。有人做过实验,只添加犊牛血清不添加FSH,结果卵裂率、分裂8细胞以及囊胚率都显著下降。精子进入卵子完成受精需要穿透卵丘的过程,激素有使卵丘膨化松软、有利于精子穿透的作用。卵子第一级体放出之后,到第二减数分裂中期处于分裂暂时休止状态,此时期正是接受精子的状态。经过12～24 h的培养业已成熟的卵子,再经过受精后进入老化时期(aging)。为了调整受精时期,有人设计在成熟培养后的16 h、20 h、24 h、28 h进行受精操作,对其囊胚率进行探讨,结果发现,24 h和28 h的囊胚率明显低,而20 h的囊胚率非常高,也说明较短时间的成熟培养对体外受精恰到好处。

2.4 精子的获能

为了使精子进入卵子,在体内受精情况下,精子需要在母畜的子宫角停留一段时间,在此期间精子的机能发生了显著变化,完成了精子进入卵子前的准备工作,这种现象称之为精子获能。获能的精子主要表现在发生了顶体反应,具备了进入卵子的能力[5]。诱导精子获能的方法有多种,先期多应用钙离子载体A23187分段处理方法,现在比较通用的方法为黄嘌呤加肝素处理方法[6]。

黄嘌呤加肝素处理方法如下:用添加10 mol黄嘌呤(咖啡因等)调制的BO液清洗精子2次,离心后取上清液,用添加3%NaCL溶液杀死精子,用血球计数板在显微镜下计算精子浓度,根据其浓度分别用黄嘌呤BO液和肝素钠BO液分为2次稀释调整精子浓度达到500～1 000万/mL,即完成了精子获能操作。使用该浓度的精子悬浮液在培养皿中制作10 L液滴,每个液滴中注入10个左右的成熟卵子进行受精培养5～6 h[7]。

卵子受精环境中精子数(或者浓度)非常关键,精子数过少则受精率降低,精子数过多则会造成多精子浸入卵子的比例增加。多精子受精的情况下,受精卵很难发育到囊胚期,少数受精卵能够发育到了囊胚期的,在胚胎移植后也在母畜体内调亡。检查成熟卵受精的方法为将受精卵染色在荧光显微镜下观察,只有一个精子进入卵子的情况为正常受精,成熟卵子内进入2个或2个以上的精子的情况为多精子受精[8]。

2.5 培养受精卵发育到囊胚期阶段

受精培养液也是精子获能处理的培养液,其组成比较单一,在精子浸入卵子后需要更换培养液,一直培养到7～9日龄,检查出发育到囊胚的可以捡出进行鲜胚移植或者冷冻保存。目前胚胎冷冻方法由多种,体外受精胚胎的冷冻方法与超排胚胎的冷冻方法基本相同,采用分段冷冻方法等都取得了较好的效果[9]。在体外受精研究初期,人们是将受精卵移植到家兔的卵管中进行培养的,其后人们发现使用卵子成熟培养的含25 mol HEPES缓冲组织培养液199(TCM199)培养受精卵能够发育到囊胚期,并移植后出生了幼畜。为了达到较高的囊胚率,还需要在培养液中添加血清。根据母畜妊娠的体内环境,也有人曾尝试在培养液中添加乳酸,但是没有取得效果。

在成熟培养和受精过程中,卵子和卵丘细胞一直形影不离,在培养过程中卵丘细胞会自动脱落到培养皿底部进行单层状态增殖,其增殖速度还与培养皿的种类有关。受精后的卵丘细胞与卵子分离开,将受精卵移到新的培养液中,结果发育不到囊胚阶段,而将受精卵移到卵子成熟培养的环境中则能够发育到囊胚阶段,说明了卵丘细胞在卵子的成熟培养和受精卵的发育过程中都起到了关键作用。在成熟培养时,卵丘细胞是附着在具备通透性的卵膜上,而在受精卵培养时,卵丘细胞并不直接与受精卵接触,说明由卵丘细胞而来的扩散物质在发挥作用。这种培养体系目前已经建立,但是对培养系中的有效物质的作用机理尚未明了,也是今后人们关注的研究课题。

3 体外受精家畜(牛)生产展望

利用屠宰场废弃的卵巢通过体外受精技术生产犊牛,无论在奶牛还是在肉牛的生产应用方面都具有重要意义。现在,由卵子的体外培养和体外受精进行胚胎移植获得的个体发育能力方面,已经没有值得怀疑的问题。因此,通过该技术可以根据市场需求定向生产奶牛或者肉牛。例如:屠宰草原红牛母牛的卵巢,实验室内使用优质草原红牛公牛冷冻精液体外受精生产草原红牛胚胎,移植到普通地方黄牛体内而生产草原红牛个体,收集黑白花奶牛的胚胎的情况也是同样效果。如此把屠宰场废弃的卵巢利用起来,将是优质品种母畜的繁殖能力得到了最大发挥,而且利用高性能公畜方面,体外受精技术也能够得心应手。体外受精胚胎成本非常低,在胚胎移植时根据受体的黄体检查,实施双测子宫角输精而使母畜产双胎,这在实际生产中能够产生更大的经济效益。

当前全国各地研究机构都积极开展家畜分子生物学研究,国家也把动物基因领域研究作为“十一五”期间的研究重点。家畜的转基因技术也需要体外受精技术作为基础,因为利用该技术可以为转基因操作提供大量的低成本胚胎。克隆技术的发展也是依靠体外受精技术为基础的,一个胚胎具备大量复制的理论条件,再通过核移植就可以大量复制优秀家畜个体,这在提高家畜生产水平方面具有重大意义。

参考文献

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[8]张明新.牛体外受精卵染色技术[J].黄牛杂志,1999,25(3):59.

受精卵争夺战背后的真爱 篇11

英俊潇洒的大卫和美丽温柔的贝蒂都在一家公司工作，两人一见钟情，不久便步入婚姻的殿堂。婚后贝蒂辞去工作，做起了全职太太，她和大卫都希望有1个聪明可爱的孩子。可是，两年过去了，贝蒂却没有任何怀孕的迹象。医生为他们做了身体检查，发现问题出在贝蒂身上——输卵管堵塞。贝蒂突然觉得所有的希望都化成了泡影，她哽咽着对大卫说：“怎么办?我们不会有自己的孩子了。”大卫强忍着心中的失望安慰贝蒂：“亲爱的，没关系，我是因为爱你才和你结婚的，不只是为了要孩子。实在不行。我们还可以领养一个孩子呀!”

医生建议他们采用体外人工受精的方法生孩子，这使他们如同在黑暗中看到了一缕曙光。于是，他们开始求助于各大医院。由于贝蒂体内的卵细胞数目不够，每次都必须注射激素以调整内分泌。待贝蒂身体内产生了足够的卵细胞后，将其取出来，再将大卫的精子注射进去。在20世纪70年代末至80年代初，体外受精技术还不很完善，他们在治疗中经历了一次又一次的失败。但是，为了实现生养孩子的愿望，他们几乎把所有的积蓄都花到了体外受精上。共同的信念把这对夫妻的心紧紧地连在一起。

到了1991年，试管婴儿技术已经日益成熟。大卫和贝蒂又开始了他们生育孩子的漫长历程。医生首先从贝蒂体内提取卵细胞，共试了7次后，方得到满意的卵细胞。然后通过注射，使这些卵细胞分别同大卫的精子结合成受精卵。这一次手术相当成功。3天后，一些成熟的受精卵被植入贝蒂的子宫内。另外，还剩余7枚受精卵，它们被医生分别放在两个零下196摄氏度的特制瓶中。一个瓶子里装了3枚，另一个瓶子里装了4枚。贝蒂将它们和自己体内的受精卵都看成是自己的孩子，她和大卫一同期待着奇迹的出现。

接下来便是虔诚的等待。医生检查后告诉他们一切情况良好，有两个受精卵已经开始成长了。两个人谈论起体内的受精卵时，贝蒂便会抚摸着自己的腹部看着大卫，充满无限的温柔和深情。几天以后，医生再次给贝蒂做了检查。只见医生脸上露出了笑意：“祝贺你们，成功了!”顿时，这对夫妻的内心充满了巨大的惊喜，大卫欢呼一声后抱着妻子打转，贝蒂则是泪流满面。12年来，他们承受了巨大的生理和心理压力，如今终于如愿以偿。1992年5月，在大卫的守护下，贝蒂顺利地生下了一对双胞胎女儿。

多少年来，拥有孩子一直是他们共同的生活目标。这种追求将两个人紧密相连，反而掩盖了许多差异和分歧。有了孩子后，他们的生活重心发生了转移，两人都产生了一种茫然不知所措和疲于应付的感觉。贝蒂依然在家做家庭主妇，她渐渐地习惯于将两个孩子和家务琐事看做是生活的全部。大卫则为了支撑这个家整日努力工作，他没有时间与孩子呆在一起，也没有心思与妻子交流。日子久了，两人都对这种单调而又忙碌的生活产生了厌倦感。

3年以后，贝蒂同大卫商量，想解冻一个瓶子里的受精卵，再生一个孩子。但是大卫只疲惫地说了一句“我们养不起”，就再也没有理会了。后来贝蒂独自去了医院，并没有让大卫察觉。她找到医生，要求解冻一瓶1991年所存的受精卵，说自己和丈夫想再生一个孩子。于是，医生拿出了存有3个受精卵的瓶子，同以前一样将受精卵注射到她的子宫内。几天以后，一封索取夫妻健康证明的院方来信被大卫收到了。得知贝蒂的行为后，大卫震怒了，觉得她完全无视自己的意愿和感受。贝蒂想努力争取大卫的谅解，但为时已晚。虽然移植未能成功受孕，但两人之间的裂痕却越来越深。有一天晚上，大卫很迟才回来，身上还带有酒气。贝蒂发现他的衬衣领口有着鲜红的唇印，她的心被刺痛了。大卫面对贝蒂的责问只是沉默不语，后来发展到夜不归宿。两人的婚姻就这样走到了尽头。

协议离婚后，由于贝蒂没有工作，法院将一对双胞胎的抚养权判给了大卫。这对一直视孩子为生活全部内容的贝蒂，是一个沉重的打击。她几乎要崩溃了。眼看无力同大卫争夺女儿，贝蒂决心另想办法。她又悄悄地同当年帮她孕育试管婴儿的医生接触，想使用剩下的最后4枚受精卵。按规定，解冻并移植受精卵必须征得两人的同意。大卫得知贝蒂又在打受精卵的主意，毫不客气地向法庭提出请求：禁止贝蒂使用4年前冻存的受精卵。一场受精卵争夺战便开始了。

贝蒂的律师对她的遭遇深表同情。律师说：“在孕育试管婴儿的过程中，女人要比男人吃更多的苦。贝蒂忍受了无数次注射和呕吐的痛苦，才生了两个孩子，可她最后竟一个也得不到，这太不公平了。法律应当赋予贝蒂拥有受精卵的权力。”然而，此案的审理结果却让贝蒂大失所望。法官宣读的判决书认定：“贝蒂可以通过植入受精卵获得孩子，但精子不应使用大卫的，因为他们已经离婚。”贝蒂感到痛苦和失望，大卫心里也不是滋味。

时间在不知不觉地消逝。1999年，贝蒂已经45岁了。按照医学惯例，45岁以上的妇女不宜接受植入受精卵的手术。此外，那4枚受精卵存放了8年之久，很可能已经处于不稳定的状态。贝蒂心急如焚。再次向法院提出上诉，要求重新审理受精卵所有权一案。这时，大卫和贝蒂的一对双胞胎女儿已经7岁了，长得活泼可爱。贝蒂常常去探望她们。大卫对孩子充满了爱心，宁愿自己辛苦，也要给孩子的成长创造条件，这一点贝蒂无可挑剔。重新成为职业妇女后，她已经理解挣钱养家的艰辛。长期以来，她觉得自己不是一个完整的女人，不能拥有家庭和孩子。她太想和自己的孩子生活在一起了。

离婚以来，大卫和贝蒂都没有再婚。随着时间的流逝，他们的怨恨已经淡化了许多，彼此之间甚至多了一份牵挂。这个周末，贝蒂又像往常一样到大卫那里去探望女儿。大卫说：“那4枚受精卵存放的时间太长了，或许早就不能在人体中存活了，你为什么还要到法院去要它们?”贝蒂幽怨地看了他一眼，凄然一笑：“你不明白它们对我多么重要。即使是4枚受精卵，我也早就把它们视作自己的孩子了，因为里面有我生命的一部分。其实，我已经不再奢望将它们孕育出来了，只是想拥有它们。”大卫听了若有所思，想起了昔日患难与共的时光。过了很久，他才开口说道；“或许。孩子和受精卵都不能成为真爱的全部内容。”

2000年1月，这起拖了5年之久的案子又被法院重新审理。由于涉及到复杂的伦理和道德问题，陪审团仍然无法轻易做出结论。经过这次毫无成效的上诉后，贝蒂觉得自己身心俱疲，她开始怀疑这样执著是否有意义。她发现，几年来忙于同大卫争夺那4枚受精卵，反而忽视了对双胞胎女儿的关爱，浪费了很多美好时光。几天后，律师把大卫的一封信转交给了贝蒂。信上写着：“几年来我们一直处在一种敌对的争夺状态中，我非常难受。我曾经完全不理解你对孩子狂热的爱，可现在做了5年单身父亲后终于能够明白了。我很抱歉当初给你带来的伤害。我们为何都把那4枚受精卵看得那么重?仔细想过之后，我感觉到我们之间才存在着一种共同而美好的东西，我们依然希望共同拥有它，这就是真爱。我们的两个女儿需要母亲在晚上给她们讲故事，而我则渴望重新找回真爱，拥有一个完整的家。贝蒂。你能回到我们身边吗?”贝蒂读到这里泪水汹涌而出，5年来的辛酸和委曲似乎都在此刻得到了释放。

贝蒂从法院撤诉了。她和大卫一起来到当年做手术的那所医院，取出装有4枚受精卵的瓶子。两人和瓶子合了影，然后捐给了医院的研究机构。这场旷日持久的受精卵争夺战使他们明白，生活和婚姻的全部真谛就是真爱，拥有了真爱便拥有了一切。

如何提高蛋种鸡的受精率 篇12

精液品质的好坏是决定种蛋受精率的先决条件,而种公鸡饲养条件的好坏又直接影响到精液的品质和数量,因此种公鸡的饲养管理非常重要。如果说健康的雏鸡是养好种鸡的基础,育成期的管理则是保证公鸡质量的关键一步。在公鸡的管理中运动是很重要的因素。育成时期有条件的鸡场最好不要把公鸡和母鸡一起放在中雏笼中饲养。公鸡的体型较大,生长发育也比母鸡快,中雏笼空间狭小,公鸡根本没有活动的空间。因此,公鸡育雏时可和母鸡一起笼养,中雏阶段到入产蛋鸡舍之前应一直平养。种公鸡饲养密度不能过大,应保证公鸡有足够的活动空间,让公鸡的体质在充分运动中加强,公鸡的体重可略超过标准体重,但不可低于标准体重。如果育雏、育成期公鸡都采用平养方式,每只鸡都要有足够的活动空间,成鸡阶段公鸡的体质发育良好,20周龄左右合格的公鸡就多,精液数量和品质就可以得到保证,抵抗外界应激能力就强,采精阶段淘汰死亡率就低,种蛋受精率就相应较高。在经过选择和精液品质检查进入成鸡舍之后,为了减少争斗,公鸡最好单独饲养。单笼饲养的种公鸡其采精量、精子密度、体重、采精成功率、精液清洁度和公鸡存活率等方面均高于双养或一笼三养。

2 公鸡饲料的营养成分

公鸡的能量和母鸡基本一致,蛋白质水平要低于16%~18%产蛋母鸡的营养水平,正常12%~14%的水平就可满足采精的需要。蛋白质中各种氨基酸平衡的话,可以不必加入鱼粉等动物蛋白质。若是农户养殖,不能准确分析饲料中各种氨基酸的比例和数量,可以在饲料中加入少量高品质鱼粉和鱼精粉等动物蛋白质饲料。但是不要用母鸡饲料饲喂公鸡,这样既浪费蛋白质饲料,公鸡也不需要那么多的钙质。一般采精时期的种公鸡钙的用量为1.0%~1.5%、磷为0.65%~0.8%即可。

3 母鸡的饲养管理

种母鸡的管理应坚持“防重于治”的原则,定期带鸡消毒,预防各种传染病发生,尽量少用药物。第一次输精之前,饮用补液盐等来减缓应激。饲料中维生素的添加量大约是商品鸡的3~4倍。所以种母鸡应使用种鸡专用多种维生素,若用商品蛋鸡的多种维生素,维生素的剂量应加大到商品鸡的数倍,特别是维生素A、维生素B、维生素D和维生素E等成分必须满足。

4 光照管理

光照不但影响公鸡精液的数量,也影响精液的质量。对公鸡来说12~14个小时10LX的光照,就可维持公鸡正常的繁殖性能,少于9小时则精液品质下降,一般公母鸡都饲养在同一栋舍内,接受光刺激的强度和时间是一致的。但对小公鸡来说达到产生最大精液量要比母鸡达到最高的产蛋高峰需要更长的光照刺激。

5 采精方法

首先剪去公鸡泄殖腔周围的羽毛,便于收集精液。公鸡一般经过10天左右4~5次的采精训练便可形成条件反射。同时做好精液品质的评定工作,如果精液过少或质量活力差,便可确定公鸡的取舍,人工授精之前公母比例在1∶20为好。若公鸡质量好,同时又是单笼饲养的话,公母比例还可加大一些。采精和输精过程要求饲养员认真负责,动作不要粗暴,饲养员要求有一定的采精和翻肛经验,要求采精翻肛手法正确,用力合理,配合默契。一般在公鸡采精之前、母鸡人工授精之前都要停止饮水,保证公鸡的精液不被污染和翻肛时粪便污染。公鸡的正常精液为乳白色,每只公鸡每次可采精液0.5~1m L。每天或隔天采精1次。

6 人工授精技术