丙氨酰-谷氨酰胺双肽（精选6篇）
丙氨酰-谷氨酰胺双肽 篇1
缺血/再灌注是指因各种原因导致组织血流短时间突然中断后, 在靶器官或组织再次恢复血液供应, 组织缺乏氧恢复而造成的机体组织细胞因能量消耗、氧自由基损伤及炎性介质反应等多因素导致的二次组织损伤的病理生理过程[1,2]。如何有效减轻缺血/再灌注后肠黏膜损伤是临床研究的重要课题[3]。有研究报道[4]谷氨酰胺是机体必须氨基酸, 为组织细胞代谢提供能量底物[5], 当肠功能衰竭时, 肠黏膜细胞内谷氨酰胺含量下降。提供外源性谷氨酰胺能否防治缺血再灌注损伤肠黏膜功能的恢复, 尚缺乏研究。本课题研究丙氨酰—谷氨酰胺对于缺血/再灌注后肠道黏膜的保护机制, 现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
选择健康成年新西兰兔30只, 雌雄不限, 体质量 (366.89±47.36) g, 山东大学实验动物中心提供, 许可证号为SCEK (鲁) 2014-0007。实验符合动物伦理学标准。
1.2 建立缺血再灌注模型
参照文献[3, 4]建立新西兰兔缺血再灌注肠损伤模型:10%水合氯醛腹腔麻醉, 腹部正中切口, 钝性游离肠系膜上动脉, 无创动脉止血夹完全阻断肠系膜上动脉血流, 时间1h。取出动脉夹, 恢复血流重新灌注。术后自由饮水、进食。
1.3 分组
按随机数字表法分为观察组与对照组各15只。采用完全夹闭阻断肠系膜上动脉1h后再开放恢复肠系膜上动脉血流方法制作缺血/再灌注肠损伤模型后。观察组:健康成年新西兰兔肠缺血/再灌注肠损伤模型建立前2h及模型建立后2h, 通过耳缘静脉分别给予丙氨酰—谷氨酰胺双肽1.0g/kg。对照组同期相同时间点分别给予等量的葡萄糖生理盐水静脉注射。
1.4 检测指标
新西兰兔模型建模成功后4h, 空气栓塞法处死新西兰兔, 手术摘取距离回盲瓣20cm小肠约5cm, 无菌生理盐水冲洗肠内容物, 部分肠组织置于10%甲醛固定。另外摘取新鲜肠组织1.0g, 制备成10%的肠组织匀浆。黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶 (SOD) , 硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛 (MDA) , 髓过氧化物酶 (MPO) 测定采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定, 试剂盒购自南京建成生物技术公司, 严格按说明书操作执行。
1.5 肠黏膜损伤评分
小肠组织切片并行HE染色, 光镜下观察小肠黏膜组织改变。采用Chiu 6级评分法进行肠道功能障碍评分:0~5分, 分值越高, 肠黏膜损伤越严重。
1.6 细菌培养方法
摘取新鲜肠系膜淋巴结, 无菌生理盐水清洗制作匀浆后行细菌定量培养及常规细菌学鉴定, 选取部分菌落与肠内容物细菌做菌种鉴定比照, 检测肠道细菌移位情况, 当在回肠培养出与肠腔内容物同一种细菌时可诊断为发生了细菌移位。
1.7统计学方法
计量资料以±s表示, 组间比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 2组MDA、MPO、SOD水平和Chiu 6级评分比较
观察组MDA、MPO水平和Chiu 6级评分低于对照组, SOD水平高于对照组, 差异均有统计学意义 (P<0.01) 。见表1。
注:与对照组比较, *P<0.01
2.2 小肠系膜淋巴结细菌培养比较
观察组菌落计数水平为 (467.94±154.29) ×105CFU/ml少于对照组的 (876.44±185.41) ×105CFU/ml, 菌种确定具有一致性 (两者一致性检验Kappa=0.79) , 绝大部分为肠道常驻菌, 以革兰阴性杆菌为主。
3 讨论
缺血/再灌注是因严重创伤、休克、感染等原因导致机体在应激状态下出现的一个病理生理过程。缺血/再灌注可引起机体多种靶器官的损伤, 如溶栓后导致的心肌损伤, 脑过度灌注损伤及肾损伤等。近年来缺血/再灌注肠损伤也逐渐被人们所认识。有研究表明[6,7]缺血/再灌注后肠黏膜屏障功能受损表现为炎性反应加重, 肠壁通透性增加, 如不能及时救治, 则易引发机体全身炎性反应综合征, 导致多脏器损伤。既往研究表明[8,9]造成缺血/再灌注的机制学说主要有氧自由基损伤学说。MDA是组织细胞产生脂质过氧化物反应的代谢产物。其含量高度反应氧自由基对组织细胞损伤的程度。SOD能够清除自由基, 是机体重要的抗氧化剂。提供外源性丙氨酰胺是否能够减少缺血/再灌注肠损伤, 其作用机制尚待进一步研究[10~12]。
研究结果发现缺血/再灌注损伤兔模型建立后, 对照组肠道黏膜肉眼观小肠黏膜充血、肿胀, 可见斑点状糜烂, 部分见炎性渗出物, 光镜下肠壁组织间中性粒细胞浸润, 血管内皮肿胀, 基底层结构不清。小肠绒毛数量减少, 高度降低, 形态不规则, 肠上皮细胞大小不一, 排列紊乱, 黏膜层厚度变薄, 隐窝结构不清楚, 小肠腺体萎缩。观察组小肠黏膜充血、肿胀明显减轻, 未见点状或片状糜乱。光镜下小肠绒毛数量未见明显减少, 形态基本正常, 黏膜层厚度正常及基底层结构清晰, 炎性细胞浸润较少。观察组与对照组比较, 菌落计数水平明显减少, 菌种一致性确定具有一致性, 绝大部分为肠道常驻菌, 以革兰阴性杆菌为主。分析原因与谷氨酰胺是外周组织氨基酸池中含量最丰富的必须氨基酸[13,14]。其作用主要为核酸、蛋白质合成提供能量, 同时又被氧化释放能量。正常情况下谷氨酰胺由组织细胞自身合成。但在缺血/再灌注损伤打击下, 合成不足, 细胞供能障碍, 导致肠功能衰竭。丙氨酰—谷氨酰胺是双肽氨基酸, 提供外源谷氨酰胺后, 明显提高肠壁黏膜组织抗氧化损伤能力, 减少了肠壁黏膜中性粒细胞趋化积聚, 减轻肠壁损伤。
研究结果表明丙氨酰—谷氨酰胺双肽能够保护缺血再灌注损伤后肠黏膜屏障功能, 减少肠道菌群移位, 其机制可能与抑制缺血/再灌注后肠道黏膜脂质过氧化, 减少中心粒细胞浸润及增加抗氧化功能有关。
丙氨酰-谷氨酰胺双肽 篇2
1 材料与方法
1.1 材料
选择健康成年新西兰兔30只, 雌雄不限, 体质量 (366.89±47.36) g, 山东大学实验动物中心提供, 许可证号为SCEK (鲁) 2014-0007。实验符合动物伦理学标准。
1.2 分组
将30只新西兰兔随机分为治疗组与对照组各15只。采用完全夹闭阻断肠系膜上动脉1h后再开放恢复肠系膜上动脉血流方法制作缺血/再灌注肠损伤模型后, 治疗组在健康成年新西兰兔肠缺血/再灌注肠损伤模型建立前2h及模型建立后2h, 通过耳缘静脉分别给予丙氨酰—谷氨酰胺双肽1次, 剂量为1.0g/kg。对照组同期相同时间点分别给予等量的葡萄糖生理盐水静脉注射。
1.3 缺血再灌注模型
参照文献[3, 4]方法建立新西兰兔缺血再灌注肠损伤模型, 采用10%水合氯醛腹腔麻醉, 兔仰卧位固定。备皮消毒后, 腹部正中切口, 钝性分离腹前肌, 钝性游离肠系膜上动脉, 无创动脉止血夹完全阻断肠系膜上动脉血流, 观察粉红色肠壁颜色变淡, 变白。阻断血流时间为1h。取出动脉夹, 恢复血流重新灌注, 缝合肌肉层及皮肤。术后将新西兰兔放入有清洁垫料的饲养盒中饲养, 让其自由饮水、进食。
1.4 肠黏膜损伤评分
建模成功后, 小肠组织切片并行HE染色, 光镜下观察小肠黏膜组织改变。采用Chiu 6级评分法进行肠道功能障碍评分:0分:正常小肠黏膜绒毛, 无神经缺损征象;1分:小肠黏膜绒毛顶端上皮下间隙增大;2分:小肠黏膜绒毛上皮层与固有层中度分离;3分:小肠绒毛两侧也有大量分离及伴有部分绒毛顶端破损;4分:小肠绒毛顶端破损班伴有固有层毛细血管暴露;5分:固有层破坏、出血、溃疡[7]。
1.5 检测指标
新西兰兔模型建模成功后4h, 空气栓塞法处死新西兰兔, 手术摘取距离回盲瓣20cm小肠约5cm, 无菌生理盐水冲洗肠内容物, 刮取新鲜肠黏膜组织0.5g, 使用生理盐水稀释, 制备成10%的肠组织匀浆。3000r/min离心10min留取上清液。检测匀浆中上清液中肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 与白介素-6 (IL-6) 含量。TNF-α、IL-6测定采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定, 试剂盒购自南京建成生物技术公司, 严格按说明书操作执行。
1.6 中性粒细胞分离及活性检测
取肠系膜上静脉抗凝血3ml, 3000r/min离心, 沉淀的细胞加入3%葡聚糖混匀, 弃上清液, 细胞洗涤后重悬Hanka液, 二次分加Percoll, 再次离心, 离心液收集白细胞, 台盼蓝染色后显微镜下计数活细胞>95%, 调整细胞浓度, 上机检测中性粒细胞 (PMN) 。化学发光法检测PMN呼吸爆发化学发光强度, 以计算机自动描记其峰值曲线代表释放自由基的活性程度。
1.7 统计学方法
应用SPSS 19.0统计软件进行数据处理。计量资料以±s表示, 组间比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 肠黏膜损伤病理学变化
缺血/再灌注损伤兔模型建立后, 对照组肠道黏膜肉眼观小肠黏膜充血、肿胀, 可见斑点状糜烂, 部分见炎性渗出物, 光镜下肠壁组织间中性粒细胞浸润, 血管内皮肿胀, 基底层结构不清。小肠绒毛数量减少, 高度降低, 形态不规则, 肠上皮细胞大小不一, 排列紊乱, 黏膜层厚度变薄, 隐窝结构不清楚, 小肠腺体萎缩。治疗组小肠黏膜充血、肿胀明显减轻, 未见点状或片状糜乱。光镜下小肠绒毛数量未见明显减少, 形态基本正常, 黏膜层厚度正常及基底层结构清晰, 炎性细胞浸润较少。
2.2 肠损伤程度评分
治疗组的肠损伤程度评分为 (2.15±0.93) 分低于对照组的 (4.98±0.85) 分, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。
2.3 肠黏膜组织中TNF-α、IL-6及PMN计数变化
治疗组TNF-α、IL-6水平明显低于对照组, PMN低于对照组, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。
注:与对照组比较, *P<0.05
3 讨论
肠道黏膜是各种炎性反应、创伤、休克后细胞因子及炎性递质产生的重要器官之一。创伤、休克、重症感染等各种原因导致的缺血/再灌注是引起急性肠损伤的主要原因[8]。既往有研究表明缺血/再灌注可引起肠道黏膜急性炎性反应, 分泌或激活多种细胞因子及炎性递质, 介导肠道黏膜血管内皮细胞损伤, 导致肠道黏膜通透性改变[9]。TNF-α、IL-6是肠黏膜上皮细胞分泌的重要炎性递质。有研究表明血浆中及肠道黏膜组织中的炎性递质的瀑布爆发可能与肠黏膜损伤及通透性改变关系密切[10]。谷氨酰胺是外周血液循环池中及靶器官组织中游离氨基酸池中含量最丰富的一种必需氨基酸, 其主要生理作用是为体内核酸合成提供氮源, 同时也可被氧化释放能量, 是肠道黏膜上皮细胞的主要功能物质。当严重创伤打击时, 肠上皮细胞内谷氨酰胺含量明显减少, 可造成肠道黏膜萎缩, 绒毛变短, 肠屏障功能下降。丙氨酰—谷氨酰胺是双肽功能物质, 外源性谷氨酰胺是否能对缺血/再灌注肠黏膜损伤提供保护, 其作用机制尚不清楚[11]。
研究结果发现缺血/再灌注损伤兔模型建立后, 对照组肠道黏膜肉眼观小肠黏膜充血、肿胀, 可见斑点状糜烂, 部分见炎性渗出物, 光镜下肠壁组织间中性粒细胞浸润, 血管内皮肿胀, 基底层结构不清。小肠绒毛数量减少, 高度降低, 形态不规则, 肠上皮细胞大小不一, 排列紊乱, 黏膜层厚度变薄, 隐窝结构不清楚, 小肠腺体萎缩[12]。治疗组小肠黏膜充血、肿胀明显减轻, 未见点状或片状糜乱。光镜下小肠绒毛数量未见明显减少, 形态基本正常, 黏膜层厚度正常及基底层结构清晰, 炎性细胞浸润较少。治疗组的肠损伤程度评分为 (2.15±0.93) 分低于对照组的 (4.98±0.85) 分, 治疗组TNF-α、IL-6水平明显低于对照组, PMN低于对照组, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。分析原因与缺血/再灌注肠道黏膜可促进多种细胞因子表达及炎性递质释放, 激活组织中性粒细胞, 诱导外周循环中性粒细胞在肠道黏膜的趋化、聚集效应, 释放各种氧化酶及蛋白酶类, 破坏内皮细胞, 导致肠道黏膜通透性改变。谷氨酰胺是机体免疫系统的主要能源, 是机体免疫细胞合成代谢的主要底物。补充外源性丙氨酰—谷氨酰胺可有效减少炎性递质释放, 减少中性粒细胞趋化聚集现象, 降低肠道黏膜组织损伤程度。
丙氨酰-谷氨酰胺双肽 篇3
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪 (SPD-20A二极管阵列检测器、RID-10A泵) , 紫外-可见分光光度计, XS205Du型电子分析天平 (梅特勒-托利多仪器上海有限公司) 、HWS-12电热恒温水浴锅 (上海精密科学仪器有限公司) ;320-S型酸度计 (梅特勒-托利多仪器上海有限公司) 。
1.2 试药
丙氨酰谷氨酰胺 (批号140421301;厂家:辰欣药业股份有限公司) 、环- (L-丙氨酰-L-谷氨酰胺) 对照品 (批号:1049962;厂家:瑞士巴亨公司 (Bachem) ) 、环- (L-丙氨酰-L-谷氨酰) 对照品 (批号:0546372;厂家:瑞士巴亨公司 (Bachem) ) 、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸对照品 (批号:1049580;厂家:瑞士巴亨公司 (Bachem) ) 、L-焦谷氨酸对照品 (批号:1.2;厂家:EDQM) 、D-丙氨酰-L-谷氨酰胺对照品 (批号:1034612;厂家:瑞士巴亨公司 (Bachem) ) 、丙氨酰谷氨酰胺对照品 (批号:X2GBC-MS;厂家:东京化成工业株式会社 (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd) ) 、L-丙氨酰-L-谷氨酸对照品 (批号:1034574;厂家:瑞士巴亨公司 (Bachem) ) ;活性炭 (批号:1001087, 厂家:上海兴长活性炭有限公司) 。
2 制备工艺
2.1 充氮工艺
为提高样品稳定性, 选择在配料和灌封时充入氮气, 以置换存在于溶液中和玻璃瓶上方的氧气, 提高本品的稳定性。为此, 进行了充氮气与不充氮气的比较研究。
充氮气样品制备:量取800mL注射用水, 持续充入氮气, 冷却至50℃, 加入丙氨酰谷氨酰胺200g, 搅拌使完全溶解。用0.1mol/L盐酸或者氢氧化钠调节pH值至5.4~6.0, 补加注射用水至全量。充氮下灌封于常规工艺洗净的50mL输液瓶中, 上塞、轧盖。115℃灭菌30min。
不充氮气样品制备:除配制和灌封全过程不充氮气外, 其他操作同充氮气样品的制备。
将充氮与不充氮的灭菌样品分别在高温60℃下放置10天, 取样检测关键质量指标, 并与0天数据比较, 结果见表1。
结果表明, 0时充氮样品质量要好于0时不充氮样品;60℃放置10天后, 充氮样品与0时相比, pH值、有关物质及含量变化不大, 均合格;未充氮样品与0时相比, pH值及含量基本没变, 但有关物质变化较大, 部分杂质超限。故本品在配制和灌装时充氮进行氧气置换对产品质量有明显的提高, 选择在生产工艺中全程充氮。
2.2 不同pH值筛选
国内已上市的丙氨酰谷氨酰胺注射液 (50mg∶10g) pH值范围为5.4~6.0, 据此, 对本品在该pH值范围内的稳定性进行试验, 以最终确定本品的pH值范围。
样品制备方法:量取1 200mL注射用水, 持续充入氮气, 冷却至50℃, 加入丙氨酰谷氨酰胺300g, 搅拌使完全溶解。
将配制好的样品平均分为3份, 分别用0.1mol/L盐酸或氢氧化钠调节pH值至5.4、5.7、6.0, 补加注射用水至全量。充氮下灌封于常规工艺洗净的50mL输液瓶中, 上塞、轧盖。115℃灭菌30min, 将灭菌后的成品于60℃下放置10天考察样品的稳定性。结果见表2。
经试验证明, 本品在pH 5.4~6.0范围内, 经115℃灭菌30min得到的成品高温放置10天后与0时相比:pH值、性状几无变化;已知杂质有所增大;含量基本没变;三个不同pH值的样品平行性良好, 因此, 选择本品的pH值为5.4~6.0。
2.3 活性炭用量筛选
样品制备方法:量取1 200mL注射用水, 持续充入氮气, 冷却至50℃, 加入丙氨酰谷氨酰胺300g, 搅拌使完全溶解。用0.1mol/L盐酸或者氢氧化钠调节pH值至5.4~6.0。
将配制好的样品平均分为3份, 一份不加药用炭吸附, 另外两份分别加入0.05% (g/mL) 、0.08% (g/mL) 药用炭, 搅拌15min, 脱碳后, 补加注射用水至全量, 搅匀。过滤后考察半成品的性状、可见异物、细菌内毒素、pH值和含量。结果见表3。
试验结果说明, 在配制过程中加0.05% (g/mL) 及0.08% (g/mL) 药用炭, 所制成样品的性状、可见异物符合规定, 对pH值没有影响, 对主药略有少量吸附, 为保证在以后生产过程中产品的质量, 确定在配制过程中加入0.05% (w/v) 活性炭。
2.4 灭菌温度选择
样品制备方法为:量取1 200mL注射用水, 持续充入氮气, 冷却至50℃, 加入丙氨酰谷氨酰胺300g, 搅拌使完全溶解。用0.1mol/L盐酸或者氢氧化钠调节pH值至5.4~6.0, 加入0.75g活性炭, 搅拌吸附15min, 脱碳后, 补加注射用水至全量。
充氮下灌封于常规工艺洗净的50mL输液瓶中, 上塞、轧盖。将样品分为3份, 一份留作半成品, 另两份分别选用115℃灭菌30min, 121℃灭菌15min。考察两种灭菌条件下成品的情况。结果见表4。
从上述实验结果看, 121℃、15min下, 样品的含量略有下降, 有关物质增加较大, 且有大部分已超过限度。115℃、30min灭菌条件与半成品相比, pH值、含量及有关物质变化均不大。故选择115℃、30min为最终的灭菌温度。
3 制备样品初步稳定性分析
通过上述筛选, 最佳处方关键控制点定位活性炭用量为0.3%, pH值为5.4~6.0, 灭菌参数为115℃、30min, 配制及灌装过程全程充氮, 以该处方制备的样品置于加速条件温度 (40±2) ℃、相对湿度 (75±5) %及长期条件温度 (25±2) ℃、相对湿度 (60±10) %进行初步稳定性考察。结果见表5、表6。
从以上实验结果可以看出该产品在加速6个月内、长期12个月内pH值、性状、有关物质及含量均符合规定, 表明该产品质量较稳定。
4 讨论
从氮气处方筛选结果看, 氮气对产品质量影响较大, 因此为保证产品质量, 实际生产时配制及灌装过程要全程充氮。从pH值、活性炭及灭菌参数筛选结果看, pH值定在5.4~6.0, 活性炭用量为0.05%, 灭菌参数为115℃、30min, 生产出来的样品已知杂质环- (L-丙氨酰-L-谷氨酰) 均小于0.05%, 且样品较稳定, 工艺可行。
参考文献
[1]刘敬臣, 王海棠, 王维.丙氨酰—谷氨酰胺对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用[J].中南大学学报:医学版, 2008, 33 (12) :1095-1100.
[2]孙忠民, 杨岚, 于楠等.丙氨酰—谷氨酰胺在有创机械通气时防治肠功能衰竭的作用[J].中国医师进修杂志, 2007, 30 (11) :53-54.
丙氨酰-谷氨酰胺双肽 篇4
1 材料与方法
1.1 研究对象
选取我院2010年1月~2011年5月收治的重型颅脑损伤患者39例, 随机分为两组:治疗组21例, 给予谷氨酰胺增强的营养支持;对照组18例, 只给予普通营养支持 (无谷氨酰胺, 其余营养成分同治疗组) 。治疗组男性14例, 女性7例;年龄19~62岁, 平均 (35.2±7.2) 岁;颅内损伤类型:脑挫裂伤7例, 脑内血肿6例, 硬膜下血肿5例, 硬膜外血肿3例;手术14例, 保守治疗7例。对照组男性11例, 女性7例, 年龄19~56岁, 平均 (34.9±6.8) 岁;颅内损伤类型:脑挫裂伤5例, 脑内血肿5例, 硬膜下血肿6例, 硬膜外血肿2例;手术12例, 保守治疗6例。为尽量排除非颅脑损伤因素对实验指标的影响, 所有入选病例均依据下列纳入和排除标准。纳入标准: (1) 年龄>18岁; (2) GCS评分5~8分; (3) 患者生存时间超过2周。排除标准: (1) 颅脑损伤合并有重要脏器损伤; (2) 既往有消化道出血等严重器官功能障碍; (3) 入院前已有感染征象。两组在性别、年龄、入院时GCS评分等临床资料方面均无显著性差异。
1.2 营养支持方法
根据身高、体质量、年龄、性别, 用Harris-Benedict公式推算静息代谢消耗 (resting metabolic expenditure, RME) , 再根据每天晨8时患者的GCS评分、心率 (HR) 、伤后天数 (DSI) , 用Clifton公式计算每天的热能需要量:GCS评分≤7分时, RME (%) =152-14 (GCS) +0.4 (HR) +7 (DSI) ;GCS评分≥8分时, RME (%) =90-3 (GCS) +0.9 (HR) 。入院后立即置鼻肠管, 采用输液泵持续均匀滴注的鼻饲方法。肠内营养制剂采用能全力 (无锡纽迪希亚制药有限公司) 以总热量的1/4开始, 每日以1/4递增逐渐过渡到全量, 不足部分由静脉营养补充, 采用糖脂双能源供热, 脂肪来源为20%的英脱利匹特, 非蛋白热量与氮之比为150∶1。对照组病例均采用上述营养支持方法, 治疗组营养支持方法同对照组, 但入院当日即静脉给予丙氨酰-谷氨酰胺 (哈尔滨三联药业有限公司) , 用量为0.4 g/kg·d。
1.3 检测指标
两组患者分别在伤后1、3、5、7 d各测定一次尿乳果糖排泄率、血浆DAO、D-乳酸和内毒素水平。
1.3.1尿乳果糖排泄率的测定
受检患者测试前日22时起禁食, 测试日晨8时排空膀胱后, 胃管内注入含乳果糖10 g的溶液150 m L, 收集随后6 h的尿液, HPLC检测 (带脉冲电化学检测器的高压液相离子色谱仪, 美国DIONEX公司) 尿中乳果糖的含量, 计算出乳果糖的排泄率。
1.3.2血浆DAO、D-乳酸和内毒素的测定
检测当日抽取外周血, 采用双抗体夹心法测定血浆中DAO、D-乳酸水平 (厦门慧嘉生物科技公司提供试剂盒) , 采用鲎试剂法检测血浆内毒素水平 (上海伊华科技公司提供试剂盒) 。
1.4 统计学处理
结果用采用SPSS 11.0进行数据分析, 数据采用均数±标准差 (±s) 表示, 统计学分析用ANOVA方差分析, Dunnett T3 post hoc检验。P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 尿乳果糖排泄率
伤后第1天的乳果糖排泄率, 治疗组与对照组相比无显著性差异, 伤后第3天治疗组与对照组相比有明显下降, 两者有显著性差异 (P<0.05) 。到第5、7天, 治疗组乳果糖排泄率下降更为显著, 两者有显著性差异 (P<0.01) 。
2.2 二胺氧化酶
伤后第1天, 治疗组的DAO值与对照组相比稍有下降, 但无显著性差异, 伤后第3天开始, 治疗组DAO值与对照组相比明显下降, 两者有显著性差异 (P<0.01) 。
2.3 D-乳酸
伤后第1天, 治疗组的D-乳酸值较对照组明显下降 (P<0.05) , 伤后第3天开始, 治疗组D-乳酸值与对照组相比显著下降 (P<0.01) 。
2.4 血浆内毒素
伤后第1天, 治疗组的血浆内毒素水平与对照组相比无显著性差异 (P>0.05) , 伤后第3、7天, 治疗组血浆内毒素水平与对照组相比明显下降 (P<0.05) , 伤后第5天, 治疗组血浆内毒素水平较对照组显著下降 (P<0.01) , 见附表。
注:1) 与对照组相比, P<0.05;2) 与对照组相比, P<0.01
3 讨论
重型颅脑损伤对机体来说是一种严重的应激状态, 为了保护心肺等重要器官, 全身血液重新分配, 胃肠道血流明显减少, 肠道黏膜出现缺血缺氧, 引起肠黏膜结构和肠道通透性改变、肠屏障功能损害以及细菌移位, 继而引起全身炎症反应综合征, 导致多器官功能障碍综合征[1,2], 加重机体功能紊乱。该研究对重型颅脑损伤患者给予丙氨酰-谷氨酰胺加强的营养支持, 以尿乳果糖排泄率、血浆DAO、D-乳酸和内毒素水平作为检测指标, 观察其对肠黏膜屏障功能的影响。
尿乳果糖/甘露醇比值、血浆二胺氧化酶、D-乳酸、内毒素是目前较为公认的评价肠黏膜屏障功能的指标[3,4]。重型颅脑损伤患者在救治过程中均使用较多量的甘露醇控制脑水肿, 尿液中甘露醇浓度较高, 而且受甘露醇输入量变化比较大。如果仍然采用尿中乳果糖/甘露醇比值来反映肠黏膜通透性, 误差极大, 因此该研究仅以乳果糖排泄率作为肠黏膜屏障功能检测指标。二胺氧化酶是人类和所有哺乳动物肠黏膜上层绒毛细胞胞质中具有高度活性的细胞内酶。该酶在小肠黏膜上层绒毛中含量高、活性也强, 在其它组织中则含量少、活性低。肠黏膜上皮细胞受损、坏死后该酶释放入血, 因而可通过测定其在外周血中变化来反映肠黏膜状态。人体内的D-乳酸主要是由胃肠道细菌发酵产生, 正常情况下很少被吸收, 并且哺乳动物不具备将其快速降解的酶系统。当肠屏障受损时, 肠道中细菌产生的大量D-乳酸通过受损的肠黏膜经局部循环进入血液, 故监测血中D-乳酸水平可及时反映肠黏膜损害程度。内毒素是革兰氏阴性菌的脂多糖成分, 在细菌崩解坏死或黏附到肠壁时才能释放出来。胃肠道是人体革兰氏阴性菌的最大储存库, 如果患者的肠黏膜屏障损害, 内毒素就容易通过肠黏膜屏障大量进入血循环, 故血浆内毒素能敏感地反映肠黏膜屏障功能。
谷氨酰胺是人体内最丰富的游离氨基酸, 占血浆游离氨基酸总量的20%。肠道是谷氨酰胺最主要的消耗器官。谷氨酰胺可在肠道局部减轻炎症反应、减少炎症介质的合成释放, 为肠黏膜提供能量, 维护肠屏障功能, 减少生物活性物质进入循环, 防止细菌移位和肠道毒素入血[5,6,7]。谷氨酰胺单体在溶液中不稳定, 形成对人体有害的焦谷氨酸和氨。导致谷氨酰胺在临床应用困难的另一原因是溶解度低, 20℃时谷氨酰胺单体在水中的溶解度为35g/L, 为降低谷氨酰胺形成焦谷氨酸和氨的危险性, 临床应用谷氨酰胺时浓度不超过1.5%, 而提供生理剂量的谷氨酰胺会增加机体水负荷, 会加重颅脑损伤患者脑水肿。丙氨酰-谷氨酰胺是一种常用的人工合成的含谷氨酰胺二肽, 其纯度可达100%, 20℃时丙氨酰-谷氨酰胺在水中溶解度是586 g/L, 性质稳定, 加入到氨基酸中不影响谷氨酰胺二肽的稳定性。因此本研究选用丙氨酰-谷氨酰胺加强的营养支持来观察其对肠黏膜屏障功能的影响。该研究发现, 给予丙氨酰-谷氨酰胺加强的营养支持的颅脑损伤患者较普通营养支持患者, 治疗3 d后其尿乳果糖排泄率、二胺氧化酶、D-乳酸、血浆内毒素水平都有明显下降, 提示丙氨酰-谷氨酰胺对重型颅脑损伤患者肠黏膜屏障损害有保护作用, 可以减轻肠黏膜屏障损害引发的全身炎症反应综合征和多器官功能障碍综合征, 改善患者的预后。
摘要：目的 探讨丙氨酰-谷氨酰胺 (Ala-Gln) 对重型颅脑损伤后肠黏膜屏障的影响。方法 将39名重型颅脑损伤患者随机分为治疗组 (Ala-Gln强化的营养支持, 21例) 和对照组 (普通营养支持, 18例) , 监测伤后1、3、5、7 d尿乳果糖排泄率、血浆二胺氧化酶 (DAO) 、D-乳酸和内毒素的变化。结果 伤后1 d治疗组较对照组尿乳果糖排泄率、血浆DAO、内毒素降低不明显, 伤后3、5、7 d治疗组尿乳果糖排泄率、血浆DAO、D-乳酸和内毒素水平较对照组明显降低 (P<0.05) 。结论 丙氨酰-谷氨酰胺对重型颅脑损伤后早期肠黏膜屏障损害有一定的保护作用。
关键词：重型颅脑损伤,丙氨酰-谷氨酰胺,肠黏膜
参考文献
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丙氨酰-谷氨酰胺双肽 篇5
1资料与方法
1.1 一般资料
选择我院2007年8月-2008年12月收治的Ⅱ型呼吸衰竭并营养不良的危重病患者65例。入选患者均有不同程度的慢性阻塞性肺病, 如慢性支气管炎、肺气肿、慢性支气管哮喘等。
1.2 方法
将65例患者随机分为两组。A组35例, 男性20例, 女性15例, 平均年龄 (71.4±3.6) 岁, 平均体重 (54.5±8.0) kg;B组30例, 男性18例, 女性12例, 平均年龄 (70.6±2.4) 岁, 平均体重 (55.3±7.5) kg。两组患者病情、性别、年龄等差异均无显著性, 具有可比性。两组患者均行积极抗感染、祛痰、平喘及无创呼吸机通气的基础上接受等氮、等热量的肠内肠外营养支持。根据Harris和Benedic多元回归方式计算出每个患者的基础代谢及实际所需能量, 热量为每天30kcal/kg (1kcal=4.184kJ) 、氮量为每天0.2～0.3g/kg作为营养供给标准。A组在以上营养支持的基础上, 每天静脉滴注丙氨酰-谷氨酰胺50ml。在治疗的第1、8天分别检测转铁蛋白、氮平衡、血清白蛋白、总淋巴细胞计数, 统计病人平均住院天数、治愈率、需转有创呼吸机通气发生率及院内感染发生率。
1.3 统计学方法
采用SPSS 11.5 for Windows软件进行统计分析, 计量资料用均数±标准差
2结果
A、B两组的转铁蛋白、氮平衡、血清白蛋白、总淋巴细胞计数在治疗的第1、8天相比, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 见表1。但是A组同B组相比, 住院天数、院内感染发生率、需有创呼吸机通气率均较低, 治愈率高, 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 见表2。
注:A、B两组差异无统计学意义 (P>0.05) 。
注:与A组相比较, *P<0.05。
3讨论
Gln是小肠粘膜细胞的主要能源物质, 也是所有快速增生细胞特别是免疫细胞的能源物质, 对维护机体氨基酸平衡及其代谢起重要作用, 是人体必需氨基酸, 也是体内含量最多和最重要的游离氨基酸, 是组织间氮的运载体及蛋白质、核酸的重要前体, 不仅可促进肌肉蛋白合成和肌细胞生长, 防止肌肉过度分解, 而且刺激生长激素、胰岛素和睾酮的分泌, 从而提高肌肉力量和质量, 提高机体的免疫功能;Gln通过促进胃肠黏膜上皮成分己糖胺及葡萄糖胺的生化合成, 促进应激后热休克蛋白 (heat shock protein, HSP) 的表达, 通过肠道诱生谷胱甘肽 (GSH) 而达到抗氧化损伤的作用, 减少缺血-再灌注损伤时肠道一氧化氮 (NO) 的浓度而减轻肠道损伤, 维持感染状态下细胞内的高能磷酸盐水平以及细胞正常代谢功能, 起到保护胃肠黏膜的作用[2,3,4]。正常情况下机体谷氨酰胺含量很丰富, 但在应激高代谢情况下机体对谷氨酰胺的需要明显超过机体本身产生谷氨酰胺的能力, 导致蛋白质合成减少, 影响免疫功能, 这时外源性补充谷氨酰胺就显得极为必需和重要, 因此它也被认为是机体在应激状态下的条件必需氨基酸[5]。本文的研究对象正处应激状态, 这时体内 (特别是血循环中) 的Gln水平会急剧下降[6], 若不及时补充, 会出现肌肉蛋白分解代谢, 使肌肉质量和免疫能力下降, 胃肠道功能受损, 从而出现呼吸肌无力、咳嗽无力、免疫力下降、胃肠道细菌移行等, 导致呼吸衰竭进一步加重, 也因此增加无创通气的失败率, 增加有创通呼吸机通气率、院内感染率和住院天数。AECOPD并呼吸衰竭患者病情往往危重, 有研究表明, 危重患者的高分解代谢常常在应激后立即出现, 3～5d最为剧烈, 7d后逐渐消退, 感染严重时时间可顺延[7]。本研究中, 呼吸衰竭并营养不良患者营养支持的第1 d就加用丙氨酰-谷氨酰胺, 可能改善了其应激水平, 增加呼吸肌肌力, 保护胃肠黏膜, 减少了感染相关并发症的发生, 这对促进患者康复、缩短住院时间、降低医疗费用、增加治愈率、减少有创通气率、减少院内感染等都具有重要意义。
摘要：目的:观察丙氨酰-谷氨酰胺对呼吸衰竭并营养不良患者营养支持治疗的效果。方法:将65例呼吸衰竭并营养不良患者随机分为两组, 给予等热量、等氮量的营养支持, A组加入丙氨酰-谷氨酰胺, B组作对照, 测定两组的转铁蛋白、氮平衡、血清白蛋白、总淋巴细胞计数、住院天数、治愈率、院内感染率和需转有创呼吸机通气发生率等指标。结果:两组的转铁蛋白、氮平衡、血清白蛋白、总淋巴细胞计数相比, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 但A组治愈率较B组高, 住院天数、院内感染率及需转有创呼吸机通气发生率较B组低, 差异均具有统计学意义 (P<0.05) 。结论:呼吸衰竭并营养不良患者营养支持中添加丙氨酰-谷氨酰胺能搞高治愈率, 减少住院天数, 降低院内感染率及需转有创呼吸机通气的发生率。
关键词：丙氨酰-谷氨酰胺,呼吸衰竭,营养不良,营养支持
参考文献
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丙氨酰-谷氨酰胺双肽 篇6
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2013年10月-2015年10月北海市人民医院普外科收治的结肠癌合并肠梗阻患者100例为研究对象。纳入标准:①结肠癌合并不全肠梗阻患者;②年龄≤75岁。排除标准:①术前严重营养不良;②无法耐受肠外营养;③完全性肠梗阻;④术前存在感染征象;⑤合并多器官功能不全;⑥远处转移。按入组顺序进行编号,奇数纳入对照组,偶数纳入观察组,每组50例。两组患者性别、年龄、病变部位等一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性(见表1)。
1.2 营养支持方法
术前3 d及术后7 d在禁食情况下给予等热量全肠外营养支持(98.0±8.4)k J/(kg·d),脂肪占热卡40%~50%。观察组添加丙氨酰-谷氨酰胺(商品名:力太;生产厂家:华瑞制药有限公司;国药准字:H20053409,规格:100 ml,20 g)100 ml/d,相当于谷氨酰胺20 g;对照组仅给予相同热卡的平衡氨基酸。
1.3 观察指标
分别于手术前1 d及手术后3和7 d,抽取受试者清晨空腹肘静脉血,常规分离血清,采用全自动生化分析仪检测血清前白蛋白及白蛋白水平;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清免疫球蛋白A(immunoglobulin A,Ig A)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,Ig G)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M,Ig M)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白介素-6(interleukin-6,IL-6);统计患者住院期间并发症发生率。
1.4 统计学方法
采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析,计量资料用均数±标准差(±s)表示,用t检验,计数资料以率表示,用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 营养指标
术前及术后3 d,两组患者血清前白蛋白、白蛋白水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后7 d,两组患者血清前白蛋白、白蛋白水平比较,经t检验,差异有统计学意义,观察组患者血清前白蛋白、白蛋白水平高于对照组(P<0.05)。见表2。
2.2 免疫指标
术前及术后3 d,两组患者血清Ig A、Ig G、Ig M水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后7 d,两组患者血清Ig A、Ig G、Ig M水平比较,经t检验,差异有统计学意义,观察组患者血清Ig A、Ig G、Ig M水平均高于对照组(P<0.05)。见表3。
2.3 炎症因子
术前及术后3 d,两组患者血清TNF-α、IL-6表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后7 d,两组患者血清TNF-α、IL-6水平比较,经t检验,差异有统计学意义,观察组患者血清TNF-α、IL-6水平低于对照组(P<0.05)。见表4。
(n=50)
(n=50,g/L,±s)
2.4 并发症
观察组和对照组的并发症发生率分别为4.0%(2/50)和16.0%(8/50),观察组并发症发生率低于对照组(P<0.05)。见表5。
(n=50,g/L,±s)
(n=50,g/L,±s)
[n=50,例(%)]
3 讨论
本研究结果显示,术后早期(术后3 d)患者血清前白蛋白、白蛋白水平较术前出现不同程度的降低(P<0.05);而术后7 d,观察组患者血清前白蛋白、白蛋白水平均较对照组提高(P<0.05),与杨洋等[5]研究结论一致,提示结肠癌合并肠梗阻围手术期应用丙氨酸-谷氨酰胺强化肠外营养,有利于促进蛋白质合成,纠正营养失衡[6]。由于长时间受恶性肿瘤的慢性消耗,大多数结肠癌患者术前已存在不同程度营养不良,而急性肠梗阻所致机体内环境紊乱、手术应激所致热量及蛋白质大量消耗及围手术期长时间禁食等,均进一步加剧机体营养失衡,甚至影响手术效果及临床预后[7,8,9]。因此,在结肠癌合并肠梗阻围手术期开展营养支持治疗是十分必要的。丙氨酸-谷氨酰胺作为机体条件必须氨基酸,既是肾脏合成氨的重要底物,又是肝脏合成谷胱甘肽的主要原料[10]。在应激和病理状态下,机体丙氨酸-谷氨酰胺消耗量急剧上升,而适时补充外源性丙氨酸-谷氨酰胺可有效促进机体蛋白质合成,纠正负氮平衡,进而达到改善机体营养失衡的作用[11]。
本研究结果显示,患者术后早期血清Ig A、Ig G、Ig M水平较术前降低(P<0.05),提示存在不同程度体液免疫抑制现象,分析其原因可能与手术应激及肠道切除所致的肠功能抑制有关;术后7 d观察组患者血清Ig A、Ig G、Ig M水平较对照组提高(P<0.05),提示围手术期持续应用丙氨酸-谷氨酰胺强化肠外营养可有效提高结肠癌合并肠梗阻患者术后免疫能力,而这也是其减少患者术后并发症发生的重要原因[12]。但本研究也发现,丙氨酸-谷氨酰胺强化肠外营养对患者术后早期体液免疫的增强作用并不明显,其效果与标准肠外营养相当,分析其原因可能与丙氨酸-谷氨酰胺应用时间过短及机体自身免疫功能恢复速度有关[13]。
本研究结果显示,患者术后早期血清TNF-α、IL-6水平较术前升高(P<0.05),与王海之等[14]研究结果一致,提示机体术后存在不同程度炎症反应。肠梗阻所致内毒素分泌、手术应激及围手术期禁食所致肠道微生态失衡是诱发术后炎症反应的主要因素。而围手术期持续应用丙氨酸-谷氨酰胺强化肠外营养则可有效抑制术后炎症反应,表现为患者术后7 d血清TNF-α、IL-6水平较术前及对照组降低(P<0.05),分析其原因可能与其提供机体必要营养,修复肠道损伤,提高机体免疫功能有关[15]。
综上所述,结肠癌合并肠梗阻围手术期采用丙氨酰-谷氨酰胺强化肠外营养,可显著增强营养,提高机体免疫力,抑制炎症反应,降低感染率,其效果优于标准肠外营养,值得临床推广应用。
摘要：目的 探讨丙氨酰-谷氨酰胺强化肠外营养对结肠癌合并肠梗阻患者炎症反应及免疫功能的影响。方法 选取100例结肠癌合并肠梗阻患者,分为观察组和对照组,每组50例。对照组仅给予标准肠外营养,观察组加用丙氨酰-谷氨酰胺100ml/d。比较两组手术前后血清前白蛋白、白蛋白、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平。统计患者住院期间并发症发生率。结果 术前及术后3 d,两组患者血清前白蛋白、白蛋白、IgA、IgG、IgM、TNF-α、IL-6水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后7 d,与对照组比较,观察组患者血清前白蛋白、白蛋白、IgA、IgG、IgM水平增高(P<0.05),TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05)。观察组并发症发生率低于对照组(4.0%vs 16.0%)(P<0.05)。结论 结肠癌合并肠梗阻围手术期采用丙氨酰-谷氨酰胺强化肠外营养,可显著增强营养,提高机体免疫力,抑制炎症反应,降低感染率,其效果优于标准肠外营养。