卵泡雌激素

卵泡雌激素（通用4篇）

卵泡雌激素 篇1

摘要：目的 探讨基础窦卵泡数 (antrol follicle count, AFC) 及基础卵泡刺激素 (bFSH) /基础黄体生成激素 (bLH) 比值预测卵巢反应性的意义。方法 回顾性分析本中心2010年10月至2012年10月371例应用长方案行体外受精/卵胞浆内单精子注射-胚胎移植 (IVF/ICSI-ET) 患者的临床资料。结果 ①AFC与外源性促性腺激素 (Gn) 用量呈显著负相关, bFSH/bLH比值与Gn用量呈显著正相关 (r分别为-0.547和0.612) 。AFC与成熟卵泡数成显著正相关, bFSH/bLH比值与成熟卵泡数量呈显著负相关 (r分别为0.945和-0.884) 。AFC与Gn用量及成熟卵泡的相关性均最密切。②AFC与bFSH/bLH比值预测卵巢反应性的ROC曲线下面积AUC1、AUC2分别为0.967、0.081, 均显著>参考下面积 (P均<0.05) AUC1>AUC2, 差异有统计学意义 (Z12=7.28, P<0.05) 。结论 AFC、bFSH/bLH均可以预测卵巢反应性, 且AFC的预测意义大于bFSH/bLH。

关键词：基础窦卵泡数,基础卵泡刺激素,体外受精-胚胎移植

在体外受精/卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植中, 超促排卵是极为关键的一步, 它的成败很大程度上影响着最后的临床结局, 如何在促排卵前较为客观有效地评估预测卵巢的反应性, 从而采用较为合理的促排方案、用药剂量非常有意义。本研究回顾性分析应用长方案行IVF/ICSI-ET患者的临床资料, 探讨AFC, b FSH/b LH比值预测卵巢反应性的价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料

2010年10月至2012年10月, 本中心应用长方案行IVF/ICSI-ET共371周期。患者年龄20~38 (30.2±3.9) 岁, AFC1-35 (13.6±4.7) 个。不孕原因为输卵管因素、排卵障碍、子宫内膜异位症、男方重度少弱精症及梗阻性无精症、双方原因及不明原因性不孕症。

1.2 方法

(1) AFC计数:月经周期第3天阴道超声测量双侧卵巢内直径2~9mm的卵泡数。 (2) 成熟卵泡数:以采卵日直径≥14mm的卵泡数量。 (3) b FSH/b LH比值测定:于IVF/ICSI-ET准备周期月经第3天监测, 采集外周静脉血2m L, 2500r/min分离血清, 采用电化学发光法测定FSH、LH水平, 再计算b FSH/b LH比值, 批内批间差异均<5%。 (4) 控制性超促排卵 (C0H) 均采用常规长方案:a.垂体降调节:从促排治疗周期的前一月经周期黄体中期开始给予长效促性腺激素释放激素激动剂 (Gn RH, 达菲林, 益普生, 法国, 3.75mg/支) 0.8~1.875mg一次性皮下注射, 14d后晨空腹抽血查血清FSH、LH、E2, 并通过阴道超声监测子宫内膜厚度及双侧卵巢内窦卵泡数目及大小。垂体降调节达到的标准可参考:血清FSH<5IU/L、LH<3IU/L、E2<50pg/L、子宫内膜厚度≤5mm, 双侧卵巢最大窦卵泡直径<5mm, 且未见卵泡囊肿。若降调节14d后未达到标准, 可再等待几天, 继续监测直至达到降调节标准。b.Gn促排卵:降调节达标准后, Gn开始启动, FSH起始剂量均根据患者年龄、基础窦卵泡数及以往促排卵经验决定。常规启动剂量150~300IU。注射FSH期间, 须适时阴超监测卵泡大小及内膜厚度、形态等。同时抽血检测血E2、LH、P水平, 根据阴超及内分泌结果适时调整FSH注射剂量, 期间若有明显优势卵泡直径超过次卵泡3mm时, 应适时给予大卵泡穿刺, 第3组患者先给予u FSH, 后期可适时给予小剂量HMG (75IU/d) , 用以补充适量的LH。当优势卵泡最大直径达到18~20mm或2个达到17mm后停用Gn, 当晚8pm-9:30pm注射h CH10000IU或艾泽 (重组人绒促性素) 250μg。

1.3 IVF-ET

注射h CG或艾泽后36h-38h后取卵。根据具体情况行IVF或ICSI, 受精14~18h内检查原核形成情况, 于取卵后72h行胚胎移植。移植胚胎数目根据具体情况按要求为2~3个, 若只有一个可利用胚胎, 仅移植1枚, 取卵当天给予黄体酮60mg肌注, 以支持黄体, 此后改为黄体酮60mg, 肌注, 地屈孕酮片 (达芙通) 10mg Bid po。胚胎移植后14d晨空腹抽血查β-HCG, 若β-HCG证实妊娠者嘱于移植术后34天左右来院行阴道B超以确定妊娠情况, 显示宫内见妊娠囊并可见原始心管搏动为临床妊娠。此后, 定期电话随访孕期情况及产科结局。

1.4 统计学分析

采用SPSS17.0软件包对资料进行处理。各项指标与Gn用量、成熟卵泡数进行Pearson相关性分析, 用Pearson相关系数表示。应用工作特征曲线 (ROC曲线) 分析各项指标与卵巢反应不良率的关系, 对ROC曲线下平均面积 (AUC) 及标准误差作Z检验。

2 结果

2.1 AFC、b FSH/b LH比值与Gn用量的相关性

AFC与外源性促性腺激素 (Gn) 用量呈显著负相关, b FSH/b LH比值与Gn用量呈显著正相关 (r分别为-0.547和0.612) (图1) 。

2.2 AFC、b FSH/b LH比值与成熟卵泡的相关性

AFC与成熟卵泡数成显著正相关, b FSH/b LH比值与成熟卵泡数量呈显著负相关 (r分别为0.945和-0.884) 。AFC与Gn用量及成熟卵泡的相关性均最密切 (图2) 。

2.3 应用ROC曲线评价AFC、b FSH/b LH比值预测卵巢低反应的价值

AFC与b FSH/b LH比值预测卵巢反应性的ROC曲线下面积AUC1、AUC2分别为0.967、0.081, 均显著>参考下面积 (P均<0.05) AUC1>AUC2, 差异有统计学意义 (Z12=7.28, P<0.05) (图3) 。

3 讨论

在控制性促排卵 (COH) 中, 患者对外源性促性腺激素的反应性存在很大的差异, 目前对这种卵巢反应差异的机制尚不十分清楚, 多数学者认为主要跟年龄、卵巢储备能力密切相关。众所周知, 女性生育能力随着年龄的增长逐渐减弱, 但是对个体而言, 卵巢反应性降低的具体年龄存在极大差异。部分患者30岁甚至在20多岁就已经出现卵巢反应性的降低。Goverde等[1]对85名特发性不孕或轻度男方因素不孕的患者进行前瞻性分析及对1155名原因不明、轻度男性因素和输卵管因素不孕的患者进行回顾性分析, 表明年龄最大和特别年轻的患者均表现为卵巢反应低下, 28岁左右卵巢反应最佳, 呈倒立的U型。由此可见卵巢年龄与生理年龄并非总是一致的, 单用年龄预测超促排卵反应性具有一定的局限性, 因此如何准确的判断患者的卵巢储备能力, 有利于决定每个患者用药个体化, 将有助于提高IVF的临床妊娠率。

在长期的临床工作中笔者发现AFC是评价卵巢储备功能, 预测卵巢反应性的较好指标, 尤其对b FSH水平正常的患者临床价值更大, 有助于指导临床开展辅助生育技术。本研究结果显示窦卵泡数 (AFC) 与外源性促性腺激素 (Gn) 用量呈显著负相关, 而与成熟卵泡数成显著正相关, 因此我们认为阴道彩超下观察到的窦卵泡数 (AFC) 是判断卵巢储备及反应性最为敏感的指标。罗金等[2]对IVF/ICSI-ET治疗的741名不孕患者进行研究, 指出AFC为预测卵巢反应最敏感的指标。Hendriks等[3]的研究也得出了相同的结果。另有研究表明[4,5], 在基础FSH正常的患者, 窦卵泡数是预测卵巢反应性及IVF结局的一个良好指标, 窦卵泡数多者, 在COH过程中卵巢对Gn反应良好, 得到的成熟卵泡数多, 相应的妊娠率高。

目前FSH对卵巢低反应性的预测价值尚存在争议。衡量FSH值升高的标准各中心所规定的阈值也不尽相同。Esposito等[6]认为b FSH明显升高 (>11.4IU/L) 才与IVF不良结局相关, b FSH略微升高 (10.0~11.4IU/L) 时预测IVF结局的能力有限。而月经周期第2~3天血清卵泡刺激素/黄体生成素 (基础FSH/LH) 比值是预测卵巢储备功能的又一项指标[7,8], 基础血清FSH/LH比值升高提示卵巢储备功能下降。本研究结果显示b FSH/b LH比值与Gn用量呈显著正相关, b FSH b LH比值与成熟卵泡数量呈显著负相关。Shrim等[9]研究了年龄<41岁且基础FSH<8IU/L的患者, FSH/LH<3患者的E2峰值、获卵数、受精数以及妊娠率均高于FSH/LH>3的患者。因此在基础FSH在正常范围时, b FSH/b LH比值更能敏感地反映出卵巢储备情况。

在辅助生育技术中, 随着阴道超声技术的广泛应用, 经阴道彩超监测AFC数目, 与卵巢储备功能之间的关系密切, 有助于用药前预测卵巢反应性及卵泡成熟度, 从而提高临床妊娠率[10], 值得进一步开发和推广。

因此同一临床医师连续动态监测AFC, 并结合b FSH/b LH值来综合评估卵巢储备功能, 为我们在临床工作中更全面、精确地预测患者的卵巢反应, 指导个体化的用药方案起到了重要的指导意义。

参考文献

[1]Goverde AJ, McDonnell J, Schats R, et al.Ovarian response to standard gonadotrophin stimulation for IVF is decreased not only in older but also in younger women in couples with idiopathic and male subfertility[J].Human Repro Duction, 2005, 20 (6) :1573-1577.

[2]罗金, 杨菁, 张琴, 等.体外受精-胚胎移植过程中影响卵巢反应性的多因素分析[J].武汉大学学报 (医学版) , 2009, 30 (4) :522-525.

[3]Hendriks DJ, Mol BW, Bancsi LF, et al.Antral follicle count in the prediction of poor ovarian response and pregnancy after in vitro fertilization:a meta analysis and comparison with basal follicle stimulating hormone level[J].Fertil Steril, 2005, 83 (2) :291-301.

[4]Bsncsi LF, Broekmans FJ, Eijkemans MJ, et al.Predictors of poor ovarian response in vitro fertilization:a prospective study comparing basal markers of ovarianr eser ve[J].Fertil Steril, 2002, 77 (2) :328-336.

[5]Kupesic S, Kurjak A, Bjelos D, et al.Threedimesionalult rasonog raphic ovarian measurements and invitro outcome are related to age[J].Fertil Steril, 2003, 79 (1) :190-197.

[6]Esposito MA, Coutifaris C, Barnhart KT.Amoderately elevated day3FSH concentration has limited predictive value, especially in younger women[J].Hum Reprod, 2002, 17 (1) :118-123.

[7]Maheshwari A, Fowler P, Bhattacharya S.Assessment of ovarian reserve_should we perform tests of ovarian reserve routinely?[J].Human Reprod, 2006, 21 (11) :2729-2735.

[8]周灿权, 钟依平.对超排卵反应不良患者的应对策略[J].实用妇产科杂志, 2005, 21 (8) :463-466.

[9]Shrim A, Elizur SE, Seidman DS, et al.Elevated day3FSH/LH ratio due to low LH concent rations predicts reduced ovarian response[J].Reprod Biomed Online, 2006, 12 (4) :418-422.

[10]Han JZ, Wang G, Zhang HA.An interventional treatment of transvaginal CDF1sonograghy for early tubal pregnancy[J].China Journal of Mordern Medicine, 2003, 13 (9) :145-146.

卵泡雌激素 篇2

2004年Kobayashi Y等通过RT-PCR和免疫组化证实CARTm RNA、CART肽存在于牛卵巢内。他们发现CART m RNA与CART肽存在于牛卵巢次级卵泡颗粒细胞内, 但在优势卵泡内没有发现。通过细胞培养证明CART肽抑制牛卵泡颗粒细胞FSH介导的雌激素分泌, 但是不影响孕激素分泌。2009年Lihua Lv等证明在卵泡分化早期, 健康卵泡 (E>P) 内CART含量低于闭锁卵泡 (E

2005年Vicentic A用At T20细胞系, 观察到了CART肽的饱和现象。故推测细胞上存在CART肽的受体。2007年, Sen A用牛卵泡颗粒细胞为实验材料, 对CART抑制其FSH介导的雌激素分泌的分子机理做了初步探索。

本实验通过对绵羊颗粒细胞体外培养体系中梯度量加入CART和胰岛素, 来探究CART和胰岛素对体外培养的绵羊颗粒细胞生长增殖和雌激素的分泌量的影响。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验样品

本实验采用的绵羊卵巢取自晋中市清徐县绵羊屠宰场。卵巢自母体绵羊中取出后立刻放入40℃无菌含抗生素的DPBS中, 2h内带回实验室。

1.1.2 主要试剂

MEMα培养液、双抗 (青链霉素混合液) 购于Gibco公司;胎牛血清、两性霉素B、FSH购于Invitrogen公司;胰蛋白酶 (Solarbio) ;CART;雄激素、亚硒酸钠、转铁蛋白、HEPES缓冲剂、胰岛素样生长因子 (IGF-I) 、碳酸氢钠、胰岛素、牛血清白蛋白 (BSA) 购于Sigma公司。

1.1.3 细胞培养液 (基础培养液)

MEMα基础培养液中加入各种物质的终浓度为青霉素10万U/L、链霉素0.1g/L、两性霉素B 1mg/L、HEPES 0.02mol/L、BSA 1g/L、FSH5ng/L、Na HCO30.84g/L、非必需氨基酸1.1mL/L、亚硒酸钠40μg/L、转铁蛋白5mg/L、雄烯二酮10～6mol/L、IGF-I 5μL/L。用1mol/LNaOH调节pH值至7.0～7.4之间, 用0.22μm滤膜滤器过滤除菌。

1.2 试验方法

1.2.1 收集颗粒细胞

用眼科剪剪下卵巢上的卵泡, 放入预先配好的40℃培养液中。在超净台内将卵泡剪成两半, 用刮刀刮下卵泡内壁的颗粒细胞。将刮下的细胞连同培养液收集到离心管中, 1400rpm离心5min, 弃上清。加入培养液重悬细胞后再次离心弃上清, 再重复一次, 以清洗细胞。

1.2.2 颗粒细胞的培养

采用96孔细胞培养板, 分为3个大组, 每个大组有4个小组, 共12个小组, 每个小组做6个重复。每个孔中加入5万个颗粒细胞, 使3个大组胰岛素浓度分为0ng/mL, 1ng/mL, 10ng/mL。每孔终体积为200mL。培养温度为37℃, CO2为5%, 饱和湿度。每48h, 换培养液一次。第6天换培养液时, 在每个大组中的4个小组中分别加入不同浓度的CART。培养第7天收集培养液和颗粒细胞。

1.2.3 细胞计数

在每孔中加入100μL胰酶溶液, 37℃下消化5～10min后, 每两孔合并一孔收集到已加入200μL10%的FBS的EP管中终止消化。台盼蓝染色后进行活细胞计数。

1.2.4 E2含量的测定

每两孔合并一孔收集细胞培养液, 使用绵羊E2 Elisa试剂盒 (上海Blue Gene) , 采取双抗体夹心法, 最终孵育后用酶标仪在450nm下测光吸收。获得OD值后, 整理标准品的数据采用四参数Logistic曲线拟合法获得标准曲线, 根据标准曲线方程和各样品的所测OD值得出各样品的浓度。

2 结果与分析

2.1 CART与胰岛素对绵羊颗粒细胞增殖的影响

试验统计分析用SPSS软件采用单因素方差进行分析, 结果表明, 没有添加胰岛素的组的颗粒细胞数量基本无边变化, 而添加胰岛素的组的颗粒细胞数量显著增加 (P<0.05) , 但是胰岛素浓度的提高并没有让颗粒细胞数量的增加有显著提升 (P>0.05) 。当培养液中加入CART时, 颗粒细胞的数量显著的减少, 但是随着CART浓度的提高, 数量减少并不明显。当体系中未添加CART并且胰岛素为10ng/mL时, 颗粒细胞的数目最多, 为9.3×104个/孔;当CART浓度为1ng/mL而不添加胰岛素时, 颗粒细胞细胞数量最少, 为3×104个/孔。

2.2 CART与胰岛素对E2分泌量的影响

当体系中未添加胰岛素时, 无论添加CART与否, 雌激素的分泌量都很少, 浓度在144.6～231.22pg/10, 000cells。当胰岛素浓度为10ng/mL, CART浓度为0时, 雌激素的分泌量最多, 为787.17pg/10, 000cells。当体系中加入CART后雌激素分泌量显著降低 (P<0.05) , 但是随着CART浓度的升高, 雌激素的分泌量并没有明显继续的降低。

3 讨论

3.1

FSH是公认的促进卵泡颗粒细胞增殖与雌激素分泌的激素。颗粒细胞中有FSH受体, 当受体与FSH结合时, 可以通过c AMP信号途径激活芳香化酶的活性, 从而使得雄激素转化为雌激素的能力增强, 进而促使颗粒细胞的增殖, 同时提高颗粒细胞E2的分泌量等。颗粒细胞上同样存在胰岛素的受体, 体外培养的颗粒细胞在有胰岛素的存在下细胞代谢得以增强。

3.2

本试验得出颗粒细胞的体外培养体系中不添加胰岛素, 颗粒细胞基本不会增殖, 反而会由于体外培养条件与体内本身条件有所差异造成部分颗粒细胞的死亡, 当然也有可能由于颗粒细胞的正常凋亡导致在无胰岛素体系中颗粒细胞数量的减少。试验采用了三个胰岛素浓度, 当培养体系中加入胰岛素时, 颗粒细胞明显有所增值, 但是由于培养时间和体外模拟的培养条件终究无法与体内媲美, 细胞数量的增加有限。当胰岛素的浓度继续提高时, 细胞数量并没有显著的增多, 说明胰岛素对颗粒细胞代谢影响存在剂量依赖效应。

3.3

在无CART添加的培养体系中, E2的分泌量与胰岛素的添加量呈正相关。当培养体系中的CART浓度为0.01ng/mL时, E2的分泌量下降了约一倍。当CART浓度提高到0.1ng/mL时, E2的分泌量继续减少。但是继续提升CART浓度, E2的分泌却没有明显的下降。由此推断, CART对颗粒细胞雌激素的分泌有明显抑制作用;但是雌激素的分泌量并不与CART的添加量存在线性关系, 而是存在一个阈值。在一定的范围内, 提高培养体系中的CART浓度, 颗粒细胞的雌激素分泌量相应的降低, 当超过一定值之后, CART对雌激素的分泌的抑制作用将不再显著的降低。这可能与细胞的耐受性及细胞中存在的CART受体数量有关。

3.4

在添加有胰岛素的培养体系中加入CART, 不仅雌激素的分泌得到了抑制, 颗粒细胞数量的增加也有所减少。可见CART不仅能抑制颗粒细胞雌激素的分泌, 还能通过与其细胞中的受体结合影响细胞代谢, 抑制颗粒细胞的增殖。CART对颗粒细胞增殖的抑制同样存在剂量依赖效应。当CART浓度为0.01ng/mL时, 抑制作用明显。继续提高CART浓度, 细胞数量没有明显的减少。

由于颗粒细胞对卵泡发育的重要作用, 研究CART与胰岛素对颗粒细胞的作用, 对认知雌性动物卵泡的生长发育机制将存在重要意义。通对动物体内CART的表达控制, 从而调控卵泡的生长发育, 进而为调控雌性动物的排卵提供个又一种可能。

参考文献

[1]Spiess J, et al.Isolation and sequence analysis of a so matostatin-like polypeptide from ovine hypothalamus[J].Biochemistry1981, 20:1982-8.

[2]Douglass J, et al.PCR differential display identifies a rat brain mRNA that is transcriptionally regulated by cocaine and amphetamine[J].J Neurosci1995, 15:2471-81.

[3]Jana Maixnerova.Structure activity relationship of CART (cocaine and amphetamine-regulated transcript) peptide fragments.Peptides2007, 27:2123-31.

[4]Kobayashi Y, et al.2004, Evidence that cocaine and am phetamine-regulated transcript is a novel intraovarian regulator of follicular atresia.Endocrinology145:5373-5383.

[5]Lihua Lv, et al.Biology of Reproduction2009, 81:580-586.

[6]Vicentic A, et al.2005, CART (cocaine and amphetamineregulated transcript) peptide receptors:specific binding in AtT20cells[J].Eur J Pharmacol528:188-189.

[7]Aritro Sen, et al.Endocrinology2007, 148 (9) :4400-4410.

[8]Aritro Sen, et al.Cocaine and Amphetamine Regulated TranscriptRegulation of Follicle Stimulating Hormon e SignalTransduction in Bovine Granulosa Cells[J].En docrinology148 (9) :4400-4410.

[9]黄洋, 等.绵羊卵泡颗粒细胞体外培养条件的优化[J].山西农业科学, 2012, 40 (2) :161-163.

[10]王锋.卵泡生长发育成熟及其内分泌调控[J].国外兽医学-畜禽, 1994, (1) :1-8.

卵泡雌激素 篇3

1 材料与方法

1.1 动物

清洁级健康雌性SD大鼠，体重（220±26)g/只（第三军医大学动物室提供），合格号SCXK（军）2007-017。

1.2 主要试剂

Trizol液（杭州博日），RT反应体系试剂盒，目的基因和内参基因引物（宝生物公司）、壬基酚（日本化成）。

1.3 主要仪器

高速冷冻离心机（德国Eppendorf公司），紫外分光光度计（北京通用），扩增仪。

1.4 方法

1.4.1 动物部分

大鼠适应性饲养1周后，按雌雄2∶1比例同笼交配，次日晨雌鼠阴道涂片，发现精子当日记为孕期0 d(E0），以后依次为E1、E2……E19，将孕鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组和NP染毒组，每组8只。NP组分别为：低剂量组20 mg/（kg·d），中剂量组40 mg/（kg·d），高剂量组80 mg/（kg·d）。在孕鼠的E14～E19期间，NP溶于纯花生油中，分别于每天9∶00～10∶00灌胃染毒，灌胃体积1 ml/100 g，每天称1次体重，以适时调整灌胃量。阴性对照组给予同体积的花生油，阳性对照组给予30μg/（kg·d）雌二醇。孕第19天以颈椎脱臼法处死大鼠，取胎鼠睾丸，组织匀浆后加入Trizol，-80℃冻存备用。

1.4.2 RNA提取

逆转录和扩增均严格按照试剂公司试剂说明书操作。基因的引物序列：FSHR上游：5′-GCT GGA TTT GGA GAC CTG GAG A-3′，下游：5′-CAT GCA ACT TGG GTA GGT TGG AG-3′，长度97 bp；β-actin上游：5′-GCC AAC A-CA GTG CTG TCT-3′，下游：5′-AGG AGC AAT GAT CTT GAT CTT-3′。每一样品设3个复孔，结果分析用相对定量法：(1)Ctaverage=（Ct1+Ct2+Ct3）/3（重复管）；(2)△△Ct=（Ct目的-Ct内参）实验组-（Ct目的-Ct内参）对照组；(3)目的基因相对表达量=2-△△Ct。

1.5 统计学方法

所有数据均以均数±标准差（x±s）表示，结果用SPSS 13.0统计软件分析，P<0.05表示有显著性差异。

2 结果

与阴性对照组比较，NP低剂量组FSHR mRNA表达增高，但随着剂量的增加，表达降低，差异有统计学意义，见表1、图1、2。

与阴性对照组比较,*P<0.05,**P<0.01

3 讨论

SCs是睾丸生精上皮中唯一的非生殖细胞，对生精细胞起支持和营养作用，也是创造和保证生精细胞增生、分裂和成熟的主要细胞。Monsees等[6]曾用SCs作为毒物作用的靶细胞，探讨以抑制素的分泌量作为外源性毒物对SCs毒性标致物的可能性，结果显示，对SCs有毒性的化学物均可能使SCs分泌抑制素降低。Meehan等[7]研究证明，SCs可以通过分泌抑制素，在睾丸的早期发育阶段调节生殖细胞的发育过程。睾丸的功能受FSH和LH 2个促性腺激素的调控，FSH被认为对精子的发生起重要的促进作用，而FSH通过作用于睾丸SCs的FSHR发挥作用[8]，FSHR位于SCs的胞膜上，属于G蛋白耦联受体超家族中的糖蛋白亚家族成员，其细胞外域具有FSH特异性结合位点，FSH和FSHR结合后，使SCs内cAMP增高，从而激活蛋白激酶A(PKA），激活的PKA移入胞核内，使某些调控因子磷酸化，磷酸化的转录因子与特定的基因调控部位结合，导致一系列的蛋白酶和转录因子激活。FSHR基因的表达具有高度细胞特异性，实验证明，睾丸中只有SCs表达FSHR[9]，陈雪雁等[10]用原位杂交试验也证实在雄性大鼠中，FSHR只位于睾丸支持细胞。

卵泡雌激素 篇4

1 材料与方法

1.1 材料

回顾性分析2005年1月~2009年7月我院经手术和病理证实的78例子宫内膜癌患者的组织石蜡标本组织,年龄43~75岁,平均45.6岁。按WHO 2003年女性生殖器官系统肿瘤分类,其中,高分化36例,中分化28例,低分化14例。所有患者均为第1次手术,且术前未接受任何形式的放疗和化疗。另选78例肿块旁正常子宫内膜组织作对照。

1.2 实验试剂

兔抗人FSHR、LHR单克隆抗体,免疫组化S-P试剂盒及DAB显色试剂盒均为武汉博士德公司产品。

1.3 实验方法

所有实验标本均为4%中性福尔马林固定,石蜡包埋,切片,染色,SP免疫组化染色,DAB显色,苏木素复染,脱水透明。以PBS代替一抗作为阴性对照,使用试剂公司提供的阳性片作为阳性对照。

1.4 结果判定标准

FSHR、LHR蛋白阳性染色为棕黄色颗粒,定位于细胞膜和(或)质,根据阳性细胞数和染色强度。阳性细胞数<5%为阴性,≥5%~25%计1分,≥25%~50%计2分,≥50%~75%计3分,≥75%计4分;阳性强度以淡黄色计1分,黄色计2分,棕黄色计3分;二者分别相乘,1~4分为弱阳性(+),5~8分为中等阳性(++),9~12分为强阳性(+++)。

1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析,采用χ2检验,运用Spearman等级相关对FSHR和LHR的表达相关性进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 卵泡刺激素受体、黄体生成素受体在子宫内膜癌中的表达

FSHR、LHR主要定位细胞膜和细胞质,阳性染色为棕黄色(见图1、2)。在78例子宫内膜癌组织中,FSHR、LHR的阳性表达率随着肿瘤分化程度的降低而降低,见表1。由表1可见,FSHR和LHR阳性表达率低分化癌显著低于高分化癌,三组之间差异有统计学意义(χ2=9.037,P=0.011;χ2=9.253,P=0.010)。

2.2 子宫内膜癌中卵泡刺激素受体、黄体生成素受体表达之间的关系

采用Spearman等级相关分析表明,子宫内膜癌组织中FSHR与LHR表达呈正相关(r=0.371,P<0.01)。见表2。

3 讨论

FSH和LH是垂体分泌的两种重要的促性腺激素,正常水平下,二者通过结合卵巢组织中FSHR和LHR发挥生理作用。FSHR和LHR通常情况下存在于卵巢颗粒细胞及卵泡膜细胞中,正常的乳腺、前列腺和颌下腺组织亦有一定数量的表达。体外研究表明,FSH能明显诱导兔、老鼠卵巢上皮细胞的增殖,并抑制卵巢癌细胞的凋亡[3]。有学者发现,在子宫内膜癌发生过程中,LH可增强肿瘤细胞的侵袭性[4]。新近有文献报道,FSHR和LHR可存在于一些恶性肿瘤中,FSH和LH能够通过其受体促进这类肿瘤细胞的MMP-2和MMP-9的表达和活性,从而提高肿瘤的侵袭与增殖能力[5]。

笔者采用免疫组织化学的方法,发现FSHR和LHR在子宫内膜癌中均有表达,二者的定位位于细胞膜和细胞质,且FSHR和LHR在内膜癌组织中的表达水平与肿瘤分化程度密切相关。肿瘤分化越好,二者表达水平越高;反之,肿瘤分化越差,二者表达水平越低,差异有统计学意义。FSHR和LHR在子宫内膜癌组织中表达的具体意义目前尚不清楚,可能与肿瘤的激素依赖性相关。有文献报道,对于FSHR和LHR阳性表达的肿瘤患者,采用Gn RH类似物或拮抗剂进行抗肿瘤治疗收到了良好的临床效果[6]。笔者的研究表明,子宫高分化内膜癌组织中FSHR和LHR的表达相对较高,对于此类患者,采用于Gn RH类似物或拮抗剂治疗效果可能要更好。

LHR和FSHR的表达在笔者的实验中表现出一致性,提示二者在子宫内膜癌中的表达可能具有一定的相关性。有文献报道,FSH与受体结合后,一方面能够活化芳香化酶,另一方面可以诱导LH受体形成,其中机制仍需进一步研究[7],这也为笔者的实验提供了一个比较好的解释。LHR和FSHR的表达相关性为制订子宫内膜癌的内分泌治疗方案提供了较好的参考。

参考文献

[1]Hinkula M,Pukkala E,Kyyromen P,et al.Grand multiparity and incidenceof endometrial cancer:a population-based study in Finland[J].Int J Cancer,2002,98(6):912-915.

[2]Ziecik AJ,Bodek G,Blitek A,et al.Nongonadal LH receptors,their involvement in female reproductive function and a new applicalbe approach[J].Vet J,2005,169(1):75-84.

[3]Davies BR,Finnigan DS,Smith SK,et al.Administration of gonadotropinsstimulates proliferation of normal mouse ovarian surface epithelium[J].Gynecol Endocrinal,1999,13:75-81.

[4]Dabizzi S,Noci I,Borri P,et al.Luteinizing hormone increase humanendometrial cancer cells invasiveness through activation of proteinkinase A[J].Cancer Res,2003,63(14):4281-4286.

[5]Grabiec M,Szymanski W,Jendryczka J,et al.Concentrations of MMP-1,TIMP-1,MMP-1/TIMP-1 and I CTP complexes in follicular fluid as relatedto fertilization rate in women treated with in-vitro fertilization[J].Ginekol Pol,2001,72(3):107-112.

[6]Davies S,Bax CM,Chatzaki E,et al.Regulation of endometrial cancercell growth by luteinizing hormone(LH)and follicle stimulatinghormone(FSH)[J].Br J Cancer,2000,83(12):1730-1734.